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KR102717830B1 - Cosmetic Composition Comprising Natural Softening Plants Prepared by Using Microorganism As Active Ingredient - Google Patents

Cosmetic Composition Comprising Natural Softening Plants Prepared by Using Microorganism As Active Ingredient Download PDF

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KR102717830B1
KR102717830B1 KR1020220041496A KR20220041496A KR102717830B1 KR 102717830 B1 KR102717830 B1 KR 102717830B1 KR 1020220041496 A KR1020220041496 A KR 1020220041496A KR 20220041496 A KR20220041496 A KR 20220041496A KR 102717830 B1 KR102717830 B1 KR 102717830B1
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KR
South Korea
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plant
cosmetic composition
softening
microorganism
natural
Prior art date
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김지은
이정노
박성민
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주식회사 코씨드바이오팜
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Publication date
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Abstract

본 발명은 효소를 대사산물로 생성하는 미생물을 이용한 쳔연 연화 식물체를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다. 상기 미생물을 이용한 천연 연화 식물체는 식물체의 당화 단계, 동결 및 파쇄 단계, 미생물 배양액을 이용한 연화 단계, 자외선 조사 단계 및 여과/세척 단계를 포함하는 방법으로 제조될 수 있다. The present invention provides a cosmetic composition containing, as an effective ingredient, a natural softening plant using microorganisms that produce enzymes as metabolites. The natural softening plant using microorganisms can be produced by a method including a saccharification step of the plant, a freezing and crushing step, a softening step using a microbial culture solution, an ultraviolet irradiation step, and a filtration/washing step.

Description

미생물을 이용하여 제조된 천연 연화 식물체를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic Composition Comprising Natural Softening Plants Prepared by Using Microorganism As Active Ingredient}Cosmetic composition comprising natural softening plants prepared by using microorganisms as active ingredients {Cosmetic Composition Comprising Natural Softening Plants Prepared by Using Microorganism As Active Ingredient}

본 발명은 효소를 대사산물로 생성하는 미생물을 이용한 천연 연화 식물체를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition containing a natural softening plant as an effective ingredient using microorganisms that produce enzymes as metabolites.

화장품이란 인체를 청결·미화하여 매력을 더하고 용모를 밝게 변화시키거나 피부·모발의 건강을 유지 또는 증진하기 위하여 인체에 바르고 문지르거나 뿌리는 등으로 사용되는 물품으로서 기본적으로 보습, 미백, 탄력 등의 기능을 갖추고 있다.Cosmetics are products that are applied, rubbed, or sprayed onto the body to cleanse and beautify the body, add charm, brighten the appearance, or maintain or improve the health of the skin or hair. They basically have functions such as moisturizing, whitening, and elasticity.

오늘날 화장품 산업은 급속도로 발전하고 있는 가운데, 유행이나 트렌드에 민감한 산업군 중 하나이다.Today, the cosmetics industry is one of the industries that is rapidly developing and sensitive to trends and fads.

특히, 코로나19의 장기화에 따른 마스크의 생활화로 기초 라인 스킨케어의 상승세 및 근본적인 피부 개선 효과를 얻을 수 있는 제품군이 각광을 받고 있다. 이에 따라 피부 진정 및 재생 성분을 주로 이루는 자연 유래, 천연 유래 등 천연이나 유기농 성분들이 트렌드를 이루고 있다. 그리고 단순히 성분을 떠나서 해당 성분을 이루는 추출물의 출처나 지리적 요건 등의 유래를 확인하고 싶어 하는 소비자가 늘고 있다.In particular, due to the prolonged COVID-19 pandemic and the incorporation of masks into daily life, basic skincare products are on the rise and products that can fundamentally improve the skin are in the spotlight. Accordingly, natural or organic ingredients, such as natural origin and natural origin, which mainly consist of skin soothing and regenerating ingredients, are trending. In addition, consumers who want to check the origin of the extracts that make up the ingredients, such as the source or geographical conditions, are increasing.

한편, 식물체를 추출하여 추출물로서 화장품에 적용하는 경우가 대부분으로, 이러한 경우에 식물체를 추출하는 과정에서 유효성분의 대부분이 소실되어 그 효과가 매우 적다는 문제점이 있다. 또한, 화장품에 식물체 그대로를 넣을 경우, 관상용 목적을 가지나, 원형 그대로의 식물체로부터 얻을 수 있는 피부 효능은 미미하다는 한계가 있다.On the other hand, most of the cases are where the plant is extracted and applied to cosmetics as an extract, but in such cases, there is a problem that most of the effective ingredients are lost during the process of extracting the plant, so the effect is very small. In addition, when the plant is put into cosmetics as it is, there is a limitation that the skin effect that can be obtained from the plant in its original form is minimal, although it has an ornamental purpose.

한편, 식물의 세포벽은 셀룰로스(cellulose), 헤미셀룰로스(hemicellulose), 펙틴(pectin), 리그닌(lignin) 등으로 구성된 복잡한 구조를 이루고 있다. 화장품에 식물체를 원료로 사용하는 경우, 이를 직접 사용하지 않고 셀룰로스를 제거하게 되는데, 이 과정에서 물 또는 유기 용매에 추출되지 않는 대부분의 유효성분들은 셀룰로스와 함께 버려지게 된다. 따라서, 최근에는 천연의 식물 소재를 사용하여 그 유효 성분을 최대한 활용하면서도 소비자들의 흥미를 유발할 수 있는 소재의 개발이 요구되고 있다.Meanwhile, the cell wall of a plant has a complex structure composed of cellulose, hemicellulose, pectin, lignin, etc. When using a plant as a raw material for cosmetics, the cellulose is removed instead of being used directly. In this process, most of the effective ingredients that are not extracted by water or organic solvents are discarded along with the cellulose. Therefore, recently, there has been a demand for the development of materials that can maximize the effective ingredients of natural plant materials while also attracting the interest of consumers.

한편, 연화(softening)란 조직이 물러지는 현상을 의미하며, 식물의 세포벽을 구성하는 다당체들이 저분자화됨으로써 연화에 관여하게 된다. 현재까지 이루어진 국내외 연구들은 시판 산(acid) 또는 효소를 이용하여 가수분해 특성을 밝힌 것이 대부분이다. Meanwhile, softening refers to the phenomenon in which tissues become soft, and the polysaccharides that make up the cell walls of plants are involved in softening by being reduced to low molecular weight. Most domestic and international studies conducted to date have used commercial acids or enzymes to elucidate hydrolysis characteristics.

한국등록특허 제10-2247990호는 산과 정제수를 포함하는 수용액에 천연 잎사귀를 함침시켜 제조된 천연 잎사귀 화장료 조성물을 개시한다.Korean Patent No. 10-2247990 discloses a natural leaf cosmetic composition manufactured by impregnating natural leaves in an aqueous solution containing acid and purified water.

한국등록특허 제10-1047785호는 천연 꽃잎을 시트르산, 카보머 또는 그 혼합물 수용액에 혼합한 후 70~90℃로 가열하는 연화 공정을 거쳐 제조된 천연 연화 꽃잎을 함유하는 화장료 조성물을 개시한다.Korean Patent No. 10-1047785 discloses a cosmetic composition containing natural softened petals manufactured through a softening process in which natural petals are mixed in an aqueous solution of citric acid, carbomer or a mixture thereof and then heated to 70 to 90°C.

이에 따라, 본 발명자들은 미생물의 대사 과정에서 발생하는 효소를 이용한 식물체의 연화 효과를 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다. Accordingly, the inventors of the present invention confirmed the softening effect of a plant body using an enzyme generated during the metabolic process of a microorganism, thereby completing the present invention.

본 발명은 미생물을 이용하여 제조된 천연 연화 식물체를 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. 구체적으로, 미생물의 대사산물을 이용한 연화 공정을 통해 친환경적이고 인체에 무해하면서 우수한 연화 효과를 확인함으로써, 이를 함유한 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention aims to provide a cosmetic composition comprising a natural softening plant manufactured using microorganisms. Specifically, the present invention aims to provide a cosmetic composition containing the same by confirming that the softening process using a metabolite of microorganisms is environmentally friendly, harmless to the human body, and has an excellent softening effect.

상기 목적을 달성하고자, 본 발명은 미생물을 이용하여 제조된 천연 연화 식물체를 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.To achieve the above purpose, the present invention provides a cosmetic composition comprising a natural softening plant body manufactured using microorganisms.

바람직하게, 상기 미생물을 이용한 천연 연화 식물체는, 식물체를 당화하는 단계; 상기 당화된 식물체를 액화 질소를 이용하여 동결 및 파쇄하는 단계; 상기 동결 파쇄한 식물체에 미생물 배양액을 첨가하여 연화하는 단계; 상기 연화물에 자외선을 조사하여 살균하는 단계; 및 상기 살균된 연화물을 여과 및 세척하여 연화 식물체를 수득하는 단계를 포함하는 방법으로 제조되고, 상기 미생물은 효소를 대사산물로 생성하는 미생물이다.Preferably, the natural softening plant body using the microorganism is produced by a method including the steps of saccharifying the plant body; freezing and crushing the saccharified plant body using liquid nitrogen; softening the frozen and crushed plant body by adding a microbial culture solution; sterilizing the softened product by irradiating it with ultraviolet rays; and filtering and washing the sterilized softened product to obtain the softened plant body, wherein the microorganism is a microorganism that produces an enzyme as a metabolite.

또한 바람직하게는, 상기 미생물은 락토바실러스 플란터럼(Lactobacillus plantarum), Pediococcus 속, 엔테로코커스 페시움(Enterococcus faecium), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 트리코더마 비리데(Trichoderma viride), 클로스트리듐 써모셀럼(Clostridium thermocellum), 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 셀룰로모나스 우다(Cellulomonas uda)로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다. Also preferably, the microorganism may be selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum , Pediococcus genus, Enterococcus faecium , Pediococcus pentosaceus , Trichoderma viride , Clostridium thermocellum, Pseudomonas fluorescens , and Cellulomonas uda .

또한 바람직하게는, 상기 미생물을 이용한 천연 연화 식물체는 화장료 조성물 총 중량 대비 0.1 내지 30 중량%로 함유될 수 있다.Also preferably, the natural softening plant using the microorganism may be contained in an amount of 0.1 to 30 wt% relative to the total weight of the cosmetic composition.

또한 바람직하게는, 상기 당화하는 단계는 상기 식물체에 단당류, 이당류, 다당류 및 당알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 당을 식물체 중량 대비 1 내지 20 중량%로 첨가하는 것이 좋다.Also preferably, the saccharification step is to add at least one sugar selected from the group consisting of monosaccharides, disaccharides, polysaccharides and sugar alcohols to the plant in an amount of 1 to 20 wt% relative to the weight of the plant.

또한 바람직하게는, 상기 동결 및 파쇄하는 단계는 상기 당화된 식물체를 액화 질소에 넣어 1 분 내지 30 분 동안 방치하여 동결시키고, 파쇄기로 파쇄하여 1 내지 10 mm 크기의 균일한 식물체를 수득하는 것이다.Also preferably, the freezing and crushing step is to freeze the saccharified plant body by placing it in liquid nitrogen and leaving it for 1 to 30 minutes, and crush it with a crusher to obtain uniform plant bodies of 1 to 10 mm in size.

또한 바람직하게는, 상기 식물체는 목본류의 어린 가지, 잎, 꽃 또는 열매 또는 초본류의 꽃, 잎, 줄기, 뿌리 또는 열매일 수 있다.Also preferably, the plant body may be a young branch, leaf, flower or fruit of a woody plant or a flower, leaf, stem, root or fruit of an herbaceous plant.

또한 바람직하게는, 상기 자외선 조사 단계는 20W의 자외선 살균등을 사용하여 10분 내지 1시간 동안 조사할 수 있다.Also preferably, the ultraviolet irradiation step can be performed for 10 minutes to 1 hour using a 20W ultraviolet sterilizing lamp.

본 발명의 화장료 조성물은 미생물의 대사과정을 통해 생성되는 효소를 이용한 식물체의 연화 공정을 통해 연화도가 우수하여, 식물체가 화장료 조성물 안에서 원형을 유지하면서 포함되고, 피부에 이물감 없이 부드럽게 마사지 되며 식물체의 유효성분을 최대한으로 이용할 수 있는 효과를 제공한다. 또한, 미생물을 이용한 연화 과정을 통해 얻어진 천연 연화 식물체는 자극 없이 피부에 안전하며, 미생물을 이용한 연화 과정 중에 발생하는 식물체와의 상호작용을 통해 고유의 효능이 증가되며, 이취 발생과 같은 부정적인 사용감이 감소된 식물체를 수득하는 효과를 제공한다. The cosmetic composition of the present invention has an excellent softening degree through a softening process of a plant using an enzyme produced through a metabolic process of microorganisms, so that the plant is included in the cosmetic composition while maintaining its original shape, and is gently massaged to the skin without a foreign body sensation, and provides the effect of maximally utilizing the effective ingredients of the plant. In addition, the natural softening plant obtained through the softening process using microorganisms is safe for the skin without irritation, and its inherent efficacy is increased through the interaction with the plant that occurs during the softening process using microorganisms, and provides the effect of obtaining a plant with reduced negative sensations of use, such as the generation of an off-flavor.

도 1은 본 발명의 실시예 1을 글리세린 수용액에 분산시킨 사진이다.Figure 1 is a photograph of Example 1 of the present invention dispersed in a glycerin aqueous solution.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.All technical terms used in the present invention, unless otherwise defined, have the following definitions and are consistent with the meaning generally understood by those skilled in the art in the relevant field of the present invention. In addition, although preferred methods or samples are described in this specification, similar or equivalent ones are also included in the scope of the present invention.

용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.The term "about" means an amount, level, value, number, frequency, percent, dimension, size, quantity, weight or length that varies by about 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 or 1 percent of the reference amount, level, value, number, frequency, percent, dimension, size, quantity, weight or length.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.Throughout this specification, unless the context otherwise requires, the words "comprise" and "comprising" will be understood to imply the inclusion of a stated step or component, or group of steps or components, but not the exclusion of any other step or component, or group of steps or components.

본 발명에서 사용하는 용어 “연화 식물체”는 미생물에 의해 생성되는 효소에 의해 세포벽 구성 성분이 변화하여 식물 조직이 물러지게 된 식물체를 말한다. The term “softened plant” used in the present invention refers to a plant whose cell wall components have been changed by enzymes produced by microorganisms, causing the plant tissue to become soft.

본 발명은 미생물을 이용한 천연 연화 식물체를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition comprising a natural softening plant using microorganisms.

일반적으로 식물체를 화장품에 그대로 사용할 경우 셀룰로스, 펙틴, 리그닌 등으로 구성된 복잡한 구조의 식물의 세포벽으로 인해 단단하여 조직이 질기며 이물감이 커 피부에 자극을 유발할 수 있으며, 식물체 중의 유효성분을 피부에 전달하는 데에 효과가 미미하다. 따라서, 식물체 중의 세포벽 구성 다당류를 분해하여 저분자화할 수 있는 과정이 필요하다.In general, when plants are used as they are in cosmetics, the complex structure of the plant cell wall, which is composed of cellulose, pectin, lignin, etc., makes the tissue tough and causes irritation to the skin due to the foreign body sensation, and the effect of delivering the effective ingredients in the plant to the skin is minimal. Therefore, a process is needed to break down the polysaccharides that compose the cell wall of the plant and reduce them to low molecular weight.

한편, 다당체의 가수분해법으로 화학 물질을 이용한 방법이 주로 사용되는데, 이는 유해 부산물을 생성하여 피부에 부작용을 유발할 수 있으며, 폐기물 처리 과정에 있어서 비용이 발생할 뿐 아니라 환경 오염의 발생 위험이 있다. Meanwhile, the method using chemicals is mainly used for hydrolyzing polysaccharides, which can produce harmful byproducts and cause adverse effects on the skin, and not only does it incur costs in the waste disposal process, but there is also a risk of environmental pollution.

이에, 미생물이 생산하는 대사산물을 이용한 다당체의 가수분해법은 상기 기술한 화학적 분해법의 대안으로 사용될 수 있다. 미생물을 이용한 다당체의 가수분해법은 그 결과물이 피부에 안전하며, 친환경적이고 대량생산에도 용이한 장점이 있다. 또한, 미생물에 의해 생성되는 유용한 대사산물이 식물체와 상호작용을 하여 시너지 효과를 기대할 수 있다.Therefore, the hydrolysis method of polysaccharides using metabolites produced by microorganisms can be used as an alternative to the chemical decomposition method described above. The hydrolysis method of polysaccharides using microorganisms has the advantage that the result is safe for the skin, environmentally friendly, and easy to mass-produce. In addition, useful metabolites produced by microorganisms can interact with plants to produce a synergistic effect.

본 발명에서는 효소를 대사산물로 생성하는 미생물을 이용하여 연화 식물체를 제조하고, 이를 함유하는 화장료 조성물을 개시하였다.In the present invention, a softening plant is produced using a microorganism that produces an enzyme as a metabolite, and a cosmetic composition containing the same is disclosed.

바람직하게, 상기 효소를 대사산물로 생성하는 미생물로는 셀룰라아제 생성 미생물을 사용하였으며, 바람직하게는 페디오코커스(Pediococcus)속, 엔테로코커스(Enterococcus)속, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 트리코더마(Trichoderma)속, 클로스트리듐(Clostridum)속, 슈도모나스(Pseudomonas)속, 셀룰로모나스(Cellulomanas)속의 미생물을 사용할 수 있다. 보다 바람직하게는, 상기 미생물은 락토바실러스 플란터럼(Lactobacillus plantarum), Pediococcus 속, 엔테로코커스 페시움(Enterococcus faecium), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 트리코더마 비리데(Trichoderma viride), 클로스트리듐 써모셀럼(Clostridium thermocellum), 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 셀룰로모나스 우다(Cellulomonas uda)로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.Preferably, a cellulase-producing microorganism is used as the microorganism that produces the enzyme as a metabolite, and preferably, a microorganism of the genus Pediococcus , Enterococcus , Lactobacillus , Trichoderma , Clostridum , Pseudomonas , or Cellulomanas can be used. More preferably, the microorganism may be selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum , Pediococcus genus, Enterococcus faecium , Pediococcus pentosaceus , Trichoderma viride , Clostridium thermocellum, Pseudomonas fluorescens , and Cellulomonas uda .

또한, 본 발명의 식물체는 목본류의 어린 가지, 잎, 꽃, 열매 등 또는 초본류의 꽃, 잎, 줄기, 뿌리, 열매 등에 응용이 가능하다. 하지만, 본 발명의 식물체가 이에만 한정되는 것은 아니다.In addition, the plant of the present invention can be applied to young branches, leaves, flowers, fruits, etc. of woody plants or flowers, leaves, stems, roots, fruits, etc. of herbaceous plants. However, the plant of the present invention is not limited thereto.

한편, 본 발명에서는 피부 미용 소재로 주로 사용되는 진피를 사용하여 연화 진피를 제조하고, 이를 포함하는 화장료 조성물을 개시하였다.Meanwhile, in the present invention, softened dermis is manufactured using dermis, which is mainly used as a skin beauty material, and a cosmetic composition containing the same is disclosed.

진피는 운향과의 귤(Citrus unshiu M.) 또는 동속 근연식물의 성숙한 과피를 말한다. 진피의 주요 성분으로는 naringin, hesperidin, vitamin C, folic acid 및 pectin 등을 함유하며, 약리 작용은 소염, 항알러지, 항균, 주름 억제 및 미백 효과 등이 보고되어 있다.Citrus peel refers to the mature peel of the citrus fruit ( Citrus unshiu M.) of the Rutaceae family or a closely related plant of the same genus. The main components of the citrus peel include naringin, hesperidin, vitamin C, folic acid, and pectin, and its pharmacological effects have been reported to include anti-inflammatory, anti-allergic, anti-bacterial, anti-wrinkle, and whitening effects.

본 발명의 일실시예에 따르면, 상기 미생물을 이용한 천연 연화 식물체는,According to one embodiment of the present invention, a natural softening plant using the microorganism is

(a) 화장료 조성물에 포함하고자 하는 식물체의 잎, 줄기, 뿌리, 꽃, 열매 등을 세척하여 당화하는 단계;(a) a step of washing and saccharifying the leaves, stems, roots, flowers, fruits, etc. of a plant to be included in a cosmetic composition;

(b) 상기 당화된 식물체를 액화 질소를 이용하여 동결 및 파쇄하는 단계;(b) a step of freezing and crushing the saccharified plant body using liquid nitrogen;

(c) 미생물 배양액에 상기 동결 파쇄한 식물체를 넣어 연화하는 단계;(c) a step of softening the frozen and crushed plant body by placing it in a microbial culture solution;

(d) 상기 연화물에 자외선을 조사하여 살균하는 단계; 및(d) a step of sterilizing the softened material by irradiating it with ultraviolet rays; and

(e) 상기 살균된 연화물을 여과하고, 세척하여 연화 식물체를 수득하는 단계를 포함하는 방법으로 제조된다.(e) It is manufactured by a method including the step of filtering and washing the sterilized softened material to obtain a softened plant body.

상기 (a)의 당화 처리 단계는 식물체의 잎, 줄기(가지), 뿌리, 꽃 등을 수확, 세척하고, 식물체 총 중량 대비 1 내지 20 중량%의 당(sugar)을 첨가하여 0.5 내지 6 시간 동안 실온에 방치하여 이루어지는 당화 처리에 의해 수행될 수 있다.The saccharification treatment step of the above (a) can be performed by harvesting and washing the leaves, stems (branches), roots, flowers, etc. of the plant, adding 1 to 20 wt% of sugar relative to the total weight of the plant, and leaving the resulting mixture at room temperature for 0.5 to 6 hours.

상기 당(sugar)은 일반적인 의미에서 단맛을 지닌 물질을 의미하며, 상기 당은 단당류, 이당류, 다당류, 당알코올 중 적어도 1종 이상을 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다. 바람직하게는, 상기 당은 설탕, 꿀 또는 글리세롤일 수 있다.The sugar above refers to a substance having a sweet taste in a general sense, and the sugar may be characterized by including at least one or more of a monosaccharide, a disaccharide, a polysaccharide, and a sugar alcohol. Preferably, the sugar may be sucrose, honey, or glycerol.

상기 첨가하는 당이 식물체 총 중량 대비 1 중량% 미만인 경우, 식물체에 당화가 고르게 되지 않게 되는 문제점이 있을 수 있고, 반대로 20 중량%를 초과하는 경우에는 당 투입량 대비 효율성이 떨어져 경제적이지 못하다.If the added sugar is less than 1 wt% of the total weight of the plant, there may be a problem in that saccharification of the plant is not evenly distributed, and conversely, if it exceeds 20 wt%, the efficiency is low compared to the amount of sugar input, making it uneconomical.

이러한 당화 처리 단계에 의해 식물체의 조직 세포가 건조되는 것을 방지하고 유효성분의 추출을 더욱 용이하게 하여 후속의 연화 단계에 적용될 수 있게 된다.This saccharification step prevents the tissue cells of the plant from drying out and makes it easier to extract the active ingredients, so that they can be applied in the subsequent softening step.

상기 (b)의 동결 파쇄 단계는 상기 당화된 식물체를 액화 질소에 넣어 1 분 내지 30 분 방치하여 동결시킨 후, 파쇄기로 파쇄하여 1 내지 10 mm 크기의 균일한 식물체를 수득할 수 있다.The freeze-crushing step of the above (b) can be performed by freezing the saccharified plant body by placing it in liquid nitrogen for 1 to 30 minutes, and then crushing it with a crusher to obtain uniform plant bodies of 1 to 10 mm in size.

상기 액화 질소는 질소를 액화한 것으로 대기 압력 하에서 영하 196℃인 것을 특징으로 할 수 있다. 또한, 액화 질소를 이용하여 식물체를 동결하는 단계에서 1분 미만으로 방치할 경우, 식물체가 불완전한 동결 상태로 될 수 있고, 반대로 30분을 초과하여 방치할 경우에는 식물체의 조직이 파괴될 수 있다.The above liquid nitrogen may be characterized by being liquefied nitrogen and having a temperature of -196°C under atmospheric pressure. In addition, in the step of freezing a plant using liquid nitrogen, if the plant is left for less than 1 minute, the plant may become incompletely frozen, and conversely, if the plant is left for more than 30 minutes, the plant tissue may be destroyed.

이러한 동결 파쇄 단계에 의해 1 내지 10 mm 크기의 균일한 식물체를 수득할 수 있고, 후속의 연화 단계에서 식물체 중의 유효성분의 소실을 방지하는 효과가 있다. 또한, 식물체 자체에 존재하거나 오염된 균을 제거하는 효과가 있어 후속의 미생물 배양액 처리 단계에서 발생할 수 있는 오염을 방지할 수 있다.By this freeze-fracturing step, uniform plant bodies of 1 to 10 mm in size can be obtained, and there is an effect of preventing the loss of effective ingredients in the plant body in the subsequent softening step. In addition, there is an effect of removing fungi existing in or contaminated with the plant body itself, so that contamination that may occur in the subsequent microbial culture solution treatment step can be prevented.

상기 (c)의 미생물 배양 단계는 상기 당화 및 동결 파쇄한 식물체에 중량 대비 1 내지 20배수의 미생물 배양액을 추가하여 배양시키는 것을 의미한다.The microbial culture step of the above (c) means culturing by adding 1 to 20 times the weight of the microbial culture solution to the saccharified and freeze-crushed plant body.

상기 미생물로는 효소를 대사산물로 생성하는 미생물인 것을 특징으로 할 수 있다. The above microorganism may be characterized as a microorganism that produces an enzyme as a metabolite.

바람직하게, 상기 미생물로는 셀룰라아제를 대사산물로 생성하는 미생물로 이루어진 군으로부터 1종 이상이 선택되어 사용될 수 있다. 바람직하게, 상기 미생물은 페디오코커스(Pediococcus)속, 엔테로코커스(Enterococcus)속, 락토바실러스(Lactobacillus)속, 트리코더마(Trichoderma)속, 클로스트리듐(Clostridum)속, 슈도모나스(Pseudomonas)속, 셀룰로모나스(Cellulomanas)속의 미생물로 이루어지는 군으로부터 1종 이상일 수 있다. 보다 바람직하게는, 상기 미생물은 락토바실러스 플란터럼(Lactobacillus plantarum), Pediococcus 속, 엔테로코커스 페시움(Enterococcus faecium), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 트리코더마 비리데(Trichoderma viride), 클로스트리듐 써모셀럼(Clostridium thermocellum), 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 셀룰로모나스 우다(Cellulomonas uda)로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.Preferably, the microorganism may be selected and used from a group consisting of microorganisms that produce cellulase as a metabolite. Preferably, the microorganism may be selected from a group consisting of microorganisms of the genus Pediococcus , the genus Enterococcus , the genus Lactobacillus , the genus Trichoderma , the genus Clostridum , the genus Pseudomonas , and the genus Cellulomanas . More preferably, the microorganism may be selected from the group consisting of Lactobacillus plantarum , Pediococcus genus, Enterococcus faecium , Pediococcus pentosaceus , Trichoderma viride , Clostridium thermocellum, Pseudomonas fluorescens , and Cellulomonas uda .

그 다음 발효조에서 20 내지 35℃의 온도에서 1 내지 7일 동안 연화 반응시키는 것을 특징으로 한다. 미생물에 따라 상기 발효 조건은 달라질 수 있으므로 본 발명의 내용이 상기 예시된 발효 온도, 발효 시간에 제한되는 것은 아니다.It is characterized by performing a softening reaction in a fermentation tank at a temperature of 20 to 35℃ for 1 to 7 days. Since the fermentation conditions may vary depending on the microorganism, the contents of the present invention are not limited to the fermentation temperature and fermentation time exemplified above.

상기 (d)의 살균 단계는 상기 연화물에 자외선을 조사하는 것을 특징으로 한다. 구체적으로 자외선 살균등(20W)을 사용하여 10분 내지 1시간의 시간 동안 조사하는 것을 특징으로 할 수 있다.The sterilization step of the above (d) is characterized by irradiating the softened material with ultraviolet rays. Specifically, it can be characterized by irradiating for 10 minutes to 1 hour using an ultraviolet sterilizing lamp (20W).

상기 (e)의 세척 단계는 상기 살균 연화물을 400 메쉬 여과포로 여과하고, 정제수로 수 회 세척하여 연화 식물체를 수득하는 것을 특징으로 한다.The washing step of the above (e) is characterized by filtering the sterilized softened substance through a 400 mesh filter cloth and washing it several times with purified water to obtain a softened plant body.

상기 미생물을 이용한 천연 연화 식물체는 화장료 조성물 총 중량 대비 0.1 내지 30 중량% 포함될 수 있다.The natural softening plant using the above microorganisms may be included in an amount of 0.1 to 30 wt% based on the total weight of the cosmetic composition.

상기 미생물을 이용한 연화 식물체의 함량이 0.1 중량% 미만인 경우에는 사용자가 화장품을 사용함에 있어 연화 식물체의 양이 미미하여 연화 식물체로 인한 효과를 기대하기에 어려움이 있으며, 연화 식물체의 함량이 30 중량% 초과하는 경우에는 연화 식물체의 투입량 대비 얻을 수 있는 효과의 양이 비례하지 않아 투입량 대비 경제적이지 못하다.When the content of the softening plant using the above microorganism is less than 0.1 wt%, it is difficult for the user to expect an effect due to the softening plant because the amount of the softening plant is so small when using the cosmetic, and when the content of the softening plant exceeds 30 wt%, the amount of effect that can be obtained is not proportional to the amount of the softening plant input, making it uneconomical compared to the amount input.

이하, 본 발명의 내용에 대해 하기 실시예에서 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에만 한정되는 것은 아니고, 이와 등가의 기술적 사상의 변형까지를 포함한다.Hereinafter, the contents of the present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the scope of the present invention is not limited to the following examples, and includes modifications of technical ideas equivalent thereto.

[실시예 1 내지 7. 미생물을 이용한 연화 진피의 제조][Examples 1 to 7. Production of softened dermis using microorganisms]

천연식물체로서 진피를 준비하여 당화 및 액화질소를 이용하여 동결건조의 전처리를 실시한 후, 미생물을 이용한 연화 과정을 통해 실시예 1 내지 7의 연화 진피를 제조하였다. As a natural plant, the tannery was prepared, and preprocessed using saccharification and liquid nitrogen to freeze-dry, and then the softened tannery of Examples 1 to 7 was manufactured through a softening process using microorganisms.

(1) 당화 전처리(1) Pretreatment of saccharification

건조된 진피 잎 100 g을 준비하여, 천연 아카시아 꿀 1,000 g에 넣어 저어주며 완전히 함침하였다. 이후 실온의 온도에서 3 시간 동안 당화 처리를 수행하였다. 당화가 완료된 후 거름망을 이용하여 여과하여 당화 진피를 수득하였다. Prepare 100 g of dried tangerine peel leaves, stir in 1,000 g of natural acacia honey, and completely soak. Then, saccharification was performed at room temperature for 3 hours. After saccharification was completed, saccharified tangerine peel was obtained by filtering using a strainer.

(2) 액화질소를 이용한 동결 파쇄 전처리(2) Pretreatment for freeze fracturing using liquid nitrogen

상기 준비된 당화 진피에 액화 질소를 부어 당화 진피가 액화 질소에 완전히 함침되도록 하였다. 이후 10 분 동안 방치하여 당화 진피를 동결하였다. 상기 동결된 당화 진피를 파쇄기를 이용하여 파쇄한 후 당화 및 동결 파쇄한 진피를 수득하였다.Liquid nitrogen was poured into the prepared saccharified dermis so that the saccharified dermis was completely immersed in the liquid nitrogen. After that, the saccharified dermis was frozen by leaving it for 10 minutes. The frozen saccharified dermis was crushed using a crusher to obtain saccharified and frozen crushed dermis.

상기 (1) 및 (2)의 과정을 통해 식물의 조직에 당이 흡착되고 액화 질소에 방치함으로써 당화된 조직이 쉽게 파쇄될 수 있도록 하여, 단단한 식물 조직을 균일한 형태의 입자 크기를 갖도록 할 수 있다.Through the processes (1) and (2) above, sugar is adsorbed to the plant tissue, and by leaving it in liquid nitrogen, the saccharified tissue can be easily broken down, thereby making it possible to make the hard plant tissue have a uniform particle size.

(3) 저분자화된 셀룰로스를 가지는 연화 진피 제조(3) Manufacturing of softened dermis with low molecular weight cellulose

각 미생물의 스탁 배양액을 고체 배지에 접종하여 배양한 후, 형성된 콜로니를 액체배지에 접종하고, 세균은 600 nm, 진균은 660 nm의 파장에서 흡광도 값 1.8 내지 2.0이 될 때까지 배양하여 미생물 배양액을 제조하였다. 각 미생물의 종류에 따른 적합한 배지와 배양 온도를 하기 표 1에 나타내었으며, 각 배지의 제조 방법은 생물자원센터(KCTC)에 공시된 조성을 기준으로 한다.The stock culture of each microorganism was inoculated onto a solid medium and cultured, and the formed colonies were inoculated onto a liquid medium and cultured until the absorbance values reached 1.8 to 2.0 at a wavelength of 600 nm for bacteria and 660 nm for fungi, thereby preparing a microbial culture. The appropriate medium and culture temperature for each type of microorganism are shown in Table 1 below, and the method for preparing each medium is based on the composition disclosed by the Korea Culture and Technology Center (KCTC).

구분division 미생물microorganism 배지명Badge name 배양 온도Incubation temperature 실시예 1Example 1 Lactobacillus plantarumLactobacillus plantarum MRS (De Man, Rogosa, Sharpe)MRS (De Man, Rogosa, Sharpe) 37 ℃37℃ 실시예 2Example 2 Enterococcus faeciumEnterococcus faecium MRSMRS 37 ℃37℃ 실시예 3Example 3 Pediococcus pentosaceusPediococcus pentosaceus MRSMRS 37 ℃37℃ 실시예 4Example 4 Trichoderma virideTrichoderma viride PD (Potato Dextrose)PD (Potato Dextrose) 25 ℃25 ℃ 실시예 5Example 5 Clostridium thermocellumClostridium thermocellum Clostridium Thermocellum mediumClostridium Thermocellum medium 60 ℃60℃ 실시예 6Example 6 Pseudomonas fluorescensPseudomonas fluorescens TS (Tryptic Soy)TS (Tryptic Soy) 30 ℃30℃ 실시예 7Example 7 Cellulomonas udaCellulomonas uda NutrientNutrient 30 ℃30℃

상기 동결건조 및 파쇄된 진피에 상기에서 제조된 미생물 배양액을 진피 중량 대비 10배 중량으로 첨가하여 연화가 이루어지도록 발효조에서 반응시켰다. 사용된 미생물과 반응 조건은 하기 표 2에 나타내었다. 반응 완료 후, 자외선 살균등(20W) 하에서 30 분간 자외선을 조사하여 살균하였다. 그 후, 400 메쉬 여과포로 여과하고, 정제수로 수 회 세척하여 실시예 1 내지 6의 미생물을 이용한 연화 진피를 수득하였다.The microbial culture solution prepared above was added to the freeze-dried and crushed dermis in an amount 10 times the weight of the dermis, and the mixture was allowed to react in a fermentation tank to soften. The microorganisms used and the reaction conditions are shown in Table 2 below. After completion of the reaction, the mixture was sterilized by irradiating it with ultraviolet rays for 30 minutes under an ultraviolet sterilizing lamp (20 W). Thereafter, the mixture was filtered through a 400 mesh filter cloth and washed several times with purified water to obtain a softened dermis using the microorganisms of Examples 1 to 6.

상기 (3)의 과정을 통해 당화된 식물 조직의 글루코오스(glucose) 등을 영양분으로 하여 미생물의 증식이 증가하며, 최종적으로 연화의 수율이 증가하는 효과가 있다. Through the process of (3) above, the growth of microorganisms increases using glucose, etc. from saccharified plant tissues as nutrients, and ultimately, there is an effect of increasing the yield of softening.

구분division 미생물microorganism 연화 온도softening temperature 연화 시간Softening time 실시예 1Example 1 Lactobacillus plantarumLactobacillus plantarum 37 ℃37℃ 20시간20 hours 실시예 2Example 2 Enterococcus faeciumEnterococcus faecium 37 ℃37℃ 30시간30 hours 실시예 3Example 3 Pediococcus pentosaceusPediococcus pentosaceus 37 ℃37℃ 24시간24 hours 실시예 4Example 4 Trichoderma virideTrichoderma viride 25 ℃25 ℃ 40시간40 hours 실시예 5Example 5 Clostridium thermocellumClostridium thermocellum 60 ℃60℃ 20시간20 hours 실시예 6Example 6 Pseudomonas fluorescensPseudomonas fluorescens 30 ℃30℃ 34시간34 hours 실시예 7Example 7 Cellulomonas udaCellulomonas uda 30 ℃30℃ 24시간24 hours

상기 실시예 1의 연화 진피를 글리세린 수용액에 분산시킨 것을 도 1에 나타내었다. 이를 통해 상기 실시예에서 제조한 연화 진피를 화장품에 적용이 가능할 것으로 판단하였다.The softened dermis of Example 1 above dispersed in a glycerin aqueous solution is shown in Fig. 1. Through this, it was determined that the softened dermis prepared in the above Example could be applied to cosmetics.

[비교예 1 내지 2. 화학적 방법을 이용한 연화 진피의 제조][Comparative examples 1 and 2. Production of softened dermis using chemical methods]

상기 실시예 1에 기재된 바와 같이, 당화 및 액화질소를 이용한 동결 파쇄를 수행한 진피에 진피 중량 대비 10배수의 1 w/w% 셀룰라아제(cellulase) 수용액을 넣어 50℃의 온도에서 3 시간동안 반응시켰다. 그 후, 400 메쉬 여과포로 여과하고 정제수로 수 회 세척하여 셀룰라아제를 이용한 연화 진피를 수득하였으며, 이를 비교예 1로 하였다.As described in Example 1 above, a 1 w/w% cellulase aqueous solution in an amount 10 times greater than the weight of the dermis was added to the dermis that had undergone saccharification and freeze-fracture using liquid nitrogen, and the result was reacted at a temperature of 50°C for 3 hours. Thereafter, the resultant was filtered through a 400 mesh filter cloth and washed several times with purified water to obtain a softened dermis using cellulase, which was referred to as Comparative Example 1.

상기 실시예 1에 기재된 바와 같이, 당화 및 액화질소를 이용한 동결 파쇄를 수행한 진피에 진피 중량 대비 10배수의 1 w/w% 펙티나아제(pectiase) 수용액을 넣어 50℃의 온도에서 3 시간동안 반응시켰다. 그 후, 400 메쉬 여과포로 여과하고 정제수로 수 회 세척하여 펙티나아제를 이용한 연화 진피를 수득하였으며, 이를 비교예 2로 하였다.As described in Example 1 above, a 1 w/w% pectinase aqueous solution in an amount 10 times greater than the weight of the dermis was added to the dermis that had undergone saccharification and freeze-fracture using liquid nitrogen, and the result was reacted at 50°C for 3 hours. Thereafter, the dermis was filtered through a 400 mesh filter cloth and washed several times with purified water to obtain a softened dermis using pectinase, which was referred to as Comparative Example 2.

[실험예 1. 연화도 측정] [Experimental Example 1. Softening Degree Measurement]

상기 실시예 1 내지 7 및 비교예 1 내지 2의 결과물인 연화 진피의 연화도를 확인하기 위해 각 연화 진피를 성상을 확인하기 위해 손등에 올려놓은 상태에서 사용자의 손가락을 이용하여 적절한 수준의 힘을 가하여 문질렀을 때, 잎이 연화되는 정도를 관찰하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다. 또한, 연화도는 하기의 기준에 따라 나타내었다.In order to confirm the degree of softening of the softened dermis resulting from Examples 1 to 7 and Comparative Examples 1 to 2, each softened dermis was placed on the back of the hand to check the properties, and when rubbed with an appropriate level of force using the user's fingers, the degree of softening of the leaf was observed, and the results are shown in Table 3 below. In addition, the degree of softening was expressed according to the following criteria.

<평가기준><Evaluation criteria>

◎ : 연화가 매우 잘 되어, 상대적으로 적은 힘을 가해도 잔류물이 남지 않고 사라짐◎: It softens very well and disappears without leaving any residue even with relatively little force.

○ : 연화가 잘 되었지만, ◎에 비해 강한 힘을 가했을 때 잔류물이 남지 않고 사라짐 ○: It softens well, but when a strong force is applied compared to ◎, it disappears without leaving any residue.

△ : 연화가 잘 되었지만, ○에 비해 강한 힘을 가했을 때 잔류물이 남지 않고 사라짐△: The softening is good, but when a strong force is applied compared to ○, it disappears without leaving any residue.

- : 연화가 되지 않아, 잔류물이 남아 있음- : Not softened, residue remains

구분division 연화도Yeonhwado 실시예 1Example 1 실시예 2Example 2 실시예 3Example 3 실시예 4Example 4 실시예 5Example 5 실시예 6Example 6 실시예 7Example 7 비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 --

상기 표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 1 내지 7의 미생물을 이용한 연화 식물체의 경우 화학적 방법을 이용한 비교예 1 내지 2보다 뛰어난 연화도를 보였다. 이를 통해 미생물을 이용하여 효과적으로 진피가 연화되었음을 확인하였다. 또한, 실시예 1의 L. plantarum을 이용한 연화 진피의 경우, 짧은 시간에 최대의 연화 효과를 확인하였다.As shown in Table 3 above, in the case of softening plants using microorganisms of Examples 1 to 7 according to the present invention, a superior softening degree was observed compared to Comparative Examples 1 to 2 using a chemical method. Through this, it was confirmed that the dermis was effectively softened using microorganisms. In addition, in the case of softening dermis using L. plantarum of Example 1, the maximum softening effect was confirmed in a short period of time.

[실험예 3. 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량 평가][Experimental Example 3. Evaluation of total polyphenol and flavonoid content]

본 실험예에서는 상기 실시예 1 내지 7 및 비교예 1 내지 2에서 제조된 연화 진피의 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량을 비색법을 이용하여 측정하였다. 각 연화 진피 1 g을 70% v/v 에탄올 10 g에 넣어 3 시간 동안 침출한 후 상등액을 감압 농축한 것을 시료로 사용하였다.In this experimental example, the total polyphenol and flavonoid contents of the softened dermis prepared in Examples 1 to 7 and Comparative Examples 1 to 2 were measured using a colorimetric method. 1 g of each softened dermis was soaked in 10 g of 70% v/v ethanol for 3 hours, and the supernatant was concentrated under reduced pressure to use as a sample.

총 폴리페놀 함량 측정을 위해 시료 20 ㎕에 2% Na2CO3 100 ㎕와 50% Folin-Ciocalteu 시약 20 ㎕를 가한 후 30 분간 암소에서 반응을 진행하였으며, microplate reader를 통해 750 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 농도별 gallic acid를 통해 작성된 검량선을 이용하여 시료에 존재하는 총 폴리페놀 함량은 mg gallic acid equivalent(GAE)/g로 계산하여 하기 표 4에 나타내었다.To measure the total polyphenol content, 100 ㎕ of 2% Na 2 CO 3 and 20 ㎕ of 50% Folin-Ciocalteu reagent were added to 20 ㎕ of the sample, and the reaction was performed in the dark for 30 minutes. The absorbance was measured at a wavelength of 750 nm using a microplate reader. The total polyphenol content in the sample was calculated as mg gallic acid equivalent (GAE)/g using a calibration curve generated using gallic acid at various concentrations, and is shown in Table 4 below.

총 플라보노이드 함량은 시료 20 ㎕에 에탄올 80 ㎕와 2% AlCl3·6H2O 100 ㎕를 가한 후 상온에서 5 분간 반응을 진행하였으며, microplate reader를 이용하여 450 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다. 농도별 quercetin을 통해 작성된 검량선을 이용하여 시료에 존재하는 총 플라보노이드 함량을 mg querctin equivalent(QE)/g 로 계산하여 하기 표 4에 나타내었다.The total flavonoid content was determined by adding 80 ㎕ of ethanol and 100 ㎕ of 2% AlCl 3 ·6H 2 O to 20 ㎕ of the sample, reacting for 5 minutes at room temperature, and measuring the absorbance at a wavelength of 450 nm using a microplate reader. The total flavonoid content in the sample was calculated as mg quercetin equivalent (QE)/g using a calibration curve created with quercetin at various concentrations, and is shown in Table 4 below.

시료Sample 총 폴리페놀 함량
(mg GAE/g)
Total polyphenol content
(mg GAE/g)
총 플라보노이드 함량
(mg QE/g)
Total flavonoid content
(mg QE/g)
실시예 1Example 1 29.7829.78 31.7731.77 실시예 2Example 2 20.5120.51 14.7214.72 실시예 3Example 3 23.8923.89 19.8519.85 실시예 4Example 4 22.6122.61 26.5426.54 실시예 5Example 5 20.1320.13 16.5516.55 실시예 6Example 6 17.8817.88 20.9820.98 실시예 7Example 7 15.3415.34 20.5120.51 비교예 1Comparative Example 1 1.611.61 1.381.38 비교예 2Comparative Example 2 0.340.34 1.021.02

상기 표 4에 나타난 바와 같이, 실시예 1 내지 7의 연화 진피는 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량이 높게 나타났으며, 이는 미생물과의 상호작용으로 인해 유효성분의 추출이 증가함에 기인한 것으로 판단된다.As shown in Table 4 above, the softened dermis of Examples 1 to 7 showed high total polyphenol and flavonoid contents, which is believed to be due to increased extraction of effective ingredients due to interaction with microorganisms.

[실험예 3. 콜라겐 합성 평가][Experimental Example 3. Evaluation of Collagen Synthesis]

본 실험예에서는 상기 실시예 1 내지 7 및 비교예 1 내지 2에서 제조된 연화 진피에 대하여 콜라겐 합성 효과를 측정하여 피부 주름 억제 효능을 확인하고자 하였다. 각 연화 진피 1 g을 70% v/v 에탄올 10 g에 넣어 3 시간 동안 침출한 후 상등액을 감압 농축한 것을 시료로 사용하였다.In this experimental example, the collagen synthesis effect was measured for the softened dermis prepared in Examples 1 to 7 and Comparative Examples 1 to 2 to confirm the skin wrinkle inhibition efficacy. 1 g of each softened dermis was placed in 10 g of 70% v/v ethanol, extracted for 3 hours, and the supernatant was concentrated under reduced pressure to use as a sample.

인간 피부 섬유아(HDFn) 세포를 1 x 105 cells/well의 농도로 24 well plate에 분주한 후, 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 안정화시켰다. FBS free 배지로 교환과 동시에 시료를 농도별로 희석하여 처리하였다. 24시간 후에 상층액을 수집하고, 남은 세포에 MTT solution을 처리하여 세포독성을 확인하였다. 수집된 상층액을 이용하여 콜라겐의 생성량을 확인하기 위해 procollagen type Ⅰ peptide EIA kit를 사용하였다. Collgen ELISA assay 후 450 nm의 파장에서 흡광도를 측정하여 생성된 콜라겐의 양을 계산한 후, 대조군과 비교하여 콜라겐 생성량(%)을 계산하였다. 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.Human dermal fibroblast (HDFn) cells were seeded in a 24-well plate at a concentration of 1 x 10 5 cells/well and stabilized in a 37°C, 5% CO 2 incubator. The samples were diluted by concentration and treated simultaneously with FBS-free medium. The supernatant was collected after 24 hours, and the cytotoxicity was confirmed by treating the remaining cells with MTT solution. The procollagen type Ⅰ peptide EIA kit was used to confirm the amount of collagen produced using the collected supernatant. After the collagen ELISA assay, the amount of produced collagen was calculated by measuring the absorbance at a wavelength of 450 nm, and the collagen production (%) was calculated by comparing it with the control group. The results are shown in Table 5 below.

시료Sample 농도 (ug/ml)Concentration (ug/ml) 콜라겐 생성량(%)Collagen production (%) 미처리Unprocessed -- 100100 실시예 1Example 1 3030 121.8121.8 100100 134.1134.1 실시예 2Example 2 3030 107.8107.8 100100 116.6116.6 실시예 3Example 3 3030 106.9106.9 100100 111.3111.3 실시예 4Example 4 3030 105.6105.6 100100 110.9110.9 실시예 5Example 5 3030 119.0119.0 100100 128.6128.6 실시예 6Example 6 3030 110.4110.4 100100 118.3118.3 실시예 7Example 7 3030 118.1118.1 100100 120.5120.5 비교예 1Comparative Example 1 3030 100.3100.3 100100 100.1100.1 비교예 2Comparative Example 2 3030 100.5100.5 100100 105.3105.3

상기 표 5에 나타난 바와 같이 실시예 1 내지 7에서 얻어진 연화 진피가 대체로 뛰어난 콜라겐 생성 효능을 나타내었으며, 콜라겐 생성량이 연화도에 비례하는 것을 확인하였다. 또한, 실시예 1의 연화 진피가 가장 우수한 효과를 나타냄을 확인하였다.As shown in Table 5 above, the softened dermis obtained in Examples 1 to 7 generally exhibited excellent collagen production efficacy, and it was confirmed that the amount of collagen production was proportional to the degree of softening. In addition, it was confirmed that the softened dermis of Example 1 exhibited the best effect.

[제조예 1 및 비교제조예 1 내지 2. 연화 진피를 포함하는 화장료 조성물 제조][Manufacturing Example 1 and Comparative Manufacturing Examples 1 to 2. Manufacturing of a cosmetic composition containing softened dermis]

실시예 1 및 비교예 1 내지 2의 연화 진피가 각 5.0 중량% 포함된 화장료 조성물을 하기 표 6의 조성으로 제조하였다. 다만, 본 발명은 여러 가지 제형으로 응용이 가능하며, 본 제조예는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Cosmetic compositions containing 5.0 wt% of the softened dermis of Example 1 and Comparative Examples 1 to 2 were prepared with the compositions shown in Table 6 below. However, the present invention can be applied in various formulations, and this preparation example is not intended to limit the present invention but is merely intended to specifically explain it.

구분division 원료명
(단위: 중량%)
Raw material name
(Unit: weight%)
제조예 1Manufacturing example 1 비교제조예 1Comparative manufacturing example 1 비교제조예 2Comparative manufacturing example 2
AA 정제수Purified water to 100to 100 to 100to 100 to 100to 100 다이소듐이디티에이Disodium EDTA 0.020.02 0.020.02 0.020.02 카보머 1Carbomer 1 7.07.0 7.07.0 7.07.0 카보머 2Carbomer 2 14.014.0 14.014.0 14.014.0 BB 다이프로필렌글라이콜Dipropylene glycol 1.01.0 1.01.0 1.01.0 글리세린glycerin 7.07.0 7.07.0 7.07.0 1,2-헥산다이올1,2-Hexanediol 2.02.0 2.02.0 2.02.0 알코올alcohol 4.04.0 4.04.0 4.04.0 CC 스테아트라이모늄
클로라이드
Steartrimonium
Chloride
5.05.0 5.05.0 5.05.0
실시예 1Example 1 5.05.0 -- -- 비교예 1Comparative Example 1 -- 5.05.0 -- 비교예 2Comparative Example 2 -- -- 5.05.0

[실험예 3. 첩포 시험(Patch test)][Experimental Example 3. Patch test]

상기 제조예 1 및 비교제조예 1 내지 2의 화장료 조성물의 피부 안전성을 평가하기 위해 피부 일차 자극 시험으로서 첩포 시험을 수행하였다.In order to evaluate the skin safety of the cosmetic compositions of the above Manufacturing Example 1 and Comparative Manufacturing Examples 1 to 2, a patch test was performed as a primary skin irritation test.

피부 질환이 없는 20~40대 성인 남녀 20명을 대상으로, 상기 제조예 1 및 비교제조예 1 내지 2의 화장료 조성물을 각 25 ㎕씩 적하한 IQ Ultimate™를 팔 하박부 안쪽 부위에 부착하였다. 첩포는 24시간 동안 부착하였고, 패치 제거 1시간 후, 패치 제거 24시간 후 및 패치 제거 48시간 후의 자극 정도를 전문가 2인에 의해 육안 평가하였다. 판정은 하기 판정 기준에 따라 전문가에 의해 이루어졌으며, 그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.Twenty adult men and women in their 20s to 40s without skin diseases were tested, and 25 ㎕ of each of the cosmetic compositions of Manufacturing Example 1 and Comparative Manufacturing Examples 1 and 2 was applied to the inner part of the forearm of IQ Ultimate™. The patches were applied for 24 hours, and the degree of irritation was visually evaluated by two experts 1 hour after patch removal, 24 hours after patch removal, and 48 hours after patch removal. The evaluation was made by experts according to the following evaluation criteria, and the results are shown in Table 7 below.

<판정 기준><Judging criteria>

- : 비(무) 자극성- : Non-irritating

+ : 약한 자극성+ : mild irritation

++ : 중증도 자극성++ : Moderate irritation

+++ : 강한 자극성+++ : Strong irritation

구분division 판정 시간Judgment time 자극 정도(피험자 수)Stimulus level (number of subjects) -- ++ ++++ ++++++ 총합Total 제조예 1Manufacturing example 1 패치 제거 1시간 후1 hour after patch removal 1818 11 11 -- 2020 24시간 후24 hours later 2020 -- -- -- 2020 48시간 후48 hours later 2020 -- -- -- 2020 비교제조예 1Comparative manufacturing example 1 패치 제거 1시간 후1 hour after removing the patch 1414 44 22 -- 2020 24시간 후24 hours later 1818 11 11 -- 2020 48시간 후48 hours later 1818 22 -- -- 2020 비교제조예 2Comparative manufacturing example 2 패치 제거 1시간 후1 hour after patch removal 1010 55 33 22 2020 24시간 후24 hours later 1515 22 33 -- 2020 48시간 후48 hours later 1919 -- 11 -- 2020

상기 표 7에 나타난 바와 같이, 실시예 1의 미생물을 이용한 연화 식물체를 함유하는 화장료 조성물의 경우 화학적 방법을 이용한 연화 식물체를 함유하는 화장료 조성물에 비해 피부 안전성이 우수함을 확인하였다.As shown in Table 7 above, it was confirmed that the cosmetic composition containing the softening plant using the microorganism of Example 1 had superior skin safety compared to the cosmetic composition containing the softening plant using a chemical method.

Claims (7)

천연 연화 식물체를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물로서,
상기 천연 연화 식물체는,
식물체를 당화하는 단계;
상기 당화된 식물체를 액화 질소를 이용하여 동결 및 파쇄하는 단계;
상기 동결 파쇄한 식물체에 미생물 배양액을 첨가하여 연화하는 단계;
상기 연화물에 자외선을 조사하여 살균하는 단계; 및
상기 살균된 연화물을 여과 및 세척하여 천연 연화 식물체를 수득하는 단계를 포함하는 방법으로 제조되고,
상기 미생물은 효소를 대사산물로 생성하는 미생물로서, 락토바실러스 플란터럼(Lactobacillus plantarum), 엔테로코커스 페시움(Enterococcus faecium), 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus), 트리코더마 비리데(Trichoderma viride), 클로스트리듐 써모셀럼(Clostridium thermocellum), 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens) 및 셀룰로모나스 우다(Cellulomonas uda)로 이루어진 군에서 선택된 것이고,
상기 미생물을 이용한 천연 연화 식물체는 화장료 조성물 총 중량 대비 0.1 내지 30 중량% 포함되는 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
A cosmetic composition containing a natural softening plant as an effective ingredient,
The above natural softening plant is,
The stage of saccharifying the plant body;
A step of freezing and crushing the above saccharified plant body using liquid nitrogen;
A step of softening by adding a microbial culture solution to the above-mentioned frozen and crushed plant body;
A step of sterilizing the above softened material by irradiating it with ultraviolet rays; and
It is manufactured by a method including the step of filtering and washing the sterilized softened material to obtain a natural softening plant body,
The above microorganism is a microorganism that produces enzymes as metabolites, and is Lactobacillus plantarum . Selected from the group consisting of Enterococcus faecium , Pediococcus pentosaceus , Trichoderma viride , Clostridium thermocellum , Pseudomonas fluorescens , and Cellulomonas uda ,
A cosmetic composition, characterized in that the natural softening plant using the above microorganism is contained in an amount of 0.1 to 30 wt% based on the total weight of the cosmetic composition.
제1항에 있어서,
상기 당화하는 단계는 상기 식물체에 단당류, 이당류, 다당류 및 당알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 당을 식물체 중량 대비 1 내지 20 중량%로 첨가하는 단계를 포함하는, 화장료 조성물.
In the first paragraph,
A cosmetic composition, wherein the saccharifying step comprises adding at least one sugar selected from the group consisting of monosaccharides, disaccharides, polysaccharides and sugar alcohols to the plant in an amount of 1 to 20 wt% relative to the weight of the plant.
제1항에 있어서,
상기 동결 및 파쇄하는 단계는,
상기 당화된 식물체를 액화 질소에 넣어 1 분 내지 30 분 동안 방치하여 동결시키고, 파쇄기로 파쇄하여 1 내지 10 mm 크기의 균일한 식물체를 수득하는 단계를 포함하는, 화장료 조성물.
In the first paragraph,
The above freezing and crushing steps are:
A cosmetic composition comprising a step of freezing the saccharified plant body by placing it in liquid nitrogen for 1 to 30 minutes, and crushing it with a crusher to obtain uniform plant bodies having a size of 1 to 10 mm.
제1항에 있어서,
상기 식물체는 목본류의 어린 가지, 잎, 꽃 또는 열매, 또는 초본류의 꽃, 잎, 줄기, 뿌리 또는 열매인 것을 특징으로 하는, 화장료 조성물.
In the first paragraph,
A cosmetic composition, characterized in that the plant body is a young branch, leaf, flower or fruit of a woody plant, or a flower, leaf, stem, root or fruit of an herbaceous plant.
제1항에 있어서,
상기 자외선 조사 단계는 20W의 자외선 살균등을 사용하여 10분 내지 1시간 동안 조사하는 것을 특징을 하는, 화장료 조성물.
In the first paragraph,
A cosmetic composition characterized in that the above ultraviolet irradiation step is performed using a 20W ultraviolet sterilizing lamp for 10 minutes to 1 hour.
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