KR102644461B1 - 경피흡수율이 우수한 모발 성장 촉진용 리포좀 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 경피흡수율이 우수한 모발 성장 촉진용 리포좀 조성물에 관한 것이다.
본 발명으로부터 제공되는 리포좀 조성물은 피담지체인 용해도가 낮은 멜라토닌의 용해 안정성을 증대시키고, 리포좀 막의 유연성이 높아 각질층 침투가 용이하여 피부에 활성 물질을 빠르게 흡수시켜 효능을 극대화시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 모발 성장 효과 및 항산화 효과가 우수하며, 경피 흡수율이 높아 화장료 조성물에 용이하게 적용이 가능하다.
본 발명으로부터 제공되는 리포좀 조성물은 피담지체인 용해도가 낮은 멜라토닌의 용해 안정성을 증대시키고, 리포좀 막의 유연성이 높아 각질층 침투가 용이하여 피부에 활성 물질을 빠르게 흡수시켜 효능을 극대화시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 모발 성장 효과 및 항산화 효과가 우수하며, 경피 흡수율이 높아 화장료 조성물에 용이하게 적용이 가능하다.
Description
본 발명은 경피흡수율이 우수한 모발 성장 촉진용 리포좀 조성물에 관한 것이다.
최근 현대인들에게 대기오염과 스트레스 등의 여러 요인들로 인하여 탈모 인구 발생이 증가하고 있으며 발생 연령도 점차 낮아짐에 따라 치료 및 예방에 대한 관심이 증대되고 있다.
탈모증 치료 및 예방에 있어 다양한 시도가 이루어지고 있는데, 외과적인 방법으로 두피피판술, 탈모 부위 축소술 및 조직 확장술에 의한 두피 성형술, 자가 모발 이식술이 있으나 그 효과 면에서는 우수하더라도 수술에 대한 환자의 경제적, 정신적 부담이 매우 커 널리 사용되기는 어렵다는 단점이 있다. 이에 탈모증을 치료를 위해 미녹시딜, 프로페시아 등의 약물이 사용되고 있으나 미녹시딜은 가려움증, 피부 자극 등의 부작용이 있고, 프로페시아는 사용 중단 시 원상태로 돌아가는 문제점과 성욕감퇴, 발기부전 등의 부작용이 발생하며 여성은 기형아 출산 위험이 있기 때문에 복용할 수 없다는 단점이 존재한다. 따라서 부작용이 없으며 부담이 적은 물질을 개발하기 위한 연구가 계속되고 있다.
멜라토닌은 사람의 송과선(Pineal Gland)에서 분비되는 신경 호르몬으로 생체 리듬과, 수면 주기와 같은 다양한 생리학적 반응을 조절한다. 또한 산화 스트레스 및 노화 과정으로 인한 세포 손상으로부터 세포를 보호할 수 있는 강력한 항산화 특성을 가지고 있다고 알려져 있다. 최근 연구 결과에서 멜라토닌이 송과체 외 영역, 특히 피부에서 합성 및 대사될 수 있다고 보고되었다.
멜라토닌의 생물학적 기능은 수용체인 멜라토닌 수용체 1 및 멜라토닌 수용체 2에 의해 매개된다. 흥미롭게도 멜라토닌 수용체는 각질 형성 세포, 멜라닌 세포 및 섬유아세포에서도 발현되는 것이 확인되었다. 피부에서 멜라토닌 수용체는 세포 증식 및 분화에 관여한다고 알려져 있다, 또한 모낭이 멜라토닌의 합성 부위로, 연구에 따르면 모낭에서 멜라토닌 수용체 단백질 발현은 모발 주기에 따라 달라지며 인간 두피 모낭의 멜라토닌 농도는 혈청에서 보다 더 높은 것으로 보고되어 멜라토닌이 잠재적으로 모발 성장을 조절할 수 있음을 확인하였다.
그러나 두피를 포함한 인간의 피부는 각질층을 비롯한 표피층, 진피층 등으로 구성된 피부 장벽이 존재한다. 특히 피부 최외각의 각질층은 케라틴이라고 하는 단백질을 주성분으로 하는 각질세포와 그 세포들 사이를 채우고 있는 지질층으로 구성되어 있어, 활성 성분들이 각질세포간 지질층을 통과하여 흡수되는 경로 외 다른 경로로는 흡수되기 어려운 구조이다. 그렇기 때문에 지용성 활성성분이 아닌 활성성분은 일반적으로 그 흡수정도가 매우 낮은 것으로 알려져 있다.
기존의 여러 경피전달 시스템들 중에서 리포좀은 생체막의 주요성분인 인지질로 구성되어 생체 친화적이며 수용성 또는 지용성 성분 모두를 리포좀의 지질 이중층으로 구성된 내부로 포집 할 수 있다는 장점이 있다. 하지만 낮은 포집 효율과 제형의 불안정성 등으로 그 사용에 한계가 있어왔다.
리포좀을 이용하는 모발 성장에 대한 기술로는, 국내의 경우 대한민국 등록특허공보 제10-2295754호「콩배아 추출물을 함유하는 모근강화, 모발성장 촉진 또는 탈모방지용 조성물」, 대한민국 등록특허공보 제10-2188665호「나노 다이아몬드의 리포좀 제형을 이용한 발모 촉진 또는 탈모 억제용 조성물」 등이 개시되어 있다.
이에, 본 발명자들은 수상 성분, 인지질층 및 인지질층 내부에 담지되는 피담지체를 최적의 성분 및 함량으로 포함시킬 경우, 피담지체인 용해도가 낮은 멜라토닌의 용해 안정성을 증대시키고, 리포좀 막의 유연성이 높아 각질층 침투가 용이하여 피부에 활성 물질을 빠르게 흡수시킬 뿐만 아니라, 모발 성장 효과, 항산화 효과 및 우수한 경피 흡수율을 동시에 부여할 수 있다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 리포좀 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 리포좀 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 수상 성분에 분산된 리포좀을 포함하고, 상기 리포좀은 인지질층 및 인지질층 내부에 담지되는 피담지체로 이루어져 있고, 상기 수상 성분은 부틸렌글라이콜, 헥산다이올, 알지닌 및 물을 포함하고, 상기 인지질층은 인지질 및 다이포타슘 글리시리제이트, 콜레스테롤 및 세라마이드를 포함하고, 상기 피담지체는 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 멜라토닌 0.1~3중량%, 하이드롤라이즈드 인삼사포닌 0.1~2중량% 및 니코틴아마이드모노뉴클레오타이드 0.01~0.5중량%를 포함되는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 수상 성분은 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 부틸렌글라이콜 10~40중량%, 헥산다이올 1~5중량%, 알지닌 0.01~0.3중량% 및 물 50~80중량%를 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 인지질층은 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 인지질 0.1~5중량%, 다이포타슘 글리시리제이트 0.1~3중량%, 콜레스테롤 0.01~1중량% 및 세라마이드 0.01~1중량%를 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 피담지체는 인지질층에 대하여 1:0.1~3 중량비로 담지되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 리포좀은 50~1,000nm의 크기를 갖는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 있어서, 상기 리포좀 조성물은 모발 성장 효과, 항산화 효과 및 경피흡수 증가 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 상기 리포좀 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 화장료 조성물은 리포좀 조성물 2~5중량%, 석창포추출물 40~50중량%, 정제수 30~40중량%, 딸기꽃받침추출물 5~10중량%, 1,2-헥산다이올 1~3중량%, 계면활성제로서 폴리글리세릴-10라우레이트 1~3중량%, 점증제로서 카보머 0.1~1중량%, pH조절제로서 트로메타민 0.01~1중량% 및 나머지는 기타 첨가제를 포함하는 것을 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 수상 성분, 인지질층 및 피담지체를 혼합하고 호모 믹서를 이용하여 500~1,500rpm으로 5~15분 동안 교반하여 1차 유화하는 단계; 및 상기 유화물을 마이크로 플루다이저(Microfludizer)를 이용하여 500 bar 내지 1,500bar의 압력으로 2차 유화하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 수상 성분은 부틸렌글라이콜, 헥산다이올, 알지닌 및 물을 포함하고, 인지질층은 인지질 및 다이포타슘 글리시리제이트, 콜레스테롤 및 세라마이드를 포함하고, 피담지체는 멜라토닌, 하이드롤라이즈드 인삼사포닌 및 니코틴아마이드모노뉴클레오타이드를 포함하는 것을 특징으로 한다.
본 발명으로부터 제공되는 리포좀 조성물은 피담지체인 용해도가 낮은 멜라토닌의 용해 안정성을 증대시키고, 리포좀 막의 유연성이 높아 각질층 침투가 용이하여 피부에 활성 물질을 빠르게 흡수시켜 효능을 극대화시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 모발 성장 효과 및 항산화 효과가 우수하며, 경피 흡수율이 높아 화장료 조성물에 용이하게 적용이 가능하다.
도 1은 본 발명에 따른 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 인간 모유두세포에서의 세포 증식률을 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 Free radical 제거능을 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 Growth Hormone Receptor(GHR) 인자의 mRNA 발현 증가 효과를 인간 모유두세포에서 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 Keratinocyte Growth Factor(KGF) 인자의 mRNA 발현 증가 효과를 인간 모유두세포에서 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 3을 화장품 제형에 적용 후 Franz Diffusion Cell 시험법을 이용하여 피부 흡수도를 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 Free radical 제거능을 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명에 따른 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 Growth Hormone Receptor(GHR) 인자의 mRNA 발현 증가 효과를 인간 모유두세포에서 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명에 따른 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 Keratinocyte Growth Factor(KGF) 인자의 mRNA 발현 증가 효과를 인간 모유두세포에서 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명에 따른 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 3을 화장품 제형에 적용 후 Franz Diffusion Cell 시험법을 이용하여 피부 흡수도를 확인한 결과를 나타낸 그래프이다.
다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.
본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함" 한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명은 수상 성분에 분산된 리포좀을 포함하고, 상기 리포좀은 인지질층 및 인지질층 내부에 담지되는 피담지체로 이루어져 있고, 상기 수상 성분은 부틸렌글라이콜, 헥산다이올, 알지닌 및 물을 포함하고, 상기 인지질층은 인지질 및 다이포타슘 글리시리제이트, 콜레스테롤 및 세라마이드를 포함하고, 상기 피담지체는 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 멜라토닌 0.1~3중량%, 하이드롤라이즈드 인삼사포닌 0.1~2중량% 및 니코틴아마이드모노뉴클레오타이드 0.01~0.5중량%를 포함되는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 수상 성분은 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 부틸렌글라이콜 10~40중량%, 헥산다이올 1~5중량%, 알지닌 0.01~0.3중량% 및 물 50~80중량%를 포함하는 것일 수 있다.
상기 수상 성분인 부틸렌글라이콜은 피부의 보습 및 향균 기능을 하며, 다른 유용성 성분들에 대한 용제로도 사용되는 수용성 성분이다. 헥산다이올은 향균 기능 및 다른 유용성 성분들에 대한 용제로 사용된다. 알지닌은 아미노산 중 하나로 피부 보습 효과가 있으며, 리포좀 안정화를 위한 목적으로 사용된다. 물은 리포좀 조성물 성분의 용이한 혼합 및 분산을 목적으로 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 인지질층은 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 인지질 0.1~5중량%, 다이포타슘 글리시리제이트 0.1~3중량%, 콜레스테롤 0.01~1중량% 및 세라마이드 0.01~1중량%를 포함하는 것이 인지질층의 물성이 저하되지 않으면서 안정성이 우수하다는 측면에서 바람직하다.
상기 인지질층 내부에는 피담지체를 담지할 수 있다. 인지칠층에 인지질, 다이포타슘 글리시리제이트, 콜레스테롤 및 세라마이드를 상기 범위의 함량으로 포함할 경우 막의 유연성이 증가되어 변형력이 우수하기 때문에, 각질 사이로 효과적으로 침투 이동할 수 있어 통상적인 리포좀보다 경피 흡수 효율이 우수하다.
상기 인지질은 통상적인 것을 사용할 수 있다. 예를 들면 탄소수가 12~24개인 지방산 사슬을 가지며, 포스파티딜콜린, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤 및 포스파티딜이노시톨 중에서 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 다이포타슘 글리시리제이트는 엣지 엑티베이터라고 불리는 단일 사슬 계면활성제로, 인지질 층의 막에 유연성을 부여하는 역할을 한다. 그렇기 때문에 아주 작은 힘으로도 변형이 쉽게 일어나, 일반 리포좀에 비해 좁은 각질층 사이의 틈새를 쉽게 통과할 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 피담지체는 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 멜라토닌 0.1~3중량%, 하이드롤라이즈드 인삼사포닌 0.1~2중량% 및 니코틴아마이드모노뉴클레오타이드 0.01~0.5중량%를 포함하는 것일 수 있다.
또한, 피담지체 총 중량에 대하여 멜라토닌 30~70중량%, 하이드롤라이즈드인삼사포닌 30~60중량%, 니코틴아마이드모노뉴클레오타이드 5~15중량%를 포함하는 것일 수 있다.
상기 멜라토닌은 산화 스트레스 및 노화 과정으로 인한 세포 손상으로부터 세포를 보호할 수 있는 강력한 항산화 특성을 가지고 있고, 모낭에서 합성되어 모낭 내 농도가 높으며 발모와 관련된 다양한 유전자에 영향을 주어 모발 성장을 조절하고 탈모개선 효과를 갖는다.
상기 하이드롤라이즈드 인삼사포닌은 혈류개선, 항산화 효능이 있으며, 모낭 세포의 증식을 촉진시키는 효과가 있어 멜라토닌과 함께 탈모개선 효과를 갖는다.
상기 니코틴아마이드모노뉴클레오타이드는 미래의 회춘약으로도 불리는 노화억제물질로 노화로 인해 부족해진 NAD+의 생합성을 증가시켜 세포를 젊게 유지시켜 주고, 두피와 모발에도 탄력을 부여해준다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 피담지체는 인지질층에 대하여 1:0.1~3 중량비로 담지되는 것이 모발 성장 효과를 주면서 석출되지 않고 안정한 리포좀을 형성할 수 있다는 측면에서 바람직하다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 리포좀은 50~1,000nm의 크기를 갖는 것일 수 있다. 상기 ‘크기’는 직경 또는 최대길이를 의미하는 것으로 정의한다. 상기 크기 범위에서 본 발명의 리포좀의 안정성 및 경피흡수 효과가 우수 하다. 예를 들면 60~500nm의 크기를 가질 수 있다. 다른 예를 들면 70~300nm의 크기를 가질 수 있다.
상기 리포좀 조성물은 피담지체인 용해도가 낮은 멜라토닌의 용해 안정성을 증대시키고, 리포좀 막의 유연성이 높아 각질층 침투가 용이하여 피부에 활성 물질을 빠르게 흡수시켜 효능을 극대화시킬 수 있다. 뿐만 아니라, 모발 성장 효과 및 항산화 효과가 우수하며, 경피 흡수율이 높아 화장료 조성물에 용이하게 적용이 가능하다.
또한, 본 발명은 리포좀 조성물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 화장료 조성물은 리포좀 조성물 2~5중량%, 석창포추출물 40~50중량%, 정제수 30~40중량%, 딸기꽃받침추출물 5~10중량%, 1,2-헥산다이올 1~3중량%, 계면활성제로서 폴리글리세릴-10라우레이트 1~3중량%, 점증제로서 카보머 0.1~1중량%, pH조절제로서 트로메타민 0.01~1중량% 및 나머지는 기타 첨가제를 포함하는 것일 수 있다.
또한, 본 발명은 수상 성분, 인지질층 및 피담지체를 혼합하고 호모 믹서를 이용하여 500~1,500rpm으로 5~15분 동안 교반하여 1차 유화하는 단계; 및 상기 유화물을 마이크로 플루다이저(Microfludizer)를 이용하여 500 bar 내지 1,500bar의 압력으로 2차 유화하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 수상 성분은 부틸렌글라이콜, 헥산다이올, 알지닌 및 물을 포함하고, 인지질층은 인지질 및 다이포타슘 글리시리제이트, 콜레스테롤 및 세라마이드를 포함하고, 피담지체는 멜라토닌, 하이드롤라이즈드 인삼사포닌 및 니코틴아마이드모노뉴클레오타이드를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 1차 유화는 호모 믹서를 사용하여 실시할 수 있으며, 호모 믹서는 통상적으로 사용되는 장치를 사용할 수 있다. 호모 믹서를 이용하여 500~1,500rpm으로 5~15분 동안 교반하여 1차 유화할 경우 인지질층이 용이하게 형성되고상기 인지질층 내부에 상기 피담지체가 담지될 수 있기 때문에 바람직하다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 2차 유화는 마이크로 플루다이저(Microfludizer)를 사용하여 실시할 수 있다. 마이크로 플루다이저는 균일한 크기의 리포좀을 수득하는 목적으로 사용하며, 고압을 이용하여 유화를 수행할 수 있다. 상기 마이크로 플루다이저는 통상적으로 사용되는 장치를 사용할 수 있다. 마이크로 플루다이저를 이용하여 500 bar 내지 1,500bar의 압력으로 2차 유화할 경우 케비테이션(cavitation) 현상에 의해 상기 1차 유화된 유화물의 입자가 미세화되기 때문에 바람직하다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
[실시예 1] 리포좀 조성물 제조
레시틴, 다이포타슘글리시리제이트, 콜레스테롤, 세라마이드, 피담지체, 정제수, 부틸렌글라이콜, 알지닌 및 헥산다이올을 하기 표 1과 같은 함량으로 준비하고, 호모믹서를 사용하여 1,000 rpm의 회전속도로 10분 동안 교반 및 1차 유화하여 제1 유화물(탄성리포좀 분산액)을 제조한 다음, 마이크로플루다이져를 사용하여 상온에서 600~900 bar의 압력으로 2~3회 처리하여, 2차 유화를 실시하여 리포좀 조성물을 제조하였다.
| 성분 (중량%) | 실시예 | 비교예 | |||
| 1 | 1 | 2 | 3 | ||
| 인지질층 | 다이포타슘글리시리제이트 | 0.80 | - | 0.80 | - |
| 레시틴 | 1.50 | - | 1.50 | 1.50 | |
| 세라마이드 | 0.05 | - | 0.05 | 0.05 | |
| 콜레스테롤 | 0.05 | - | 0.05 | 0.05 | |
| 피담지체 | 멜라토닌 | 0.50 | 0.50 | - | 0.50 |
| 하이드롤라이즈드 인삼사포닌 |
0.50 | - | - | 0.50 | |
| 니코틴아마이드모노 뉴클레오타이드 |
0.10 | - | - | 0.10 | |
| 수상성분 | 부틸렌글라이콜 | 20.00 | 20.00 | 20.00 | 20.00 |
| 헥산다이올 | 2.00 | 2.00 | 2.00 | 2.00 | |
| 알지닌 | 0.05 | - | 0.05 | 0.05 | |
| 정제수 | 74.45 | 77.50 | 75.55 | 75.25 | |
| 총합 | 100.00 | 100.00 | 100.00 | 100.00 | |
[비교예 1] 조성물 제조
멜라토닌, 정제수, 부틸렌글라이콜 및 헥산다이올을 표 1과 같은 함량으로 준비하고, 믹서를 사용하여 600 rpm의 회전속도로 5분 동안 교반 및 혼합하여 조성물을 제조하였다.
[비교예 2] 리포좀 조성물 제조
피담지체를 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 리포좀 조성물을 제조하였다.
[비교예 3] 리포좀 조성물 제조
다이포타슘 글리시리제이트를 제외하고, 상기 실시예 1과 동일한 방법으로 리포좀 조성물을 제조하였다.
[실험예 1] 리포좀의 입도 분석
실시예 1 및 비교예 3의 리포좀을 입도 분석기를 이용하여 평균 입도 분포를 확인하였다.
| 구분 | 실시예 1 | 비교예 3 |
| 평균입도분포 (nm) | 98.6 ± 4.59 | 71.8 ± 1.75 |
그 결과, 표 2에 나타난 바와 같이 실시예 1의 리포좀 평균 입도는 80~130nm 범위로 상당히 균일하게 분포되어 있었고, 평균 입자의 사이즈가 비교예 3보다 약 1.37배 정도 커서 탄성 리포좀 내부에 포집할 수 있는 피담지체의 양이 많아지고, 이에 따라 포집 효율도 증가함을 확인하였다.
실시예 1, 비교예 1 및 비교예 3에서 멜라토닌의 함량을 1.50 중량%로 증가 시 상온에서 비교예 1는 1시간 이내, 비교예 3은 하루 경과 후 석출이 발생했지만, 실시예 1은 1주일 이상 안정한 것을 확인하였다.
[실험예 2] 리포좀의 가변형성지수 측정
실시예 1 및 비교예 3의 리포좀의 가변형성지수를 측정하고자 하였다. 가변형성지수는 계면활성제에 의해 증대되는 리포좀 막의 유동성을 측정하는 것으로, 리포좀 분산액을 피부 각질세포간 간극 크기와 동일한 50nm membrane에 0.2Mpa의 압력으로 통과시켜 측정한 후 수학식 1에 따라 가변형성지수를 측정하였다.
<수학식 1>
Deformability = Jflux X (rv/rp)2
Jflux : membrane을 통과한 vesicle의 양
rv : extrusion 후 vesicle의 입자 크기
rp : membrane의 기공 크기
| 구분 | 실시예 1 | 비교예 3 |
| 가변형성지수 | 3.1577 ± 0.0843 | 1.6348 ± 0.0473 |
그 결과, 표 3에 나타난 바와 같이 실시예 1의 리포좀 가변형성지수는 3.1577로 비교예 3의 리포좀 대비 약 1.9배 높게 측정되었다. 이를 통해 실시예 1의 리포좀이 막의 유연성이 높아 각질층 침투가 용이하고, 피부에 활성 물질을 빠르게 흡수시켜 효능을 극대화시킴을 알 수 있었다.
[실험예 3] 세포증식 확인 실험
실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 세포 증식 효과를 확인하기 위해 세포 증식 확인 실험을 진행하였다. HFDPC를 96-웰 플레이트에 한 well 당 1×103개의 농도로 분주하고 37℃, 5% CO2 환경인 배양기에서 배양하여 plate에 부착시켰다. 24시간 뒤, 각각의 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3을 포함한 배지로 교체하여 배양하고 48시간 뒤 배지를 제거하고 10% WST-1 시약을 각 well에 처리하였다. 2시간 동안 배양기에서 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정한 후 하기 수학식 3에 따라 세포 증식율을 측정하였다.
<수학식 3>
세포증식율(%)=[(시험물질의 흡광도)/(대조군의 흡광도)] X 100
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 2% 농도 처리 시 세포증식율이 실시예 1은 40.01%, 비교예 2는 8.71%, 비교예 3은 30.75% 증가하는 것을 확인하였다. 실시예 1은 비교예 2 및 비교예 3에 대비 세포증식율이 높게 나타났고, 특히 비교예 3 대비 약 7.1% 높게 측정되었다.
[실험예 4] 항산화 실험: DPPH Assay
실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 항산화 효능을 확인하고자 DPPH assay를 통해 항산화력을 측정하였다. 에탄올에 녹인 DPPH(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl) 50 μM과 각각의 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3을 적정농도로 희석하여 준비하고, 준비된 시료를 DPPH 용액과 섞어 30분간, 4℃에서 보관하였다. 이후, 반응이 끝난 시료를 ELISA reader를 이용하여 520 nm에서 흡광도를 측정한 후 하기 수학식 4에 따라 항산화 효과를 계산하였다.
<수학식 4>
Free radical 제거능(%)=[(시험물질의 흡광도)/(대조군의 흡광도)] X 100
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 실시예 1 및 비교예 3은 각각 34.41%, 33.87% 의 비슷한 Free radical 제거 효과를 나타내었으며, 비교예 2에서는 Free radical 제거 효과가 없는 것을 확인하였다.
[실험예 5] 발모 효과 실험: : GHR, KGF mRNA 발현 확인 실험
실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3의 발모 효과를 확인하고자, 확인 지표로 사용되는 Growth Hormone Receptor(GHR)과 Keratinocyte Growth Factor(KGF)의 mRNA 발현량을 in-vitro 상에서 확인하였다. HFDPC 세포를 24-웰 플레이트에 한 Well 당 1×105개의 농도로 분주한 후 37℃, 5% CO2 환경인 배양기에서 24시간 동안 배양하여 세포를 plate에 부착시켰다. 이후 각각의 실시예 1, 비교예 2 및 비교예 3을 적정농도로 희석한 배지를 처리하여 24시간 동안 반응시켰다. 이후 각 샘플을 처리한 세포에서 RNA 추출 키트(NucleoSpin™ RNA, Macherey-Nagel™)를 이용하여 RNA를 분리한 뒤 나노드롭(Nanodrop)을 이용하여 260nm에서 RNA를 정량한 후, 각 2μg의 RNA를 사용하여 PCR 기계에서 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA에 타겟 유전자 특이적 프라이머와 시아닌 염료인 사이버그린(SYBR Green)을 첨가한 혼합물을 이용하여 real-time PCR 기계에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 실시함으로써 최종적으로 타겟 유전자의 발현 정도를 평가하였다. 프라이머의 서열과 반응 조건은 하기 표 4에 나타내었으며, 유전자 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였다.
| 구분 | 유전자 | 프라이머 방향 |
서열(5’→3’) | 반응조건 |
| 서열번호 1 | GHR | F | 5' -AGTGCAACCAGATCCACCCA- 3 | 95℃, 5분 동안 중합 효소 활성화 후, 95℃ 15초, 58℃ 30초, 72℃ 30초 조건에서 35 사이클로 중합 반응 |
| 서열번호 2 | R | 5' -ATTGCGTGGTGCTTCCCATC- 3 | ||
| 서열번호 3 | KGF | F | 5' -TCCTGCCAACTTTGCTCTAC- 3 | |
| 서열번호 4 | R | 5' -TAGCCATTTGCTCTGGAGTC- 3 | ||
| 서열번호 5 | β-actin | F | 5' -CATGAAGTGTGACGTGGACA- 3 | |
| 서열번호 6 | R | 5' -CAGGGCAGTGATCTCCTTCT - 3' |
그 결과, 도 3에 나타난 바와 같이 실시예 1은 GHR mRNA 발현이 무처리군 대비 1.71배 증가하였고, 비교예 3은 1.29배 증가하였으며, 비교예 2는 발현량에 변화가 없었다. 실시예 1의 GHR mRNA 발현은 비교예 2 및 비교예 3에 비해 높게 나타났고, 특히 비교예 3 대비 32.2% 증가하였다.
또한, 도 4에 나타난 바와 같이 실시예 1은 KGF mRNA 발현이 무처리군 대비 1.85배 증가하였고, 비교예 2는 1.02배 증가하였으며, 비교예 3은 1.25배 증가하였다. 실시예 1의 KGF mRNA 발현은 비교예 2 및 비교예 3에 비해 높게 나타났고, 특히 비교예 3 대비 47.7% 증가하였다.
[실험예 6] Franz Diffusion Cell 시험법을 이용한 경피흡수 시험
실시예 1, 비교예 1 및 비교예 3을 화장료 조성물에 5중량% 적용 후 프란츠 디퓨전 셀을 사용하여 경피흡수 시험을 실시하였다. 상기 화장료 조성물은 석창포추출물 45중량%, 정제수 40중량%, 딸기꽃받침추출물 5중량%, 그 외 기타 첨가제 5중량%를 포함하였다.
경피흡수 시험은 프란츠 디퓨젼 셀(Franz diffusion cell, 유효면적: 0.64㎠, 수용칸의 부피: 5ml)을 사용하여 싱크 조건(Sink condition)하에서 실시하였으며, 수용상은 pH 7.4의 인산 완충 식염수(Phosphate buffered saline, PBS)를 사용하였다. 준비된 인공피부를 수용칸(Receptor chamber) 위에 위치시키고, 공여칸(Donor chamber)을 덮어 클램프로 고정시킨 후 수용상을 프란츠 디퓨젼 셀에 채우고 32±1℃ 로 유지시켰다. 실시예 1, 비교예 1 및 비교예 3을 포함하는 화장료 조성물을 각각 1ml씩 균일하게 도포하여 경피흡수 시험을 실시하였다. 경피흡수 시험 실시 후 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간 경과 시 수용상 0.3ml을 채취 및 분석하고, 새로운 인산 완충 식염수로 보충하였다. 인공피부는 사용 시 인산 완충 식염수에 5분간 세척하여 사용하였다. 분석은 HPLC를 사용하였다. 분석조건으로는, 이동상으로 메탄올과 물 50:50 혼합액을 사용하였고, 컬럼은 Sunfire® C18 5㎛ 4.6x150mm, 주입량은 20㎕, 유속은 1.0ml/분, 검출파장은 230nm에서 분석하였다.
| 시간 | 누적흡수율 (%) | ||
| 비교예 1 | 비교예 3 | 실시예1 | |
| 1시간 | 0.65 ± 0.105 | 0.88 ± 0.057 | 1.09 ± 0.213 |
| 2시간 | 1.32 ± 0.238 | 1.39 ± 0.086 | 1.78 ± 0.080 |
| 4시간 | 2.21 ± 0.414 | 2.22 ± 0.425 | 2.49 ± 0.165 |
| 6시간 | 2.94 ± 0.257 | 3.05 ± 0.220 | 3.84 ± 0.164 |
| 12시간 | 6.05 ± 0.426 | 6.81 ± 0.290 | 9.81 ± 0.393 |
| 24시간 | 8.46 ± 0.104 | 12.37 ± 0.822 | 15.64 ± 0.756 |
삭제
그 결과, 표 5 및 도 5에 나타난 바와 같이 실시예 1을 포함하는 화장료 조성물이 비교예 1을 포함하는 화장료 조성물 대비 약 1.85배, 비교예 3을 포함하는 화장료 조성물 대비 약 1.26배 높은 경피 흡수율을 나타냈다. 이에 따라 실시예 1이 비교예 1 및 비교예 3 대비 피부 흡수 효과가 우수한 것을 확인하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Claims (10)
- 수상 성분에 분산된 리포좀을 포함하고,
상기 리포좀은 인지질층 및 인지질층 내부에 담지되는 피담지체로 이루어져 있고,
상기 수상 성분은 부틸렌글라이콜, 헥산다이올, 알지닌 및 물을 포함하고,
상기 인지질층은 인지질 및 다이포타슘 글리시리제이트, 콜레스테롤 및 세라마이드를 포함하고,
상기 피담지체는 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 멜라토닌 0.1~3중량%, 하이드롤라이즈드 인삼사포닌 0.1~2중량% 및 니코틴아마이드모노뉴클레오타이드 0.01~0.5중량%를 포함되는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 수상 성분은 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 부틸렌글라이콜 10~40중량%, 헥산다이올 1~5중량%, 알지닌 0.01~0.3중량% 및 물 50~80중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 인지질층은 리포좀 조성물 총 중량에 대하여 인지질 0.1~5중량%, 다이포타슘 글리시리제이트 0.1~3중량%, 콜레스테롤 0.01~1중량% 및 세라마이드 0.01~1중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 피담지체는 인지질층에 대하여 1:0.1~3 중량비로 담지되는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 리포좀은 50~1,000nm의 크기를 갖는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 리포좀 조성물은 모발 성장 효과, 항산화 효과 및 경피흡수 증가 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 리포좀 조성물을 포함하는 화장료 조성물.
- 제7항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 리포좀 조성물 5중량%, 석창포추출물 45중량%, 정제수 40중량%, 딸기꽃받침추출물 5중량% 및 그 외 기타 첨가제 5중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 수상 성분, 인지질층 및 피담지체를 혼합하고 호모 믹서를 이용하여 500~1,500rpm으로 5~15분 동안 교반하여 1차 유화하는 단계; 및
상기 유화물을 마이크로 플루다이저(Microfludizer)를 이용하여 500~ 1,500bar의 압력으로 2차 유화하는 단계를 포함하되,
상기 수상 성분은 부틸렌글라이콜, 헥산다이올, 알지닌 및 물을 포함하고, 인지질층은 인지질 및 다이포타슘 글리시리제이트, 콜레스테롤 및 세라마이드를 포함하고, 피담지체는 멜라토닌, 하이드롤라이즈드 인삼사포닌 및 니코틴아마이드모노뉴클레오타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 리포좀 조성물의 제조방법.
- 삭제
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| KR1020230100222A KR102644461B1 (ko) | 2023-08-01 | 2023-08-01 | 경피흡수율이 우수한 모발 성장 촉진용 리포좀 조성물 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20050083836A (ko) * | 2002-10-30 | 2005-08-26 | 아에스아테 아게 어플라이드 사이언스 앤드 테크놀로지 | 멜라토닌, 징코 빌로바, 및 비오틴을 포함하는 제제 |
| KR101595530B1 (ko) * | 2015-05-27 | 2016-02-18 | (주)씨엠에스랩 | 피부 주름 개선 및 미백 효과가 우수한 경피 흡수 촉진용 리포좀 조성물 |
| JP2016135750A (ja) * | 2015-01-23 | 2016-07-28 | 株式会社ベスビオ | 化粧料 |
| KR102188665B1 (ko) | 2018-11-05 | 2020-12-08 | 이강현 | 나노 다이아몬드의 리포좀 제형을 이용한 발모 촉진 또는 탈모 억제용 조성물 |
| KR20210065317A (ko) * | 2019-11-27 | 2021-06-04 | 권중휘 | 구증구포한 산양삼 추출물과 천연한방추출물을 함유하는 두발의 발모 및 육모, 눈썹과 속눈썹의 발모 및 육모 촉진용 화장료 조성물을 이용한 순식물성 샴푸, 에센스, 두피크림, 눈썹 및 속눈썹의 화장품 |
| KR102295754B1 (ko) | 2020-04-06 | 2021-08-31 | 주식회사 현대바이오랜드 | 콩배아 추출물을 함유하는 모근강화, 모발성장 촉진 또는 탈모방지용 조성물 |
-
2023
- 2023-08-01 KR KR1020230100222A patent/KR102644461B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (6)
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| KR102295754B1 (ko) | 2020-04-06 | 2021-08-31 | 주식회사 현대바이오랜드 | 콩배아 추출물을 함유하는 모근강화, 모발성장 촉진 또는 탈모방지용 조성물 |
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