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KR102585048B1 - Jak1 선택적 억제제 - Google Patents

Jak1 선택적 억제제 Download PDF

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KR102585048B1
KR102585048B1 KR1020197023855A KR20197023855A KR102585048B1 KR 102585048 B1 KR102585048 B1 KR 102585048B1 KR 1020197023855 A KR1020197023855 A KR 1020197023855A KR 20197023855 A KR20197023855 A KR 20197023855A KR 102585048 B1 KR102585048 B1 KR 102585048B1
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indol
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amino
phenyl
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KR1020197023855A
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칼 망누스 닐손
안니카 비르기타 마르가레타 오스트란드
안나 인그리드 크리스티나 베르그렌
요한 에르. 요한손
마티 유하니 레피스퇴
자미르 프랄하드 카와트카르
치빈 수
제이슨 그랜트 케틀
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아스트라제네카 아베
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Abstract

화학식 I의 화합물 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염이 본원에 개시되며, 식에서 R1 내지 R8은 본원에 정의된 임의의 의미를 갖는다. 또한, 화학식 I의 화합물을 포함하는 제약 조성물 및 이의 사용 방법이 개시된다.
[화학식 I]

Description

JAK1 선택적 억제제
JAK(야누스-관련 키나제) 족은 시토카인 및 성장 인자 매개 신호 도입에서 중요한 역할을 하는 4개의 비-수용체 티로신 키나제, JAK1, JAK2, JAK3 및 Tyk2를 포함한다(Schindler C, and Darnell JE Jr., Annu. Rev. Biochem. 1995;64;621-651). 키나제 JAK1은 특히, 타입 I 인터페론(예를 들어, IFN알파), 타입 II 인터페론(예를 들어, IFN감마), 일반적인 감마 사슬 γc(예를 들어, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 및 IL-21), 및 인터류킨-6 족(IL-10, IL-13 및 IL-22)의 수용체와 상호 작용한다(문헌[N Engl J Med 2013, 368, 161-170]). 이러한 시토카인이 그의 수용체와 결합한 후, 수용체 올리고머화가 일어나 관련된 JAK 키나제의 세포질 꼬리가 근접하게 이동하여 JAK 키나제 상 티로신 잔기의 인산전이 및 활성화를 촉진시킨다. 인산화된 JAK 키나제는 다양한 신호 변환기 및 전사 활성제(STAT) 단백질과 결합하고 이들을 활성화시킨다. 이어서, 이러한 STAT 단백질은 이량체화되고 핵으로 전위되며, 여기서 시그널링(signalling) 분자 및 전사 인자 둘 다로서 기능하고, 궁극적으로 시토카인-반응성 유전자의 프로모터에 존재하는 특정 DNA 서열에 결합한다(문헌[Leonard et al., (2000), J. Allergy Clin. Immunol.105:877-888]). 다양한 면역결핍 및 자가면역 질환, 예컨대 알레르기, 천식, 원형 탈모, 이식(동종이식) 거부 반응, 류마티스 관절염, 근위축성 측삭 경화증 및 다발성 경화증, 및 고형 및 혈액 암은 JAK/STAT 경로의 시그널링 장애로 인한 것이다. 예를 들어, 문헌[Frank, (1999), Mol. Med. 5:432-456 Vijayakriishnan et al, Trends Pharmacol. Sci 2011, 32, 25-34 and Flanagan et al,; Open Rheumatol J. 2012, 6, 232-244; N Engl J Med 2013, 368, 161-170; Exp. Dermatol. 2014, 23, 7-11; J. Med. Chem. 2014, 57, 5023-5038, J Allergy Clin Immunol 2014;133:1162-74, and Expert Opin Orp Drug(2015) 3 (4), 419-431]을 참조한다.
JAK1의 중요한 요소는 수용체의 상이한 서브유닛의 세포내 도메인에서 다른 JAK 키나제와 쌍을 이룰 수 있는 능력이다. 예를 들어, JAK3은 다양한 시토카인 수용체의 일반적인 감마 사슬(γc)과 관련되며, JAK1과 쌍을 이룬다(문헌[Immunol. Rev. 2008, 223, 132-142]). JAK1이 JAK3보다 우세하고, JAK1의 억제는 JAK3 활성에도 불구하고 일반적인 감마 사슬을 통한 시그널링을 불활성화시키기에 충분한 것으로 밝혀졌다(문헌[Chem. Biol. 2011, 18 (3), 314-323]). 따라서, JAK1의 선택적 억제는 JAK1/JAK3-STAT 경로를 통한 시토카인 시그널링과 관련된 다수의 염증 및 자가면역 질환을 치료하기에 충분할 수 있다. 그러나, 다른 JAK 키나제에 대한 오프타깃(off-target) 활성을 거의 내지 전혀 갖지 않는 선택적 JAK1 억제제의 개발은 어려운 것이었다. 특히, 현재 임상 개발에서 JAK1 선택적 억제제로서 확인된 화합물은 단지 미미한 JAK1 선택성을 나타낸다. (문헌[Future Med. Chem. (2015) 7(2), 203-235]). 예를 들어, 필고티니브(Filgotinib)(문헌[J. Med. Chem. 2014, 57, 9323-9342]) 및 ABT-494(WO2015061665 - 도 1)와 같은, 자가면역 질환의 치료를 위한 활발한 개발에서 JAK1 억제제에 대한 생화학적 분석에서 보고된 JAK1/JAK2 선택성 비는 대략 ATP의 Km에서 측정된 IC50에 기초하여 2.8이다. 따라서, 이러한 화합물은 다른 JAK 키나제에 대해 약간의 표적 활성을 가질 것이고, 그에 따라 더 많은 선택적 JAK1 억제제로 제한될 수 있는 추가의 부작용이 있을 것으로 예상된다. 따라서, 빈혈과 같은 오프타깃 활성과 관련된 실제 부작용 또는 인지된 부작용이 없는 JAK1-관련 장애, 예를 들어 백혈병, 림프종, 이식 거부(예를 들어, 췌장 도 이식 거부), 골수 이식 적용(예를 들어, 이식편대숙주병), 자가면역 질환(예를 들어, 제1형 당뇨병), 및 염증(예를 들어, 천식, 알레르기 반응)을 치료하기 위한 매우 강력하고 선택적인 JAK1 억제제를 개발할 필요가 있다.
본 개시 내용은 선택적 JAK1 억제를 갖는 신규 화합물에 관한 것이다. 따라서, 본원에 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염이 제공된다:
[화학식 I]
(상기 식에서,
R1, R3, 및 R4는 각각 개별적으로 수소 및 메틸로부터 선택되고;
R2는 수소, 메틸, 및 -CH2CH2OH로부터 선택되고;
n은 1 또는 2이고;
R5는 메틸, 에틸, 및 -CH2OR8로부터 선택되고;
R6은 메틸, 염소, 및 플루오린으로부터 선택되고;
R7은 메틸, 에틸, 및 시클로프로필로부터 선택되고;
R8은 메틸, 에틸 및 벤질로부터 선택됨).
또한, 본 개시 내용은 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염, 및 제약학적으로 허용가능한 희석제, 부형제 또는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.
또한, 대상체에게 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, JAK1-관련 장애(예를 들어, 제1형 당뇨병, 루푸스, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 천식, 아토피성 피부염, 자가면역 갑상선 장애, 궤양성 대장염, 크론병, COPD, 백반증, 및 원형 탈모)의 치료 방법이 개시된다. 또 다른 구현예에서, 대상체에게 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는 JAK1-관련 장애의 치료를 위한 화학식 I의 화합물의 용도가 개시된다. 또 다른 구현예에서, JAK1-관련 장애의 치료를 위한 약제 또는 제제의 제조에 있어서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 용도가 개시된다. 또 다른 구현예에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, JAK1-관련 장애의 치료를 위한 제약 조성물이 개시된다.
또한, 대상체에게 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서의 JAK1의 억제 방법이 개시된다. 또 다른 구현예에서, 대상체에게 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 JAK1의 억제를 위한 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 용도가 개시된다. 또 다른 구현예에서, 대상체에서 JAK1의 억제를 위한 약제 또는 제제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 용도가 개시된다. 또 다른 구현예에서, 화학식 I의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 대상체에서 JAK1의 억제를 위한 제약 조성물이 개시된다.
또한, 본 개시 내용은 화학식 I의 화합물의 제조에 유용한 방법 및 중간체를 제공한다.
도 1은 실시예 35에 대해 열거된 표제 화합물의 결정질 형태의 분말 X-선 회절 다이어그램을 도시한다.
도 2는 치료되지 않은 마우스와 비교하여 실시예 35의 화합물 0.5 mg/kg으로 원형 탈모증이 확립된 C3H/HeJ 마우스를 치료한 후의 모발 지수 점수(HIS)를 도시한다.
도 3은 접종되었지만 치료되지 않은 래트와 비교하여, 실시예 35의 화합물로 치료된 후 OVA 접종된 갈색 노르웨이 래트에서의 기관지 폐포 세척에서 호산구의 감소율%를 도시한다.
화합물
일 구현예에서, 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염이 개시된다:
[화학식 I]
(상기 식에서,
R1, R3, 및 R4는 각각 개별적으로 수소 및 메틸로부터 선택되고;
R2는 수소, 메틸, 및 -CH2CH2OH로부터 선택되고;
n은 1 또는 2이고;
R5는 메틸, 에틸, 및 -CH2OR8로부터 선택되고;
R6은 메틸, 염소, 및 플루오린으로부터 선택되고;
R7은 메틸, 에틸, 및 시클로프로필로부터 선택되고;
R8은 메틸, 에틸 및 벤질로부터 선택됨).
일부 구현예에서, R1 내지 R4 각각은 독립적으로 수소 및 메틸로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R1, R3, 및 R4는 모두 수소이다.
일부 구현예에서, n은 1이다.
일부 구현예에서, R5는 메틸 또는 -CH2OR8이다.
일부 구현예에서, R6은 메틸 또는 플루오린이다.
일부 구현예에서, R7은 메틸이다.
일부 구현예에서, R8은 메틸이다.
적어도 하나의 구현예에서, R1, R3 및 R4는 H이고; R2는 메틸이고; R6은 플루오린이고; R7은 메틸이고; R5는 -CH2OR8이고; R8은 메틸이다.
일 구현예에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 Ia의 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염이다:
[화학식 Ia]
(상기 식에서,
R1a, R3a, 및 R4a는 각각 개별적으로 수소 및 메틸로부터 선택되고;
R2a는 수소, 메틸, 및 -CH2CH2OH로부터 선택되고;
n은 1 또는 2이고;
R5a는 메틸, 에틸, 및 -CH2OR8a로부터 선택되고;
R6a는 메틸, 염소, 및 플루오린으로부터 선택되고;
R7a는 메틸, 에틸, 및 시클로프로필로부터 선택되고;
R8a는 메틸, 에틸 및 벤질로부터 선택됨).
일부 구현예에서, R1a 내지 R4a 각각은 독립적으로 수소 및 메틸로부터 선택된다.
일부 구현예에서, R1a, R3a, 및 R4a는 모두 수소이다.
일부 구현예에서, n은 1이다.
일부 구현예에서, R5a는 메틸 또는 -CH2OR8a이다.
일부 구현예에서, R6a는 메틸 또는 플루오린이다.
일부 구현예에서, R7a는 메틸이다.
일부 구현예에서, R8a는 메틸이다.
적어도 하나의 구현예에서, R1a, R3a 및 R4a는 H이고; R2a는 메틸이고; R6a는 플루오린이고; R7a는 메틸이고; R5a는 -CH2OR8a이고; R8a는 메틸이다.
일 구현예에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 Ib의 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염이다:
[화학식 Ib]
(상기 식에서,
R5b는 메틸, 에틸, 및 -CH2OR8b로부터 선택되고;
R6b는 메틸, 염소, 및 플루오린으로부터 선택되고;
R7b는 메틸, 에틸, 및 시클로프로필로부터 선택되고;
R8b는 메틸, 에틸 및 벤질로부터 선택됨).
일부 구현예에서, R5b는 메틸 또는 -CH2OR8b이다.
일부 구현예에서, R6b는 메틸 또는 플루오린이다.
일부 구현예에서, R7b는 메틸이다.
일부 구현예에서, R8b는 메틸이다.
적어도 하나의 구현예에서, R6b는 플루오린이고; R7b는 메틸이고; R5b는 -CH2OR8b이고; R8b는 메틸이다.
일부 구현예에서, 표 1의 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염이 개시된다:
[표 1]
개시된 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물은 본원에 기재된 방법 및 공정을 사용하여 제조될 수 있다. 일 양태에서, 개시된 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물은 실시예에 기재된 방법에 따라 제조된다.
화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물은 다양한 입체이성질체 형태로 존재할 수 있고, 본 개시 내용은 각각의 화합물에 대해 존재할 수 있는 각각의 입체이성질체 형태, 및 라세미체를 포함하는 그의 혼합물에 관한 것이다. 치환체가 탄소 원자의 키랄 중심에 부착될 수 있고, 따라서 개시된 화합물이 거울상이성질체, 부분입체이성체 및 라세미체를 포함하는 것으로 이해된다. 용어 "거울상이성질체"는 서로의 비-중첩가능한 거울상인 입체이성질체의 쌍을 포함한다. 한 쌍의 거울상이성질체의 1:1 혼합물은 라세미체 혼합물이다. 상기 용어는 적절할 경우 라세미체 혼합물을 표시하기 위하여 사용된다. 용어 "부분입체이성체" 또는 "부분입체이성질체"는 적어도 2개의 비대칭 원자를 갖지만, 서로의 거울상은 아닌 입체이성질체를 포함한다. 절대 입체 화학은 Cahn-Ingold-Prelog R-S 시스템에 따라 명시된다. 화합물이 순수 거울상이성질체일 경우, 각각의 키랄 중심에서 입체 화학은 R 또는 S에 의해 명시될 수 있다. 절대 배위가 공지되지 않은 분해된 화합물은 그것이 나트륨 디선(D line)의 파장에서 평면 편광을 회전시키는 방향(덱스트로- 또는 좌선성)에 따라 (+) 또는 (-)로 표시될 수 있다. 구조 또는 화학명이 키랄성을 나타내지 않는 한, 그러한 구조 또는 명칭은 구조 또는 명칭에 상응하는 임의의 단일 입체이성질체뿐만 아니라, 라세미체를 포함하는 입체이성질체의 임의의 혼합물을 포함하고자 한다.
표현 "제약학적으로 허용가능한 염"은 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물의 생물학적 효과 및 특성을 보유한 산 부가염을 포함한다. 아세테이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비설페이트/설페이트, 캄포르설포네이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디설포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 히프푸레이트, 히드로요오다이드/요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸설페이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 팔모에이트, 포스페이트/수소 포스페이트/이수소 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 서브살리실레이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 트리플루오로아세테이트 염과 같은 제약학적으로 허용가능한 염은 무기산 또는 유기산으로 형성될 수 있다. 염이 유도될 수 있는 무기산은, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다. 염이 유도될 수 있는 유기산은, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 톨루엔설폰산, 트리플루오로아세트산, 설포살리실산 등을 포함한다.
화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물의 제약학적으로 허용가능한 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티(moiety)로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이러한 화합물의 유리산 형태를 화학량론적 양의 적절한 염기(예컨대, Na+, Ca2+, Mg2+, 또는 K+ 히드록시드, 카르보네이트, 비카르보네이트 등)와 반응시키거나, 이러한 화합물의 유리 염기 형태를 화학량론적 양의 적절한 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로 물 또는 유기 용매 또는 상기 둘의 혼합물에서 수행된다. 일반적으로, 실행 가능할 경우, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴과 같은 비-수성 매질의 사용이 바람직하다. 추가의 적합한 염의 목록은 예를 들어 문헌["Remington's Pharmaceutical Sciences," 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985)]; 및 문헌["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]에서 알 수 있다.
본원에서 제공된 임의의 화학식은 또한 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물에 대해 비표지된 형태뿐만 아니라 동위 원소 표지된 형태를 나타내고자 한다. 동위 원소 표지된 화합물은 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량 번호를 갖는 원자로 대체되는 것을 제외하고는, 본원에 제공된 화학식에 의해 도시된 구조를 갖는다. 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물에 도입될 수 있는 동위 원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 플루오린 및 염소의 동위 원소, 예컨대 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 16F, 31P, 32P, 35S, 36Cl 및 125I를 포함한다. 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물은 방사성 동위 원소, 예컨대 2H, 3H, 13C 및 14C가 존재하는 다양한 동위 원소 표지된 화합물을 포함할 수 있다. 동위 원소 표지된, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물은 일반적으로 당업자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 사전에 사용된 비-표지된 시약 대신 적절한 동위 원소 표지된 시약을 사용한 수반된 실시예에 기재된 것과 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다.
제약 조성물
본 개시 내용은 적어도 하나의 구현예에서 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 제약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물을 포함한다.
표현 "제약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제"는 합리적인 이익/위험 비율에 비례하는 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이, 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투여 형태를 포함한다. 제약학적으로 허용가능한 부형제, 담체, 및 희석제는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 실제 제약학적으로 허용가능한 부형제, 담체, 및 희석제의 임의의 선택은 제약 조성물의 의도된 사용 및 투여 방법에 따라 달라진다.
개시된 조성물은 경구 사용에 적합한 형태(예를 들어, 정제, 로젠지, 경질 또는 연질 캡슐, 수성 또는 유성 현탁액, 에멀전, 분산성 분말 또는 과립, 시럽 또는 엘릭시르로서), 국소 사용에 적합한 형태(예를 들어, 크림, 연고, 젤, 또는 수성 또는 유성 용액 또는 현탁액으로서), 흡입제에 의한 투여에 적합한 형태(예를 들어, 미분된 분말 또는 액체 에어로졸로서), 흡입법에 의한 투여에 적합한 형태(예를 들어, 미분된 분말로서) 또는 비경구 투여에 적합한 형태(예를 들어, 정맥내, 피하내, 근육내 또는 근육내 투여용 멸균 수성 또는 유성 용액으로서 또는 직장 투여용 좌약으로서)일 수 있다.
개시된 조성물은 관련 기술분야에 잘 알려진 통상적인 제약 부형제를 사용하여 통상적인 절차에 의해 수득될 수 있다. 따라서, 경구용 조성물은, 예를 들어 1종 이상의 착색제, 감미제, 향료 및/또는 방부제를 함유할 수 있다.
정제 제제에 적합한 제약학적으로 허용가능한 부형제는, 예를 들어, 불활성 희석제, 예컨대 락토스, 나트륨 카르보네이트, 칼슘 포스페이트 또는 칼슘 카르보네이트; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분 또는 알겐산; 결합제, 예컨대 전분; 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석; 방부제, 예컨대 에틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트; 및 산화방지제, 예컨대 아스코르브산을 포함한다. 정제 제제는 비코팅되거나, 통상적인 코팅제 및 관련 기술분야에 잘 알려진 절차를 사용하여 코팅시켜 그의 위장관 내에서의 활성 성분의 분해 및 후속 흡수를 개질시키거나, 그의 안정성 및/또는 외관을 개선시킬 수 있다.
경구용 조성물은 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어, 칼슘 카르보네이트, 칼슘 포스페이트 또는 카올린과 혼합된 경질 젤라틴 캡슐 형태로, 또는 활성 성분이 물 또는 오일, 예컨대 땅콩유, 유동 파라핀(liquid paraffin) 또는 올리브유와 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로서 존재할 수 있다.
수성 현탁액은 일반적으로 1종 이상의 현탁화제, 예컨대 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 나트륨 알기네이트, 폴리비닐 피롤리돈, 트래거캔스 고무 및 아카시아 고무; 분산제 또는 습윤제, 예컨대 레시틴 또는 알킬렌 옥시드와 지방산(예를 들어 폴리옥스에틸렌 스테아레이트)의 축합 생성물, 또는 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방족 알코올의 축합 생성물, 예를 들어 헵타데카에틸렌옥시세탄올, 또는 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트, 또는 에틸렌 옥시드와 장쇄 지방족 알코올의 축합 생성물, 예를 들어 헵타데카에틸렌옥시세탄올, 또는 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트, 또는 에틸렌 옥시드와 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르의 축합 생성물, 예를 들어 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레에이트와 함께 나노 또는 미소화된 입자 형태로 또는 미세하게 분말화된 형태로 활성 성분을 함유한다. 또한, 수성 현탁액은 1종 이상의 방부제, 예컨대 에틸 또는 프로필 p-히드록시벤조에이트; 산화방지제, 예컨대 아스코르브산; 착색제; 향료제; 및/또는 감미제, 예컨대 수크로스, 사카린 또는 아스파탐을 함유할 수 있다.
유성 현탁액은 식물성 오일, 예컨대 땅콩 오일, 올리브유, 참기름 또는 코코넛 오일, 또는 미네랄 오일, 예컨대 유동 파라핀에 활성 성분을 현탁시킴으로써 제제화될 수 있다. 또한, 유성 현탁액은 증점제, 예컨대 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알코올을 함유할 수 있다. 상기한 바와 같은 감미제, 및 향료제를 첨가하여 맛좋은 경구 제제를 제공할 수 있다. 이러한 조성물은 산화방지제, 예컨대 아스코르브산의 첨가에 의해 보존될 수 있다.
물의 첨가에 의한 수성 현탁액의 제조에 적합한 분산성 분말 및 과립은 일반적으로 활성 성분을 분산제 또는 습윤제, 현탁화제 및 1종 이상의 방부제와 함께 함유한다. 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제는 상기에 이미 언급된 것에 의해 예시된다. 추가의 부형제, 예컨대 감미제, 향료 및 착색제가 또한 존재할 수 있다.
또한, 제약 조성물은 수중유(oil-in-water) 에멀전 형태일 수 있다. 유성 상은 식물성 오일, 예컨대 올리브유 또는 땅콩 오일, 또는 미네랄 오일, 예컨대 유동 파라핀 또는 이들의 임의의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는, 예를 들어 자연 발생 고무, 예컨대 아카시아 고무 또는 트래거캔스 고무, 자연 발생 포스파티드, 예컨대 대두, 레시틴, 에스테르, 또는 지방산 및 헥시톨 무수물로부터 유도된 부분 에스테르(예를 들어 소르비탄 모노올레에이트) 및 상기 부분 에스테르와 에틸렌 옥시드의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트일 수 있다. 또한, 에멀전은 감미제, 향료 및 방부제를 함유할 수 있다.
또한, 제약 조성물은 상기 언급된 적절한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제 중 하나 이상을 사용하여 공지된 절차에 따라 제제화될 수 있는 멸균 주사가능 수성 또는 유성 현탁액 형태일 수 있다. 또한, 멸균 주사가능 제제는 비-독성 비경구적으로 허용가능한 희석제 또는 용매 중 멸균 주사가능 용액 또는 현탁액, 예를 들어 1,3-부탄디올 중 용액일 수 있다.
흡입 및/또는 흡입법에 의한 투여를 위한 조성물은 미분된 고체를 함유하는 에어로졸 또는 액체 방울로서 활성 성분을 분배하도록 배치된 통상적인 가압 에어로졸 형태일 수 있다. 통상적인 에어로졸 추진제, 예컨대 휘발성 플루오린화된 탄화수소가 사용될 수 있고, 에어로졸 장치는 계량된 양의 활성 성분을 분배하도록 편리하게 배치된다. 제제에 대한 추가의 정보를 위하여, 독자는 문헌[Chapter 25.2 in Volume 5 of Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990]을 참조한다.
단일 투여량 형태를 생성하도록 1종 이상의 부형제와 조합되는 활성 성분의 양은 치료되는 호스트 및 특정 투여 경로에 따라 필연적으로 달라질 것이다. 투여 경로 및 투여량 요법에 대한 추가의 정보를 위하여 독자는 문헌[Chapter 25.3 in Volume 5 of Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990]을 참조한다. 예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염(즉, 활성 성분)의 효능 및 물리적 특성에 따라, 언급될 수 있는 제약 조성물은 활성 성분이 적어도 1 중량%(또는 적어도 10 중량%, 적어도 30 중량% 또는 적어도 50 중량%)로 존재하는 것을 포함한다. 즉, 제약 조성물의 활성 성분 대 다른 성분(즉, 부형제, 담체, 및 희석제의 첨가)의 비는 중량 기준으로 적어도 1:99(또는 적어도 10:90, 적어도 30:70 또는 적어도 50:50)이다.
화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 1일 1회, 2회, 3회, 또는 24시간 동안 의학적으로 필요한 만큼 여러 번 투여될 수 있다. 당업자는 대상체에 기초하여 각각의 개별 투여량을 용이하게 결정할 수 있을 것이다. 일부 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 하나의 투여 형태로 투여되거나, 일부 구현예에서, 다중 투여 형태로 투여된다.
방법
화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염은, 예를 들어 하기 예시된 시험에서 볼 수 있는 바와 같이, JAK1 키나제 및 JAK1 키나제와 연관된 관련 단백질 활성을 억제할 수 있으므로, 이러한 억제가 바람직하고/하거나 요구되는 병태의 치료에 유용할 수 있다. 따라서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 JAK1 키나제가 억제 또는 감소되는 것이 요망되고/되거나 요구되는 병태, 또는 일부 구현예에서 JAK1 키나제와 관련된 단백질 활성이 억제 또는 감소되는 것이 요망되고/되거나 요구되는 병태의 치료에 유용할 수 있다. 따라서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 JAK1 키나제의 억제로부터 이점을 얻을 수 있는 장애, 예를 들어 호흡기 질환/장애 및/또는 염증 및/또는 염증 성분을 갖는 질환의 치료에 유용할 것으로 예상된다.
따라서, 적어도 하나의 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서의 JAK1 키나제의 억제 방법이 개시된다.
또 다른 구현예에서, JAK1 키나제의 억제를 위한 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 용도가 개시된다.
또 다른 구현예에서, JAK1 키나제의 억제를 위한 약제의 제조에 있어서 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 용도가 개시된다.
또 다른 구현예에서, JAK1 키나제의 억제를 위한 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제약 조성물이 개시된다.
본 개시 내용의 적어도 하나의 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 5 mM의 생리학적 ATP 농도에서 약 0.010 마이크로몰 이하의 JAK1 효소 억제 활성(IC50)을 나타낸다. 적어도 하나의 다른 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 세포 IL-13 유도된 JAK-STAT6-루시페라제 분석에서 약 0.050 마이크로몰 이하의 억제 활성(IC50)을 나타낸다.
본 개시 내용의 또 다른 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 5 mM의 생리학적 ATP 농도에서 약 0.010 마이크로몰 이하의 JAK1 효소 억제 활성(IC50) 및 5 mM의 생리학적 ATP 농도에서 약 0.5 마이크로몰 이상의 JAK2 및 JAK3 효소 억제 활성(IC50)을 나타낸다. 적어도 하나의 다른 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 5 mM의 생리학적 ATP 농도에서 약 0.010 마이크로몰 이하의 JAK1 효소 억제 활성(IC50), 5 mM의 생리학적 ATP 농도에서 약 0.5 마이크로몰 이상의 JAK2 및 JAK3 효소 억제 활성(IC50), 및 세포 IL-13 유도된 JAK-STAT6-루시페라제 분석에서 약 0.050 마이크로몰 이하의 억제 활성(IC50)을 나타낸다.
또 다른 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 JAK1-관련 장애의 치료 방법이 개시된다.
또 다른 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, JAK1-관련 장애의 치료를 위한 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물의 용도가 개시된다.
또 다른 구현예에서, JAK1-관련 장애의 치료를 위한 약제 또는 제제의 제조에 있어서 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 용도가 개시된다.
또 다른 구현예에서, JAK-관련 장애의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 화학식 1, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염의 용도가 개시된다.
또 다른 구현예에서, JAK1-관련 장애의 치료를 위한 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제약 조성물이 개시된다.
본 개시 내용에 따라, 용어 "JAK1-관련 장애"는, 예를 들어 제1형 당뇨병, 루푸스, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 천식, 아토피성 피부염, 자가면역 갑상선 장애, 궤양성 대장염, 크론병, COPD, 백반증, 및 원형 탈모를 포함한다.
화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 투여 경로에 따라 다양한 투여량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 경구 투여량은 1일 당 약 0.01 mg/kg(체중)(mg/kg/일) 내지 약 100 mg/kg/일, 예컨대 약 0.01 내지 약 20 mg/kg/일, 예를 들어 약 1.0 내지 약 15 mg/kg/일, 예를 들어 약 12.5 mg/kg/일 범위일 수 있다. 정맥내 투여량은 일정한 속도의 주입 동안 약 0.5 mg/kg/일 내지 약 50 mg/kg/일 범위일 수 있다. 흡입 투여량은 약 0.0001 mg/kg/일 내지 약 0.10000 mg/kg/일, 예컨대 약 0.0001 mg/kg/일 내지 약 0.001 mg/kg/일, 예를 들어 약 0.0006 mg/kg/일 범위일 수 있다. 또한, 흡입 투여량은 사용되는 전달 장치에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 건조 분말 흡입기 장치를 통한 흡입 투여량은 약 0.010 mg/kg/일 내지 약 0.020 mg/kg/일 범위일 수 있다.
임의의 경우에, 의사 또는 통상의 기술자는 투여 경로, 치료될 병태의 유형 및 중증도 뿐만 아니라, 치료될 특정 환자의 종, 나이, 체중, 성별, 신장 기능, 간장 기능 및 반응에 따라 달라질 수 있는, 개별 환자에 가장 적합할 실제 투여량을 결정할 수 있을 것이다. 상기한 투여량은 평균적인 경우의 예이며; 물론 더 높거나 더 낮은 투여량 범위가 유리한 개별 경우가 있을 수 있으며, 이는 본 발명의 범위내에 포함된다.
본원에서 사용된 용어 "유효량"은 대상체에서 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어, JAK1과 관련된 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제 및/또는 JAK1-관련 장애의 증상의 개선 및/또는 JAK1-관련 장애의 진행의 늦춤 또는 지연을 이끌어낼 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적 염의 양을 포함한다. 상기 효과는 객관적(즉, 몇 가지 시험 또는 마커에 의해 측정가능함) 또는 주관적(즉, 대상체가 효과의 징후 또는 느낌을 제공함)일 수 있다.
용어 "대상체"는 온혈 포유동물, 예를 들어, 영장류, 소, 돼지, 양, 개, 고양이, 래빗, 래트 및 마우스를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 영장류, 예를 들어, 인간이다. 일부 구현예에서, 대상체는 JAK1-관련 장애를 앓는다. 일부 구현예에서, 대상체는 치료를 필요로 한다(예를 들어, 대상체는 치료로부터 생물학적으로 또는 의학적으로 이점을 얻을 것임).
표현 "억제하다" "억제" 또는 "억제하는"은 생물학적 활성 또는 과정의 기준 활성의 감소를 포함한다. 일부 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 JAK1 키나제를 억제시킨다. 일부 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 선택적 JAK1 억제제이다. 표현 "선택적 JAK1 억제제"는 JAK1을 억제하지만, JAK2 또는 JAK3에 대해, 또는 JAK2 및 JAK3 둘 다에 대해 불활성이거나 덜 활성인 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 JAK1 키나제를 억제시키지만, JAK2 또는 JAK3에 대해, 또는 JAK2 및 JAK3 둘 다에 대해 불활성이거나 또는 덜 활성이다. 예를 들어, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 5 mM의 생리학적 ATP 농도에서 약 0.010 마이크로몰 이하의 JAK1 효소 억제 활성(IC50), 및 5 mM의 생리학적 ATP 농도에서 약 0.5 마이크로몰 이상의 JAK2 및 JAK3 효소 억제 활성(IC50)을 나타낸다. 적어도 하나의 다른 구현예에서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 5 mM의 생리학적 ATP 농도에서 약 0.010 마이크로몰 이하의 JAK1 효소 억제 활성(IC50), 5 mM의 생리학적 ATP 농도에서 약 0.5 마이크로몰 이상의 JAK2 및 JAK3 효소 억제 활성(IC50), 및 세포 IL-13 유도된 JAK-STAT6-루시페라제 분석에서 약 0.050 마이크로몰 이하의 억제 활성(IC50)을 나타낸다.
표현 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 JAK1 키나제와 관련된 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제, 및 대상체에서 JAK1-관련 장애의 하나 이상의 증상의 개선, 또는 대상체에서 JAK1-관련 장애의 진행의 늦춤 또는 지연을 포함한다. 따라서, 화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 상기한 병태의 치료적 및/또는 예방적 치료 둘 다에 제시된다.
실시예
화학식 I, Ia, Ib 또는 표 1의 화합물, 및 이의 제약학적으로 허용가능한 염은 본원에 기재된 방법 및 절차를 사용하거나, 유사한 방법 및 절차를 사용하여 제조될 수 있다. 전형적인 또는 예시적인 공정 조건(즉, 반응 온도, 시간, 반응물의 몰 비, 용매, 압력 등)이 주어질 경우, 달리 언급되지 않는 한, 다른 공정 조건이 또한 사용될 수 있다는 것을 인지할 것이다. 최적의 반응 조건은 사용되는 특정 반응물 또는 용매에 따라 달라질 수 있지만, 이러한 조건은 당업자에 의해 결정될 수 있다.
추가로, 당업자에게 명백한 바와 같이, 특정 관능기기가 원하지 않는 반응을 겪는 것을 방지하기 위하여 통상적인 보호기가 필요할 수 있다. 특정 관능기를 위한 적합한 보호기의 선택뿐만 아니라 보호 및 탈보호에 적합한 조건은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 다수의 보호기, 및 그의 도입 및 제거는 문헌[T. W. Greene and G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1999] 및 거기에 언급된 참고 문헌에 기재되어 있다. 본 발명의 화합물의 제조 방법은 본 발명의 추가의 구현예로서 제공되고, 하기 절차에 의해 예시된다. 단리된 거울상이성질체의 입체화학적 배치는 표 24에 나타낸 바와 같이, 효소 억제 연구에서 JAK1에 대한 생물학적 활성을 기초로 이루어졌다.
중간체 1: 7-니트로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌
단계 1
물(1500 mL) 중 NaOH(599 g, 14986.55 mmol)의 용액을 공기 중에서 25℃에서 5분에 걸쳐 DCM(3000 mL) 중 7-니트로-1H-인돌(243 g, 1498.65 mmol) 및 테트라부틸암모늄 수소 설페이트(50.9 g, 149.87 mmol)의 교반 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 20분 동안 교반하였다. 4-메틸페닐설포닐 클로라이드(371 g, 1948.25 mmol)를 공기 중에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(2000 mL)으로 희석하고, 물(2x500 mL), 10% 수성 K2CO3(2x500 mL), 및 1 M HCl(2x500 mL) 및 포화 NaCl(2x500 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 약 200 mL의 DCM이 남겨졌을 때, EtOAc(500 mL)를 첨가하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. 약 200 mL의 EtOAc가 남겨졌을 때, MTBE(1000 mL)를 첨가하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, MTBE(1000 mL)로 세척하고, 진공하에 건조시켜 7-니트로-1-토실-1H-인돌(402 g, 85%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.39 (s, 3H), 7.09 (d, 1H), 7.40 - 7.55 (m, 3H), 7.75 - 7.85 (m, 3H), 7.95 - 8.00 (m, 1H), 8.06 (d, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 317.
단계 2
브롬(81 mL, 1580 mmol)을 80℃에서 CCl4(1000 mL) 중 7-니트로-1-토실-1H-인돌(50 g, 158 mmol)에 적가하였다. 생성된 용액을 80℃에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 진공하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 세척하여 3-브로모-7-니트로-1-토실-1H-인돌(53 g, 85%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.41 (s, 3H), 7.55 - 7.62 (m, 2H), 7.57 (t, 1H), 7.85 - 7.92 (m, 3H), 7.96 (d, 1H), 8.49 (s, 1H).
m/z (ES-), [M-H]+ = 393.
단계 3
1,4-디옥산(1500 mL) 중 3-브로모-7-니트로-1-토실-1H-인돌(200 g, 506 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-바이(1,3,2-디옥사보롤란)(193 g, 759 mmol), 칼륨 아세테이트(99 g, 1012 mmol) 및 PdCl2(dppf)(18.5 g, 25.3 mmol)의 용액을 질소로 3회 탈기하고, 반응 혼합물을 90℃에서 8시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 진공하에 농축시켰다. 고체를 물로 처리하고, 여과하고, 메탄올로 세척하고, 진공하에 건조시켜 7-니트로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌(150 g, 67%)을 회색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.41 (s, 12H), 2.47 (s, 3H), 7.38 - 7.43 (m, 3H), 7.66 (d, 1H), 7.87 (d, 2H), 8.24 (s, 1H), 8.29 - 8.32 (d, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 443.
중간체 2: 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1-토실-1H-인돌
7-니트로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌, 중간체 1(50 g, 113 mmol)을 응축기 및 질소 주입구가 장착된 1L 반응기에 충전시켰다. 2,4-디클로로-5-메틸피리미딘(24 g, 147 mmol) 및 2-메틸테트라히드로푸란(200 mL, 4 vol)을 반응기에 첨가하였다. 물(10 mL, 2 vol) 중 칼륨 카르보네이트(46.9 g, 339 mmol)의 용액을 탈기하고, N2로 다시 충전시키고, 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응기를 탈기하고, 다시 충전시키고(3xN2), 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 디클로로메탄 부가물(4.62 g, 5.65 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 탈기하고, N2로 다시 충전시키고(3x), 이어서 반응물을 60℃까지 천천히 가열시켰다. 30분 후, 침전물이 형성되었다. 반응물을 1시간 동안 교반하고, 반응기 온도를 25℃로 설정하였다. 30분 냉각 후, 내부 온도는 42℃이고, 헵탄(1 vol)을 첨가하였다. 이어서, 반응기 온도를 +5℃로 설정하였다. 20℃에서, 물(4 vol)을 첨가하고, 1시간에 걸쳐 +5℃로 계속 냉각시킨 후, 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 부흐너 깔때기 상에서 여과하고, 고체를 물(4 vol) 및 EtOAc(2 vol)로 세척하여 밝은 황색 고체를 수득하였으며, 이것을 질소 흐름하에 건조시켰다. 고체를 EtOAc(1 vol)에서 교반하고, 여과하고, 생성된 고체를 진공하에 건조시켜 (42.8 g)을 수득하였다. 모액을 합하고, 진공하에 증발시켜 (20 g)을 수득하였다. 헵탄에 슬러리화된 실리카 700 g을 컬럼(10x300 mm) 상에 패킹하였다. 고체를 DCM에 용해시키고, 조합하고, 컬럼에 로딩하였다. DCM의 완전한 용리 후, 컬럼을 헵탄 중 20% EtOAc로 용리시킨 후, 헵탄 중 20 내지 50% EtOAc의 구배로 용리시켰다. 원하는 화합물을 합하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 헵탄(0.5 vol) 중 50% EtOAc에 슬러리화하고, 여과하고, 질소의 흐름하에 건조시켜 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1-토실-1H-인돌(35.6 g, 71%)을 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.40 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 7.54 (d, 2H), 7.61 (t, 1H), 7.91 (d, 2H), 7.95 - 8.04 (m, 1H), 8.40 (dd, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.79 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 442.9.
중간체 3: 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1H-인돌
3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1-토실-1H-인돌, 중간체 2(2.477 g, 5.59 mmol)를 1,4-디옥산/물 2:1(75 mL)에 용해시키고, 3.8 M 나트륨 히드록시드(22 mL, 83.9 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 2시간 동안 50℃까지 가열하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 2 M HCl를 첨가하여 중화시켰다. 형성된 고체를 여과해내고, EtOAc, Et2O로 세척하고, 진공하에 건조시켜 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1H-인돌(1.894 g, 117%(습윤))을 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.52 (s, 3H), 7.47 (t, 1H), 8.20 (d, 1H), 8.25 (d, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.90 (d, 1H), 12.66 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 289.2.
중간체 4: 3-(2,5-디클로로피리미딘-4-일)-7-니트로-1H-인돌
단계 1
PdCl2(dppf)*CH2Cl2 (0.554 g, 0.68 mmol)를 25℃에서 질소하에 THF/물 4:1(75 mL) 중 7-니트로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌, 중간체 1(3.00 g, 6.78 mmol), 2,4,5-트리클로로피리미딘(1.617 g, 8.82 mmol) 및 K2CO3(2.81 g, 20.35 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, EtOAc(150 mL)로 희석하고, 염수(150 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 이동상으로서 석유 에테르 중 8 내지 30% EtOAc의 구배를 사용하여 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 진공하에 증발시키고, 잔류물을 아세토니트릴로부터 결정화시켜 1-((4-클로로페닐)설포닐)-3-(2,5-디클로로피리미딘-4-일)-7-니트로-1H-인돌(1.43 g, 43.4%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.42 (s, 3H), 7.52 (d, 2H), 7.66 (t, 1H), 7.91 - 8.14 (m, 3H), 8.52 (dd, 1H), 8.90 (s, 1H), 9.08 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 463.
단계 2
물(30 mL) 중 NaOH(2.202g, 55.05 mmol)의 용액을 25℃에서 1,4-디옥산(30 mL) 중 3-(2,5-디클로로피리미딘-4-일)-7-니트로-1-토실-1H-인돌(1.7 g, 3.67 mmol)의 교반 현탁액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반한 후, 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc(200 mL)로 희석하고, 물(50 mL), 포화 NaHCO3(50 mL), 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켜 3-(2,5-디클로로피리미딘-4-일)-7-니트로-1H-인돌(0.500 g, 44.1%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 7.34 (t, 1H), 8.06 (dd, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.87 (dd, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 309.
중간체 5: 2-플루오로-3-(메틸설포닐)아닐린
단계 1
요오드화 구리(I)(1.002 g, 5.26 mmol)를 25℃에서 질소하에 1분에 걸쳐 1,4-디옥산(10 mL) 중 3-브로모-2-플루오로아닐린(5 g, 26.31 mmol), N1,N2-디메틸에탄-1,2-디아민(0.464 g, 5.26 mmol) 및 요오드화 나트륨(7.89 g, 52.63 mmol)에 한번에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 110℃에서 1일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 조 생성물을 이동상으로서 석유 에테르 중 구배 5 내지 30% EtOAc를 사용하여 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 진공하에 증발시켜 2-플루오로-3-요오도아닐린(5.00 g, 80%)을 갈색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 5.32 (bs, 2H), 6.59 - 6.83 (m, 2H), 6.83 - 6.93 (m, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 238.
단계 2
요오드화 구리(I)(0.402 g, 2.11 mmol)를 질소하에 DMSO(20 mL) 중 2-플루오로-3-요오도아닐린(5.00 g, 21.10 mmol), 나트륨 메탄설피네이트(3.23 g, 31.64 mmol), N1,N2-디메틸에탄-1,2-디아민(0.558 g, 6.33 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 95℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 물(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 1:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하여 2-플루오로-3-(메틸설포닐)아닐린(3.20 g, 80%)을 무색의 오일로서 수득하였으며, 이것은 정치시키자 응고되었다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.20 (s, 3H), 3.96 (bs, 2H), 6.97 - 7.13 (m, 2H), 7.20 - 7.31 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 190.
나타낸 설피네이트를 사용하여 상기 기재된 절차를 반복하여 표 2에 기재된 중간체 6을 제공하였다:
[표 2]
중간체 7: (3-브로모-2-플루오로페닐)(에틸)설판
리튬 디이소프로필아미드(17.14 mL, 34.29 mmol)를 -78℃에서 질소하에 10분에 걸쳐 THF(250 mL) 중 1-브로모-2-플루오로벤젠(5.00 g, 28.57 mmol)에 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 60분 동안 교반하였다. 1,2-디에틸디설판(5.20 g, 42.54 mmol)을 20분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 60분 동안 교반한 후, 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50 mL)로 켄칭시키고, EtOAc(2x250 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 펜탄 중 0 내지 10% EtOAc의 구배를 사용하여 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 진공하에 증발시켜 (3-브로모-2-플루오로페닐)(에틸)설판(5.27 g, 78%)을 무색의 오일로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) 1.32 (t, 3H), 2.95 (q, 2H), 6.90 - 7.04 (m, 1H), 7.22 - 7.34 (m, 1H), 7.35 - 7.47 (m, 1H).
중간체 8: tert -부틸 (3-(에틸티오)-2-플루오로페닐)카르바메이트
(3-브로모-2-플루오로페닐)(에틸)설판, 중간체 7(4.14 g, 17.61 mmol)를 25℃에서 질소하에 1,4-디옥산(80 mL) 중 시클로헥산-1,2-디아민(6.03 g, 52.82 mmol), 인산, 칼륨 염(3.74 g, 17.61 mmol), 요오드화 구리(I)(8.38 g, 44.02 mmol) 및 tert-부틸 카르바메이트(10.31 g, 88.04 mmol)에 한번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 6시간 동안 교반한 후, 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 펜탄 중 0 내지 10% EtOAc의 구배를 사용하여 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 진공하에 증발시켜 tert-부틸 (3-(에틸티오)-2-플루오로페닐)카르바메이트(1.412 g, 29.6%)를 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.31 (t, 3H), 1.55 (s, 9H), 2.94 (q, 2H), 6.73 (bs, 1H), 6.91 - 7.19 (m, 2H), 7.92 - 8.05 (m, 1H).
중간체 9: tert -부틸 (3-(에틸설포닐)-2-플루오로페닐)카르바메이트
tert-부틸 (3-(에틸티오)-2-플루오로페닐)카르바메이트, 중간체 8(1.4 g, 5.16 mmol)를 0℃에서 질소하에 DCM(15 mL) 중 3-클로로벤젠-1-카르보퍼옥소산(2.67 g, 15.48 mmol)에 한번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(50 mL)으로 희석하고, 여과하고, 포화 NaHCO3(2x50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc 3:1로 전개하는 제조용 TLC로 정제하여 tert-부틸 (3-(에틸설포닐)-2-플루오로페닐)카르바메이트(1.650 g, 105%)를 황색 오일로서 수득하였다. m/z (ES-), [M-H]+ = 302.
중간체 10: 3-(에틸설포닐)-2-플루오로아닐린
2,2,2-트리플루오로아세트산(10.0 g, 87.70 mmol)을 20℃에서 DCM(20 mL) 중 tert-부틸 (3-(에틸설포닐)-2-플루오로페닐)카르바메이트, 중간체 9(1.65 g, 5.44 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 증발시키고, DCM(50 mL)에 재용해시키고, 포화 NaHCO3(2x100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켜 3-(에틸설포닐)-2-플루오로아닐린(0.786 g, 71.1%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR δ (CDCl3, 400 MHz) δ 1.32 (t, 3H), 3.32 (q, 2H), 3.60 - 4.10 (bs, 2H), 7.00 - 7.17 (m, 2H), 7.17 - 7.34 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 204.
중간체 11: 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민
단계 1
3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1-토실-1H-인돌, 중간체 2(20.0 g, 45.16 mmol), 2-플루오로-3-(메틸설포닐)아닐린 히드로클로라이드, 중간체 5(11.2 g, 49.68 mmol), 세슘 카르보네이트(30.9 g, 94.8 mmol), Pd2(dba)3(4.14 g, 4.52 mmol) 및 2'-(디시클로헥실포스피노)-N,N-디메틸-[1,1'-바이페닐]-2-아민(3.55 g, 9.03 mmol)을 질소하에 1L 반응기에 충전시켰다. 2-메틸테트라히드로푸란(200 mL) 및 물(100 mL)을 실온에서 첨가하였다. 반응물을 배기시키고, N2(3x)로 다시 충전시킨 후, 72.5℃(Tr= 80℃)까지 가열하고, 4시간 동안 교반하였다(3시간 후 갈색 침전물이 형성됨). 헵탄(400 mL, 20 vol)을 첨가하고, 가열을 중단시키고, 반응물을 30분에 걸쳐 17℃까지 냉각시켰다. 침전물을 10분 동안 교반한 후, 부흐너 깔때기 상에서 여과하였다. 필터 케이크를 물(2 volХ3), EtOAc/헵탄 1:2(3 volХ3)로 세척한 후, 진공/질소하에 건조시켜 N-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)-5-메틸-4-(7-니트로-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(25.93 g, 96%)을 갈색 고체로서 수득하였다. 추가의 정제없이 계속하였다. m/z (ES+), [M+H]+ = 596.2.
단계 2
1L 반응기에, 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1-토실-1H-인돌(27.0 g, 45.3 mmol)을 실온에서 충전시키고, 2-메틸테트라히드로푸란(250 mL) 및 3.8 M NaOH(수성)(250 mL)를 첨가하여 갈색의 불용성 혼합물을 얻었다. 혼합물을 85℃까지 가열하고, 밤새 교반하였다. 헵탄(10 vol)을 반응 혼합물에 충전시키고, 40분에 걸쳐 17℃까지 냉각시키고, 30분 동안 교반하였다. 고체를 부흐너 깔때기로 여과하고, 필터 케이크를 물(3x40 mL)로 세척하였다. 수성 세척액의 pH: pH 시험지에 의해 10 내지 11. 40 mL의 물을 필터 케이크에 충전시키고, 0.5 N HCl에 의해 pH를 7로 조정하면서 슬러리화시켰다. 고체를 다시 부흐너 깔때기로 여과하고, 물(50 mL)로 세척하고, 질소/진공하에 20분 동안 건조시킨 후, 헵탄/EtOAc(4x40 mL)로 세척하였다. (LCMS에 의한 45%의 미반응 출발 물질, 화합물을 동일한 조건하에 다시 반응시켰다). 고체를 1 L 반응기에 충전시키고, 2-메틸테트라히드로푸란(250 mL) 및 3.8 M NaOH(수성)(250 mL)를 첨가하여 갈색의 불용성 혼합물을 수득하였다. 혼합물을 85℃까지 가열하고, 밤새 교반하였다. 헵탄(10 vol)을 반응 혼합물에 충전시키고, 40분에 걸쳐 17℃까지 냉각시키고, 30분 동안 교반하였다. 고체를 부흐너 깔때기로 여과하고, 필터 케이크를 물(3x40 mL)로 세척하였다. 수성 세척액의 pH: pH 시험지에 의해 10 내지 11. 40 mL의 물을 필터 케이크에 충전시키고, 0.5 N HCl에 의해 pH를 7로 조정하면서 슬러리화시켰다. 고체를 다시 부흐너 깔때기로 여과하고, 물(50 mL)로 세척하고, 질소/진공하에 20분 동안 건조시킨 후, 헵탄/EtOAc(4x40 mL)로 세척하고, 건조시켜 N-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)-5-메틸-4-(7-니트로-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(20.0 g, 100%)을 수득하였다.
m/z (ES+), [M+H]+ = 442.1.
단계 3
N-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)-5-메틸-4-(7-니트로-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(11.0 g, 24.9 mmol)을 1L 반응기에 충전시키고, 2-메틸테트라히드로푸란/EtOH 2:1(330 mL)을 첨가하였다. 반응기를 80℃까지 가열하고, 용해를 위하여 10분 동안 교반한 후, 30℃로 천천히 냉각시켰다. 10% Pd-C(2.00 g, 24.9 mmol, 50% 습윤) 및 물(10 mL) 중 암모늄 포르메이트(9.43 g, 149.5 mmol)의 용액(흡열성)을 실온에서 질소하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃까지 천천히 가열하고, 15분 동안 교반하였다. 이어서, 40 내지 50℃까지 냉각시키고, 질소하에(주의) 부흐너 깔때기 상에서 여과하고, 케이크를 뜨거운 THF/EtOH 1:1(50 mL)로 세척하고, 여액을 농축하고, 진공하에 DCM(50 mL)과 공동 증발시켜 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민(10.0 g, 98%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
m/z (ES+), [M+H]+ = 412.4.
중간체 12: N-(3-(에틸설포닐)-2-플루오로페닐)-5-메틸-4-(7-니트로-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민
Pd2(dba)3(159 mg, 0.17 mmol) 및 2'-(디시클로헥실포스피노)-N,N-디메틸-[1,1'-바이페닐]-2-아민(136 mg, 0.35 mmol)을 23℃에서 질소하에 DMF(15 mL) 중 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1H-인돌, 중간체 3(500 mg, 1.73 mmol), 3-(에틸설포닐)-2-플루오로아닐린, 중간체 10(352 mg, 1.73 mmol) 및 세슘 카르보네이트(1693 mg, 5.20 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 용매를 진공하에 증발시켜 N-(3-(에틸설포닐)-2-플루오로페닐)-5-메틸-4-(7-니트로-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(1.22 g, 155%)을 어두운 색 고체로서 수득하였다. 추가의 정제 없이 사용하였다. m/z (ES+), [M+H]+ = 456.
나타낸 출발 중간체를 사용하여 상기 기재된 절차를 반복하여 표 6에 기재된 중간체 13~14를 얻었다:
[표 6]
a 반응 혼합물을 진공하에 농축시켰다.
b 반응 혼합물을 EtOAc(200 mL)로 희석하고, 물(50 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 DCM/MeOH 5:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하였다.
중간체 15: 3-(2-((3-(에틸설포닐)-2-플루오로페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민
MeOH/THF/물 1:1:1(75 mL) 중 N-(3-(에틸설포닐)-2-플루오로페닐)-5-메틸-4-(7-니트로-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민, 중간체 12(1.406 g, 3.09 mmol), 암모늄 클로라이드(0.991 g, 18.52 mmol) 및 철(1.034 g, 18.52 mmol)을 60℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 용매를 감압하에 제거하였다. 잔류물을 용리액으로서 DCM/MeOH 10:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하여 3-(2-((3-(에틸설포닐)-2-플루오로페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민(0.600 g, 46%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 1.11 (t, 3H), 2.37 (s, 3H), 3.33 (q, 2H), 5.12 (bs, 2H), 6.39 (d, 1H), 6.74 (t, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.44 - 7.66 (m, 2H), 7.94 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.34 (t, 1H), 9.03 (s, 1H), 11.34 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 426.
나타낸 출발 중간체를 사용하여 상기 기재된 절차를 반복하여 표 7에 기재된 중간체 16~17을 얻었다:
[표 7]
a 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공하에 증발시키고, DCM(50 mL)에 재용해시켰다. 유기 상을 물(2x50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다.
b 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, EtOAc(100 mL)로 희석시켰다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다.
중간체 18: 3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민
단계 1
칼륨 카르보네이트(40.9 mL, 678.28 mmol)의 용액을 온도계 및 질소 주입구가 장착된 1L 반응기에 충전시켰다. 혼합물을 실온에서(23℃) N2로 3회 탈기하였다. 7-니트로-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-인돌, 중간체 1(100 g, 226.09 mmol), 2,4-디클로로-5-플루오로피리미딘(49.1 g, 293.92 mmol) 및 메틸 THF(1000 mL)를 첨가하고, 실온에서 10분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 질소로 3회 탈기하였다. 디클로로[1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 디클로로메탄 부가물(9.23 g, 11.30 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 탈기하고, 다시 충전시키고(3xN2), 23℃에서 밤새도록 교반하여 황색 침전물을 얻었다. 헵탄(500 mL)을 실온에서 반응 혼합물에 충전시키고, 10분 동안 교반하였다. 이어서, 교반을 중단시키고, 침전물을 침전시켰다. 반응 혼합물을 5℃까지 냉각시키고, 1시간 동안 교반하였다. 침전물을 유리-깔때기를 통해 여과하고, 물이 중성 pH에 이를 때까지 물로 세척하였다(13 vol, 치환 세척, 1.3L). 이어서, 필터 케이크를 실온에서 EtOAc/헵탄 혼합물 1:1(5x2 vol, 1 L), 헵탄(2x200 mL, 2x2vol)으로 세척하고, 고체를 35℃에서 진공하에 밤새도록 건조시켜 3-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)-7-니트로-1-토실-1H-인돌(97 g, 89% 실질 수율)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.41 (s, 3H), 7.51 (d, 2H), 7.69 (t, 1H), 7.95 (d, 2H), 8.01 (dd, 1H), 8.75 (d, 1H), 8.81 (dd, 1H), 9.01 (d, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 447.2.
단계 2
3-(2-클로로-5-플루오로피리미딘-4-일)-7-니트로-1-토실-1H-인돌(89.5 g, 200.30 mmol), 2-플루오로-3-(메틸설포닐)아닐린 히드로클로라이드, 중간체 5(54.2 g, 240.36 mmol), Pd2(dba)3(9.17 g, 10.01 mmol) 및 2'-(디시클로헥실포스피노)-N,N-디메틸-[1,1'-바이페닐]-2-아민(7.88 g, 20.03 mmol)을 질소하에 2 L 반응기에 첨가하였다. 탈기된 2-2-메틸테트라히드로푸란(1000 mL) 및 물(450 mL) 중 세슘 카르보네이트(137 g, 420.62 mmol)의 용액을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 탈기하였다(x7). 이어서, 반응물을 72.6℃까지 가열한 후, 밤새도록 교반하였다. 반응물을 4 내지 5℃까지 냉각시키고, 적어도 30분 동안 교반하였다. 고체를 부흐너 깔때기 상에서 여과하고, 차가운 2-2-메틸테트라히드로푸란(300 mL, 3 vol), 물(3x300 mL, 3 vol) 및 EtOAc/헵탄 혼합물 1:2(3x300 mL, 3 vol)로 세척하고, 진공하에 40℃에서 건조시켜 5-플루오로-N-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)-4-(7-니트로-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(77.89 g, 65% 실질 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.56 - 2.64 (m, 3H), 3.42 (d, 3H), 7.52 - 7.64 (m, 4H), 7.73 (t, 1H), 7.98 - 8.09 (m, 3H), 8.22 (t, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.79 (d, 1H), 8.94 (d, 1H), 9.89 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 600.2.
단계 3
5-플루오로-N-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)-4-(7-니트로-1-토실-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(97.7 g, 129.87 mmol)을 실온에서 5 L 반응기에 충전시켰다. THF(100 mL) 및 3.8 M NaOH(aq)(1000 mL)의 혼합물을 첨가하여 갈색의 불용성 혼합물을 얻었다. 혼합물을 환류하에 75℃까지 가열하고, 주말 동안 교반하였다. THF(10 vol) 및 헵탄(10 vol)을 반응 혼합물에 충전시켰다. 이어서, 그것을 40분에 걸쳐 17℃까지 냉각시키고, 60분 동안 교반하고, 고체를 부흐너 깔때기 상에서 여과하였다. 필터 케이크를 1M 구연산(500 mL, pH 중성이 될 때까지), 물(5x300 mL, pH 중성이 될 때까지), 그 다음 헵탄/EtOAc(4x400 mL)로 세척하였다. 고체를 진공하에 건조시켜 5-플루오로-N-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)-4-(7-니트로-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(55.0 g, 95%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.27 - 3.38 (m, 3H), 7.30 (t, 1H), 7.47 (t, 1H), 7.64 (t, 1H), 8.11 - 8.29 (m, 3H), 8.52 (d, 1H), 8.98 (d, 1H), 9.60 (s, 1H), 12.57 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 446.2.
단계 4
실온에서 질소하에 THF/EtOH 2:1(600 mL) 중 5-플루오로-N-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)-4-(7-니트로-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(59.5 g, 123.5 mmol, 92.5 중량%)의 교반 현탁액에 10% Pd/C(12.0 g, 123.5 mmol, 50% 습윤) 및 물(50 mL) 중 암모늄 포르메이트(46.8 g, 741.4 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃까지 천천히 가열하고, 30분 동안 교반하였다. 12 g의 활성탄을 첨가하고, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 40℃까지 냉각시키고, 질소하에 부흐너 깔때기(종이) 상에서 여과하였다. 필터 케이크를 THF/EtOH(160 mL)로 세척하였다. 여액을 4 vol로 농축하고, 생성된 슬러리를 실온까지 냉각시키고, 질소하에 여과하였다. 고체를 물(2 vol), 에탄올(2 vol)로 세척하고, 질소/진공하에 40℃에서 건조시켜 3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민(44.3 g, 86%)을 밝은 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 3.28 (s, 3H), 5.20 (bs, 2H), 6.43 (dd, 1H), 6.78 (t, 1H), 7.44 (t, 1H), 7.57 - 7.63 (m, 1H), 7.66 (d, 1H), 8.09 - 8.25 (m, 2H), 8.38 (d, 1H), 9.34 (s, 1H), 11.57 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 416.3.
중간체 19: 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌
나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중 60% 분산액)(1.32 g, 33.10 mmol)를 0℃에서 무수 THF(150 mL) 중 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1H-인돌, 중간체 3(6.37 g, 22.07 mmol)의 교반하는 황색 현탁액에 일부분씩 나누어 첨가하였다. 25분 동안 교반한 후(기체 발생 중단), (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란(4.10 mL, 23.17 mmol)을 신속하게 적가하였다. 5분 후, 냉각조를 제거하고, 상온에서 반응물을 1.5시간 동안 교반하였다. 추가의 나트륨 하이드라이드(미네랄 오일 중 60% 분산액)(130 mg, 3.3 mmol) 및 (2-(클로로메톡시)에틸)트리메틸실란(0.4 mL, 2.3 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 추가의 40분 동안 교반한 후, 포화 NaHCO3(aq)로 켄칭시키고, 담황색 혼합물을 Et2O로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 Et2O(x2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 클로로포름에 용해시키고, 120 g의 컬럼을 사용하여 자동화 실리카 겔 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 3분 동안 헥산 중 5% EtOAc, 그 다음 25분 동안 헥산 중 5 내지 45% EtOAc의 구배를 이동상으로 사용하였다. 생성물을 254 nm 파장을 사용하여 수집하여 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌(9.21 g, 100%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ -0.16 (s, 9H) 0.60 - 0.73 (m, 2H) 2.51 - 2.52 (m, 3H) 3.11 - 3.22 (m, 2H) 5.72 (s, 2H) 7.48 (t, 1H) 7.94 (d, 1H) 8.57 (s, 1H) 8.64 (s, 1H) 8.84 (d, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 419.2.
중간체 20: 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-아민
단계 1
세슘 카르보네이트(2.333 g, 7.16 mmol)를 25℃에서 질소하에 DMF(20 mL) 중 3-(2-클로로-5-메틸피리미딘-4-일)-7-니트로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌, 중간체 19(1.0 g, 2.39 mmol), 2-플루오로-3-(메틸설포닐)아닐린, 중간체 5(0.542 g, 2.86 mmol), Pd2(dba)3(0.219 g, 0.24 mmol) 및 2-디시클로헥실포스피노-2'-(N,N-디메틸아미노)-바이페닐(다베포스(Davephos))(0.188 g, 0.48 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 3시간 동안 교반하고, 실온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc(200 mL)로 희석하고, 물(50 mL), 포화 NaHCO3(50 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 이동상으로서 석유 에테르 중 5 내지 60% EtOAc의 구배를 사용하여 플래시 실리카 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 진공하에 증발시켜 N-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)-5-메틸-4-(7-니트로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(0.940 g, 69%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ -0.08 (s, 9H), 0.74 - 0.87 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 3.22 - 3.38 (m, 5 H), 5.67 (s, 2H), 7.21 - 7.33 (m, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.48 - 7.60 (m, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.89 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 8.89 (t, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 572.2.
단계 2
N-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)-5-메틸-4-(7-니트로-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-3-일)피리미딘-2-아민(2.76 g, 4.83 mmol), 철(11.59 g, 207.59 mmol) 및 암모늄 히드로클로라이드(11.10 g, 207.59 mmol)를 MeOH/THF/물 1:1:1(120 mL)에 용해시키고, 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시켰다. 고체를 여과해내고, 여액을 물(200 mL)에 붓고, DCM(8x40 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 증발시켜 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-아민(2.52 g, 96%)을 오렌지색 고무로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ -0.05 (s, 9H), 0.87 - 0.93 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 3.56 - 3.65 (m, 2H), 5.05 (s, 2H), 5.73 (s, 2H), 6.53 (d, 1H), 6.78 (t, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.53 (d, 1H), 7.58 (d, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.28 (d, 2H), 9.13 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 542.3.
중간체 21: (S)-2-브로모-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드
DIPEA(0.679 mL, 3.89 mmol)를 25℃에서 DMF(3 mL) 중 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 11(200 mg, 0.49 mmol) 및 (S)-2-브로모프로판산(149 mg, 0.97 mmol)에 한번에 첨가하였다. 생성된 용액을 -40℃까지 냉각시키고, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물(619 mg, 0.97 mmol)을 -40℃에서 적가하고, 30분 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 DCM(25 mL)으로 희석하고, 염수(2x50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 MeOH/DCM 1:20을 사용하여 제조용 TLC로 정제하여 (S)-2-브로모-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드(224 mg, 84%)를 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.86 (d, 3H), 2.42 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 4.78 - 4.90 (m, 1H), 7.01 (t, 1H), 7.38 - 7.52 (m, 2H), 7.57 (t, 1H), 8.09 (d, 1H), 8.18 (d, 1H), 8.25 - 8.34 (m, 2H), 9.21 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 11.37 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 546.
중간체 22: (R)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드
단계 1
(S)-메틸 2-히드록시프로파노에이트(250 g, 2.40 mol), DCM(1500 mL) 및 2,6-디메틸피리딘(656.7 g, 6.13 mol)을 3000 mL 4-목 둥근 바닥 플라스크에 넣고, 혼합물을 -78℃까지 냉각시켰다. 트리플루오로메탄설폰산 무수물(630 g, 2.23 mol)을 -78℃에서 교반하면서 적가한 후, 생성된 용액을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(1000 mL)로 희석하고, 1M HCl(3x500 mL) 및 염수(1x500 mL)로 세척하였다. 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 0℃에서 1-메틸피페라진(213.3 g, 2.13 mol), DCM(800 mL), 물(400 mL) 및 칼륨 카르보네이트(491.3 g, 3.53 mol)를 함유하는 교반되는 3000 mL 4-목 둥근 바닥 플라스크에 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새도록 교반한 후, DCM(500 mL)으로 희석하였다. 생성된 혼합물을 물(1x500 mL) 및 염수(500 mL)로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 이동상으로서 석유 에테르 중 17 내지 50% 에틸 아세테이트의 구배를 사용하여 제조용 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 (R)-메틸 2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(226 g, 68%)를 밝은 황색 오일로서 수득하였다. m/z (ES+), [M+H]+ = 187.
단계 2
3000 mL 4-목 둥근 바닥 플라스크에 수소 클로라이드(2000 mL, 60.34 mol, 6M/L)를 넣은 후 (R)-메틸 2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(226 g, 1.21 mol)를 넣었다. 생성된 용액을 100℃에서 밤새도록 교반한 후, 진공하에 농축시켰다. 생성된 혼합물을 아세토니트릴(1000 mL)로 희석하고, 여과에 의해 고체를 수집하였다. 생성물을 실온에서 에탄올(1 g/20 mL)로부터 재결정화시켜(x5) (R)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드(124 g, 42%)를 백색 고체로서 수득하였다. 1H NMR (300MHZ,CD3OD) δ1.69 - 1.71 (d, 3H), 3.04 (s, 3H), 3.83 (m, 8H), 4.35 - 4.42 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 173.
중간체 23: (R)-메틸 2-((S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트
2,6-디메틸피리딘(0.672 mL, 5.77 mmol)을 DCM(5 mL) 중 (S)-메틸 2-히드록시프로파노에이트(500 mg, 4.81 mmol)의 -78℃로 냉각된 용액에 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반한 후, 트리플루오로메탄설폰산 무수물(0.974 mL, 5.77 mmol)을 적가하였다. 반응물을 30분 동안 교반하고, 냉각을 제거하고, 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 실온으로 만들었다. 용액을 1M HCl(aq)(20 mL)로 세척하고, 상 분리기로 건조시킨 후, DCM(10 mL)에 현탁된 (S)-1,2-디메틸피페라진 디히드로클로라이드(0.944 g, 5.05 mmol) 및 물(10 mL) 중 칼륨 카르보네이트(1.993 g, 14.42 mmol)의 용액의 혼합물에 천천히 첨가하였다. 반응물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 상을 분리시켰다. 유기 상을 염수(25 mL)로 세척하고, 상 분리기로 건조시키고, 진공하에 증발시켜 (R)-메틸 2-((S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(0.726 g, 75%)를 밝은 오렌지색 오일로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 1.05 (d, 3H), 1.29 (d, 3H), 2.1 - 2.25 (m, 2H), 2.25 - 2.37 (m, 4H), 2.46 (t, 1H), 2.69 - 2.83 (m, 3H), 3.28 (q, 1H), 3.70 (s, 3H).
나타낸 아민을 사용하여 상기 기재된 절차를 반복하여 표 8에 기재된 중간체 24를 얻었다:
[표 8]
중간체 25: (R)-2-((S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드
(R)-메틸 2-((S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 23(726 mg, 3.62 mmol)을 6M HCl(6 mL, 36.00 mmol)에서 환류하에 16시간 동안 교반하였다. (반응을 건식으로 수행하였다). 물(6 mL)을 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, 용매를 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴에 현탁시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과해내고, 아세토니트릴로 세척하고, 진공하에 건조시켜 (R)-2-((S)-3,4-디메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드(626 mg, 66.6%)를 고체로서 수득하였다. 1H NMR(500 MHz, D2O) δ 1.33 (d, 3H), 1.37 - 1.48 (m, 3H), 2.88 (s, 3H), 3.07 - 3.23 (m, 1H), 3.28 - 3.85 (m, 7H).
나타낸 출발 중간체를 사용하여 상기 기재된 절차를 반복하여 표 9에 기재된 중간체 26을 얻었다:
[표 9]
a 잔류물을 물/아세토니트릴에 용해시키고, 동결 건조시켰다. 잔류 반고체를 아세토니트릴에 현탁시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과해내고, 아세토니트릴로 세척하고, 진공하에 건조시켰다.
중간체 27: (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드
단계 1
2,6-디메틸피리딘(0.868 mL, 7.45 mmol)을 DCM(10 mL) 중 (S)-메틸 2-히드록시프로파노에이트(0.646 g, 6.21 mmol)의 -78℃로 냉각된 용액에 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 교반한 후, 트리플루오로메탄설폰산 무수물(1.259 mL, 7.45 mmol)을 적가하였다. 반응물을 45분 동안 교반하고, 냉각을 제거하고, 반응 혼합물을 실온으로 만들고, 1시간 동안 교반하였다. 용액을 1M HCl(aq)(20 mL)로 세척하고, 상 분리기로 건조시키고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴(5 mL)에 용해시키고, 아세토니트릴(10 mL) 중 (R)-1,3-디메틸피페라진 디히드로클로라이드(1.22 g, 6.52 mmol) 및 칼륨 카르보네이트(2.57 g, 18.63 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응물을 N2 분위기하에 20시간 동안 60℃까지 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, 고체를 여과해내고, 아세토니트릴로 세척하고, 여액을 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM(10 mL) 및 8% NaHCO3(aq)(10 mL)에 용해시키고, 진탕하고, 상 분리시켰다. 수성 상을 DCM(10 mL)으로 추출하였다. 합한 추출물을 상 분리기로 건조시키고, 진공하에 증발시켜 (R)-메틸 2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(0.589 g, 47.4%, 80% de)를 담색 오일로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.94 (d, 3H), 1.06 (d, 3H), 1.82 (t, 1H), 2.03 (t, 1H), 2.10 (s, 3H), 2.37 - 2.55 (m, 3H), 2.55 - 2.67 (m, 2H), 3.61 (s, 3H), 3.66 - 3.74 (m, 1H). (가장 풍부한 부분입체이성질체가 기재됨)
단계 2
(R)-메틸 2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(589 mg, 2.94 mmol)를 6 M HCl(aq)(5 mL, 30.00 mmol)에 용해시키고, 18시간 동안 환류시켰다. 반응물을 실온까지 냉각시키고, 용매를 진공하에 반고체 잔류물로 증발시켰다. 디에틸 에테르를 잔류물에 첨가하고, 30분 동안 교반하고, 고체를 여과해내고, 진공하에 건조시켜 (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드(623 mg, 82%)를 담색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, D2O) δ 1.32 (d, 3H), 1.41 (d, 3H), 2.89 (s, 3H), 3.08 - 3.91 (m, 7H), 4.25 - 4.51 (m, 1H). (가장 풍부한 부분입체이성질체가 기재됨)
중간체 28: 메틸 3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트
1-메틸피페라진(100 g, 988.4 mmol) 및 칼륨 카르보네이트(164 g, 1186 mmol)를 질소하에 건조 아세토니트릴(800 mL)에 슬러리화시켰다. 메틸 2-브로모-3-메톡시프로파노에이트(201g, 988.4 mmol)를 50 내지 60℃에서 40분에 걸쳐 슬러리에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소하에 61℃에서 23시간 동안 가열한 후, 20℃까지 냉각시켰다. 고체를 여과해내었다. 여액을 오일성 잔류물로 증발시키고, 이것을 1M HCl(1000 mL)에 용해시켰다. 이어서, pH를 4M HCl(대략 300 mL)을 사용하여 1로 조정하였다. 생성된 용액을 DCM(200 mL)으로 추출하였다. 물 용액을 포화 Na2CO3(1000 mL)을 사용하여 pH 9로 염기성으로 만들고, DCM(2x500 mL)으로 추출하였다. 이어서, 수성 상의 pH를 나트륨 히드록시드로 10 내지 11로 상승로 상승시키고, DCM(2x500 mL)으로 추출하였다. 4개의 유기 상을 합하고, 진공하에 증발시켜 메틸 3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(181 g, 85%)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 2.07 (s, 3H), 2.14 - 2.34 (m, 4H), 2.39 - 2.52 (m, 4H), 3.14 (s, 3H), 3.22 (dd, 1H), 3.42 (dd, 1H), 3.48 - 3.56 (m, 4H).
중간체 29: 메틸 2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트
칼륨 카르보네이트(1.987 g, 14.38 mmol)를 20℃에서 질소하에 아세토니트릴(20 mL) 중 메틸 2-브로모프로파노에이트(2.041 g, 12.22 mmol) 및 1-메틸피페라진(1.20 g, 11.98 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 선명한 오렌지색 혼합물을 실온까지 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 희석하고, 여과하였다. 오렌지색 용액을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르에 용해시키고, 여과하였다. 여액을 진공하에 증발시켜 메틸 2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(2.2 g, 99%)를 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.23 (dd, 3H), 2.21 (d, 3H), 2.28 - 2.65 (m, 8H), 3.16 - 3.27 (m, 1H), 3.63 (s, 3H). m/z (ES+), [M+H]+ = 187.
나타낸 반응물을 사용하여 상기 기재된 절차를 반복하여 표 10에 기재된 중간체 30~44를 얻었다:
[표 10]
a 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL)로 희석하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 용매를 진공하에 증류에 의해 제거하였다. 반응 혼합물을 Et2O(50 mL)로 희석하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하였다. 용매를 진공하에 증류에 의해 제거하였다.
b 3 당량의 칼륨 카르보네이트를 사용하였다.
c 반응 혼합물을 여과하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. 혼합물을 EA에 재용해시키고, HCl로 세척하였다. 수성 층을 합하고, Na2CO3를 사용하여 pH를 8로 조정하였다. 수성 상을 EtOAc로 세척하였다. 유기 층을 합하고, 진공하에 증발시켰다.
d 반응 혼합물을 여과하고, 용매를 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 진공하에 증발시켰다.
e 2 당량의 칼륨 카르보네이트를 사용하였다.
f 여액을 농축시킨 후, 잔류물을 DCM(150 mL)에 용해시키고, 0.1 M HCl(aq)(200 mL)로 다시 추출하고, 상 분리시켰다. 수성 상을 DCM(150 mL)으로 세척한 후, K2CO3(s)의 첨가에 의해 pH 10으로 염기성화하였다. 이어서, 화합물을 DCM(3x125 mL)으로 추출하고, 진공하에 증발시켰다.
중간체 45: 2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드
메틸 2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 29(6.00 g, 32.21 mmol)를 0℃에서 6M HCl(70 mL, 420.00 mmol)에 적가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각시키고, DCM(2x2000 mL)으로 세척하였다. 수성 상을 감압하에 제거하여 2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드(6.00 g, 76%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.54 (d, 3H), 2.83 (s, 3H), 3.47 - 3.90 (m, 8H), 4.25 - 4.45 (m, 1H), 12.21 (bs, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 173.
나타낸 출발 중간체를 사용하여 상기 기재된 절차를 반복하여 표 11에 기재된 중간체 46~47을 얻었다:
[표 11]
a 반응 혼합물을 실온까지 냉각시킨 후, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴 또는 디에틸 에테르에 현탁시키고, 실온에서 교반하였다. 고체를 여과해내고, 진공하에 건조시켰다.
중간체 48: 리튬 3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트
물(5 mL) 중 리튬 히드록시드(0.321 g, 13.39 mmol)의 용액을 THF(5 mL) 중 메틸 3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 28(1.93 g, 8.92 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물이 맑아질 때까지 MeOH 몇 방울을 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 24시간 동안 가열하였다. 유기물을 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 물로 희석하고, 동결 건조시켜(x3) 리튬 3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(1.92 g, 103%)를 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, D2O) δ 2.06 (s, 3H), 2.48 (bs, 8H), 2.99 (t, 1H), 3.20 (s, 3H), 3.46 - 3.57 (m, 2H).
나타낸 출발 중간체를 사용하여 상기 기재된 절차를 반복하여 표 12 에 기재된 중간체 49~59를 얻었다:
[표 12]
a THF/MeOH 1:1을 용매로서 사용하였다.
b 3 당량의 LiOH를 사용하였다.
c 반응 혼합물을 물(30 mL)로 희석하였다. 수성 층을 EtOAc 또는 디에틸 에테르로 세척하고, 동결 건조시켰다.
d MeOH를 용매로서 사용하였다.
e 반응 온도: 50℃
f 반응 온도: 60℃.
g 1M HCl(10 mL)을 반응 혼합물에 첨가한 후, 동결 건조시켰다.
h 2 당량의 LiOH를 사용하였다.
중간체 60: (S)-메틸 3-에톡시-2-히드록시프로파노에이트
마그네슘 트리플레이트(1.577 g, 4.90 mmol)를 25℃에서 질소하에 에탄올(10 mL)에 용해된 (S)-메틸 옥시란-2-카르복실레이트(2.00 g, 19.59 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 30시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 염수(25 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc/석유 에테르 1:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하여 (S)-메틸 3-에톡시-2-히드록시프로파노에이트(1.788 g, 61.6%)를 무색의 오일로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.20 (t, 3H), 2.46 (bs, 1H), 3.45 - 3.67 (m, 2H), 3.74 (d, 2H), 3.83 (s, 3H), 4.19 - 4.41 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 203.
중간체 61: (S)-메틸 3-에톡시-2-(((트리플루오로메틸)설포닐)옥시)프로파노에이트
2,6-디메틸피리딘(1.643 mL, 14.11 mmol)을 -78℃에서 질소하에 DCM(30 mL) 중 (S)-메틸 3-에톡시-2-히드록시프로파노에이트, 중간체 60(1.9 g, 12.82 mmol)에 첨가하였다. 다시 완전 냉각을 지속시킨 후, 트리플루오로메탄설폰산 무수물(2.341 mL, 14.11 mmol)을 시린지 펌프를 통해 1시간 동안 적가하였다. 생성된 용액을 -78℃에서 30분 동안 교반한 후, 실온까지 가온시키고, 추가의 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(100 mL)으로 희석하고, 1 M HCL(75 mL)로 세척하고, 유기 상을 진공하에 건조시켜 (S)-메틸 3-에톡시-2-(((트리플루오로메틸)설포닐)옥시)프로파노에이트(3.30 g, 92%)를 밝은 갈색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.23 (t, 3H), 3.48 - 3.75 (m, 2H), 3.82 - 4.01 (m, 3H), 4.23 - 4.46 (m, 2H), 5.22 - 5.36 (m, 1H).
중간체 62: (R)-메틸 3-에톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트
칼륨 카르보네이트(3.26 g, 23.55 mmol)를 물(420 mL)에 용해시키고, 0℃에서 5분에 걸쳐 DCM(15 mL) 중 (S)-메틸 3-에톡시-2-(((트리플루오로메틸)설포닐)옥시)프로파노에이트, 중간체 61(3.3 g, 11.78 mmol) 및 1-메틸피페라진(1.769 g, 17.66 mmol)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(500 mL)으로 희석하고, 물(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc 1:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하여 (R)-메틸 3-에톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(2.40 g, 88%)를 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.18 (t, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.36 - 2.60 (m, 4H), 2.60 - 2.79 (m, 4H), 3.35 - 3.60 (m, 3H), 3.61 - 3.84 (m, 4H), 4.21 (q, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 231.
중간체 63: 리튬 (R)-3-에톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트
물(6 mL) 중 리튬 히드록시드(204 mg, 8.51 mmol)를 25℃에서 THF/MeOH 1:1(12 mL) 중 (R)-메틸 3-에톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 62(980 mg, 4.26 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. 잔류물을 MeOH(50 mL)로 희석하고, 석유 에테르(2x50 mL)로 세척하고, 진공하에 증발시켜 (R)-3-에톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판산(421 mg, 45.7%)을 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 1.19 (t, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.34 - 2.78 (m, 8H), 2.97 - 3.08 (m, 1H), 3.42 - 3.59 (m, 2H), 3.70 (dd, 1H), 3.76 - 3.87 (m, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 217.
중간체 64: 나트륨 3-(벤질옥시)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트
단계 1
온도계가 장착된 둥근 바닥 플라스크에서, (S)-2-아미노-3-(벤질옥시)프로판산(3.00 g, 15.37 mmol)을 황산(18.44 mL, 36.88 mmol)에 용해시키고, 빙조에 의해 0℃까지 냉각시켰다. 물(10 mL) 중 나트륨 니트라이트(1.696 g, 24.59 mmol)의 용액을 내부 온도를 3℃ 미만으로 유지시키면서 60분에 걸쳐 소량씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 교반하고, 밤새도록 실온까지 천천히 가온시켰다. pH 4가 될 때까지, NaOH(50%, aq, w/w, 2.8 mL)를 첨가하였다. 이어서, 에틸 아세테이트(25 mL)를 첨가하고, pH를 2 M H2SO4(수성)의 첨가에 의해 pH 3으로 감소시키면서 반응 혼합물을 격렬하게 교반하였다. 상을 분리시키고, 수성 상을 EtOAc(3x25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 상 분리기 상에서 여과하고, 진공하에 농축하여 (S)-3-(벤질옥시)-2-히드록시프로판산(2.55 g, 85%, 98.0% ee)을 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 3.78 (dd, 1H), 3.83 (dd, 1H), 4.37 (t, 1H), 4.61 (d, 2H), 7.28 - 7.4 (m, 5H). 교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다.
단계 2
아세틸 클로라이드(4.28 mL, 60.14 mmol)를 빙조, 0℃, 냉각된 메탄올(14 mL)에 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 5분 동안 교반한 후, 0℃에서 메탄올(14.00 mL) 중 (S)-3-(벤질옥시)-2-히드록시프로판산(2.36 g, 12.03 mmol)의 용액으로 옮겼다. 생성된 혼합물을 실온에서 40분 동안 교반하였다. 트리메틸 오르토포르메이트(2.66 mL, 24.06 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 이동상으로서 12 CV에 걸쳐 헵탄 중 50% EtOAc를 사용하여 비오티지(Biotage)® KP-SIL 50 g 컬럼 상에서 자동화 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 화합물을 257 nm의 파장을 사용하여 검출하였다. 생성물을 수집하고, 진공하에 증발시켜 (S)-메틸 3-(벤질옥시)-2-히드록시프로파노에이트(1.94 g, 77%)를 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 3.04 (d, 1H), 3.76 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 4.31 - 4.36 (m, 1H), 4.54 (d, 1H), 4.61 (d, 1H), 7.27 - 7.37 (m, 5H).
단계 3
트리플릭 무수물(1.543 mL, 9.13 mmol)을 톨루엔(20 mL) 중 (S)-메틸 3-(벤질옥시)-2-히드록시프로파노에이트(1.92 g, 9.13 mmol) 및 DIPEA(1.595 mL, 9.13 mmol)의 빙조, 0℃, 냉각된 용액에 적가하였다. 반응물을 25℃에서 30분 동안 교반한 후, -78℃까지 냉각시켰다. 톨루엔(20 mL) 중 1-메틸피페라진(1.013 mL, 9.13 mmol) 및 DIPEA(1.595 mL, 9.13 mmol)의 혼합물을 첨가하였다(온도를 -70℃ 미만으로 유지시키면서). 반응 혼합물을 냉각하면서 밤새도록 교반하고, 그 동안 냉각조는 -40℃에 이르렀다. 반응 혼합물을 실온까지 가온시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 이동상으로 12 CV에 걸쳐 헵탄 중 66% EtOAc, 그 후 10 CV에 걸쳐 MeOH 중 0.2 M NH3를 사용하여 비오티지® KP-SIL 50 g 컬럼 상에서 자동화 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 생성물을 파장 250 nm를 사용하여 검출하였다. 생성물 분획을 수집하고, 진공하에 증발시켜 (R)-메틸 3-(벤질옥시)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(1.32 g, 66%, 96.0% ee)를 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 2.42 (s, 3H), 2.5 - 2.71 (m, 4H), 2.71 - 2.83 (m, 4H), 3.49 (t, 1H), 3.66 - 3.74 (m, 4H), 3.78 (dd, 1H), 4.53 (dd, 2H), 7.24 - 7.39 (m, 5H). m/z (ES+), [M+H]+ = 293.6.
단계 4
(R)-메틸 3-(벤질옥시)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(308 mg, 1.05 mmol)를 메탄올(1.5 mL) 및 수성 1M 나트륨 히드록시드(1.05 mL)에 용해시키고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 추가의 수성 1M 나트륨 히드록시드(0.2 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 추가의 2시간 및 45℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 실온에 이르게 하고, 물(5 mL)로 희석하고, 동결 건조시켜 조 나트륨-3-(벤질옥시)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트(356 mg)를 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.10 (s, 3H), 2.16 - 2.34 (m, 4H), 2.52 - 2.63 (m, 4H), 2.91 (dd, 1H), 3.58 (dd, 1H), 3.65 (dd, 1H), 4.39 - 4.48 (m, 2H), 7.23 - 7.28 (m, 1H), 7.28 - 7.36 (m, 4H). m/z (ES+), [M+H]+ = 279.2.
중간체 65: 리튬 2-(4-메틸피페라진-1-일)부타노에이트
리튬 히드록시드(0.335 g, 14.00 mmol)를 질소하에 THF(6 mL), 물(6 mL) 및 MeOH(1 mL) 중 에틸 2-(4-메틸피페라진-1-일)부타노에이트, 중간체 30(2.00 g, 9.33 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 40℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 물(10 mL)로 희석하고, 디에틸 에테르(2x10 mL)로 추출하고, 수성 층을 동결 건조시켜 리튬 2-(4-메틸피페라진-1-일)부타노에이트(1.680 g, 97%)를 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.82 (t, 3H), 1.38 - 1.68 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 2.16 - 2.48 (m, 4H), 2.49 - 2.67 (m, 5H).
중간체 66: 리튬 2-(4-( tert -부톡시카르보닐)피페라진-1-일)프로파노에이트
단계 1
칼륨 카르보네이트(0.890 g, 6.44 mmol)를 20℃에서 질소하에 아세토니트릴(10 mL) 중 메틸 2-브로모프로파노에이트(0.897 g, 5.37 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트(1.00 g, 5.37 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL)로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 진공하에 증발시켰다. 반응 혼합물을 디에틸 에테르(50 mL)로 희석하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 진공하에 증발시켜 tert-부틸 4-(1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(1.80 g, 123%)를 무색의 오일로서 수득하고, 이것을 다음 단계에 직접 취하였다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) 1.33 (d, 3H), 1.46 (s, 9H), 2.45 - 2.75 (m, 4H), 3.25 - 3.60 (m, 5H), 3.72 (s, 3H). m/z (ES+), [M+H]+ = 273.
단계 2
물(5 mL) 중 리튬 히드록시드(0.158 g, 6.61 mmol)의 용액을 THF/MeOH 1:1(10 mL) 중 tert-부틸 4-(1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(1.80 g, 6.61 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 물(15mL)로 희석시키고, 동결 건조시켜 리튬 2-(4-(tert-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 66(1.60 g, 91%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, D2O) 1.13 (d, 3H), 1.35 (s, 9H), 2.40 - 2.55 (m, 4H), 2.89 (q, 1H), 3.26 - 3.47 (m, 4H). m/z (ES+), [M+H]+ = 259.
실시예 1
(R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일)프로판아미드
칼륨 카르보네이트(101 mg, 0.73 mmol)를 0℃에서 질소하에 DMF(5 mL) 중 (S)-2-브로모-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드, 중간체 21(200 mg, 0.37 mmol) 및 2-(피페라진-1-일)에탄올에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 18시간 동안 교반한 후, 실온까지 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 생성물을 30 mL/분의 유속으로 7분에 걸쳐 물(0.05% NH3xH2O) 중 41 내지 58% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지(XBridge) C18 OBD 컬럼 상에서 제조용 비키랄-HPLC로 정제하였다. 생성물을 수집하고, 진공하에 증발시켜 (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일)프로판아미드(100 mg, 50%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1.47 (d, 3H), 2.47 (s, 3H), 2,85 - 3.43 (m, 13H), 3.45 -3.60 (m, 1H), 3.86 (t, 2H), 7.06 (t, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.30 - 7.54 (m, 1H), 7.54 - 7.72 (m, 1H), 7.94 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.47 (bs, 1H), 8.58 (t, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 596.
실시예 2
(R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드
DIPEA(13.9 mL, 78.08 mmol)를 25℃에서 DCM(70 mL) 중 (R)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드, 중간체 22(3.34 g, 13.64 mmol) 및 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 11(4.00 g, 9.72 mmol)에 한번에 첨가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물, T3P(50 wt%)(12.37 g, 19.44 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반한 후, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 이동상으로서 물 중 5 내지 60% MeOH의 구배를 사용하여 C18-플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 풀링하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 CO2 중 40% EtOH 및 40 mL/분의 유속을 사용하여 키랄셀(ChiralCel) OD-H(20x250 mm) 상에서 제조용 키랄-HPLC로 정제하였다. 거울상이성질체를 220 nm의 파장을 사용하여 검출하였다. 주요 이성질체(이성질체 1)를 수집하여 (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드(1.85 g, 30%)를 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.26 (d, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.30 - 2.75 (m, 11H), 3.25 (s, 3H), 3.27 - 3.40 (m, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.30 - 7.48 (m, 2H), 7.48 - 7.65 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.23 - 8.40 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.66 (s, 1H), 11.38 (s, 1H).
19F NMR (282 MHz, DMSO-d 6 ) δ -121.22. m/z (ES+), [M+H]+ = 566.
나타낸 중간체를 사용하여 실시예 2에 기재된 절차를 반복하여 하기 표 17에 기재된 실시예 3~5를 얻었다:
[표 17]
a T3P를 실온에서 첨가하였다.
b 반응 혼합물을 증발 건조시키고, EtOAc 또는 DCM(50 mL)에 재용해시키고, 포화 NaHCO3(2x100 mL) 및 염수(2x100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 DCM/MeOH 10:1 또는 20:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하였다.
c 조 생성물을 IPA 중 50% 헥산(0.1% DEA) 및 20 mL/분의 유속을 사용하여 키랄파크(ChiralPak) IA(21.2x150 mm, 5 ㎛) 컬럼 상에서 제조용 키랄-HPLC로 정제하였다. 화합물을 220 및 254 nm의 파장을 사용하여 검출하였다. 주요 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
d 반응 시간: 2시간.
e 물(0.05% NH3xH2O) 중 아세토니트릴의 증가하는 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 OBD 컬럼 상에서 비키랄 제조용 HPLC 정제.
f 30분에 걸쳐 20 mL/분의 유속 및 EtOH/MeOH 35:15 중 50% 헥산(0.1% DEA)을 사용하여, AXIA 패킹된(250x21.2 mm, 5 μm), 페노메넥스(Phenomenex) Lux 5u 셀룰로스-4 컬럼 상에서 키랄 정제. 254 및 220 nm의 파장을 사용하여 이성질체를 검출하였다. 주요 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
g 20 mL/분의 유속으로 물(0.1% FA) 중 아세토니트릴의 증가하는 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 OBD Prep 컬럼(100 Å, 5 μm, 19x250 mm) 상에서 비키랄 제조용 HPLC 정제. 화합물을 220 및 254 nm의 파장에서 검출하였다.
실시예 6
(S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드
실시예 2의 반응으로부터 이성질체 2를 수집하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 물(0.1% FA) 중 10 내지 60% MeOH의 구배를 사용하여 C18-플래시 크로마토그래피에 의해 재정제하였다. 순수한 분획을 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 40 mL/분의 유속 및 CO2 중 40% EtOH를 사용하여 키랄셀 OD-H(20x250 mm) 상 제조용 SFC에 의해 재정제하였다. 이성질체를 220 nm의 파장을 사용하여 검출하였다. 이성질체 2를 수집하여 (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드(40 mg)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.41 (d, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.49 - 2.87 (m, 8H), 3.15 (s, 3H), 3.39 (q, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.14 (dd, 1H), 7.28 - 7.38 (m, 1H), 7.53 - 7.63 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 8.09 (dd, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.51 - 8.61 (m, 1H).
19F NMR (400 MHz, CD3OD) δ-125.65. m/z (ES+), [M+H]+ = 566.
실시예 7
(R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드
단계 1
(R)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드, 중간체 26(113.0 mg, 0.42 mmol) 및 디(1H-이미다졸-1-일)메타논(127 mg, 0.78 mmol)을 DMF(3 mL)에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-아민, 중간체 20(90.0 mg, 0.17 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온까지 냉각시키고, EtOAc(10.0 mL)로 희석하고, 포화 Na2CO3(30 mL)에 부었다. 상들을 진탕하고, 분리하고, 수성 상을 EtOAc(3x15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 0.1 M HCO2H(aq), pH3 중 5 내지 95% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 워터스 선파이어(Waters Sunfire) C18 ODB(5㎛, 19x150mm) 컬럼 상에서 역상 제조용 HPLC로 정제하였다. 생성물 분획을 수집하고, 동결 건조시켜 (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드(125 mg, 104%(물 존재))를 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ -0.07 (s, 9H), 0.85 - 0.92 (m, 2H), 0.98 (d, 6H), 1.24 (d, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.20 - 2.33 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.64 (d, 2H), 2.72 - 2.82 (m, 2H), 3.10 (q, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.45 - 3.57 (m, 2H), 5.68 (d, 1H), 5.78 (d, 1H), 7.06 (t, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.55 (t, 1H), 8.16 - 8.22 (m, 2H), 8.28 (t, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.45 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 724.
단계 2
(R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드(97.0 mg, 0.13 mmol)를 DCM(1.3 mL)에 용해시키고, TFA(0.25 mL, 3.37 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물 실온에서 60시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 포화 NaHCO3(10 mL)에 부었다. 상들을 진탕하고, 분리하고, 수성 상을 DCM(3x5 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 140 mL/분의 유속 및 120 bar에서 CO2 중 35% EtOH/DEA 100:0.5를 사용하여 셀루코트(Cellucoat)(250x30 mm, 5 ㎛) 컬럼 상에서 키랄 SFC로 정제하였다. 생성물 피크를 270 nm에서 검출하였다. 생성물을 수집하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 CO2 중 20 mM MeOH/NH3의 이동상을 사용하여 워터스 BEH(5 ㎛, 30x250 mm) 컬럼 상에서 SFC에 의해 재정제하였다. 생성물 분획을 수집하고, 동결 건조시켜 (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드, 실시예 7(21 mg, 27 %)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.98 (d, 6H), 1.28 (d, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.21 - 2.35 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.62 - 2.69 (m, 2H), 2.71 - 2.81 (m, 2H), 3.19 (q, 1H), 3.25 (s, 3H), 6.98 (t, 1H), 7.35 - 7.44 (m, 2H), 7.51 - 7.58 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.25 - 8.35 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 11.39 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
실시예 8
(R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드
(R)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드, 중간체 26(199 mg, 0.73 mmol) 및 1,1'-카르보닐디이미다졸(91 mg, 0.56 mmol)을 DMF(2 mL)에 용해시키고, 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 18(202 mg, 0.49 mmol)을 첨가하고, 반응물을 3시간 동안 60℃까지 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시켰다. DCM(25 mL)을 첨가하고, 유기 상을 8% NaHCO3(3x25 mL)로 세척하고, 상 분리기로 건조시키고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 100 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 25 내지 65% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 ㎛, 250x50 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 화합물을 229 nm에서 UV에 의해 검출하였다. 생성물을 수집하고, 동결 건조시켜 (R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드, 실시예 8(188 mg, 65%, 99.4% de)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.98 (d, 6H), 1.28 (d, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.2 - 2.34 (m, 2H), 2.65 (d, 2H), 2.7 - 2.81 (m, 2H), 3.19 (q, 1H), 3.27 - 3.34 (m, 3H), 7.03 (t, 1H), 7.38 - 7.5 (m, 2H), 7.58 - 7.66 (m, 1H), 8.14 - 8.25 (m, 2H), 8.28 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 11.60 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 598.3.
실시예 9
(R)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드, 이성질체 1
단계 1
3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-아민, 중간체 20(225 mg, 0.42 mmol), 리튬 2-((3S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-3,5-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 55(143 mg, 0.50 mmol) 및 피리딘(0.088 mL, 1.04 mmol)을 DCM(5.0 mL)에 용해시키고, 생성된 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시켰다. 냉각된 반응 혼합물에, 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥시드, T3P(0.371 mL, 1.25 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 서서히 실온으로 만들었다. 반응물을 16시간 동안 교반하였다. 반응을 물로 켄칭시키고, DCM(5 mL)으로 희석하고, 10% Na2CO3(30 mL)에 붓고, 진탕시키고, 상들을 분리하고, 수성 상을 DCM(3x10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 100 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 45 내지 95% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 ㎛, 250x50 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 화합물을 270 nm에서 UV에 의해 검출하였다. 생성물 분획을 수집하고, 동결 건조시켜 (2S,6S)-tert-부틸 4-(1-((3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(256 mg, 76%)를 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ -0.08 (d, 9H), 0.78 - 0.97 (m, 2H), 1.18 - 1.31 (m, 9H), 1.39 (s, 9H), 2.32 - 2.47 (m, 5H), 2.61 - 2.78 (m, 2H), 3.18 - 3.36 (m, 4H), 3.42 - 3.57 (m, 2H), 3.77 - 3.89 (m, 2H), 5.70 (d, 1H), 5.75 - 5.86 (m, 1H), 7.06 (t, 1H), 7.27 - 7.45 (m, 2H), 7.55 (t, 1H), 8.14 - 8.23 (m, 2H), 8.27 (t, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.24 (s, 1H), 9.53 (d, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 810.
단계 2
DCM(2.0 mL)에 용해된 (2S,6S)-tert-부틸 4-(1-((3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(179.8 mg, 0.22 mmol)에 TFA(0.5 mL, 6.73 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 96시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM으로 희석하고, 물의 첨가에 의해 켄칭시키고, 포화 NaHCO3(10 mL)에 붓고, 진탕시키고, 상들을 분리하고, 수성 상을 EtOAc(3x5 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 이성질체를 150 mL/분의 유속 및 120 bar에서 CO2 중 30% EtOH/DEA 100:0.5를 사용하여 키랄파크 IB(250x30 mm, 5 ㎛) 컬럼 상에서 키랄 SFC로 분리하였다. 이성질체 1을 수집하고, 진공하에 증발시켜 (R)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드 이성질체 1, 실시예 9(50 mg, 41%, 97% ee)를 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 1.22 - 1.33 (m, 6H), 1.39 (d, 3H), 2.19 - 2.36 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.69 - 2.8 (m, 2H), 3.14 - 3.28 (m, 4H), 3.29 - 3.41 (m, 2H), 6.77 (d, 1H), 7.12 (t, 1H), 7.20 - 7.31 (m, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.50 (t, 1H), 7.73 (d, 1H), 8.20 (d, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.99 (t, 1H), 9.83 (s, 1H), 11.45 (s, 1H). 하나의 교환가능한 양성자는 관찰되지 않았다.
실시예 10
(S)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드
실시예 9, 단계 2의 합성으로부터 이성질체 2를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (S)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드, 실시예 10(48 mg, 36%, 90% ee)을 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, CDCl3) δ 1.24 - 1.32 (m, 6H), 1.35 (d, 3H), 2.33 - 2.47 (m, 5H), 2.61 - 2.78 (m, 2H), 3.24 (s, 3H), 3.33 - 3.44 (m, 3H), 6.79 (d, 1H), 7.11 (t, 1H), 7.2 - 7.31 (m, 1H), 7.38 (d, 1H), 7.50 (t, 1H), 7.72 (d, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.99 (t, 1H), 9.87 (s, 1H), 11.45 (s, 1H). 하나의 교환가능한 양성자는 관찰되지 않았다.
실시예 11
(R)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드 이성질체 1
단계 1
3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 18(318 mg, 0.77 mmol), 리튬 2-((3S,5S)-4-(tert-부톡시카르보닐)-3,5-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 55(235 mg, 0.80 mmol) 및 DIPEA(0.535 mL, 3.06 mmol)를 DMF(2 mL)에 용해시키고, 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V)(306 mg, 0.80 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 50℃까지 1.5시간 동안 가열한 후, 상온까지 냉각시켰다. 반응 혼합물을 DCM(25 mL) 및 5% Na2CO3(aq)(25 mL)로 희석하고, 진탕하고, 상 분리시켰다. 수성 상을 DCM(2x25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 화합물을 100 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 45 내지 85% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm, 250x50 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 화합물을 230 nm에서 UV에 의해 검출하였다. 생성물을 수집하고, 동결 건조시켰다. 부분입체이성질체를 70 ml/분의 유속 및 용리액으로서 120 bar에서 CO2 중 35% EtOH/DEA 100:0.5를 사용하여 셀루코트(250x20 mm, 5㎛) 컬럼 상에서 키랄 SFC를 사용하여 분리시켰다. 부분입체이성질체를 300 nm에서 검출하였다. 제1 용리 화합물을 수집하고, 이성질체 1로서 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 아세토니트릴/물에 용해시키고, 동결 건조시켜 (2S,6S)-tert-부틸 4-(1-((3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 이성질체 1(62.0 mg, 25.3%, 99.9% de)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.19 - 1.34 (m, 9H), 1.39 (s, 9H), 2.40 (dd, 2H), 2.75 (dd, 2H), 3.26 - 3.37 (m, 4H), 3.75 - 3.87 (m, 2H), 7.04 (t, 1H), 7.39 - 7.51 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.14 - 8.25 (m, 2H), 8.28 (d, 1H), 8.44 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.68 (s, 1H), 11.54 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 684.3.
단계 2
Tert-부틸 (2S,6S)-4-(1-((3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(62 mg, 0.09 mmol)를 DCM(4 mL)에 용해시키고, TFA(1 mL, 12.98 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM(25 mL), 8% NaHCO3(aq)(25 mL)에 용해시키고, 진탕하고, 상 분리시켰다. 수성 상을 DCM(25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기로 건조시키고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 MeOH/NH3 20 mM을 사용하여 워터스 BEH 2-EP(5 μm, 30x250 mm) 컬럼 상에서 SFC로 정제하였다. 생성물을 수집하고, 진공하에 증발시켜 (R)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드, 실시예 11(32.7 mg, 61.8%)을 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.06 (d, 6H), 1.26 (d, 3H), 2.12 - 2.21 (m, 2H), 2.61 (dd, 2H), 3.06 - 3.14 (m, 2H), 3.20 (q, 1H), 3.30 (s, 3H), 7.03 (t, 1H), 7.41 (d, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.59 - 7.65 (m, 1H), 8.16 - 8.24 (m, 2H), 8.27 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 11.63 (bs, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 584.2.
실시예 12
(S)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드 이성질체 2
단계 1
실시예 11, 단계 1의 반응으로부터 제2 용리 화합물을 수집하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 아세토니트릴/물에 용해시키고, 백색 고체를 파괴시켰다. 고체를 여과시키고, 아세토니트릴/물로 세척하고, 진공하에 건조시켜 (2S,6S)-tert-부틸 4-(1-((3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 이성질체 2(89 mg, 36.3%, 99.3% de)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.18 - 1.31 (m, 9H), 1.39 (s, 9H), 2.44 (dd, 2H), 2.69 (dd, 2H), 3.26 - 3.36 (m, 3H), 3.49 (q, 1H), 3.78 - 3.89 (m, 2H), 7.03 (t, 1H), 7.38 - 7.51 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.15 - 8.24 (m, 2H), 8.27 (d, 1H), 8.44 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 11.60 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 684.2.
단계 2
Tert-부틸 (2S,6S)-4-(1-((3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카르복실레이트 이성질체 2(89 mg, 0.13 mmol)를 DCM(4 mL)에 용해시키고, TFA(1 mL, 12.98 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM(25 mL), 8% NaHCO3(aq)(25 mL)에 용해시키고, 진탕하고, 상 분리시켰다. 수성 상을 DCM(25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기로 건조시키고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 DMSO에 용해시키고, 용리액으로서 MeOH/NH3 20 mM을 사용하여 워터스 BEH 2-EP(5 μm, 30x250 mm) 컬럼 상에서 SFC로 정제하였다. 생성물을 수집하고, 진공하에 증발시켜 (S)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드, 실시예 12(32.4 mg, 42.6%)를 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.06 (d, 6H), 1.19 (d, 3H), 2.21 (dd, 2H), 2.52 - 2.59 (m, 2H), 3.08 - 3.17 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.37 - 3.5 (m, 1H), 7.03 (t, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.58 - 7.67 (m, 1H), 8.13 - 8.23 (m, 2H), 8.26 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 11.67 (bs, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 584.2.
실시예 13
(S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)부탄아미드,
DIPEA(2.54 mL, 14.58 mmol)를 15℃에서 질소하에 DCM(50 mL) 중 리튬 2-(4-메틸피페라진-1-일)부타노에이트, 중간체 65(1.81 g, 9.72 mmol) 및 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 11(2.00 g, 4.86 mmol)에 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하고, T3P(EtOAc 중 50%)(6.18 g, 9.72 mmol)를 0℃에서 적가하고, 반응물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 물(NH4HCO3) 중 5 내지 80% MeOH의 구배를 사용하여 플래시 C18-플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 잔류물을 용리액으로서 아세토니트릴 중 물(% NH4HCO3 함유)의 점감적 극성 혼합물을 사용하여 선파이어(SunFire) Prep C18 OBD 컬럼(5㎛, 30x100 mm) 상에서 제조용 HPLC에 의해 재정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 진공하에 증발시켰다. 거울상이성질체를 150 mL/분의 유속 및 CO2 중 50% IPA(0.1% DEA)를 사용하여 키랄파크 AD-H(50x250 mm, 5 ㎛) 컬럼 상에서 제조용 키랄 SFC로 분리하였다. 거울상이성질체를 254 nm에서 UV를 사용하여 검출하였다. 제1 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)부탄아미드, 실시예 13(200 mg, 7%, 96.4% ee)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ1.05 (t, 3H), 1.77 - 1.99 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.45 - 2.90 (m, 8H), 3.11 - 3.23 (m, 4H), 7.02 (t, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.32 (t, 1H), 7.52 - 7.62 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 8.06 - 8.15 (m, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.51 - 8.61 (m, 1H). 교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다. 19F NMR (400 MHz, CD3OD) δ-125.77. m/z (ES+), [M+H]+ = 580.
실시예 14
(R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)부탄아미드
실시예 13의 합성으로부터 제2 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)부탄아미드 이성질체 2, 실시예 14(200 mg, 7%, 92.8% ee)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.05 (t, 3H), 1.77 - 1.99 (m, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.45 - 2.95 (m, 8H), 3.11 - 3.23 (m, 4H), 7.02 (t, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.52 - 7.62 (m, 1H), 7.91 (s, 1H), 8.06 - 8.15 (m, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.51 - 8.61 (m, 1H). 교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다. 19F NMR (400 MHz, CD3OD) δ -125.72. m/z (ES+), [M+H]+ = 580.
나타낸 중간체를 사용하여 상기 실시예 13 및 14에 대해 기재된 절차를 반복하여 하기 표 18에 기재된 실시예 15~18을 얻었다:
[표 18]
a 역상 HPLC 정제가 사용되지 않았다.
b 이성질체를 150 mL/분의 유속 및 이동상으로서 CO2 중 50% MeOH(0.1% DEA)를 사용하여 키랄파크 AS-H(50x250mm, 5 ㎛) 컬럼 상에서 키랄 SFC로 분리하였다. 원하는 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
c DMF가 용매로서 사용되었다.
d 화합물을 용리액으로서 아세토니트릴 중 물(0.1% 포름산 함유)의 점감적 극성 혼합물을 사용하여 엑스브리지 Prep C18 OBD 컬럼(5㎛, 19x150 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 진공하에 증발시켰다.
e 이성질체를 40 mL/분의 유속 및 CO2 중 45% IPA(0.1% DEA)를 사용하여 키랄파크 AD-H(20x250 mm, 5 ㎛) 컬럼 상에서 제조용 키랄 SFC로 분리하였다. 이성질체를 220 nm에서 UV를 사용하여 검출하였다. 원하는 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
실시예 19
(S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)부탄아미드
3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 11(300 mg, 0.73 mmol)를 질소하에 DCM(1 mL) 중 리튬 2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)부타노에이트, 중간체 49(313 mg, 1.46 mmol), 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물, T3P(EtOAc 중 50%)(928 mg, 1.46 mmol) 및 DIPEA(1.019 mL, 5.83 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(50 mL)으로 희석하고, 포화 NaHCO3(2x100 mL), 염수(2x100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM/MeOH 10:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하였다. 생성물 분획을 진공하에 증발시켰다. 부분입체이성질체를 15 mL/분의 유속 및 이동상으로서 헥산(0.1% DEA) 중 50% IPA를 사용하여 키랄파크-AD-H-SL001(20x250 mm) 컬럼 상 제조용 키랄-HPLC로 분리하였다. 부분입체이성질체를 254 및 220 nm에서 UV를 사용하여 검출하였다. 제1 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)부탄아미드, 실시예 19(30 mg, 24%, 99.9% ee)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1.07 (t, 3H), 1.17 (d, 6H), 1.75 - 1.98 (m, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.52 - 2.70 (m, 2H), 2.89 (dd, 2H), 2.93 - 3.10 (m, 2H), 3.11 - 3.25 (m, 4H), 7.03 (t, 1H), 7.17 (dd, 1H), 7.35 (dd, 1H), 7.54 - 7.64 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 8.10 (dd, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.52 - 8.62 (m, 1H). 교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다.
19F NMR (282 MHz, DMSO-d 6) δ -121.25. m/z (ES+), [M+H]+ = 608.
실시예 20
(R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)부탄아미드
실시예 19의 합성으로부터 제2 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)부탄아미드 이성질체 2, 실시예 20(5 mg, 4%, 90% ee)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1.09 (t, 3H), 1.25 - 1.45 (m, 6H), 1.70 - 1.98 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.74 (s, 3H), 2.98 - 3.13 (m, 2H), 3.16 (s, 3H), 3.15 - 3.60 (m, 5H), 7.03 (t, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.53 - 7.65 (m, 1H), 7.93 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.50 - 8.65 (m, 1H). 교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다.
19F NMR (282 MHz, DMSO-d 6) δ -121.11. m/z (ES+), [M+H]+ = 608.
나타낸 중간체를 사용하여 상기 실시예 19 및 실시예 20에 대해 기재된 절차를 반복하여 하기 표 19에 기재된 실시예 21~23을 얻었다:
[표 19]
a 잔류물을 30 mL/분의 유속 및 물(0.05% NH3H2O) 중 30 내지 55% 아세토니트릴의 구배로 용리하는 엑스브리지 Prep C18 OBD 컬럼(5 ㎛, 19x150 mm) 상에서 제조용 HPLC에 의해 재정제하였다. 화합물을 220 및 254 nm의 파장에서 검출하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
b 이성질체를 20 mL/분의 유속 및 헥산(0.1% DEA)/EtOH/MeOH 50:35:15를 사용하여, AXIA 패킹된(250x21.2 mm, 5 μm), 페노메넥스 Lux 5u 셀룰로스-4 컬럼 상에서 제조용 키랄-HPLC로 분리하였다. 원하는 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
c 용리액으로서 아세토니트릴 중 물(0.1% NH4HCO3을 함유)의 점감적 극성 혼합물을 사용하여 엑스브리지 Prep C18 OBD 컬럼(5μm, 19x150 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 진공하에 증발시켰다.
실시예 24
(R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(피페라진-1-일)프로판아미드
단계 1
DIPEA(0.637 mL, 3.65 mmol)를 질소하에 DMF(10 mL) 중 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 11(500 mg, 1.22 mmol), 리튬 2-(4-(tert-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 66(628 mg, 2.43 mmol), EDC(349 mg, 1.82 mmol) 및 HOBT(279 mg, 1.82 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(75 mL)에 붓고, EtOAc(2x75 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수(3x100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM/MeOH 8:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하여 tert-부틸 4-(1-((3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(440 mg, 55.6%)를 담황색 고체로서 수득하였다. m/z (ES+), [M+H]+ = 652.
단계 2
TFA(0.050 mL, 0.64 mmol)를 20℃에서 DCM(20 mL) 중 tert-부틸 4-(1-((3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소프로판-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(420 mg, 0.64 mmol)에 적가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM(50 mL)으로 희석하고, NaHCO3(2x50 mL)로 세척하고, 유기물을 진공하에 증발시켰다. 거울상이성질체를 20 mL/분의 유속 및 용리액으로서 100% MeOH(0.1% DEA)를 사용하여, AXIA 패킹된(250x21.2 mm, 5 μm), 페노메넥스 Lux 5u 셀룰로스-4 컬럼 상에서 제조용 키랄-HPLC로 분리하였다. 이성질체를 254 및 220 nm의 파장에서 검출하였다. 제1 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(피페라진-1-일)프로판아미드 이성질체 1, 실시예 24(53 mg, 27%, 99.9% ee)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.26 (d, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.45 - 2.65 (m, 4H), 2.73 - 2.85 (m, 4H), 3.22 - 3.40 (m, 4H), 6.98 (t, 1H), 7.35 - 7.50 (m, 2H), 7.50 - 7.62 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.25 - 8.37 (m, 2H), 9.18 (s, 1H), 9.73 (s, 1H), 11.48 (bs, 1H). 하나의 교환가능한 양성자는 관찰되지 않았다.
19F NMR (376 MHz, DMSO-d 6 ) -121.21. m/z (ES+), [M+H]+ = 552.
실시예 25
(S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(피페라진-1-일)프로판아미드
실시예 24, 단계 2의 반응으로부터 제2 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(피페라진-1-일)프로판아미드, 실시예 25(47 mg, 24%, 92.6% ee)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6 ) δ1.25 (d, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.43 - 2.65 (m, 4H), 2.68 - 2.85 (m, 4H), 3.22 - 3.40 (m, 4H), 6.97 (t, 1H), 7.35 - 7.50 (m, 2H), 7.50 - 7.62 (m, 1H), 8.02 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.25 - 8.37 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.69 (s, 1H), 11.43 (bs, 1H). 하나의 교환가능한 양성자는 관찰되지 않았다.
19F NMR (282 MHz, DMSO-d 6 ) -121.20. m/z (ES+), [M+H]+ = 552.
실시예 26
(R)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드
단계 1
DIPEA(1.02 mL, 5.83 mmol)를 25℃에서 DCM(5 mL) 중 리튬 2-((3R,5R)-4-(tert-부톡시카르보닐)-3,5-디메틸피페라진-1-일)부타노에이트, 중간체 56(438 mg, 1.46 mmol) 및 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 11(300 mg, 0.73 mmol)에 한번에 첨가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 10분 동안 교반하였다. 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물, T3P(928 mg, 1.46 mmol)를 0℃에서 적가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 MeOH/DCM 1:10을 사용하여 제조용 TLC로 정제하여 (2R,6R)-tert-부틸 4-(1-((3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(200 mg, 39.5%)를 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.03 - 1.11 (m, 3H), 1.18 - 1.52 (m, 15H), 1.81 - 1.92 (m, 2H), 2.35 - 2.80 (m, 5H), 2.82 - 2.93 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.75 - 3.99 (m, 2H), 4.08 - 4.21 (m, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.18 (dd, 1H), 7.32 (t, 1H), 7.52 - 7.61 (m, 1H), 7.91 (d, 1H), 8.09 (d, 1H), 8.26 (s, 1H), 8.51 - 8.61 (m, 1H). 교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다. 부분입체이성질체의 혼합물.
m/z (ES+), [M+H]+ = 694.
단계 2
TFA(5 mL, 64.90 mmol)를 25℃에서 DCM(20 mL) 중 (2R,6R)-tert-부틸 4-(1-((3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-1-옥소부탄-2-일)-2,6-디메틸피페라진-1-카르복실레이트(370 mg, 0.53 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 30 mL/분의 유속으로 7분에 걸쳐 물(0.03% NH3H2O) 중 30 내지 50% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 Prep C18 OBD 컬럼(5 ㎛, 19x150 mm) 상에서 역상 제조용 크로마토그래피로 정제하였다. 화합물을 220 및 254 nm의 파장을 사용하여 검출하였다. 부분입체이성질체를 15 mL/분의 유속 및 85분에 걸쳐 헥산(0.1% DEA) 중 50% EtOH를 사용하여 키랄파크-AD-H-SL001(20x250 mm) 상에서 제조용 키랄-HPLC로 분리하였다. 화합물을 220 및 254 nm의 파장을 사용하여 검출하였다. 제1 용리 화합물을 수집하고, 진공하에 증발시켜 R-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드, 실시예 26(78 mg, 28%, 99.0% ee)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.09 (t, 3H), 1.41 (d, 6H), 1.80 - 2.00 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.77 (dd, 2H), 3.07 (dd, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.28 - 3.40 (m,1H), 3.55 - 3.72 (m, 2H), 7.02 (t, 1H), 7.23 (d, 1H), 7.33 (t, 1H), 7.53 - 7.62 (m, 1H), 7.92 (d, 1H), 8.05 - 8.13 (m, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.40 - 8.49 (m, 2H), 8.50 - 8.60 (m, 1H).
19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ-125.59. m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
실시예 27
(S)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드
실시예 26, 단계 2의 반응으로부터 제2 용리 화합물을 수집하고, 진공하에 증발시켜 (S)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드, 실시예 27(30.0 mg, 13%, 99.9% ee)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.07 (t, 3H), 1.22 (d, 6H), 1.80 - 1.93 (m, 2H), 2.40 - 2.58 (m, 5H), 2.81 (dd, 2H), 3.07 - 3.18 (m, 4H), 3.19 - 3.29 (m, 2H), 7.03 (t, 1H), 7.19 (d, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.53 - 7.63 (m, 1H), 7.94 (s, 1H), 8.05 - 8.15 (m, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.52 - 8.62 (m, 1H). 교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다. m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
나타낸 중간체를 사용하여 상기 실시예 26 및 27에 대해 기재된 절차를 반복하여 하기 표 20에 기재된 실시예 28~33을 얻었다:
[표 20]
a 단계 1로부터의 반응 혼합물을 EtOAc 또는 DCM(300 mL)으로 희석하고, 물(150 mL) 및 염수(125 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM/MeOH 20:1 또는 30:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하였다.
b 이성질체를 20 mL/분의 유속 및 이동상으로서 헥산:EtOH:MeOH 50:35:15를 사용하여, AXIA 패킹된(250x21.2 mm, 5 μm), 페노메넥스 Lux 5u 셀룰로스-4 컬럼 상에서 제조용 키랄-HPLC로 분리하였다. 화합물을 254 및 220 nm의 파장을 사용하여 검출하였다. 원하는 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
c 단계 2: 25 mL/분의 유속 및 이동상으로서 물(10 mmol/L NH4HCO3) 중 15 내지 45% 아세토니트릴을 사용하여 엑스브리지 쉴드 RP18 OBD 컬럼(5 μm, 19x150 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 화합물을 254 및 220 nm의 파장을 사용하여 검출하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 진공하에 증발시켰다.
d 이성질체를 21분에 걸쳐 20 mL/분의 유속 및 이동상으로서 100% MeOH(0.1% DEA)를 사용하여 (R,R)-웰크(WHELK)-O1-크로마실(Kromasil)(50x250 mm, 5 μm) 상에서 제조용 키랄-HPLC로 분리하였다. 이성질체를 254 및 220 nm의 파장을 사용하여 검출하였다. 원하는 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
e 단계 2: 용리액으로서 아세토니트릴 중 물(0.05% 포름산 함유)의 점감적 극성 혼합물을 사용하여 엑스브리지 Prep C18 OBD 컬럼(5 μm, 19x150 mm) 상에서 제조용 HPLC에 의한 정제. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 진공하에 증발시켰다.
실시예 34
(S)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드
리튬 3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 48(430 mg, 2.06 mmol), 2-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-b]피리딘-3-일)-1,1,3,3-테트라메틸이소우로늄 헥사플루오로포스페이트(V)(785 mg, 2.06 mmol) 및 DIPEA(1.068 mL, 6.11 mmol)를 DMF(10 mL)에 용해시키고, 실온에서 5분 동안 교반한 후, 3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 18(635 mg, 1.53 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반한 후, DCM(75 mL) 및 5% Na2CO3(aq)(50 mL)로 희석하고, 진탕하고, 상 분리시켰다. 수성 상을 DCM(2x50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 화합물을 100 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 15 내지 65% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 ㎛, 250x50 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 화합물을 220 nm에서 UV에 의해 검출하였다. 생성물 피크를 수집하고, 동결 건조시켰다. 이어서, 아세토니트릴로부터 결정화시키고, 고체를 여과에 의해 수집하고, 최소량의 아세토니트릴로 세척하고, 진공하에 건조시켰다. 거울상이성질체를 140 mL/분의 유속으로 150 bar에서 CO2 중 25% IPA/DEA 100:0.5를 사용하여 셀루코트(250x30 mm, 5 ㎛) 컬럼 상에서 키랄- SFC로 분리하였다. 거울상이성질체를 270 nm에서 UV에 의해 검출하였다. 제1 용리 거울상이성질체를 수집하고, 동결 건조시켜 N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드, 실시예 34(213 mg, 23%, 99.9% ee)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.14 (s, 3H), 2.24 - 2.44 (m, 4H), 2.56 - 2.67 (m, 2H), 2.68 - 2.8 (m, 2H), 3.24 - 3.35 (m, 6H), 3.50 (t, 1H), 3.67 (dd, 1H), 3.79 (dd, 1H), 7.04 (t, 1H), 7.41 - 7.55 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.19 (t, 1H), 8.22 - 8.32 (m, 2H), 8.44 (d, 1H), 9.46 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 11.47 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 600.2.
실시예 35
(R)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드
실시예 34로부터 제2 용리 거울상이성질체를 수집하고, 동결 건조시켰다. EtOH/물(3:1)(5 mL)에서 현탁액을 교반함으로써 잔류물을 재결정화시키고, 오일조를 사용하여 70℃까지 가열하고, 시드(seed)를 첨가하였다. 이어서, 오일조 온도를 23℃로 설정하고, 현탁액을 천천히 실온으로 만들었다. 5일 동안 교반을 계속하여 긴 바늘 모양의 결정이 혼합된 짧은 바늘 모양의 결정을 함유하는 우유 같은 슬러리를 얻었다. 현탁액을 교반하면서 70℃까지 가열한 후, 가열 및 교반을 중단하고, 혼합물을 천천히 실온에 이르게 하였다(2x). 단지 좋은 긴 바늘 모양의 결정. 현탁액을 교반없이 1주일 더 정치시켰다. 고체를 여과해내고, 40℃에서 진공하에 건조시켜 (R)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드, 실시예 35(186 mg, 20%, 99.4% ee)를 백색 바늘 모양 결정으로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.14 (s, 3H), 2.23 - 2.45 (m, 4H), 2.57 - 2.67 (m, 2H), 2.69 - 2.78 (m, 2H), 3.26 - 3.34 (m, 6H), 3.50 (t, 1H), 3.67 (dd, 1H), 3.79 (dd, 1H), 7.03 (t, 1H), 7.4 - 7.55 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.13 - 8.33 (m, 3H), 8.44 (d, 1H), 9.46 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 11.48 (s, 1H). 19F NMR (470 MHz, DMSO-d 6 ) δ -120.52, -147.75. m/z (ES+), [M+H]+ = 600.5.
실시예 35의 샘플을 단일 규소 결정(SSC) 웨이퍼 마운트 상에 장착하고, 분말 X-선 회절을 세타-세타 파날리티컬 엑스퍼트(Theta-Theta PANalytical X'Pert) PRO(X-선의 파장 1.5418 Å 니켈-여과된 Cu 방사선, 전압 45 kV, 필라멘트 방출 40 mA)로 기록하였다. 자동 가변 발산 및 산란방지 슬릿을 사용하고, 샘플을 측정 동안 회전시켰다. 샘플을 PIXCEL 검출기(유효 길이 3.35° 2세타)를 사용하여 0.013°의 단계 폭 및 233초의 단계 측정 시간을 사용하여 2~50° 2세타로부터 스캐닝하였다. 결정의 특징적인 피크 위치를 하기 표 21에 열거하고(XRPD에 의해 측정됨), 도 1에 나타내었다:
[표 21] 실시예 35의 5개의 가장 특징적인 피크:
당업자는 본원에 나타낸 회절 패턴 데이터가 절대값으로 해석되어서는 안되며, 본원에 개시된 것과 실질적으로 동일한 파워 회절 패턴을 제공하는 임의의 결정질 형태가 본 개시 내용의 범위내에 속한다는 것을 인지할 것이다(추가의 정보를 위하여 문헌[Jenkins, R & Snyder, R.L. 'Introduction to X-Ray Powder Diffractometry' John Wiley & Sons, 1996] 참조).
실시예 36
(S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)부탄아미드
HATU((1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리디늄 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트)(832 mg, 2.19 mmol)를 DMF(1 mL) 중 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 11(300 mg, 0.73 mmol), 리튬 2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)부타노에이트, 중간체 58(511 mg, 2.55 mmol) 및 DIPEA(1.273 mL, 7.29 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 조 생성물을 30 mL/분의 유속 및 용리액으로서 물(0.03% NH3H2O) 중 30 내지 55% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 Prep C18 OBD 컬럼(5 ㎛, 19x150 mm) 상에서 역상 제조용 크로마토그래피로 정제하였다. 220 및 254 nm의 파장을 사용하여 화합물을 검출하였다. 거울상이성질체를 50 mL/분의 유속 및 CO2 중 50% MeOH/아세토니트릴 1:1(0.1% DEA)을 사용하여 (R,R)웰크-01 5/100 크로마실(250x21.1 mm) 컬럼 상에서 키랄 SFC로 분리하였다. 220 nm의 파장을 사용하여 화합물을 검출하였다. 제1 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)부탄아미드, 실시예 36(40 mg, 6%, 99.9% ee)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.08 (t, 3H), 1.72 - 2.02 (m, 4H), 2.38 - 2.50 (m, 6H), 2.70 - 2.85 (m, 4H), 2.88 - 3.10 (m, 4H), 3.15 (s, 3H), 3.27 - 3.40 (m, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.26 (d, 1h), 7.34 (t, 1H), 7.52 - 7.65 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.08, (d, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.52 - 8.63 (m, 1H). 교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다.
19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ-125.64. m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
실시예 37
(R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)부탄아미드
실시예 36의 합성으로부터 제2 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)부탄아미드(40 mg, 6%, 99.9% ee)를 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 1.07 (t, 3H), 1.73 - 2.03 (m, 4H), 2.39 - 2.49 (m, 6H), 2.68 - 2.83 (m, 4H), 2.88 - 3.09 (m, 4H), 3.15 (s, 3H), 3.27 - 3.40 (m, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.25 (d, 1h), 7.34 (t, 1H), 7.52 - 7.62 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 8.08, (d, 1H), 8.28 (s, 1H), 8.50 - 8.63 (m, 1H). 교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다. 19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ-125.70.
m/z (ES+), [M+H]+ = 594.
나타낸 중간체를 사용하여 상기 실시예 36 및 37에 대해 기재된 절차를 반복하여 하기 표 22에 기재된 실시예 38~45를 얻었다:
[표 22]
a 반응 혼합물을 물(50 mL)에 붓고, EtOAc(2x75 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 석유 에테르/EtOAc 10:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하였다.
b 조 물질을 20 mL/분의 유속 및 물(0.03% NH3H2O) 중 35 내지 50% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 선파이어 Prep C18 OBD 컬럼(19x150 mm, 5 ㎛) 상에서 역상 제조용 크로마토그래피로 정제하였다.
c 용리액으로서 아세토니트릴 중 물(0.5% 포름산 함유)의 점감적 극성 혼합물을 사용하여 엑스브리지 Prep C18 OBD 컬럼, (5㎛, 19 x150 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 진공하에 증발시켰다.
d 이성질체를 20 mL/분의 유속 및 이동상으로서 EtOH/MeOH 35:15 중 50% 헥산(0.1% DEA)을 사용하여, AXIA 패킹된(250x21.2 mm, 5 ㎛), 페노메넥스 Lux 5u 셀룰로스-4 컬럼 상에서 제조용 키랄-HPLC로 분리하였다. 254 및 220 nm의 파장을 사용하여 이성질체를 검출하였다. 원하는 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
e 잔류물을 DCM/MeOH 10:1, 8:1 또는 7:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하였다.
f 이성질체를 18 mL/분의 유속 및 100% MeOH를 사용하여 키랄파크 IC(20x250 mm, 5㎛) 상에서 제조용 키랄-HPLC로 분리하였다. 254 및 220 nm의 파장을 사용하여 화합물을 검출하였다. 원하는 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
g 이성질체를 이동상으로서 100% MeOH(DEA로 개질됨)를 사용하여 키랄파크 IA(21.2x150 mm, 5 ㎛) 상에서 제조용 키랄-HPLC로 분리하였다. 원하는 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다.
실시예 46
(R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)프로판아미드
2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)프로판산 디히드로클로라이드, 중간체 47(175 mg, 0.68 mmol) 및 CDI(84 mg, 0.52 mmol)를 DMF(2 mL)에 용해시키고, 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 18(187 mg, 0.45 mmol)을 첨가하고, 반응물을 4시간 동안 60℃까지 가열하였다. 반응물을 실온까지 냉각시켰다. DCM(25 mL)을 첨가하고, 유기 상을 8% NaHCO3(3x25 mL)로 세척하고, 상 분리기로 건조시키고, 진공하에 증발시켰다. 화합물을 100 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 25 내지 70% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 ㎛, 250x50 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 228 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 생성물을 수집하고, 동결 건조시켰다. 거울상이성질체를 140 ml/분의 유속 및 용리액으로서 120 bar에서 CO2 중 40% IPA/DEA 100:0.5를 사용하여 셀루코트(250x20 mm, 5㎛) 컬럼 상에서 키랄 SFC를 사용하여 분리시켰다. 270 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 제1 용리 화합물을 수집하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 19 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 25 내지 70% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 ㎛, 250x19 mm) 상에서 제조용 HPLC에 의해 재정제하였다. 228 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 생성물 분획을 수집하고, 동결 건조시켜 (R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)프로판아미드, 실시예 46(40 mg, 30%, 99.9% ee)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.25 (d, 3H), 1.71 - 1.82 (m, 2H), 2.26 (s, 3H), 2.52 - 2.67 (m, 4H), 2.77 - 2.89 (m, 4H), 3.23 - 3.39 (m, 3H), 3.57 (q, 1H), 7.03 (t, 1H), 7.37 - 7.51 (m, 2H), 7.62 (t, 1H), 8.13 - 8.24 (m, 2H), 8.27 (d, 1H), 8.44 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 11.61 (bs, 1H). 19F NMR (470 MHz, DMSO-d 6 ) δ -120.55, -147.73. m/z (ES+), [M+H]+ = 584.4.
실시예 47
(S)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드
단계 1
3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-아민, 중간체 20(300 mg, 0.55 mmol) 및 리튬 2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 69(103 mg, 0.55 mmol)를 DCM(5 mL)에 현탁시키고, 피리딘(0.134 mL, 1.66 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난 2,4,6-트리옥시드, T3P(0.989 mL, 1.66 mmol)를 적가하였다. 반응 혼합물을 22℃에서 1시간 동안 교반하였다. 리튬 2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 53(20 mg, 0.11 mmol)의 또 다른 부분 및 T3P(200 μL, 0.34 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(15 mL)으로 희석하고, 포화 NaHCO3(5 mL)로 켄칭시키고, 실온에서 5분 동안 교반하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM(2x5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압하에 농축하여 2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)프로판아미드(377 mg, 96%)를 수득하였다.
m/z (ES+), [M+H]+ = 710.5.
단계 2
2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)프로판아미드(335 mg, 0.47 mmol)를 DCM(3.5 mL)에 용해시키고, 빙조로 냉각시키고, TFA(1.083 mL, 14.16 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. DCM(5 mL)을 첨가한 후, TFA(1 mL)를 첨가하고, 5시간 동안 교반을 계속하였다. 이어서, 반응 혼합물을 40℃에서 밤새도록 가열하였다. DCM(25 mL)을 첨가한 다음, NaHCO3(10 mL) 및 MeOH(1 mL)를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM(2x20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 DCM(25 mL), 포화 NaHCO3(10 mL) 및 MeOH(1 mL)에 재용해시키고, 진탕하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 DCM(2x20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 19 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 20 내지 80% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm, 250x19 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 269 nm에서 UV에 의해 화합물을 수집하고, 진공하에 증발시켰다. 부분입체이성질체를 80 mL/분의 유속 및 이동상으로서 120 bar에서 CO2 중 35% EtOH/TEA 100:0.5를 사용하여 키랄파크 IB(30x250 mm, 5 ㎛) 컬럼 상 키랄-SFC로 분리하였다. 260 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 제1 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (S)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드, 실시예 47(20 mg, 8%, 99.9% de)을 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6) δ 1.03 (d, 3H), 1.30 (d, 3H), 1.86 (t, 1H), 2.07 - 2.23 (m, 4H), 2.40 (s, 3H), 2.54 - 2.63 (m, 2H), 2.68 - 2.78 (m, 1H), 2.79 - 2.91 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.69 (q, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.32 - 7.47 (m, 2H), 7.49 - 7.61 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.22 - 8.35 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.65 (s, 1H), 11.38 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 580.4.
실시예 48
(R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드
실시예 47, 단계 2의 반응으로부터 제2 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드(22 mg, 9%, 99.2% de)를 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6) δ 1.11 (d, 3H), 1.16 (d, 3H), 2.02 (t, 1H), 2.11 - 2.23 (m, 4H), 2.40 (s, 3H), 2.44 - 2.49 (m, 1H), 2.54 - 2.66 (m, 3H), 2.66 - 2.78 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.76 - 3.89 (m, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.51 - 7.59 (m, 1H), 8.00 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.23 - 8.36 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 11.37 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 580.4.
실시예 49
(R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드
(R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)프로판산 디히드로클로라이드, 중간체 27(573 mg, 2.21 mmol) 및 CDI(275 mg, 1.70 mmol)를 실온에서 1시간 동안(기체 방출) DMF(2 mL)에서 교반하였다. DMF(2 mL)에 용해된 3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 18(816 mg, 1.47 mmol)을 첨가하고, 반응물을 50℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM(25 mL) 및 5% Na2CO3(aq)(25 mL)로 희석하고, 진탕하고, 상 분리시켰다. 수성 상을 DCM(2x25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기로 건조시키고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 100 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 15 내지 65% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm, 250x50 mm) 상에서 제조용 HPLC에 의해 2회 정제하였다. 235 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 생성물을 동결 건조시켜 (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드, 실시예 49(234 mg, 32%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.11 (d, 3H), 1.16 (d, 3H), 2.02 (t, 1H), 2.1 - 2.23 (m, 4H), 2.42 - 2.54 (m, 1H), 2.54 - 2.67 (m, 3H), 2.67 - 2.78 (m, 1H), 3.25 - 3.36 (m, 3H), 3.77 - 3.88 (m, 1H), 7.03 (t, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.46 (t, 1H), 7.57 - 7.68 (m, 1H), 8.15 - 8.24 (m, 2H), 8.29 (d, 1H), 8.43 (d, 1H), 9.45 (s, 1H), 9.63 (s, 1H), 11.55 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 584.3.
실시예 50
(S)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드
3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 11(387 mg, 0.94 mmol) 및 2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)부탄산 디히드로클로라이드, 중간체 46(300 mg, 1.10 mmol)을 무수 DCM(25 mL)에 현탁시키고, 피리딘(0.3 mL, 3.71 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 빙조에서 0℃까지 냉각시키고, T3P(1.5 mL, 2.52 mmol)를 적가하였다. 빙조를 제거하고, 반응 혼합물을 23℃에서 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3(20 mL)으로 켄칭시키고, 23℃에서 30분 동안 교반하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 상을 DCM(2x20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 100 mL/분의 유속으로 25분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 20 내지 70% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm, 250x50 mm) 상에서 2번 주사하여 제조용 HPLC로 정제하였다. 269 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 제1 용리 이성질체를 수집하고, 동결 건조시켜 (S)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드, 실시예 50(205 mg, 37%)을 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.97 (t, 3H), 1.10 (d, 3H), 1.65 - 1.77 (m, 2H), 1.77 - 1.87 (m, 1H), 1.91 - 2.01 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.55 - 2.67 (m, 2H), 2.67 - 2.77 (m, 1H), 2.81 - 2.94 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.55 (t, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.5 - 7.58 (m, 1H), 8.05 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.24 - 8.34 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 11.20 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 594.4.
실시예 51
(R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드
실시예 50의 반응으로부터 제2 용리 이성질체를 수집하고, 동결 건조시켜 (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드, 실시예 51(210 mg, 38%)을 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.95 (t, 3H), 1.13 (d, 3H), 1.57 - 1.69 (m, 1H), 1.72 - 1.86 (m, 1H), 2.00 - 2.09 (m, 1H), 2.09 - 2.23 (m, 4H), 2.38 - 2.58 (m, 6H), 2.72 - 2.81 (m, 1H), 2.81 - 2.91 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.44 - 3.53 (m, 1H), 6.98 (t, 1H), 7.35 - 7.45 (m, 2H), 7.51 - 7.6 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.24 - 8.36 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.61 (s, 1H), 11.32 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 594.4.
나타낸 중간체를 사용하여 상기 실시예 50~51에 대해 기재된 절차를 반복하여 하기 표 23에 기재된 실시예 52~57을 얻었다:
[표 23]
a 더 많은 T3P를 일부분씩 나누어 첨가하였다.
b 0℃에서 1시간 후, DIPEA(0.9 mL, 5.15 mmol) 및 추가의 T3P(3.0 mL, 5.04 mmol)를 실온에서 3시간에 걸쳐 반응 혼합물에 조금씩 나누어 첨가하였다.
실시예 58
(R)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드
단계 1
3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-아민, 중간체 20(210 mg, 0.39 mmol) 및 리튬 2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 51(97 mg, 0.44 mmol, 약 84 중량%)을 DCM(10 mL)에 현탁시키고, 피리딘(0.10 mL, 1.24 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, T3P(0.9 mL, 1.51 mmol, EtOAc 중 50 중량%)를 적가하였다. 반응 혼합물을 22℃에서 1시간 동안 교반하였다. 리튬 2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 51(24 mg, 0.11 mmol)을 첨가한 다음, T3P(0.2 mL, 0.34 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 22℃에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3(20 mL)로 켄칭시키고, 22℃에서 15분 동안 교반하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM(2x10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 부분입체이성질체를 140 mL/분의 유속 및 120 bar에서 CO2 중 32% EtOH/DEA 100:0.5를 사용하여 셀루코트(5 μm, 250x30 mm) 컬럼 상에서 키랄 SFC로 분리하였다. 220 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 제1 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)프로판아미드 이성질체 1(125 mg, 45%, 99.9% de)을 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ -0.09 (s, 9H), 0.77 - 0.89 (m, 1H), 0.92 - 1.17 (m, 4H), 1.25 (d, 3H), 1.81 - 1.95 (m, 1H), 2.13 (s, 3H), 2.22 - 2.34 (m, 1H), 2.39 (s, 3H), 2.43 - 2.62 (m, 3H), 2.67 - 2.86 (m, 2H), 3.07 - 3.65 (m, 6H), 5.72 (d, 1H), 5.87 (d, 1H), 7.05 (t, 1H), 7.35 - 7.48 (m, 2H), 7.51 - 7.6 (m, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.19 (s, 1H), 8.23 - 8.31 (m, 1H), 8.31 - 8.41 (m, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.86 (s, 1H).
단계 2
2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)프로판아미드 이성질체 1(123 mg, 0.17 mmol)을 무수 DCM(2 mL)에 용해시키고, TFA(3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 상온에서 19시간 동안 교반하였다. DCM(10 mL)을 첨가한 다음, NaHCO3(10 mL) 및 MeOH(1 mL)를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM/MeOH 5:1(2x6 mL)의 혼합물로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 19 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 20 내지 80% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm, 250x19 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 269 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 생성물을 수집하고, 동결 건조시켜 (R)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드, 실시예 58(63 mg, 63%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.03 (d, 3H), 1.30 (d, 3H), 1.86 (t, 1H), 2.08 - 2.22 (m, 4H), 2.40 (s, 3H), 2.46 - 2.62 (m, 2H), 2.68 - 2.78 (m, 1H), 2.79 - 2.91 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.69 (q, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.33 - 7.45 (m, 2H), 7.5 - 7.59 (m, 1H), 8.03 (s, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.25 - 8.36 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.64 (s, 1H), 11.36 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 580.3.
실시예 59
(S)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드 이성질체 2
단계 1
실시예 58, 단계 1의 반응으로부터 제2 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)프로판아미드 이성질체 2(120 mg, 43%, 99.7% de)를 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ -0.09 (s, 9H), 0.81 - 0.91 (m, 1H), 0.95 - 1.16 (m, 7H), 1.95 (t, 1H), 2.03 - 2.18 (m, 4H), 2.33 - 2.43 (m, 4H), 2.43 - 2.57 (m, 1H), 2.58 - 2.72 (m, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.4 - 3.56 (m, 2H), 3.84 (s, 1H), 5.73 (d, 1H), 5.87 (d, 1H), 7.04 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.55 (t, 1H), 8.11 - 8.22 (m, 2H), 8.27 (t, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.84 (s, 1H).
단계 2
2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)프로판아미드 이성질체 2(118 mg, 0.17 mmol)를 무수 DCM(2 mL)에 용해시키고, TFA(3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 상온에서 19시간 동안 교반하였다. DCM(10 mL)을 첨가한 다음, NaHCO3(10 mL) 및 MeOH(1 mL)를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM/MeOH 5:1(2x6 mL)의 혼합물로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 19 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 20 내지 80% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm, 250x19 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 269 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 생성물 분획을 동결 건조시켜 (S)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드, 실시예 59(74 mg, 77%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 1.12 (d, 3H), 1.16 (d, 3H), 2.02 (t, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.16 - 2.22 (m, 1H), 2.40 (s, 3H), 2.43 - 2.48 (m, 1H), 2.54 - 2.66 (m, 3H), 2.67 - 2.77 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.76 - 3.88 (m, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.27 (d, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.51 - 7.59 (m, 1H), 8.00 (s, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.26 - 8.34 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 11.36 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 580.5.
실시예 60
(R)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드
단계 1
리튬 2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)부타노에이트, 중간체 52(104 mg, 0.52 mmol) 및 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-아민, 중간체 20(210 mg, 0.39 mmol)를 DCM(10 mL)에 용해시키고, 피리딘(0.1 mL, 1.24 mmol)을 첨가한 다음, T3P(1.0 mL, 1.68 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 22℃에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3(15 mL)로 켄칭시키고, 추가의 10분 동안 교반하고, DCM(3x7 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 100 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 20 내지 80% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm, 250x50 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 269 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 순수한 분획을 풀링하고, 동결 건조시켰다. 부분입체이성질체를 150 mL/분의 유속 및 120 bar에서 CO2 중 23% EtOH/DEA 100:0.5를 사용하여 키랄파크 IB 컬럼(5 μm, 250x30 mm) 상에서 키랄 SFC로 분리하였다. 270 nm에서 UV를 사용하여 화합물을 검출하였다. 제1 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)부탄아미드 이성질체 1(69 mg, 24%, 99.3% de)을 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ -0.08 (s, 9H), 0.80 - 0.96 (m, 2H), 0.99 (t, 3H), 1.06 (d, 3H), 1.63 - 1.87 (m, 3H), 2.06 - 2.16 (m, 4H), 2.39 (s, 3H), 2.56 (d, 2H), 2.73 - 2.86 (m, 3H), 3.25 (s, 3H), 3.31 (s, 1H), 3.47 - 3.56 (m, 2H), 5.78 (dd, 2H), 7.05 (t, 1H), 7.37 - 7.44 (m, 2H), 7.52 - 7.59 (m, 1H), 8.13 - 8.21 (m, 2H), 8.28 (t, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.61 (s, 1H).
단계 2
2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)부탄아미드 이성질체 1(67 mg, 0.09 mmol)을 DCM(2 mL)에 용해시키고, TFA(3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 22℃에서 17시간 동안 교반하였다. DCM(10 mL) 및 NaHCO3(15 mL)을 첨가하고, 진탕시키고, 상들을 분리하고, 수성 층을 DCM(2x5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 19 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 20 내지 80% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 ㎛, 250x19 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 269 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 생성물 피크를 수집하고, 동결 건조시켜 (R)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드, 실시예 60(31 mg, 56%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.97 (t, 3H), 1.10 (d, 3H), 1.62 - 1.88 (m, 3H), 1.97 (t, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.55 - 2.67 (m, 2H), 2.67 - 2.77 (m, 1H), 2.82 - 2.95 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.56 (t, 1H), 6.97 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.48 (d, 1H), 7.55 (t, 1H), 8.05 (d, 1H), 8.12 (d, 1H), 8.24 - 8.37 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.63 (s, 1H), 11.22 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 594.4.
실시예 61
(S)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드
단계 1
실시예 60, 단계 1로부터 제2 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켜 2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)부탄아미드(133 mg, 47%, 95.9% de)를 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ -0.09 (s, 9H), 0.82 - 0.91 (m, 1H), 0.92 - 1.02 (m, 4H), 1.12 (d, 3H), 1.53 - 1.66 (m, 1H), 1.69 - 1.84 (m, 1H), 1.91 - 2.02 (m, 1H), 2.02 - 2.1 (m, 1H), 2.12 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.43 - 2.66 (m, 4H), 2.74 - 2.84 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.48 - 3.56 (m, 3H), 5.77 (d, 1H), 5.84 (d, 1H), 7.05 (t, 1H), 7.40 (t, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.52 - 7.59 (m, 1H), 8.15 (d, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.24 - 8.31 (m, 1H), 8.33 (s, 1H), 9.23 (s, 1H), 9.73 (s, 1H).
단계 2
2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)부탄아미드 이성질체 2(131 mg, 0.18 mmol)를 DCM(2 mL)에 용해시키고, TFA(3 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 22℃에서 17시간 동안 교반하였다. DCM(10 mL) 및 NaHCO3(15 mL)를 첨가하고, 진탕시키고, 상들을 분리하고, 수성 층을 DCM(2x5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기를 통해 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 19 mL/분의 유속으로 20분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 20 내지 80% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm, 250x19 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 269 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 생성물을 수집하고, 동결 건조시켜 (S)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드 이성질체 2, 실시예 61(65 mg, 60%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 0.95 (t, 3H), 1.13 (d, 3H), 1.56 - 1.70 (m, 1H), 1.72 - 1.85 (m, 1H), 2.01 - 2.09 (m, 1H), 2.09 - 2.23 (m, 4H), 2.34 - 2.58 (m, 6H), 2.73 - 2.81 (m, 1H), 2.81 - 2.91 (m, 1H), 3.25 (s, 3H), 3.45 - 3.54 (m, 1H), 6.98 (t, 1H), 7.36 - 7.46 (m, 2H), 7.50 - 7.59 (m, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.13 (d, 1H), 8.25 - 8.37 (m, 2H), 9.16 (s, 1H), 9.62 (s, 1H), 11.33 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 594.5.
실시예 62
(R)-3-에톡시-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드
DIPEA(688 μl, 3.94 mmol)를 0℃에서 DCM(1 mL) 중 리튬 (R)-3-에톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 63(237 mg, 1.09 mmol) 및 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-아민, 중간체 11(180 mg, 0.44 mmol)에 한번에 첨가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 1-프로판포스폰산 시클릭 무수물, T3P(835 mg, 1.31 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(50 mL)으로 희석하고, 포화 NaHCO3(2x50 mL) 및 염수(2x50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 용리액으로서 DCM/MeOH 20:1을 사용하여 제조용 TLC로 정제하였다. 생성물(50% ee)을 19분에 걸쳐 20 mL/분의 유속으로 용리액으로서 MTBE(0.1% DEA) 중 20% IPA를 사용하여 키랄파크 IA(20x250 mm, 5 μm) 상에서 제조용 키랄-HPLC로 정제하였다. 254 및 220 nm의 파장을 사용하여 생성물을 검출하였다. 주요 이성질체를 수집하여 (R)-3-에톡시-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드, 실시예 62(40 mg, 15%, 99.7% ee)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1.21 (t, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.42 (s, 6H), 2.50 - 2.73 (m, 4H), 2.74 - 3.02 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 3.45 - 3.65 (m, 3H), 3.86 (dd, 1H), 3.97 (dd, 1H), 7.02 (t, 1H), 7.13 (d, 2H), 7.31 (t, 1H), 7.49 - 7.63 (m, 1H), 7.90 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.47 - 8.52 (m, 1H). 19F NMR (282 MHz, CD3OD) δ -125.71. m/z (ES+), [M+H]+ = 610.
실시예 63
(R)-3-에톡시-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드
중간체 18 및 63을 사용하여 상기 실시예 62에 대해 기재된 절차를 반복하여 실시예 63(80 mg, 24%, 97.9% ee)을 백색 고체로서 얻었다.
56분에 걸쳐 14 mL/분의 유속 및 헥산(0.1% DEA) 중 50% IPA를 사용하여 키랄파크-AD-H-SL002, (20x250 mm) 상에서 제조용 키랄-HPLC로 정제하였다. 254 및 220 nm를 사용하여 화합물을 검출하였다. 주요 이성질체를 진공하에 증발시켰다.
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 1.21 (t, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.45 - 2.72 (m, 4H), 2.73 - 3.02 (m, 4H), 3.21 (s, 3H), 3.44 - 3.66 (m, 3H), 3.78 - 4.04 (m, 2H), 7.00 - 7.21 (m, 2H), 7.42 (t, 1H), 7.58 - 7.73 (t, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.23 - 8.37 (m, 2H), 8.42 (t, 1H).
교환가능한 양성자가 관찰되지 않았다. 19F NMR (282 MHz, CD3OD) δ -149.01, -124.61
m/z (ES+), [M+H]+ = 614.
실시예 64
(R)-3-(벤질옥시)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드
단계 1
나트륨 3-(벤질옥시)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로파노에이트, 중간체 64(317 mg, 0.93 mmol) 및 3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-아민, 중간체 20(448 mg, 0.83 mmol)를 에틸 아세테이트(20 mL)에 현탁시키고, 피리딘(0.25 mL, 3.09 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, T3P(1.0 mL, 1.68 mmol, 에틸 아세테이트 중 50 중량%)를 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반한 후, 22℃에서 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, T3P(1.0 mL, 1.68 mmol)를 적가하고, 22℃에서 3시간 동안 교반을 계속하였다. 반응 혼합물을 다시 0℃까지 냉각시키고, T3P(0.5 mL, 0.84 mmol)를 적가하고, 22℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다시 0℃까지 냉각시키고, T3P(0.5 mL, 0.84 mmol)를 적가하고, 22℃에서 16시간 동안 계속 교반하였다. 물(5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 22℃에서 30분 동안 교반하였다. NaHSO4(20 mL)를 첨가한 다음, DCM(10 mL)을 첨가하고, 상 분리시켰다. 수성 상을 DCM(2x10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축하여 3-(벤질옥시)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드(690 mg, 정량)를 수득하고, 이것을 다음 단계에 직접 취하였다. m/z (ES+), [M+H]+ = 802.3.
단계 2
3-(벤질옥시)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1-((2-(트리메틸실릴)에톡시)메틸)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드 이성질체 2(600 mg, 0.75 mmol)를 무수 DCM(3 mL)에 용해시키고, TFA(3 mL, 26 mmol)를 상온에서 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 22℃에서 4시간 동안 교반하였다. TFA(2 mL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 22℃에서 3일 동안 교반하였다. TFA(2 mL)를 첨가하고, 4일 동안 계속 교반하였다. TFA(2 mL)를 첨가하고, 혼합물을 22℃에서 밤새도록 교반하였다. DCM(20 mL)을 첨가하고, 혼합물을 포화 NaHCO3(50 mL)로 중화시키고, MeOH(3 mL)를 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 상을 DCM 중 10% MeOH(2x11 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 상 분리기를 통해 여과한 다음, 실리카의 소형 플러그를 통해 여과하고, 이것을 DCM 및 MeOH의 혼합물로 세척하였다. 합한 여액을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 100 mL/분의 유속으로 30분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 20 내지 80% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm 250x50 mm) 상에서 제조용 HPLC로 정제하였다. 269 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 생성물 피크를 수집하고, 동결 건조시켰다. 거울상이성질체를 40 mL/분의 유속 및 용리액으로서 100% MeOH/NH3　100:0.1을 사용하여 Lux C4 컬럼(30x250 mm, 5μm) 상에서 제조용 키랄 HPLC로 분리하였다. 260 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 제2 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 100 mL/분의 유속으로 25분에 걸쳐 H2O/ACN/NH3 95/5/0.2 완충제 중 25 내지 75% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 엑스브리지 C18 컬럼(10 μm, 250x50 ID mm) 상에서 제조용 HPLC에 의해 재정제하였다. 270 nm에서 UV에 의해 화합물을 검출하였다. 순수한 분획을 동결 건조시켜 (R)-3-(벤질옥시)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드, 실시예 64(161 mg, 32%)를 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.15 (s, 3H), 2.26 - 2.44 (m, 7H), 2.59 - 2.69 (m, 2H), 2.71 - 2.82 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.58 (t, 1H), 3.79 (dd, 1H), 3.91 (dd, 1H), 4.54 (s, 2H), 6.98 (t, 1H), 7.24 - 7.36 (m, 5H), 7.40 (t, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.52 - 7.58 (m, 1H), 8.01 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.26 - 8.33 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 11.21 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 672.5.
실시예 65
(S)-3-(벤질옥시)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드
실시예 64, 단계 2의 반응으로부터 제1 용리 이성질체를 수집하고, 진공하에 증발시켰다. 잔류물을 아세토니트릴/물에 용해시키고, 동결 건조시켜 (S)-3-(벤질옥시)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드 실시예 65(63 mg, 12%)를 고체로서 수득하였다.
1H NMR(500 MHz, DMSO-d 6 ) δ 2.15 (s, 3H), 2.27 - 2.44 (m, 7H), 2.59 - 2.69 (m, 2H), 2.72 - 2.82 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.58 (t, 1H), 3.79 (dd, 1H), 3.91 (dd, 1H), 4.54 (s, 2H), 6.98 (t, 1H), 7.24 - 7.37 (m, 5H), 7.40 (t, 1H), 7.44 (d, 1H), 7.51 - 7.58 (m, 1H), 8.01 (d, 1H), 8.14 (d, 1H), 8.26 - 8.33 (m, 2H), 9.17 (s, 1H), 9.83 (s, 1H), 11.21 (s, 1H). m/z (ES+), [M+H]+ = 672.4.
실시예 66
(R)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(피페라진-1-일)프로판아미드
단계 1
칼륨 카르보네이트(4.21 g, 30.45 mmol)를 25℃에서 공기 중에서 아세토니트릴(60 mL) 중 메틸 2-브로모-3-메톡시프로파노에이트(3 g, 15.23 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트(3.12 g, 16.75 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터 케이크를 추가의 아세토니트릴로 세척하였다. 여액을 합하고, 용매를 감압하에 제거하였다. 조 생성물을 플래시 알루미나 크로마토그래피에 의해 석유 에테르 중 용리 구배 0 내지 100% EtOAc로 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 tert-부틸 4-(1,3-디메톡시-1-옥소프로판-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(2.300 g, 50.0%)를 무색의 오일로서 수득하였다.
m/z (ES+), [M+H]+ = 303.
단계 2
리튬 히드록시드(0.238 g, 9.92 mmol)를 MeOH(5 mL), THF(5.00 mL) 및 물(25 mL)의 용매 혼합물 중 tert-부틸 4-(1,3-디메톡시-1-옥소프로판-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(1.0 g, 3.31 mmol)의 슬러리에 첨가한 후, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 진공하에 농축하여 조 리튬 2-(4-(tert-부톡시카르보닐)피페라진-1-일)-3-메톡시프로파노에이트(1.200 g)를 황색 고체로서 수득하였다. m/z (ES+), [M+H]+ = 289.
단계 3
2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스피난(5398 mg, 9.99 mmol)을 실온에서 DCM(30 mL) 중 중간체 33(415 mg, 1.00 mmol), 리튬 2-(4-(tert-부톡시카르보닐) 피페라진-1-일)-3-메톡시프로파노에이트(588 mg, 2.00 mmol) 및 DIPEA(1.745 mL, 9.99 mmol)의 용액에 첨가한 후, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응물을 물(100 mL)로 희석하고, DCM(3 x 20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 상을 물(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척한 후, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공하에 농축시켰다. 조 생성물을 용리액으로서 물(0.05% NH3 함유) 및 MeCN의 점감적 극성 혼합물을 사용하여 제조용 HPLC(엑스브리지 Prep C18 OBD 컬럼, 5μ 실리카, 직경 19 mm, 길이 150 mm)로 정제하였다. 원하는 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜 tert-부틸 4-(1-((3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-3-메톡시-1-옥소프로판-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(305 mg, 44.5%)를 황색 고체로서 수득하였다. m/z (ES+), [M+H]+ = 686.
단계 4
tert-부틸 4-(1-((3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)아미노)-3-메톡시-1-옥소프로판-2-일)피페라진-1-카르복실레이트(300 mg, 0.44 mmol)를 1:3 TFA-DCM(10 mL)의 용액에 첨가한 후, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 용매를 진공하에 농축시키고, 조 생성물을 용리액으로서 물(0.1% 포름산 함유) 및 MeCN의 점감적 극성 혼합물을 사용하여 제조용 HPLC(엑스브리지 Prep C18 OBD 컬럼, 5μ 실리카, 직경 19 mm, 길이 150 mm)로 정제하였다. 적절한 분획을 농축 건조하여 N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(피페라진-1-일)프로판아미드(200 mg, 78%)를 황색 고체로서 수득하였다. 화합물을 용리액으로서 MTBE(0.1% DEA로 개질됨) 중 10% MeOH로 등용매적으로 용리하는 키랄파크 ID-3 컬럼 상에서 제조용 키랄-HPLC에 의해 더 정제하였다. 제1 용리 화합물을 함유하는 분획을 농축 건조하여 실시예 66, (R)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(피페라진-1-일)프로판아미드(39.0 mg, 19.43%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 2.50 (s, 3H), 2.68-2.71 (m, 2H), 2.80 - 2.90 (m, 6H), 3.30 (s, 3H), 3.62 - 3.69 (m, 2H), 3.76 - 3.83 (m, 1H), 7.00-7.06 (t, 1H), 7.44-7.49 (t, 1H), 7.60 - 7.65 (m, 2H), 8.16 - 8.27 (m, 3H), 8.40 - 8.44 (m, 2H), 9.47 (s, 1H), 10.25 (s, 1H), 12.20 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 586.
실시예 67
실시예 66의 제2 용리 이성질체의 분획을 농축 건조하여 실시예 67, (S)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(피페라진-1-일)프로판아미드(35.0 mg, 17.50%)를 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ 2.50 (s, 3H), 2.73 (m, 2H), 2.83 - 2.92 (m, 6H), 3.30 (s, 3H), 3.64 - 3.69 (m, 2H), 3.76 - 3.82 (m, 1H), 7.00-7.06 (t, 1H), 7.44-7.49 (t, 1H), 7.60 - 7.65 (m, 2H), 8.16 - 8.27 (m, 3H), 8.41 - 8.44 (m, 2H), 9.47 (s, 1H), 10.30 (s, 1H), 12.29 (s, 1H).
m/z (ES+), [M+H]+ = 586.
실시예 68: 효소 억제 연구
50 mM HEPES pH 7.3, 1 mM DTT, 0.01% 트윈(Tween)-20, 50 μg/ml BSA, 및 10 mM MgCl2의 완충제 조건하에 재조합 JAK1(아미노산 866-1154, 라이프 테크롤로지즈(Life Technologies), 미국 캘리포니아주 칼스배드 #PV4774), JAK2(아미노산 831-1132, 아스트라제네카 알앤드디 보스톤(AstraZeneca R&D Boston)), 또는 JAK3(아미노산 781-1124, 아스트라제네카 알앤드디 보스톤)를 사용하여 효소 억제 연구를 수행하였다. JAK 효소를 곤충 세포에서 N-종결 GST 융합체로서 발현시키고, 글루타티온-친화성 및 크기 배제 크로마토그래피로 정제하였다. 효소를 30, 3, 0.3, 0.03, 0.003 및 0 μM의 최종 시험 농도로 투여된 억제제의 존재하에 5 mM의 그의 생리학적 ATP 농도의 대략적 상한에서 분석하였다.
JAK1에 대해, 4 nM의 효소를 1.5 μM 펩티드 기질(FITC-C6-KKHTDDGYMPMSPGVA-NH2 (서열 번호 1), 인토네이션(Intonation), 미국 매사추세츠주 보스톤)로 인큐베이션하였다. JAK2에 대해, 0.3 nM의 효소를 1.5 μM 펩티드 기질(5FAM-GEEPLYWSFPAKKK-NH2 (서열 번호 2), 인토네이션, 미국 매사추세츠주 보스톤)로 인큐베이션하였다. JAK3에 대해, 0.1 nM의 효소를 1.5 μM 펩티드 기질(5FAM-GEEPLYWSFPAKKK-NH2 (서열 번호 2), 인토네이션, 미국 매사추세츠주 보스톤)로 인큐베이션하였다. 인산화된 및 비인산화된 펩티드를 분리하고, 억제율%을 계산하기 위하여 캘리퍼(Caliper) LC3000 시스템(캘리퍼 라이프 사이언시즈(Caliper Life Sciences), 미국 매사추세츠주)에 의해 정량화하였다. 이 분석의 결과를 표 24에 나타내었다.
실시예 69: 세포 인터류킨 유도된 JAK-STAT6-루시페라제 분석(pSTAT6)
STAT6 프로모터(U937-STAT6-Luc)의 제어하에 게놈적으로 포함된 루시페라제 리포터 유전자를 갖는 U937 단핵구를 기재로 하는 안정한 세포주가 발생되었다. 세포를 37℃및 5% CO2에서 성장 배지(GlutaMAX 및 25 mM Hepes를 갖는 RPMI 1640, 10% FCS, 1% 나트륨, 1% 비-필수 아미노산 및 0.5 mg/ml 게네티신(선택용)) 중 현탁액에서 성장시켰다.
세포를 5분 동안 250 g에서 원심 분리에 의해 수거하고, 분석 완충제(20 mM HEPES, 1 x HBSS 및 0.1% BSA)에 1 μl 당 1000개의 세포로 재현탁시켰다. 세포 자극을 위하여, 각각 300 pM 또는 7 nM로 분석 완충제에 또한 용해시킨 인터류킨(IL-13)을 사용하였다. 이것은 최종 분석에서 각각 150 pM 및 3.5 nM을 제공하여 Emax의 80%로 신호를 유도하였다. 시험 및 대조군 화합물을 DMSO 중 웰 당 5 nl에서 10 mM 내지 0.5 nM의 순차적인 희석으로 분석 플레이트(낮은 부피의 백색 384-웰 플레이트)에 적용하였다.
각각의 웰에 4 μl의 세포 및 4 μl의 인터류킨(IL-13)을 첨가하고, 플레이트를 밀봉하고, 37℃에서 4½시간 및 이어서, 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. SteadyGlo(프로메가(Promega))의 웰 당 4 μl의 첨가에 의해 분석을 전개하고, 20분 후, 플레이트를 발광 필터가 있는 엔비전(Envision) 플레이트 판독기에서 판독하였다.
분석에서 화합물은 따라서 1600배 희석되었고, 인터류킨 유도된 신호의 억제에 대한 투여량-반응 곡선은 화합물에 대한 IC50을 결정하였다. 분석은 대조군 및 시험 화합물과 관련하여 2 nM 내지 2 μM의 IC50 범위에서 화합물을 결정하였다.
[표 24]
실시예 70 - 원형 탈모 생체내 투여량 적정 연구
명확한 모발 성장이 관찰될 때까지, 증가된 투여량으로 원형 탈모(AA)가 확립된 C3H/HeJ 마우스에게 본 개시 내용의 범위내의 화합물을 경구로 제공하였다. 모발 성장은 주 단위로 평가된 모발 지수 점수(HIS)로 표현하였으며, 건강한 마우스(전체 털 = 300의 HIS) 및 완전 AA를 가진 마우스(털 없음 = 0의 HIS)와 비교하였다.
A. 동물 그룹
그룹 1 - (n=6) 원형 탈모 마우스 치료 그룹
그룹 2 - (n=6) 비치료된 원형 탈모 마우스(대조군 그룹)
그룹 3 - (n=6) 건강한 대조군
B. 치료
3개의 모든 그룹을 55±15% 상대 습도로 21±2℃에서 12시간/12시간 명/암 주기가 있는 시설에서 마크롤론 케이지에 6마리씩 6마리 보관하였다. 설치류 음식 및 물을 자유식으로 제공하였다. 연구 시작 전 및 종료 직전에 사진을 찍었다. 체중(BW) 및 HIS를 주 1회 모니터링하였다. 하루에 한 번, 그룹 1 마우스에게 단계적으로 증가된 용량으로 10 mL의 수돗물 중 실시예 35의 화합물에 담근 5 g의 분쇄된 설치류 음식을 제공하였다(BW 및 HIS를 주 1회 모니터링함):
1. 0.5 mg/kg 체중(BW)로 2주,
2. 2.5 mg/kg BW로 2주, 및
3. 12.5 mg/kg BW로 2주.
C. 종료
명확한 모발 성장이 관찰되고 모발 성장 점수가 기록된 실시예 35의 화합물의 최고 농도로 마지막 투여 후 1 내지 2시간 후에, 그룹 1 마우스를 희생시켰다. 눈 뒤에서 EDTA-코팅된 시험관(멀티벳(Multivette) 300, 사르스테트)에 혈액을 채취하고, 얼음위에 두었다. 원심 분리(4℃, 4000G, 5분)하여 혈장을 얻고, 50 μL를 96-웰 NUNC 플레이트로 옮기고, LC-MSMS에 의해 약물 농도에 관해 분석할 때까지 -20℃에서 보관하였다.
D. 결과
3개의 그룹 모두에 대한 결과를 Y-축 상 HIS 및 X-축 상 시간(주)로 도 2에 그래프로 나타내었다.
E. 결과
종료시 실시예 35의 화합물의 평균 혈장 노출(총 농도)는 338 nM이고, HIS = 218이었다.
결과는 다음을 나타낸다:
1. 실시예 35의 화합물은 HIS = 300을 달성하기 위하여 장기간의 치료가 필요하였지만, 최고 투여량에서 원하는 반응을 생성하였다.
2. 최고 효과(HIS = 300)를 나타내는 전체 실험(12주)에 대해 12.5 mg/kg BW가 바람직한 투여량일 것이다.
실시예 71 - OVA 폐 염증 모델 생체내 약물력학적 특성 연구
갈색 노르웨이 래트를 감작시키고, 닭 난소 알부민(OVA)으로 접종하였다 (문헌[Clinical and Experimental Allergy, 37 (2007) 973-988]). 본 개시 내용의 범위내에서 일정량의 미소화된 화합물을 흡입시킨 후, OVA-접종된 갈색 노르웨이 래트의 폐에서 기도 염증의 감소를, 하기 프로토콜을 사용하여 접종되었지만 비치료된 래트와 비교하여 기관지 폐포 세척(BAL)의 호산구의 감소율%로서 측정하였다. 모델 대조군으로서, 모델 참조 화합물, 부데소나이드의 투여량(2 * 300 μg/kg)에 대한 면역 시험(i.t.)을 사용하였다.
A. 동물 그룹
74마리의 동물을 8개의 실험 그룹으로 나누고, 다음과 같이 처리하였다:
그룹 1(식염수/식염수/공기), n=6 - 0일째(S1) 및 7일째(S2)에 거짓(식염수) 감작 및 14일째(P1)에 거짓(식염수) 접종. 치료 - 실내 공기
그룹 2(OVA/식염수/락토스), n=8 - 0일째(S1) 및 7일째(S2)에 Al(OH)3/OVA 혼합물로 감작된 후, 14일째(P1)에 면역 시험 거짓(식염수) 접종. 치료 - DPI 락토스.
그룹 3(OVA/OVA/락토스), n=12 - 0일째(S1) 및 7일째(S2)에 Al(OH)3/OVA 혼합물로 감작된 후, 14일째(P1)에 면역 시험 OVA 접종. 치료 - DPI 락토스.
그룹 4(OVA/OVA/실시예 35), n=10 - 0일째(S1) 및 7일째(S2)에 Al(OH)3/OVA 혼합물로 감작된 후, 14일째(P1)에 면역 시험 OVA 접종. 치료 - DPI; 실시예 35의 화합물, 표적 투여량 0.03 μg/kg
그룹 5(OVA/OVA/실시예 35), n=10 - 0일째(S1) 및 7일째(S2)에 Al(OH)3/OVA 혼합물로 감작된 후, 14일째(P1)에 면역 시험 OVA 접종. 치료 - DPI; 실시예 35의 화합물, 표적 투여량 0.3 μg/kg
그룹 6(OVA/OVA/실시예 35), n=10 - 0일째(S1) 및 7일째(S2)에 Al(OH)3/OVA 혼합물로 감작된 후, 14일째(P1)에 면역 시험 OVA 접종. 치료 - DPI; 실시예 35의 화합물, 표적 투여량 3 μg/kg
그룹 7(OVA/OVA/실시예 35), n=10 - 0일째(S1) 및 7일째(S2)에 Al(OH)3/OVA 혼합물로 감작된 후, 14일째(P1)에 면역 시험 OVA 접종. 치료 - DPI; 실시예 35의 화합물, 표적 투여량 30 μg/kg
그룹 8(OVA/OVA/부데소나이드), n=8 - 0일째(S1) 및 7일째(S2)에 Al(OH)3/OVA 혼합물로 감작된 후, 14일째(P1)에 면역 시험 OVA 접종. 치료 - 2x300 μg/kg 14일째로 부데소나이드(모델 참조 화합물)로 면역 시험. 1일 2회.
B. 실험 절차
제1 감작(S1) 개시 전, 체중(BW)을 기록하고, 모든 래트를 식별 번호로 꼬리에 표시하였다. S2 전 및 종료점(D15) 전에 BW를 추가로 기록하였다. 모든 동물의 BAL을 측정하였다. 종료시, 수행자(들)(연구원)는 개별 래트의 상태를 알지 못하였다.
i. 감작
래트를 0일째 및 7일째에 OVA/Al(OH)3의 혼합물(1 ml의 식염수/래트 중 100 μg의 OVA:100 mg의 Alum)로 피하내(s.c.) 주사하고, 0.5 ml/래트의 보르데텔라 퍼투시스(B. Pertussis) 독소(0.1 μg /ml)로 복강내(i.p.) 주사하였다. 동일한 양 및 계획으로 등장성 식염수의 피하내 및 복강내 주사에 의해 거짓 감작을 수행하였다.
ii. 화합물의 투여
건조 분말 흡입(DPI) 작업 절차
각각의 노출 시스템은 플로우-패스트(flow-past) 노출 흡입 챔버, 래트 통제 튜브 및 모디파이드 라이트 더스트 피드 메카니즘(Modified Wright Dust Feed mechanism)으로 구성되었다. 각각의 투여량 수준에 대한 흡입 챔버 중 에어로졸 농도의 측정을 흡입 포트(AP40, 47 mm, 밀리포어(Millipore)) 중 하나에서 필터 샘플링에 의해 수행하였다. 실시예 35의 화합물의 상이한 투여량은 시험 물품의 농도 및 노출 챔버 중 흐름을 일정하게 유지하면서 노출 시간을 변화시킴으로써 달성되었다. 그룹 2 및 3으로부터의 래트를 통제 튜브(바텔 챔버)에서 락토스에 노출시켰다. 다음 식을 사용하여 2 내지 10분의 노출 시간 및 250 g의 체중을 가정하여 표적 흡입 투여량(μg/kg)을 계산하였다:
상기 식에서, C = 에어로졸 농도(μg/L). RMV: 매분 환기량(L/분) = 4.19 x BW(g) 0.66/1000(McMahon 1977) D= 노출 시간. BW 체중(kg).
필터 분석 결과를 바탕으로, 폐 부하(폐 투여량)는 다음의 식에 따라 계산될 수 있다:
폐 투여량 = 흡입된 투여량 * 폐에 침착된 분획
모델 참조 화합물(부데소나이드)의 기관내 투여
OVA 접종 전날에 래트를 칭량하였다. 접종시 래트를 30 내지 40° 각도로 바로 누운 자세로 놓고 이소플루란(Isoflurane) 혼합물(공기 및 4% 이소플루란)로 마취시키고, 비히클 또는 화합물로 점적주사하였다. 이러한 기관내 점적주사를 끝에 볼루스-벌브를 갖는 개질된 금속 캐뉼러를 사용하여 수행하였다. 의식을 회복할 때까지 래트를 위로 향하게 바로 누운 자세로 케이지에 두었다. 참조 화합물을 제1 일일 투여 6시간 후 제2 일일 투여로 1일 2회 투여하였다. 점적주사 부피: 0.25mL/래트.
iii. 접종(OVA를 이용한 유발)
OVA 접종 5분(5') 전, 혀 정맥으로부터 혈액(0.2ml)을 채취하고, 혈장(60ul/웰)을 96-딥웰 플레이트 상에 채취하였다. 유발은 14일째(P1)에 발생하고, 화합물 투여 2시간 후에 적용되었다. 래트를 30 내지 40° 각도로 바로 누운 자세로 놓고 이소플루란 혼합물(공기 및 4% 이소플루란)로 마취시키고, 등장성 식염수 또는 OVA(0.1 mg/ml)로 점적주사하였다. 기관내 점적주사를 끝에 볼루스-벌브를 갖는 개질된 금속 캐뉼러를 사용하여 수행하였다. 의식을 회복할 때까지 래트를 위로 향하게 바로 누운 자세로 케이지에 두었다. 동일한 양 및 계획으로 등장성 식염수의 면역 시험 점적주사에 의해 거짓 접종을 수행하였다. 점적주사 부피: 0.25ml/래트
iv. 종료 및 기관지 폐포 세척
OVA 접종(P1) 22시간 후에, 래트를 1 ml의 펜토바르비탈(50 mg/ml)의 복강내 주사로 안락사시켰다. EDTA 코팅된 튜브에 경정맥(v. jugularis)으로부터 혈액을 채취하고, 원심분리하고(로탄타(Rotanta) 46R, 480 xg, 10 min, 20℃), 혈장 샘플을 드라이아이스 상에 놓인 2 x 96-딥웰 플레이트(60ul/웰) 상에 수집하고, 추가의 분석을 위하여 최소 -70℃에서 저장하였다. PBS로 전체 폐를 수동 관류하여 기관지 폐포 세척(BAL)을 수행하였다. 기관이 노출된 후, 폴리에틸렌 튜브(PE120)를 삽입하고, 봉합선으로 묶었다. 튜브를 시린지에 연결하고, 실온에서 4.2 ml의 PBS로 미리충전시키고, 폐에 천천히 주사하였으며, 폐에서 10초 지속하였다. 유체를 시린지에 느린 흡인으로 재수집하였다. 이러한 절차를 2회 수행하였다. 최종 BAL 유체를 시험 튜브(4 ml, 폴리프로필렌(PP))로 옮겼다. BAL 샘플을 갖는 튜브를 칭량하였다(1 ml의 BALF가 1 g인 것으로 가정함). 원심 분리(로탄타 46R, 300 xg, 10분, 4℃)할 때까지, BAL을 얼음 상에 유지시켰다. 원심 분리 후, 상청액을 드라이아이스에 놓인 4 x 96-웰 플레이트(0.1ml/웰)에 나누고, 저장하고, 매개체의 분석까지 최소 -70℃에서 저장하였다. 이어서, 세포 펠렛을 0.5 ml의 PBS에 재현탁시키고, 세포를 계수할 때까지 얼음 상에서 유지시켰다. 게이팅된 프로그램을 갖는 반자동 시스템 XT-1800i Vet(시스멕스(Sysmex), 일본 고베)를 사용하여 세포의 총 및 차수를 계수하였다: BALrOVAi .
C. 결과
필터 분석을 바탕으로, 미소화된 실시예 35의 하기 폐 투여량(μg/kg 체중)을 달성하였다:
그룹 4: 0.08
그룹 5: 0.11
그룹 6: 0.6
그룹 7: 4.76
결과는 도 3에서 상기 p-값(대안적으로, n.s.는 중요하지 않음을 나타냄), 및 각각의 실험 그룹의 비-치료된 그룹 3(OVA/OVA)과 비교된 호산구의 감소율%를 막대 그래프로 나타내었다.
결과는 다음을 나타낸다:
1. 실시예 35의 화합물은 각각 0.08, 0.11, 0.6 및 4.76 μg/kg의 폐 투여량에서 7, (중요하지 않음), 28(중요하지 않음), 68(p<0.01) 및 61(p<0.01)%로 BAL에서 호산구를 감소시켰다.
2. OVA 유발(그룹 3)은 BAL에서 호산구의 수를 상당히 증가시켰다.
3. 실시예 35의 화합물은 OVA 대조군(그룹 3)과 비교하여 68%의 최대 억제로 투여량 의존 방식으로 호산구의 존재를 상당히 감소시켰으며, 억제 플래토가 투여량 0.6 μg/kg으로부터 관찰되었다.
4. 모델 참조 화합물 부데소나이드는 과잉 투여량 2 * 300 mg/kg(그룹 8)에서 이 모델에 대해 관찰된 범위에서 호산구의 97% 억제를 나타내었다.
SEQUENCE LISTING <110> AstraZeneca AB <120> JAK1 SELECTIVE INHIBITORS <130> 200572-WO-PCT <140> 62/447,057 <141> 2017-01-17 <160> 2 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> JAK kinases peptide substrates <400> 1 Lys Lys His Thr Asp Asp Gly Tyr Met Pro Met Ser Pro Gly Val Ala 1 5 10 15 <210> 2 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> JAK kinases peptide substrates <400> 2 Gly Glu Glu Pro Leu Tyr Trp Ser Phe Pro Ala Lys Lys Lys 1 5 10

Claims (21)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 I]

    (상기 식에서,
    R1, R3 및 R4는 각각 개별적으로 수소 및 메틸로부터 선택되고;
    R2는 수소, 메틸, 및 -CH2CH2OH로부터 선택되고;
    n은 1 또는 2이고;
    R5는 메틸, 에틸, 및 -CH2OR8로부터 선택되고;
    R6은 메틸, 염소, 및 플루오린으로부터 선택되고;
    R7은 메틸, 에틸, 및 시클로프로필로부터 선택되고;
    R8은 메틸, 에틸, 및 벤질로부터 선택됨).
  2. 제1항에 있어서, 각각의 R1 내지 R4가 독립적으로 수소 및 메틸로부터 선택된 것인, 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R1, R3 및 R4가 모두 수소인, 화합물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, R2가 메틸인, 화합물.
  5. 제1항에 있어서, R5가 메틸 또는 -CH2OR8인, 화합물.
  6. 제1항, 제2항 및 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R8이 메틸인, 화합물.
  7. 제1항에 있어서, R6이 메틸 또는 플루오린 원자인, 화합물.
  8. 제1항, 제2항, 제5항 및 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R6이 플루오린 원자인, 화합물.
  9. 제1항에 있어서, R7이 메틸인, 화합물.
  10. 제1항에 있어서, 하기 화학식 Ia의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 Ia]

    (상기 식에서,
    R1a, R3a 및 R4a는 각각 개별적으로 수소 및 메틸로부터 선택되고;
    R2a는 수소, 메틸, 및 -CH2CH2OH로부터 선택되고;
    n은 1 또는 2이고;
    R5a는 메틸, 에틸, 및 -CH2OR8a로부터 선택되고;
    R6a는 메틸, 염소, 및 플루오린으로부터 선택되고;
    R7a는 메틸, 에틸, 및 시클로프로필로부터 선택되고;
    R8a는 메틸, 에틸 및 벤질로부터 선택됨).
  11. 제1항에 있어서, 하기 화학식 Ib의 구조를 갖는 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 Ib]

    (상기 식에서,
    R5b는 메틸, 에틸, 및 -CH2OR8b로부터 선택되고;
    R6b는 메틸, 염소, 및 플루오린으로부터 선택되고;
    R7b는 메틸, 에틸, 및 시클로프로필로부터 선택되고;
    R8b는 메틸, 에틸 및 벤질로부터 선택됨).
  12. 제1항에 있어서,
    (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(2-(3-(에틸설포닐)-2-플루오로페닐아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(2-(3-(시클로프로필설포닐)-2-플루오로페닐아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(5-클로로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드;
    (S)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드;
    (R)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드;
    (S)-2-((3S,5S)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드;
    (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)부탄아미드;
    (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)부탄아미드;
    (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)부탄아미드;
    (S)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)부탄아미드;
    (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)부탄아미드;
    (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)부탄아미드;
    (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (S)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)부탄아미드;
    (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(피페라진-1-일)프로판아미드;
    (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (S)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (S)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시프로판아미드;
    (R)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시프로판아미드;
    (S)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (R)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (S)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시프로판아미드;
    (R)-2-((3R,5R)-3,5-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시프로판아미드;
    (S)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)부탄아미드;
    (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)부탄아미드;
    (R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)부탄아미드;
    (S)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)부탄아미드;
    (S)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-((3S,5S)-3,4,5-트리메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)프로판아미드;
    (S)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)프로판아미드;
    (S)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)프로판아미드;
    (S)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드;
    (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드;
    (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드;
    (S)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (S)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (S)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시프로판아미드;
    (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시프로판아미드;
    (S)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시프로판아미드;
    (R)-2-((R)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시프로판아미드;
    (R)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드;
    (S)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)프로판아미드;
    (R)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (S)-2-((S)-2,4-디메틸피페라진-1-일)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)부탄아미드;
    (R)-3-에톡시-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-3-에톡시-N-(3-(5-플루오로-2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-3-(벤질옥시)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (S)-3-(벤질옥시)-N-(3-(2-((2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐)아미노)-5-메틸피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드;
    (R)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(피페라진-1-일)프로판아미드; 및
    (S)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(피페라진-1-일)프로판아미드;
    또는 이들의 제약학적으로 허용가능한 염으로부터 선택된 화합물.
  13. 제1항에 있어서, (R)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드인 화합물, 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염.
  14. 제1항에 있어서, (R)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드인 화합물.
  15. 제1항에 있어서, (R)-N-(3-(5-플루오로-2-(2-플루오로-3-(메틸설포닐)페닐아미노)피리미딘-4-일)-1H-인돌-7-일)-3-메톡시-2-(4-메틸피페라진-1-일)프로판아미드의 제약학적으로 허용가능한 염인 화합물.
  16. JAK1-관련 장애의 치료를 위한, 제1항, 제2항, 제5항, 제7항 및 제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염, 및 제약학적으로 허용가능한 희석제, 부형제 또는 담체를 포함하는 제약 조성물이며, 여기서 상기 JAK1-관련 장애가 제1형 당뇨병, 루푸스, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 천식, 아토피성 피부염, 자가면역 갑상선 장애, 궤양성 대장염, 크론병, COPD, 백반증, 및 원형 탈모로부터 선택되는, 제약 조성물.
  17. JAK1-관련 장애의 치료를 위한, 제1항, 제2항, 제5항, 제7항 및 제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 제약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 제약 조성물이며, 여기서 상기 JAK1-관련 장애가 제1형 당뇨병, 루푸스, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 건선, 천식, 아토피성 피부염, 자가면역 갑상선 장애, 궤양성 대장염, 크론병, COPD, 백반증, 및 원형 탈모로부터 선택되는, 제약 조성물.
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