KR102433277B1 - 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 - Google Patents
유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102433277B1 KR102433277B1 KR1020190144626A KR20190144626A KR102433277B1 KR 102433277 B1 KR102433277 B1 KR 102433277B1 KR 1020190144626 A KR1020190144626 A KR 1020190144626A KR 20190144626 A KR20190144626 A KR 20190144626A KR 102433277 B1 KR102433277 B1 KR 102433277B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- composition
- phospholipids
- choline alfoscerate
- oil
- reaction
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 53
- 229960004788 choline alfoscerate Drugs 0.000 title claims abstract description 45
- 239000008777 Glycerylphosphorylcholine Substances 0.000 title claims abstract description 43
- SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-O glycerylphosphorylcholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCO[P@](O)(=O)OC[C@H](O)CO SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-O 0.000 title claims abstract 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 14
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 45
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 40
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000014593 oils and fats Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 41
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 11
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 11
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 11
- 239000003925 fat Substances 0.000 claims description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 9
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 claims description 8
- 102100031415 Hepatic triacylglycerol lipase Human genes 0.000 claims description 8
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 claims description 8
- 229940083466 soybean lecithin Drugs 0.000 claims description 8
- 102100037883 Phospholipase B1, membrane-associated Human genes 0.000 claims description 6
- 239000008344 egg yolk phospholipid Substances 0.000 claims description 6
- 229940068998 egg yolk phospholipid Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 6
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 5
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 5
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 5
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 108020002496 Lysophospholipase Proteins 0.000 claims description 3
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 9
- 229960001231 choline Drugs 0.000 abstract description 4
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-N choline alfoscerate Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP([O-])(=O)OC[C@H](O)CO SUHOQUVVVLNYQR-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 37
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 9
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 9
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 8
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 8
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 7
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 7
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 6
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 6
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 6
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 3
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 235000020238 sunflower seed Nutrition 0.000 description 3
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 2
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003925 brain function Effects 0.000 description 1
- 239000000828 canola oil Substances 0.000 description 1
- 235000019519 canola oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000007809 chemical reaction catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002385 cottonseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008169 grapeseed oil Substances 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000006993 memory improvement Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 239000008345 purified egg yolk phospholipid Substances 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 229940005741 sunflower lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- -1 that is Chemical compound 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 인지질의 가수분해를 통한 식품 또는 약품용 콜린알포세레이트 조성물의 제조에 관한 것으로, 효소에 의한 인지질의 가수분해에 있어서 식용 가능한 유지(油脂)를 첨가함으로써 소요 반응을 촉진하고, 고순도 콜린알포세레이트 조성물의 생산성을 확보할 수 있도록 한 것이다.
본 발명을 통하여, 식약용 콜린알포세레이트 조성물의 제조에 있어서 안전성 및 생산성을 획기적으로 향상시킬 수 있다.
본 발명을 통하여, 식약용 콜린알포세레이트 조성물의 제조에 있어서 안전성 및 생산성을 획기적으로 향상시킬 수 있다.
Description
본 발명은 인지질의 가수분해를 통한 식품 또는 약품용 콜린알포세레이트 조성물의 제조에 관한 것으로, 효소에 의한 인지질의 가수분해에 있어서 식용 가능한 유지(油脂)를 첨가함으로써 소요 반응을 촉진하고, 고순도 콜린알포세레이트 조성물의 생산성을 확보할 수 있도록 한 것이다.
콜린알포세레이트(choline alfoscerate)로 알려져 있는 알파글리세릴포스포릴콜린(L-α-glyceryl phosphoryl choline)은 인지질(燐脂質)인 포스파티딜콜린(phosphatidyl choline)에서 유래하며 두개의 아실기의 가수분해를 통하여 얻어진다.
알파글리세릴포스포릴콜린은 콜린신경계 전구체로서, 다양한 뇌기능 개선 효과를 발현하는 것으로 알려져 있으며, 그 예로서 뇌졸중 환자에 있어서의 학습 및 기억력 개선 효과와, 알츠하이머 환자에 있어서의 증상 호전 효과를 들 수 있다.
알파글리세릴포스포릴콜린 즉, 콜린알포세레이트는 상기와 같은 약리효과 뿐 아니라, 다양한 건강 증진 및 미용 효과 등을 나타내는 것으로 확인되고 있으며, 이에 건강 보조 식품 및 화장품 등 다양한 분야에 그 용도가 확장되고 있다.
콜린알포세레이트가 함유된 조성물의 제조 방법으로는 화학적 합성법 또는 효소를 활용한 정제법을 들 수 있는데, 전자의 제법은 합성 과정에서 다량의 독성 부산물 및 오염물이 배출될 뿐 아니라 완성품의 안전성 역시 담보할 수 없는 바, 식용 또는 약용 목적의 콜린알포세레이트 조성물의 제조에는 주로 효소 적용 분해 정제법이 적용되고 있다.
콜린알포세레이트 조성물의 제조에 있어서 원료로 활용될 수 있는 물질로서 자연계에서 일반적으로 존재하는 다양한 인지질이 적용될 수 있는데, 구체적인 예를 들면 대두 레시틴, 해바라기 레시틴, 쌀 레시틴 또는 이들 저순도 레시틴으로부터 정제된 탈지 레시틴, 분획 레시틴(fractionated lecithin) 또는 고순도 레시틴(purified lecithin)을 들 수 있다.
효소를 활용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조는 상기와 같은 원료 물질로서의 레시틴 즉, 기질(基質)로서의 인지질에서 지방산을 제거하는 공정이라 할 수 있으며, 상대적으로 온화한 반응 조건을 설정할 수 있을 뿐 아니라 유해 부산물이 산출되지 않는 장점이 있으나, 기질인 인지질이 물에 대하여 불용성이므로 적절한 효소 반응을 위한 조치가 요구되는데, 관련 종래기술로서 특허 제1995642호 및 특허 제1995643호를 들 수 있다.
특허 제1995642호 및 특허 제1995643호를 비롯한 종래의 효소 적용 콜린알포세레이트 조성물 제조방법은 유기용매인 헥산(hexane)을 반응매질로 적용하고, 반응촉매로서 고정화 리파제를 활용한 것으로, 전술한 인지질의 불용성 문제를 일정 수준 해결할 수 있으나, 다음과 같은 다양한 문제를 야기하였다.
우선, 유기용매인 헥산이 적용된다는 점에서 완성품에 있어서의 생체 독성을 배제할 수 없다.
또한, 반응 특성상 격렬한 교반이 필요하여 방폭 시설물 등 고도의 안전시설 구축이 요구되며, 반응 후 헥산 회수를 위한 용매 회수 설비 역시 필수적으로 요구된다.
특히, 효소의 안정성 부족 등으로 인하여 충분한 반응 효율을 확보할 수 없는 바, 생산성이 산업적 생산이 가능한 수준에 미달하는 심각한 문제점을 가진다.
본 발명은 전술한 문제점을 감안하여, 잔류 독성이 전무하고 생산성이 우수할 뿐 아니라, 유해 부산물 및 오염물의 배출이 미미한 친환경적인 콜린알포세레이트 조성물 제조가 가능하도록 창안된 것으로, 인지질의 가수분해가 수행되는 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법에 있어서, 기질인 인지질과 효소, 물 및 유지가 혼합되어 인지질의 가수분해가 수행됨으로써 반응액이 형성되는 반응단계와, 반응단계에서 형성된 반응액을 정제 및 농축하여 콜린알포세레이트 조성물을 형성하는 취출단계로 이루어짐을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 및 그 조성물이다.
또한, 상기 효소는 포스포리파제 A1, 포스포리파제 A2, 포스포리파제 B 및 리파제로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함함을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 및 그 조성물이다.
또한, 상기 취출단계는 반응액과 에탄올을 혼합하여 혼합액을 형성하는 혼합단계와, 혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하는 추출단계와, 추출액과 유지를 혼합 및 교반하고 정치하여 층분리한 한 후 에탄올 층을 재차 수거하여 정제액을 형성하는 정제단계와, 정제액을 농축하여 콜린알포세레이트 조성물 형성하는 농축단계로 이루어짐을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 및 그 조성물이다.
본 발명을 통하여, 식약용 콜린알포세레이트 조성물의 제조에 있어서 안전성 및 생산성을 획기적으로 향상시킬 수 있다.
특히, 공정 전반에 있어서 대규모 설비 또는 고도의 안전 시설을 요구하지 않는 바, 제조 시설 구축 비용 및 운용 비용을 절감할 수 있을 뿐 아니라, 유해 부산물 및 오염물의 제조 과정에서의 생성을 방지할 수 있다.
본 발명의 상세한 구성 및 수행 과정을 설명하면 다음과 같다.
본 발명은 인지질의 가수분해 효소인 포스포리파제(phospholipase) 및 리파제(lipase)가 물과 유지(油脂)의 계면에서 반응하는 특성을 보유한다는 사실에서 착안한 것으로, 효소 반응의 기질인 인지질이 효소 반응에 적합하고 적절한 수준의 계면을 형성할 수 있도록 처리함으로써, 유기용매 없이도, 왕성하고 안정적인 효소 반응이 가능한 것이다.
즉, 본 발명에서는 효소 반응액에 적절한 양의 식용유지를 투입하여 인지질의 효소 반응에 필요한 물 및 유지간 계면을 조성함으로써, 효소에 의한 인지질의 가수분해를 일층 촉진할 수 있도록 한 것이다.
이러한 본 발명은 기본적으로 인지질을 효소를 적용하여 가수분해하되, 반응 과정에 있어서 식용 가능한 유지를 첨가하는 것으로, 여기서 기질인 인지질로는 고순도 인지질로서의 포스파티딜콜린은 물론, 대두 레시틴, 난황 레시틴, 해바라기 레시틴, 옥수수 레시틴 및 쌀 레시틴 등이 적용될 수 있으며, 식용 유지 역시 대두유, 해바라기씨유, 옥수수유, 카놀라유, 면실유 및 포도씨유 등 일상적으로 섭취되는 다양한 식용유가 적용될 수 있다.
또한, 적용 효소로는 인지질을 가수분해하는 포스포리파제 A1, 포스포리파제 A2, 포스포리파제 B 또는 리파제가 단독 또는 혼합되어 적용될 수 있다.
이렇듯, 본 발명은 인지질의 가수분해가 수행되는 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법으로서, 기질인 인지질과 효소, 물 및 유지가 혼합되어 인지질의 가수분해가 수행됨으로써 반응액이 형성되는 반응단계로 개시된다.
반응단계는 인지질, 효소, 물 및 유지가 혼합되어 효소에 의한 인지질의 가수분해가 수행되는 단계로서, 전체 요소가 일시에 혼합된 후 반응될 수도 있고, 일단 인지질, 효소 및 물이 우선 혼합된 후, 유지가 첨가되어 반응되는 방식이 적용될 수도 있다.
또한, 온도 조절 및 교반이 가능한 용기에 상기 요소가 투입되어 반응이 진행될 수 있다.
반응단계가 완료되어 가수분해된 소화액인 반응액이 형성되면, 반응액을 정제 및 농축하여 콜린알포세레이트 조성물을 형성하는 취출단계가 수행됨으로써 본 발명의 조성물이 완성된다.
취출단계는 반응액으로부터 콜린알포세레이트 조성물 즉, 고순도 콜린알포세레이트 함유물을 취출하는 과정으로서, 콜린알포세레이트를 추출하는 용매로서 에탄올이 적용될 수 있으며, 층분리 등의 처리가 수행될 수 있다.
즉, 취출단계는 반응액과 에탄올을 혼합하여 혼합액을 형성하는 혼합단계와, 혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하는 추출단계와, 추출액과 유지를 혼합 및 교반하고 정치하여 층분리한 한 후 에탄올 층을 재차 수거하여 정제액을 형성하는 정제단계와, 정제액을 농축하여 콜린알포세레이트 조성물 형성하는 농축단계를 거쳐 수행될 수 있으며, 이로써 정제된 고순도의 콜린알포세레이트 조성물을 획득할 수 있다.
이하, 본 발명 제조 방법의 상세한 구성 및 수행 과정을 다양한 비교예 및 실시예를 통하여 설명하면 다음과 같다.
비교예 1. 고순도 인지질의 효소 반응 효율 확인
순도 90%의 포스파티딜콜린 10g과, 물 50㎖와, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 65%, 리소포스파티딜콜린(lyso-phosphatidyl choline) 20%, 지방산 및 기타로 확인되었다.
즉, 12시간의 반응 시간에도 불구하고 인지질 반응 효율은 30% 수준에 불과하였다.
비교예 2. 탈지 대두레시틴의 효소 반응 효율 확인
포스파티딜콜린 함량 22%의 탈지 대두레시틴 10g과, 물 50㎖와, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 9%, 리소포스파티딜콜린 3%, 지방산 및 기타로 확인되었다.
즉, 12시간의 반응 시간에도 불구하고 여전히 인지질 중 상당 부분이 반응되지 않고 잔존하였음을 확인할 수 있다.
고순도 인지질의 유지 적용 효소 반응 효율 확인
순도 90%의 포스파티딜콜린 10g과, 물 50㎖와, 대두유 30g과, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 0.2%, 리소포스파티딜콜린 0.5%, 지방산 및 기타로 확인되었다.
즉, 대두유를 첨가함으로써 대부분의 인지질이 가수분해되었음을 확인할 수 있었다.
탈지 대두레시틴의 유지 적용 효소 반응 효율 확인
포스파티딜콜린 함량 22%의 탈지 대두레시틴 10g과, 물 50㎖와, 대두유 30g과, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 0.1%, 리소포스파티딜콜린 0.1%, 지방산 및 기타로 확인되었다.
즉, 대두레시틴에 있어서도 대두유를 첨가함으로써 대부분의 인지질이 가수분해되었음을 확인할 수 있었다.
고순도 난황 인지질의 유지 적용 효소 반응 효율 확인
주식회사 두산 제조 정제 난황 인지질(DS PL95E) 25g을 100㎖의 에탄올에 용해하여 난황액을 형성하였다.
500g의 활성 알루미나와 1,200㎖의 에탄올을 혼합하여 유리컬럼에 장착한 후, 상기 난황액을 통과시키고 4,000㎖의 에탄올을 추가 용출하여 용출액을 형성하였다.
용출액을 감압 농축하여 고순도 난황 인지질 12g이 수득되었다.
고순도 난황 인지질 12g과, 물 50㎖와, 해바라기씨유 30g과, 500㎕의 포스포리파제 A1을 온도 조절이 가능한 효소 반응기에 투입하여 교반하면서 45℃에서 12시간 반응하여 반응액을 형성하였다.
반응액 0.5㎖를 취하여 클로로포름과 메탄올이 부피비 2 대 1로 혼합된 혼합용액으로 인지질을 추출한 후 건조하여 수득된 수득물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석하였다.
분석 결과 수득물내 인지질 조성은 포스파티딜콜린 0.1%, 리소포스파티딜콜린 0.3%, 지방산 및 기타로 확인되었다.
즉, 식용유지를 첨가함으로써 난황 인지질에 있어서도 대부분의 인지질이 가수분해되었음을 확인할 수 있었다.
고순도 인지질로 부터의 콜린알포세레이트 조성물 제조
실시예 1의 반응액에 에탄올 100㎖를 첨가하여 20분간 250RPM으로 교반하여여 혼합액을 형성하였다.
혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하였다.
추출액에 대두유 30㎖를 투입하여 교반한 후 정치하고 에탄올 층을 재차 수거함으로써 정제액을 형성하였다.
정제액을 건조하여 콜린알포세레이트 조성물 1.2g을 수득하였으며, 수득된 콜린알포세레이트 조성물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석한 결과 콜린알포세레이트 함량이 95%인 것으로 확인되었다.
탈지 대두레시틴으로 부터의 콜린알포세레이트 조성물 제조
실시예 2의 반응액에 에탄올 100㎖를 첨가하여 20분간 250RPM으로 교반하여여 혼합액을 형성하였다.
혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하였다.
추출액에 대두유 50㎖를 투입하여 교반한 후 정치하고 에탄올 층을 재차 수거하되, 에탄올 층 수거액에 재차 대두유 50㎖를 투입하여 교반한 후 정치하고 에탄올 층을 재차 수거함으로써 정제액을 형성하였다.
정제액에 0.5g의 활성탄을 투입하고, 교반하여 불순물을 흡착시킨 후 여과 및 건조하여 콜린알포세레이트 조성물 0.9g을 수득하였으며, 수득된 콜린알포세레이트 조성물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석한 결과 콜린알포세레이트 함량이 95%인 것으로 확인되었다.
고순도 난황 인지질로 부터의 콜린알포세레이트 조성물 제조
실시예 3의 반응액에 에탄올 100㎖를 첨가하여 30분간 200RPM으로 교반하여여 혼합액을 형성하였다.
혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하였다.
추출액에 해바라기씨유 30㎖를 투입하여 교반한 후 정치하고 에탄올 층을 재차 수거함으로써 정제액을 형성하였다.
정제액에 0.5g의 활성탄을 투입하고, 교반하여 불순물을 흡착시킨 후 여과 및 건조하여 콜린알포세레이트 조성물 1.8g을 수득하였으며, 수득된 콜린알포세레이트 조성물을 고속 액체 크로마토그래피로 분석한 결과 콜린알포세레이트 함량이 94%인 것으로 확인되었다.
전술한 비교예 및 실시예를 통하여도 확인할 수 있는 바와 같이, 대두유 또는 해바라기씨유 등의 식용유지를 첨가함으로써 인지질의 효소 가수분해 및 이를 통한 콜린알포세레이트 제조상 효율성을 극대화할 수 있다.
특히, 공정상 일체의 유기용매를 배제할 수 있어, 완성품의 안전성을 확보할 수 있으며, 유해 부산물 및 오염물의 배출을 최소화할 수 있음은 물론, 유기용매의 적용 및 회수에 필요한 복잡한 설비를 간소화할 수 있어, 제조비용을 절감할 수 있다.
Claims (4)
- 인지질의 가수분해가 수행되는 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법에 있어서,
기질인 인지질과 효소, 물 및 유지가 혼합되어 인지질의 가수분해가 수행됨으로써 반응액이 형성되되, 상기 기질인 인지질은 포스파티딜콜린, 탈지 대두레시틴 또는 난황 인지질이고, 상기 유지는 일상적으로 섭취되는 식용유인 반응단계와;
반응단계에서 형성된 반응액을 정제 및 농축하여 콜린알포세레이트 조성물을 형성하는 취출단계로 이루어짐을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법.
- 청구항 1에 있어서,
상기 효소는 포스포리파제 A1, 포스포리파제 A2, 포스포리파제 B 및 리파제로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함함을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법.
- 청구항 1에 있어서,
취출단계는 반응액과 에탄올을 혼합하여 혼합액을 형성하는 혼합단계와;
혼합액을 정치하여 층분리한 후 에탄올 층을 수거하여 추출액을 형성하는 추출단계와;
추출액과 유지를 혼합 및 교반하고 정치하여 층분리한 한 후 에탄올 층을 재차 수거하여 정제액을 형성하는 정제단계와;
정제액을 농축하여 콜린알포세레이트 조성물 형성하는 농축단계로 이루어짐을 특징으로 하는 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법.
- 삭제
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190144626A KR102433277B1 (ko) | 2019-11-12 | 2019-11-12 | 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020190144626A KR102433277B1 (ko) | 2019-11-12 | 2019-11-12 | 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20210057630A KR20210057630A (ko) | 2021-05-21 |
| KR102433277B1 true KR102433277B1 (ko) | 2022-08-31 |
Family
ID=76157721
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020190144626A KR102433277B1 (ko) | 2019-11-12 | 2019-11-12 | 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR102433277B1 (ko) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101995642B1 (ko) | 2017-12-28 | 2019-07-02 | 숙명여자대학교산학협력단 | 포스파티딜콜린으로부터 식품원료로 이용가능한 콜린알포세레이트의 제조방법 |
| KR101995643B1 (ko) | 2017-12-28 | 2019-07-02 | 숙명여자대학교산학협력단 | 레시틴으로부터 식품원료로 이용가능한 콜린알포세레이트의 제조방법 |
-
2019
- 2019-11-12 KR KR1020190144626A patent/KR102433277B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101995642B1 (ko) | 2017-12-28 | 2019-07-02 | 숙명여자대학교산학협력단 | 포스파티딜콜린으로부터 식품원료로 이용가능한 콜린알포세레이트의 제조방법 |
| KR101995643B1 (ko) | 2017-12-28 | 2019-07-02 | 숙명여자대학교산학협력단 | 레시틴으로부터 식품원료로 이용가능한 콜린알포세레이트의 제조방법 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Biotechnology & Biotechnological Equipment, Vol. 32, pp. 968-973 (2018.)* |
| Biotechnology Progress, Vol. 36, pp. e1910 (1-9) (2019.10.10.) |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20210057630A (ko) | 2021-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8658401B2 (en) | Method for preparing high purity L-α glycerylphosphorylcholine | |
| CN1084790C (zh) | 生产植物溶血卵磷脂的方法 | |
| JP2000333689A (ja) | ホスファチジルセリンの製造方法 | |
| EP1890706B1 (en) | Process for the preparation and isolation of phosphatides | |
| KR100331932B1 (ko) | 리소포스파티딜에탄올아민의 제조방법 | |
| CN110144369A (zh) | 一种制备高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法 | |
| KR102433277B1 (ko) | 유지를 이용한 콜린알포세레이트 조성물의 제조 방법 | |
| CN105087700A (zh) | 高含量磷脂酰丝氨酸的制备方法 | |
| EP1310563B1 (en) | Process for the production of phospholipids | |
| JP2002253288A (ja) | ホスファチドの製造と使用 | |
| CN104818303A (zh) | 一种酶法制备甘油磷酸胆碱的方法 | |
| JP3032357B2 (ja) | リン脂質画分の分画精製方法 | |
| JPS63123389A (ja) | 酵素法リン脂質−ｄ−セリン誘導体の製造法 | |
| KR102531373B1 (ko) | 난황 레시틴으로부터 콜린 알포세레이트를 제조하는 방법 | |
| JP2008061546A (ja) | ホスファチジルイノシトールの製造方法 | |
| CN108486179B (zh) | 一种固定化磷脂酶d连续催化制备磷脂酸的方法 | |
| TWI591181B (zh) | Method and composition for producing sodium cyclic phosphatidic acid | |
| JPS6253155B2 (ko) | ||
| CN109232640B (zh) | 一种甘油磷脂酰胆碱的制备方法 | |
| KR20230001330A (ko) | 크릴 오일의 제조방법 | |
| JP2010159383A (ja) | 複合脂質の分離法 | |
| KR101055094B1 (ko) | 양배추 포스포리파아제 d에 의한 난황 인지질로부터 포스파티딜세린의 생합성 방법 | |
| CN118203092A (zh) | 一种富含甘油磷酰胆碱脱油蛋黄粉的制备方法 | |
| KR100450308B1 (ko) | 난황에서 포스파티딜콜린 결정화 방법 | |
| CN108315367A (zh) | 一种两步酶解法生产磷酸肌酸的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20191112 |
|
| PA0201 | Request for examination | ||
| PN2301 | Change of applicant |
Patent event date: 20200224 Comment text: Notification of Change of Applicant Patent event code: PN23011R01D |
|
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| PE0902 | Notice of grounds for rejection |
Comment text: Notification of reason for refusal Patent event date: 20210510 Patent event code: PE09021S01D |
|
| PG1501 | Laying open of application | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20211207 |
|
| PN2301 | Change of applicant |
Patent event date: 20220802 Comment text: Notification of Change of Applicant Patent event code: PN23011R01D |
|
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20220826 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20220826 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration |