KR102439576B1 - 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 제비집의 시알산추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물을 제공한다.
본 발명의 실시 예에 따르면, ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리 정제 방법으로 제비집에 함유되어 있는 뇌기능 개선 물질인 시알산을 효율적으로 추출하고, 상기 방법으로 추출된 시알산 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 뇌기능을 개선시키는 효과가 있다. 또한, 제비집으로부터 추출된 시알산 추출물에 마이셀 나노 입자의 영양전달체를 부가하여 시알산 추출물의 체내흡수율을 높임으로써 뇌기능 개선효과를 증대시키는 효과가 있다.
본 발명의 실시 예에 따르면, ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리 정제 방법으로 제비집에 함유되어 있는 뇌기능 개선 물질인 시알산을 효율적으로 추출하고, 상기 방법으로 추출된 시알산 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 뇌기능을 개선시키는 효과가 있다. 또한, 제비집으로부터 추출된 시알산 추출물에 마이셀 나노 입자의 영양전달체를 부가하여 시알산 추출물의 체내흡수율을 높임으로써 뇌기능 개선효과를 증대시키는 효과가 있다.
Description
본 발명은 뇌기능을 개선하기 위해 사용되는 영양전달체 조성물에 관한 것으로, 좀 더 상세하게는 제비집에서 추출된 시알산 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물에 관한 것이다.
우리나라는 급격한 고령화 사회를 맞고 있으며, 그 때문에 뇌혈관 장해 또는 치매의 증가가 예상되고 있다. 이들 뇌질환의 예방 또는 치료를 위해 뇌순환, 대사개선약 또는 항치매약 등의 뇌기능 개선성을 가진 의약의 연구, 개발이 진행되고 있다.
최근, 학습능력, 기억력 등의 뇌 기능을 높이는 물질의 탐색이 다방면에 걸쳐 연구되고 있다. 또한, 예방의 관점에서 식생활 등을 통해 섭취할 수 있는 뇌기능을 개선하는 물질도 필요하다.
제비집은 바다제비가 분비한 타액과 깃털 등으로 만든 둥지, 즉 제비집으로 중국 명나라 시기부터 먹어오던 전통식품이다. 제비집에는 시알산(sialic acid)이 함유되어 있으며 시알산은 cholinesterase(AChE), butyrylcholinesterase(BuChE)의 저해제(inhibitor)로 작용하여 알츠하이머 치매의 치료에 유효한 것으로 규명되었다. 제비집이 고급 중국 요리점 및 중식당 등과 온라인 유통 및 홈쇼핑 등을 통해 알려지면서 여러 가지 가공식품 및 식재료로서 관심과 소비가 급격히 증가하고 있으나 대부분 단순 건조물 및 가공품이 대부분이어서 기능성 원료로서 제비집 추출액을 제조함에 있어서 이들 기능성 물질 즉, 뇌기능 개선용 물질을 효율적으로 추출하는 추출법에 대한 개발이 절실히 필요하고, 이러한 추출법으로 추출된 뇌기능 개선용 물질을 포함한 조성물의 개발이 절실히 요구되고 있다.
본 발명은 종래의 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서,
본 발명의 목적은 ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리 정제 방법으로 제비집에 함유되어 있는 뇌기능 개선 물질인 시알산을 효율적으로 추출하고, 상기 방법으로 추출된 시알산 추출물을 유효성분으로 포함하는 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 제비집으로부터 추출된 시알산 추출물에 마이셀 나노 입자의 영양전달체를 부가하여 시알산 추출물의 체내흡수율을 높임으로써 뇌기능 개선효과를 증대시키는 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물을 제공하는 데 있다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해 제공되는 본 발명의 일실시 예에 따른 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물은 제비집의 시알산추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.
여기서, 상기 시알산추출물은 제비집을 물, 알칼리 이온수 또는 유기용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매를 투입하여 추출하는 단계; 상기 추출된 용매에 비극성 고분자 비드를 투입하여 시알산(sialic acid)를 흡착하는 단계; 상기 시알산이 흡착된 비극성 고분자 비드를 분리하고 이에 탈착제를 투입하여 시알산을 탈착하는 단계; 상기 탈착된 시알산을 고형화하는 단계;를 포함하는 ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리정제 방법으로 추출되는 것을 특징으로 한다.
그리고, 상기 제비집의 시알산 추출물에는 체내흡수율을 높이는 영양전달체가 더 포함되는 것을 특징으로 하며, 상기 영양전달체는 마이셀 나노입자인 것을 특징으로 한다.
또한, 상기 제비집의 시알산 추출물에는 뇌기능 개선 물질인 알파-지피씨, 대두레시틴, DHA, 포스파티딜세린, 브로컬리, 참당귀, 수선화, 용안육, 단삼, 맥문동, 천마, 은행나무잎 엑기스, 로얄제리, 영지, 고려인삼, 클로렐라, 현미흑초, 프로폴리스, 세사민, 우콘 중 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 것이 더 포함되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 실시 예에 따르면, ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리 정제 방법으로 제비집에 함유되어 있는 뇌기능 개선 물질인 시알산을 효율적으로 추출하고, 상기 방법으로 추출된 시알산 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 뇌기능을 개선시키는 효과가 있다.
또한, 제비집으로부터 추출된 시알산 추출물에 마이셀 나노 입자의 영양전달체를 부가하여 시알산 추출물의 체내흡수율을 높임으로써 뇌기능 개선효과를 증대시키는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물에서 ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리 정제 방법을 도시한 공정도.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물에서 담즙산 및 시알산을 포함하는 속효성 마이셀 나노입자를 설명하기 위한 개념도.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물에서 AChE 활성에 대한 제비집 추출물과 시알산의 효능을 비교한 그래프.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물에서 헤마부위의 신경세포의 퇴화정도를 관찰하기 위해 아밀로이드 베타 단백질을 뇌실 내 처리한 군과 아무것도 처리하지 않은 군의 세포 퇴화 비교 이미지.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물에서 담즙산 및 시알산을 포함하는 속효성 마이셀 나노입자를 설명하기 위한 개념도.
도 3은 본 발명의 일실시예에 따른 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물에서 AChE 활성에 대한 제비집 추출물과 시알산의 효능을 비교한 그래프.
도 4는 본 발명의 일실시예에 따른 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물에서 헤마부위의 신경세포의 퇴화정도를 관찰하기 위해 아밀로이드 베타 단백질을 뇌실 내 처리한 군과 아무것도 처리하지 않은 군의 세포 퇴화 비교 이미지.
이하의 본 발명에 대한 상세한 설명들은 본 발명이 실시될 수 있는 실시 예이고 해당 실시 예에 대한 예시로써 도시된 첨부 도면을 참조한다. 이들 실시 예는 당업자가 본 발명을 실시하기에 충분하도록 상세히 설명된다. 본 발명의 다양한 실시 예는 서로 다르지만 상호 배타적일 필요는 없음이 이해되어야 한다. 예를 들어, 여기에 기재되어 있는 특정 형상, 구조 및 특성은 일실시 예에 관련하여 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 다른 실시 예로 구현될 수 있다. 또한 각각의 기재된 실시 예 내의 개별 구성요소의 위치 또는 배치는 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 변경될 수 있음이 이해되어야 한다.
따라서 후술되는 상세한 설명은 한정적인 의미로서 취하려는 것이 아니며, 본 발명의 범위는 적절하게 설명된다면 그 청구항들이 주장하는 것과 균등한 모든 범위와 더불어 첨부된 청구항에 의해서만 한정된다. 도면에서 유사한 참조부호는 여러 측면에 걸쳐서 동일하거나 유사한 기능을 지칭한다.
본 발명에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.
발명의 전체에서 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한, 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있음을 의미한다. 또한 명세서에 기재된 "…부", "…모듈" 등의 용어는 적어도 하나의 기능이나 동작을 처리하는 단위를 의미하며, 이는 하드웨어 또는 소프트웨어로 구현되거나 하드웨어와 소프트웨어의 결합으로 구현될 수 있다.
본 발명의 일실시 예에 따른 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물은 제비집에 함유되어 있는 시알산 추출물을 유효성분으로 한다.
여기서, 제비집은 제비집 자체 또는 제비집의 작은 조각 또는 제비집을 건조하여 분말화한 것 또는 제비집 추출액 또는 제비집 농축액 또는 제비집 액기스 분말 또는 이들의 현탁액 등이 원료로 사용될 수 있다.
이러한 제비집에 함유되어 있는 성분들은 시알산 유도체, 예를 들어 뉴라민산의 N-아실체와 그 유도체, N-아세틸뉴라민산(Neu5Ac)과 N-글리콜뉴라민산(Neu5Gc), 그리고 히드록실기가 아세틸기, 황산기, 인산기 등으로 변형된 유도체 등이 있다.
그리고, 제비집에 함유되는 시알산은 하기의 일반식으로 표시되는 뉴라민산 골격을 갖는다.
[화학식 1]
이러한 제비집에 함유되어 있는 뇌기능 개선 물질인 시알산은 ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리정제 방법으로 추출된다.
도 1에 도시된 바와 같이 ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리정제 방법은 먼저, 제비집을 물, 알칼리 이온수 또는 유기용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매를 투입하여 추출한다.
그리고, 추출된 용매에 비극성 고분자 비드를 투입하여 시알산(sialic acid)를 흡착한다.
이어, 시알산이 흡착된 비극성 고분자 비드를 분리한 후, 이에 탈착제를 투입하여 시알산을 탈착한다.
그리고, 탈착된 시알산을 고형화 한다.
이때, 시알산을 대량으로 함유한 제비집 추출물을 얻고 싶은 경우에는 칼럼으로서 SEPHADEXLH-20(Amersham pharmacia Biotech AB사 제조 : Cat17-0090-01)을 이용하는 것이 바람직하다.
이렇게 하여 얻어진 추출액의 HPLC(고속액체 크로마토그래피)에 의한 크로마토그램을 표준품의 시알산 크로마토그램과 비교한 바, 추출액에는 시알산 유도체가 함유되어 있는 것이 확인되었다.
이에 더하여, 제비집의 시알산 추출물에는 체내흡수율을 높이는 영양전달체가 포함될 수 있다.
영양전달체는(Nutrient Delivery System)는 식품업계에서 사용하는 용어이며, 시알산과 같은 영양물질을 효과적으로 필요한 장기로 전달해주는 시스템이다. 비슷한 예로는 제약업계에서는 약물전달체(Drug Delivery System), 화장품업계에서는 피부전달체(Transdermal Delivery System)로 특정 약물이나 화장품 소재를 체내에 흡수 및 전달해 주는 전달 시스템이 있다.
이처럼 영양전달체는 대부분의 영양물질이 체내에 흡수되어 특정의 장기조직이나 세포로 용이하게 전달되지 않아 장기에 그 효능을 최대한 전달하기 어렵다는 것을 고려하여 영양물질의 체내 흡수율을 높이는 역할을 한다.
도 2에 도시된 바와 같이, 영양전달체는 담즙산을 이용 시 체내 흡수율 및 효능이 우수한 속효성 마이셀 나노 입자이다. 여기서, 담즙산과 시알산은 도 2에 도시된 바와 같이 연결되어 존재한다. 그리고, 마이셀 나노입자는 100 내지 200 nm의 크기를 가지며, 바람직하게는 110 내지 190 nm의 크기를 갖고, 더욱 바람직하게는 120 내지 180 nm의 크기를 갖는다. 상기의 크기를 가지는 영양전달체인 마이셀 나노 입자는 체내 조직 투과 및 흡수가 용이하여 시알산의 체내 흡수율을 높인다. 이로 인하여 시알산의 효능인 뇌기능 개선 효과를 증대시킨다.
또한, 영양전달체인 마이셀 나노 입자는 계면활성제로 리조레시틴을 포함함으로써 높은 조직 투과 및 흡수율을 갖게 된다.
이에 더하여, 제비집의 시알산 추출물에는 뇌기능 개선 물질인 알파-지피씨, 대두레시틴, DHA, 포스파티딜세린, 브로컬리, 참당귀, 수선화, 용안육, 단삼, 맥문동, 천마, 은행나무잎 엑기스, 로얄제리, 영지, 고려인삼, 클로렐라, 현미흑초, 프로폴리스, 세사민, 우콘 중 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 것이 더 포함될 수 있다.
또한, 시알산의 효과를 손상시키지 않은 범위 내에서 부형제, 감미료, 산미료, 증점제, 향료, 색소, 유화제, 및 기타 의약품이나 식품 등으로 일반에 이용되고 있는 첨가제나 소재를 포함할 수도 있다.
[실시예 1]
이하, 제조예, 제제예, 시험예 등을 들어 본 발명을 더욱 상세히 구체적으로 설명하는데, 본 발명은 이들에 한정되는 것이 아니다. 특히, 여기서는 본 발명의 제비집을 발효와 비발효로 나누지 않고 실시예를 나타내고 있는데, 제비집을 발효하여 사용할 수도 있다.
사용한 제비집은 네스투랄(Nastural Ltd, Thailand)사가 제조한 제왕의 아침(The King's Morning)이라는 상품명으로 판매되고 있는 제비집 엑기스로 만들었다. 이 제비집 엑기스는 표 1에 나타내는 바와 같은 시알산을 갖고 있었다. 또한, 유용성분은 콜라겐, 시알산, 폴리페놀, 칼슘, 철분, 식이섬유이었으며 결합당은 갈락토스와 아라비노스 뿐이었다. 사용한 제비집은 아세틸계 42.5%, 케토계 27.5%로 아세틸계의 시알산이 많이 포함되어 있었다.
| 명칭 | 용출시간(분) | 범위(%) | 함량 |
| 아세틸-갈락토사이드 | 8.75 | 13.72 | 고 |
| 아세틸-글루코사이드 | 10.84 | 15.23 | 고 |
| 아세틸-아라비노사이드 | 12.53 | 12.72 | 고 |
| 케토-갈락토사이드 | 15.17 | 5.17 | 소 |
| 케토-글루코사이드 | 17.52 | 6.83 | 중 |
| 케토-아라비노사이드 | 20.38 | 3.52 | 소 |
1. 제비집 추출물과 시알산 추출액의 제조 및 영양전달체 제조(제조예 1)
제비집을 정제수와 함께 분쇄하고 추출하여 얻어진 제비집 추출물을 Sep-Pac Plus C18 Cartridge 칼럼(Waters사 제조)에 흡착시키고, 멸균수로 세척한 후, 1% HCI-메탄올 용액으로 용출시킴으로써 제비집 중의 시알산 추출액을 분리했다. 이렇게 하여 얻어진 시알산 추출액을 온도 37℃에서 증발기에 의해 농축한 후, pH를 7.0으로 조정하고, DMSO(디메틸술폭시드)에 용해시키고, 이어 건조시켜 제비집 추출물과 시알산 추출액을 얻었다. 또한, 시알산을 대량으로 함유한 제비집 추출물을 얻고 싶은 경우에는 칼럼으로서 SEPHADEXLH-20(Amersham pharmacia Biotech AB사 제품: Cat17-0090-01)을 이용한 ABT공법으로 제조할 수도 있다.
영양전달체 즉, 마이셀 나노입자는 타우로콜산(taurocholic aicd) 5.78g을 25 ml 메탄올 (메탄올 85 : 물 15의 부피비)에 혼합하여 430mM의 타우로콜산 용액을 만들었다. 상기 타우로콜산 용액 2.25mL에 레시틴 용액 1.8mL(클로로폼에 100 mg/mL로 용해된 레시틴 용액)를 첨가하여 1차 용액을 제조하였다. 제조된 상기 1차 용액을 테플론 캡을 가진 유리 튜브에 넣고 55℃ water bath에서 5시간 동안 온열 처리 하였다. 그리고 끈적거리고 걸쭉해져 누르스름해질 때까지 상기 1차 용액을 질소 가스를 이용하여 증발시켰다. 증발된 잔여물을 2시간 동안 -70 ℃에서 냉동시키고 튜브를 열어 9시간 이상 감압 하에서 동결건조 시키고, 다시 PBS에서 용해시켜 4시간 동안 56℃에서 온열처리 하였다. 온열처리가 완료된 후 용액을 무혈청 배지에서 1:10으로 희석시키고(부피 기준) 0.45um 필터를 이용하여 여과하여 시알산-담즙산 콘쥬게이트된 마이셀 나노 입자를 제조하였다
2. 시험식의 제조
이하의 처방에 기초하여 관용적인 방법에 따라 배합성분을 연질 캅셀(OVAL No.6) 속에 채워 시험식으로 제제예 1 및 플라시보식을 제조했다.
| 배합성분 | 제제예 1(mg) | 플라보식(mg) |
| 제조예1(영양전달체) | 130.5 | 0 |
| 유채오일 | 195.3 | 325.8 |
| 식물성 미트로우 | 34.2 | 34.2 |
| 합계 | 360.0 | 360.0 |
캅셀의 피막은 젤라틴 분말, 글리세린, 이산화티타늄, 및 카라멜 색소로 이루어진다.
3. 피험자
시험실시 전에 생활습관 앙케이트 조사를 한 50~70세 남녀에서, 이하의 제외 기준에 해당하지 않는 자를 피험자로 했다.
제외기준 :
a) 이미 제비집을 상용하고 있는 자
b) 제비집을 주성분으로 하는 의약품 또는 건강보조식품을 상용하고 있는 자
c) 뇌기능 또는 혈액 순환에 영향을 주는 의약품 또는 건강보조식품을 섭취하고 있는 자
d) 당뇨병, 또는 뇌기능, 혈액 순환, 소화기, 췌장, 간장 혹은 신장 등에 심각한 질환을 갖고 있는 자
e) 본 시험 개시 시 다른 임상시험에 참가중인 자
f) 특정 알레르기(제비집을 포함)가 있는 자
g) 생활습관 앙케이트 조사의 결과에서, 피험자로서 부적합하다고 판단된 자(예를 들어, 피험식 조성중인 성분에서 알레르기를 일으킨 적인 있는 자, 극단적인 음주경향이 있는 자 등)
h) 색각 이상 또는 색각 장해가 있는 자
i) 기타, 시험담당 의사가 부적합하다고 판단한 자
4. 시험 스케줄
시험은 이중맹검 평행군 간 비교로 수행했다.
우선, 상기 피험자를 시험기간 첫날(시험 첫째날)에 내원시켜 문진, 신체계측, 및 뇌기능 검사 1 및 2를 했다.
이어 이들 피험자를 시험군 및 플라시보군의 2군에, 각각 30명씩을 무작위로 분할하여, 시험식의 섭취를 개시시켰다.
시험군의 피험자에게는 제제예 1을, 플라시보군의 피험자에게는 플라시보식을, 각각 매일 1회, 2캅셀, 12주간 섭취하게 했다. 또한, 섭식 중에는 피험자에게 일지도 쓰게 했다.
섭식을 개시하고 나서 4주 후(시험 28일째), 8주후(시험 56일째), 및 12주후(시험 84일째)에 문진, 신체계측, 및 뇌기능 검사 2를 각각 수행했다.
5. 검사항목
본 시험에서는 문진, 신체계측, 및 뇌기능 검사를 했다. 각 검사 방법은 이하와 같았다. 또, 각 검사에서 얻어진 값은 평균값 ㅁ 표준오차로 나타냈다.
a) 문진
자각증상 및 타각 증상의 유무를 문진했다.
b) 신체계측
신장, 체중, 체지방, 혈압, 맥박수, 및 시력을 측정했다.
c) 뇌기능 검사
뇌기능 검사로서, 이하와 같은 뇌기능 검사 1 및 2를 했다. 검사는 공복 상태에서 했다. 또, 끽연자에 대해서는 검사를 마칠 때까지는 금연시켰다.
뇌기능 검사 1 : 개정 하세가와식 간이지능평가 스케일(HDS-R)로 검사했다.
뇌기능 검사 2 : 단어의 상기시험 및 스트로프 테스트(Stroop test)로 검사했다. 각 시험 모두 이하와 같이 수행했다.
(1) 단어의 상기 시험
"당신이 알고 있는 동물 이름을 되도록 많이 말해 주십시오"라고 피험자에게 알려주고, 첫번째 동물 이름이 거론되고나서 60초 이내에 열거할 수 있는 동물의 이름을 기재했다. 중복된 것은 제외하고 열거된 동물 이름의 수를 기록하고, 상기수로 했다.
첫번째 동물이 좀처럼 생각나지 않을 때에는, "예를 들어, 개가 동물 이름인데요, 그 밖에는 어떤 것이 있습니까?"라고 피험자를 유도했다. 이 유도 후에도 생각나지 않고 30초가 경과했다면, 검사를 중지하고 상기수를 0으로 했다.
동물은 포유류에 한정되지 않고 파충류, 조류, 어류 등의 명칭도 상기수에 더했다.
마찬가지로 야채 및 "아"로 시작되는 말에 대해서도 각각 열거시키고, 이들의 상기수도 기록했다.
또한, 이들 동물, 야채 및 "아"로 시작되는 말 각각의 상기수를 총계하고, 이것을 총상기수로 했다.
(2) 스트로프 테스트 :
"적" "청" "흑"의 3종류의 색의 70문자가 무작위로 쓰여져 있는 문자를 읽는 시험(단계 1),
"적" "청" "흑"의 3종류의 색 70개를 읽는 시험(단계 2), 및 "적" "청" "흑"으로 기입된 70문자를 "적" "청" "흑"의 3종류로 무작위로 색분류하고, 그 문자를 읽는 시험(단계 3) 및 그 색을 읽는 시험(단계 4)의 총 4종류의 시험을 실시하고, 읽는데 필요한 초수를 기록했다.
a) 일지
시험식의 섭취상황, 자각증상, 및 다른 의약품의 복용상황을 피험자에게 기재하게 했다.
6. 시험 결과
a) 피험자의 배경
플라시보군 및 시험군에서, 각각 25명 및 25명의 피험자(계50명)가 시험에 참가했는데, 탈락, 중지한 자가 없었다. 시험에 참가한 피험자의 배경을 표 3에 나타냈다. 연령, 성별, 및 HDS-R에 의한 점수에서 군 사이에 불균형은 보이지 않았다
(P>0.05). 또한, 통계분석은 분산분석(ANOVA)으로 했다.
| 군 | 플라시보군 | 시험군 | |
| 성별 | 남 | 12 | 12 |
| 여 | 13 | 13 | |
| 평균연령(세) | 60.5 ± 1.25 | 60.3 ± 1.27 | |
| HDS-R에 의한 평균점수 | 28.5 ± 0.23 | 29.5 ± 0.25 | |
값 : 평균값 ± 표준오차
b) 유효성
시험 첫째날, 28일째. 56일째, 및 84일째의 피험자의 뇌기능 검사 2의 측정값에서 제제예 1의 뇌기능에 대한 유효성을 평가했다.
통계 해석은 동일군 내에서 시험 첫날과, 시험 28일째, 56일째, 및 84일째를 비교하는 경우에는 군내의 대응하는 t검사에 의해 검정했다. 유의 수준은 양측 5%로 했다.
c) 뇌기능 검사
(1) 단어의 상기 시험
시험군에서는 동물, 야채, 및 "아"로 시작되는 말의 상기수 및 총상기수가 섭취전보다 증가했는데(표 4), 플라시보군에서는 증가가 나타나지 않았다.
(2) 스트로프 테스트
시험군에서는 단계 1∼4의 각 단계에서 읽는데 필요로 한 초수가 감소했는데(표 5), 플라시보군에서는 감소가 나타나지 않았다.
이상과 같이, 플라시보군에서는 효과는 명확히 인정할 수 없으며, 제제예 1의 뇌기능 개선 효과는 분명했다.
| 측정항목 | 시험 첫째날 | 시험 4주차 | 시험 8주차 | 시험 12주차 |
| 야채 | 17.36 ± 0.53 | 17.79 ± 0.67 | 19.23 ± 0.69 | 21.37 ± 0.68 |
| "아"로 시작되는 말 | 12.86 ± 0.75 | 15.68 ± 0.34 | 16.87 ± 0.85 | 18.2 1± 0.85 |
| 동물 | 19.33 ± 1.22 | 23.67 ± 0.93 | 22.78 ± 1.17 | 22.25 ± 1.15 |
| 총상기수 | 49.55 ± 2.50 | 57.14 ± 1.94 | 58.88 ± 2.71 | 61.83 ± 2.68 |
단위 : 개
값 : 평균값 ± 표준오차
| 측정항목 | 시험 첫째날 | 시험 4주차 | 시험 8주차 | 시험 12주차 |
| 1 단계 | 32.89 ± 1.28 | 31.92 ± 1.25* | 32.22 ± 1.21 | 30.75 ± 1.32 |
| 2 단계 | 35.73 ± 1.36 | 33.45 ± 1.37 | 36.72 ± 1.38 | 35.21 ± 1.28 |
| 3 단계 | 42.18 ± 1.25 | 38.58 ± 1.56 | 40.35 ± 1.69 | 37.87 ± 1.35 |
| 4 단계 | 60.17 ± 2.19 | 55.38 ± 2.51 | 56.39 ± 2.17 | 53.86 ± 2.17 |
단위 : 초
값 : 평균값 ± 표준오차
단계 1 : 문자를 읽는데 필요한 초수, 단계 2 : 색을 읽는데 필요한 초수, 단계 3 : 색칠된 글자를 읽는데 필요한 초수, 단계 4 : 색칠된 글자색을 읽는데 필요한 초수를 각각 나타낸다.
d) 안전성
체중, 혈압 및 맥박에 이상은 없었다. 일지에도 특별히 이상을 나타내는 소견은 없었다. 또, 본 시험기간 중에 시험식과 관련된 유해 사항은 볼 수 없었다.
이상에서, 제제에 1은 안전성이 있다라고 할 수 있었다.
[실시예 2]
1. AChE 활성에 대한 제비집 추출물과 시알산의 효능 비교
제비집 추출물과 시알산을 이용하여 AChE 활성에 대한 비교 실험을 다음과 같이 진행하였다. 실험동물로 5주령의 수컷 ICR 마우스(Orient Bio, 대한민국)를 구입하여 일주일의 적응기간을 유지하였다. 생체 내 AChE 활성 억제 효과를 비교하기 위하여 대조군(Donepezil 1.0mg/kg) 및 시알산(200mg/kg)과 제비집 추출물(50 mg/kg)을 각각의 마우스(각 군당 3마리)에 1회 경구 투여하였다. 각각의 물질을 투여한 후 6시간째에 해마를 분리한 후 1 M 인산 완충용액(pH 8.0)을 이용하여 균질화 한 후 균질액을 획득하였다. 획득한 균질액은 Amplex red assay kit(Molecular probe, USA)를 이용하여 생체 내 AChE 활성을 측정하였다. 그 결과, 제비집 추출물의 경우 AChE 활성 억제 효과가 미미한 반면에 시알산의 경우 약 71.5%의 AChE 활성 억제효과를 관찰하였다(도 3참조).
2. 아밀로이드 베타 단백질 유도 치매 래트 모델에서 해마 부위의 조직학적 검사
행동학적 검사가 끝난 래트는 다이에틸 에스터로 마취한 뒤 복강을 열어 심장을 통하여 염수로 관류 하였다. 이후 뇌를 적출하여 10% 중성의 완충용 포르말린에 고정시킨 뒤 헤마톡실린&에오신 염색을 통해 해마 부위의 신경 세포의 퇴화 정도를 관찰하였다. 그 결과, 아밀로이드 베타 단백질을 뇌실 내 처리한 군을 보면 아무것도 처리하지 않은 군에 비하여 해마의 치상회(dentate gyrus) 부위의 기억과 관련된 피라미드 세포(pyramidal cell)의 퇴화가 관찰되었다. 시알산을 200 mg/kg 농도로 4주간 투여한 군에서는 그 손상 정도가 약하게 나타났다(도 4참조).
이와 같이 본 발명은 뇌기능 장해의 예방 및 치료에 유용하다. 여기서, 뇌기능 장해는 뇌혈관성 치매, 알츠하이머형 치매 및 양자의 혼합형 등의 치매증; 건망증 또는 기억상실 등의 기억력 저하 ; 인지력 저하 ; 학습능력 저하 ; 메니에르증 및 지주막하출혈(수막 졸증), 뇌출혈, 뇌혈전, 뇌경색, 및 뇌부종 등의 뇌혈관 장해의 후유증(휴유증으로 인한 의식장해, 운동장해 및 언어장해, 구음장해, 실어증, 감정장해, 사고장해, 감각장해, 기억장해, 및 자세이상) 등을 들 수 있다.
또한, 본 발명은 알츠하이머형 치매; 메니에르증; 및 지주막하출혈, 뇌출혈 및 뇌경색의 후유증의 예방 및 치료에 유용하다.
또한, 본 발명은 뇌기능 장해의 예방 및 치료라는 목적으로 사용할 뿐 아니라, 건강한 사람의 학습능력, 기억력 또는 반사반응능력 등의 뇌기능을 더욱 향상시키는 것을 목적으로 사용할 수도 있다.
또한, 본 발명은 식품 또는 동물용 사료로, 예를 들어, 건강식품, 기능성 식품, 건강보조식품, 특정 보건용 식품, 미용식품, 또는 영양보조식품(서플리먼트)으로서 사용할 수 있다. 이들 식품 및 동물용 사료는 예를 들어, 차 및 쥬스 등의 음료수 ; 및 아이스크림, 젤리, 엿, 쵸콜렛, 및 츄잉껌 등의 형태일 수도 있다. 또한, 액제, 분말제, 과립제, 캅셀제, 또는 정제의 형태일 수도 있다. 여기서, 동물용 사료의 동물에는 애완동물 축산동물 또는 동물원 등에서 사육되고 있는 동물을 포함하는, 부종의 예방 또는 치료를 필요로 하는 모든 동물이 포함된다.
또한, 본 발명은 의약품 또는 의약부외품으로서 사용할 수 있다. 이들 의약품 또는 의약부외품은 예를 들어, 산제, 정제, 코팅정, 당의정, 경질 혹은 연질 젤라틴 캅셀제, 액제, 유제, 또는 현탁제의 형태로 경구에 투여할 수 있는데, 예를 들어, 좌제의 형태로 직장으로, 예를 들어, 주사제 또는 윤액(輪液)의 형태로 ; 예를 들어, 연고, 크림제, 겔제, 또는 액제의 형태로 국소적 또는 경피로 비경구적으로 투여할 수도 있다. 바람직한 것은 경구투여다.
또한, 본 발명은 정제의 형태로 이용하는 경우에, 약학적 또는 식품학적으로 인용된 다양한 담체를 이용할 수 있고, 유당, 포도당 등의 부형제, 물, 에탄올 등의 결합제, 한천말, 건조전분 등의 붕해제, 스테아린, 카카오버터 등의 붕괴억제제, 카오린, 벤토나이트 등의 흡착제, 라우릴황산나트륨 등의 흡수촉진제, 글리세린, 전분 등의 보습제, 붕산말, 폴리에틸렌글리콜 등의 활택제 등을 예시할 수 있다.
또한, 본 발명의 섭취량은 특별히 제한되지 않지만, 제형, 및 사용자 혹은 환자 등의 섭취자 또는 섭취동물의 연령, 체중 및 증상에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 유효성분량으로 1일당 섭취자 또는 섭취동물의 체중 1kg에 대해 시알산량으로 0.3∼5mg, 바람직하게는 0.35∼3mg, 더욱 바람직하게는 0.35∼1.5mg을 경구 섭취하는 것이 뛰어난 뇌기능 개선효과를 얻을 수 있으므로 바람직하다. 또한. 섭취기간은 섭취자 또는 섭취동물의 연령, 증상에 따라 임의로 정할 수 있다.
이와 같이 본 발명은 ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리 정제 방법으로 제비집에 함유되어 있는 뇌기능 개선 물질인 시알산을 효율적으로 추출하고, 상기 방법으로 추출된 시알산 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 뇌기능의 개선은 물론 뇌기능 장해의 예방 및 치료에 유용하다. 또한, 제비집으로부터 추출된 시알산 추출물에 마이셀 나노 입자의 영양전달체를 부가하여 시알산 추출물의 체내흡수율을 높임으로써 뇌기능의 개선 효과 및 뇌기능 장해의 예방, 치료효과를 증대시킨다. 또한, 장기 복용하더라도 부작용 등의 걱정이 적고, 안전성이 높다. 그리고, 의약품, 혹은 건강식품, 건강보조식품, 특정 보건용 식품, 또는 영양보조식품 등의 식품으로서 이용할 수 있다.
이상에서 본 발명의 바람직한 실시 예에 대하여 설명하였으나, 본 발명은 상술한 특정의 실시 예에 한정되지 아니한다. 즉, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가지는 자라면 첨부된 특허청구범위의 사상 및 범주를 일탈함이 없이 본 발명에 대한 다수의 변경 및 수정이 가능하며, 그러한 모든 적절한 변경 및 수정은 균등물들로 본 발명의 범위에 속하는 것으로 간주 되어야 할 것이다.
Claims (5)
- 제비집의 시알산추출물을 유효성분으로 포함하고,
상기 시알산추출물은 제비집을 물, 알칼리 이온수 또는 유기용매로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매를 투입하여 추출하는 단계; 상기 추출된 용매에 비극성 고분자 비드를 투입하여 시알산(sialic acid)를 흡착하는 단계; 상기 시알산이 흡착된 비극성 고분자 비드를 분리하고 이에 탈착제를 투입하여 시알산을 탈착하는 단계; 상기 탈착된 시알산을 고형화하는 단계;를 포함하는 ABT(Affinity Beads Technology) 기반의 시알산 분리정제 방법으로 추출되는 것이며,
상기 제비집의 시알산추출물은 체내흡수율을 높이는 영양전달체인 시알산-담즙산 콘쥬게이트된 마이셀 나노입자를 포함하고,
치매 예방, AChE 활성 억제, 및 학습능력, 기억력 또는 반사반응능력을 향상시키는 특징이 있는 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물. - 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제 1 항에 있어서,
상기 제비집의 시알산 추출물에는 뇌기능 개선 물질인 알파-지피씨, 대두레시틴, DHA, 포스파티딜세린, 브로컬리, 참당귀, 수선화, 용안육, 단삼, 맥문동, 천마, 은행나무잎 엑기스, 로얄제리, 영지, 고려인삼, 클로렐라, 현미흑초, 프로폴리스, 세사민, 우콘 중 선택되는 어느 하나 또는 둘 이상의 것이 더 포함되는 것을 특징으로 하는 뇌기능 개선용 영양전달체 조성물.
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