KR102334546B1

KR102334546B1 - 수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증 조성물

Info

Publication number: KR102334546B1
Application number: KR1020190163878A
Authority: KR
Inventors: 한상미; 우순옥; 김세건; 방경원; 김효영; 최홍민; 문효정
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2019-12-10
Filing date: 2019-12-10
Publication date: 2021-12-03
Also published as: KR20210073251A

Abstract

본 발명은 수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 수벌번데기 추출물은 생체 내 독성을 가지지 않으면서도, NO 생성을 효과적으로 억제할 수 있으므로 우수한 항염증 효과를 통해 약학, 화장품, 식품 등 다양한 분야에서 유용하게 사용될 수 있다.

Description

수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증 조성물{Composition for anti-inflammatory comprising male pupa extract}

본 발명은 수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것이다.

현대 사회에서는 의학의 발달로 인해 인간의 평균 수명이 증가하여 고령화 사회로 접어들고 있으며 그에 따른 사람들의 미용에 대한 관심과 연령이 다양해지고 있는 추세이다. 최근에는 웰빙(well-being) 열풍과 함께 식물 유래의 천연 성분에 대한 인식이 높아지고 있다. 각종 식물의 뿌리, 열매, 꽃 나무껍질, 줄기, 잎, 종자 등 약용 식물의 모든 부위로부터 유래된 한약재의 경우 예전부터 전해 내려오는 처방으로 증명된 안전성과 효능을 인정받고 있어 건강식품, 건강보조식품, 바이오 식품, 한방화장품 등 한약재를 원료로 한 다양한 제품들이 활용되고 있다. 또한 인체에 친화적으로 부작용이 낮은 천연물을 이용한 의약품 및 화장품 등 기능성 소재에 관해 많은 연구가 진행 중이다.

면역 반응의 일종인 염증반응은 미생물이나 화합물 등에 의해 유해한 자극이 가해진 후의 인체의 방어기전으로, 자극의 제거 및 손상된 조직의 수복과정까지의 모든 과정을 가리킨다. 염증반응이 만성적으로 일어날 때에는 염증매개 물질이 과도하게 분비되어 암세포의 성장을 촉진시키거나, 인슐린 저항성을 증가시켜 동맥경화를 악화시키는 등 다양한 병리학적 기전에 관여한다고 보고되어 있다. 면역체계에서 대식세포(macrophage)는 염증반응과 면역기능을 조절하며, 항상성을 유지하는데 있어 중요한 역할을 한다. LPS(Lipopolysaccharide)의 자극에 의해 활성이 증가하며, 이 LPS는 외부의 항원과 공유결합으로 결합된 지질과 다당류의 복합체로서 주로 그람음성균(Gram-negative bacteria)의 외막 성분으로 존재하는 내독소(endotoxin)이다. 자극에 의해 활성화된 대식세포는 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL(interleukin)-1β및 IL-6와 같은 전 염증성 사이토카인의 분비를 촉진시킨다. 이러한 염증 매개 물질들이 형성되면 아라키돈산이 COX(cyclooxygenase)의 작용을 거쳐 류코트리엔, 트롬복산, 프로스타글란딘 등으로 바뀌는 과정 및 NO(nitric oxide)의 대량 생성에 관여함으로써 염증매개에 큰 역할을 하며, 숙주의 치명적 손상을 입힌다고 알려져 있다. 그 중 자유라디칼인 NO는 반응성이 높은 물질로 NOS(NO synthase)에 의해 L-아르기닌으로부터 생성되며, NOS 는 cNOS(constitutive NOS)와 iNOS(inducible NOS)의 두 그룹으로 나누어진다. 특히 iNOS는 외부자극이나 전염증성 사이토카인 등에 의해 자극을 받게 되면, 다양한 세포에서 발현되어 NO를 다량으로 생산한다고 보고되고 있다. 과도한 NO 의 생산은 염증 반응을 일으키고 면역 체계의 이상을 유발하는 것으로 알려져 있다.

TNF-α, IL-1β및 IL-6와 같은 전염증성 사이토카인의 생성에는 ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2), p38(p38 kinases), JNK(c-Jun NH2-terminal kinase)와 같은 MARKs(mitogen-activated protein kinases), NF-κ(nuclear factor kappa B)가 관여하는 것으로 알려져 있다. 대식세포에서 LPS의 자극이 오면 MAPKs와 NF-κ가 활성화되어 각종 염증인자들의 생성을 유도시킨다. NF-κ는 면역과 염증 반응에 관계된 유전자의 발현에 중요한 역할을 한다. LPS에 의하여 NF-κ가 활성화되면 결합해 있던 Iκα(inhibitory kappa Bα)가 분해되고, 그 후 NF-κ가 세포 원형질에서 핵으로 들어가게 되어 TNF-α, IL-6 등의 사이토카인 발현의 전사인자로서 생성을 촉진시킨다.

한편 꿀벌의 수벌은 일벌이나 여왕벌보다 성충 전 기간이 길고, 처녀 여왕벌과의 교미 역할만 할 뿐 봉군 내에서 꿀만 소비해 유용성이 없는 산물로 오랜 기간 동안 취급되어 왔다. 그러나 최근 이와 같은 수벌의 유용성을 새롭게 발굴하고자 하는 노력들이 이어지고 있으며, 수벌을 식용으로 이용하거나 화장품 소재로 개발하려는 연구가 보고된 바 있다.

그러나 아직까지 수벌을 이용하여 유용한 생리활성을 보고한 연구결과는 많지 않은 실정이며, 이를 활용하기 위한 새로운 연구가 필요하다.

KR 공개특허공보 제10-2010-0084447호

이에 본 발명자들은 수벌의 기능성에 대하여 연구하던 중, 수벌 번데기 추출물이 우수한 항염증 효과를 나타냄을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 수벌 번데기 추출물을 포함하는 항염증용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 수벌 번데기 추출물을 포함하는 항염증용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증용 건강기능식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증용 식품 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 1) 15일 내지 25일령의 수벌 번데기를 건조하는 단계; 2) 건조된 수벌번데기에 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매로부터 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 수벌번데기 추출물을 제조하는 단계; 및 3) 상기 2) 단계의 추출물을 여과하는 단계; 를 포함하는 수벌 번데기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 수벌번데기 추출물은 생체 내 독성을 가지지 않으면서도, NO 생성을 효과적으로 억제할 수 있으므로 우수한 항염증 효과를 통해 약학, 화장품, 식품 등 다양한 분야에서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 수벌 번데기 추출물 및 분획물 (compound) 처리에 따른 세포 독성을 나타낸 도이다 (0: 미처리군, 1: 메탄올 추출물, 2: 메탄올-헥산 분획물, 3: 메탄올-에틸아세테이트 분획물).
도 2는 수벌 번데기 추출물 및 분획물 (compound) 처리에 따른 NO 억제 활성을 나타낸 도이다 (0: 미처리군, 1: 메탄올 추출물, 2: 메탄올-헥산 분획물, 3: 메탄올-에틸아세테이트 분획물).

본 발명은 수벌번데기 추출물을 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.

상기 항염증용 조성물은 약학적 조성물, 피부 외용제 조성물, 화장료 조성물, 건강기능식품 조성물 및 식품 조성물을 포함한다.

이하 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.

본 발명에 있어서, 수벌 번데기는 수벌의 번데기 (male pupa) 를 말하며, 15 일 내지 25일령, 바람직하게는 17 내지 23일령의 수벌 번데기일 수 있다.

본 발명의 수벌 번데기는 식용으로 사용되는 누에 번데기의 2배에 달하는 함량의 단백질 및 비타민 B, D, E, 식이섬유 및 엽산의 다양한 영양소를 함유하고 있으며, 생활사에 따라 수벌의 유충, 성충과는 비타민, 아미노산 조성, 지방산 함량 등의 조성이 상이하여 상호 상이한 생리학적 활성을 나타내는 것일 수 있다.

본 발명의 수벌 번데기는 재래꿀벌 (동양종), 양봉 꿀벌(서양종), 호박벌, 어리별쌍살벌, 말벌, 왕벌, 미동정된 벌 등을 모두 포함할 수 있고, 분류학상 배벌과, 대모벌과, 호리병벌과, 말벌과, 꿀벌상과 등에 속하는 모든 벌을 포함할 수 있으나, 바람직하게는 서양종 꿀벌(Apis mellifera)의 수벌 번데기일 수 있다.

본 발명에 있어서, "추출물"은 수벌 번데기의 추출 처리에 의해 얻어지는 추출 및 분획물, 이들의 희석액, 농축액, 상기 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물이나 정제물, 또는 이들의 혼합물 등, 추출액 자체 및 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 포함한다.

본 발명의 수벌 번데기 추출물은 건조된 수벌 번데기 분말에 5~30배 부피의 용매를 가하여 완전히 침지되도록 하여 제조된다. 추출 방법은 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 추출 방법을 사용할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 추출 온도는 실온에서 함침하거나 가온할 수 있으며, 10℃내지 130 ℃일 수 있고, 이에 한정되지 않는다.

추출 용매는 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올, 이들의 혼합용매로부터 선택된 1종 이상의 용매를 이용할 수 있으며, 상기 탄소수 1 내지 4의 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 할 수 있다.

특히 바람직하게 본 발명의 수벌 번데기 추출물은 메탄올 추출물의 분획물일 수 있으며, 바람직하게는 유기용매 분획물, 더욱 바람직하게는 헥산 또는 에틸 아세테이트 분획물일 수 있고, 이들 분획물은 개별적으로 또는 순차적으로 분획하여 얻어질 수 있다. 상기 추출물을 여과 및 감압 농축하여 최종 수벌 번데기 추출물을 수득한다.

본 발명의 수벌 번데기 추출물은 생체 내 독성을 가지지 않으면서도, NO 생성을 억제하며, 염증 유발인자인 iNOS 및 COX-2의 발현을 억제하고, 전염증성 사이토카인인 IL-1βIL-6 및 TNF-α의 발현을 억제하는 등 우수한 항염증 효과를 가질 수 있으므로, 약학, 화장품, 건강기능 식품, 식품, 각종 보조제 등 다양한 분야에서 유용하게 사용될 수 있다.

일 양태로써, 본 발명은 수벌 번데기 추출물을 포함하는 항염증용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 상기 항염증용 조성물은 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물일 수 있다. 구체적으로 산화 질소의 생성을 억제하고, 염증 유발인자 및 전염증성 사이토카인의 발현을 억제함으로써 염증성 질환을 예방 또는 치료하는 것일 수 있다.

상기 염증성 질환은 염증을 주병변으로 하는 질병을 총칭하는 의미로서, 이에 제한되지는 않으나, 알러지성 천식, 알러지성 비염, 알러지성 점막염, 두드러기 및 아나필락스(anaphylax)를 포함하는 알러지성 질환, 경피증(systemic sclerosis), 피부근염(dermatomyositis) 및 포함체 근육염(inclusion body myositis)을 포함하는 근병증, 관절염, 아토피성 피부염, 건선, 천식, 다발성 경화증, 패혈증, 다발성연골염, 경피증, 습진, 통풍, 치주질환, 베체트 증후군, 부종, 맥관염, 가와사키병, 당뇨병성 망막염, 자가 면역 췌장염, 혈관염, 사구체 신염, 급성 및 만성 기관지염, 인플루엔자 감염증 등일 수 있다.

본 발명에 있어서 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨대, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화할 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 투여를 위해서 상기 유효성분 이외에 추가로 약학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토오스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 상기 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 상기 약학적 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 예를 들어, 1일 1 mg/kg 내지 1,000 mg/kg일 수 있으나, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로 및 투여 방식은 각각 독립적일 수 있으며, 그 방식에 있어 특별히 제한되지 아니하며, 목적하는 해당 부위에 상기 약학적 조성물이 도달할 수 있는 한 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다.

상기 약학적 조성물은 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다. 상기 비경구 투여 방식으로는 예를 들어 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 경피 투여 또는 피하 투여 등이 포함되며, 상기 약학적 조성물을 질환 부위에 도포하거나 분무, 흡입하는 방법 또한 이용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

다른 양태로써, 본 발명은 수벌 번데기 추출물을 포함하는 항염증용 피부 외용제 조성물을 제공한다. 본 발명에서 상기 항염증용 조성물은 염증성 질환의 예방, 개선 또는 치료용 피부 외용제 조성물일 수 있다.

또한, 본 발명은 수벌 번데기 추출물을 포함하는 항염증용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명에서 상기 항염증용 조성물은 염증 억제 또는 완화용 화장료 조성물일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 피부 외용제 또는 화장료 조성물은 연고제, 크림제, 겔제, 로션제, 액제, 드레싱제, 패취제, 수포제, 테이프제, 연무제, 외용산제 및 스프레이제 등으로 제형화될 수 있다.

본 발명의 조성물에는 일반적으로 피부 외용제 또는 화장료 조성물에 사용되는 임의의 성분이 사용될 수 있다.

예를 들어, 연고제, 크림제, 겔제 및 로션제의 경우, 백색와셀린(와셀린), 황색와셀린, 라놀린, 정제 밀랍, 세타놀,스테아릴 알콜, 스테아르산, 수소첨가유, 탄화수소겔, 폴리에틸렌 글리콜, 액체 파라핀 및 스쿠알란과 같은 기제; 올레산, 이소프로필 미리스테이트, 글리세롤 트리이소옥타노에이트, 크로타미톤, 디에틸 세바케이트, 디이소프로필 세바케이트, 디이소프로필아디페이트, 헥실라울레이트, 지방산, 지방산 에스테르, 식물성유, 지방산 알콜 및 알콜과 같은 용매 또는 안정화제; 토코페롤 유도체, L-아스코르브산, 디부틸히드록시톨루엔 및 부틸히드록시아니졸과 같은 항산화제; p-히드록시벤조에이트와 같은 방부제; 글리세린, 프로필렌 글리콜 및 소듐히알루로네이트와 같은 연석제; 폴리옥시에틸렌 유도체, 글리세롤 지방산 에스테르, 수크로스 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르 및 레시틴과 같은 계면활성제; 카르복시비닐폴리머, 크산검, 카르복시메틸 셀룰로스 및 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스 및 히드록시 프로필메틸 셀룰로스와 같은 증점제; 안정화제; 보존제; 흡착 촉진제; 및 기타 적당한 충진제들이 첨가될 수 있다.

수포제의 경우, 폴리아크릴산과 폴리아크릴산 공중합체와 같은 점착제; 알루미늄설페이트, 알루미늄 포타슘 설페이트, 알루미늄 클로라이드, 마그네슘 알루미노메타실리케이트 및 디히드록시알루미늄 아미노아세테이트와 같은 가교제; 소듐 폴리아크릴레이트, 폴리비닐알콜, 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴, 소듐알기네이트, 카르복시메틸셀룰로스, 소듐 카르복 시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스와 히드록시프로필메틸 셀룰로스와 같은 증점제; 글리세린, 폴리에틸렌글리콜 (마크로골), 폴리에틸렌글리콜과 1,3-부탄디올과 같은 다가알콜; 폴리옥시에틸렌 유도체와 같은 계면활성제; l-멘톨과 같은 향료; p-히드록시벤조에이트와 같은 방부제; 정제수; 및 기타 적당한 충진제가 첨가될 수 있다.

테이프제의 경우, 스틸렌-이소프렌-스틸렌 블럭 공중합체 및 아크릴레이트 수지와 같은 점착제; 아크릴성 포화 탄화수소 수지, 수소 첨가된 로신 수지 및 테르펜 수지와 같은 점착 수지; 액체 검과 액체 파라핀과 같은 유연제; 디부틸히드록시톨루엔과 같은 항산화제; 폴리에틸렌글리콜과 같은 다가알콜; 올레산과 같은 흡착 촉진제; 폴리옥시에틸렌 유도체와 같은 계면활성제; 및 기타 적당한 충진제가 첨가될 수 있다. 그밖에, 소듐 폴리아크릴레이트와 폴리비닐알콜과 같은 물흡수성 폴리머와 소량의 정제수가 물을 함유하는 테이프제의 제조에 첨가될 수 있다.

연무제의 경우, 백색와셀린(와셀린), 황색와셀린, 라놀린, 정제 밀랍, 세타놀, 스테아릴 알콜, 스테아르산, 수소첨가유, 탄화수소겔, 폴리 에틸렌글리콜, 액체 파라핀 및 스쿠알란과 같은 기제; 올레산, 이소프로필 미리스테이트, 글리세롤 트리이소옥타노에이트, 크로타미톤, 디에틸세바케이트, 디이소프로필 세바케이트, 이소프로필 아디페이트, 헥실 라우레이트, 지방산, 지방산 에스테르, 식물성유, 지방족 알콜 및 알콜과 같은 용매 또는 안정화제; 토코페롤 유도체, L-아스코르브산, 디부틸히드록시톨루엔 및 부틸히드록시아니졸과 같은 항산화제; p-히드록시벤조에이트와 같은 방부제; 글리세린, 프로필렌 글리콜 및 소듐히알루로네이트와 같은 연석제; 폴리옥시에틸렌 유도체, 글리세롤 지방산 에스테르, 수크로스 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르, 프로필렌글리콜 지방산 에스테르 및 레시틴과 같은 계면 활성제 연고, 크림, 겔 또는 로션에 사용되는 것과 같은 카르복시비닐 폴리머, 크산검, 카르복시메틸 셀룰로스 및 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스 및 히드록시프로필메틸 셀룰로스와 같은 증점제; 안정화제; 완충제; 감미제 현탁제; 유화제; 조미료; 방부제; 흡착 촉진제 및 기타 적당한 충진제들이 첨가될 수 있다.

외용산제의 경우, 감자전분, 쌀전분, 옥수수 전분, 탈크 및 산화아연과 같은 충진제, 및 기타 적당한 첨가제들이 첨가될 수 있다.

본 발명의 피부 외용제 또는 화장료 조성물은 피부나 점막에 적용되는 조성물에 배합되는 공지의 각종 성분을 배합하여 제조될 수 있으며, 피부 외용제 또는 화장료 조성물을 제조하는데 잘 알려진 방법에 따라, 필요에 따라 적당한 기제와 함께, 각 성분을 잘 혼합하여 제조될 수 있으며 이와 같이 제조된 제제는 필요에 따라 병변에 적용된다.

본 발명에 따른 수벌 번데기 추출물은 본 발명의 피부 외용제 또는 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 50 중량%, 바람직하게는 1 내지 30 중량%로 포함된다. 그 함량이 0.0001 중량% 미만일 경우에는 항염증 효과를 달성할 수 없으며, 50 중량%를 초과할 경우에는 제제화가 어렵고 사용감이 저하될 수 있다.

또 다른 양태로써, 본 발명은 수벌 번데기 추출물을 포함하는 항염증용 건강기능식품 또는 식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서 “건강기능식품”이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체내조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다. 본 발명의 목적상 상기 건강기능식품은 항염증 활성을 증진시키기 위한 것으로, 예를 들어, 산화 질소의 생성에 의한 염증 질환들을 예방 및 개선하기 위한 건강기능식품을 의미한다.

본 발명에 있어서 식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조 시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 상기 식품 조성물의 제형 또한 식품 조성물로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있다. 또한 식품에는 특수영양식품 (예, 조제유류, 영, 유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류 (예, 라면류, 국수류 등), 빵류, 건강보조식품, 조미식품 (예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류 (예, 스넥류), 캔디류, 쵸코렛류, 껌류, 아이스크림류, 유가공품 (예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품 (각종 김치류, 장아찌 등), 음료 (예, 과실 음료, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료 (예, 라면 스프 등), 식품첨가제 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

본 발명의 조성물을 건강기능식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 건강기능식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 바람직하게는 50 중량부 이하, 보다 바람직하게는 25 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 조절 및 위생을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수 있다.

본 발명의 식품 또는 건강기능식품 조성물은 유효성분인 수벌 번데기 추출물을 함유하는 것 외에 통상의 식품 조성물과 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알코올이다. 상술한 향미제는 천연 향미제 (타우마틴), 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.

또한, 상기 식품 조성물은 수벌 번데기 추출물 외에 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 식품 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

또한 본 발명은 수벌 번데기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물의 제조방법을 제공한다.

보다 구체적으로 본 발명은 1) 15일 내지 25일령의 수벌 번데기를 건조하는 단계; 2) 건조된 수벌번데기에 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매로부터 선택된 1종 이상의 용매를 가하여 수벌번데기 추출물을 제조하는 단계; 및 3) 상기 2) 단계의 추출물을 여과하는 단계; 를 포함하는 수벌 번데기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명에 있어, 상기 1) 단계의 건조는 수벌 번데기의 분말을 제조하기 위한 목적을 달성하기 위하여 동결건조, 감압 건조, 열풍 건조와 같은 당 분야의 공지된 건조 방법을 제한없이 이용할 수 있으나, 바람직하게는 동결 건조일 수 있다. 예컨대 동결 건조는 채취된 수벌 번데기를 냉동한 후 상온에서 해동한 후 멸균하고, 이를 동결건조기에서 -40∼-45℃에서 24 내지 72시간 동안 건조하여 얻어질 수 있다. 상기 건조된 동결 건조물은 분말화한 후 추출될 수 있다.

본 발명의 상기 2) 단계의 수벌 번데기 추출물을 제조하는 단계는 2-1) 탄소수 1 내지 4의 알코올을 가하여 추출물을 제조하는 단계; 및 2-2) 상기 추출물을 헥산 또는 에틸아세테이트로 분획하여 분획물을 제조하는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 할 수 있다.

또한 본 발명의 수벌 번데기 추출물은 in vitro에서 NO 를 억제하기 위한 시약 조성물로 활용될 수 있다.

본 발명의 수벌 번데기 추출물을 in vitro에서 세포에 가하는 경우 다양한 자극에 의해 유도되는 NO 생성을 효과적으로 억제할 수 있으므로, 항염증 기전의 연구, 항염증제의 스크리닝, 세포 실험 등에 다양하게 활용될 수 있다.

이하, 앞서 설명한 내용과 중복되는 내용은 명세서 기재의 복잡성을 피하기 위하여 생략하며, 중복된 내용은 동일하게 적용될 수 있다.

이하 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 수벌번데기 시료 및 분석시료의 준비

본 발명의 시료는 서양종꿀벌을 사육하는 양봉농가에서 생산한 17~23일령의 수벌번데기를 채취하여 사용하였다. 채취된 수벌 번데기는 채취 후 즉시 -20℃ 냉동고에 보관하였다. 냉동된 수벌번데기는 상온에서 1시간 동안 방치하여 해동시킨 후 증류수에 세척하고 불순물을 제거한 뒤 고압멸균기에서 121℃에서 10분간 가열하여 멸균하였다. 동결건조 시료는 동결건조기(Samwon Freezing Engineering Co., SFDSM24L, Seongnam, Korea)를 이용하여 -40∼-45℃에서 72시간 동안 건조하였다. 수벌번데기 건조물은 망체를 사용하여 고운 가루로 만든 후에 99% 메탄올 1L을 첨가하여 3시간 동안 소니케이션(Branson Ultrasonics, 8510, CT, USA)으로 추출한 다음 여과지로 불순물을 제거하였다. 여과한 추출물을 감압농축기(Eyela, N-1200A, Tokyo, Japan)로 농축 하였다. 유기용매 분획물 제조는 추출물을 증류수에 현탁한 후 헥산(hexane), 에틸 아세테이트 (ethyl acetate) 를 이용하여 순차적으로 분획하였으며, 각각의 분획물은 상기와 동일한 방법으로 감압농축 하여 분석 시료로 준비하여 이하 실시예에 사용하였다.

또한 본 발명에서는 마우스 유래 대식세포주인 RAW264.7 세포를 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank, Seoul, Korea)에서 구입하여 세포 실험에 사용하였다. 10% FBS(fetal bovine serum; GenDEPOT, TX, USA)와 100 units/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin을 첨가한 DMEM(Dulbecco’s modified eagle medium; Gibco, Grand Island, NY, USA)을 사용하여 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 세포를 배양하였다.

실시예 2. 수벌번데기 추출물의 세포 독성 확인

수벌번데기 추출물의 세포 독성을 확인하기 위하여 수벌 번데기 처리 후 세포 생존율을 EZ-Cytox cell viability assay kit(Dogen, EZ-3000, Suwon, Korea)를 사용하여 제조사에서 권장하는 실험방법에 따라서 측정하였다. 먼저 RAW264.7 세포를 96 well plate에 최종농도가 2×10⁵ cells/mL가 되도록 분주한 뒤 37℃, 5% CO₂ 배양기에서 24시간 배양한 후 실시예 1에서 제조된 수벌번데기 추출물을 50 μg/mL농도로 처리하고 24시간 배양하였다. 24시간 배양 후 EZ-cytox 시약을 10 μL 넣고 4시간 동안 배양한 후 microplate reader(BioSurplus, Spectramax M2, CA, USA)를 이용하여 480 nm에서 흡광도를 측정하였고, 세포생존율은 대조군에 대한 생존율로 나타내었다.

도 1에 나타낸 바와 같이, 수벌 번데기 메탄올 추출물, 메탄올-에틸아세테이트 분획물, 메탄올-헥산 분획물 처리 군 모두 세포 독성을 나타내지 않는 것을 확인하였다.

실시예 3. 수벌 번데기 추출물의 항염증 효과 확인

실시예 1에서 제조한 수벌 번데기 추출물의 항염증 효과를 확인하기 위하여, NO(Nitric oxide) 생성 억제 정도를 분석하였다. NO는 혈액응고, 혈압 및 신경전달 기능의 조절 등 생리학적 과정에 관여하며, 농도에 따라 세포 기능 유지에 중요한 작용한 작용을 하지만, 고농도의 NO 생성은 염증을 유발시키게 되며, 조직의 손상, 유전자 변이 등을 일으키고, 유해물질을 생성하여 암의 형성과 진행에 중요한 역할을 하고, 세포 내 유해한 산화물질의 축적, DNA 손상을 일으키며 세포자연사를 초래하는 것으로 알려져 있다.

먼저 96 웰 플레이트에 Raw 264.7 세포를 최종 농도 2×10⁵cells/well로 분주하였다. 상기 세포를 37℃, 5% CO₂배양기에서 24시간 동안 배양한 이후 실시예 1에서 제조된 수벌 번데기 추출물을 각 50 μg/mL 로 처리하였다. 그 후, 2시간 후 LPS 1μg/ml를 처리하여 염증 자극하고 18시간 동안 배양하였다. NO 억제활성 측정은 NO plus detection kit(iNtRON, MA, USA)를 이용하였으며, 제조사에서 권장하는 실험방법에 따라 진행하였다. microplate reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하였고, 표준곡선(Nitrite)을 작성하여 NO 생성량을 산출하였으며, NO 억제 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, LPS 처리군은 LPS 무처리군에 비해 높은 NO 생성량을 보였으며, 수벌 번데기 메탄올 추출물, 메탄올-에틸아세테이트 분획물, 메탄올-헥산 분획물은 모두 미처리 대조군에서 유도되는 NO 증가를 효과적으로 억제함을 확인하였다. 특히 메탄올-에틸아세테이트 분획물의 경우, 독성이 적으면서 NO 생성을 LPS 처리군 대비 16.23% 억제함으로써, 가장 우수한 억제능을 나타냄을 확인하였다. 상기와 같은 결과는 수벌 번데기 추출물 및 분획물이 염증 유발에 중요한 역할을 한다고 알려진 NO 생성의 억제를 효과적으로 달성함으로써 항염증 효과를 나타냄을 보여주는 결과이다.

이하 본 발명의 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 약학적 조성물의 제조

1- 1. 산제의 제조

수벌 번데기 추출물 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

1- 2. 정제의 제조

수벌번데기 추출물 100 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

1-3. 캡슐제의 제조

수벌번데기 추출물 100 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 2. 피부 외용제/ 화장료 조성물의 제조

2-1. 유연화장수(스킨로션)의 제조

수벌번데기 추출물 0.5 %

베타-1,3-글루칸 1.0 %

부틸렌글리콜 2.0 %

프로필렌글리콜 2.0 %

카르복시비닐폴리머 0.1 %

피이지-12 노닐페닐에테르 0.2 %

폴리솔베이트 80 0.4 %

에탄올 10.0 %

트리에탄올아민 0.1 %

방부제, 색소, 향료 적량

정제수 to 100 %

2-2. 크림의 제조

수벌번데기 추출물 1.0 %

베타-1,3-글루칸 5.0 %

밀납 10.0 %

폴리솔베이트 60 1.5 %

피이지 60 경화피마자유 2.0 %

솔비탄세스퀴올레이트 0.5 %

유동파라핀 10.0 %

스쿠알란 5.0 %

카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 5.0 %

글리세린 5.0 %

부틸렌글리콜 3.0 %

프로필렌글리콜 3.0 %

트리에탄올아민 0.2 %

방부제, 색소, 향료 적량

정제수 to 100 %

Claims

서양종 꿀벌 (Apis mellifera) 수벌번데기 추출물을 포함하고,
상기 서양종 꿀벌 수벌번데기 추출물은 메탄올 추출물의 분획물이며, 상기 분획물은 헥산 또는 에틸아세테이트 분획물인,
항염증용 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 수벌 번데기는 15일 내지 25일령의 수벌번데기인 것을 특징으로 하는, 항염증용 약학적 조성물.
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서양종 꿀벌 (Apis mellifera) 수벌번데기 추출물을 포함하고,
상기 서양종 꿀벌 수벌번데기 추출물은 메탄올 추출물의 분획물이며, 상기 분획물은 헥산 또는 에틸아세테이트 분획물인,
항염증용 피부 외용제 조성물.
제7항에 있어서, 상기 조성물은 연고제, 크림제, 겔제, 로션제, 액제, 드레싱제, 패취제, 수포제, 테이프제, 연무제, 외용산제 및 스프레이제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상으로 제형화되는 것을 특징으로 하는, 항염증용 피부 외용제 조성물.
서양종 꿀벌 (Apis mellifera) 수벌번데기 추출물을 포함하고,
상기 서양종 꿀벌 수벌번데기 추출물은 메탄올 추출물의 분획물이며, 상기 분획물은 헥산 또는 에틸아세테이트 분획물인,
항염증용 화장료 조성물.
서양종 꿀벌 (Apis mellifera) 수벌번데기 추출물을 포함하고,
상기 서양종 꿀벌 수벌번데기 추출물은 메탄올 추출물의 분획물이며, 상기 분획물은 헥산 또는 에틸아세테이트 분획물인,
항염증용 건강기능식품 조성물.
서양종 꿀벌 (Apis mellifera) 수벌번데기 추출물을 포함하고,
상기 서양종 꿀벌 수벌번데기 추출물은 메탄올 추출물의 분획물이며, 상기 분획물은 헥산 또는 에틸아세테이트 분획물인,
항염증용 식품 조성물.
1) 15일 내지 25일령의 서양종 꿀벌(Apis mellifera) 수벌번데기를 동결 건조하는 단계;
2) 건조된 서양종 꿀벌 수벌번데기에 메탄올을 가하여 수벌번데기 추출물을 제조하고, 상기 서양종 꿀벌 수벌번데기 추출물을 헥산 또는 에틸아세테이트로 분획하는 단계; 및
3) 상기 2) 단계의 분획물을 여과하는 단계;를 포함하는 서양종 꿀벌 수벌번데기 추출물을 유효성분으로 포함하는 항염증용 조성물의 제조방법.
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