KR102282645B1

KR102282645B1 - 천궁 및 황금 혼합 추출물 또는 이들의 분리화합물을 함유하는 여드름 및 비듬완화용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102282645B1
Application number: KR1020190080588A
Authority: KR
Inventors: 김태양; 황성진; 이춘몽; 이광식; 이건국
Original assignee: 주식회사 코리아나화장품
Priority date: 2019-07-04
Filing date: 2019-07-04
Publication date: 2021-07-28
Also published as: KR20210004328A

Abstract

본 발명은 천궁(Cnidium officinale)과 황금(Scutellaria baicalensis )의 혼합 추출물 또는 이들의 분리화합물인 센큐놀라이드 A(Senkyunolide A)와 우고닌(Wogonin)을 유효성분으로 함유하는 여드름 및 비듬 완화용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 여드름균을 억제할 수 있고, 지질생합성 억제 효과, 비듬 완화 효과 및 피지 분비 억제 효과를 갖는다.

Description

천궁 및 황금 혼합 추출물 또는 이들의 분리화합물을 함유하는 여드름 및 비듬완화용 화장료 조성물{COSMETIC COMPOSITION COMPRISING MIXED EXTRACTS OF CNIDIUM OFFICINALE AND SCUTELLARIA BAICALENSIS OR COMPOUNDS SEPERATED FROM THEREOF FOR ALLEIVIATING ACNE AND DANDRUFF}

본 발명은 천궁과 황금의 혼합 추출물 또는 이들의 분리화합물인 센큐놀라이드 A와 우고닌을 유효성분으로 함유하는 여드름 및 비듬 완화용 화장료 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 두피, 얼굴을 포함한 피부에서 피지는, 피부의 보습유지나 미생물의 침입을 막는 역할을 담당하고 있지만, 사춘기 이후에는 여드름을 유발 시킨다. 특히, 20대 이후의 여성의 경우에는 피지의 과잉 분비로 인해 피부 번들거림, 화장의 들뜸 및 모공이 넓어지는 등 미용 면에서 많은 문제를 유발시킨다. 피지 과잉이 일어나는 데는 여러가지 원인이 관여하고 있는데, 그 중에서도 가장 중요한 것은 피지선의 활성에 있어 피지 분비를 촉진하는데 관여하는 호르몬의 하나인 다이하이드로테스토스테론의 양에 의해서 피지선의 세포가 활성화되어 피지 과분비가 일어난다고 알려져 있다.

여드름은 하나의 원인이 아니라 여러 가지 원인이 복합적으로 관여하는데, 사춘기의 남성 호르몬 기능 항진으로 피지선의 분비가 왕성해지고 모낭의 상피세포가 이상을 일으켜 모낭이 막히고 이로 인해 여드름의 기본 병변인 면포가 형성된다. 모낭 내에 상주하는 균은 자유-지방산(free fatty acid)을 생성하여 모낭을 자극하여 염증을 유발한다. 이러한 여드름으로의 진행은 피지 과분비로 인해 더욱 악화된다. 피지선은 안드로겐을 생성하고, 지질합성에 관여하는 효소의 발현을 증가시킴으로써, 지질 합성을 촉진시키는데, 이와 관련된 효소로는 Fatty acid synthase, acetyl-CoA carboxylase, ATP-citrate lyase 등이 있다. 이러한 지질 대사과 관련된 효소들은 SRE이라는 전자 조절 부위를 가지며, 안드로겐은 SRE에 결합하는 SREBP를 조절함으로써 지질합성과 관련된 효소들을 조절하는것으로 알려져 있다. 또한 자유-지방산의 생성은 여드름균의 군집형성과 균체 형성을 촉진하게 됨으로써, 피부 염증을 유발하게 되고 각질을 두텁게 한다.

여드름 치료를 위해, 종래에는 에스트로겐 등의 여성 호르몬을 사용하거나 5α-리덕테이즈 억제제를 이용해왔다. 그러나 이러한 여성 호르몬제들은 여드름 치료 효과 외에, 피부 염증 발생, 호르몬 투여에 의한 부작용 발생 등이 보고 되고 있어, 현재는 사용을 중단하거나 매우 극미량을 사용하고 있는 실정이다. 화장품 분야에서도 피지의 과분비는 화장품의 들뜸이나 모공이 넓어지게 되는 요인으로서 중요한 관심의 대상임에도 불구하고 그 연구는 미미한 실정이다. 현재 피지 억제 화장품은, 일시적으로 피지를 흡착시키는 다공성 파우더를 사용하거나, 기존에 피지를 억제한다고 알려진 생약 추출물인 아이비 추출물 등을 화장품 원료로 사용하고 있으나 그 효과는 미미하며 안전한 천연추출물 유래의 피지 분비를 억제를 통한 여드름 증상 완화 효과를 가지는 화장료 조성물의 개발이 필요한 실정이다.

한국등록특허 제10-1212346호는 천궁 및 돌외 추출물을 포함하여, 여드름 치료 및 예방 효과를 갖는 화장료 조성물을 개시하고 있다.

또한, 미국공개특허 제2018/0078481호에서는 비듬방지 치료를 위한 국소 화장료 조성물을 개시하면서, 샐러리(apium graveolens)에서 추출된 화합물을 개시하고 있다.

본 발명자는 여드름을 개선하기 위해 천연 식물 성분들에 대한 다양한 피부 생리활성을 검색한 결과, 천연 식물 추출물 중에서 천궁( Cnidium officinale)과 황금(Scutellaria baicalensis ) 추출물로부터 효능을 확인하고, 이의 유효 성분을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. 이에 본 발명은 천궁 및 황금의 혼합 추출물을 포함하여 여드름 및 비듬 완화 효과가 있는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기와 같은 목적은 천궁(Cnidium officinale) 및 황금(Scutellaria baicalensis)의 혼합추출물을 유효 성분으로 포함하는, 여드름 완화용 및 피지 분비억제용 화장료 조성물에 의해 달성된다.

바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 천궁에서 분리된 센큐놀라이드 A (Senkyunolide A) 및 황금에서 분리된 우고닌(Wogonin)의 혼합물을 유효성분으로 포함한다.

또한 바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 피지 생성 억제 효과를 갖는다.

또한 바람직하게는, 상기 혼합추출물은 천궁 추출물과 황금 추출물을 1:1 내지 1:2의 중량비로 포함할 수 있고, 상기 혼합물은 센큐놀라이드 A와 우고닌을 1:1 내지 5:1의 중량비로 포함할 수 있다.

또한 바람직하게는, 상기 천궁 및 황금의 혼합추출물은 화장료 조성물 전체 중량 대비 0.01 내지 30.0 중량%로 포함될 수 있다.

또한 바람직하게는, 상기 센큐놀라이드 A와 우고닌의 혼합물은 화장료 조성물 전체 중량 대비 0.001 내지 5.0중량%로 포함될 수 있다.

또한 바람직하게는, 천궁 추출물 및 황금 추출물은 물, 탄소수 1-4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 아세톤, 에틸 아세테이트 및 부틸 아세테이트로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매로 추출될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 천궁 및 황금의 혼합 추출물 또는 이들의 분리화합물인 센큐놀라이드 A(Senkyunolide A) 및 우고민(wogonin)을 유효성분으로 함유하여 우수한 여드름 완화 효과, 비듬 완화 효과 및 피지 분비 억제 효과를 갖는다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 하기의 정의를 가지며 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미에 부합된다. 또한, 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다.

용어 "약"이라는 것은 참조 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1% 정도로 변하는 양, 수준, 값, 수, 빈도, 퍼센트, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 의미한다.

본 명세서를 통해, 문맥에서 달리 필요하지 않으면, "포함하다" 및 "포함하는"이란 말은 제시된 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군을 포함하나, 임의의 다른 단계 또는 구성요소, 또는 단계 또는 구성요소들의 군이 배제되지는 않음을 내포하는 것으로 이해하여야 한다.

본 발명은 천궁(Cnidium officinale ) 및 황금(Scutellaria baicalensis)의 혼합추출물을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 사용된 천궁(Cnidium officinale)은 산형과에 속하는 다년생 초본식물로써, 우리나라에서는 흔히 약용으로 재배한다. 천궁의 약성은 온화하고 맛이 시어 혈액순환, 진통억제, 간장기능 활성화 등의 효능을 가지고 있으며, 한방에서는 오래 전부터 잎과 뿌리를 진정, 진통, 강장 등의 효능으로 사용되어 왔다.

본 발명에 사용된 황금(Scutellaria baicalensis)은 속썩은풀의 뿌리로서, 원뿔 모양의 비틀어져 있는 모양의 뿌리로써 길이는 8~30cm, 지름은 1~4cm, 뿌리의 바깥면은 황갈색 또는 진한 노란색을 나타낸다. 속썩은풀은 국내 산지에서 흔히 발견되어지며, 예로부터 고혈압, 두통, 코피 지혈 등에 활용되어 왔으며, 황금의 찬 성질로 열을 내리는 증상에 널리 사용되었다.

본 발명의 천궁( Cnidium officinale) 추출물 및 황금( Scutellaria baicalensis ) 추출물은 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라, 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건하에서, 통상적인 용매를 사용하여 제조될 수 있으나, 바람직하게는 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올) , 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법 (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 (c) 초음파 추출법을 이용하여 추출한다. 본 발명에서는 바람직하게는 추출용매를 이용한 용매 추출법을 이용하였다.

본 발명에서 천궁( Cnidium officinale) 추출물 및 황금( Scutellaria baicalensis) 추출물은 다양한 추출용매, 예를 들어, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 에탄올, 70%(v/v) 에탄올 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 70%(v/v) 에탄올을 사용하여 얻어진 것이다.

한편, 본 발명의 천궁( Cnidium officinale) 추출물 및 황금( Scutellaria baicalensis) 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

또한, 본 발명의 천궁( Cnidium officinale) 추출물 및 황금( Scutellaria baicalensis) 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 및 발효 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 이산화탄소에 의한 감압, 고온에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리하거나 자연 상태나 각종 미생물을 이용한 발효산물에 의한 추출물 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 및 추출방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.

본 발명에 따른 천궁( Cnidium officinale) 추출물 및 황금( Scutellaria baicalensis) 추출물은 발효 과정을 거친 추출물도 포함하는데 발효추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다. 천궁( Cnidium officinale) 뿌리 및 황금( Scutellaria baicalensis) 뿌리(를 100~500메쉬 정도로 미세하게 파쇄한 다음 통상적인 미생물 배양액을 1~50g/L를 첨가하고 효모 균주 또는 유산균등의 미생물을 10,000~100,000 cfu/L의 양으로 첨가한다. 배양온도는 30~37℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양한다. pH는 5~7로 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 5내지 10일간 배양한다. 이후 숙성 및 여과를 통해 얻을 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 천궁( Cnidium officinale) 및 황금(Scutellaria baicalensis) 의 혼합추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 30.0 중량%로 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 천궁( Cnidium officinale) 및 황금(Scutellaria baicalensis ) 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.1 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 또한 바람직하게는, 상기 천궁( Cnidium officinale) 및 황금(Scutellaria baicalensis) 의 혼합추출물은 천궁 추출물과 황금 추출물을 1:1 내지 1:2의 중량비로 포함할 수 있다.

상기 혼합 추출물의 함량이 0.01 중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량%를 초과하는 경우에는 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

본 발명의 일 실시형태에 따르면, 화장료 조성물이 센큐놀라이드 A와 우고닌의 혼합물을 포함하는 경우에는, 상기 혼합물은 화장료 조성물 전체 중량 대비 0.001 내지 5.0중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 또한 바람직하게는, 상기 혼합물은 센큐놀라이드 A와 우고닌을 1:1 내지 5:1의 중량비로 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있다. 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제,비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액,현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로 서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

하기의 제조예는 상기에서 언급한 (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법, (b) 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법, 또는 (c) 초음파 추출법, (d)발효공정을 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물을 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 사실이며, 하기에 언급한 제조예에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 있어서, 유효성분인 천궁 추출물은 전초 또는 뿌리 추출물을 포함하며, 유효성분인 센큐놀라이드 A은 상기 천궁 추출물로부터 분리한 화합물로써, 하기의 화학식 1로 표시 된다.

[화학식 1]

본 발명에 있어서, 유효성분인 황금 추출물은 뿌리 추출물을 포함하며, 유효성분인 우고닌은 황금 추출물로부터 분리한 화합물로써, 하기의 화학식 2로 표시 된다.

[화학식 2]

본 발명에 있어서 “추출물”은 천궁 또는 황금의 추출 처리에 의하여 얻어지는 추출액으로써, 상기 추출액의 희석액, 농축액, 이를 건조하여 얻어지는 건조물, 상기 추출액의 조정제물, 정제물, 또는 추출액을 이용하여 형성 가능한 모든 제형의 추출물을 의미한다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다

제조예 1 - 천궁( Cnidium officinale ) 추출물 제조

천궁 뿌리를 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 다음 일정한 크기로 절단하여 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하여 농축액을 얻었다.

제조예 2 - 황금( Scutellaria baicalensis ) 추출물 제조

황금 뿌리를 깨끗한 물로 씻어 건조시킨 다음 일정한 크기로 절단하여 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하여 농축액을 얻었다

제조예 3 - 센큐놀라이드 A 제조

상기 제조예 1에서 획득한 천궁 추출물에 1L의 정제수를 넣어 분산시킨 후 n-헥산(hexane)을 이용하여 용매 분획을 실시하였다. 이 분획층을 감압 농축하여 10.27g을 얻었다. 헥산층은 클로르포름과 메탄올(20:9)로 재분획하여 비극성 분획층을 4.47g을 획득하였다. 획득한 비극성 분획층은 실리카겔(60~120mesh) 컬럼을 이용하여 유효성분을 분리 하였으며, 이동상으로는 헥산과 메탄올 (40:1 -> 1:1) 조건을 조절하여 분리 및 정제를 하였으며 전체 7개의 fraction을 회수 하였으며, 각 fraction의 효능 평가를 통하여 가장 효과 있는 fraction을 prep-LC를 이용하여 0.337g 회수하였으며 NMR을 통하여 구조 동정하였으며, 문헌(ZSCHOCKE, S., et al. HPLC-coupled spectroscopic techniques (UV, MS, NMR) for the structure elucidation of phthalides in Ligusticum chuanxiong.　Molecular diversity, 2005, 9.1-3: 33-39.) 및 표준품과 비교하여 분리된 성분이 센큐놀라이드 A임을 확인하였다. 센큐놀라이드 A의 화학식은 상기 화학식 1에 나타내었다.

제조예 4 - 우고닌 제조

상기 제조예 2에서 획득한 추출물에 1L의 정제수를 넣어 분산시킨 후 n-헥산(hexane), 에틸아세테이트(Ethylacetate)를 이용하여 용매 분획을 실시하였다. 이중 에틸아세테이트 분획층을 감압 농축하여 107.44g을 얻었다. 에틸아세테이트 분획층은 클로르포름, 메탄올, 정제수(10:5:1)로 재분획하여 분획층을 29.14g을 획득하였다. 획득한 분획층은 의 효능 평가를 통하여 효능을 재검증하고 prep-LC를 이용하여 정제 후 NMR을 통하여 구조 동정하였다. 문헌(DELANGE, David Marrero, et al. Selective and high yield isolation of pure wogonin from aerial parts of Scutellaria havanensis Jacq.　Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res, 2015, 30.2: 104-108.) 및 표준품과 비교하여 분리된 성분이 우고닌임을 확인하였다. 우고닌 화학식은 상기 화학식 2에 나타내었다.

실험예 1 - 디스크 확산법(Disc-diffusion method)에 의한 항균활성 측정

상기의 실시예를 통하여 제조한 본 발명의 추출물 및 이로부터 분리한 유효성분에 대한 항균활성을 확인하기 위하여 디스크 확산법을 이용하였다.

멸균된 페이퍼 디스크에 일정농도의 제조예1,2를 50ul 분주하여 상온에서 24시간 자연건조를 통하여 용매를 제거 하였다. 배양된 P. acnes 및 M. furfur를 디스크 확산법 측정용 평판배지에 초기 균수를 동일하게 하여 1ml씩 분주하여 도말하였다. 이후 페이퍼 디스크는 P. acnes 및 M. furfur가 도말된 평판배지에 붙인 후, 적정온도에서 48시간동안 배양한 후 생육 저지환(Clean Zone)의 크기를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 1 내지 3에 나타내었다.

시료명	농도(ppm)	초기 균수	생육 저지환 (mm)
제조예 1 (천궁 추출물)	20,000	1.0710⁷ (P. acnes*)	12.33
	10,000		10.50
	1,000		-
제조예 2 (황금 추출물)	20,000		14.55
	10,000		12.33
	100		-
제조예 3 (센큐놀라이드 A)	1,000		8.93
제조예 3 (센큐놀라이드 A)	100		-
제조예 4 (우고닌)	1,000		-
제조예 4 (우고닌)	100		-
제조예 1 (천궁 추출물)	20,000	1.5110⁷ (M. furfur*)	12.50
	10,000		9.50
	1,000		-
제조예 2 (황금 추출물)	20,000		9.33
	10,000		-
	100		-
제조예 3 (센큐놀라이드 A)	1,000		-
제조예 3 (센큐놀라이드 A)	100		-
제조예 4 (우고닌)	1,000		9.26
제조예 4 (우고닌)	100		-

구분			초기 균수	생육 저지환 (mm)
제조예 1 (천궁 추출물) 10,000ppm	제조예 2 (황금추출물)	20,000ppm	1.2110⁷ (P. acnes*)	17.50
		10,000ppm		14.33
제조예 1 (천궁 추출물) 10,000ppm	제조예 2 (황금추출물)	20,000ppm	1.3410⁷ (M. furfur*)	14.50
		10,000ppm		12.00

구분			초기 균수	생육 저지환 (mm)
제조예 3 (센큐놀라이드 A) 1,000ppm	제조예 3 (우고닌)	1,000ppm	1.1210⁷ (P. acnes*)	14.33
		100ppm		-
		1,000ppm	1.0910⁷ (M. furfur*)	12.88
		100ppm		-

실험예 2 - 지질생합성 억제 효과

여드름과 비듬의 발생은 여러 원인이 복합적으로 작용한다. 특히, 여드름은 남성호르몬의 과잉으로 피지선의 분비가 왕성해지고 모낭이 막혀 여드름의 기본 병변인 면포가 형성되게 된다. 비듬의 경우에는 과도하게 분비된 피지를 영양분으로 하여 과다 증식하게 되는 비듬균에 의한 과각질화, 염증 반응 등이 발생된다. 따라서, 지질생합성의 조절은 여드름과 비듬을 모두 개선할 수 있다. 인간 피지샘 세포(human sebocyte)에 열을 가한 다음, 단백질을 정량하고 항체를 고정 시킨 후, c-digit를 이용하여 단백질(FAS, SREBP-1, PPARγ)의 발현을 확인하여 수치화하였다. 그 결과를 표 4 및 5에 나타냈다.

구분	농도 (ppm)	FAS 저해율( % )	SREBP -1	PPARγ저해율 ( % )
제조예 1 (천궁 추출물)	50	21.24 ±1.27	20.47 ±0.91	23.27 ±2.07
제조예 2 (황금 추출물)	50	18.42 ±2.17	15.94 ±3.22	20.97 ±1.02
제조예 3 (센큐놀라이드 A)	50	32.68 ±2.29	28.81 ±0.97	35.35 ±2.52
	10	19.21 ±1.49	9.24 ±1.51	12.63 ±2.19
	1	8.17 ±0.76	-	-
제조예 3 (우고닌)	50	17.33 ±2.24	22.31 ±2.11	15.17 ±1.31
	10	7.92 ±0.87	8.67 ±1.17	-
	1	-	-	-

구분			FAS 저해율( % )	SREBP -1	PPARγ저해율 ( % )
제조예 3 (센큐놀라이드 A) 50ppm	제조예 3 (우고닌)	50ppm	43.10 ±1.00	35.71 ±2.18	45.11 ±2.01
		10ppm	25.94 ±1.25	21.46 ±2.13	23.49 ±1.19
		1ppm	17.07 ±1.37	9.47 ±0.92	10.19 ±2.12

실험예 3 - 콜레스테롤량 측정

피지 세포를 10cm 배양용기에 1 X 10⁵개씩 분주하고 제조예 1 내지 4를 각각 1, 10, 50 μg/ml의 농도로 처리한 다음, 5일간 배양하고 콜레스테롤을 정량하였다. 콜레스테롤 정량 방법은 상기 5일간 배양된 세포에 라이시스 완충액(EDTA 10 μL, 100mM SPB 용액, PMSF 1 μL, Triton X-100 10 μL)를 처리하고 초음파로 분해하였다. 세포 용해액에 클로로포름:메탄올 (2:1) 용액을 첨가하고 혼합한 다음, 원심분리(2000rpm, 15분)하여 하층액을 취하여 질소가스(N₂)로 농축시켰다. 상기 농축된 시료에 에탄올 300 μL를 넣어 녹인 후 total cholesterol kit(AM 202-K)를 이용하여 콜레스테롤 량을 측정하였다. 1 mL의 효소 시액에 100 μL의 시료를 첨가하고 혼합하여 37℃에서 5분 동안 배양 후 500 nm의 파장에서 ELISA reader로 흡광도를 측정하였다. 표준액의 콜레스테롤은 3 mL의 효소시액에 20uL의 표준액을 넣어 3 mg/mL 값으로 하였다. 그 결과를 표 6 및 7에 나타내었다.

	농도 (μg/ml)	콜레스테롤 (ml/ml protein)
대조군	-	0.97
제조예 1(천궁 추출물)	50	0.91
제조예 2(황금 추출물)	50	0.90
제조예 3 (센큐놀라이드 A)	50	0.80
	10	0.83
	1	0.86
제조예 4 (우고닌)	50	0.78
	10	0.82
	1	0.85

구분			콜레스테롤 (ml/ml protein)
대조군		-	0.94
제조예 3 (센큐놀라이드 A) 50μg/ml	제조예 4 (우고닌)	50 μg/ml	0.63
		10 μg/ml	0.79
		1 μg/ml	0.81
제조예 3 (센큐놀라이드 A) 10μg/ml		50 μg/ml	0.68
		10 μg/ml	0.72
		1 μg/ml	0.79

상기 실험예를 통하여 천궁 및 황금으로부터 분리한 센큐놀라이드 A, 우고닌의 단독 사용보다 혼합 사용시 우수한 콜레스테롤 생성 억제 효과를 확인할 수 있다.

하기의 처방예는 센큐놀라이드 A과 우고닌의 혼합물을 함유하는 제헝예의 예시이며, 본 발명의 권리범위는 하기에 언급한 제형예에 의해 한정되는 것은 아니다.

처방예 1 - 화장수

센큐놀라이드 A 50ppm, 우고닌 50 ppm을 포함하는 혼합물을 함유한 화장료 중 화장수의 처방예는 다음 표 8와 같다.

성분		함량 (중량%)
제형예 1	비교제형예 1
센큐놀라이드 A 및 우고닌 혼합물 글리세린 1.3-부틸렌글리콜 피이지1500 알란토인 DL-판테놀 EDTA-2Na 벤조페논-9 소듐 히아루로네이트 에탄올 옥틱도데세스-16 폴리솔베이트 20 방부제, 향, 색소 증류수	- 글리세린 1.3-부틸렌글리콜 피이지1500 알란토인 DL-판테놀 EDTA-2Na 벤조페논-9 소듐 히아루로네이트 에탄올 옥틱도데세스-16 폴리솔베이트 20 방부제, 향, 색소 증류수	3.0 5.0 3.0 1.0 0.1 0.3 0.02 0.04 5.0 10.0 0.2 0.2 미량 잔량
합계		100

처방예 2 - 크림

센큐놀라이드 A 50ppm, 우고닌 50 ppm을 함유한 화장료 중 크림의 처방예는 다음 표 9와 같다.

성분	제형예 2 (중량%)	비교제형예 2 (중량%)
센큐놀라이드 A 및 우고닌 혼합물 친유형 노스테아린산글리세린 세테아릴알콜 스테아린산 밀납 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에타올아민 소듐히아루로네이트 방부제, 향, 색소 증류수	3.0 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량	- 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량
합계	100

처방예 3 - 에센스

센큐놀라이드 A 50ppm, 우고닌 50 ppm을 함유한 화장료 중 에센스의 처방예는 다음 표 10과 같다.

성분		함량 (중량%)
제형예 3	비교 제형예 3
센큐놀라이드 A 및 우고닌 혼합물 글리세린 베타인 피이지 1500 알란토인 DL-판테놀 이.디.티.에이-2Na 벤조페논 - 9 히드록시에칠 셀룰로오스 소듐히아루로네이트 카르복시비닐폴리머 트리에탄올아민 옥틸도데칸올 옥틸도데세스 -16 에탄올 방부제, 향, 색소 증류수	- 글리세린 베타인 피이지 1500 알란토인 DL-판테놀 이.디.티.에이-2Na 벤조페논 - 9 히드록시에칠 셀룰로오스 소듐히아루로네이트 카르복시비닐폴리머 트리에탄올아민 옥틸도데칸올 옥틸도데세스 -16 에탄올 방부제, 향, 색소 증류수	3.0 10.0 5.0 2.0 0.1 0.3 0.02 0.04 0.1 8.0 0.2 0.18 0.3 0.4 6.0 미량 잔량
합계		100

실시예 1 - 혼합 추출물 및 유효성분을 함유하는 화장료의 피지분비 억제효과

실험은 처방예 2에서 제조한 제형예 2 및 비교제형예 2의 크림 제형을 이용하여 실험하였으며, 각 그룹은 20대 남녀 20명을 선정하여, A 그룹에는 혼합 추출물(센큐놀라이드 A 50ppm 및 우고닌 50ppm)이 함유된 제형예 2의 크림을, B 그룹에는 천궁 추출물이 함유되지 않은 비교제형예 2의 크림을 1일 2회 매일 아침, 저녁 세안 후 4주간 사용하도록 하였다. 피지 측정은 세안 후 30분간 항온, 항습실에서 안정시킨 후 피지측정기(Sebumeter)를 이용하여, 이마의 피지량을 측정하였다. 시험을 위한 크림을 사용하기 전 피지량을 초기값으로 설정하였으며, 해당 유연 화장수를 지속적으로 사용하면서 매주 1회 4주간 피지량의 변화를 측정하였다. 본 발명의 천궁 추출물에 의한 피지량의 변화는 초기 피지량과 비교하여 피지 억제 효능 여부를 판정하였으며, 그 결과는 표 11에 나타내었다.

피지 분비량 (g/㎠/h)	제형예 2 그룹 A	비교제형예 2 그룹 B
초기값	243 ± 12.7	214 ± 10.29
2주	190 ± 11.4	201 ± 12.11
4주	174 ± 10.1	204 ± 9.11

본 발명의 천궁 및 황금 추출물에서 분리된 유효성분을 함유하는 제형예 2의 크림은 아무것도 함유하지 않은 비교제형예 2와 비교하였을 때 시간이 지남에 따라 피지 분비를 효과적으로 감소시켰으며, 피지분비 억제 효과가 우수함을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 혼합물(센큐놀라이드 A 50ppm 및 우고닌 50ppm)은 피지 분비를 효과적으로 감소시킴으로써 피지의 과잉 분비로 인해 여드름이 발생하는 것을 방지할 수 있을 것으로 예측된다.

실시예 2 - 혼합 추출물 및 유효성분을 함유하는 화장료의 자극 완화 효과

실험은 처방예 2에서 제조한 제형예 3 및 비교실시예의 크림 제형을 이용하여 실시하였으며, 각 그룹은 20대 남녀 20명으로 선정하여, A 그룹에는 혼합 추출물(센큐놀라이드 A 및 우고닌 100ppm)이 함유된 제형예 3의 크림을, B 그룹에는 천궁 추출물이 함유되지 않은 비교제형예의 크림을 1일 2회 매일 아침, 저녁 세안 후 4주간 사용하도록 하였다. 평가는 얼굴 양쪽면을 사용하여 4주동안 사용하면서 피부에 나타나는 자극 여부를 평가하였다.

구분	자극 완화 효과
구분	자극없음	약한자극감	강한자극감
제형예 2 그룹 A	10	8	2
비교제형예 2 그룹 B	5	7	8

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims

천궁(Cnidium officinale)에서 분리된 센큐놀라이드 A(Senkyunolide A) 및 황금(Scutellaria baicalensis)에서 분리된 우고닌(Wogonin)을 1:1 내지 5:1의 중량비로 혼합한 혼합물을 유효성분으로 포함하는 여드름 및 비듬 완화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피지 생성 억제 효과를 갖는, 여드름 및 비듬 완화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 센큐놀라이드 A와 우고닌의 혼합물은 화장료 조성물 전체 중량 대비 0.001 내지 5.0중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는, 여드름 및 비듬 완화용 화장료 조성물.
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