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KR102250928B1 - 능실 캘러스 배양 추출물을 함유하는 임산부용 화장료 조성물 - Google Patents

능실 캘러스 배양 추출물을 함유하는 임산부용 화장료 조성물 Download PDF

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KR102250928B1
KR102250928B1 KR1020190115843A KR20190115843A KR102250928B1 KR 102250928 B1 KR102250928 B1 KR 102250928B1 KR 1020190115843 A KR1020190115843 A KR 1020190115843A KR 20190115843 A KR20190115843 A KR 20190115843A KR 102250928 B1 KR102250928 B1 KR 102250928B1
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neungsil
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fruit
cosmetic composition
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서유주
장혜인
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서유주
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Publication date
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Abstract

본 발명은 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물, 식품 조성물, 약학적 조성물에 관한 것으로서 세포독성이 없으면서도 항산화, 항염증, 튼살 완화 효과가 탁월하여 임산부용 화장료 조성물, 식품 조성물, 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

능실 캘러스 배양 추출물을 함유하는 임산부용 화장료 조성물{Cosmetic composition containing Trapa japonica Flerov callus extracts}
본 발명은 능실 캘러스 배양 추출물을 함유하는 화장료 조성물, 식품 조성물, 약학적 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 능실 캘러스 배양 추출물을 함유하여 항산화 효과, 미백 효과 및 튼살 제거 효과가 우수한 임산부용 화장료 조성물, 식품 조성물, 약학적 조성물에 관한 것이다.
임신으로 인해 여성은 호르몬의 영향과 신진대사의 변화로 피부와 신체가 급격하게 변화된다. 임신 중에 피부는 건조하고 거칠어지며 신체는 부위에 따라 다양한 변화가 일어난다. 임신 중 나타나는 다양한 변화 중 특히 피부에 나타나는 변화로는 색소 침착, 혈관 확장 및 증가, 임신선의 발생을 포함한 피부 구조의 변화, 피지선의 발달에 따른 여드름의 발생이나 악화 등을 포함하는 피부 부속 기관의 변화 등이 있다.
기미, 주근깨, 잡티 등의 색소 침착은 임신 중 90% 이상의 여성잉 경험하게 되는데, 이러한 증상은 에스트로젠과 프로게스테론 호르몬 분비 증가가 중요한 원인이 된다. 이러한 색소 침착의 원인 중에서 호르몬이나 유전적인 요인은 인위적으로 제거할 수 없지만, 자외선 차단을 하거나 비타민이 풍부한 과일과 채소를 충분히 섭취하여 예방이 가능하다.
튼살은 1889년 Troisier에 의해 알려지기 시작했으며 임신한 여성의 복부에 주로 발생하여 임신선이라 불리웠다. 또한, 원인과 색상에 따라 임신선, 백색 선조, 자주색 선조로 구분한다. 튼살은 임신과 비만 등에 의한 급격한 체중 증가를 포함한 다양한 환경에서 나타나는 것으로 보고되고 있으며, 일반적으로는 임신에 동반되는 경우가 가장 흔하다. 튼살과 같은 교원 조직의 변화는 정확한 원인이 밝혀지지 않았지만, 부신피질 호르몬의 활성증가, 탄력섬유 또는 교원섬유의 형태 및 정량적 변화에 의한 것으로 알려져 있다. 튼살 치료를 위한 바르는 약제의 경우에는 주로 콜라겐 섬유 증식을 도울 수 있는 약제들이 이용되고 있다. 주로 비타민 A의 인공합성체가 주를 이루고 있으며 과일산, 비타민 C, 비타민 K 등이 보조적으로 겸용되고 있다. 그러나 이런 약제들은 개인에 따라서 다소 차이는 있지만 대부분 표피 자극을 주기 ‹š문에 부작용이 있다. 튼살 화장료의 경우에는 다른 주된 치료와 겸용하여 초기의 튼살이 심하게 진행하는 것을 억제하는데 도움을 주고 튼살의 발생 가능한 부위에 미리 사용함으로써 피부의 컨디셔닝이 가능하다. 화장품의 사용은 튼살 제품은 예방 차원에서 이뤄지나, 적어도 가능한 초기에 특히 붉은 빛이 돌 때 치료를 시작하는 것이 좋다. 튼살 제품의 사용과 병행하여 튼살 완화 효과를 배가 시킬 수 있도록 적당한 복근 운동과 가슴 운동을 하고, 피부를 재생시켜 줄 수 있는 비타민제가 포함된 영양제 복용하거나, 자외선 노출이나 음주 흡연을 자제하고, 체중을 조절하도록 노력하며, 혈액 순환에 도움이 되는 마사지를 병행하여 주는 것이 제안된다(Cosmetic Dermatology, 2001).
임산부를 위한 화장품은 포름알데이드, 이소플라본 등의 인체에 유해한 성분을 배제하면서도 임산부의 피부 트러블인 색소 침착 현상 및 튼살 등을 완화 시킬 수 있는 것이 바람직하다. 특히 최근에는 화장품 성분의 유전자 변형이나 환경 호르몬으로 인한 문제점이 대두되면서 장기적으로 인체에 유해하지 않고 안전하게 사용할 수 있는 천연물질 추출물을 주성분으로 하는 기능성 화장품에 대한 기대가 높아지고 있다.
특허문헌 : 국내 등록특허 제10-0927970호
이에 본 발명자들은 안전성이 입증된 천연물 유래 소재로부터 임산부용 화장료 조성물 물질을 스크리닝 하던 중, 건위(健胃), 건비(健脾) 등의 효능으로 알려진 능실 추출물의 화장료로서의 사용에 대한 연구가 없음에 주목하여 능실 추출물의 항산화, 항염증, 색소 침착 완화, 튼살 개선 효능을 확인하였다. 그 결과, 능실 열매 알맹이, 껍질, 알맹이 및 껍질 추출물에 비해 능실 캘러스 배양 추출물은 다양한 농도에서 우수한 항산화, 항염증 효과를 나타내어 천연물 유래 소재로 임산부에 안전하면서도 임산부의 피부 트러블 개선 효과를 가짐을 확인하여, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명이 해결하고자 하는 과제는 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 다른 과제는 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 합성 억제 및 항산화 효과를 갖는 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명이 해결하고자 하는 과제들은 이상에서 언급된 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 유효성분으로 능실 캘러스 배양 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
능실(Trapa japonica Flerov)은 마름의 열매로, 마름은 냉온대와 난온대 지방에서 자라는 수생식물 중 부엽식물에 해당하며 일본, 대만, 만주, 중국, 우수리, 북반구 전역 등에 분포되어 있다. 마름은 수면에 떠서 자라는 1년 초이며 잎은 삼각형을 띤 마름모꼴이고 가장자리에 톱니가 많고 잎 끝이 뾰족하다. 능실은 초가을에 까맣게 익는데 양쪽 끝이 뾰족해져서 날카로운 가시가 된다. <약용식물사전>에 마름 열매를 달여 먹으면 두창을 낫게 하고 술독을 풀며 눈을 밝게 할 뿐만 아니라 위암, 자궁암을 낫게 한다고 적혀 있으며, 또 <약이 되는 식물>에 마름 열매 15 내지 20개를 물로 달여서 하루 3번 나누어 마시면 갖가지 암에 효과가 있고 술독과 태독을 없애며 소화를 잘 되게 한다고 적혀 있다. 능실은 약 15%가 전분으로 구성되어 있으며 이외에도 포도당, 단백질, 비타민 C, 비타민 B등의 성분을 함유하고 기운은 평(平)하고 약간 단맛을 가지고 있다. 한방에서는 주로 건위(健胃), 건비(健脾)작용을 가지고 있어서 허약체질, 위장기능이 약하여 영양불량이 있거나 노약자의 영양식으로 권장되고 있다. 능실은 죽으로 먹기도 하고 그냥 끓여서 먹기도 하는데 이시진의 <본초강목>에서는 마름죽이 위장을 좋게 하고, 속에 있는 열을 없애고, 성인이나 노인이 마름죽을 상식하면 위장과 비장을 건강하게 하여 다리와 허리를 강하게 하고, 기운이 생긴다고 언급하고 있다. 또한, 광노화 억제 효능이 있음이 선행 연구에 의해 알려져 있다.
캘러스는 식물체에서 잘라낸 조직을 옥신을 함유한 배지에서 배양하거나, 어떤 종류의 식물에 상처를 내거나, 상처 부위를 옥신으로 처리하거나 할 때에 생기는 특수한 조직 또는 세포덩어리를 말한다. 보통 캘러스는 정상적인 기관 형성이나 조직 분화를 일으키는 능력을 잃은 무정형의 조직 또는 세포 덩어리로 대부분 유세포로 되어 있다. 넓은 의미로는 아그로박테리움(agrobacterium) 등의 감염에 의해서 생기는 식물종양조직도 포함시키기도 한다. 캘러스는 식물의 뿌리, 줄기, 잎 등 어떤 조직으로부터도 유도할 수 있다. 본 발명에서는 능실 잎에서 유도된 캘러스를 사용하였으나, 이에 한정하는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, 상기 "추출"은 당업계에 공지된 추출, 분리 및 분획하는 방법을 사용하여 천연으로부터 추출, 분리 및 분획하여 수득한 것을 사용할 수 있다. 본 발명에서 정의된 "추출물"은 적적한 용매를 이용하여 능실로부터 추출 처리에 의해 얻어지는 것이며, 예를 들어 능실 열매 알맹이, 능실 열매 껍질, 능실 열매 알맹이 및 껍질, 능실 캘러스의 조추출물, 극성용매 가용 추출물 또는 비극성용매 가용 추출물을 모두 포함한다.
본 발명에 있어서, 상기 능실 추출물은 다양한 추출 용매와 추출 방법에 따라 추출될 수 있으며, 능실 캘러스로부터 추출물을 추출하기 위한 적절한 용매로는 예를 들어, 상기 용매로는 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 등의 C1-C4 알코올 또는 이의 혼합용매를 사용할 수 있다. 본 발명의 추출물의 추출 용매로 에탄올, 50 내지 90% (v/v) 에탄올 또는 60% 내지 80% (v/v) 에탄올을 사용할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 에탄올을 사용하여 능실 캘러스 배양 추출물을 제조하는 경우 능실 캘러스 배양 추출물 내 지용성 및 수용성 활성성분이 모두 충분히 녹아들 수 있고, 이에 최적 효과를 나타내는 추출물을 제조할 수 있다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 탄소수 1 내지 4의 알코올로 추출된다. 본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 60 내지 80% (v/v) 에탄올을 추출용매로 하여 추출된 것을 특징으로 한다.
상기 추출 온도는 상온인 것이 바람직하며, 이에 제한되지 않는다. 또한 추출방법으로는 열수추출법, 냉침추출법, 환류냉각추출법, 용매추출법, 수증기증류법, 초음파추출법, 용출법, 압착법 등의 방법이 사용될 수 있다.
상기와 같이 물 또는 유기용매를 이용하여 추출물을 얻은 이후에는 당업계에서 알려진 통상의 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무건조 또는 동결건조할 수도 있다.
본 발명에 있어서, 상기 제조한 능실 캘러스 배양 추출물은 추가적으로 증류한 후 분획하여 얻을 수 있으며, 구체적으로는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획으로도 얻을 수 있으며, 바람직하게는 박층크로마토그래피를 이용하여 분획할 수 있으나 이에 본 발명이 제한되는 것은 아니고, 적절한 용매를 이용하여 추가 분획물을 얻을 수 있는 방법이라면 어느 것이든지 이용할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 분획물을 얻기 위해 사용하는 용매는 클로로포름, 에틸 아세트산, 부탄올 및 물로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있으며, 클로로포름, 에틸 아세트산, 부탄올을 사용할 수 있으며, 에틸 아세트산을 사용할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 능실 캘러스에 전분분해효소를 처리하고, 에탄올로 추출한 후 70 ~ 100℃ 및 400 ~ 850 mbar에서 가온가압하여 2회 내지 3회 가열농축하고, 40 ~ 80℃ 및 100 ~ 350 mbar에서 감온감압하여 1회 내지 2회 가열농축하는 것을 포함하는 방법에 의하여 제조된 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 조성물 총 중량에 대해. 0.03 ~ 10 중량%의 농도로 함유된 것을 특징으로 한다. 이는 0.03% 미만에서는 효과를 기대할 수 없으며 10%을 초과하는 경우에는 화장품 제형에서 피부 안정성 및 제형 안정도에 영향을 줄 수 있으며 경제성이 떨어지게 되기 때문이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 피부 항산화 효과가 있다. 또한, 활성 산소를 소거하는 것은 멜라닌 색소 형성 억제에 효과적이라 알려져 있다. 능실 열매 알맹이, 껍질, 알맹이 및 껍질 추출물에 비해 능실 캘러스 배양 추출물은 다양한 농도에서 세포독성이 없으면서도 우수한 항산화 효과를 나타냈다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 피부 미백 효과가 있다. 용어 "미백"은 피부를 하얗게 하는 것을 말한다. 멜라닌은 색소 세포 내에 존재하는 티로시나제(tyrosinase, Tyr)의 작용에 의해 티로신으로부터 복잡한 과정을 거쳐 생성된다. 생성된 멜라닌은 피부 세포에 전달되고, 표피 박리와 함께 멜라닌이 상실되어 소멸되는 순환 작용을 보인다. 즉, 피부가 자외선에 노출되면 티로시나제가 활성화되는데, 상기 티로시나제가 피부조직에 존재하는 티로신에 작용하여 도파(DOPA) 및 도파퀴논을 생성시키는 산화 과정을 유도하고, 이로 인해 피부 색소 세포인 멜라노사이트 내의 멜라노좀에서 멜라닌이 합성되며, 합성된 멜라닌은 피부의 각질 형성 세포인 케라티노사이트로 전달되고, 각질화 과정에 의해 피부 표면에 도달하여 자외선으로부터 피부를 보호하게 된다. 그러나, 멜라닌이 국소적으로 과도하게 합성되거나, 피부 병변 및 노화에 따라 피부의 생리 기능이 떨어지게 되면, 멜라닌이 피부 표면에 침착되어 기미, 주근깨 등의 다양한 색소 침착을 유발하게 되는데, 본 발명의 조성물은 멜라노좀으로부터 멜라닌 합성이 억제되는 기작을 억제하여 미백 효과를 가지는 것을 특징으로 하며, 이에 본 발명이 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 항노화 효과가 있다. 피부 노화에 중요한 원인으로 여겨지는 활성 산소를 제거하는 항산화 물질의 체내흡수는 피부노화를 예방하고 지연시키는 데에 주요하다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 튼살 완화 효과가 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 피부 항염 효과가 있다. 능실 열매 알맹이, 껍질, 알맹이 및 껍질 추출물에 비해 능실 캘러스 배양 추출물은 다양한 농도에서 세포독성이 없으면서도 우수한 항염 효과를 나타냈다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성되는 군으로부터 선택되는 제형을 갖는다.
본 발명에 따른 건강기능식품은 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 C1-C4 알코올로 추출되는 피부 미백용 건강기능식품이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화용 건강기능식품을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 C1-C4 알코올로 추출되는 항산화용 건강기능식품이다.
본 발명에 따른 건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료의 형태로 제공될 수 있으며, 상기 건강기능식품은 유효성분인 본 발명에 따른 능실 캘러스 배양 추출물 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합 양은 그의 사용 목적 예를 들어 예방, 건강 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한이 없고, 예로는 육류, 소세지, 빵, 초코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 치료용 약학적 조성물은 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 포함하는, 멜라닌 합성 억제 및 항산화 효과를 갖는, 색소 침착 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물이다.
본 발명에 있어서, 상기 피부 색소 침착 질환은 피부 색소 침착에 의해 발생하는 다양한 질환을 포함할 수 있으나, 바람직하게는 멜라닌 색소의 합성 증가로 피부에 국소적으로 발생하는 질환일 수 있고, 더욱 바람직하게는 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 약물에 의한 색소 침착, 염증 후 색소 침착, 및 피부염에서 발생하는 과색소 침착으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 질환인 것을 특징으로 할 수 있다.
상기에 언급한 바와 같이 본 발명을 의약으로 사용하는 경우 본 발명의 조성물은 약학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으며, 이때 약학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분, 젤라틴화 전분, 미결정셀룰로오스, 유당, 포비돈, 콜로이달실리콘디옥사이드, 인산수소칼슘, 락토스, 만니톨, 엿, 아라비아고무, 전호화전분, 옥수수전분, 분말셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 오파드라이, 전분글리콜산나트륨, 카르나우바납, 합성규산 알루미늄, 스테아린산, 스테아린산마그네슘, 스테아린산알루미늄, 스테아린산칼슘, 백당 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 내지 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서 상기 조성물은 실제 임상 투여시에 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있으며, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌 (Remington's Pharmaceutical Science, 최근, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 이용하는 것이 바람직하다. 상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시 벤조에이트, 프로필히드록시 벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 광물유 등이 있다.
상기 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트(Calcium carbonate), 수크로스 (Sucrose) 또는 락토오스(Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 또한, 상기 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
상기 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 상기 비경구투여는 피부 외용 또는 복강 내 주사, 직장 내 주사, 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사 주입방식을 사용하여 이루어질 수 있다.
상기 본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 감염된 바이러스 종류, 약물의 활성약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에 있어서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명에 있어서 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 피부 색소 침착 질환의 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
상술한 본 발명의 조성물에 대한 설명은 중복된 내용의 기재에 의한 과도한 복잡성을 피하기 위하여 그 기재를 생략하며, 본 명세서에서 달리 정의되지 않은 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적으로 사용되는 의미를 갖는 것이다.
본 발명에 의한 능실 캘러스 배양 추출물을 함유하는 화장료 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물은 세포독성이 없으면서도 항산화 효과, 미백 효과, 항염증 효과, 튼살 완화 효과가 탁월하여 임산부용 화장료 조성물, 식품 조성물 및 약학 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 (a) 능실 열매 알맹이 추출물, (b) 능실 열매 껍질 추출물, (c) 능실 열매 알맹이 및 껍질 추출물, (d) 능실 캘러스 배양 추출물의 0,015 내지 50㎍/mL 농도에서 세포독성을 확인하기 위해 RAW 264.7 세포의 CCK-8 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 (a) 능실 열매 알맹이 추출물, (b) 능실 열매 껍질 추출물, (c) 능실 열매 알맹이 및 껍질 추출물, (d) 능실 캘러스 배양 추출물의 0.015 내지 50㎍/mL 농도에서 세포독성을 확인하기 위해 HaCaT 세포의 CCK-8 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 능실 캘러스 배양 추출물의 12.5 내지 100㎍/mL 농도에서 세포독성을 확인하기 위해 MTT 분석 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 (a) 능실 열매 알맹이 추출물, (b) 능실 열매 껍질 추출물, (c) 능실 열매 알맹이 및 껍질 추출물, (d) 능실 캘러스 배양 추출물의 0.005 내지 1,000㎍/mL 농도에서 DPPH 제거능 결과를 나타낸 도이다.
도 5는 능실 캘러스 배양 추출물의 12.5 내지 100㎍/mL 농도에서 DPPH 제거능 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 (a) 능실 열매 알맹이 추출물, (b) 능실 열매 껍질 추출물, (c) 능실 열매 알맹이 및 껍질 추출물, (d) 능실 캘러스 배양 추출물의 5 내지 50㎍/mL 농도에서 NO 소거능 결과를 나타낸 도이다.
도 7은 능실 캘러스 배양 추출물의 12.5 내지 100㎍/mL 농도에서 NO 소거능 결과를 나타낸 도이다
이하, 본 발명을 제조예, 실시예 및 실험예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 제조예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 제조예, 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 능실 추출물의 제조
1-1) 능실 열매 추출물의 제조
능실 열매는 홍익제원(천안, KOREA)에서 구입하였다. 능실 열매의 껍질, 알맹이, 껍질+알맹이 50g 각각에 70% 에탄올(C2H5OH) 500mL 을 혼합하여 3시간 동안 환류 추출 후 여과액을 얻었으며, 얻어진 여과액을 회전진공농축기(Buchi B-480 Co., Flawil, Switzerland)에서 감압 농축하였다. 농축된 용액을 동결건조기(EYELA FDU-540 Co., Tokyo, Japan)로 동결 건조하여 분말로 만들었으며, 얻어진 분말은 초저온 냉동고(-80℃)에서 보관하면서 실험에 따라 필요한 농도로 증류수에 희석하여 사용하였다.
1-2) 능실 캘러스 배양 추출물의 제조
능실 캘러스의 유도
살균 처리한 능실의 잎 조직을 2 내지 3% 수크로스(sucrose), 0.4% 젤라이트(gelrite), 식물 성장 조절제로서 키네틴(kinetin), a-나프탈렌아세트산(NAA), 벤질 아데닌(BA) 및 인돌 초산(IAA)을 함유한 5.5 ~ 5.9pH 의 MS 배지에 치상하여, 25℃ 식물 배양기(JSCC-250 cp, JSResearch, Korea)에서 암처리하여 캘러스를 유도하였다. 유도된 캘러스를 2주 간격으로 4회 이상 계대 배양하여 세포를 증식시킨 후 8주 이후부터는 4주 간격으로 계대 배양하여 체세포를 유도하였다. 현탁 배양은 최적 배지로 선정한 NAA 2mg/L와 BA 1mg/L를 첨가한 MS 기본 배양액 5.5 pH, 250mL를 함유한 500mL 플라스크에 캘러스 1g을 접종하였고, 멸균된 알루미늄 호일로 밀봉한 후 교반기에서 120rpm의 속도로 배양하였다. 배양실 온도를 19 내지 21℃로 조정하였고, 14시간 동안 광처리, 10시간 동안 암처리로 광주기를 조절하여 1 내지 2주 동안 1차 배양하였다. 그 후 동일한 배양 조건에서 상기 현탁 배지를 250mL로 1차 증량하였고, 캘러스 증식 속도에 맞춰 현탁 배지 250mL를 2차 증량하며 총 4 내지 6주간 실시하여 능실 캘러스를 유도하였다.
능실 캘러스 배양 추출물의 제조
상기 능실 캘러스 배양 추출물은 능실 캘러스에 전분분해효소를 처리하고, 에탄올로 추출한 후 70 ~ 100℃ 및 400 ~ 850 mbar에서 가온가압하여 2회 내지 3회 가열농축하고, 40 ~ 80℃ 및 100 ~ 350 mbar에서 감온감압하여 1회 내지 2회 가열농축하는 것을 포함하는 방법에 의하여 제조하였다.
실시예 2: 능실 캘러스 배양 추출물의 세포독성 확인
1-1) CCK-8 분석
세포독성 및 항염 효과 확인을 위해 RAW264.7 대식세포와 HaCaT 세포를 배양하여 사용하였다. RAW264.7 대식세포와 HaCaT 세포는 한국 세포주 은행(Korean Cell Line Bank, Korea)에서 구매하였으며, 우태아혈청(FBS; Welgene, Korea)과 페니실린/스트렙토마이신(Invitrogen, USA)이 첨가된 DMEM 배지(Welgene)를 RAW264.7 대식세포와 HaCaT 세포배양에 사용하였다. 5% CO2, 37℃, 습도 100% 조건의 인큐베이터에서 상기 세포를 배양하였다.
HaCaT 세포 및 RAW264.7 세포의 세포독성이 나타나지 않는 최대 처리 농도 결정을 위해 CCK-8 분석(cell counting kit-8)을 진행하여, 24 시간 동안 다양한 농도로 처리하여 세포의 생존률을 측정하였다. 24 웰-플레이트에 세포를 5.0×104 cell/well로 분주한 후 하루 동안 안정화시켰다. 이후 기존 배양액을 제거한 후 피신(ficin)을 농도별로 세포에 처리하여 37℃에서 24시간 동안 반응시켰다. 배양액을 제거한 후 DMEM:EZ-Cytox를 10:1로 희석한 용액을 각 웰 마다 100Μl를 처리하고 약 30분 동안 반응시킨 후 ELISA reader(BioTek Instruments Inc., USA)를 사용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였으며, 세포가 첨가되지 않은 대조군의 흡광도를 기초로 세포 생존율을 계산하였다. 세포 생존율은 대조군에 대한 백분율로 표기하였다.
세포 생존율(%) = (Abssample / Abscontrol) × 100
Abscontrol : 시료를 첨가하지 않은 반응용액의 흡광도
Abssample : 시료를 첨가한 반응용액의 흡광도
대조군은 시료를 처리하지 않았고 각 추출물은 0.015 내지 250μg/mL의 농도로 처리하여 세포 생존율을 측정하였다. 그 결과 RAW 264.7 대식세포에서는 껍질과 알맹이를 동시에 추출한 추출물의 경우 15μg/mL 이상의 농도에서 세포독성이 관찰되었으며, 껍질 추출물의 경우 더 낮은 농도인 0.15μg/mL 이상의 농도에서 세포독성이 관찰되었다. 반면에 껍질을 제거하고 알맹이만 추출한 추출물의 경우 고농도인 150μg/mL에서도 세포독성이 없는 것으로 관찰되었다. 능실 캘러스 배양 추출물은 250μg/mL의 농도에서도 세포독성이 나타나지 않는 것을 확인하였다(도 1).
HaCaT 세포에서는 껍질과 알맹이를 동시 추출한 추출물의 경우 150μg/mL 이상 농도에서 세포독성이 관찰되었으며, 껍질 추출물의 경우 더 낮은 농도인 50μg/mL 이상의 농도에서 세포독성이 관찰되었다. 반면에 껍질을 제거한 알맹이만 추출한 추출물의 경우 고농도인 150μg/mL에서도 세포독성이 없는 것으로 관찰되었다. 또한 능실 캘러스 배양 추출물도 250μg/㎖의 농도에서도 세포독성이 나타나지 않는 것을 확인하였다(도 2).
그 결과, 능실 열매 껍질 추출물이 추출물 중 가장 낮은 농도에서 세포독성이 나타나며, 능실 캘러스 배양 추출물은 고농도에서도 세포독성이 없음을 확인할 수 있었다.
1-2) MTT 분석
한국 세포주 은행으로부터 구입한 RAW264.7 세포는 100mm2 culture dish에 2 ×106 cells/dish로 접종한 후 페니실린 100IU/mL, 스트렙토마이신 100μg/㎖, 10% 우태아혈청(FBS)을 함유하는 DMEM 배지를 넣고 37℃ 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기(Sanyo, Japan) 내에서 배양하였다. RAW264.7 세포는 2일 간격으로 계대배양하였다.
MTT 분석법은 세포의 탈 수소 효소 작용에 의하여 노란색을 띄는 수용성 기질인 MTT tetrazolium을 적자색을 띄는 포르마잔(formazan)으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 측정하는 검사법으로, MTT의 환원은 대사가 활발한 세포에서만 일어나므로 시료의 세포독성을 평가하는 데 널리 사용되고 있다.
계대배양한 RAW264.7 세포를 96-웰 프레이트에 1×105 cells/well로 분주하고 37℃ 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 24시간 동안 배양한 후 배양 배지를 무혈청배지로 교체하였다. 이어서 최종 처리 농도가 12.5, 25, 50, 100μg/mL이 되도록 희석한 능실 캘러스 배양 추출물을 세포에 처리하였으며, 양성 대조군은 최종 처리 농도가 1, 10, 100, 1000μg/mL이 되도록 희석한 SDS를 세포에 각각 처리하여 24 시간 동안 세포 배양 조건에서 배양하였다. 배양 후 MTT 용액을 각 웰에 넣고 차광상태에서 2시간 동안 반응시킨 다음 상등액을 제거하고, 생성된 포르마잔을 DMSO로 완전히 용해시켜 마이크로플레이트 리더(Biotek Synergy-HT, USA)로 540nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 능실 캘러스 배양 추출물의 처리군에서 무처리군 대비 12.5μg/mL에서 -3.00%, 25μg/mL에서 -2.64%, 50μg/mL에서 -1.02%, 100μg/mL에서 -0.50%의 세포독성을 나타내어, 능실 캘러스 배양 추출물은 모든 처리 농도에서 세포독성에 영향을 미치지 않음을 확인하였다(도 3).
실시예 3: 폴리페놀 함량 측정
능실 열매 껍질, 알맹이, 껍질+알맹이 추출물 각각 및 능실 캘러스 배양 추출물의 폴리페놀 함량은 Gutfinger 방법(Gutfinger T., Journal of the American Oil Chemists Society, Vol. 58, No.11, 1981)을 응용하여 측정하였다. 추출 시료용액 1㎖에 50% Foiln-Ciocalteu's phenol 시약 0.5㎖를 가하여 실온에서 3분간 반응시켰다. 반응용액에 Na2CO3 포화용액 1㎖와 7.5㎖ 증류수를 차례로 혼합하여 30분간 방치시킨 뒤, 12,000rpm에서 10분간 원심분리한 후 상청액을 취해 760nm에서 흡광도를 측정하였다. 총 폴리페놀 함량은 갈릭산(gallic acid)을 표준물질로 이용하여 작성한 검량선에 따라 함량을 구하였으며 측정단위로는 GAE(Gallic acid equivalent)/g을 사용하였다
각각의 추출물에 존재하는 총 폴리페놀 함량은 3회에 거쳐 실험한 후 나온 값의 평균값과 표준 편차값을 계산하였고 갈릭산 표준용액의 표준검정곡선을 통해 추출물 및 용매 분획물의 중량 1g당 함유하고 있는 갈릭산의 양(GAE; gallic acid equivalent)으로 환산하여 측정하였다. 갈릭산을 표준물질로 하여 측정한 결과, 하기 표 1에 나타냈다.
능실 열매에서는 껍질 부분에 많은 폴리페놀인 213.20±15.78mg/g GAE을 함유하고 있었으며 능실 캘러스 배양 추출물의 폴리페놀 함량도 매우 높게 나타났다. 폴리페놀은 항산화, 미백 효과와 관련된 화장품 원료로, 폴리페놀 함량과 관련된 결과는 능실 추출물의 항산화 효과, 미백 효과와 관련된다.
시료 총 폴리페놀 함량 (㎎/g ext.)
능실 열매 알맹이 추출물 19.04±0.58
능실 열매 껍질 추출물 213.20±15.78
능실 열매 알맹이+껍질 추추물 174.33±10.69
능실 캘러스 배양 추출물 205.2±18.97
실시예 4: 플라보노이드 함량 측정
능실 열매 껍질, 알맹이, 껍질+알맹이 추출물 각각 및 능실 캘러스 배양 추출물의 플라보노이드 함량은 Nieva Moreno 방법(김미혜, 남부대학교 박사학위논문, 2012)을 응용하여 측정하였다. 각 샘플 0.1㎖와 80% 에탄올 0.9 ㎖을 혼합한 혼합물 0.5 ㎖에 10% aluminium niatate와 1M potassium acetate 0.1 ㎖ 그리고 80% 에탄올 4.3㎖을 가하여 실온에 40분 방치한 뒤 415nm에서 흡광도를 측정하였으며, 케르세틴(quercetin)을 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다.
각각의 추출물에 존재하는 총 플라보노이드 함량은 3회에 거쳐 실험한 후 나온 값의 평균값과 표준 편차값을 계산하였고 케르세틴 표준용액의 표준검정곡선을 통해 추출물 및 용매 분획물의 중량 1g당 함유하고 있는 케르세틴의 양(QE; quercetin equivalent)으로 환산하여 측정되었다. 케르세틴을 표준물질로 하여 측정한 결과를 표 2에 나타냈다. 총 플라보노이드 함량도 총 폴리페놀 함량과 마찬가지로 능실 열매 추출물 중에서는 껍질 부분에서 함량이 높게 나타났다. 플라보노이드는 항산화, 항노화 효과와 관련된 화장품 원료로, 플라보노이드 함량과 관련된 결과는 능실 추출물의 항산화 효과, 항노화 효과와 관련된다.
시료 총 플라보노이드 함량(㎎/g ext.)
능실 열매 알맹이 추출물 8.24±0
능실 열매 껍질 추출물 29.30±3.24
능실 열매 알맹이+껍질 추추물 27.24±1.98
능실 캘러스 배양 추출물 37.4±7.43
실시예 5: DPPH 분석에 의한 항산화 활성 측정
미백 활성은 멜라닌 세포에 직접적으로 작용하는 활성 산소와 관련되므로, 항산화 활성이 미백효과와 밀접하게 관련되어 있음은 알려져 있다. 따라서 능실 열매(껍질, 알맹이, 껍질+알맹이 각각) 추출물 및 능실 캘러스 배양 추출물의 항산화 활성 여부를 DPPH 분석을 통해 확인하였다.
100μM DPPH 용액 200μl에 피신(ficin)용액 100μl를 첨가한 후 37℃에서 약 30분간 반응시킨다. 이후 517nm에서 흡광도를 측정하여 흡광도의 감소 정도를 관찰하였다. DPPH 라디컬 소거능은 시료 자체의 흡광도(blank)와 시료 무첨가군(control), 시료 첨가군(sample) 사이의 흡광도 차이를 백분율로 나타내었다.
DPPH 저해율 (%) =
Figure 112019096262773-pat00001
각 추출물의 DPPH 소거율을 측정한 결과, 능실 열매 알맹이 추출물은 대조군인 비타민 C와 비교했을 때 500㎍/㎖ 농도에서는 더 우수한 소거능을 확인하였다. 능실 열매 껍질 추출물의 경우 저농도인 0.005㎍/㎖의 농도에서도 75% 이상의 라디칼 소거능을 나타내어 항산화 활성이 우수함을 확인하였다. 이는 폴리페놀이나 플라보노이드와 같은 항산화 물질의 함량과 연관된 것으로 판단된다. 능실 열매 껍질 추출물의 경우 0.15㎍/㎖ 이상의 농도에서 세포독성을 보이므로 저농도에서의 사용이 요구되지만, 저농도에서도 우수한 항산화 활성을 나타낸다(도 4).
능실 열매 알맹이 + 껍질 동시 추출물의 경우 세포독성 실험결과와 같이 능실 열매 알맹이 추출물과 능실 열매 껍질 추출물의 중간 값을 나타냈다. 50㎍/㎖ 이상의 농도에서 비타민 C와 유사한 정도의 라디칼 소거능을 나타내며 그 이하의 농도에서는 라디칼 소거능이 없음을 확인하였다.
능실 캘러스 배양 추출물의 경우 농도 의존적으로 라디칼 소거능이 좋아지며 0.05㎍/㎖ 이상의 농도에서도 대조군인 비타민 C 보다 훨씬 우수한 라디칼 소거능을 나타내 항산화 효과가 매우 우수한 것으로 평가된다. 세포독성 실험에서도 능실 캘러스 배양 추출물은 250㎍/㎖ 이상의 고농도에서도 세포독성이 없으며, 낮은 농도에서도 라디칼 소거능이 우수함을 확인하였다.
추가적으로, 항산화 효능이 있는 것으로 알려진 아스코르브산(ascorbic acid)을 대조군으로 하여, 능실 캘러스 배양 추출물의 DPPH 라디칼 소거능을 확인하는 실험을 수행하였다. 96 웰 플레이트의 각 웰에 메탄올을 이용하여 조제한 0.15mM DPPH 용액 100μL 와 초순수를 이용하여 최종 처리농도가 12.5, 25, 50, 100㎍/㎖ 이 되도록 희석한 능실 캘러스 배양 추출물 100μL를 각각 첨가하였고, 양성대조군(ascorbic acid)은 최종 처리농도가 0.1, 1, 10, 100㎍/㎖ 이 되도록 희석한 아스코르브산 100μL를 각각 첨가하였다. 이후 30분 동안 상온에서 차광 반응 후 마이크로플레이트 리더를 이용하여 540nm에서 반응액의 흡광도를 측정하여 도 에 나타냈다. 능실 캘러스 배양 추출물은 대조군 대비 우수한 DPPH 라디칼 소거능을 나타냈다(도 5).
실시예 6: 미백 효과의 측정
멜라노마 배양세포에서 능실 캘러스 배양 추출물의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인하였다. 멜라닌 합성을 유도하기 위하여 50nM a-MSH(melanin stimulating hormone)을 사용하였으며, 양성 대조군으로는 미백제로 사용되는 알부틴을 처리하였다. B16-F10 멜라노마 세포를 6 웰 플레이트에 웰 당 2×105 세포로 분주한 후 24시간 동안 안정화시켰다. 50nM a-MSH을 세포에 처리하고 희석한 0.1% 능실 캘러스 배양 추출물 또는 0.1% 알부틴을 처리한 후 1% FBS와 1% PS를 포함하는 DMEM 배지에서 5일 동안 배양시켰다. 배양 후 상등액을 취해 405nm에서 흡광도를 측정하여 멜라닌 합성량을 측정하고 능실 캘러스 배양 추출물에 의한 멜라닌 합성 억제효능을 측정하였다.
멜라노마 세포에서 a-MSH을 단독으로 처리한 실험군에서는 멜라닌 합성이 크게 증가하였으나, 능실 캘러스 배양 추출물을 함께 처리한 실험군에서는 양성대조군인 알부틴과 거의 동일한 수준으로 멜라닌 함량이 감소하였다. 이와 같은 결과를 통해 능실 캘러스 배양 추출물이 멜라닌을 효과적으로 억제하는 우수한 미백 효과를 가지고 있음을 확인하였다.
실시예 7: Nitric Oxide(NO) 분석에 의한 항염증 효과 측정
능실 열매(껍질, 알맹이, 껍질+알맹이 각각) 추출물 및 능실 캘러스 배양 추출물의 항염증 작용을 알아보기 위하여 RAW 264.7 세포에서 LPS 자극에 의한 NO 생성에 대한 저해능을 조사하였다. 능실 열매 알맹이 추출물은 25㎍/㎖ 이상의 농도에서 유의성 있는 감소를 나타내었다. 또한 능실 열매 껍질 추출물은 5㎍/㎖ 이상의 농도에서 유의성 있는 감소를 나타내었다. 능실 열매 알맹이+껍질 추출물은 5㎍/㎖ 이상의 농도에서 유의성 있는 감소를 나타내었다.
능실 캘러스 배양 추출물은 5㎍/㎖ 이상의 농도에서 유의성 있는 감소를 나타내었다. 능실 각 부위별 추출물 및 캘러스 배양 추출물 모두 NO 생성을 억제하는 효과를 가지고 있으며 특히 능실 껍질 추출물과 능실 캘러스 배양 추출물은 저농도에서도 NO 저해 효과가 우수하였다(표 3, 도 6).
다만, 능실 열매 껍질 추출물의 경우 세포독성이 우려되므로, 세포독성 측면에서 우수한 결과를 나타내는 능실 알맹이 추출물 및 능실 캘러스 배양 추출물을 사용하는 것이 안전성이 요구되는 화장품 소재로 바람직하다.
시료 추출물 함량(㎍/㎖) NO 생성량
(%,대조군 100% )		 LPS에 의한 NO 생성량
(%, 대조군 100%)
능실 열매 알맹이 추출물 6.25 179.2±4.93, 189.0±8.29
12.5 172.5±4.36
25 162.6±4.58
50 154.1±7.14
능실 열매 껍질 추출물 5 158.1±4.25 205.5±9.43
10 151.5±4.04
25 100.0±3.51
50 92.9±1.96
능실 열매 알맹이+껍질 추추물 5 183.3±5.69 202.4±0.95
10 167.6±7.79
25 110.7±4.87
50 95.3±1.02
능실 캘러스 배양 추출물 5 160.1±2.89 203.8±5.61
10 146.8±2.56
25 110.8±4.98
50 101.5±3.45
추가적으로, 양성 대조군으로 종래 알려진 항염물질인(NG-Methyl-L-arginine acetate salt, L-NMMA)과 능실 캘러스 배양 추출물의 NO 생성 저해능을 확인하는 실험을 수행하였다. RAW264.7 세포는 실시예 2와 동일한 조건에서 배양하였다. 최종 처리농도가 12.5, 25, 50, 100㎍/㎖ 이 되도록 희석한 능실 캘러스 배양 추출물과 LPS 1ppm을 함께 세포에 처리하고, 최종 처리농도가 5, 10, 20, 40㎍/㎖ 이 되도록 희석한 양성 대조군(L-NMMA)과 LPS 1ppm을 함께 세포에 처리하여 세포배양 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 배양 후 세포 배양 상충액 50μL에 griess reagent 50μL를 첨가하여 10분 동안 차광 반응시킨 후 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 산화질소 생성 저해능 시험결과 능실 캘러스 배양 추출물의 LPS에 의해 유도한 NO 생성 저해능을 측정한 결과 농도 의존적으로 저해능이 좋아지는 것을 확인할 수 있었다(도 7).
실시예 8 : 화장료 조성물의 튼살 제거 효과 측정
튼살 개선 효과의 측정
상기 제조예 1에 따라 제조된 크림의 튼살 개선 효과를 측정하기 위해 실험자(20세~35세 여성) 40명을 20명씩 2개 그룹으로 나누고, 각각의 그룹에 대해 피부 튼살 부위에 제제예 1(표 4)의 크림을 1일 2회씩 연속 3개월 간 도포하도록 하였다.
성분 농도(%)
능실 캘러스 배양 추출물 1.00
양배추 추출물 10.0
스피룰리나 막시마 추출물 0.10
부틸렌글라이콜 30.0
1,2-헥산다이올 2.00
정제수 56.9
시간 경과에 따른 튼살의 길이(mm), 넓이(mm) 및 색도의 변화를 측정하여 튼살 개선 효과를 평가하였다. 크림을 피부에 도포하기 전 튼살의 넓이, 길이를 측정하고 0, 4, 8, 12주에 각각 측정하여 변화 양상을 관찰하였다. 튼살의 색의 변화는 이미지 아나소프트웨어(image anasoftware)가 장착된 비디오 마이크로스코프(video microscope)를 사용하여 측정하였다.
구분 0주 4주 8주 12주
제조예 1 길이(mm) 40.5 38.9 37.1 34
넓이(mm) 4.2 4.1 3.9 3.5
색도 4.8 4.5 3.6 3.0
표 5를 참고하면, 능실 캘러스 배양 추출물을 함유하는 제제예 1의 크림을 도포한 피실험자의 피부 튼살 부위가 완화된 결과를 보였다.

Claims (11)

  1. 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 항산화용인 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부 미백용인 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 C1-C4의 알코올로 추출되는 것인 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 50 내지 90% (v/v) 에탄올을 추출용매로 하여 추출된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제 함유 클린징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성되는 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것인, 화장료 조성물.
  7. 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부 미백용 건강기능식품.
  8. 제7항에 있어서, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 C1-C4 알코올로 추출되는 피부 미백용 건강기능식품.
  9. 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화용 건강기능식품.
  10. 제9항에 있어서, 상기 능실 캘러스 배양 추출물은 C1-C4 알코올로 추출되는 항산화용 건강기능식품.
  11. 능실 캘러스 배양 추출물을 유효성분으로 포함하는, 멜라닌 합성 억제 및 항산화 효과를 갖는, 색소 침착 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
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