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KR102141035B1 - Colon targeting composition for preventing or treating inflammatory bowel diseases - Google Patents

Colon targeting composition for preventing or treating inflammatory bowel diseases Download PDF

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Publication number
KR102141035B1
KR102141035B1 KR1020190029309A KR20190029309A KR102141035B1 KR 102141035 B1 KR102141035 B1 KR 102141035B1 KR 1020190029309 A KR1020190029309 A KR 1020190029309A KR 20190029309 A KR20190029309 A KR 20190029309A KR 102141035 B1 KR102141035 B1 KR 102141035B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
acid
inflammatory bowel
compound
bowel disease
formula
Prior art date
Application number
KR1020190029309A
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Korean (ko)
Inventor
정연진
정성근
조희영
김현영
Original Assignee
부산대학교 산학협력단
한국화학연구원
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Publication date
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Abstract

The present invention relates to a colon-targeting composition for preventing or treating inflammatory bowel disease, and particularly, to a compound represented by chemical formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutical composition and health-aid food composition for preventing or treating inflammatory bowel disease, including the compound or a salt thereof, as an active ingredient. The compound according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof is a colon-targeting therapeutic composition, which is decomposed and activated only by the enzymes of intestinal microorganisms in the colon, and can be released in the colon as 5-aminosalicylic acid and 5-aminonictinic acid, respectively, and 5-aminosalicylic acid and 5-aminonictinic acid supplement each other′s efficacy to improve the effect of treating inflammatory bowel disease.

Description

대장 표적성 염증성 장질환 예방 또는 치료용 조성물{COLON TARGETING COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING INFLAMMATORY BOWEL DISEASES}Composition for preventing or treating colon-targeting inflammatory bowel disease {COLON TARGETING COMPOSITION FOR PREVENTING OR TREATING INFLAMMATORY BOWEL DISEASES}

본 발명은 대장 표적성 염증성 장질환 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing or treating colon-targeting inflammatory bowel disease.

염증성 장질환은 위장관 전반에 걸쳐 발생하는 비정상적인 만성 염증의 재발과 호전을 반복하는 난치성 질환으로 대표적으로 궤양성 대장염과 크론병이 있다. 아직 정확한 병인은 밝혀지지 않았지만, 전염증성 매개체(pro-inflammatory mediators)와 항염증성 매개체(anti-inflammatory mediators)의 균형의 붕괴가 염증성 장질환의 병인 중 하나로 알려져 있다. Inflammatory bowel disease is a refractory disease that repeats the recurrence and improvement of abnormal chronic inflammation occurring throughout the gastrointestinal tract, and typically includes ulcerative colitis and Crohn's disease. Although the exact etiology has not been established, the collapse of the balance between pro-inflammatory mediators and anti-inflammatory mediators is known as one of the causes of inflammatory bowel disease.

현재 염증성 장질환의 약물치료요법은 완치보다는 증상 완화 및 합병증 예방에 초점을 맞추어 삶의 질을 향상시키는 것을 목적으로 한다. 5-아미노살리실산(5-aminosalicylic acid)은 염증성 장질환의 치료제로 사용되는 대표적인 약물 중 하나로, 5-아미노살리실산에 대장 표적성 약물 송달 기법을 적용한 설파살라진(sulfasalazine), 올살라진(olsalazine)과 같은 약제가 현재 임상적으로 사용되고 있다. Medication therapy for inflammatory bowel disease aims to improve the quality of life by focusing on symptom relief and prevention of complications rather than cure. 5-aminosalicylic acid is one of the representative drugs used for the treatment of inflammatory bowel disease, such as sulfasalazine and olsalazine, which are applied to the 5-aminosalicylic acid targeted drug delivery technique. Drugs are currently in clinical use.

하지만, 5-아미노살리실산은 효능(efficacy)이 낮아 증상이 심한 염증성 장질환의 치료 및 관리에는 사용이 제한된다는 단점이 있기 때문에, 중증 이상의 염증성 장질환 환자의 경우에는 약가가 높은 생물학적 제제를 사용하거나 심한 경우 외과적 수술을 통해 병소를 제거한다. 이러한 방법은 비용적 측면이나 수술 합병증 및 재발 가능성의 한계를 가지고 있어, 치료 효과가 우수한 약물요법의 개발에 대한 필요가 증가하고 있다. However, 5-amino salicylic acid has a disadvantage in that its efficacy is low and its use is limited in the treatment and management of severe inflammatory bowel disease. In severe cases, the lesion is removed by surgical operation. This method has a limitation in terms of cost, surgical complications, and recurrence, and thus, there is an increasing need for the development of a drug therapy with excellent therapeutic effect.

GPR109A는 G-단백질 결합 수용체(G-protein coupled receptor)의 일종으로, 니코틴산 수용체로도 잘 알려져 있다. GPR109A는 대장 상피세포, 피부세포나 지방세포, 면역세포 등에서 발현되지만, 특히 대장 상피세포의 GPR109A가 대장의 건강을 유지하는 데 중요한 역할을 맡고 있는 것으로 알려지면서 최근 주목받고 있다.GPR109A is a type of G-protein coupled receptor, also known as a nicotinic acid receptor. GPR109A is expressed in colon epithelial cells, skin cells, adipocytes, immune cells, etc., but in particular, GPR109A of colon epithelial cells is known to play an important role in maintaining the health of the large intestine.

염증성 장질환을 앓고 있는 환자의 대장 내에는 특히 GPR109A의 생체 내 효능제로 알려진 부티레이트(butyrate)의 농도가 낮고, 부티레이트를 생산하는 균주의 종류와 개체수 또한 크게 감소해 있는 것으로 알려져 있기 때문에, GPR109A 효능제를 이용한 염증성 장질환 치료제의 개발 가능성이 더욱 증가하게 되었다Since the concentration of butyrate, known as an in vivo agonist of GPR109A, is low in the large intestine of patients with inflammatory bowel disease, the type and number of strains producing butyrate is also known to be greatly reduced, so the GPR109A agonist The possibility of using inflammatory bowel disease treatment has increased

하지만, 대장의 염증을 억제하기 위해 GPR109A 효능제를 경구로 복용하는 경우에는 약물의 전신 흡수로 인해 피부세포나 면역세포의 GPR109A가 불필요하게 활성화되어 피부 홍반 등의 부작용을 야기할 수 있는 문제점이 있다.However, when the GPR109A agonist is taken orally to suppress inflammation of the large intestine, there is a problem in that GPR109A of skin cells or immune cells is unnecessarily activated due to systemic absorption of the drug and may cause side effects such as skin erythema. .

한국공개특허 제10-2016-0099720호 (2016.08.22. 공개)Korean Patent Publication No. 10-2016-0099720 (published on August 22, 2016)

상기와 같은 문제를 해결하기 위해, 본 발명은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.In order to solve the above problems, the present invention provides a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명은 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease comprising the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

또한, 본 발명은 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food composition for preventing or improving inflammatory bowel disease comprising the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 하기 화학식 1로 표시될 수 있다.The compound according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be represented by Formula 1 below.

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112019026354048-pat00001
Figure 112019026354048-pat00001

본 발명에 따른 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease according to the present invention may include the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 발명에 따른 염증성 장질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함할 수 있다.The health functional food composition for preventing or improving an inflammatory bowel disease according to the present invention may include a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 대장에서 장내 미생물의 효소에 의해서만 분해되어 활성화되는 대장 표적성을 가진 치료 조성물로 사용될 수 있다. 상기 화합물 또는 이의 염은 대장에서 5-아미노살리실산과 5-아미노니코틴산으로 각각 방출될 수 있고, 서로의 효능을 보완하여 치료 효과를 향상시킬 수 있다. The compound according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof can be used as a therapeutic composition having a colonic targeting property that is degraded and activated only by an enzyme of an intestinal microorganism in the colon. The compound or a salt thereof may be released as 5-aminosalicylic acid and 5-aminonicotinic acid in the large intestine, respectively, and complement each other's efficacy to improve the therapeutic effect.

또한, 상기 화합물 또는 이의 염은 기존에 임상적으로 사용중인 5-아미노살리실산의 대장 표적성 프로드럭보다 염증의 억제 및 증상의 완화에 더 우수한 치료 효과를 가지면서도 부작용은 적어, 약학 조성물 또는 건강기능식품 조성물의 유효성분으로 사용됨으로써 안전하고 효과적으로 염증성 장질환을 예방, 개선 또는 치료할 수 있다. In addition, the compound or a salt thereof has a superior therapeutic effect in suppressing inflammation and alleviating symptoms, but has fewer side effects, than the existing 5-aminosalicylic acid target prodrug used clinically, and has fewer side effects, pharmaceutical composition or health function By being used as an active ingredient in food compositions, inflammatory bowel disease can be prevented, improved or treated safely and effectively.

도 1은 본 발명에 따른 대장 표적성 프로드럭(ASA-azo-NA)과 이의 생체 내 활성을 개략적으로 나타낸 모식도이다.
도 2는 본 발명의 실험예 1에 따른 5-아미노살리실산 또는 5-아미노니코틴산 처리 결과이다.
도 3은 본 발명의 실험예 1의 NF-κB 외 다른 전염증성 매개 인자(iNOS, COX-2)에 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이고, 도 4는 항염증 사이토카인(IL-10)에 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이다.
도 5는 본 발명의 실험예 3에 따른 인간 대장암 세포(HCT116)에 프로카인아미드(PA)를 처리한 PCR 실험 결과이다.
도 6은 본 발명의 실험예 3에 따른 NF-κB에 5-아미노니코틴산을 처리 결과이고, 도 7은 다른 전염증성 매개 인자인 인터류킨 8(IL-8)에 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이다.
도 8은 본 발명의 실험예 3에 따른 NF-κB에 5-아미노살리실산 또는 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이고, 도 9는 IL-8에 5-아미노살리실산 또는 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이다.
도 10은 본 발명의 실험예 4에 따른 화합물 1의 활성화 정도를 나타낸 그래프이다.
도 11 및 도 12는 생체 내 실험에서의 화합물 1의 활성화 정도를 나타낸 그래프이다.
도 13은 본 발명의 실험예 5에 따른 랫트 모델의 조직 사진이다.
도 14는 본 발명의 실험예 5에 따른 대장염 손상 지수(CDS) 분석 그래프이다.
도 15는 본 발명의 실험예 5에 따른 미엘로퍼옥시다아제(MPO) 분석 그래프이다.
도 16 내지 도 18은 본 발명의 실험예 5에 따른 웨스턴블럿 및 ELISA 분석 결과이다.
도 19는 본 발명의 실험예 6에 따른 랫트 모델의 조직 사진이다.
도 20은 본 발명의 실험예 6에 따른 대장염 손상 지수(CDS) 분석 그래프이다.
도 21은 본 발명의 실험예 6에 따른 미엘로퍼옥시다아제(MPO) 분석 그래프이다.
도 22 내지 도 24는 본 발명의 실험예 6에 따른 웨스턴블럿 및 ELISA 분석 결과이다.
도 25는 본 발명의 실험예 7에 따른 마우스의 몸무게 변화 그래프이다.
도 26은 본 발명의 실험예 7에 따른 마우스의 질병 활동성 지표(disease activity index, DAI)이다.
도 27은 본 발명의 실험예 7에 따른 마우스의 생존율 그래프이다.
도 28은 본 발명의 실험예 7에 따른 마우스의 대장의 조직 사진이고, 도 29는 상기 대장의 길이를 수치화한 그래프이다.
도 30은 본 발명의 비교예 1에 따른 화합물의 생체 내 활성화 후 생성되는 약물들을 세포에 처리하여 염증 매개 인자 억제 효과를 확인한 것으로, (A)는 NF-κB 루시페라제 활성도 변화를, (B)는 IL-8의 변화, (C)는 COX-2 및 iNOS의 변화를 나타낸다.
도 31은 본 발명의 비교예 1에 따른 화합물의 대장염 치료 효과를 분석한 그래프로, (A)는 대장염 손상 지수(CDS)를 분석한 그래프이며, (B)는 미엘로퍼옥시다아제(MPO) 분석 그래프이다.
도 32는 본 발명의 비교예 1에 따른 화합물의 대장 염증 개선 효과를 분석한 것으로, (C)는 IL-6의 변화 정도를, (D)는 CINC-3의 변화 정도를, (E)는 COX-2 및 iNOS의 변화 정도를 확인한 결과이다 1 is a schematic diagram schematically showing the intestinal targeting prodrug (ASA-azo-NA) and its in vivo activity according to the present invention.
2 is a result of treating 5-aminosalicylic acid or 5-aminonicotinic acid according to Experimental Example 1 of the present invention.
3 is a result of treating 5-aminonicotinic acid with other pro-inflammatory mediators (iNOS, COX-2) other than NF-κB of Experimental Example 1 of the present invention, and FIG. 4 shows anti-inflammatory cytokines (IL-10) This is the result of treating 5-aminonicotinic acid.
5 is a result of a PCR experiment in which procainamide (PA) was treated on human colon cancer cells (HCT116) according to Experimental Example 3 of the present invention.
6 is a result of treating 5-aminonicotinic acid on NF-κB according to Experimental Example 3 of the present invention, and FIG. 7 is a result of treating 5-aminonicotinic acid on interleukin 8 (IL-8), another pro-inflammatory mediator. .
8 is a result of treating 5-aminosalicylic acid or 5-aminonicotinic acid on NF-κB according to Experimental Example 3 of the present invention, and FIG. 9 is a result of treating 5-aminosalicylic acid or 5-aminonicotinic acid on IL-8. to be.
10 is a graph showing the degree of activation of Compound 1 according to Experimental Example 4 of the present invention.
11 and 12 are graphs showing the degree of activation of compound 1 in an in vivo experiment.
13 is a tissue picture of a rat model according to Experimental Example 5 of the present invention.
14 is a graph of colitis damage index (CDS) analysis according to Experimental Example 5 of the present invention.
15 is a myeloperoxidase (MPO) analysis graph according to Experimental Example 5 of the present invention.
16 to 18 are Western blot and ELISA analysis results according to Experimental Example 5 of the present invention.
19 is a tissue picture of a rat model according to Experimental Example 6 of the present invention.
20 is a graph of colitis damage index (CDS) analysis according to Experimental Example 6 of the present invention.
21 is a myeloperoxidase (MPO) analysis graph according to Experimental Example 6 of the present invention.
22 to 24 are the results of Western blot and ELISA analysis according to Experimental Example 6 of the present invention.
25 is a graph showing a change in body weight of a mouse according to Experimental Example 7 of the present invention.
26 is a disease activity index (disease activity index, DAI) of the mouse according to Experimental Example 7 of the present invention.
27 is a graph of survival rates of mice according to Experimental Example 7 of the present invention.
28 is a photograph of the tissue of the large intestine of a mouse according to Experimental Example 7 of the present invention, and FIG. 29 is a graph quantifying the length of the large intestine.
30 is to confirm the effect of inhibiting the inflammatory mediators by treating drugs produced after in vivo activation of the compound according to Comparative Example 1 of the present invention, (A) is a change in NF-κB luciferase activity, (B ) Shows changes in IL-8, (C) shows changes in COX-2 and iNOS.
FIG. 31 is a graph analyzing the effect of treating the colitis of the compound according to Comparative Example 1 of the present invention, (A) is a graph analyzing the colitis damage index (CDS), and (B) is a myeloperoxidase (MPO) analysis graph to be.
Figure 32 is an analysis of the effect of improving the inflammation of the colon of the compound according to Comparative Example 1 of the present invention, (C) the degree of change of IL-6, (D) the degree of change of CINC-3, (E) It is the result of confirming the degree of change of COX-2 and iNOS

이하, 본 발명을 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

도 1은 본 발명에 따른 대장 표적성 프로드럭(ASA-azo-NA)과 이의 생체 내 활성을 개략적으로 나타낸 모식도이다. 본 발명자들은 5-아미노살리실산의 낮은 효능 및 GPR109A 효능제의 부작용을 보완하기 위해, 5-아미노살리실산과 GPR109A 효능제로 잘 알려진 니코틴산 화합물을 아조결합을 통해 연결하여 지금까지 보고된 바 없는 GPR109A 효능제의 대장 표적성 프로드럭(ASA-azo-NA)을 합성하였고, 현재 임상적으로 사용 중인 설파살라진과의 대조 실험을 통해 대장 표적성 및 향상된 약효를 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.1 is a schematic diagram schematically showing the intestinal targeting prodrug (ASA-azo-NA) and its in vivo activity according to the present invention. In order to compensate for the low efficacy of 5-aminosalicylic acid and the side effects of GPR109A agonist, the present inventors linked a nicotinic acid compound known as 5-aminosalicylic acid and GPR109A agonist through an azo bond to provide a GPR109A agonist that has not been reported so far. The colon targeting prodrug (ASA-azo-NA) was synthesized, and the present invention was completed by confirming colon targeting and improved efficacy through a control experiment with sulfasalazine currently in clinical use.

본 명세서에서, "ASA-azo-NA"란, 5-아미노살리실산(5-aminosalicylic acid, 5-ASA)과 GPR109A 효능제로 잘 알려진 니코틴산(Nicotinic acid, NA) 화합물이 아조 결합(azo coupling)에 의해 연결된 화합물을 의미한다.In the present specification, "ASA-azo-NA" means 5-aminosalicylic acid (5-ASA) and a nicotinic acid (NA) compound known as a GPR109A agonist by azo coupling. Means a linked compound.

본 명세서에서, "예방"이란, 본 발명에 따른 약학 조성물 또는 건강기능식품 조성물의 투여에 의해 염증성 장질환, 또는 상기 질환의 적어도 하나 이상의 증상의 발생을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 또한, 재발을 예방하거나 방지하기 위해 상기 질병에 차도가 있는 대상의 치료를 포함한다.In the present specification, "prevention" refers to all actions of suppressing or delaying the onset of inflammatory bowel disease or at least one symptom of the disease by administration of the pharmaceutical composition or dietary supplement composition according to the present invention. do. It also includes treatment of subjects with remission to the disease to prevent or prevent recurrence.

본 명세서에서, "치료"란, 본 발명에 따른 약학 조성물의 투여에 의해 염증성 장질환, 또는 상기 질환의 적어도 하나 이상의 증상을 완화, 감소, 또는 소멸시키는 등 그 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.As used herein, "treatment" refers to all that improves or ameliorates the symptoms of inflammatory bowel disease or at least one symptom of the disease by alleviating, reducing, or disappearing the symptoms by administering the pharmaceutical composition according to the present invention. It means act.

본 명세서에서, "개선"이란, 본 발명에 따른 건강기능식품 조성물의 섭취에 의해 염증성 장질환, 또는 상기 질환의 적어도 하나 이상의 증상이 완화, 감소, 또는 소멸시키는 등 그 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다.In the present specification, "improvement" means to improve or advantageously improve the symptoms such as inflammatory bowel disease or at least one symptom of the disease is alleviated, reduced, or eliminated by ingestion of the health functional food composition according to the present invention. It means all the acts.

본 명세서에서, "약학 조성물"이란, 특정한 목적을 위해 투여되는 조성물로, 본 발명의 목적상 염증성 장질환, 또는 상기 질환의 적어도 하나 이상의 증상을 예방하거나 또는 치료하기 위해 투여되는 것을 의미한다.As used herein, "pharmaceutical composition" means a composition that is administered for a specific purpose, and is administered for the purpose of the present invention to prevent or treat inflammatory bowel disease, or at least one symptom of the disease.

본 명세서에서, "건강기능식품"이란, 특정보건용식품(food for specified health use, FoSHU)과 유사한 뜻으로, 영양 공급 외에도 생체 조절 기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료 효과가 높은 식품을 의미한다.In the present specification, "health functional food" means a food for specified health use (FoSHU), and is a food with high medical and medical effects processed to efficiently exhibit bio-control functions in addition to nutrition. it means.

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.The present invention provides a compound represented by Formula 1 below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112019026354048-pat00002
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상기 화합물은 5-아미노살리실산(5-aminosalicylic acid, 5-ASA)과 GPR109A 효능제로 잘 알려진 니코틴산(Nicotinic acid, NA) 화합물이 아조 결합(azo coupling)에 의해 형성된 것일 수 있고, 보다 상세하게는 5-아미노살리실산(5-ASA)과 5-아미노니코틴산(5-aminonicotinic acid, 5-ANA)의 아조 결합에 의해 형성된 5-[(3-카르복시-4-하이드록시페닐)디아제닐]니코틴산{5-[(3-carboxy-4-hydroxyphenyl)diazenyl]nicotinic acid; 이하, ASA-azo-NA} 일 수 있다.The compound may be a 5-aminosalicylic acid (5-ASA) and a nicotinic acid (NA) compound, which is well known as a GPR109A agonist, may be formed by azo coupling, and more specifically, 5 -5-[(3-carboxy-4-hydroxyphenyl)diazenyl]nicotinic acid formed by azo bonds of aminosalicylic acid (5-ASA) and 5-aminonicotinic acid (5-ANA) {5- [(3-carboxy-4-hydroxyphenyl)diazenyl]nicotinic acid; Hereinafter, it may be ASA-azo-NA}.

상기 화합물은 하기 화학식 2 및 화학식 3의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 즉 5-아미노살리실산(5-ASA) 및 5-아미노니코틴산(5-ANA)으로 분해될 수 있다.The compound may be decomposed into a compound of Formula 2 and Formula 3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, namely 5-aminosalicylic acid (5-ASA) and 5-aminonicotinic acid (5-ANA).

[화학식 2][Formula 2]

Figure 112019026354048-pat00003
Figure 112019026354048-pat00003

[화학식 3][Formula 3]

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Figure 112019026354048-pat00004

본 발명에 따른 상기 화합물은 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 상기 염은 약학적 또는 식품학적으로 허용가능한 염기성 염 또는 산성염 중 어느 하나의 형태로 사용할 수 있다. The compound according to the present invention can be used in the form of a pharmaceutically or food acceptable salt, and the salt can be used in the form of either a pharmaceutically or food acceptable salt or an acid salt.

염기성염은 유기 염기염, 무기 염기염 중 어느 하나의 형태로 사용할 수 있으며, 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 리튬염, 마그네슘염, 세슘염, 아미늄(aminium)염, 암모늄염, 트리에칠아미늄염 및 피리디늄염으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The basic salt can be used in either organic or inorganic base salts, sodium salt, potassium salt, calcium salt, lithium salt, magnesium salt, cesium salt, aluminum salt, ammonium salt, triethyl It may be selected from the group consisting of an aluminum salt and a pyridinium salt, but is not limited thereto.

산성염은 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 유리산으로는 무기산과 유기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 아황산, 인산, 이중 인산, 질산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 말레산, 말산, 퓨마르산, 글루코산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, 캠퍼설폰산, 옥살산, 말론산, 글루타릭산, 아세트산, 글리콘산, 석신산, 타타르산, 4-톨루엔설폰산, 갈락투론산, 엠본산, 글루탐산, 시트르산, 아스파르탄산, 스테아르산 등을 사용할 수 있다. As the acid salt, an acid addition salt formed by free acid is useful. Inorganic and organic acids can be used as the free acid, hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid, sulfurous acid, phosphoric acid, double phosphoric acid, nitric acid, etc. can be used as the inorganic acid. Citric acid, acetic acid, maleic acid, malic acid and fumaric acid can be used as the organic acid , Gluconic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, camphorsulfonic acid, oxalic acid, malonic acid, glutaric acid, acetic acid, glycolic acid, succinic acid, tartaric acid, 4-toluenesulfonic acid, galacturonic acid, embonic acid, Glutamic acid, citric acid, aspartic acid, stearic acid, and the like can be used.

또한, 본 발명에 따른 상기 화합물은 약학적 또는 식품학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물을 모두 포함할 수 있다. 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있고, 상기 화합물을 수혼화성 유기용매, 예를 들면 아세톤, 메탄올, 에탄올, 또는 아세토니트릴 등에 녹이고 과량의 유기염기를 가하거나 무기염기의 염기 수용액을 가한 후 침전시키거나 결정화시켜서 제조할 수 있다. 또는 이 혼합물에서 용매나 과량의 염기를 증발시킨 후 건조시켜서 부가염을 얻거나 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.In addition, the compound according to the present invention may include all salts, hydrates, and solvates that can be prepared by conventional methods, as well as pharmaceutically or food acceptable salts. The addition salt can be prepared by a conventional method, and the compound is dissolved in a water-miscible organic solvent, for example acetone, methanol, ethanol, or acetonitrile, added with excess organic base, or a basic aqueous solution of an inorganic base is precipitated. It can be prepared by prescribing or crystallization. Or it can be prepared by evaporating the solvent or excess base from this mixture and then drying it to obtain additional salts or suction filtration of the precipitated salts.

본 발명은 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease.

본 발명에 따른 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease according to the present invention may include a compound represented by the following Chemical Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 1][Formula 1]

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Figure 112019026354048-pat00005

본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 염은 5-아미노살리실산(5-aminosalicylic acid, 5-ASA)과 GPR109A 효능제로 잘 알려진 니코틴산(Nicotinic acid, NA) 화합물로, 바람직하게는 5-아미노니코틴산(5-Aminonicotinic acid, 5-ANA)과의 아조 결합(azo coupling)에 의해 합성된 5-[(3-카르복시-4-하이드록시페닐)디아제닐]니코틴산{5-[(3-carboxy-4-hydroxyphenyl)diazenyl]nicotinic acid; 이하, ASA-azo-NA} 일 수 있다.In the pharmaceutical composition according to the present invention, the compound or a salt thereof is a 5-aminosalicylic acid (5-ASA) and a nicotinic acid (NA) compound well known as a GPR109A agonist, preferably 5- 5-[(3-carboxy-4-hydroxyphenyl)diazenyl]nicotinic acid{5-[(3-carboxy) synthesized by azo coupling with 5-Aminonicotinic acid (5-ANA) -4-hydroxyphenyl)diazenyl]nicotinic acid; Hereinafter, it may be ASA-azo-NA}.

상기 화합물 또는 이의 염은 염증성 장질환 치료제로 알려진 아미노살리실산에 상기 아미노니코틴산 외의 다른 화합물이 결합될 수 있으나, 본 발명의 일 비교예에 따르면, 다른 화합물이 결합되는 경우, 상기 아미노니코틴산과의 결합에 의해 합성된 상기 화합물만큼의 유의적인 효과를 가지지 못하는 것으로 나타났다. 보다 상세한 것은 하기 비교예에 의해 후술될 것이다. The compound or a salt thereof may be combined with other compounds other than the aminonicotinic acid to amino salicylic acid, which is known as a therapeutic agent for inflammatory bowel disease, but according to a comparative example of the present invention, when other compounds are combined, the binding to the aminonicotinic acid It was found that it does not have a significant effect as the compound synthesized by. More details will be described later by the following comparative examples.

본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 염은 대장에서 장내 미생물의 효소에 의해 분해되어 활성화되는 대장 표적성 프로드럭(prodrug)일 수 있다. 상기 프로드럭 형태의 이용은 생체 내에서의 용해도나 친유성과 같은 물리 화학적 한계, 생체 이용률 같은 생물학적 한계 등을 극복하는데 유용하다. 상기 프로드럭은 목적하는 약물의 합성이 용이하고, 상온이나 생체 외에서 반감기 등이 우수하여 양호한 안정성을 가지며, 생체 내에서는 적절한 조건에서 완벽하게 모약물(parent drug)로 변환될 수 있어야 한다. In the pharmaceutical composition according to the present invention, the compound or a salt thereof may be a colonic target prodrug activated by being decomposed and activated by an enzyme of an intestinal microorganism in the large intestine. The use of the prodrug form is useful to overcome physical and chemical limitations such as solubility and lipophilicity in vivo, and biological limitations such as bioavailability. The prodrug is easy to synthesize the desired drug, has excellent stability at room temperature or in vitro, has excellent half-life, and must be able to be completely converted into a parent drug under appropriate conditions in vivo.

또한, 프로드럭은 상기 조건을 모두 만족시키기 위해 보통 생체 내에서 효소 반응에 의해서만, 즉, 대장에서 장내 미생물의 효소 반응에 의해서만 활성화되도록 할 수 있다. 그리하여 상기 화합물 또는 이의 염은 전신흡수 되지 않고 대장 특이적으로 작용할 수 있고, 이로써 전신흡수에 따른 부작용을 줄일 수 있다.In addition, the prodrug can be activated only by an enzymatic reaction in vivo, that is, only by an enzymatic reaction of an intestinal microorganism in the large intestine, in order to satisfy all of the above conditions. Thus, the compound or a salt thereof may not be absorbed systemically and may function specifically in the large intestine, thereby reducing side effects due to systemic absorption.

본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 염은 대장에서 장내 미생물에 의해 하기 화학식 2 및 화학식 3의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 즉 5-아미노살리실산(5-ASA) 및 5-아미노니코틴산(5-ANA)으로 분해될 수 있다.In the pharmaceutical composition according to the present invention, the compound or a salt thereof is a compound of Formula 2 and Formula 3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, that is, 5-aminosalicylic acid (5-ASA) and 5 by the intestinal microorganism in the large intestine. -Can be decomposed to amino nicotinic acid (5-ANA).

[화학식 2][Formula 2]

Figure 112019026354048-pat00006
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[화학식 3][Formula 3]

Figure 112019026354048-pat00007
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상기 화학식 2 및 상기 화학식 3의 화합물 또는 이의 염은 대장에서 각각 분해되어 활성화될 수 있고, 상호 보완적으로 작용할 수 있다. 특히, GPR109A 효능제인 5-아미노니코틴산의 활성에 의해 대장에서는 전염증성 매개체를 억제하고 항염증 사이토카인을 증가시켜 대장 내 염증을 효과적으로 억제할 수 있다.The compound of Formula 2 and Formula 3 or a salt thereof may be decomposed and activated in the large intestine, respectively, and may complement each other. In particular, by the activity of 5-aminonicotinic acid, a GPR109A agonist, it is possible to effectively suppress inflammation in the large intestine by inhibiting pro-inflammatory mediators in the large intestine and increasing anti-inflammatory cytokines.

본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 염은 NF-κB, IL-8, iNOS 및 COX-2로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 염증 매개 인자의 발현을 감소시킬 수 있고, 항염증 사이토카인 IL-10의 활성을 증가시킬 수 있다. 상세하게는, 상기 화합물 또는 이의 염이 대장에서 장내 미생물에 의해 5-아미노살리실산과 5-아미노니코틴산으로 분해 및 활성화되어 이들의 작용에 의해 염증 매개 인자의 발현을 더욱 감소시킬 수 있다. 특히, 5-아미노니코틴산은 항염증 사이토카인 IL-10의 활성 증가에 도움을 줄 수 있다. 보다 상세한 것은 하기 실시예에 의해 후술될 것이다.In the pharmaceutical composition according to the present invention, the compound or a salt thereof can reduce the expression of one or more inflammatory mediators selected from the group consisting of NF-κB, IL-8, iNOS and COX-2, and anti-inflammatory cytokines It can increase the activity of IL-10. Specifically, the compound or a salt thereof can be decomposed and activated into 5-aminosalicylic acid and 5-aminonicotinic acid by intestinal microorganisms in the large intestine, thereby further reducing the expression of inflammatory mediators by their action. In particular, 5-aminonicotinic acid may help increase the activity of the anti-inflammatory cytokine IL-10. More details will be described later by the following examples.

본 발명에 따른 약학 조성물은 약학적 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention can be prepared according to conventional methods in the pharmaceutical field.

본 발명에 따른 약학 조성물은 상기 제형에 따라 약학적으로 허용가능한 적절한 담체와 배합될 수 있고, 필요에 따라, 부형제, 희석제, 분산제, 유화제, 완충제, 안정제, 결합제, 붕해제, 용제 등을 더 포함하여 제조될 수 있다. 상기 "약학적으로 허용 가능한"이란, 상기 약학 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 것을 의미하고, 상기 적절한 담체 등은 본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 활성 및 특성을 저해하지 않는 것으로, 투여 형태 및 제형에 따라 달리 선택될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be combined with a suitable pharmaceutically acceptable carrier according to the formulation, and if necessary, further include excipients, diluents, dispersants, emulsifiers, buffers, stabilizers, binders, disintegrants, solvents, etc. Can be manufactured. The "pharmaceutically acceptable" means that there is no toxicity to cells or humans exposed to the pharmaceutical composition, and the appropriate carrier or the like inhibits the activity and properties of the compound according to the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof Not to be selected, it may be differently selected depending on the dosage form and formulation.

본 발명에 따른 약학 조성물은 어떠한 제형으로도 적용될 수 있고, 보다 상세하게는 통상의 방법에 따라 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 비경구형 제형로 제형화하여 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention can be applied in any dosage form, and more specifically, it can be used by formulating into a parenteral dosage form of an oral dosage form, an external preparation, a suppository, and a sterile injectable solution according to a conventional method.

상기 경구형 제형 중 고형 제형은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등의 형태로, 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로스, 락토오스, 솔비톨, 만니톨, 셀룰로오스, 젤라틴 등을 섞어 조제할 수 있고, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 포함될 수 있다. 또한, 캡술제형의 경우 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체를 더 포함할 수 있다.Among the oral dosage forms, solid dosage forms are in the form of tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., at least one excipient, for example starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, sorbitol, mannitol, cellulose, gelatin, etc. Can be prepared by mixing, and may include lubricants such as magnesium stearate and talc in addition to simple excipients. In addition, in the case of a capsul formulation, a liquid carrier such as fatty oil may be further included in addition to the above-mentioned substances.

상기 경구형 제형 중 액상 제형은 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.Among the oral formulations, liquid formulations include suspensions, intravenous solutions, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used as diluents, various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, can be included. have.

상기 비경구 제형은 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. 이에 제한되지 않고, 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제를 모두 사용 가능하다.The parenteral formulation may include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, and suppositories. Non-aqueous solvents and suspensions may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate. As a base for suppositories, witepsol, macrogol, Tween 61, cacao butter, laurin butter, and glycerogelatin may be used. Without being limited thereto, any suitable formulation known in the art may be used.

또한, 본 발명에 따른 약학 조성물은 치료 효능의 증진을 위해 칼슘이나 비타민 D3 등을 더 첨가할 수 있다. In addition, the pharmaceutical composition according to the present invention may further add calcium, vitamin D 3, and the like to improve the therapeutic efficacy.

본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 상기 "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미한다.In the pharmaceutical composition according to the present invention, the pharmaceutical composition may be administered in a pharmaceutically effective amount. The "pharmaceutically effective amount" means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment and does not cause side effects.

상기 약학 조성물의 유효 용량 수준은 사용 목적, 환자의 연령, 성별, 체중 및 건강 상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 달리 결정될 수 있다. 예를 들어, 일정하지는 않지만 일반적으로 0.001 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 0.01 내지 10mg/kg을 일일 1회 내지 수회 투여될 수 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.The effective dosage level of the pharmaceutical composition is intended for use, age of the patient, sex, weight and health status, type of disease, severity, drug activity, sensitivity to the drug, administration method, administration time, administration route and discharge rate, treatment The duration, combination, or factors including the drug used concurrently and other factors well known in the medical field can be determined differently. For example, although not constant, it is generally 0.001 to 100 mg/kg, preferably 0.01 to 10 mg/kg once to several times a day. The above dosage does not limit the scope of the invention in any aspect.

본 발명에 따른 약학 조성물은 염증성 장질환이 발생할 수 있는 임의의 동물에 투여할 수 있고, 상기 동물은 예를 들어, 인간 및 영장류뿐만 아니라 소, 돼지, 말, 개 등의 가축 등을 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be administered to any animal that may develop inflammatory bowel disease, and the animal may include, for example, humans and primates, as well as livestock such as cows, pigs, horses, and dogs. have.

본 발명에 따른 약학 조성물은 제제 형태에 따른 적당한 투여 경로로 투여될 수 있고, 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다. 투여 방법은 특히 한정할 필요 없이, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 기관지내 흡입, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracere-broventricular) 주사 등의 통상적인 방법으로 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention can be administered by a suitable route of administration according to the form of the formulation, and can be administered through various routes, oral or parenteral, as long as it can reach the target tissue. The method of administration is not particularly limited, and may be administered by conventional methods such as, for example, oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrabronchial inhalation, intrauterine epidural or intracere-broventricular injection. .

본 발명에 따른 약학 조성물은 염증성 장질환 예방 또는 치료를 위하여 단독으로 사용될 수 있고, 수술 또는 다른 약물 치료 등과 병용하여 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be used alone for the prevention or treatment of inflammatory bowel disease, and may be used in combination with surgery or other drug treatment.

본 발명에 따른 약학 조성물에 있어서, 상기 염증성 장질환은 궤양성 대장염, 크론병, 교원성 대장염, 림프성 대장염, 허혈성 대장염, 전환성 대장염 및 베체트 증후군으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the pharmaceutical composition according to the present invention, the inflammatory bowel disease may be selected from the group consisting of ulcerative colitis, Crohn's disease, collagen colitis, lymphoid colitis, ischemic colitis, metastatic colitis and Behcet syndrome, but is not limited thereto. no.

또한, 본 발명은 염증성 장질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food composition for preventing or improving inflammatory bowel disease.

본 발명에 따른 염증성 장질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함할 수 있다.The health functional food composition for preventing or improving inflammatory bowel disease according to the present invention may include a compound represented by the following Chemical Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112019026354048-pat00008
Figure 112019026354048-pat00008

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 화합물 또는 이의 염은 대장에서 장내 미생물에 의해 하기 화학식 2 및 화학식 3의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 즉 5-아미노살리실산(5-ASA) 및 5-아미노니코틴산(5-ANA)으로 분해될 수 있다.In the dietary supplement composition according to the present invention, the compound or a salt thereof is a compound of Formula 2 and Formula 3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, that is, 5-aminosalicylic acid (5-ASA) by the intestinal microorganism in the large intestine. And 5-aminonicotinic acid (5-ANA).

[화학식 2][Formula 2]

Figure 112019026354048-pat00009
Figure 112019026354048-pat00009

[화학식 3][Formula 3]

Figure 112019026354048-pat00010
Figure 112019026354048-pat00010

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 염증성 장질환은 궤양성 대장염, 크론병, 교원성 대장염, 림프성 대장염, 허혈성 대장염, 전환성 대장염 및 베체트 증후군으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.In the dietary supplement composition according to the present invention, the inflammatory bowel disease may be selected from the group consisting of ulcerative colitis, Crohn's disease, collagen colitis, lymphoid colitis, ischemic colitis, metastatic colitis and Behcet's syndrome, but is not limited thereto. It does not work.

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물에 있어서, 상기 건강기능식품은 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽 또는 음료 등으로 제조될 수 있고, 상기 건강기능식품이 취할 수 있는 형태에는 제한이 없으며, 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있다. 예를 들어, 음료 및 각종 드링크, 과실 및 그의 가공식품(과일통조림, 잼 등), 어류, 육류 및 그 가공식품(햄, 베이컨 등), 빵류 및 면류, 쿠키 및 스낵류, 유제품(버터, 치즈 등) 등이 가능하며, 통상적인 의미에서의 기능성 식품을 모두 포함할 수 있다. 또한, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품도 포함할 수 있다.In the dietary supplement composition according to the present invention, the dietary supplement may be prepared as a powder, granule, tablet, capsule, syrup or beverage, and there is no limitation on the form that the dietary supplement can take, and is conventional It can include all foods of meaning. For example, beverages and various drinks, fruits and processed foods thereof (canned fruit, jam, etc.), fish, meat and processed foods (ham, bacon, etc.), breads and noodles, cookies and snacks, dairy products (butter, cheese, etc.) ) And the like, and may include all functional foods in the ordinary sense. In addition, it may also include food used as a feed for animals.

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 당업계에서 통상적으로 사용되는 식품학적으로 허용 가능한 식품 첨가제 및 적절한 기타 보조 성분을 더 포함하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 향미제, 천연 탄수화물, 감미제, 비타민, 전해질, 착색제, 펙트산, 알긴산, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. 특히, 상기 천연 탄수화물로는 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로오스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜을 사용할 수 있으며, 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. The dietary supplement composition according to the present invention may be prepared by further including a food-acceptable food additive commonly used in the art and other suitable auxiliary ingredients. For example, it may further contain flavoring agents, natural carbohydrates, sweeteners, vitamins, electrolytes, colorants, pectic acids, alginic acids, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusting agents, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohols, carbonic acid, etc. Can. In particular, as the natural carbohydrate, monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol may be used. , As a sweetener, natural sweeteners such as taumatin and stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame can be used.

본 발명에 따른 건강기능식품에 함유된 상기 화합물 또는 이의 염의 유효 용량은 상기 약학 조성물의 유효 용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 예방, 건강 또는 치료적 처치 등 그 사용 목적에 따라 적절하게 조절될 수 있다.The effective dose of the compound or its salt contained in the dietary supplement according to the present invention can be used in accordance with the effective dose of the pharmaceutical composition, but in the case of long-term intake for health and hygiene purposes or for health control purposes It may be below the above range, it can be appropriately adjusted according to the purpose of use, such as prevention, health or therapeutic treatment.

본 발명에 따른 건강기능식품 조성물은 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어나, 염증성 장질환 예방 또는 개선을 위한 보조제로 섭취될 수 있다.The health functional food composition according to the present invention has the advantage that there is no side effect, etc. that may occur when taking the drug for a long time by using food as a raw material, unlike a general drug, and is excellent in portability, as an auxiliary for preventing or improving inflammatory bowel disease Can be ingested.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.Hereinafter, examples will be described in detail to help understanding of the present invention. However, the following examples are merely illustrative of the contents of the present invention, and the scope of the present invention is not limited to the following examples. The embodiments of the present invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.

<실시예 1> 화합물 1(ASA-azo-NA)의 합성<Example 1> Synthesis of Compound 1 (ASA-azo-NA)

하기 반응식 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 화합물 1(ASA-azo-NA)의 합성 과정이다. 대장 표적성 약물 송달을 위해 대장에서 특이적으로 분해되는 아조결합을 이용하여 살리실산과 니코틴산을 연결할 수 있다.Scheme 1 below is a synthesis process of Compound 1 (ASA-azo-NA) according to an embodiment of the present invention. Salicylic acid and nicotinic acid can be linked to each other by using an azo bond that is specifically degraded in the large intestine for delivery of targeted drugs.

[반응식 1][Scheme 1]

Figure 112019026354048-pat00011
Figure 112019026354048-pat00011

상기 반응식 1을 참조하면, 화합물 4의 5-아미노니코틴산(5-Aminonicotinic acid, 138 mg, 1 mmol)을 5M, 10 mL의 차가운 염산에 충분히 녹인 후, 화합물 5의 아질산나트륨(sodium nitrite, 103 mg, 1.5 mmol)을 첨가하고 4℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 2시간 뒤, 반응을 종결하기 위해 술팜산(sulfamic acid, 49 mg, 0.5 mmol)을 넣어주고 10분 동안 반응시켜 화합물 2를 제조하였다. 이어서 화합물 3의 살리실산(salicylic acid, 207 mg, 1.5 mmol)을 1M 수산화나트륨에 녹인 후 첨가해주고 pH 9까지 적정한 후 4시간 동안 반응시켰다. 반응 후 침전을 위해 용액을 pH 5까지 적정하고, 침전물을 여과(filtration)를 통해 얻어낸 후 디에틸에테르/아세톤 1:1 용액으로 3번 씻어내고 건조시켜 화합물 1을 합성하였다. 합성의 유무는 FT-IR 및 1H-NMR로 확인하였다.Referring to Reaction Scheme 1 above, 5-aminonicotinic acid (138 mg, 1 mmol) of Compound 4 was sufficiently dissolved in 5M, 10 mL of cold hydrochloric acid, and then sodium nitrite of Compound 5 (103 mg) , 1.5 mmol) was added and reacted at 4° C. for 2 hours. After 2 hours, to complete the reaction, sulfamic acid (49 mg, 0.5 mmol) was added and reacted for 10 minutes to prepare compound 2. Then, salicylic acid of compound 3 (salicylic acid, 207 mg, 1.5 mmol) was dissolved in 1M sodium hydroxide, added, titrated to pH 9, and reacted for 4 hours. After the reaction, the solution was titrated to pH 5 for precipitation, and the precipitate was obtained through filtration, washed 3 times with a diethyl ether/acetone 1:1 solution, and dried to synthesize compound 1. The presence or absence of synthesis was confirmed by FT-IR and 1 H-NMR.

수율: 63%; 녹는점: 269~273℃; IR(nujol mull), νmax(cm-1): 1705(C=O, COOH in pyridine), 1651(C=O, COOH in benzene); 1H-NMR (DMSO-d6): δ = 7.17 (d, 1H, J = 1.3 Hz), 8.12 (d, 1H, J = 1.4 Hz), 8.37 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 9.15 (s, 1H), 9.29 (s, 1H).Yield: 63%; Melting point: 269-273°C; IR (nujol mull), νmax (cm -1 ): 1705 (C=O, COOH in pyridine), 1651 (C=O, COOH in benzene); 1 H-NMR (DMSO-d 6 ): δ = 7.17 (d, 1H, J = 1.3 Hz), 8.12 (d, 1H, J = 1.4 Hz), 8.37 (s, 1H), 8.50 (s, 1H) , 9.15 (s, 1H), 9.29 (s, 1H).

하기 반응식 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 화합물 1(ASA-azo-NA)의 활성화 과정이다. Scheme 2 below is an activation process of compound 1 (ASA-azo-NA) according to an embodiment of the present invention.

[반응식 2][Scheme 2]

Figure 112019026354048-pat00012
Figure 112019026354048-pat00012

상기 반응식 2를 참조하면, 상기 화합물 1은 대장의 장내 미생물에 의해 활성화될 경우, 5-아미노살리실산(5-Aminosalicylic acid, 5-ASA)과 5-아미노니코틴산(5-Aminonicotinic acid, 5-ANA)으로 방출될 수 있다.Referring to Reaction Scheme 2, when Compound 1 is activated by the intestinal microflora of the large intestine, 5-aminosalicylic acid (5-ASA) and 5-aminonicotinic acid (5-ANA) Can be released.

<분석예 1> 고성능액체크로마토그래피(High Performance Liquid Chromatography; 이하, HPLC) 분석<Analysis Example 1> High Performance Liquid Chromatography (HPLC) analysis

HPLC 시스템은 306 펌프, 151 UV 측정기, 234 오토인젝터(autoinjector, Gilson)로 구성되어있다. 분석을 위한 샘플은 모두 0.45μm의 필터를 거쳐 사용하였다. HPCL의 이동상은 아세토나이트릴(acetonitrile)과 pH 7.4, 1 mM의 인산 완충용액(1.5:8.5 v/v)에 0.5 mM 테트라부틸암모늄 클로라이드(tetrabutylammonium chloride)를 첨가하여 사용하였으며, 유속은 1 mL/min로 측정하였다. 5-아미노살리실산과 5-아미노니코틴산은 각각 330 nm 및 295 nm에서 측정되었고, 체류 시간(retention time)은 각각 10.5분 및 3분이었다.The HPLC system consists of a 306 pump, 151 UV meter, and 234 autoinjector (Gilson). All samples for analysis were used through a 0.45 μm filter. The mobile phase of HPCL was used by adding 0.5 mM tetrabutylammonium chloride to acetonitrile, a pH 7.4, 1 mM phosphate buffer solution (1.5:8.5 v/v), and a flow rate of 1 mL/ It was measured in min. 5-aminosalicylic acid and 5-aminonicotinic acid were measured at 330 nm and 295 nm, respectively, and retention times were 10.5 minutes and 3 minutes, respectively.

<분석예 2> 웨스턴블럿(Immunoblot)<Analysis Example 2> Western blot (Immunoblot)

랫트의 대장 조직(0.2 g)을 차가운 RIPA 버퍼 2 mL로 균질화한 후, 얼음에서 30분 동안 인큐베이션 하였다. 이후, 균질화물을 10,000×g로 4℃에서 10분 동안 원심분리하고, 상등액의 단백질을 정량 분석한 후, SDS-PAGE 겔(gel)에 전기 영동하여 유도형 NO 생성 효소(Inducible nitric oxide synthase; 이하, iNOS) 및 사이클로옥시제나아제-2(cyclooxygenase-2; 이하, COX-2) 단백질을 관찰하였다. The colon tissue of the rat (0.2 g) was homogenized with 2 mL of cold RIPA buffer, and then incubated on ice for 30 minutes. Subsequently, the homogenate was centrifuged at 10,000×g for 10 minutes at 4° C., and the protein of the supernatant was quantitatively analyzed, followed by electrophoresis on an SDS-PAGE gel to generate an inducible nitric oxide synthase; Hereinafter, iNOS) and cyclooxygenase-2 (hereinafter referred to as COX-2) proteins were observed.

세포에서는 차가운 RIPA 버퍼로 세포를 긁어낸 후 원심 분리하여 상등액을 정량 분석하고, SDS-PAGE 겔에 전기 영동하여 iNOS 및 COX-2 단백질을 관찰하였다.In the cells, the cells were scraped off with cold RIPA buffer, centrifuged, and the supernatant was quantitatively analyzed. Electrophoresis was performed on an SDS-PAGE gel to observe iNOS and COX-2 proteins.

모든 실험은 중복 수행되었으며, α-튜불린(α-tubulin, Santa Cruz Biotechnology) 항체로 표준화하였다.All experiments were performed in duplicate, and standardized with α-tubulin (α-tubulin, Santa Cruz Biotechnology) antibody.

<분석예 3> ELISA 분석<Analysis Example 3> ELISA analysis

인터류킨 8(Interleukin 8; 이하, IL-8), 인터류킨 10(Interleukin 10; 이하, IL-10) 및 사이토카인 유발 호중구 화학 유인물질-3(cytokine-induced neutrophil chemoattractant-3; 이하, CINC-3)의 농도를 분석하기 위해, 세포의 상등액 또는 균질화한 조직의 상등액을 각각 ELISA 키트(R&D system)를 이용하여 분석하여 결과를 도출하였다.Interleukin 8 (hereinafter referred to as IL-8), Interleukin 10 (hereinafter referred to as IL-10) and cytokine-induced neutrophil chemoattractant-3 (hereinafter referred to as CINC-3) To analyze the concentration of the cells, the supernatant of the cells or the supernatant of the homogenized tissue was analyzed using an ELISA kit (R&D system) to derive the results.

<분석예 4> 통계 분석<Analysis Example 4> Statistical Analysis

통계적 유의성을 확인하기 위해 Tukey’s HSD test를 사용하였으며, 대장염 손상 지수(colon damage score, CDS)에서는 만 위트니 유 검정(Mann Whitney U test)을 사용하였다. 변수 간의 상관관계를 분석하기 위해 일원배치 분산분석을 사용하였다. 모든 데이터는 평균에 표준편차로 표현되었고, 유효성은 P < 0.05로 정의되었다.To confirm the statistical significance, Tukey's HSD test was used, and the Mann Whitney U test was used for the colon damage score (CDS). One-way ANOVA was used to analyze the correlation between variables. All data were expressed as the standard deviation of the mean, and efficacy was defined as P <0.05.

<실험예 1> 세포 배양 및 형질 주입<Experimental Example 1> Cell culture and transfection

1. 실험방법1. Experimental method

쥐 면역세포(이하, RAW 264.7 cell)를 각각 10% 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS), 1% 페니실린(penicillin) 및 스트렙토마이신(streptomycin)이 포함된 둘베코수정이글배지(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium, HyClone, UT, USA)에서 배양하였다.Dulbecco's Modified Eagle's Medium containing 10% Fetal Bovine Serum (FBS), 1% penicillin and streptomycin in rat immune cells (hereinafter RAW 264.7 cells), respectively. , HyClone, UT, USA).

RAW 264.7 세포를 6웰 플레이트에 접종한 뒤, 60% 정도 자랐을 때 NF-κB-의존적 플라스미드와 레닐라 루시페라아제 플라스미드(Renilla luciferase plasmid)를 퓨젠(Fugene, Roche, CA, USA)을 이용하여 형질 주입하였다. 그 후, 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharide; 이하, LPS)로 염증을 유도한 뒤, 5-아미노살리실산과 5-아미노니코틴산을 각각 또는 동시에 처리하여 NF-κB 루시페라아제 활성도(luciferase activity)를 측정하였다.RAW 264.7 cells were seeded in 6-well plates, and when grown to about 60%, NF-κB-dependent plasmid and Renilla luciferase plasmid were transfected with Fugene, Roche, CA, USA. . Subsequently, inflammation was induced with lipopolysaccharide (hereinafter referred to as LPS), followed by treatment of 5-aminosalicylic acid and 5-aminonicotinic acid respectively or simultaneously to measure NF-κB luciferase activity.

2. 실험결과2. Experimental results

도 2는 본 발명의 실험예 1에 따른 5-아미노살리실산 또는 5-아미노니코틴산 처리 결과이다. 2 is a result of treating 5-aminosalicylic acid or 5-aminonicotinic acid according to Experimental Example 1 of the present invention.

도 2를 참조하면, LPS로 염증을 유도한 뒤, 5-아미노살리실산과 5-아미노니코틴산을 각각 처리하였을 때, 각각의 처리 농도가 높아질수록 NF-κB 루시페라아제 활성도가 감소하는 것으로 나타났다. 또한, 상기 약물을 동시에 처리하였을 때 활성도가 크게 감소하였다.Referring to FIG. 2, after inducing inflammation with LPS, when 5-aminosalicylic acid and 5-aminonicotinic acid were treated, NF-κB luciferase activity decreased as the treatment concentration increased. In addition, the activity was significantly reduced when the drug was treated simultaneously.

도 3은 본 발명의 실험예 1의 NF-κB 외 다른 전염증성 매개 인자(iNOS, COX-2)에 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이고, 도 4는 항염증 사이토카인(IL-10)에 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이다.3 is a result of treating 5-aminonicotinic acid with other pro-inflammatory mediators (iNOS, COX-2) other than NF-κB of Experimental Example 1 of the present invention, and FIG. 4 shows anti-inflammatory cytokines (IL-10) This is the result of treating 5-aminonicotinic acid.

도 3 및 도 4를 참조하면, 5-아미노니코틴산 처리에 의해 전염증성 매개 인자 iNOS 및 COX-2는 상기 니코틴산의 처리 농도가 높아질수록 감소하는 것으로 나타났다. 또한, 항염증 사이토카인에 5-아미노니코틴산을 처리한 경우, 상기 니코틴산의 처리 농도가 높아질수록 항염증 사이토카인 IL-10의 농도는 증가하는 것으로 나타났다.Referring to FIGS. 3 and 4, it was shown that pro-inflammatory mediators iNOS and COX-2 by 5-aminonicotinic acid treatment decreased as the treatment concentration of the nicotinic acid increased. In addition, when 5-aminonicotinic acid was treated with anti-inflammatory cytokines, the concentration of anti-inflammatory cytokines IL-10 increased as the concentration of nicotinic acid increased.

<실험예 2> 칼슘 동원 테스트(Calcium mobilization test)를 통한 5-아미노니코틴산의 GPR109A의 활성화 정도 확인<Experimental Example 2> Confirmation of the degree of activation of GPR109A of 5-aminonicotinic acid through a calcium mobilization test

1. 실험방법1. Experimental method

상기 실시예 1에 따른 화합물 1(ASA-azo-NA)은 상기 반응식 2와 같이 대장의 장내 미생물에 의해 분해 및 활성화될 경우, 5-아미노살리실산과 5-아미노니코틴산으로 방출된다. 5-아미노니코틴산은 니코틴산과 구조적으로 유사하지만, 실제로 GPR109A를 활성화하는지에 관해서는 알려진 바가 없다. Compound 1 (ASA-azo-NA) according to Example 1 is released into 5-amino salicylic acid and 5-amino nicotinic acid when decomposed and activated by the intestinal microorganisms of the large intestine as shown in Reaction Scheme 2. 5-Aminonicotinic acid is structurally similar to nicotinic acid, but it is not known whether it actually activates GPR109A.

GPR109A의 활성화 정도를 확인하기 위해 GPR109A를 형질 주입시킨 햄스터 난소 세포주(Gα16-coupled CHO cell line)에 약물을 처리한 후, 칼슘 분석 키트(Fluo-4 NW calcium assay kit)를 이용하여 Ex/Em=485/525 nm에서 측정하였다.To check the activation level of GPR109A, the drug was treated with a hamster ovary cell line (Gα16-coupled CHO cell line) transfected with GPR109A, and then Ex/Em= using a Fluo-4 NW calcium assay kit. Measured at 485/525 nm.

2. 실험결과2. Experimental results


물질
matter
농도(mM)
Concentration (mM) calcium mobilization assaycalcium mobilization assay % Activation % Activation EC50 (μM)EC 50 (μM)
5-아미노니코틴산
5-aminonicotinic acid 0.020.02 52 ± 2.252 ± 2.2
18
18 0.10.1 83 ± 3.0 83 ± 3.0 0.50.5 98 ± 6.498 ± 6.4
5-아미노살리실산
5-aminosalicylic acid 1One -3.4 ± 1.1-3.4 ± 1.1
-
- 22 3.6 ± 1.43.6 ± 1.4 1010 1.6 ± 1.31.6 ± 1.3 니코틴산Nicotinic acid 0.010.01 100 ± 3.2100 ± 3.2 0.0520.052

표 1은 본 발명의 실험예 2에 따른 칼슘 동원 분석(calcium mobilization assay) 결과이다. 상기 표 1을 참조하면, 니코틴산의 활성화 정도보다는 작지만, 5-아미노니코틴산의 농도가 증가함에 따라 GPR109A가 더욱 크게 활성화되었고, 0.5 mM에서 거의 100% 활성화되는 것으로 나타났다. 따라서, 5-아미노니코틴산은 니코틴산보다 효능은 낮으나 비슷한 효력을 가지는 약물임을 확인하였다. 반면, 5-아미노살리실산은 GPR109A를 전혀 활성화하지 않는 것으로 나타났다.Table 1 shows the results of a calcium mobilization assay according to Experimental Example 2 of the present invention. Referring to Table 1, it was found that GPR109A was activated more significantly as the concentration of 5-aminonicotinic acid increased, but almost 100% activated at 0.5 mM, although it was smaller than the degree of activation of nicotinic acid. Therefore, it was confirmed that 5-aminonicotinic acid has a lower efficacy than nicotinic acid but has a similar effect. On the other hand, it was shown that 5-aminosalicylic acid does not activate GPR109A at all.

<실험예 3> GPR109A 활성화를 통한 5-아미노니코틴산의 염증 억제 효과 확인<Experimental Example 3> Confirmation of the anti-inflammatory effect of 5-aminonicotinic acid through activation of GPR109A

1. 실험방법1. Experimental method

인간 대장암 세포(이하, HCT116 cell)는 DNA 메틸트랜스퍼라아제 1(DNA methyltransferase 1; 이하, DNMT1)의 과다활동(overactivation)으로 인해 GPR109A가 억제되어있는 것으로 알려져 있다. 5-아미노니코틴산의 염증 억제 효과가 GPR109A의 활성화를 통해 나타나는지 확인하기 위해, 상기 HCT116에 DNMT1 억제제인 프로카인아미드(procainamide; 이하, PA)를 24시간 전처리한 후 GPR109A를 재활성화시킨 세포에서 5-아미노니코틴산의 염증 억제 효과를 확인하였다.Human colon cancer cells (hereinafter referred to as HCT116 cells) are known to inhibit GPR109A due to overactivation of DNA methyltransferase 1 (hereinafter referred to as DNMT1). In order to confirm whether the anti-inflammatory effect of 5-aminonicotinic acid appears through the activation of GPR109A, the cells were re-activated with GPR109A after pre-treatment with the DNMT1 inhibitor procainamide (hereinafter referred to as PA) for 24 hours in the HCT116 5- The anti-inflammatory effect of aminonicotinic acid was confirmed.

상기 HCT116 세포를 10% 우태아혈청(FBS), 1% 페니실린 및 스트렙토마이신이 포함된 둘베코수정이글배지(DMEM, HyClone, UT, USA)에서 배양하였다.The HCT116 cells were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM, HyClone, UT, USA) containing 10% fetal calf serum (FBS), 1% penicillin and streptomycin.

먼저, PA를 처리할 경우 GPR109A가 활성화 되는지 확인하기 위해, PCR 실험을 통해 GPR109A의 mRNA가 증가하는지 확인하였다.First, in order to confirm that GPR109A is activated when PA is processed, it was confirmed whether the mRNA of GPR109A is increased through a PCR experiment.

그리고나서, 상기 HCT116 세포를 6웰 플레이트에 접종한 뒤, 60% 정도 자랐을 때, NF-κB-의존적 플라스미드와 레닐라 루시페라아제 플라스미드(Renilla luciferase plasmid)를 퓨젠(Fugene, Roche, CA, USA)을 이용하여 형질 주입하였다. 그 후, DNMT1 억제제인 PA를 24시간 전처리하여 GPR109A를 재활성화시킨 후, 종양 괴사 인자 알파(tumor necrosis factor-alpha; 이하, TNF-α)로 염증을 유도한 뒤, 5-아미노살리실산과 5-아미노니코틴산을 각각 또는 동시에 처리하여 NF-κB 루시페라아제 활성도(luciferase activity)를 측정하였다.Then, when the HCT116 cells were inoculated into a 6-well plate and grown to about 60%, NF-κB-dependent plasmid and Renilla luciferase plasmid were used in Fugene, Roche, CA, USA. Was transfected. Subsequently, the DNMT1 inhibitor PA was pre-treated for 24 hours to reactivate GPR109A, and then induced inflammation with tumor necrosis factor-alpha (hereinafter referred to as TNF-α), followed by 5-aminosalicylic acid and 5- Aminonicotinic acid was treated individually or simultaneously to measure NF-κB luciferase activity.

2. 실험결과2. Experimental results

도 5는 본 발명의 실험예 3에 따른 인간 대장암 세포(HCT116)에 프로카인아미드(PA)를 처리한 PCR 실험 결과이다. 도 5를 참조하면, 상기 HCT116 세포에 PA를 24시간 처리하면, 억제되어있는 GPR109A mRNA가 다시 재활성화되는 것으로 나타났다.5 is a result of a PCR experiment in which procainamide (PA) was treated on human colon cancer cells (HCT116) according to Experimental Example 3 of the present invention. Referring to FIG. 5, when the HCT116 cells were treated with PA for 24 hours, it was shown that the suppressed GPR109A mRNA is reactivated.

도 6은 본 발명의 실험예 3에 따른 NF-κB에 5-아미노니코틴산을 처리 결과이고, 도 7은 다른 전염증성 매개 인자인 인터류킨 8(IL-8)에 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이다. 6 is a result of treating 5-aminonicotinic acid on NF-κB according to Experimental Example 3 of the present invention, and FIG. 7 is a result of treating 5-aminonicotinic acid on interleukin 8 (IL-8), another pro-inflammatory mediator. .

도 6 및 도 7을 참조하면, HCT116 세포에 PA를 24시간 전처리 후 TNF-α로 염증을 유도한 뒤 5-아미노니코틴산을 처리하였을 때, 처리하지 않은 군에서는 NF-κB 루시페라아제 활성도가 감소하지 않았지만, PA를 처리하여 GPR109A를 활성화시킨 군에서는 NF-κB 루시페라아제 활성도가 농도 의존적으로 감소하는 것으로 나타났다. 또한, 5-아미노니코틴산 처리에 의해 전염증성 매개 인자인 IL-8 역시 감소하는 것으로 나타났다.6 and 7, when 5-aminonicotinic acid was treated after induction of inflammation with TNF-α after 24 hours pre-treatment of PA in HCT116 cells, NF-κB luciferase activity was not decreased in the untreated group. , In the group treated with PA to activate GPR109A, NF-κB luciferase activity was found to decrease in a concentration-dependent manner. In addition, IL-8, a pro-inflammatory mediator, was also decreased by 5-aminonicotinic acid treatment.

도 8은 본 발명의 실험예 3에 따른 NF-κB에 5-아미노살리실산 또는 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이고, 도 9는 IL-8에 5-아미노살리실산 또는 5-아미노니코틴산을 처리한 결과이다. HCT116 세포에 PA를 24시간 전처리 후 TNF-α로 염증을 유도한 뒤, 5-아미노살리실산 또는 5-아미노니코틴산을 처리하여 NF-κB 루시페라아제 활성도 및 IL-8을 확인하였다.8 is a result of treating 5-aminosalicylic acid or 5-aminonicotinic acid on NF-κB according to Experimental Example 3 of the present invention, and FIG. 9 is a result of treating 5-aminosalicylic acid or 5-aminonicotinic acid on IL-8. to be. After 24 hours pre-treatment of PA in HCT116 cells, inflammation was induced with TNF-α, followed by treatment with 5-aminosalicylic acid or 5-aminonicotinic acid to confirm NF-κB luciferase activity and IL-8.

도 8 및 도 9를 참조하면, PA를 전처리하여 GPR109A를 재활성화시킨 군에 상기 5-아미노살리실산 및 5-아미노니코틴산을 동시에 처리한 경우에 NF-κB 루시페라아제의 활성도가 더 크게 감소하는 것으로 나타났고, IL-8 또한 PA를 전처리한 군에 상기 5-아미노살리실산 및 5-아미노니코틴산을 동시에 처리한 경우, 상기 5-아미노살리실산 또는 5-아미노니코틴산을 각각 처리한 군보다 더 크게 감소하는 것으로 나타났다.8 and 9, it was found that the activity of NF-κB luciferase was significantly reduced when the 5-aminosalicylic acid and 5-aminonicotinic acid were simultaneously treated in the group in which PA was pre-treated to reactivate GPR109A. , IL-8 It was also found that when the 5-aminosalicylic acid and 5-aminonicotinic acid were simultaneously treated in the group pre-treated with PA, the 5-aminosalicylic acid or 5-aminonicotinic acid group was significantly reduced.

<실험예 4> 소장 및 대장 내용물에서 화합물 1(ASA-azo-NA)의 활성 확인<Experimental Example 4> Confirmation of the activity of compound 1 (ASA-azo-NA) in the small and large intestine contents

1. 실험방법1. Experimental method

생체 외 실험에서 SD rat를 희생한 후 회음 절개하여 소장 내용물 및 대장 내용물을 얻어 이를 질소백 안에서 인산 완충용액((phosphate-buffered saline; PBS)에 녹여 50% 현탁액을 제조하였다. 제조한 소장 및 대장 내용물 현탁액에 각각 대장 표적성 프로드럭인 화합물 1과 설파살라진(sulfasalazine; 이하, SSZ)을 넣은 후 시간별로 용액을 얻어 20,000×g로, 4℃에서 10분 동안 원심분리한 후 상등액을 메탄올로 희석하고 HPLC로 분석하여 활성화 정도를 확인하였다.After sacrificing the SD rat in an in vitro experiment, perineal incision was obtained to obtain the contents of the small intestine and the contents of the large intestine, which was dissolved in a phosphate-buffered saline (PBS) in a nitrogen bag to prepare a 50% suspension. After adding the colon targeting prodrug compound 1 and sulfasalazine (hereinafter, SSZ) to the contents suspension, a solution was obtained hourly, centrifuged at 20,000×g for 10 minutes at 4° C., and the supernatant was diluted with methanol. The degree of activation was confirmed by analysis by HPLC.

2. 실험결과2. Experimental results

도 10은 본 발명의 실험예 4에 따른 화합물 1의 활성화 정도를 나타낸 그래프이다. 도 10을 참조하면, 화합물 1이 소장 내용물과 혼합되었을 경우에는 분해되지 않고 안정하여 5-아미노살리실산이 방출되지 않았지만, 대장 내용물에서는 시간이 지남에 따라 화합물 1이 분해 및 활성화되어 2시간 후 47.1%, 6시간 경과 후 87.8%의 5-아미노살리실산이 방출되는 것으로 나타났다.10 is a graph showing the degree of activation of Compound 1 according to Experimental Example 4 of the present invention. Referring to FIG. 10, when compound 1 was mixed with the small intestine contents, it did not decompose and was stable and 5-aminosalicylic acid was not released, but in the large intestine contents, compound 1 was decomposed and activated over time, and 47.1% after 2 hours. , After 6 hours, 87.8% of 5-aminosalicylic acid was released.

도 11 및 도 12는 생체 내 실험에서의 화합물 1의 활성화 정도를 나타낸 그래프이다. 도 11 및 도 12를 참조하면, 하기 후술될 생체 내 실험에서 상기 화합물 1을 랫트에 경구 투여한 후 2, 4 및 6시간 후 확인한 결과, 시간이 지날수록 검출량은 감소했지만, 대장에서 5-아미노살리실산이 시간대마다 검출되었다. 특히, 2시간 경과한 경우에는 상기 화합물 1을 처리한 경우에 SSZ를 처리한 경우보다 더 많은 5-아미노살리실산이 활성화되는 것으로 나타났다. 또한, 혈액 검사를 통해 혈액에서 흡수된 5-아미노니코틴산의 농도를 살펴보면, 혈액 내에서는 5-아미노니코틴산이 검출되지 않았다.11 and 12 are graphs showing the degree of activation of compound 1 in an in vivo experiment. 11 and 12, in the in vivo experiment to be described below, the compound 1 was orally administered to the rat and confirmed after 2, 4, and 6 hours. As a result, the detection amount decreased with time, but 5-amino in the large intestine. Salicylic acid was detected every hour. In particular, when 2 hours have elapsed, it was found that more 5-aminosalicylic acid is activated when Compound 1 is treated than when SSZ is treated. In addition, when looking at the concentration of 5-aminonicotinic acid absorbed in the blood through a blood test, 5-aminonicotinic acid was not detected in the blood.

세포 실험을 통해 확인한 5-아미노살리실산과 5-아미노니코틴산의 상호보완적인 효과가 실제 생체 내 실험에서도 재연되는지 확인하기 위해, 랫트 모델과 마우스 모델에서 각각 생채 내 실험을 진행하였다. In order to confirm whether the complementary effect of 5-aminosalicylic acid and 5-aminonicotinic acid confirmed through cell experiments is reproduced in an actual in vivo experiment, experiments were carried out in a rat model and a mouse model, respectively.

<실험예 5> DNBS로 대장염을 유도한 랫트 모델에서의 화합물 1(ASA-azo-NA)의 활성 확인<Experimental Example 5> Confirmation of the activity of compound 1 (ASA-azo-NA) in a rat model inducing colitis with DNBS

1. 실험방법1. Experimental method

7주령 수컷 SD rat(250~260 g)를 샘타코에서 구입하여 부산대학교 약학대학 실험동물센터에서 적절한 온도, 습도 및 밤낮 사이클을 조절하여 수용하였다. 동물 실험은 부산대학교 실험동물윤리위원회의 승인을 받아 도덕적인 절차를 통해 진행하였다(승인번호: PNU-2017-1525). 7-week-old male SD rats (250-260 g) were purchased from Samtaco and accommodated by adjusting the appropriate temperature, humidity, and day and night cycles at the College of Pharmacy Lab Animal Center, Pusan National University. Animal experiments were conducted through a moral procedure with the approval of the Pusan National University Animal Experimental Ethics Committee (approval number: PNU-2017-1525).

먼저, 랫트 모델에서는 디니트로벤젠술폰산(dinitrobenzenesulfonic acid; 이하, DNBS)으로 대장염을 유도한 후 약효를 확인하는 실험을 진행하였다. 랫트의 대장염을 유도를 위해 실험하기 하루 전부터 공복을 유지하였고 가볍게 이소플루렌(isoflurane)으로 마취한 후 고무 캐뉼라를 이용해 직장으로부터 8 cm 부근에 DNBS(48 mg/0.4 mL/rat)를 주입하고, 3일 후부터 약물을 7 일간 경구 투여하여 약효를 확인하였다. First, in the rat model, after inducing colitis with dinitrobenzenesulfonic acid (hereinafter, DNBS), an experiment was conducted to confirm the efficacy. For the induction of colitis in rats, fasting was maintained one day prior to the experiment and lightly anesthetized with isoflurane, followed by injection of DNBS (48 mg/0.4 mL/rat) 8 cm from the rectum using a rubber cannula. After 3 days, the drug was orally administered for 7 days to confirm drug efficacy.

랫트는 정상군, DNBS 대조군, 화합물 1(ASA-azo-NA, 21.6 mg/kg, 30 mg/kg의 설파살라진과 동등한 5-아미노살리실산 포함) 투여군, 설파살라진(30 mg/kg) 투여군, 단순히 물리적으로 5-아미노살리실산 및 5-아미노니코틴산을 혼합한 약물(PMT)군으로 구분하고, 각각 5마리의 랫트를 가지고 실험하였다. 7일 동안 약물을 투여한 후 랫트를 해부하여 웨스턴블럿(immunoblot) 및 ELISA를 통해 항염증 효과 및 대장염 개선 효과를 확인하였다. Rats were normal group, DNBS control group, compound 1 (ASA-azo-NA, 21.6 mg/kg, 30 mg/kg of 5-aminosalicylic acid equivalent to sulfasalazine) administration group, sulfasalazine (30 mg/kg) administration group, simply physically It was divided into a group of drugs (PMT) in which 5-aminosalicylic acid and 5-aminonicotinic acid were mixed, and experiments were conducted with 5 rats each. After administration of the drug for 7 days, the rats were dissected to confirm the anti-inflammatory effect and the effect of improving colitis through Western blot and ELISA.

2. 실험결과2. Experimental results

도 13은 본 발명의 실험예 5에 따른 랫트 모델의 조직 사진이다.13 is a tissue picture of a rat model according to Experimental Example 5 of the present invention.

도 13을 참조하면, 차례로 정상군, DNBS 대조군(이하, DNBS), 화합물 1(이하, ASA-azo-NA) 투여군, 설파살라진(이하, SSZ) 투여군, 단순히 물리적으로 5-아미노살리실산과 5-아미노니코틴산을 혼합한 약물(이하, PMT)군 처리한 랫트의 장막(serosal) 및 내강(luminal)을 나타내고, 이를 통해 정상군 외의 실험군에서 염증의 발생을 확인할 수 있었다.Referring to Figure 13, in turn, the normal group, DNBS control group (hereinafter, DNBS), compound 1 (hereinafter, ASA-azo-NA) administration group, sulfasalazine (hereinafter, SSZ) administration group, simply 5-amino salicylic acid and 5-amino physically Drugs containing nicotinic acid (hereinafter referred to as PMT) group treated rats (serosal) and lumen (luminal), through which it was possible to confirm the occurrence of inflammation in the experimental group other than the normal group.

도 14는 본 발명의 실험예 5에 따른 대장염 손상 지수(CDS) 분석 그래프이다. 대장염 손상 지수(colon damage score, CDS)는 염증의 크기, 붓기, 출혈 및 협착 유무를 0~5점까지 부여한 후 수치화한 것으로, 보다 상세하게는 정상(0점); 충혈이 존재하나 궤양이 없는 상태(1점); 선형 궤양이 존재하나 염증은 없는 상태(2점); 2-4 cm 크기의 염증 및 궤양이 형성되어있는 상태(3점); 다른 기관과 장막 유착, 2-4 cm 크기의 염증 및 궤양이 존재하는 상태(4점); 협착, 심각한 장고리를 수반한 장막 유착, 4 cm 이상의 염증 부위 및 궤양화(5점)로 각각 평가하였다.14 is a graph of colitis damage index (CDS) analysis according to Experimental Example 5 of the present invention. The colon damage score (CDS) was quantified after giving the size of inflammation, swelling, bleeding, and stenosis to 0-5 points, more specifically normal (0 points); Hyperemia, but no ulceration (1 point); Linear ulcers present but no inflammation (2 points); 2-4 cm sized inflammation and ulceration (3 points); Semantic adhesions with other organs, 2-4 cm sized inflammation and ulceration (4 points); It was evaluated by stenosis, intestinal adhesions with severe intestinal rings, inflamed areas over 4 cm and ulceration (5 points).

도 14를 참조하면, 대장염 손상 지수로 평가하였을 때, PMT군은 거의 효과가 없는 것으로 나타났고, ASA-azo-NA군이 SSZ군보다 확연히 낮은 대장염 손상 지수를 나타내었다.Referring to FIG. 14, when evaluated by the colitis damage index, the PMT group showed little effect, and the ASA-azo-NA group showed a significantly lower colitis damage index than the SSZ group.

도 15는 본 발명의 실험예 5에 따른 미엘로퍼옥시다아제(MPO) 분석 그래프이다. 염증의 정도를 확인할 수 있는 미엘로퍼옥시다아제 분석(myeloperoxidase assay, 이하, MPO)에서, MPO 활성의 1 단위(unit)는 25℃에서 분당 과산화물 1 μmol 분해를 의미한다.15 is a myeloperoxidase (MPO) analysis graph according to Experimental Example 5 of the present invention. In myeloperoxidase assay (hereinafter referred to as MPO), which can confirm the degree of inflammation, one unit of MPO activity means 1 μmol peroxide decomposition at 25°C.

도 15를 참조하면, PMT군은 MPO 단위의 감소가 없는 반면, ASA-azo-NA군 및 SSZ군의 경우 염증의 정도가 개선되었으며, 특히 ASA-azo-NA군은 SSZ군보다 낮은 MPO 단위를 나타내었다.15, the PMT group does not have a decrease in MPO units, while the degree of inflammation is improved in the ASA-azo-NA group and SSZ group, in particular, the ASA-azo-NA group has a lower MPO unit than the SSZ group. Shown.

도 16 내지 도 18은 본 발명의 실험예 5에 따른 웨스턴블럿 및 ELISA 분석 결과이다. 도 16 내지 도 18을 참조하면, 전염증성 매개 인자인 iNOS, COX-2의 단백질 양은 PMT군에서 DNBS군과 큰 차이를 보이지 않았고, ASA-azo-NA군과 SSZ군에서는 많이 감소한 것으로 나타났으며, 특히 ASA-azo-NA군이 SSZ군보다 더 감소한 것으로 나타났다. 또한, 전염증 사이토카인 CINC-3 역시 PMT군은 DNBS군과 큰 차이를 보이지 않았고, ASA-azo-NA군이 SSZ군보다 염증 매개 인자의 수치를 훨씬 떨어뜨렸다.16 to 18 are Western blot and ELISA analysis results according to Experimental Example 5 of the present invention. 16 to 18, the proinflammatory mediators iNOS, COX-2 protein amount did not show a significant difference from the DNBS group in the PMT group, the ASA-azo-NA group and SSZ group showed a significant decrease. , In particular, the ASA-azo-NA group was more reduced than the SSZ group. In addition, the proinflammatory cytokine CINC-3 also showed no significant difference from the PMT group in the DNBS group, and the ASA-azo-NA group significantly lowered the level of inflammatory mediators than the SSZ group.

추가적으로, DNBS로 염증을 유도한 뒤 대장에서의 항염증 사이토카인 IL-10 농도를 확인한 결과. SSZ군에서는 검출되지 않았으나 ASA-azo-NA군에서는 IL-10의 농도가 현저히 증가하는 것으로 나타났다.Additionally, after inducing inflammation with DNBS, the result of confirming the anti-inflammatory cytokine IL-10 concentration in the large intestine. Although it was not detected in the SSZ group, the concentration of IL-10 was significantly increased in the ASA-azo-NA group.

<실험예 6> DNBS로 대장염을 유도한 랫트 모델에서의 화합물 1(ASA-azo-NA)의 GPR109A 활성화를 통한 치료 효과 확인<Experimental Example 6> Confirmation of the therapeutic effect through GPR109A activation of Compound 1 (ASA-azo-NA) in a rat model inducing colitis with DNBS

1. 실험방법1. Experimental method

7주령 수컷 SD rat(250~260 g)를 샘타코에서 구입하여 부산대학교 약학대학 실험동물센터에서 적절한 온도, 습도 및 밤낮 사이클을 조절하여 수용하였다. 동물 실험은 부산대학교 실험동물윤리위원회의 승인을 받아 도덕적인 절차를 통해 진행하였다(승인번호: PNU-2017-1525). 7-week-old male SD rats (250-260 g) were purchased from Samtaco and accommodated by adjusting the appropriate temperature, humidity, and day and night cycles at the College of Pharmacy Lab Animal Center, Pusan National University. Animal experiments were conducted through a moral procedure with the approval of the Pusan National University Animal Experimental Ethics Committee (approval number: PNU-2017-1525).

먼저, 랫트 모델에서는 디니트로벤젠술폰산(DNBS)으로 대장염을 유도한 후 약효를 확인하는 실험을 진행하였다. 랫트의 대장염을 유도를 위해 실험하기 하루 전부터 공복을 유지하였고 가볍게 이소플루렌(isoflurane)으로 마취한 후 고무 캐뉼라를 이용해 직장으로부터 8 cm 부근에 DNBS(48 mg/0.4 mL/rat)를 주입하고, 3일 후부터 약물을 7 일간 경구 투여하여 약효를 확인하였다. First, in the rat model, after inducing colitis with dinitrobenzenesulfonic acid (DNBS), an experiment was conducted to confirm its efficacy. For the induction of colitis in rats, fasting was maintained one day prior to the experiment and lightly anesthetized with isoflurane, followed by injection of DNBS (48 mg/0.4 mL/rat) 8 cm from the rectum using a rubber cannula. After 3 days, the drug was orally administered for 7 days to confirm drug efficacy.

랫트는 정상군, DNBS 대조군, 화합물 1(ASA-azo-NA, 21.6 mg/kg, 30 mg/kg의 설파살라진과 동등한 5-아미노살리실산 포함) 투여군, 설파살라진(30 mg/kg, 이하 SSZ) 투여군, ASA-azo-NA와 GPR109A 길항제 메펜졸레이트(mepenzolate; 이하, MPN) 혼합한 약물 투여군, 설파살라진과 MPN을 혼합한 약물 투여군, MPN 투여군으로 나누고, 각각 5마리의 랫트를 가지고 실험하였다. 7일 동안 약물을 투여한 후 랫트를 해부하여 웨스턴블럿(immunoblot) 및 ELISA를 통해 항염증 효과 및 대장염 개선 효과를 확인하였다. Rats were normal group, DNBS control group, compound 1 (ASA-azo-NA, 21.6 mg/kg, 30 mg/kg of 5-aminosalicylic acid equivalent to sulfasalazine), sulfasalazine (30 mg/kg, SSZ), ASA-azo-NA and GPR109A antagonist mefenzolate (mepenzolate; hereinafter, MPN) was divided into a drug-administered group, a sulfasalazine-MPN-mixed drug-administered group, and an MPN-administered group, and tested with 5 rats each. After administration of the drug for 7 days, the rats were dissected to confirm the anti-inflammatory effect and the effect of improving colitis through Western blot and ELISA.

2. 실험결과2. Experimental results

도 19는 본 발명의 실험예 6에 따른 랫트 모델의 조직 사진이다.19 is a tissue picture of a rat model according to Experimental Example 6 of the present invention.

도 19를 참조하면, 차례로 정상군, DNBS 대조군, ASA-azo-NA 투여군, SSZ 투여군, ASA-azo-NA와 MPN을 혼합 투여한 약물군, SSZ와 MPN을 혼합 투여한 약물군, MPN을 단독 처리한 군의 랫트의 장막(serosal) 및 내강(luminal)을 나타내고, 이를 통해 정상군 외의 실험군에서 염증의 발생을 확인하였다.Referring to FIG. 19, in turn, the normal group, DNBS control group, ASA-azo-NA administration group, SSZ administration group, ASA-azo-NA and MPN mixture administration group, SSZ and MPN combination administration group, and MPN alone treatment The rats of the group showed serosal and luminal, and through this, the occurrence of inflammation was confirmed in the experimental groups other than the normal group.

도 20은 본 발명의 실험예 6에 따른 대장염 손상 지수(CDS) 분석 그래프이다. 도 20을 참조하면, ASA-azo-NA의 대장염 개선 효과가 MPN과 혼합 투여한 경우, ASA-azo-NA 투여군에 비해 대장염 손상 지수가 확연히 증가함으로써 그 치료 효과가 현저히 감소된 것으로 나타났다. 반면에, 설파살라진의 대장염 손상 지수는 MPN의 투여 여부와 상관없이 비슷한 정도의 지수를 보이는 것으로 나타났다.20 is a graph of colitis damage index (CDS) analysis according to Experimental Example 6 of the present invention. Referring to FIG. 20, when the effect of improving the colitis of ASA-azo-NA was mixed with MPN, the therapeutic effect was significantly reduced by significantly increasing the colitis damage index compared to the ASA-azo-NA administration group. On the other hand, the colitis damage index of sulfasalazine was found to have a similar index regardless of whether or not MPN was administered.

도 21은 본 발명의 실험예 6에 따른 미엘로퍼옥시다아제(MPO) 분석 그래프이다. 도 21을 참조하면, MPO 수치에서 ASA-azo-NA의 염증 개선 효과가 MPN을 동시에 처리한 군에서는 확연히 감소한 것으로 나타난 반면에, SSZ군에서는 MPN 처리 여부와 상관없이 비슷한 정도의 염증 개선 효과를 나타내었다.21 is a myeloperoxidase (MPO) analysis graph according to Experimental Example 6 of the present invention. Referring to FIG. 21, in the MPO level, the effect of improving the inflammation of ASA-azo-NA was significantly decreased in the group simultaneously treated with MPN, while the SSZ group showed a similar effect of improving inflammation regardless of whether MPN was treated. Did.

도 22 내지 도 24는 본 발명의 실험예 6에 따른 웨스턴블럿 및 ELISA 분석 결과이다. 도 22 내지 도 24를 참조하면, 전염증성 매개 인자인 iNOS, COX-2의 단백질 양은 MPN 단독 투여군과 DNBS 대조군에서 큰 차이를 보이지 않았고, ASA-azo-NA군에서 확연한 감소를 보였으나, ASA-azo-NA를 MPN과 혼합 투여한 군에서는 감소효과가 줄어든 것으로 나타났다. 반면에, SSZ는 MPN 투여와 상관없이 비슷하게 감소하는 것으로 나타났다. 또한, 전염증 사이토카인 CINC-3 역시 MPN군과 DNBS군에서는 큰 차이를 보이지 않았고, ASA-azo-NA군의 감소 효과는 MPN에 의해 억제된 반면에, SSZ는 MPN 투여와 상관없이 일정하게 염증 매개 인자의 수치를 떨어뜨렸다.22 to 24 are the results of Western blot and ELISA analysis according to Experimental Example 6 of the present invention. 22 to 24, the proinflammatory mediators iNOS, COX-2 protein amount did not show a significant difference in the MPN-only administration group and the DNBS control group, and showed a marked decrease in the ASA-azo-NA group, but ASA- In the group administered with azo-NA mixed with MPN, the reduction effect was decreased. On the other hand, SSZ was shown to decrease similarly regardless of MPN administration. In addition, the proinflammatory cytokine CINC-3 also did not show a significant difference in the MPN and DNBS groups, and the reduction effect of the ASA-azo-NA group was suppressed by MPN, whereas SSZ was constantly inflamed irrespective of MPN administration. The level of the parameter was dropped.

추가적으로, DNBS로 염증을 유도한 뒤 대장에서의 항염증 사이토카인 IL-10 농도를 확인한 결과, ASA-azo-NA의 IL-10 증가 효과가 MPN에 의해 억제되는 것으로 나타났으나, SSZ군에서는 검출되지 않았다.Additionally, as a result of inducing inflammation with DNBS and confirming the anti-inflammatory cytokine IL-10 concentration in the large intestine, it was found that the IL-10 increase effect of ASA-azo-NA is inhibited by MPN, but detected in the SSZ group Did not.

<실험예 7> DSS로 소장관 염증을 유도한 마우스 모델에서의 화합물 1(ASA-azo-NA)의 활성 확인<Experimental Example 7> Confirmation of activity of compound 1 (ASA-azo-NA) in a mouse model inducing small intestinal tract inflammation with DSS

1. 실험방법1. Experimental method

8주령 마우스(32~35 g)에 덱스트란 소듐 설페이트(dextran sodium sulfate; 이하, DSS)를 음용수에 3%로 희석하여 7일 동안 투여하여 염증을 유도하였고, 7일 후 약물을 7일 동안 경구 투여하여 실험을 진행하였다. 마우스는 정상군, DSS 대조군, ASA-azo-NA 투여군, SSZ 투여군으로 나누고, 군당 8마리씩 실험을 진행하였다. 약효를 확인하기 위해, DSS로 염증을 유도한 후 마우스의 생존율, 대장의 길이 감소 억제 효과를 통해 약효를 평가하였다.Eight weeks old mice (32-35 g) were diluted with 3% dextran sodium sulfate (DSS) in drinking water for 3 days to induce inflammation, and after 7 days, the drug was orally administered for 7 days The experiment was conducted by administration. The mice were divided into a normal group, a DSS control group, an ASA-azo-NA administration group, and an SSZ administration group, and 8 experiments were performed per group. To confirm the drug efficacy, after inducing inflammation with DSS, the drug efficacy was evaluated through the survival rate of the mouse and the inhibitory effect of reducing the length of the large intestine.

2. 실험결과2. Experimental results

도 25는 본 발명의 실험예 7에 따른 마우스의 몸무게 변화 그래프이다.25 is a graph showing a change in body weight of a mouse according to Experimental Example 7 of the present invention.

도 25를 참조하면, ASA-azo-NA를 투여한 마우스는 투여 종료 후 93.5%까지 몸무게를 유지한 반면, DSS 대조군에서는 88.8%, SSZ 투여군은 81.7%로 나타나, ASA-azo-NA 투여군이 DSS로 인한 몸무게 감소가 가장 낮은 것을 확인하였다.Referring to FIG. 25, mice administered ASA-azo-NA maintained weight up to 93.5% after the end of administration, whereas 88.8% in the DSS control group and 81.7% in the SSZ administration group, and the ASA-azo-NA administration group was DSS It was confirmed that the weight loss due to was the lowest.

도 26은 본 발명의 실험예 7에 따른 마우스의 질병 활동성 지표(disease activity index, DAI)이다. 도 26을 참조하면, 7일 동안 투여한 DSS로 인해 증가된 질병 활동성 지표가 ASA-azo-NA를 투여한 군에서는 0.06으로 나타난 반면, DSS 대조군은 0.46, SSZ 투여군은 0.85로 나타나 ASA-azo-NA 투여군에서 확연히 뛰어난 질병 활동성 지표 감소 효과를 확인하였다.26 is a disease activity index (disease activity index, DAI) of the mouse according to Experimental Example 7 of the present invention. Referring to FIG. 26, the increased disease activity index due to DSS administered for 7 days was 0.06 in the group administered with ASA-azo-NA, while the DSS control group was shown to be 0.46, and the SSZ-administered group was 0.85, indicating ASA-azo- In the NA-administered group, it was confirmed that the excellent disease activity index reduction effect was excellent.

도 27은 본 발명의 실험예 7에 따른 마우스의 생존율 그래프이다.27 is a graph of survival rates of mice according to Experimental Example 7 of the present invention.

도 27을 참조하면, ASA-azo-NA를 투여한 경우, 약물 투여 종료 후 66.6%가 생존한 반면, DSS 대조군은 33%, SSZ 투여군은 25%로 나타나, ASA-azo-NA 투여군이 확연히 뛰어난 생존율을 보임을 확인하였다.Referring to FIG. 27, when ASA-azo-NA was administered, 66.6% survived after drug administration, whereas the DSS control group was 33% and the SSZ administration group was 25%, and the ASA-azo-NA administration group was significantly superior. The survival rate was confirmed.

도 28은 본 발명의 실험예 7에 따른 마우스의 대장의 조직 사진이고, 도 29는 상기 대장의 길이를 수치화한 그래프이다.28 is a photograph of the tissue of the large intestine of a mouse according to Experimental Example 7 of the present invention, and FIG. 29 is a graph quantifying the length of the large intestine.

도 28 및 도 29를 참조하면, 정상군의 평균길이가 10.3 cm인 반면에, DSS 대조군은 7.16 cm까지 길이가 감소하였으나, ASA-azo-NA군과 SSZ군은 각각 8.08 cm, 8.15 cm로 비슷한 정도로 나타나, 대장의 길이가 줄어드는 것을 예방할 수 있었다. 28 and 29, the average length of the normal group was 10.3 cm, while the DSS control group was reduced to 7.16 cm in length, but the ASA-azo-NA and SSZ groups were similar to 8.08 cm and 8.15 cm, respectively. It appeared to the extent that the length of the large intestine could be prevented.

<비교예 1> 5-{4-[2-(디에틸아미노)에틸]카르바모일페닐아조}살리실산(5-{4-[2-(diethylamino)ethyl]carbamoylphenylazo}salicylic acid; 5-ASA-azo-PA)<Comparative Example 1> 5-{4-[2-(diethylamino)ethyl]carbamoylphenylazo}salicylic acid (5-{4-[2-(diethylamino)ethyl]carbamoylphenylazo}salicylic acid; 5-ASA- azo-PA)

1. 5-ASA-azo-PA 화합물 합성1. Synthesis of 5-ASA-azo-PA compounds

하기 반응식 3과 같은 과정으로 5-ASA-azo-PA 화합물을 합성하였다.5-ASA-azo-PA compounds were synthesized in the same manner as in Scheme 3 below.

[반응식 3][Scheme 3]

Figure 112019026354048-pat00013
Figure 112019026354048-pat00013

상기 반응식 3을 참조하면, 프로카인아미드(PA) HCl(2 mmol)을 차가운 18% 염산 3 mL에 용해시키고 아질산나트륨(NaNO2, 4 mmol)을 첨가한 후, 술팜산(2 mmol)을 첨가하기 전에 4℃에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 용액에 0.1 M NaOH(3 ml)에 용해시킨 살리실산(6 mmol)을 첨가하고 4℃에서 1시간 동안 교반한 후, 실온에서 6시간 동안 반응시켰다. 반응기간 동안 pH는 9-10으로 적용시켰다. 침전물을 여과하고 에탄올/아세톤(1:1)로 세 번 세척한 후 진공 건조기에서 건조시켰다.Referring to Reaction Scheme 3, procainamide (PA) HCl (2 mmol) was dissolved in 3 mL of cold 18% hydrochloric acid, sodium nitrite (NaNO 2 , 4 mmol) was added, and then sulfamic acid (2 mmol) was added. It was stirred for 1 hour at 4 ℃ before. Salicylic acid (6 mmol) dissolved in 0.1 M NaOH (3 ml) was added to the solution, stirred at 4° C. for 1 hour, and reacted at room temperature for 6 hours. During the reaction period, pH was applied to 9-10. The precipitate was filtered, washed three times with ethanol/acetone (1:1) and dried in a vacuum dryer.

수율: 75%; mp: 258-260℃; IR(nujol mull), γmax(cm-1): 1628(C=O, carboxylic), 1654(C=O, amide); 1H-NMR (DMSO-d6): δ = 1.21 (t, 6H, J = 15.5 Hz), 3.27 (m, 6H), 3.63 (q, 2H, J = 11 Hz), 6.78 (d, 2H, J = 18 Hz), 7.79 (dd, 1H, J 1 = 18 Hz, J 2 = 5 Hz), 7.83 (d, 2H, J = 16.5 Hz), 8.0 (d, 2H, J = 16.5 Hz), 8.21 (d, 1H, J = 5 Hz), 8.8 (t, 1H, J = 11 Hz). ESI-MS m/z 385.1873 [M+H]+, 407.1694 [M+Na]+.Yield: 75%; mp: 258-260°C; IR (nujol mull), γ max (cm -1 ): 1628 (C=O, carboxylic), 1654 (C=O, amide); 1 H-NMR (DMSO-d 6 ): δ = 1.21 (t, 6H, J = 15.5 Hz), 3.27 (m, 6H), 3.63 (q, 2H, J = 11 Hz), 6.78 (d, 2H, J = 18 Hz), 7.79 (dd, 1H, J 1 = 18 Hz, J 2 = 5 Hz), 7.83 (d, 2H, J = 16.5 Hz), 8.0 (d, 2H, J = 16.5 Hz), 8.21 (d, 1H, J = 5 Hz), 8.8 (t, 1H, J = 11 Hz). ESI-MS m/z 385.1873 [M+H] + , 407.1694 [M+Na] + .

하기 반응식 4는 본 발명의 비교예 1에 따른 5-ASA-azo-PA의 활성화 과정이다.Scheme 4 below is an activation process of 5-ASA-azo-PA according to Comparative Example 1 of the present invention.

[반응식 4][Scheme 4]

Figure 112019026354048-pat00014
Figure 112019026354048-pat00014

상기 반응식 4를 참조하면, 5-ASA-azo-PA는 대장의 장내 미생물에 의해 활성화될 경우, 5-아미노살리실산(5-Aminosalicylic acid, 5-ASA)과 프로카인아미드(Procainamide, PA)로 방출될 수 있다.Referring to Reaction Scheme 4, 5-ASA-azo-PA is released by 5-aminosalicylic acid (5-ASA) and procainamide (PA) when activated by the intestinal microflora of the large intestine. Can be.

2. 5-ASA-azo-PA의 염증 매개 인자 억제에 따른 항염증 효과 확인2. Confirmation of anti-inflammatory effect of 5-ASA-azo-PA according to inhibition of inflammatory mediators

도 30은 본 발명의 비교예 1에 따른 화합물의 생체 내 활성화 후 생성되는 약물들을 세포에 처리하여 염증 매개 인자 억제 효과를 확인한 것으로, (A)는 NF-κB 의존적 루시페라아제 플라스미드와 CMV 레닐라 루시페라아제 플라스미드를 동시에 감염시킨 대장암 세포 HCT116에 5-아미노살리실산(5-ASA)(10mM) 및 프로카인아미드(PA)(10 mM)를 단독 또는 복합 존재하에서 TNF-α 10 ng/ml를 6시간 동안 처리하고 리포터 활성을 확인하여 CMV 레닐라 루시페라아제 활성을 통하여 표준화한 결과이고(*: P < 0.05; **: P < 0.01 vs. TNF-α 단독 처리군; #: P < 0.05), (B)는 5-ASA(10 mM) 및 PA(10 mM)를 단독 또는 복합 존재하에서 TNF-α(10ng/ml)를 처리하여 6시간 동안 자극된 HCT116 세포 상층액에서 IL-8의 수준을 확인한 결과이며(*: P < 0.05 vs. TNF-α 단독 처리군; **: P < 0.01 vs. TNF-α 단독처리군; #: P < 0.05.), (C)는 RAW 264.7 세포를 5-ASA(10 mM) 및 PA(10 mM)를 단독 또는 복합 존재하에서 LPS로 4시간 동안 자극시킨 RAW 264.7 세포 용해물에서 iNOS 및 COX-2 단백질 수준을 확인한 결과이다.30 is to confirm the effect of inhibiting the inflammatory mediators by treating the cells produced after in vivo activation of the compound according to Comparative Example 1 of the present invention, (A) is NF-κB-dependent luciferase plasmid and CMV Renilla luciferase plasmid TNF-α 10 ng/ml treated with 5-aminosalicylic acid (5-ASA) (10 mM) and procainamide (PA) (10 mM) alone or in complex in colon cancer cell HCT116 infected with the same for 6 hours And the reporter activity was confirmed and normalized through CMV Renilla luciferase activity (*: P <0.05; **: P <0.01 vs. TNF-α alone treatment group; #: P <0.05), (B) is It is a result of confirming the level of IL-8 in HCT116 cell supernatant stimulated for 6 hours by treating TNF-α (10 ng/ml) in the presence of 5-ASA (10 mM) and PA (10 mM) alone or in combination ( *: P <0.05 vs. TNF-α alone treated group; **: P <0.01 vs. TNF-α alone treated group; #: P <0.05.), (C) shows 5-ASA (10) RAW 264.7 cells This is a result of confirming iNOS and COX-2 protein levels in RAW 264.7 cell lysates stimulated with LPS for 4 hours in the presence of either mM or PA (10 mM) alone or in combination.

도 30을 참조하면, (A)와 같이 TNF-α는 루시페라아제 활성을 9.6배 증가시킨 반면, PA 또는 5-ASA가 처리된 실험군에서는 TNF-α에 의한 루시페라아제 유도가 약화되었으며, PA 및 5-ASA를 함께 처리한 실험군에서는 뚜렷한 부가적 억제가 확인되었다. 또한, (B) 및 (C)와 같이 5-ASA 및 PA를 복합처리한 경우, TNF-α에 의해 유도되는 IL-8 및 호중구 화학주성인자의 분비와 LPS에 의한 COX-2 및 iNOS 유도가 감소되는 것을 확인할 수 있었다.Referring to FIG. 30, as shown in (A), TNF-α increased luciferase activity by 9.6-fold, whereas in the experimental group treated with PA or 5-ASA, induction of luciferase by TNF-α was weakened, and PA and 5-ASA In the experimental group treated with, a significant additional inhibition was confirmed. In addition, when 5-ASA and PA were complexed as in (B) and (C), secretion of IL-8 and neutrophil chemotaxis induced by TNF-α and COX-2 and iNOS induction by LPS It was confirmed that the decrease.

즉, 세포 기반 실험에서 5-ASA 및 PA를 복합처리한 경우, 염증 매개 인자가 억제됨을 확인할 수 있었고, 이러한 실험 결과가 생체 내(in vivo)에서도 나타나는지 확인하였다.That is, when 5-ASA and PA were complexed in a cell-based experiment, it was confirmed that the inflammatory mediators were inhibited, and it was confirmed whether the results of these experiments also appeared in vivo.

3. 5-ASA-azo-PA의 대장염 치료 효과 확인3. Confirming the effectiveness of 5-ASA-azo-PA treatment for colitis

도 31은 본 발명의 비교예 1에 따른 화합물의 대장염 치료 효과를 분석한 그래프로, (A)는 대장염 손상 지수(CDS)를 분석한 그래프이며, (B)는 미엘로퍼옥시다아제(MPO) 분석 그래프이다. FIG. 31 is a graph analyzing the effect of treating the colitis of the compound according to Comparative Example 1 of the present invention, (A) is a graph analyzing the colitis damage index (CDS), and (B) is a myeloperoxidase (MPO) analysis graph to be.

도 31을 참조하면, (A)의 그래프에서 5-ASA-azo-PA 및 SSZ의 대장염 손상 지수가 낮게 나타났으며, 두 약물 사이에서는 통계적으로 유의한 대장염 손상 지수의 차이는 나타나지 않았다. 또한, (B)의 그래프에서 5-ASA-azo-PA 및 SSZ는 TNBS대조군보다 낮은 MPO수치를 나타냄을 확인했으며, 두 약물 사이에서는 통계적으로 유의한 MPO수치의 차이는 나타나지 않았다.Referring to FIG. 31, in the graph of (A), 5-ASA-azo-PA and SSZ had a low colitis damage index, and there was no statistically significant difference between the two drugs. In addition, in the graph of (B), it was confirmed that 5-ASA-azo-PA and SSZ showed lower MPO values than the TNBS control group, and there was no statistically significant difference in MPO values between the two drugs.

도 32는 본 발명의 비교예 1에 따른 화합물의 대장 염증 개선 효과를 분석한 것으로, (C)는 대장암 유도 물질인 트리니토로벤젠설포닉산(Trinitrobenzenesulfonic acid; 이하, TNBS)으로 염증이 유도된 랫트에 pH 6.8 PBS(500μl)에 5-ASA-azo-PA(28.9mg/kg, 30 mg/kg의 설파살라진과 동등한 5-아미노살리실산 포함) 또는 SSZ(30mg/kg)을 하루에 한 번씩 경구로 투여하고 약물 처리 7일 후 염증성 대장에서 IL-6의 수준을 확인한 결과이고, (D)는 상기 과정으로 약물 처리 7일 후 염증성 대장에서 CINC-3의 수준을 확인한 결과이며, (E)는 상기 과정으로 약물 처리 7일 후 염증성 대장에서 COX-2 및 iNOS의 수준을 확인한 결과이다 (*: P < 0.05; **: P < 0.01 vs. TNBS 대조군).Figure 32 is an analysis of the effect of improving the inflammation of the colon of the compound according to Comparative Example 1 of the present invention, (C) is a rat induced inflammation with trinitrobenzenebenzene sulfonic acid (Trinitrobenzenesulfonic acid; hereinafter, TNBS) To pH 6.8 PBS (500 μl), 5-ASA-azo-PA (28.9 mg/kg, 30 mg/kg of 5-aminosalicylic acid equivalent to sulfasalazine) or SSZ (30 mg/kg) administered orally once a day And 7 days after drug treatment is the result of confirming the level of IL-6 in the inflammatory colon, (D) is the result of confirming the level of CINC-3 in the inflammatory colon 7 days after drug treatment with the above procedure, (E) is the above procedure As a result, the levels of COX-2 and iNOS were confirmed in the inflammatory colon 7 days after drug treatment (*: P <0.05; **: P <0.01 vs. TNBS control).

도 32를 참조하면, (C), (D) 및 (E)와 같이 염증이 유도된 대장에서 IL-6, CINC-3, iNOS 및 COX-2의 수준이 급격히 증가된 반면, 5-ASA-azo-PA와 설파살라진을 처리한 실험군의 염증 매개자의 수준이 감소된 것을 확인할 수 있었다. 그러나 위의 도 30에서 5-ASA와 PA를 동시에 처리한 세포에서 두 약물의 상가적 염증 억제 효과를 확인하였으나, 5-ASA-azo-PA와 설파살라진의 염증 억제 효과에서는 기대와는 달리 동물 실험에서는 두 약물 사이에 통계적인 유의성을 가지는 염증 억제 효과의 차이가 나타내지 않았다.Referring to FIG. 32, levels of IL-6, CINC-3, iNOS, and COX-2 in the colon where inflammation was induced, such as (C), (D), and (E), were rapidly increased, whereas 5-ASA- It was confirmed that the level of inflammatory mediators in the experimental group treated with azo-PA and sulfasalazine was reduced. However, in FIG. 30 above, the additive anti-inflammatory effect of the two drugs was confirmed in cells treated with 5-ASA and PA at the same time, but the anti-inflammatory effect of 5-ASA-azo-PA and sulfasalazine did not meet the expectations in animal experiments. There was no difference in the anti-inflammatory effect with statistical significance between the two drugs.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.Since the specific parts of the present invention have been described in detail above, for those skilled in the art, it is obvious that this specific technique is only a preferred embodiment, and the scope of the present invention is not limited thereby. Do. That is, the substantial scope of the present invention is defined by the appended claims and their equivalents.

Claims (10)

하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
[화학식 1]
Figure 112019026354048-pat00015
A compound represented by Formula 1 below, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[Formula 1]
Figure 112019026354048-pat00015
 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
[화학식 1]
Figure 112019026354048-pat00016
A pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease comprising a compound represented by the following Chemical Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
[Formula 1]
Figure 112019026354048-pat00016
 제 2 항에 있어서,
상기 화합물 또는 이의 염은,
대장에서 장내 미생물의 효소에 의해 분해되어 활성화되는 대장 표적성 프로드럭인 것을 특징으로 하는, 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.According to claim 2,
The compound or salt thereof,
A pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease, characterized in that it is a large intestine targeted prodrug that is decomposed and activated by an enzyme of an intestinal microorganism in the colon. 제 2 항에 있어서,
상기 화합물 또는 이의 염은,
대장에서 하기 화학식 2 및 화학식 3의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염으로 분해되는 것을 특징으로 하는, 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
[화학식 2]
Figure 112019026354048-pat00017

[화학식 3]
Figure 112019026354048-pat00018
According to claim 2,
The compound or salt thereof,
A pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease, characterized in that in the large intestine is decomposed into a compound of Formula 2 and Formula 3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[Formula 2]
Figure 112019026354048-pat00017

[Formula 3]
Figure 112019026354048-pat00018
 제 4 항에 있어서,
상기 화학식 2 및 상기 화학식 3의 화합물 또는 이의 염은,
대장에서 각각 활성화되어 상호 보완적으로 작용하는 것을 특징으로 하는, 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.The method of claim 4,
The compound of Formula 2 and Formula 3 or a salt thereof,
Each activated in the large intestine, characterized in that acts complementarily, pharmacological composition for the prevention or treatment of inflammatory bowel disease. 제 2 항에 있어서,
상기 화합물 또는 이의 염은,
NF-κB, IL-8, iNOS 및 COX-2로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 염증 매개 인자의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는, 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.According to claim 2,
The compound or salt thereof,
NF-κB, IL-8, iNOS and COX-2, characterized in that to reduce the expression of one or more inflammatory mediators selected from the group consisting of, pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease. 제 2 항에 있어서,
상기 화합물 또는 이의 염은,
항염증 사이토카인 IL-10의 활성을 증가시키는 것을 특징으로 하는, 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.According to claim 2,
The compound or salt thereof,
A pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatory bowel disease, characterized by increasing the activity of the anti-inflammatory cytokine IL-10. 제 2 항에 있어서,
상기 염증성 장질환은,
궤양성 대장염, 크론병, 교원성 대장염, 림프성 대장염, 허혈성 대장염, 전환성 대장염 및 베체트 증후군으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.According to claim 2,
The inflammatory bowel disease,
A pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory bowel disease, characterized in that it is selected from the group consisting of ulcerative colitis, Crohn's disease, collagen colitis, lymphoid colitis, ischemic colitis, metastatic colitis and Behcet's syndrome. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 염증성 장질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
[화학식 1]
Figure 112019026354048-pat00019
A health functional food composition for preventing or improving inflammatory bowel disease comprising a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
[Formula 1]
Figure 112019026354048-pat00019
 제 9 항에 있어서,
상기 염증성 장질환은,
궤양성 대장염, 크론병, 교원성 대장염, 림프성 대장염, 허혈성 대장염, 전환성 대장염 및 베체트 증후군으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 염증성 장질환 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.The method of claim 9,
The inflammatory bowel disease,
A ulcerative colitis, Crohn's disease, collagen colitis, lymphoid colitis, ischemic colitis, metabolic colitis, and Behcet syndrome, characterized in that the group selected from the group consisting of, inflammatory bowel disease prevention or improvement health functional food composition.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160099720A (en) 2014-01-10 2016-08-22 시그모이드 파마 리미티드 Compositions for use in the treatment of ulcerative colitis

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KIM, W. 등, Molecular Pharmaceutics, 2016, 제13권, 제6호, 페이지 2126-2135 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114790204A (en) * 2021-01-26 2022-07-26 成都贝诺科成生物科技有限公司 Compound for preventing and treating intestinal diseases and medicinal composition thereof
CN114790204B (en) * 2021-01-26 2024-05-03 成都贝诺科成生物科技有限公司 Compound for preventing and treating intestinal diseases and pharmaceutical composition thereof

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