KR102106813B1 - 양파 추출물을 포함하는 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법 및 그에 따라 제조된 조성물에 관한 것으로, 건조양파를 에탄올에 침적시켜 양파 추출물을 획득하는 제1 단계; 양파 추출물을 여과하는 제2 단계; 여과된 양파 추출물을 농축시키는 제3 단계; 농축액을 고형분 함량 5~20중량%가 되도록 용해하는 제4 단계; 용해액을 헥산으로 1차 분획한 다음 에틸 아세테이트로 2차 분획하여 용해액내의 비극성 성분을 제거하는 제5 단계; 및 분획물을 감압 농축시켜 양파 추출 파우더를 얻는 제6 단계;로 제조되는 양파 추출 파우더를 포함하는 것이 특징이며, 양파 특유의 취는 제거하면서도 자외선에 노출된 피부의 손상을 예방하고 손상된 피부의 재생을 촉진하는 효능을 갖는다.

Description

양파 추출물을 포함하는 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 및 그 제조방법{Compositions for preventing skin damage and accelerating skin regeneration containing Allium cepa Extracts}

본 발명은 양파 추출물을 포함하는 피부 손상 예방 및 피부 재생용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 양파 특유의 취는 제거하면서도 양파 추출물에 함유된 스피레오시드(spiraeoside)의 함량을 개선하여 자외선에 노출된 피부의 손상을 예방하고 손상된 피부의 재생을 촉진하는 양파 추출물을 포함하는 피부 손상 예방 및 피부 재생용 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

피부 노화의 주된 요인으로 꼽히는 광노화는 피부에 생기는 대부분의 미용 및 의학적 문제의 원인이 되고 있다.

이러한 광노화의 경우 내인성 노화에 비해 피부결이 거칠고 보다 더 건조하며 피부 탄력은 현저하게 감소하여 처지고, 깊은 피부 주름과 자반 및 피지선 과형성과 같은 병변도 흔히 관찰된다. 광노화가 일어난 피부는 표피의 두께가 처음에는 조금 증가되다가 나중에는 내인성 노화 때보다 더 얇아지고 각질세포의 형태와 배열이 비정상적으로 된다. 랑게르한스세포의 수도 더욱 감소되어 국소적인 면역 기능의 저하가 심해진다. 멜라닌 세포의 경우 숫자는 감소되지만 세포의 활성은 불규칙하게 증가되어 피부에 저색소반과 과색소반이 얼룩으로 혼재하는 양상을 보이게 되고 악성 종양의 발생 가능성이 현저하게 높아지게 된다.

또한 광노화가 일어난 피부는 내인성 노화 피부에 비하여 진피 기질의 아교질 양이 더욱 더 감소되어 있다. 진피의 3~4%를 차지하는 탄력소는 그 수와 직경이 감소하고 길이가 짧아지며 석회화가 일어난다. 더욱이, 광노화가 일어난 진피에서는 진피 상부에 변형된 탄력섬유성 물질(elastotic material)이 광범위하게 침착되어 있으며 진피 기질의 점다당질(mucopolysaccharide) 중 hyaluronic acid의 감소가 현저하여 피부의 긴장도가 떨어지게 된다. 진피 두께의 감소와 그 구성 성분의 변화는 피부 탄력의 감소를 초래하여 외관상 처지거나 굵게 주름진 피부로 보이게 한다.

이와 같은 광노화를 일으키는 햇빛의 파장대는 자외선 영역이다. 일광화상은 주로 자외선B(UVB, 290-320 nm)에 의하여 발생되는 것으로 피부 내 DNA 손상이 일어나고 그로 인해 광노화에 대한 증상이 나타나게 된다.

따라서 자외선에 의한 DNA 손상을 줄여주는 화장품 원료를 개발하는 것이 요구된다. DNA가 있는 미토콘드리아는 신경세포인 아포프토시스 세포(apoptotic cell death) 사멸 및 괴사세포(necrotic cell) 사멸에 중요한 역할을 한다. Programmed cell death의 초기단계 특징이 바로 활성화된 미토콘드리아의 붕괴이며 이는 기저막 전위의 변화, 미토콘드리아의 산화환원전위(oxidation-reduction potential)의 변화와 같은 현상으로 나타난다. 이러한 초기 세포자멸(apoptosis) 현상인 미토콘드리아의 세포막간 전위(mitochondrial transmembrane potential)의 변화는 미토콘드리아 내부의 전기화학전위(electrochemical potential)에 민감한 형광색소(fluorochrome)를 사용하여 측정할 수 있는데 녹색 형광 시아닌염료(green fluorescent cyanine dye)인 JC-1이 가장 널리 사용되는 염료로 진핵세포(eukaryotic cell)의 시토졸내로 침투하여 전위에 따라 미토콘드리아에 축적되게 된다. 축적시 JC- 1은 green(~529 nm)으로부터 red(~590 nm)로 fluorescence emission shift가 일어나게 되며 결과적으로 미토콘드리아 분극이 일어나게 되면 red/green fluorescence intensity ratio가 감소하게 된다.

더욱이, 피부를 구성하는 가장 바깥부분인 외피세포는 끊임없이 벗겨져 제거되고, 그 밑에서 자라나는 다른 세포들이 그 자리를 대신하는 과정이 계속되고 있다. 따라서 외부의 자극에 의해 피부 손상이 일어났을 때 상처 치유가 곧바로 일어나게 되는데 표피와 진피의 손상으로 기저막이 노출되어 있으면서 표피가 소실된 상처는 상처표면이 선홍색을 띠게된다.

손상된 피부에서 새로운 결체조직을 형성하는 것으로는 새로운 혈관 생성과 콜라겐 합성과정이 있다. 콜라겐 합성(collagen synthesis)과정에서는 섬유아세포(fibroblast)는 콜라겐 합성 및 기타 결체 조직 형성에서 가장 중요한 세포이므로 상처 복구 과정에서도 중요한 역할을 한다. 섬유아세포는 혈소판, 대식세포 등에 의해 염증기에 생성된 산물과 성장 인자 등에 반응하여 움직이고 증식하며 염증기 후반부에 상처에 나타나기 시작한다. 일차 치유양식에 의한 상처치유는 아주 소량의 교원질만으로도 손상 받은 부위를 채울 수 있으며 교원질 합성이 표피세포 이동과 거의 동시에 발생한다.

이에 본 출원인은 세포 스크래치 검정법(cell scratch assay)으로 일정한 출발점을 만든 다음 본 발명에 따라 제조된 시료 처리 후 시간이 지남에 따라 세포가 얼마나 자라나는지를 현미경으로 관찰하는 실험을 수행함으로써, 자외선에 노출된 피부의 손상을 예방하고 손상된 피부의 재생을 촉진하는 양파 추출물을 개발하게 된 것이다.

대한민국 공개특허 제10-2004-0012913호

따라서, 본 발명의 목적은 양파 특유의 취는 제거하면서도 양파 추출물에 함유된 스피레오시드(spiraeoside)의 함량을 개선하여 자외선에 노출된 피부의 손상을 예방하고 손상된 피부의 재생을 촉진하는 양파 추출물을 포함하는 피부 손상 예방 및 피부 재생용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 해결하기 위하여, 본 발명에 따른 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법은,

건조양파를 에탄올에 침적시켜 양파 추출물을 획득하는 제1 단계; 양파 추출물을 여과하는 제2 단계; 여과된 양파 추출물을 농축시키는 제3 단계; 농축액을 고형분 함량 5~20중량%가 되도록 용해하는 제4 단계; 및 용해액을 헥산으로 1차 분획한 다음 에틸 아세테이트로 2차 분획하여 용해액내의 비극성 성분을 제거하는 제5 단계;를 포함하여 제조되는 양파 추출물을 포함한다.

또한, 본 발명에 따른 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법은,

분획물을 감압 농축시켜 양파 추출 파우더를 얻는 제6 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.

여기서, 상기 제1 단계의 양파 추출물을 획득은,

건조양파를 양파:에탄올= 1:5 중량비율로 95% 에탄올에 상온에서 1~5일 동안 침적시켜 추출하는 특징으로 한다.

또한, 상기 제2 단계의 여과는, 메시크기 0.1~10㎛를 가진 여과기로 추출하는 특징으로 한다.

또한, 상기 제3 단계의 농축은, 양파 추출물을 40~70℃ 온도에서 농축시켜 제조하는 특징으로 한다.

또한, 상기 제6 단계는, 상기 분획물을 40~100℃ 온도에서 40~550Torr로 감압하고 농축시켜 양파 추출 파우더를 얻는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 따른 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법으로 제조된 양파 추출 파우더는 취 개선 효능과 함께 스피레오시드 함량이 10.0 중량% ~ 40.0 중량% 인 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명에 따른 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물을 함유하는 화장품을 제공한다.

또한, 본 발명에 따른 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 화장품은 조성물의 양파 추출 파우더를 10~40% BG에 용해시킨 것인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물은 함량 또는 사용 방법에 따라, 에센스, 로션, 크림, 워시오프 (Wash-Off) 또는 리브온 (Leave-On) 제품 외에도 기존의 제품에 보습을 부여할 수 있는 또 다른 카테고리의 적용이 가능한 보습 및 보습유지 화장료의 첨가물로써의 이용이 가능하다.

본 발명에 따른 화장품은 로션이나 입술 메이크업용 뿐만 아니라 통상적인 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 각 제형에는 일반적으로 배합되는 유연화제나 향료, 색소, 산화방지제, pH조절제 등의 첨가제가 적절하게 사용될 수 있음은 물론이다.

본 발명에 의하여 제공되는 양파 추출물은 양파 특유의 취는 제거하면서도 자외선에 노출된 피부의 손상을 예방하고 손상된 피부의 재생을 촉진하는 효능을 갖는다.

도 1은 본 발명에 따라 제조된 제1 실시예의 양파 추출 파우더의 독성 실험결과를 나타낸 그래프,
도 2는 도 1에 대응되는 지표물질인 스피레오시드의 독성 실험결과를 나타낸 그래프,
도 3은 본 발명에 따라 제조된 양파 추출 파우더 및 지표 물질인 스피레오시드를 control 대조군과 UVB 50mJ 처리군을 비교하여 염색된 정도를 비교한 사진자료,
도 4는 제2 실시예의 양파 추출 파우더 및 스피레오시드의 독성 실험결과를 나타낸 비교그래프,
도 5 내지 도 15는 양파 추출 파우더 및 지표물질인 스피레오시드의 세포 재생 촉진 효능을 관찰자료로서, 도 5는 control, 도 6은 FBS 2%, 도 7은 양파 추출 파우더 25㎍/㎖, 도 8은 양파 추출 파우더 50㎍/㎖, 도 9는 양파 추출 파우더 100㎍/㎖, 도 10은 양파 추출 파우더 250㎍/㎖, 도 11은 스피레오시드 0.15㎍/㎖, 도 12는 스피레오시드 0.3㎍/㎖, 도 13은 스피레오시드 0.6㎍/㎖, 도 14는 스피레오시드 1.5㎍/㎖, 도 15는 스피레오시드 3㎍/㎖ 처리된 것이다.

이하, 본 발명을 하기 도면과 실시예 및 실험예에 의해 상세하게 설명한다. 하기 도면이나 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 의해 한정되는 것이 아님은 물론이다. 또한, 효능 측정을 위한 실험과정에서 통상적인 측정실험에 대한 설명은 생략하였다.

1. 광노화 효능 평가 실험방법

1-1. 세포독성 평가(MTT assay)

양파 추출물의 광노화 효능을 검증하기 위하여, 24-well plate 에 각질형성세포(HaCaT)를 접종하여 24 시간 배양한 뒤, 배양된 세포의 배지를 serum free 배지로 교체하고 시료를 농도별로 처리하여 24 시간 배양한다. 배양이 끝난 세포에 2.5 mg/ml 의 MTT 용액을 10배 희석시킨 배지로 교체하여 반응시킨 후 상등액을 제거하고 DMSO 1 ml 을 첨가하여 생성된 MTT-formazan 결정체를 용해시켜 ELISA reader로 570 nm 에서 흡광도를 측정한다. 세포 독성은 대조군과 비교하여 흡광도의 백분율로 나타낸다.

1-2. JC-1 staining (JC-1 염색)

미토콘드리아의 세포막 전위변화를 검증하기 위해, 각질세포(Human keratinocyte)를 35 mm plate 에 분주하여 24 시간 안정화한 후, serum-free medium 으로 교체하고 샘플을 처리한다. 1시간 뒤, HBSS(Hank's Balanced Salt solution)버퍼로 세척후 fresh HBSS 를 첨가한 뒤 UVB 50 mJ/㎠ 을 조사한다. Serum-free medium 으로 배지를 교체한 뒤 시료를 처리하여 37°C, 5% CO₂ incubator 에서 24 시간 배양한다. 배지 제거 후 1 μg/ml 의 JC-1 solution 을 처리하여 37°C, 5% CO₂ incubator 에서 빛이 없는 상태로 2 시간 반응시킨 뒤 배지를 제거하고 형광 현미경으로 관찰한다.

1-3. 사용기기 및 시약

① ELISA reader: Infinite M200 (Tecan, Austria), ② MTT: Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (M5655, Sigma-Aldrich), ③ RNA 정량: Qubit® fluoremeter with RNA BR Assay kit (Invitrogen, USA),④ cDNA 합성: High Capacity RNA-to-cDNA kit (Applied Biosystems, USA), ⑤ Real-Time PCR: 7500 Fast with Power SYBR Green PCR master mix (Applied Biosystems, USA), ⑥ JC-1 dye(Invitrogen), ⑦ Leica 현미경

1-4. 취 개선 양파 추출 파우더 샘플 제조 방법 및 추출물내 지표물질인 스피레오시드 함량분석 방법

양파 추출물의 취 개선을 검증하고, 추출물 내 스피레오시드 함량 분석을 하기 위해 아래의 방법으로 샘플을 제조하고 분석했다.

1-5. 시료제조

양파 추출물에 사용될 양파를 선정하여 세척하고 건조시킨다.

그런 다음, 건조양파를 95%의 에탄올에 양파:에탄올= 1:5, 바람직하게는 1:2의 중량 비율로 상온에서 1~5일, 바람직하게는 2일 동안 침적시켜 양파 추출물을 획득한다.

다음, 메시크기 0.1~10㎛, 바람직하게는 1㎛의 메시크기를 가진 여과기로 양파 추출물을 여과시킨다.

여과된 양파 추출물을 대략 40~70℃, 바람직하게는 60℃ 온도에서 농축시켜 농축액을 제조한다.

제조된 농축액을 정제수를 이용하여 고형분 함량 5~20중량%, 바람직하게는 10중량%가 되도록 용해시켜 용해액을 제조한다.

제조된 용해액을 헥산으로 1 내지 6회, 바람직하게는 3회 이상 분획하여 양파 추출물의 용해액내의 취 원인으로 알려진 비극성 성분인 휘발성 성분을 제거한 다음, 에틸 아세테이트로 1 내지 4회, 바람직하게는 2회 이상 재차 분획하여 양파 추출물의 용해액내에 남아 있는 비극성 성분을 제거함으로써, 전체 시료함량 중 스피레오시드의 추출 함량이 많아지도록 한다.

이와 같이 에틸 아세테이트로 분획되어 얻은 분획물을 대략 40~100℃, 바람직하게는 50~60℃, 가징 바람직하게는 55℃ 온도에서 대략 40~550Torr로 감압한 상태에서 농축시켜 양파 추출 파우더를 얻었다.

1-6. 지표물질인 스피레오시드 제조

또한, 비교시료로써, 지표물질인 스피레오시드 1,000ppm을 30% BG(butylene glycol)에 가온시켜 용해한 후, 0.1~0.3㎛, 바람직하게는 0.22㎛ 메시크기의 여과기로 여과한 여과물을 사용하였다.

여과된 스피레오시드 2.1 mg을 50 mL 용량 플라스크에 MeOH를 넣어 녹인 용액을 표준용액으로 한다.

또한, 테스트 용액은 양파 추출 파우더 50 mg을 MeOH에 완전히 녹인 후 0.45 ㎛로 Filter 한 것을 검체로 한다.

여기서, 함량 분석 조건은 다음과 같다.

Column : Capcell Pak C18 4.6 ⅹ 250mm (Shiseido HPLC column)

Flow rate : 1.0 mL/min

Detection : UV 280 nm

Temp : 30°C

Injection volume : 20 Ul

Analysis time : 30 min

Mobile phase : ACN·정제수·초산 (250:750:1)

1-7. 실험결과

에탄올로 추출하여 얻은 양파 추출 파우더, 에틸 아세테이트로 분획하여 얻은 양파 추출 파우더, 및 헥산으로 1차 분획한 다음 에틸 아세테이트로 2차 분획하여 얻은 양파 추출 파우더의 스피레오시드의 함량에 대한 실험결과는 표1과 같다.

시료	스피레오시드 함량 (ppm)
95%EtOH 파우더	4,500ppm =>0.45%
제2 분획 파우더 (함량개선)	112,000ppm =>11.2%
제1,2 분획 파우더 (함량개선, 취 개선)	358,000ppm =>35.8%

표 1에 나타난 바와 같이, 95% EtOH로 추출한 파우더의 경우, 스피레오시드 함량이 0.45% 였고 양파 고유의 취를 가지고 있었다. 에틸 아세테이트로 제2 분획한 양파 추출 파우더의 경우, 스피레오시드 함량이 11.2% 였고, 취는 많이 개선 되지 않았다. 반면, 헥산으로 1차 분획 후, 에틸 아세테이트로 2차 분획한 파우더는 취 개선과 함께 스피레오시드 함량이 35.8%로 유효 성분 수치가 가장 높았다.

이와 같이 제조된 양파 추출 파우더를 화장료에 사용하는 경우, 제형에 따라 파우더 타입 원료 사용이 용이하지 않은 경우가 있어, 취를 제거한 파우더를 액상 형태로 가공하는 실험을 진행하였다.

이를 위해, 취를 개선한 양파 추출 파우더를 10~40% BG, 바람직하게는 30% 부틸렌 글리콜(BG)과 헥산디올(Hexanediol)에 각각 용해하였고, 그 결과를 아래 표2에 나타내었다.

시료	스피레오시드 함량 (ppm)
제1,2 분획파우더	358,000ppm =>35.8%
제1,2 분획파우더 30%BG-solution type	1,030ppm =>0.103%
제1,2 분획파우더 Hexanediol-solution type	90ppm =>0.009%

표 2에 도시된 바와 같이, 30% BG에 용해했을 때가 Hexanediol에 용해했을 때 보다 약 11배 높은 수치의 스피레오시드가 검출됨을 확인 하였다.

따라서, 화장품의 제형에 따라 취를 개선한 양파 추출 파우더 혹은 해당 파우더를 30% BG에 용해시킨 제품 사용이 가능할 것으로 판단된다.

취를 개선한 양파 추출 파우더를 시료로 하여 아래의 테스트를 진행했다.

1-7-1. 세포 독성 테스트(MTT Assay)

JC-1 staining 에 앞서, 각질형성세포(HaCaT)를 이용하여 독성 평가를 진행하였다. 실험결과는 표3 및 도 1과 도 2에 나타내었다.

표 3 및 도1, 도2에 표기된 바와 같이, 양파 추출 파우더 전 농도에서 독성이 검출되지 않았다. 따라서, 양파 추출 파우더 50, 100, 250, 500 ㎍/㎖의 농도로 실험을 진행하였고, 지표성분인 스피레오시드도 양파 추출물 내 함유량에 따라 0.3, 0.6, 1.5, 3 ㎍/㎖의 농도에 맞춰 실험을 진행하였다.

1-7-2. JC-1 staining

양파 추출 파우더 및 지표 물질인 스피레오시드를 control(미처리)과 대조군인 UVB 50mJ 처리군과 비교하여 염색된 정도를 도 3에 비교사진으로 나타내었다.

도 3에 나타난 바와 같이, 전 농도에서 UVB 처리군 보다 살아있는 세포에 염색되는 붉은 형광이 증가하는 것으로 보이며, 고농도보다 저농도에서 높은 광보호 효능이 관찰되었다.

따라서, 양파 추출 파우더 및 스피레오시드는 고농도보다 저농도에서 UVB에 의한 세포사멸을 저해하는 효능이 높은 것으로 판단된다.

2. 상처 치유 효능 평가 실험방법

2-1. 세포독성평가 (MTT assay)

양파 추출물의 피부 재생을 촉진시킴에 따른 상처 치유 효능을 검증하기 위하여, 24-well plate에 섬유아세포(human fibroblast)를 접종하여 24시간 배양한 뒤, 배양된 세포의 배지를 serum-free 배지로 교체하고 시료를 농도별로 처리하여 24시간 배양한다. 배양이 끝난 세포에 2.5 mg/ml의 MTT 용액을 10배 희석시킨 배지로 교체하여 반응시킨 후 상등액을 제거하고 DMSO 1 ml을 첨가하여 생성된 MTT-formazan 결정체를 용해시켜 ELISA reader로 570 nm에서 흡광도를 측정한다. 세포 독성은 대조군과 비교하여 흡광도의 백분율로 나타낸다.

2-2. Wound healing assay

60mm plate에 Fibroblast를 접종하여 24시간 배양한다. 배양 후 일직선으로 scraping 하고 serum-free 배지로 교체하면서 시료를 농도별로 처리한다. 3일 또는 6일간 배양한 후 현미경(Leica)으로 세포사진을 촬영한다.

2-3. 사용기기 및 시약

① ELISA reader: Infinite M200 (Tecan, Austria), ② MTT: Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (M5655, Sigma-Aldrich), ③ Scraper(NUNC), Leica 현미경

2-4. 시료 정보

양파 추출 파우더는 상술한 광노화 효능평가에서 제조한 것을 사용하였으며, 디메틸 설폭사이드(DMSO[dimethyl sulfoxide])를 용매로 사용하였다.

스피레오시드는 제조사(EXTRASYNTHESE)에서 구매한 것을 사용하였으며, 마찬가지로 디메틸 설폭사이드(DMSO[dimethyl sulfoxide])를 용매로 사용하였다.

2-5. 테스트 결과

2-5-1. 세포 독성 테스트(MTT Assay)

양파 추출 파우더 및 스피레오시드에 관한 독성 테스트 결과는 아래 표 4 및 도 4에 나타내었다.

표 4 및 도 4에 나타난 바와 같이, 양파 추출 파우더 및 스피레오시드 전 농도에서 독성이 검출되지 않아, 양파 추출 파우더 25, 50, 100, 250, 500 ㎍/㎖의 농도 및 이에 대응되는 지표물질인 스피레오시드 0.15, 0.5, 0.6, 1.5, 3 ㎍/㎖로 migration 테스트를 진행하였다.

2-5-2. Cell migration 테스트

양파 추출 파우더 및 지표물질인 스피레오시드의 세포 재생 촉진 효능을 관찰하기 위하여 wound healing assay를 진행하고 그 결과를 농도별로, 그리고 Day1, Day2, Day3, Day4, Day7자 별로 나누어 순차적으로 도 5 내지 도 16에 나타냈다.

여기서, 도 5는 control에 대한 것이고, 도 6은 FBS(Fetal bovine serum) 2%처리된 것이고, 도 7은 양파 추출 파우더 25㎍/㎖, 도 8은 양파 추출 파우더 50㎍/㎖, 도 9는 양파 추출 파우더 100㎍/㎖, 도 10은 양파 추출 파우더 250㎍/㎖, 도 11은 스피레오시드 0.15㎍/㎖, 도 12는 스피레오시드 0.3㎍/㎖, 도 13은 스피레오시드 0.6㎍/㎖, 도 14는 스피레오시드 1.5㎍/㎖, 도 15는 스피레오시드 3㎍/㎖ 처리된 것이다.

도 5 내지 도 16에 도시된 바와 같이, 실험결과 스피레오시드는 농도의존적으로 migration 효능이 관찰 되었으며, 양파 추출 파우더는 전 농도 migration 효능이 나타나며, 특히 50, 100 ㎍/㎖ 농도에서 positive control인 FBS 2%와 비슷한 수준의 세포 재생 촉진 효능이 관찰되었다.

따라서, 양파 추출 파우더와 스피레오시드는 상처가 발생하였을 때 세포 재생을 촉진하는 효능이 있는 것으로 판단된다.

비록 본 발명이 상기에서 언급한 바람직한 실시예와 관련하여 설명되었지만, 본 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다른 다양한 수정이나 변형이 가능할 것이며, 첨부된 청구범위는 본 발명의 진정한 범위 내에 속하는 그러한 수정 및 변형을 포함한다.

Claims (9)

1. 건조양파를 에탄올에 침적시켜 양파 추출물을 획득하는 제1 단계;
   양파 추출물을 여과하는 제2 단계;
   여과된 양파 추출물을 농축시키는 제3 단계;
   농축액을 고형분 함량 5~20중량%가 되도록 용해하는 제4 단계; 및
   용해액을 헥산으로 1차 분획한 다음 에틸 아세테이트로 2차 분획하여 용해액내의 비극성 성분을 제거하는 제5 단계;를 포함하여 제조되어,
   양파 추출물의 스피레오시드 함량을 10.0 중량% ~ 40.0 중량% 로 개선시키고, 동시에 취 개선효능을 갖는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법.
   
2. 제 1항에 있어서,
   상기 제5 단계 이후에,
   분획물을 감압 농축시켜 양파 추출 파우더를 얻는 제6 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법.
   
3. 제 1항에 있어서,
   상기 제1 단계의 양파 추출물 획득은,
   건조양파를 양파:에탄올 = 1:5 중량비율로 95%의 에탄올에 상온에서 1~5일 동안 침적시켜 추출하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법.
   
4. 제 1항에 있어서,
   상기 제2 단계의 여과는,
   메시크기 0.1~10㎛를 가지는 여과기로 여과하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법.
   
5. 제 1항에 있어서,
   상기 제3 단계의 농축은,
   양파 추출물을 40~70℃ 온도에서 농축시켜 제조하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법.
   
6. 제 2항에 있어서,
   상기 제6 단계는,
   상기 분획물을 40~100℃ 온도에서 40~550Torr로 감압하고 농축시켜 양파 추출 파우더를 얻는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물 제조방법.
   
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8. 제 1항 내지 제 6항 중 어느 한 항의 제조방법으로 제조된 양파 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물을 함유하는 화장품.
   
9. 제 8항에 있어서,
   상기 조성물의 양파 추출물은 양파 추출 파우더를 10~40% BG(부틸렌글리콜)에 용해시킨 것인 것을 특징으로 하는 자외선에 의한 피부 손상 예방 및 피부 재생 촉진용 조성물을 함유하는 화장품.

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