KR102105299B1

KR102105299B1 - an embryo culture dish capable of an individual culturing

Info

Publication number: KR102105299B1
Application number: KR1020190038368A
Authority: KR
Inventors: 김민규; 박연배; 김병호; 이진희; 길태영; 박강선
Original assignee: 주식회사 엠케이바이오텍
Priority date: 2019-04-02
Filing date: 2019-04-02
Publication date: 2020-04-29
Also published as: WO2020204264A1

Abstract

The present invention relates to a fertilized egg culture dish allowing individual culturing by physically separating a space. The present invention provides a fertilized egg culture dish (40) allowing individual culturing, wherein the fertilized egg culture dish (40) comprises: a wide plate-shaped upper substrate (10); channels (20) provided in the upper substrate (10); and a channel protection frame part (30) provided on a side surface of the upper substrate (10). In addition, according to the fertilized egg culture dish (40) of the present invention, each of the channels (20) includes an upper channel (22) and a lower channel (21), wherein the upper channel (22) has a cylindrical structure and the lower channel (21) is formed in a conical structure. Moreover, according to the fertilized egg culture dish (40) of the present invention, multiple numbers of the channels (20) are provided in the upper substrate.

Description

An embryo culture dish capable of an individual culturing}

본 발명은 물리적으로 공간을 분리해 개체 배양이 가능하게 하는 수정란 배양 접시에 관한 것이다.The present invention relates to a fertilized egg culture dish that allows individual culture by physically separating a space.

일반적으로 시험관 아기(체외수정, In Vitro Fertilization, 이하 IVF) 시술은 1984년 서울대학교병원에서 공식적으로 시작하였다. 1985년 국내에서 최초 '시험관아기'가 출생한 이래 이 기술로 수많은 아이가 태어났다. 1992년부터 2009년까지 공식 보고된 IVF 시술의 누적 횟수만 30만건에 달한다. 그리고 2006년부터는 저출산 대응 정책의 일환으로 이 기술에 대한 공적 비용 지원도 시작되었다. 2000년대 이후 지속적으로 초혼 연령이 증가함에 따라 첫 임신이 늦어지게 되어 난임이 증가하게 되었다. 이에 따라, 해결방안으로 IVF 시술이 확산되었고 전체 출생아 수 중 체외수정에 의해 태어나는 신생아의 비율이 증가하게 되었다. 현재 IVF 시술이 증가함에 따라 신생아의 건강 지표가 악화가 보고되고 있고, 체외 수정란을 만드는 실험 시설 및 재료에 대해 다양한 문제 제의가 나타나고 있다.In general, in vitro fertilization (in vitro fertilization, IVF) procedure was officially started at Seoul National University Hospital in 1984. Since the birth of the first 'in vitro baby' in Korea in 1985, numerous children have been born with this technology. The cumulative number of IVF procedures reported from 1992 to 2009 has reached 300,000. And from 2006, as part of a low birth rate response policy, public cost support for the technology has also begun. As the age of first marriage increased continuously since the 2000s, the first pregnancy was delayed, resulting in increased fertility. As a result, the IVF procedure spread as a solution and the proportion of newborns born by in vitro fertilization among the total number of births increased. Currently, as the IVF procedure increases, deterioration of the health indicators of newborns has been reported, and various problems have been suggested for experimental facilities and materials that make in vitro fertilized eggs.

우리나라의 수정란 이식은 1979년부터 한우에서 비외과적으로 수정란의 채취와 이식이 이루어졌다. 이후 1980년대에 과배란처리에 의한 채내 수정란이 집중적으로 생산되어왔고, 젖소에서 능력개량의 수단으로 외국 수정란이 도입되어 이식시험을 실시하기도 하였다. 1990년대 이전에 수정란 생산 방법은 체내에서 생산된 수정란이 대다수를 이루었지만, 이후 지속적인 수정란 연구로 체외 수정란이 생산되기 시작하였다. 초기 체외수정란의 경우 이식된 수란우의 유산율이 인공수정과 체내 수정란 보다 높으며, 송아지의 체중, 임신 기간, 난산 및 기형이 증가하였다. In Korea, fertilized egg transplantation has been carried out and harvested non-surgically from Korean cattle since 1979. Since the 1980s, in vitro fertilized eggs have been produced intensively by over-ovulation, and foreign fertilized eggs have been introduced as a means of improving abilities in cows to carry out transplantation tests. Prior to the 1990s, fertilized eggs produced in the body made up the majority of fertilized eggs, but afterwards, in vitro fertilized eggs began to be produced. In the case of early in vitro fertilized eggs, the abortion rate of the implanted oviparous eggs was higher than that of the artificial insemination and in vitro fertilized eggs, and the calf weight, gestation period, and fertility and malformation increased.

2000년대에는 혈청 무사용 배양액 개발, 성장인자 첨가 체외배양 배양액 등 체외수정란의 문제를 극복하는 다양한 연구들이 이루어짐에 따라 세계적으로 체외 수정란에 대한 수요가 급격히 증가하게 되었다. 최근에는 체외수정란이 체내 수정란 생산량을 따라 잡았으며, 이 이면에 OPU(Ovum Pick-Up)이라는 새로운 기술이 있다. 유전체분석방법 중 단일연기다형(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)분석 등 첨단 과학기술이 체외수정란 생산에 접목되어 이용되고 있다. 이를 이용해 성별 확인 및 개체에 대한 다양한 유전적 분석을 실시하여 능력검증에 활용하고 있다.In the 2000s, the demand for in vitro fertilized eggs increased rapidly worldwide as various studies were conducted to overcome the problems of in vitro fertilized eggs such as the development of serum-free culture medium and in vitro culture medium with growth factors. Recently, in vitro fertilized eggs have caught up with the production of fertilized eggs in the body, and there is a new technology called OPU (Ovum Pick-Up). Among the genome analysis methods, advanced science and technology, such as single nucleotide polymorphism (SNP) analysis, are being used in combination with in vitro fertilized egg production. This is used to verify gender by performing gender identification and various genetic analysis of individuals.

대한민국 등록실용신안20-0448564호(세포 또는 조직 배양용 기구)는 무균 상태에서 여러 종류의 세포를 동시에 배양하여 형태학적, 생리학적, 분자생물학적 변화를 비교 관찰하거나, 동일 배양세포에 동시에 다양한 방법으로 자극을 주어 형태학적, 생리학적, 분자생물학적 변화를 비교 관찰할 수 있는 세포 또는 조직 배양용 기구에 대한 문헌이다. 무독성의 방법으로 개별적인 세포 배양 챔버를 구비한 세포 또는 조직 배양용 기구를 제공하며 무균 상태에서 여러 종류의 세포를 동시에 배양하여 형태학적, 생리학적, 분자생물학적 변화를 동시에 비교 관찰하거나, 동시에 동일 배양세포에 다양한 방법으로 자극을 주어 형태학적, 생리학적, 분자생물학적 변화를 동시에 비교 관찰할 수 있는 세포 또는 조직배양용 기구를 제공한다. 하지만 평평하게 디자인 되어있어 수정란 발달시키기에 적합하지 않다는 문제점이 있다.Republic of Korea Utility Model No. 20-0448564 (cell or tissue culture device) cultivates several types of cells simultaneously in sterile conditions to compare and observe morphological, physiological, and molecular biological changes, or simultaneously in various ways on the same cultured cells. This is a literature on a cell or tissue culture instrument that can be compared to observe morphological, physiological and molecular biological changes by stimulation. It provides a cell or tissue culture apparatus with individual cell culture chambers in a non-toxic method, and simultaneously cultivates several types of cells under sterile conditions to simultaneously compare and observe morphological, physiological, and molecular biological changes, or at the same time. It provides a device for cell or tissue culture by stimulating the cells in various ways to simultaneously observe morphological, physiological and molecular biological changes. However, it has a problem that it is not suitable for developing a fertilized egg because it is designed flat.

상기한 바와 같이 종래기술은 수정란을 생산하는 방법의 경우 대부분이 세포 배양에 사용되는 다양한 접시를 공용하고 있다. 세포 배양의 경우 세포 분화가 주 목적으로 바닥에 세포를 넓게 분포하여 자라날 수 있도록 평평하게 디자인 되어있어 수정란을 발달시키기에 적절하지 않다.As described above, in the case of the method of producing a fertilized egg, the prior art mostly uses various dishes used for cell culture. In the case of cell culture, the cell differentiation is mainly designed to grow with a wide distribution of cells on the floor for the main purpose, so it is not suitable for developing a fertilized egg.

따라서 다양한 방법으로 미소적(Drop)을 형성하여 을 나누거나 발달을 시키고 있다.Therefore, it forms microscopic (Drop) in various ways to divide or develop.

하지만, 현재 방법에서는 세포 배양용 접시에 미속적을 형성하여 배양을 실시 하는데 이는 물리적으로 공간이 분리되어 있지 않아 배양접시가 외부의 힘에 의해 흔들릴 경우 서로 섞일 수 있는 위험을 가지고 있다.However, in the current method, a culture is performed by forming a microscopically in a cell culture dish, which has a risk of mixing with each other if the culture dish is shaken by an external force because the space is not physically separated.

상기 문제를 해결하기 위해 최근 해외에서 수정란 생산 전용 접시들이 개발이 되고 있으나, 현재 사용되고 있는 일반 세포 배양용 접시들에 비해 가격이 10배 이상 차이가 나 산업에서 적용이 쉽지 않은 실정이다.In order to solve the above problem, recently, plates for fertilized egg production have been developed abroad, but the price is more than 10 times different from the currently used general cell culture plates, but it is not easy to apply in the industry.

따라서 본 발명에서는 물리적으로 구획을 나누어 수정란의 개체 배양이 가능하게하고 각각의 채널의 모양을 원추형 형태로 형성하여 수정란의 밀도를 높임으로써 발달에 도움이 될 수 있도록 하는 개체 배양이 가능한 수정란 배양 접시를 제공하고자 한다.Accordingly, in the present invention, a fertilized egg culture dish capable of cultivating an individual can be cultured by physically dividing a compartment to enable individual culture of the fertilized egg and forming a shape of each channel in a conical shape to increase the density of the fertilized egg. Want to provide.

또한 국내 상황에 맞는 수정란의 밀도를 높임으로써 발달에 도움이 될 수 있도록 하며 해외에서 제조한 수정란 생산 전용 접시에 비하여 현저히 비용이 절감되는 개체 배양이 가능한 수정란 배양 접시를 제공하고자 한다.In addition, we aim to provide a fertilized egg culture dish capable of incubating individuals that can help development by increasing the density of fertilized eggs suitable for domestic situations and significantly reduce the cost compared to a fertilized egg production dish manufactured overseas.

본 발명은 상기한 문제점 및 요구를 해결하기 위하여,The present invention to solve the above problems and needs,

넓은 판상의 상부기판(10);A wide plate-shaped upper substrate 10;

상기 상부기판(10)에 구비된 채널(20);A channel 20 provided on the upper substrate 10;

상기 상부기판(10)의 측면에 구비된 채널보호프레임부(30);으로 구성되는 것을 특징으로 하는 개체 배양이 가능한 수정란 배양 접시(40)를 제공한다.Provided is a fertilized egg culture dish 40 capable of culturing an individual, comprising: a channel protection frame part 30 provided on a side surface of the upper substrate 10.

또한 본 발명은 상기한 채널(20)은 상부채널(22)과 하부채널(21)을 포함하여 구성되되,In addition, the present invention, the channel 20 is composed of an upper channel 22 and a lower channel 21,

상기한 상부채널(22)은 원통형 구조로 되어 있고,The upper channel 22 has a cylindrical structure,

상기한 하부채널(21)은 원추형 구조로 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 개체 배양이 가능한 수정란 배양 접시(40)를 제공한다.The lower channel 21 provides a fertilized egg culture dish 40 capable of culturing an individual, which is formed in a conical structure.

또한 본 발명은 상기한 채널(20)은 상부기판에 다수개로 구성되어 있는 것을 특징으로 하는 개체 배양이 가능한 수정란 배양 접시(40)를 제공한다.In addition, the present invention provides a fertilized egg culture dish 40 capable of culturing an individual, characterized in that the channel 20 is composed of a plurality of upper substrates.

본 발명에 따른 개체 배양이 가능한 수정란 배양 접시는 상부기판에 물리적으로 균등한 면적으로 다수로 구획을 나누어(실시예로 4~16개 바람직하게는 9개로 구획을 나눔) 채널을 형성하게 됨에 따라 수정란의 개체 배양이 가능하게 하는 작용과 효과가 나타나게 된다.The fertilized egg culture dish capable of culturing an individual according to the present invention is a fertilized egg as a channel is formed by dividing the compartment into a plurality of physically even areas (eg, 4 to 16, preferably divided into 9) on the upper substrate. The effects and effects that enable the individual culture of humans will appear.

즉, 본 발명의 배양 접시는 4~16개 바람직하게는 9개의 구획으로 나누어져 있어 각각의 구획마다 개체 별 배양이 가능하여 총 9개의 개체를 한번으로 배양이 가능하며, 이와 같이 구획이 물리적으로 나누어져 있어 외부 충격에서 수정란이 서로 섞이는 위험성이 줄어들어 작업자들이 실험을 하는 경우 사용의 편의성이 현저히 증진되게 된다.That is, the culture dish of the present invention is divided into 4 to 16, preferably 9 compartments, so that each compartment can be cultured individually, so that a total of 9 individuals can be cultured at once. Since it is divided, the risk of mixing the fertilized egg from external impact is reduced, so that the convenience of use is significantly improved when workers experiment.

또한 본 발명에 따른 개체 배양이 가능한 수정란 배양 접시는 채널의 형태가 U자 또는 원뿔형태로 구성되어 그 단면이 점점 줄어드는 형성으로 되어 있는 것을 특징으로 하여 수정란이 가운데로 용이하게 모이게 되어 수정란을 발달시키기에 매우 적절한 구조가 되는 작용과 효과가 나타난다.In addition, the fertilized egg culture dish capable of culturing an individual according to the present invention is characterized in that the shape of the channel is formed in a U-shape or conical shape, and its cross-section is gradually reduced, so that the fertilized egg is easily gathered in the center to develop the fertilized egg. The action and effect of being a very appropriate structure are shown.

본 발명은 채널이 물리적으로 나누어져 있어 외부충격에서 수정란이 서로 섞이는 위험성이 줄어들어 작업자들이 실험에 사용하는 경우 편의성이 현저히 증진되게 된다.In the present invention, since the channels are physically divided, the risk of mixing the fertilized eggs with each other in an external shock is reduced, and convenience is significantly improved when workers use them in experiments.

본 발명은 기존 세포 배양접시를 대신하여 대체품으로 사용할 수 있는 작용과 효과가 있다.The present invention has an action and effect that can be used as a substitute for the existing cell culture dish.

도 1은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 사시도 이다.
도 1b는 본 발명의 다른 실시예에 따른 사시도 이다.
도 2는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 평면도 이다.
도 3은 본 발명의 측면도 이다.
도 4는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 측면도이다.
도 4b는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 측면도이다.
도 5는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 순서도이다.1 is a perspective view according to a preferred embodiment of the present invention.
1B is a perspective view according to another embodiment of the present invention.
2 is a plan view according to a preferred embodiment of the present invention.
3 is a side view of the present invention.
4 is a side view according to a preferred embodiment of the present invention.
4B is a side view according to a preferred embodiment of the present invention.
5 is a flow chart according to a preferred embodiment of the present invention.

이하 첨부된 도면을 통해 상세하게 설명하고자 한다.Hereinafter will be described in detail through the accompanying drawings.

도 1은 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 사시도 이다. 도 2는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 평면도 이다. 도 3은 본 발명의 측면도 이다. 도 4는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 측면도이다. 도 4b는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 측면도이다. 도 5는 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 순서도이다.1 is a perspective view according to a preferred embodiment of the present invention. 2 is a plan view according to a preferred embodiment of the present invention. 3 is a side view of the present invention. 4 is a side view according to a preferred embodiment of the present invention. 4B is a side view according to a preferred embodiment of the present invention. 5 is a flow chart according to a preferred embodiment of the present invention.

본 발명은 넓은 판상의 상부기판(10);The present invention is a wide plate-shaped upper substrate (10);

본 발명은 배양접시(40)는 넓은 판상의 상부기판(10)으로 구성되어 있고, 상기한 상기 상부기판(10)에 다수개의 채널(20)을 구비하고 있다.In the present invention, the culture plate 40 is composed of a wide plate-shaped upper substrate 10, and is provided with a plurality of channels 20 on the upper substrate 10 described above.

또한 본 발명의 상부기판(10)의 측면에는 채널보호프레임부(30)가 구성되어 개체 배양이 가능하도록 구성되어 있다.In addition, on the side of the upper substrate 10 of the present invention, a channel protection frame part 30 is configured to enable individual culture.

상기 배양접시(40)는 사람 또는 포유동물의 수정란을 배양할 수 있는 기능을 수행하는 장치 또는 도구를 의미한다.The culture dish 40 means a device or tool that performs a function capable of culturing a fertilized egg of a human or mammal.

본 발명의 상부기판(10)은 그 내부에 다수개의 채널(20)이 형성되어 있는 거을 기술적 특징으로 한다.The upper substrate 10 of the present invention is characterized in that a plurality of channels 20 are formed therein.

도 1에서 보는 것처럼, 넓은 판상의 상부기판(10)은 직사각형 형태의 가로와 세로 크기는 각각 55~75m이고 바람직하게는 65mm이다.As shown in FIG. 1, the wide plate-shaped upper substrate 10 has a rectangular shape having a horizontal and vertical size of 55 to 75 m, and preferably 65 mm.

도 1b에서 보는 것처럼 본 발명은 하부기판(11)이 형성될 수 있으며 본 발명의 배양접시(40)를 배양기 등에 놓아두는데 안정적으로 안치하게 하는 기능을 수행하게 한다.As shown in Fig. 1b, the present invention allows the lower substrate 11 to be formed, and performs the function of stably placing the culture dish 40 of the present invention in a cultivator or the like.

하부기판(11)은 채널(20)에 이물질이 묻지 않도록 하며 채널이 깨지는 것을 방지하는 기능을 수행하게 된다.The lower substrate 11 does not allow foreign matter to adhere to the channel 20 and performs a function of preventing the channel from breaking.

본 발명의 상기 상부기판(10)에 구비된 다수개의 채널(20)은 사람 또는 포유동물의 수정란을 다수로 삽입시켜 배양할 수 있는 기능을 수행하게 된다.The plurality of channels 20 provided in the upper substrate 10 of the present invention performs a function of culturing by inserting a large number of human or mammalian fertilized eggs.

본 발명의 기술적 특징은 상기 상부기판(10)에 구비된 채널(20)이 다수개로 형성된 구조적인 특성에 있다.The technical feature of the present invention is a structural characteristic in which a plurality of channels 20 provided in the upper substrate 10 are formed.

현재 수정란을 생산하는 방법의 경우 대부분이 세포 배양에 사용되는 다양한 접시를 공용하고 있다. 세포 배양의 경우 세포 분화가 주 목적으로 바닥에 세포를 넓게 분포하여 자라날 수 있도록 평평하게 디자인되어 있어 수정란을 발달시키기에 적절하지 않다. 따라서 다양한 방법으로 미소적(Drop)을 형성하여 구획을 나누거나 발달을 시키고 있는 실정이다.Currently, most methods for producing fertilized eggs share various dishes used for cell culture. In the case of cell culture, the cell differentiation is mainly designed to grow by spreading the cells widely on the floor for the main purpose, so it is not suitable for developing a fertilized egg. Therefore, it is a situation in which microscopic (Drop) is formed in various ways to divide or develop a section.

현재 방법에서는 세포 배양용 접시에 미소적을 형성하여 배양을 실시하는데 이는 물리적으로 공간이 분리되어 있지 않아 배양 접시가 외부의 힘에 의해 흔들릴 경우 서로 섞일 수 있는 위험을 가지게 된다.In the present method, the cells are cultured by forming microscopic droplets on the cell culture dish, which is not physically separated, and thus, if the culture dish is shaken by external force, there is a risk of mixing with each other.

따라서 본 발명은 상기한 채널(20)은 상부기판(10)에 연결되어 있으며 다수개로 형성되어 있고 바람직하게는 상부기판에 균등한 범위로 형성되어 있고 가로와 세로로 동일한 갯수로 형성되어 있는 것을 특징으로 한다.Therefore, the present invention is characterized in that the above-described channel 20 is connected to the upper substrate 10 and is formed in a plurality, preferably formed in an equal range on the upper substrate, and is formed in the same number in the horizontal and vertical directions. Is done.

바람직하게는 상부기판(10)이 가로와 세로가 65mm 인 경우 채널은 균등한 면적으로 나누어 채널이 4~16개로 형성되는 것이 좋으며 더욱 바람직하게는 채널(20)이 가로*세로(3*3) 9개로 형성되어 있는 것이 매우 효과적이다.Preferably, when the upper substrate 10 is 65 mm horizontally and vertically, the channels are preferably divided into equal areas to form 4 to 16 channels. More preferably, the channels 20 are horizontally * vertically (3 * 3). It is very effective to form nine.

이와 같이 본 발명은 상부기판(10)에 물리적으로 균등한 면적으로 다수로 구획을 나누어(실시예로 4~16개 바람직하게는 9개로 구획을 나눔) 채널(20)을 형성하게 됨에 따라 수정란의 개체 배양이 가능하게 하는 기술적 특징을 가지게 된다.As described above, the present invention divides the compartment into a plurality of physically equal areas on the upper substrate 10 (eg, 4 to 16, preferably divided into 9) to form a channel 20. It will have technical features that enable individual culture.

즉, 본 발명의 배양 접시는 4~16개 바람직하게는 9개의 구획으로 나누어져 있어 각각의 구획마다 개체 별 배양이 가능하여 총 9개의 개체를 한번으로 배양이 가능하다. That is, the culture dish of the present invention is divided into 4 to 16, preferably 9 compartments, so that each compartment can be cultured individually, so that a total of 9 individuals can be cultured at once.

이와 같이 구획이 물리적으로 나누어져 있어 외부 충격에서 수정란이 서로 섞이는 위험성이 줄어들어 작업자들이 실험을 하는 경우 사용의 편의성이 현저히 증진되게 된다.Since the compartments are physically divided as described above, the risk of mixing the fertilized eggs with each other is reduced, so that the convenience of use is significantly improved when workers experiment.

본 발명의 채널보호프레임부(30)는 상기 상부기판(10)의 측면에 구비되어 있으며 상기 채널(20)을 안정적으로 상부기판에 고정하게 하는 기능 및 외부충격으로부터 보호하는 기능을 수행하게 된다.The channel protection frame portion 30 of the present invention is provided on the side surface of the upper substrate 10 and performs a function of stably fixing the channel 20 to the upper substrate and a function of protecting from external shock.

도 3 및 도 4에서 보는 바와 같이 채널보호프레임부(30)는 상부기판과 연결되어 있으며 상부기판에 형성된 채널을 안정적으로 상부기판에 고정하게 하고 외부충격으로부터 보호하는 기능을 수행한다.3 and 4, the channel protection frame part 30 is connected to the upper substrate and performs a function of stably fixing the channel formed in the upper substrate to the upper substrate and protecting it from external shock.

상기한 채널보호프레임부(30)의 높이(H1)는 채널지지부(31)의 높이(H2) 보다 크게 형성되어 있어 채널에 가하는 미네랄 오일 등이 넘치는 경우 접시의 외부로 유출되지 않도록 하는 기능을 수행하게 된다.The height (H1) of the channel protection frame portion 30 is formed larger than the height (H2) of the channel support portion 31 to perform a function to prevent spillage to the outside of the dish when mineral oil or the like applied to the channel overflows. Is done.

본 발명은 상기한 채널(21)의 측면부에 채널을 상부기판(10)에 연결시켜주고 상부기판에 고정하게 하는 채널지지부(31)가 형성되어 있다.In the present invention, a channel support portion 31 is formed on the side of the channel 21 to connect the channel to the upper substrate 10 and to fix it to the upper substrate.

도 4에서 보는 바와 같이 채널은 채널지지부(31)에 의하여 상부기판에 연결되어 고정하는 기능이 수행된다.4, the channel is connected to and fixed to the upper substrate by the channel support 31.

본 발명의 기술적 특징은 상기한 채널(20)의 구조적인 특성에 있다.The technical feature of the present invention lies in the structural characteristics of the channel 20 described above.

상기한 바와 같이 현재 수정란을 생산하는 방법의 경우 대부분이 세포 배양에 사용되는 다양한 접시를 공용하고 있다. 세포 배양의 경우 세포 분화가 주 목적으로 바닥에 세포를 넓게 분포하여 자라날 수 있도록 평평하게 디자인되어 있어 수정란을 발달시키기에 적절하지 않다. 따라서 다양한 방법으로 미소적(Drop)을 형성하여 구획을 나누거나 발달을 시키고 있는 실정이다.As described above, in the case of a method for producing a fertilized egg, most of them use a variety of dishes used for cell culture. In the case of cell culture, the cell differentiation is mainly designed to grow by spreading the cells widely on the floor for the main purpose, so it is not suitable for developing a fertilized egg. Therefore, it is a situation in which microscopic (Drop) is formed in various ways to divide or develop a section.

앞서 설명한 바처럼, 현재 방법에서는 세포 배양용 접시에 미소적을 형성하여 배양을 실시하는데 이는 물리적으로 공간이 분리되어 있지 않아 배양 접시가 외부의 힘에 의해 흔들릴 경우 서로 섞일 수 있는 위험을 가지고 있다.As described above, in the present method, the cells are cultured by forming microscopic droplets on the cell culture dish, which has the risk of mixing with each other when the culture dish is shaken by external force because the space is not physically separated.

따라서 본 발명은 상기한 채널(20)은 다수개로 형성되되 U자형 또는 원추형 형태의 구조를 갖는 것을 기술적 특징으로 한다,Therefore, the present invention is characterized in that the channel 20 is formed in a plurality, but has a U-shaped or conical structure.

바람직하게는 원추형 형태로 된 것이 더욱 효과적이다.The conical form is more effective.

본 발명의 상기한 채널(20)은 상부채널(22)과 하부채널(21)을 포함하여 구성되게 된다.The above-described channel 20 of the present invention is configured to include an upper channel 22 and a lower channel 21.

도 4b에서 보는 것처럼, 상기한 상부채널(22)은 원통형 구조로 되어 있고, 추후 미네랄 오일이 첨가되어 배양액의 수분 증발을 방지하는 기능을 수행한다.As shown in FIG. 4B, the upper channel 22 has a cylindrical structure, and mineral oil is added later to prevent evaporation of the culture medium.

즉, 상부채널(22)에는 미네랄 오일이 충진되는 곳으로서 하부채널(21)에 포함된 배양액을 막아서 수분 증발을 방지하는 기능을 수행하게 된다.That is, the upper channel 22 is filled with mineral oil, and serves to prevent the evaporation of moisture by blocking the culture medium contained in the lower channel 21.

상기한 상부채널(22)은 직경(W1)이 10~20mm로 형성되어 있고 바람직하게는 15mm로 형성되는 것이 효과적이다.The upper channel 22 has a diameter (W1) of 10 to 20mm is formed, preferably 15mm is effective.

상기한 하부채널(21)은 원추형 구조로 형성되어 있어서 그 단면이 점점 줄어드는 형성으로 되어 있는 것을 특징으로 하여 수정란이 가운데로 용이하게 모이게 되어 수정란을 발달시키기에 매우 적절한 구조가 되는 작용이 나타난다.The lower channel 21 is formed in a conical structure, and its cross section is gradually reduced, so that the fertilized eggs are easily gathered in the middle, and thus a very suitable structure for developing a fertilized egg appears.

상기한 하부채널(21)은 수정란이 다수개로 포함되어 배양이 되는바 배양액이 포함되어 있게 된다.The lower channel 21 includes a large number of fertilized eggs to be cultured, so that the culture medium is included.

또한 상기한 하부채널(21)에는 하판부(23)가 형성되어 있는데 하판부는 평평한 형태로 형성되어 있는 것을 특징으로 한다.In addition, the lower channel 21 has a lower plate portion 23, which is characterized in that the lower plate portion is formed in a flat shape.

상기한 하판부가 그 단면이 V 자 또는 U자형 형태로 되는 경우 다수의 수정란이 포함된 하부채널에서 서로 섞이는 문제점이 발생하는바 하판부는 평평한 형태로 있는 것이 매우 효과적이다.When the lower plate portion has a V-shaped or U-shaped cross-section, a problem in mixing with each other in a lower channel including a large number of fertilized eggs occurs. It is very effective that the lower plate has a flat shape.

상기한 하판부(23)의 직경은 1~5mm로 형성될 수 있으며 바람직하게는 3mm 정도로 형성된 것이 좋다.The diameter of the lower plate portion 23 may be formed from 1 to 5 mm, and preferably, about 3 mm.

도 4b에서 보는 것처럼, 상기한 하판부(23)는 바닥에 접촉되지 않는 구조로 되어 있는 것이 지면과 접촉하여 발생하는 온도 변화 등의 외부적 요인을 제거하여 채널에 포함된 수정란의 배양이 효과적으로 수행되게 된다.As shown in Figure 4b, the lower plate portion 23 has a structure that does not come into contact with the floor, and removes external factors such as temperature changes caused by contact with the ground to effectively cultivate the fertilized egg contained in the channel. Will be.

따라서 채널(20)의 깊이(D1)가 상기한 채널지지부(31)의 높이(H2) 보다 작게 형성되어 있다.Therefore, the depth D1 of the channel 20 is formed smaller than the height H2 of the channel support 31.

따라서 상기한 채널(20)의 깊이(D1)는 3~6mm 정도이고 바람직하게는 5mm이며, 상기한 채널지지부(31)의 높이(H2)는 7~9mm 정도이고 바람직하게는 8mm 정도 형성된 것이 좋다.Accordingly, the depth D1 of the channel 20 is about 3 to 6 mm, preferably 5 mm, and the height H2 of the channel support 31 is about 7 to 9 mm, preferably about 8 mm. .

본 발명의 수정란 배양 접시는 투광성 소재로 제조될 수 있고 상기 투광성 소재는 유리(glass) 또는 수지제(resin) 일 수 있다. The fertilized egg culture dish of the present invention may be made of a light-transmitting material, and the light-transmitting material may be glass or resin.

상기 수지제는 폴리스티렌(polystyrene), 폴리프로필렌(polypropylene), 폴리에틸렌(polyethylene), 폴리아미드(polyamide) 또는 아크릴(acryl)이 바람직하나 상기 소재 등의 다른 소재로 제작이 가능하다.The resin is preferably polystyrene, polypropylene, polyethylene, polyamide or acryl, but can be made of other materials such as the above materials.

본 발명은 상기한 수지제로 제조한 배양 접시의 안쪽은 코팅제로 코팅하여 수지제의 비친환경적인 점을 차단하고 수정란의 친오가닉(organic friendly)의 특성을 높여 수정란 배양 효율을 증진하게 된다.The present invention is to improve the efficiency of fertilized egg cultivation by coating the inside of the culture dish made of the above-mentioned resin with a coating agent to block the non-environmental point of the resin and increase the characteristic of organic friendly of fertilized eggs.

상기한 코팅제는 콜라겐 또는 젤라틴을 사용하는 것이 바람직하다.It is preferable to use collagen or gelatin as the coating agent.

도 1 내지 도 4에 도시된 바와 같이 본 발명의 바람직한 실시예를 살펴본다. As shown in Figure 1 to Figure 4 looks at a preferred embodiment of the present invention.

본 발명에 따른 배양접시(40)는 가로와 세로 크기는 각각 55 ~ 75mm이다. The culture dish 40 according to the present invention has a horizontal and vertical size of 55 to 75 mm, respectively.

채널(20)의 경우 총 9개인 원형모형의 채널(20)로 나누어져 있고 각 채널(20)의 크기는 상부 10 ~ 20mm, 하부 1 ~ 4mm로 상광하협의 형태로 되어 있다.In the case of the channel 20, the channel 20 is divided into a total of nine circular models, and the size of each channel 20 is 10 to 20 mm in the upper part and 1 to 4 mm in the lower part, in the form of an upper and lower channel.

더욱 구체적으로, 상기 본 발명의 배양접시(40)는 기존 세포배양접시를 개량한 것으로, 상기 내부의 채널(20)이 상광하협으로 점차 좁아지는 형상으로 이루어진다. 상기 내부의 채널(20)은 U자 또는 원뿔 형태로 구성된다. More specifically, the culture dish 40 of the present invention is an improvement of the existing cell culture dish, and the inner channel 20 is formed in a shape that gradually narrows due to the upper and lower canal. The inner channel 20 is configured in a U-shape or conical shape.

상기 내부의 채널(20)을 원뿔 또는 사각형의 형상으로 제작할 수 있지만 U자 형태의 채널로 제작하는 것이 바람직하다. 상기 채널(20)모양이 점점 좁아지는 형태로 구성되어 있어 수정란이 가운데로 용이하게 모이게 된다.Although the inner channel 20 can be manufactured in the shape of a cone or a square, it is preferable to manufacture it as a U-shaped channel. Since the shape of the channel 20 is gradually narrowed, the fertilized egg is easily collected in the middle.

본 발명의 배양접시(40)는 총 9개 채널(20)로 나누어져 있어 각각의 채널(20)마다 개체별 배양이 가능하여 총 9개의 개체를 한번에 배양이 가능하도록한 것이다.The culture dish 40 of the present invention is divided into a total of nine channels 20, so that each channel 20 can be cultured individually, so that a total of nine individuals can be cultured at once.

상기 채널(20)은 상측이 개방되어 있는 구조이며 상광하협구조로 이동시 각개의 배양체들이 섞이지 않는 특징이 있다.The channel 20 has a structure in which the upper side is open and the individual cultures are not mixed when moving to the upper and lower ganglia structure.

도 4b에 도시된 바와 같이 상기 채널(20)은 상부채널(22)과 하부채널(21)로 구비하며 구분선(24)을 기준으로 나뉘어 지는데 상기 구분선(24)는 도면상 구분을 지어주기위해서 존재할뿐 실제 제작시에는 존재하지 않는다.As shown in FIG. 4B, the channel 20 is provided as an upper channel 22 and a lower channel 21, and is divided based on the dividing line 24. The dividing line 24 exists to form a dividing line in the drawing. However, it does not exist in actual production.

상기 상부채널(22)는 10 ~ 20mm의 직경으로 비교적 넓은 형태로 구비되어 있으며 하부채널(21)은 하측으로 내려갈수록 점점 좁아지는 형태를 하며 하부채널(21)의 끝에 구비된 하판부(23)은 1 ~ 4mm의 크기로 평평한 구조이다.The upper channel 22 is provided in a relatively wide shape with a diameter of 10 to 20mm, and the lower channel 21 has a shape that becomes narrower as it descends downward and has a lower plate portion 23 provided at the end of the lower channel 21. Is a flat structure with a size of 1 to 4 mm.

상기 하판부(23)에서 구분선(24)까지 높이는 1 ~ 5mm를 가지며 하측으로 갈수록 좁아지는 형태이며 수정란에 영양을 공급하는 배양액을 채우는 높이 이다.The height from the lower plate portion 23 to the dividing line 24 has a height of 1 to 5 mm and is narrower toward the lower side, and is a height that fills the culture solution for supplying nutrition to the fertilized egg.

상기 구분선(24)부터 상측으로 1 ~ 3mm의 높이를 가진 상부채널(22)은 평평한구조이며 8 ~ 18mm의 넓이를 가진 형태로 구비되어 미네랄오일을 채울수 있다.The upper channel 22 having a height of 1 to 3 mm from the dividing line 24 to the upper side is a flat structure and is provided in a form having a width of 8 to 18 mm to fill mineral oil.

상기 하부채널(21)에 배양액을 채우고 상부채널(22)에 미네랄오일을 채우는 이유는 배양액이 외부온도로 인해 증발하는것을 막고자 함이다. The reason for filling the lower channel 21 with the culture medium and the upper channel 22 with the mineral oil is to prevent the culture medium from evaporating due to the external temperature.

상기 채널(20)은 하측면이 평평한 구조인 하판부(23)을 구비하며 이와 같은 평평한 구조의 상기 하판부(23)는 다수개의 수정란이 서로 혼합되지 않고 잘 배양되도록 하는 기능을 수행한다.The channel 20 is provided with a lower plate portion 23 having a flat lower side structure, and the lower plate portion 23 having such a flat structure performs a function of allowing a plurality of fertilized eggs to be cultured well without being mixed with each other.

본 발명은 개체 배양이 가능한 수정란 배양접시(40)에 개별적인 수정란 배양 채널(20)을 구비하여 여러종류의 수정란을 동시에 배양하거나 동일 수정란을 다양한 방법으로 자극을 주어 형태학적, 생리학적, 분자생물학적 변화를 비교 관찰 할 수 있는 개체 배양이 가능한 수정란 배양접시(40)를 얻을 수 있다.The present invention is provided with individual fertilized egg culture channels (20) in a fertilized egg culture dish (40) capable of culturing an individual, culturing several types of fertilized eggs at the same time or stimulating the same fertilized egg in various ways to change morphological, physiological, and molecular biology It is possible to obtain a fertilized egg culture dish (40) capable of culturing an individual capable of comparative observation.

상기 채널(20)이 물리적으로 나누어져 있어 외부 충격에서 수정란이 서로 섞이는 위험성이 줄어들어 작업자들이 실험에 사용하기 용이하다.Since the channel 20 is physically divided, the risk of mixing the fertilized eggs with each other in an external impact is reduced, so that it is easy for workers to use in the experiment.

하지만, 상기 배양접시(40)의 크기 경우 일반적으로 사용되는 직사각형의 세포 배양접시의 크기과 동일한 55 ~ 75mm로 되어 있어 기존 세포 배양접시를 대신하여 대체품으로 사용 할 수 있는 작용과 효과가 나타난다.However, since the size of the culture dish 40 is 55 to 75 mm, which is the same as the size of a generally used rectangular cell culture dish, the action and effect can be used as a substitute for the existing cell culture dish.

도 3 내지 도 4b에 도시된 바와 같이 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 수정란 배양접시(40)의 측면을 도시화한 측면도이다. 채널보호프레임부(30)의 높이는 8 ~ 12mm이고, 상기 내부 채널(20)의 경우 벽 높이가 5 ~ 9mm, 내부 높이가 3 ~ 6mm로 되어 있다.3 to 4B is a side view showing a side view of a fertilized egg culture dish 40 according to a preferred embodiment of the present invention. The height of the channel protection frame 30 is 8 to 12 mm, and in the case of the inner channel 20, the wall height is 5 to 9 mm and the inner height is 3 to 6 mm.

이하 본 발명과 수정란 이식과정이 포함된 순서도와 함께 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention and the fertilized egg will be described with a flow chart including the implantation process.

다수개의 배양이 가능한 배양접시(40)에 있어서, 상기 배양접시(40)는 사람 또는 포유동물의 수정란을 배양할 수가 있다.In a culture dish 40 capable of multiple cultures, the culture dish 40 may culture human or mammalian fertilized eggs.

도 5에 도시된 바와 같이, 상기 수정란은 포유동물의 것으로서 수정란을 배양하기에 앞서 생리식염수로 2 ~ 4번 세척을 하는 흡입작업흡인작업(S10)(Aspiration)을 수행한다,As shown in FIG. 5, the fertilized egg is a mammal, and an aspiration operation (S10) (Aspiration) is performed for washing 2 to 4 times with physiological saline before culturing the fertilized egg.

상기 생리식염수로 여러번 세척하는 이유는 잔존물이 남아있을 수 있기 때문에 흡인작업(S10)(Aspiration)을 할 때 주사기 안으로 잔존물이 들어갈 수 있기 때문에 잔존물 제거를 위해 생리식염수를 사용한다.The reason for washing several times with the physiological saline is because the residue may remain in the syringe when the suction operation (S10) (Aspiration) because the residue may remain, the physiological saline is used to remove the residue.

상기 과정이 완료되면 체외성숙(S20)(In Vitro Maturation, 이하 IVM)의 단계에서 상기 배양 접시(10)의 외측을 보호하는 미네랄오일을 덮어준다. 이때 미네랄오일을 덮기 전에 상기 채널(20)에 배양액을 먼저 덮어준다. 배양액을 덮어주는 이유는 수정란에 영양을 공급하기 위함이며, 미네랄오일을 덮는 이유는 배양액이 증발하는 것을 막고자 함이다.When the process is completed, in vitro maturation (S20) (In Vitro Maturation, hereinafter referred to as IVM) covers the mineral oil protecting the outside of the culture dish 10. At this time, the culture medium is first covered with the channel 20 before the mineral oil is covered. The reason for covering the culture solution is to supply nutrients to the fertilized egg, and the reason for covering the mineral oil is to prevent the culture solution from evaporating.

상기 과정 다음으로는 체외수정(S30)(In Vitro Fertilization, 이하 IVF)의 단계로서 상기 채널(20)에 구비된 성숙된 수정란에 원심분리가 끝난 정액을 피펫팅하는 단계이다.Following the above process, as a step of in vitro fertilization (S30) (In Vitro Fertilization, hereinafter referred to as IVF), the step of pipetting the semi-centrifuged semen into the matured fertilized egg provided in the channel 20.

상기 피펫팅을 한 후에 다시 12000RPM 원심분리를 실시하고난 부산물인 상층액을 비스듬이 기울여서 다시 피펫팅한다.After the pipetting, 12000RPM centrifugation was performed again, and the supernatant, a by-product, was pipetted again at an angle.

상기 채널(20)을 12000RPM 원심분리를 하여 비스듬이 상층액을 제거하는 이유는 상기 채널(20)에 구비된 성숙된 수정란에 침전물(난구세포와 기타 부유물 등)의 영향을 주지 않기 위해서이다.The reason why the channel 20 is centrifuged at 12000 RPM to remove the oblique supernatant is not to affect the precipitates (eg, egg cells and other suspended solids) on the mature fertilized egg provided in the channel 20.

상기 과정 다음으로는 체외배양(S40)(In Vitro Culture, 이하 IVC)의 단계로 넘어간다.After the above process, the in vitro culture (S40) (In Vitro Culture, IVC) is transferred to the step.

체외배양(S40)(In Vitro Culture, 이하 IVC)의 단계에서는 상기 과정을 거친 상기 채널(20)에 대하여 피펫팅을 하여 난구세포를 제거한다.In the step of in vitro culture (S40) (In Vitro Culture, hereinafter IVC), the cells 20 which have been subjected to the above process are pipetted to remove the ovarian cells.

피펫팅 이유는 제거가 덜된 침전물(난구세포와 기타 부유물 등)을 제거하기 위함이다. 상기 침전물(난구세포와 기타 부유물 등)을 제거한 뒤는 인큐베이터에 보관하며 상기 체외배양(In Vitro Culture, 이하 IVC)의 단계를 1 ~ 3번 가량 진행하여 상기 침전물(난구세포와 기타 부유물 등)을 제거한다. 이때 1 ~ 3번 가량 진행하는 기간은 4 ~ 6정도 기간을 두고 실시 한다. The reason for pipetting is to remove sediment (eg, ovarian cells and other suspended solids) that are less removed. After removing the sediment (eg, ovarian cells and other suspended solids), store it in an incubator and proceed through the steps of In Vitro Culture (hereinafter IVC) for 1 to 3 times to remove the sediment (eg, ovarian cells and other suspended solids). do. At this time, the period of about 1 to 3 times is conducted over a period of about 4 to 6.

상기 과정 다음으로는 수정란이식(S50)(Embryo Transfer, 이하 ET과정)의 단계로서 상기 배양접시(40)의 채널(20)에서 배양한 수정란을 배반포일 시기인 6 ~ 7일 사이의 배반포 상태인 수정란을 이식준비하는 단계이다.After the process, the fertilized egg cultured in the channel 20 of the culture dish 40 as a stage of fertilized egg transplantation (S50) (Embryo Transfer, ET process) is in a blastocyst state between 6 and 7 days, which is the time of blastocyst. This is the stage to prepare the embryo for transplantation.

상기의 수정란이식(S50) 과정 전에 수정란을 incubator에서 꺼내어 현미경으로 배반포 단계의 수정란을 마우스피펫으로 골라낸 후 동결기에서 동결과정(S40-2)(Slow freezing, 이하 완만동결)을 수행한다.Before the fertilized egg transplantation (S50) process, the fertilized egg is taken out of the incubator, the fertilized egg of the blastocyst stage is picked up with a mouse pipette, and then the freezing process (S40-2) (lower freezing) is performed in a freezer.

상기한 동결(S40-2)(Slow freezing, 이하 완만동결)의 단계에서는 동결기에 액체질소를 넣은 다음 홀드상태로 -6도로 온도를 맞춘 다음 수정란 동결을 수행한다.In the above-described freezing (S40-2) (Slow freezing), liquid nitrogen is added to the freezer, the temperature is adjusted to -6 degrees in a hold state, and fertilized egg freezing is performed.

상기 과정들을 통해 상기 배양접시(40)에 배양하는 수정란의 상태를 확인할 수 있다.Through the above process, it is possible to check the state of a fertilized egg cultured in the culture dish 40.

본 발명은 상기한 구성과 기능으로 이루어져 있고 비용을 현저히 절감할 수 있는 개체 배양이 가능한 수정란 배양 접시를 제공한다.The present invention provides a fertilized egg culture dish capable of culturing an individual, which has the above-described configuration and functions, and can significantly reduce costs.

본 발명은 미생물을 배양하는 접시를 생산, 제조, 판매, 유통, 연구하는 산업에 유용하다.The present invention is useful in industries that produce, manufacture, sell, distribute, and research dishes for culturing microorganisms.

특히 본 발명은 수정란을 배양하는 접시를 생산, 제조, 판매, 유통, 연구하는 산업에 유용하다.In particular, the present invention is useful in industries that produce, manufacture, sell, distribute, and research dishes for culturing fertilized eggs.

10: 상부기판
11: 하부기판
20: 채널
21: 하부채널
22: 상부채널
23: 하판부
24: 구분선
30: 채널보호프레임부
40: 배양접시10: upper substrate
11: Lower substrate
20: Channel
21: lower channel
22: upper channel
23: lower part
24: divider
30: channel protection frame
40: culture dish

Claims

A wide plate-shaped upper substrate 10;
A channel 20 provided on the upper substrate 10;
Consists of a channel protection frame portion 30 provided on the side of the upper substrate 10,
The channel 20 is composed of an upper channel 22 and a lower channel 21,
The upper channel 22 has a cylindrical structure,
The upper channel 22 has a cylindrical structure and mineral oil is added to block the culture medium contained in the lower channel 21 to perform a function of preventing evaporation of moisture.
The lower channel 21 is formed in a conical structure,
The lower channel 21 is formed with a lower plate 23, but is formed in a flat shape,
The depth (D1) of the channel 20 is formed to be smaller than the height (H2) of the channel support portion 31, so that the lower plate portion 23 is not in contact with the floor,
The channel protection frame portion 30 is provided on the side of the upper substrate 10 and performs a function of stably fixing the channel 20 to the upper substrate and a function of protecting from external shock,
The height (H1) of the channel protection frame part 30 is formed larger than the height (H2) of the channel support part 31 so that when the mineral oil applied to the upper channel 22 overflows, it does not spill out of the culture dish. To perform the function,
The inside of the culture dish is coated with gelatin to block the unfriendly point of the resin culture dish and to increase the characteristics of organic friendly of the fertilized egg to improve the efficiency of fertilized egg culture. Plate (40).

delete

According to claim 1,
The channel 20 is a fertilized egg culture dish 40 capable of culturing an individual, characterized in that it is composed of a plurality of upper substrates.