KR102072683B1

KR102072683B1 - 알레르기의 예방 방법

Info

Publication number: KR102072683B1
Application number: KR1020147024806A
Authority: KR
Inventors: 삐에르-앙리 벤아무; 크리스토프 뒤뽕; 뤼씨 몽둘레
Original assignee: 디비브이 테크놀로지스 (소시에떼 아노님)
Priority date: 2012-02-06
Filing date: 2013-02-04
Publication date: 2020-02-03
Anticipated expiration: 2033-02-04
Also published as: PT2812025T; CN104114185B; AU2017254938B2; IL233596A0; AU2017254938A1; KR20150035492A; JP6193266B2; US20140377311A1; WO2013117519A1; EP2812025B1; US20160324955A1; IL233596B; HUE036962T2; ES2644118T3; ES2798378T3; EP3248616A1; EP3248616B1; CN104114185A; AU2013218164A1; EP2812025A1

Abstract

본 발명은 대상체에서 알레르기 예방을 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 소아 알레르기의 경피 예방에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 방법에서 사용하기 위한 조성물뿐만 아니라, 이들의 제조에 관한 것이다. 본 발명은 임의의 알레르기, 특히 식품 또는 호흡기 알레르기에 대한 보호를 야기하는데 사용될 수 있다.

Description

알레르기의 예방 방법{METHOD OF PREVENTING ALLERGIES}

본 발명은 대상체에서 알레르기를 예방하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 소아들에서의 알레르기의 경피 예방에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 방법에 사용하기 위한 조성물뿐만 아니라, 이의 제조에 관한 것이다. 본 발명은 임의의 알레르기, 특히 식품 또는 호흡기 알레르기에 대한 보호를 야기하는데 사용될 수 있다.

알레르기는 일상적 의료 행위에서 점점 더 큰 위치를 차지하고 있다. 이것은 WHO에 의해 4번째의 전세계적 골칫거리로서 분류되는 전세계적 공중보건 현상이다. 프랑스에서, 세명 중 한명의 프랑스인에게 알레르기가 있고, 호흡기 및 식품 알레르기 모두가 성인 및 소아들 집단의 대부분에 영향을 준다.

탈감작화(desensitization)(또는 면역요법)는 최소량의 알레르겐을 투여함으로써, 상기 알레르겐에 대한 알레르기 반응을 다소 억제하는 것을 가능하게 하는 것에 따른 기법이다. 일정한 또는 가변적인 투여량으로 알레르겐을 점진적으로 투여함으로써, 대상체는 알레르겐에 대한 내성을 기르게 된다. 면역요법은 제한된 수의 알레르겐에 대해 감작(sensitize)된, 중증 IgE-의존적 알레르기가 있는 환자에서 유효한 것으로 입증되었다. 탈감작화는 단기간 알레르기 반응과 관련된 증상 뿐만 아니라, 예를 들어 알레르기성 비염의 천식으로의 변형과 같은 더욱 중증인 임상 증상으로의 징후의 진행을 감소시킬 수 있다(Tij et al., 2004). 2000년이 시작된 이래로, 이 방법만이 WHO에 의해 알레르기를 근본적으로 치료하기 위한 유일한 방법으로서 인정받았다.

면역요법의 작용 메카니즘이 잘 공지되어 있지는 않지만, 이들은 (i) IgG, 및 특히, IgG4 분획의 증가(상기 항체들은 시험관 내에서 IgE의 생물학적 효과를 차단함); (ii) TH1 및 TH2 면역학적 반응의 변형으로, 좀더 균형잡힌 TH1/TH2 반응을 촉진함; 및/또는 (iii) 비만세포, 특정 T 림프구 및 호산구에 대해 항-알레르기 특성을 나타내고 또한 IgG4의 생성을 촉진하는 인터류킨 10(IL-10)을 생성하는 T 세포의 생성과 관련되는 것으로 보인다.

면역요법은 피하, 설하, 비강 또는 경피를 비롯한 다양한 프로토콜 또는 경로에 의해 달성될 수 있다. 피하 면역요법이 널리 사용된다. 비용이 비싸고 매 주사마다 전문의의 개입이 필요하지만, 이것은 오늘날 여전히 소아들에게는 표준 탈감작화 경로로서 고려되고 있다(Pajno et al., 2005). 그러나, 매년 평균 3.4명이 사망하여 사망 빈도가 2백5십만 주사 당 1명으로 추정되므로 위험이 없는 것은 아니다. 게다가, 높은 반응 위험이 있는 잠재적인 아나필락시스 알레르겐, 예컨대 각과류 및 대부분의 식품 알레르겐은 피하 탈감작화 치료에 사용되지 않는다.

설하 면역요법은 피하 면역요법에 대한 만족스러운 대안으로서 WHO에 의해 고려된다. 환자에 의해 훨씬 양호한 내성으로, 설하 면역요법은 다른 투여 경로보다 양호한 비용-효과적인 비율을 제공하는 것으로 고려되는데, 이것이 의사의 개입을 필요로 하지 않고 환자에 의해 자가-투여될 수 있기 때문이다(Pajno et al., 2005). 또한, 1,000회 투여된 투여량에 대해 0.1 내지 0.2회 반응으로부터 추정되듯이, 설하 경로를 통한 치료 동안 부작용이 거의 발생하지 않는다. 이러한 반응은 구강 또는 설하 영역 또는 위장관에 영향을 주는 등 주로 미미하다(La Rosa et al., 1999).

그러나, 효율성의 측면에서, 설하 경로는 피하 경로보다는 덜 효과적인 것으로 고려된다: 이것은 더 많은 양의 알레르겐의 사용을 필요로 하며 모든 알레르겐에 대해 인정되지 못한다. 이것은 심지어 땅콩 및 우유에 대한 탈감작화를 위해 상기 경로를 통한 시험이 진행중임에도 그러하다. 다른 식품 알레르겐을 사용하는 상기 기법의 사용의 안정성은 평가받을 것이 남아있다.

비강-내 면역요법은 18회 중 17회의 통제된 연구에서 효과적인 것으로 입증되었다. 그러므로 이것은 적어도 알레르기성 비염을 치료하는데 있어서는 효과적이고 안전한 경로이다. 그러나, 이것은 일반적으로 환자에 의해 내성이 거의 길러지지 않아, 임상적 사용이 점점 제한된다. 상이한 탈감작화 경로를 비교하는 연구에서, 비강 경로를 통한 치료는 1년이 되기 전에 대략 50%의 경우에서 조기 중단되며, 피하 또는 설하 경로를 통해 치료된 소아들 중 10% 미만에서 초기 중단이 발생한 것과 비교된다(Pajno et al., 2005).

경피 면역요법은 피부 적용에 기반한다. 본 방법은 전형적으로 대상체의 피부 상에, 존재하는 알레르기를 유발하는 것으로 알려진 알레르겐을 반복적으로 적용하여, 일반적으로 피부의 표면층 내에 알레르겐의 확산을 야기하는 것을 포함한다. 본 발명자에 의해 수행된 실험은 경피 면역요법에 의해 유발된 면역 반응의 유형이 치료 조건에 의해 조절될 수 있다는 것을 보여준다. 예를 들어, 국제 출원 WO2009/080934호는 피부의 미손상 영역 상에 아쥬반트 없이 경피 요법을 가함으로써 알레르겐에 대한 강력한 탈감작화를 수득할 수 있다는 것을 기재하고 있다. 유사하게는, 국제 출원 WO2009/071599호는 땅콩에 대한 강한 탈감작화가 경피 면역요법에 의해 수득될 수 있다는 것을 기재하고 있다.

상기 실험 및 공개문헌에서, 경피 면역요법의 알레르겐-특이적 효과가 본 발명자에 의해 연구되었다. 연구를 지속하여, 본 발명자는 이제 놀랍게도, 치료 조건에 따라, 경피 면역요법이 알레르기 환자에서 알레르기의 발달을 예방하기 위한 예방적 치료로서 사용될 수 있다는 것을 발견하였다. 그러므로 상기 예상치못한 결과는 대상체에서 알레르기를 예방하기 위한 예방적 치료를 디자인할 수 있게 한다.

본 발명은 알레르겐의 예방적 경피 투여에 의해 포유류 대상체에서 알레르기를 예방하기 위한 신규 방법을 제공한다. 더욱 바람직하게는, 본 발명은 소아에게 알레르겐을 경피 투여하는 것을 포함하는 소아에서의 알레르기 예방 방법에 관한 것으로, 알레르겐은 동일한 알레르겐 또는 상이한 알레르겐에 대한 알레르기 반응의 검출 시 소아에게 투여된다.

본 발명의 추가의 목표는 또한 소아에게 하나 이상의 알레르겐을 경피 투여하는 것을 포함하는 소아에서의 알레르기 예방 방법에 관한 것으로, 소아는 6세 미만이고, 하나 이상의 알레르겐에 대해 검출된 알레르기 반응을 갖는다. 소아는 바람직하게는 영아 또는 유아이다.

본 발명의 하나의 양상에 따르면, 소아가 우유 또는 집먼지 진드기에 알레르기가 있고 6세 미만이며, 상기 소아에게 하나 이상의 우유 또는 집먼지 진드기 단백질을 경피로 투여하는 것을 포함하는, 소아에서의 알레르기 예방을 위한 방법이 제공된다. 본 출원에서 기재될 바와 같이, 이러한 경피 투여는 상기 소아에서 다른 알레르겐에 대한 알레르기의 발생 또는 발달을 예방한다.

본 발명의 추가의 양상에 따르면, 소아에서 첫번째 알레르기 반응의 발생을 검출 또는 확인하고, 상기 첫번째 알레르기 반응의 검출 또는 확인 시, 상기 소아에게 상기 첫번째 알레르기 반응의 원인이 되는 하나 이상의 알레르겐을 경피로 투여하고, 상기 경피 투여가 소아를 또다른 알레르겐에 대한 하나 이상의 추가의 알레르기의 발달로부터 보호하는 것을 포함하는, 소아에서의 알레르기 예방을 위한 방법이 제공된다.

본 발명의 추가의 양상에 따르면, 소아에서 알레르기 반응의 발생을 검출 또는 확인하고, 상기 알레르기 반응의 검출 또는 확인 시, 상기 소아에게 상기 알레르기 반응의 원인이 되는 하나 이상의 알레르겐을 경피로 투여하고, 상기 경피 투여가 상기 소아에서 복합 알레르기의 발달로부터 소아를 보호하는 면역 반응을 유도하는 것을 포함하는, 소아에서의 복합 알레르기 예방을 위한 방법이 제공된다.

본 발명은 또한 조성물이 알레르겐을 포함하고 알레르기가 있는 소아에게 경피로 적용되는, 대상체에서의 알레르기를 예방하는데 사용하기 위한 조성물에 관한 것이다. 가장 바람직하게는, 소아는 6세 미만이고, 더욱 바람직하게는 소아는 영아 또는 유아이다. 더욱더 바람직하게는, 소아는 우유 또는 집먼지 진드기에 알레르기가 있다. 가장 바람직하게는, 소아는 첫번째 알레르기의 검출 시 치료된다.

본 발명은 식품, 호흡기 또는 접촉성 알레르기를 포함하여, 치료된 대상체에서 추가의 알레르기 발달을 예방하기 위해 사용될 수 있다. 이것은 첫번째 알레르겐에 대해 첫번째 알레르기 사건을 나타내는 영아 또는 유아를 치료하는데, 첫번째 알레르겐에 대해 소아를 탈감작화하는데, 그리고 다른 상이한 알레르겐에 대한 추가의 알레르기 발달을 예방하는데 특히 적합하다.

도 1: 연구 디자인. BALB/c 마우스를 우유에 대해 감작시키고, 2개의 그룹으로 나누어, 하나의 그룹은 처리하고(EPIT) 다른 그룹은 처리하지 않았다(Sham). 처리는 8주 동안 수행하였다. 상기 기간 후, 모든 마우스에게 마우스를 땅콩 단백질 추출물(Peanut Protein Extract: PPE)에 대해 감작시키기 위해 일반적으로 사용되는 동일한 프로토콜로 땅콩을 주었다. 이후 마우스를 땅콩에 10일 동안 노출시켰다. 조직학에 의해 측정되는, 식도 내로의 호산구 침윤의 측정에 의해 식도 염증을 평가하였다. 혈청학적 반응 및 세포 반응을 또한 조사하였다.
도 2: 제43일(D43)에의 감작화 후, 제78일(D78)에 EPIT 동안, 및 치료 종결시, 제99일 및 제127일(D99 및 D127)에 우유에 대한 특이적 IgE(도 2a) 및 IgG2(도 2b) 반응. 결과를 평균 ± SD로 표현한다. ** p<0.01.
도 3: EPIT후 그러나 PPE에 노출되기 전(D99) 및 PPE에 노출된 후(D127), PPE에 대한 특이적 IgE(도 3a) 및 IgG2(도 3b) 반응. 결과를 평균 ± SD로 표현한다. * p<0.05, *** p<0.001.
도 4: IL-4(도 4a) 및 IL-5(도 4b)에 의해 측정된, 우유(CMP) 또는 PPE에 의한 시험관 내에서 재활성된 비장세포의 세포 반응. 결과를 평균 ± SD로 표현한다. * p<0.05.
도 5: 시험관 내에서 재활성된 비장세포로부터의 Foxp3+CD25+CD4+ T 세포(Treg)의 유도. 실험 종결시에, 비장세포를 수확하고 우유(그래프의 좌측) 및 PPE(그래프의 우측)의 존재 하에 3일 동안 시험관 내에서 재활성시켰다. 총 CD4+ T 세포 집단 당 Treg의 백분율을 평균 ± SD로 표현한다. * p<0.05, ** p<0.01.
도 6: 조직학적 분석에 의해 평가된 식도 내로의 호산구 침윤. 결과를 평균 ± SD로 표현한다. ** p<0.01.

본 발명은 알레르기의 신규한 예방적 치료를 제공한다. 이것은 특히 알레르겐에 대한 알레르기 반응을 나타내는 소아를 치료하여, 다른 상이한 알레르겐에 대한 추가적인 알레르기의 발달로부터 이들을 보호하는데 적합하다. 이것은 우유 또는 집먼지 진드기에 대해 알레르기 반응을 보이는 어린 소아들을 치료함으로써, 다른 알레르겐에 대한 추가적인 알레르기 발달로부터 상기 소아들을 보호하는데 특히 효과적이다. 실제로, 첫번째 알레르겐에 대해 알레르기 반응을 일으킨 영아 또는 유아와 같은 어린 소아들은 다른 물질에 대해 알레르기성이 되기가 매우 쉽다. 본 발명은 이러한 알레르기가 있는 대상체의 치료를 가능하게 하고 추가의 알레르기의 발생을 감소시킨다.

본 출원은 하기 정의를 참조로 하여 가장 잘 이해될 것이다:

정의

"경피 투여"는 피부의 표면과 접촉을 가능하게 하는 조건 하에서 대상체의 피부 상에 대해 물질(예를 들어, 알레르겐)을 적용하는 것을 말한다. 피부 적용은 바람직하게는 임의의 피부 천공 또는 전처리 없이 수행된다. 피부 적용은 바람직하게는 피부의 표면층(들) 내에 알레르겐의 통과를 가능하게 하는 조건에서 및/또는 알레르겐의 면역 세포와의 접촉을 가능하게 하기에 충분한 시간 기간 동안 유지된다. 경피 투여는 바람직하게는 피부 장치, 예컨대 패치에 의해 수행된다.

본 발명의 문맥 내에서, 알레르기를 "예방"한다는 용어는 대상체를 추가의 알레르기의 발달로부터의 보호, 추가의 알레르겐에 대한 민감도의 출현 예방, 추가의 알레르겐에 대한 이러한 민감도 또는 알레르기의 출현 또는 발생 지연, 또는 임의의 추가의 알레르기 반응의 강도 억제 또는 감소를 포함하는 것을 의미한다.

본 발명의 문맥 내에서, "미손상 피부"라는 용어는 각질층의 온전함이 실질적으로 유지되어야만 하는 것을 나타낸다. 본 발명의 실시를 위해, 미손상(즉, 비-전처리된) 피부 상에, 예를 들어 각질층의 온전함이 본질적으로 유지되는 피부의 표면 또는 부분 상에, 항원을 적용하는 것이 또한 가장 바람직하다. 각질층의 온전함 및 상기 각질층 아래에 위치하는 케라틴세포 및 랑게르한스 세포의 자연적 활성화 상태를 유지하는 것이, 편향된 Th2 면역 반응을 피하기 위해 중요하다. 상기 온전함을 유지함으로써, 수득되는 반응이 내성이라는 측면으로 크게 지향한다. 따라서, 예를 들어 사세포를 제거하기 위해 예를 들어, 수화, 물로 세정 또는 매우 부드러운 단일 스트리핑(single stripping)과 같이 피부 표면의 부드러운 세정이 적용 부위에 수행될 수 있지만, 피부는 전처리되지 않아서 실질적인 각질층의 온전함을 유지하고 있어야 한다. 특히, 피부의 테이프-스트리핑(tape-stripping) 또는 강한 마모가 수행되어서는 안되는데, 이러한 전처리는 각질층의 전부 또는 일부를 붕괴 또는 제거하여 케라틴세포의 자극을 유발하기 때문이다. 유사하게는, 각질층의 천공이 회피되어야만 한다.

"알레르겐"이라는 용어는 알레르기 반응에 관여하는 면역 분자를 지칭한다. 알레르겐은 지질, 단백질, 펩티드, 폴리펩티드, 금속, 플라스틱 등과 같은 다양한 특성의 것일 수 있다. 특정 구현예에서, 알레르겐은 단백질, 폴리펩티드 및/또는 펩티드이다. 알레르겐은 자연 상태일 수 있고, 또는 (예를 들어, 재조합 및/또는 효소적 기법에 의해) 인공적으로 제조될 수 있다. 알레르겐은 그의 안정성, 면역원성 등을 향상시키기 위해 구조적으로 변경 또는 개질될 수 있다. 알레르겐은 순수하거나 다른 성분과의 혼합물일 수 있다. 알레르겐은 여러 분자의 혼합물(예를 들어, 추출물)일 수 있다. 하기에 추가로 논의되는 바와 같이, 알레르겐은 상이한 상태, 예를 들어 액체 또는 건조 상태로 사용될 수 있다.

알레르기 예방 방법

본 발명의 하나의 양상에 따르면, 알레르기의 예방 치료를 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 특히, 본 발명자는 알레르겐의 경피 투여가 대상체에서의 비 알레르겐-특이적 면역 반응을 유도하거나 촉진할 수 있어, 대상체에서 다른 상이한 알레르겐에 대한 추가의 알레르기의 발달로부터 보호할 수 있다는 것을 예상치 못하게 발견하였다. 알레르기 백그라운드(background)를 갖는 대상체에 경피 면역요법을 적용함으로써, 존재하는 알레르기를 탈감작시킬 뿐만 아니라, 추가의 알레르기의 발달을 예방하는 것이 가능하다. 하기에 상세히 논의되는 바와 같이, 본 출원인의 생체 내 실험은 우유에 알레르기가 있는 포유류에 대한 우유 단백질의 경피 적용이 우유에 대항하여 탈감작시키고 또한 땅콩 및 먼지 진드기를 포함한 다른 알레르겐의 도전으로부터 보호한다는 것을 입증한다. 상기 결과는 식품 알레르겐을 사용하여, 다른 식품 알레르겐 뿐만 아니라 호흡기 또는 접촉성 알레르겐에 대한 추가의 알레르기의 발달에 대항하여 보호 면역을 야기하는 것이 가능하므로 특히 놀랍고 주목할만 하다. 본 발명은 추가의 알레르기를 발달시킬 위험이 있는 첫번째 알레르기 반응을 나타내는 소아들을 보호하는데 특히 적합하다. 본 발명은 어린 소아들, 예컨대 영아(0-1세) 및 유아(1-3세)의 치료에 특히 적합하다. 이론에 구애됨 없이, 본 출원인은 반응이 경피 요법에 의해 Treg 세포의 생성 촉진에 의해 야기되어, 대상체에서의 IgE-생성 세포 및 다른 알레르기 면역 세포의 양호한 조절을 유도할 수 있는 것으로 여긴다.

본 발명의 하나의 양상에서, 소아에게 하나 이상의 알레르겐, 바람직하게는 검출된 알레르기 반응의 원인이 되는 하나의 알레르겐을 경피 투여하는 것을 포함하는, 검출된 알레르기 반응을 갖는 소아에서 추가의 알레르기를 예방하기 위한 방법이 제공된다.

본 출원인은 이러한 보호 효과가 일단 대상체에서 적어도 첫번째 알레르기 반응이 일어날 때 발생된다는 것을 발견하였다. 본 출원에서 제시되는 결과는 이러한 대상체에서의 알레르겐의 경피 적용이 Treg를 유도하거나 촉진할 수 있다는 것을 입증한다. Treg를 경피적으로 유도하는 능력은 이전에 해당 분야에 보고된 바가 없다. 제시된 결과는 경피적으로 투여된 알레르겐이 대상체에서 검출된 알레르기 반응의 원인이 되는 알레르겐인 경우, Treg가 상기 대상체에서 유도된다는 것을 또한 보여준다. 그러므로, Treg 세포 생성을 유도하기 위해 적어도 첫번째 알레르기 반응(예를 들어, 알레르겐에 대한 민감도)이 필요하고, 알레르겐을 사용하는 경피 치료가 상기 Treg 집단을 증폭시킬 수 있어, 후속 알레르기 반응(들)에 작용하는 것이 가능하다. 본 치료는 비-알레르겐 특이적 면역 반응의 발생을 가능하게 하여, 이는 새로운 알레르겐에 대한 후속 알레르기의 발달을 억제한다.

그러므로 본 발명은 소아, 특히 6세 미만의 어린 소아들을 치료하는데 특히 적합하다. 이러한 소아들에서, 면역계는 아직 복합 알레르겐에 노출되지 않았다. 특히, 식품 알레르겐은 이러한 소아들에서 여전히 제한된다. 따라서, 첫번째 알레르기 반응의 검출 시, 본 발명의 예방적 경피 치료가 특히 효과적이다. 게다가, 알레르기가 초기에 발달될 수 있기 때문에, 상기 소아들을 치료함으로써, 복합 알레르기의 발달 예방이 가능하다.

그러므로 치료는 바람직하게는 알레르기 반응을 나타내는 6세 미만의 소아들에게 적용된다. 본 발명은 영아 및 유아를 치료하기에 특히 적합하다. 상기 소아들에서 검출되는 알레르기 반응은 전형적으로는 우유 알레르기 또는 먼지 진드기 알레르기이다. 따라서, 본 방법은 우유 또는 먼지 진드기에 대해 알레르기를 갖는 6세 미만의 소아들을 치료하기에 특히 적합하다. 상기 대상체에게 예방량의 우유 또는 집먼지 진드기 알레르겐을 경피 투여함으로써, 추가 알레르기의 발달에 대해 소아들을 효과적으로 보호하는 것이 가능하다.

대상체에서 알레르기 반응의 존재의 검출 또는 확인 바로 후에 치료를 수행하는 것이 바람직하다. 실제로, 초기에 작용함으로써(즉, 대상체가 복합 알레르겐에 노출되기 전), 넓은 범위의 알레르기의 발달을 예방할 것으로 예상되는 강하고 잠재적인 면역 반응을 유도하는 것이 가능하다. 이에 따라, 첫번째 알레르기 반응의 검출 또는 확인시에 소아들을 치료하여, 모든 다른 알레르겐에 대항하는 보호 효과가 고려될 수 있도록 하는 것이 가장 바람직하다.

하나의 바람직한 구현예에서, 알레르겐은 치료된 소아에서 두번째 알레르겐에 대한 두번째 알레르기 반응이 검출되기 전에 투여된다. 알레르기 반응의 검출 또는 확인은 당업계에 단독으로 공지된 기법을 사용하여 수행될 수 있다. 적합한 방법의 예에는 프릭(prick)-시험, IgE의 투여 및/또는 아토피 패치-테스트의 사용이 포함된다. 알레르기 반응의 검출에는 심지어 알레르기의 임상적 징후가 존재하지 않지만 알레르겐에 대한 민감도가 검출된 경우도 포함된다. 일반적으로, 검출은 먼저 고전적인 알레르기 증상(염증, 팽윤 등)의 출현으로부터 기인한다. 이후 필요하다면 상기 기법 중 임의의 것을 사용하여 예를 들어, 의사에 의해 다시 시험되거나 입증될 수 있다. 일단 알레르기 반응이 대상체에 대해 검출되거나 입증되면, 본 발명의 치료를 시작할 수 있다. 치료 효율은 치료가 알레르기 반응의 검출 또는 확인 후 바로(예를 들어, 즉시 또는 수 주 이내, 예를 들어 4주 미만) 시작되는 경우 증가할 것이다. 게다가, 초기에 작용함으로써, 임의의 다른 알레르기에 대한 예방 효과가 발생된다. 상기 목적을 위해, 치료가 대상체에서 첫번째 알레르기 반응의 검출 시, 그리고 추가의 알레르기의 검출 전(예를 들어, 상기 소아에서 두번째 알레르겐에 특이적인 검출가능한 IgE의 출현 전)에 수행되는 것이 최상이다. 그러나, 치료는 또한 그것이 부가적인 알레르기에 대항하여 여전히 일반적인 보호를 발생시킬 수 있으므로, 여러 알레르기 반응을 보이는 대상체에서 잠재력이 있다.

그러므로, 본 방법은 첫번째 알레르기 반응을 가진 영아(1세 미만) 또는 유아(1세 내지 3세)의 치료에 특히 유효하다.

바람직한 구현예에서, 본 방법은 우유 또는 집먼지 진드기에 대해 검출된 알레르기 반응을 가진 6세 미만의 소아들의 치료를 위한 것이다.

본 발명의 하나의 양상에 따르면, 대상체에 대한 하나 이상의 알레르겐를 경피 적용하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 가장 바람직하게는, 적용되는 하나 이상의 알레르겐은 대상체에서 검출된 알레르기 반응의 원인이 되는 알레르겐이다. 실제로, 이러한 알레르겐을 사용하면, 보호 효과가 수득되고 또한 대상체가 알레르겐에 대해 탈감작될 수 있다. 게다가, 본 출원인은 놀랍게도 원인 알레르겐은 대상체에서 Treg를 유도할 수 있는 반면, 미관련된 알레르겐은 그렇지 못하다는 것을 보여주었다.

검출된 알레르기 반응의 "원인이 되는" 알레르겐(또는 "원인" 알레르겐)은 대상체가 알레르기를 갖는 물질로부터 유래된 임의의 알레르겐을 지칭한다. 알레르겐은 알레르기 물질의 성분(예를 들어, 우유 또는 집먼지 진드기의 단백질), 또는 면역원성 에피토프(들)을 갖는 이러한 성분의 단편(예를 들어, 단백질의 단편)일 수 있다. 상기한 바와 같이, 알레르겐은 전체 추출물, 정제된 혼합물, 단리된 면역원 등일 수 있다.

본 발명의 하나의 구현예에서, 검출된 알레르기 반응은 우유 알레르기이고, 투여된 알레르겐은 우유 단백질 또는 면역원성 에피토프(들)을 갖는 이의 단편을 포함한다.

본 발명의 또다른 구현예에서, 검출된 알레르기 반응은 집먼지 진드기 알레르기이고, 투여된 알레르겐은 집먼지 진드기 단백질 또는 면역원성 에피토프(들)을 갖는 이의 단편을 포함한다.

경피 치료 프로토콜은 의사에 의해 조정될 수 있다. 전형적으로, 알레르겐은 보호 면역 반응을 야기하기에 충분한 시간 기간 동안 반복적으로(즉, 수 회) 적용된다. 바람직한 구현예에서, 치료는 3개월 이상, 바람직하게는 6개월 이상, 더욱 바람직하게는 6 내지 36개월의 기간 동안 수행된다. 상기 치료 기간 동안, 알레르겐은 다양한 빈도로, 예컨대 매주, 매 격일, 또는 매일 투여될 수 있다. 각 적용에 사용되는 알레르겐의 투여량은 당업자에 의해 조정될 수 있다. 전형적으로는, 이는 0.1 내지 10000㎍, 바람직하게는 20 내지 1000㎍을 포함할 수 있다. 대상체에서의 보호 면역은 통상의 검사에 의해 언제든 확인될 수 있다. 특히, 치료된 대상체에서의 보호 면역 반응의 존재는 알레르기, 예컨대 소화관 질환, 피부 증상(예를 들어, 습진 또는 아토피 피부염), 비염, 또는 천식의 임상적 증상의 감소, 또는 이의 소멸 또는 부재에 의해 입증될 수 있다. 임상적 징후의 부재가 충분하더라도, 대상체에 면역 세포 또는 매개체(예컨대 IgE)를 투여하는 것이 또한 수행될 수 있다. 일단 보호 면역이 발생되면, 치료를 감소(투여량, 적용 빈도, 적용 시간)하거나 또는 심지어 중지하는 것이 가능하다. 상기 나타낸 바와 같이, 치료는 전형적으로는 상이한 간격으로의 반복된 적용으로, 3개월 이상의 시간 기간 동안 유지된다.

바람직한 구현예에서, 알레르겐은 아쥬반트 없이 적용된다. 그러나, 바람직하지는 않더라도, 알레르겐은 아쥬반트, 즉, 면역 반응 향상을 야기하도록 면역계를 예를 들어, 활성화 또는 가속화시키는 임의의 성분과 조합될 수 있다. 아쥬반트의 예에는 무기 염, 예컨대 칼슘 포스페이트, 알루미늄 포스페이트 및 알루미늄 히드록시드; 면역자극성 DNA 또는 RNA, 예컨대 CpG 올리고뉴클레오티드; 단백질, 예컨대 항체 또는 톨(Toll)-유사 수용체 결합 단백질; 사포닌, 예를 들어, QS21; 사이토카인; 무라밀 디펩티드 유도체; LPS; MPL 및 3D-MPL을 포함하는 유도체; GM-CSF(과립구-대식세포 콜로니-자극 인자: Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor); 이미퀴모드; 콜로이드 입자; 완전 또는 불완전 프로이드(Freund) 아쥬반트; 리비(Ribi) 아쥬반트 또는 박테리아 독소, 예를 들어 콜레라 독소 또는 장독소(LT)가 포함된다.

추가의 바람직한 구현예에서, 알레르겐은 피부의 미손상 영역 상에 적용된다.

아쥬반트 없이 알레르겐을 미손상 피부 상에 적용하는 것이 특히 바람직하다.

알레르겐은 알레르겐과 대상체의 피부 사이에 접촉을 유지하기에 적합한 상이한 기법 또는 장치를 사용하여 적용될 수 있다. 이러한 장치에는 제한 없이 패치, 테이프, 드레싱, 시트 또는 당업자에게 공지된 임의의 다른 형태가 포함된다. 바람직하게는, 피부 장치는 패치, 더욱더 바람직하게는 밀봉 패치(occlusive patch)이다. 바람직한 패치 장치는 피부의 온전성을 바꾸지 않는다, 즉, 이들은 비-관통성이다. 가장 바람직한 구현예에서, 본 발명의 방법은 국제 특허 출원 WO2002/071950 및 WO 2007/122226에 기재된 피부 패치 장치를 사용한다. 이러한 장치는 밀봉성이고 건조 형태로 알레르겐을 사용하는 것으로 설정되며, 알레르겐은 패치 상에 접착제를 첨가하지 않고, 정전기 및/또는 반데르발스(Van der Waals)력을 통해 유지된다. 이러한 장치(Viaskin®라고 명명됨)의 제조 및 특징은 그 전체가 본원에 참조로서 인용된 상기 확인된 출원에서 상세히 기재된다.

본 발명의 수행을 위해, 피부와 함께 밀폐된 챔버를 형성하도록 조정된 뒷면이 있고, 상기 뒷면이 챔버 내의 피부쪽을 보는 면 상에 정전기력 및/또는 반데르발스력을 통해 부착된 건조 항원을 가지고 있는 장치를 사용하는 것이 특히 적합하다. 피부에 적용시, 챔버 내의 수분이 증가하여, 알레르겐 용해와 피부와의 접촉을 초래한다.

본 발명의 또다른 바람직한 구현예에서, 항원은 알레르겐이 결합된 지지체를 포함하는 밀봉 패치 장치를 사용하여 대상체의 피부 상에 적용된다. 바람직하게는, 알레르겐은 접착제를 첨가하지 않고, 정전기 또는 반데르발스력을 통해 패치의 지지체에 부착된다. 특정 구현예에서, 패치의 지지체는 셀룰로오스 플라스틱(CA, CP), 염화폴리비닐(PVC), 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 폴리카보네이트, 폴리아크릴, 폴리올레핀, 폴리에스테르, 폴리에틸렌 및 에틸렌-비닐 아크릴레이트(EVA)로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체 또는 유리를 포함할 수 있다. 패치는 접착제 경계에 의해 피부에 고정될 수 있다.

가장 바람직한 구현예에서, 본 방법은 바람직하게는 정전기 피부 장치를 사용하여 피부 상에 적용된 건조 알레르겐 제제를 사용하여 수행된다. 이와 관련해서, 용어 "건조"는 알레르겐이 실질적으로 분말화된, 예를 들어, 개별화되거나 덩어리를 형성할 수 있는 입자의 형태인 사실을 지칭한다.

덜 바람직하지만, 알레르겐은 액체 형태일 수 있고, 저장소 또는 관통된 멤브레인을 갖는 밀봉 장치와 같은 공지된 장치를 사용하여 적용된다.

본 발명의 하나의 양상에 따르면, 우유 또는 집먼지 진드기에 대해 검출된 알레르기 반응을 갖는 6세 미만의 소아에게 하나 이상의 우유 또는 집먼지 진드기 단백질을 경피 투여하는 것을 포함하며, 상기 경피 투여가 상기 소아에서 다른 알레르겐에 대한 알레르기를 예방하는, 소아에서 알레르기를 예방하기 위한 방법이 제공된다.

또한, 본 발명은 소아에서 첫번째 알레르기 반응의 발생을 검출 또는 확인하는 것을 포함하고, 상기 첫번째 알레르기 반응의 검출 시 상기 소아에게 상기 첫번째 알레르기 반응의 원인이 되는 알레르겐을 경피 투여하는 것을 포함하고, 상기 경피 투여는 상기 소아에서 상기 소아를 복합 알레르기의 발달로부터 보호하는 면역 반응을 유도하는, 복합 알레르기의 발달로부터 소아를 보호하기 위한 방법에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 대상체에서의 알레르기의 예방을 위해 사용되는 조성물로서, 상기 조성물이 알레르겐을 포함하고 검출된 알레르기 반응을 가진 소아에게 경피로 적용되는 것인 조성물에 관한 것이다. 더욱 바람직하게는, 소아는 6세 미만이다. 더욱더 바람직하게는, 소아는 우유 또는 집먼지 진드기에 대해 알레르기가 있다. 가장 바람직하게는, 소아는 첫번째 알레르기의 검출 시 치료된다.

본 발명의 추가의 목적은 대상체에게 원인 알레르겐을 경피 적용하는 것을 포함하는, 알레르기를 갖는 대상체에서 Treg 를 유도하는 방법이다.

본 발명의 추가의 양상 및 장점은 하기 실시예 부분에서 기재될 것이며, 이것은 설명으로 고려되어야 한다.

실시예

방법

마우스

3주령 암컷 BALB/c 마우스(Charles River Laboratories, France)를 연구에 사용하였다. 모든 실험은 유럽 공동체 동물 취급 규칙에 따라 수행하였다.

우유에 대한 감작화 프로토콜

3주령 BALB/c 마우스를 아쥬반트로서 10㎍의 콜레라 독소와 혼합된 우유를 6주 동안 위장내 투여함으로써 우유에 대해 감작시켰다. 감작화 기간 전 및 종결시에 후-안와 정맥총으로부터 혈청을 수집하였다. 미처리 마우스도 동일자에 피를 뽑았다.

우유에 대한 경피 면역요법 프로토콜

경피 면역요법(EPIT)을 연속되는 8주 동안 1주에 1회 주행하였다. 먼저, 마우스를 케타민 및 자일라진으로 복강내 마취시키고, 전기 면도기 및 제모 크림으로 털을 밀었다. 다음 날, 100㎍의 우유 단백질을 등에 바르고 48시간 동안 접착 밴드로 유지시켰다.

땅콩에 대한 감작화 프로토콜

경피 면역요법의 종료 2주 후에, 마우스를 경구로, 오직 1 회 투여량(80mg) 의 땅콩 단백질을 투여함으로써 입증된 땅콩 감작화 프로그램에 적용시켰다. 대조군 마우스(우유에 대해 감작되지 않은, 우유에 처리되지 않은)를 양성 대조군으로서 동일한 땅콩 감작화 프로그램에 적용시켰다. 미처리 마우스를 음성 대조군으로서 포함시켰다.

지속적인 땅콩 경구 유발

땅콩을 이들의 섭생에 재도입하였다. 이것은 연속 4일 동안 표준 마우스 사료 대신 땅콩만을 급식하는 것으로 이루어진다. 이후 동물에게 차후 6일 동안 표준 사료와 혼합된 땅콩을 주고, 10mg의 땅콩 단백질을 포함하는 용액의 위장내 투여를 상기 제2 단계의 마지막 3일 동안 매일 지속하였다. 최종적으로, 깊은 마취후에 마우스를 희생시키고, 샘플을 취해 식도의 조직학, 식도 점막내 사이토카인의 mRNA 발현 및 재활성된 비장세포에 의해 분비되는 사이토카인을 검사하였다. 땅콩에 대한 혈청학적 반응을 측정하기 위해 혈액 샘플을 또한 취하였다.

혈장 샘플 내의 특이적 IgE, IgG1, 및 IgG2a의 어세이

마취하에 혈액 샘플을 후-안와 정맥총으로부터 수집하고, 혈장 샘플을 추가의 분석 전까지 -20℃에 저장하였다. 특이적 항체를 사내에서 개발된 정량 ELISA를 사용하여 측정하였다. 간략하게는, 마이크로타이터 플레이트를 웰 당 100㎕의 우유 또는 땅콩 알레르겐 물질로, 5㎍/ml의 단백질 농도로 코팅하였다. 웰 당 50㎕의 각각의 혈청의 연속 희석물을 분배하고, 24시간 동안 +4℃에서 인큐베이션시켰다. 알칼리 포스파타아제(Serotec, Oxford, England)로 표지된 항-마우스 IgE, IgG1 또는 IgG2a 항체를 추적제로서 사용하였다. 파라-니트로페닐 포스페이트(pNPP - Sigma, France)를 효소 기질로서 사용하였다. 특이적 IgE, IgG1 및 IgG2a 를, 알레르겐 단백질 대신 추적제에 상보적인 항-마우스 IgE, IgG1 또는 IgG2a 항체(Serotec, Oxford, England)로 코팅된 고체 상을 사용하는 동일한 조건 하에서 수행된 총 IgE, IgG1 또는 IgG2a 어세이로 수득된 농도-반응 곡선과 비교하여 정량하였다. 마우스 면역글로불린 표준은 Serotec(Oxford, England)으로부터 입수하였다.

세포 반응

마우스의 희생 후, 비장을 단일-세포 현탄액으로 손질하고, RPMI-1640(Gibco, France)으로 3회 세정하였다. 세포를 계수하여 4 x 10⁶ 세포/ml의 배양 밀도로 조정하고, 500㎕의 세포 현탁액을 500㎕ 배지 또는 우유 또는 PPE(100㎍/ml)와 함께 24-웰 마이크로타이터 플레이트(Nunc)의 각 웰에 넣었다. 72시간 후, 상청액을 수확하고, 제조사의 지침에 따라 BioPlex cytokine Assay(BioRad, marnes-la-Coquette, France)를 사용하여 사이토카인의 존재에 대해 분석하였다. 세포 계수 및 CD4, CD25 및 Foxp3 염색을 특정 항체(BD Pharmingen)를 사용하여 수행하였다. 기정 FSC^lo/SSC^lo 게이트에서 5000회 사건을 습득함으로써 Canto II 세포분석기 상에서 습득을 수행하였다. 이후 CD4+ 집단 내 CD25 및 Foxp3-양성 세포의 백분율을 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 평가하였다.

결과

혈청학적 반응 ( 도 2 및 3)

우유에 대한 감작화를 제1일 내지 제43일까지 수행한 후, 우유 EPIT에 의한 처리를 수행하였다(도 1의 프로토콜 참조).

도 2a에서 제시된 바와 같이, 우유에 대한 감작화는 마우스에서의 특이적 IgE의 생성에 의해 표시된다(도 2a: 제43일).

우유-감작된 마우스에서, 우유 EPIT 처리(도 2a: 제44일 내지 제127일)는 하기를 유도하였다:

우선, 8주간의 처리 동안 특이적 IgE의 증가(도 2a: 제78일 내지 제98일),

이후 임상 연구에서 관찰된 바와 같이, EPIT의 종료 1개월 후에 특이적 IgE의 감소(도 2a: 제99일 내지 제127일);

최종적으로, Th1 생물학적 마커인 특이적 IgG2a의 유의한 증가(도 2b: 제D78일 내지 제D127일). 제 127일에, 특이적 IgE를 넘는 특이적 IgG2a의 달성된 비율은 Th2 프로파일을 형성하는 면역 반응의 좀더 현저한 Th1 프로파일로의 개질을 보여주며, EPIT 효능을 나타낸다.

프로토콜의 제 2상 동안, 마우스를 PPE에 노출시켰다. 결과는 제99일에 땅콩에 노출된 마우스 중에서(땅콩에 대한 감작화 프로토콜) 오직 Sham 처리군 및 대조군 마우스만이 땅콩에 대해 특이적 IgE의 증가를 보였다(도 3a)는 것을 나타낸다. 반대로, 경피 우유 면역요법으로 미리 처리된 마우스에서는, 땅콩에 대한 특이적 IgG2a의 유의한 증가(도 3b)가 관찰되었고, 이는 땅콩에 대한 내성 반응의 특징이다. 상기 결과는 우유 EPIT 처리가 마우스를 후속 PPE 알레르기로부터 보호하였다는 것을 보여준다.

세포 반응 ( 도 4 및 5 )

i) 사이토카인 (도 4)

도 4는 IL-4(도 4a) 및 IL-5(도 4b)에 측정된 바와 같은, 우유 단백질(CMP) 또는 땅콩 단백질 추출물(PPE)에 의해 시험관 내에서 재활성화된 비장세포의 세포 반응을 보여준다. 결과는 평균 ± SD로서 표현된다.

도 4-좌측 부분 및 도 4b-좌측 부분: Sham 그룹의 비장세포의 시험관 내 재활성화는 대조군 및 EPIT에 비해(p<0.05), Th2 사이토카인인 IL-4 및 IL-5의 생성에 의해 현저해졌다. 상기 현상은 우유-EPIT 마우스에 적용된 EPIT의 보호 효과를 나타낸다.

도 5-우측 부분 및 도 5b-우측 부분(EPIT/Sham/대조군 그룹에 대한 땅콩 단백질 노출 프로토콜의 영향): 우유-감작화-Sham-처리 및 대조군 마우스에서의 땅콩에 대한 노출은 우유 감작화-EPIT 처리된 마우스에 비해(p<0.05), Th2 사이토카인인 IL-4 및 IL-5의 높은 생성에 의해 현저해졌다. 상기 현상은 우유 단백질 감작화 마우스에 적용된 EPIT의 보편적인 보호 효과를 나타낸다.

ii) Treg (도 5)

Treg 세포의 특이적 유도를 하기 사건 후에 분석하였다:

- 감작화(도 5-우유 - 좌측 부분),

- 우유 EPIT(도 5-우유/ - 우측 부분),

- Sham 마우스에 대한 PPE 노출(도 5 - PPE - 좌측 부분),

- 우유 EPIT 처리 마우스에 대한 PPE 노출(도 5 - PPE - 우측 부분).

본 결과는 우유 EPIT 처리된 그룹에서, 높은 수준의 Treg(CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺) 세포가 우유 감작화 후에 유도된다는 것을 보여준다. 상기 Treg 집단은 면역요법에 의해 특이적으로 유도된다. 반대로, Treg 세포의 수는 PPE의 존재 하에 시험관 내 재활성화에 의해 증가되지 않았다. 이론에 구애됨 없이, EPIT-우유에 의해 특이적으로 유도된 Treg 세포의 존재(도 5-우유/ - 우측 부분)가 Th2 사이토카인의 생성 없이 PPE에 대한 면역 반응을 내성 프로파일로 유도하는 것 같다.

식도 내 호산구 침윤 ( 도 6 )

땅콩에 대한 지속적인 경구 땅콩 노출은 주로 식도를 자극하여, 땅콩에 대해 감작된 마우스에 대해 높은 호산구 침윤을 유도한다(대조군, 도 6).

PPE 감작화 프로토콜로, 감작되고 우유에 처리되지 않고, 이후 땅콩에 노출된 마우스에서는 높은 호산구 침윤이 관찰되었다(sham, 도 6).

감작되고 우유에 대해 EPIT-처리된 마우스가 땅콩에 노출되어 식도 염증이 유도된 경우, 미처리 마우스(우유 및 땅콩에 감작되지 않은 마우스: naive, 도 6)와 유사한 수준으로, 식도에서 호산구 침윤이 관찰되지 않았다(EPIT, 도 6).

논의

본 연구는 놀랍게도, 우유에 대한 초기 탈감작화가 다른 알레르겐에 대한 면역 반응에 유의하게 영향을 준다는 것을 생체 내에서 보여주었다. 이것은 경피 요법에 의해 야기된 알레르기에 대한 예방 효과의 첫번째 입증이다. 게다가, 우유에 대한 EPIT 처리는 조절 T 세포(Treg)의 특이적 생성을 유도하였다. Treg를 통한 우유에 대한 내성 유도는 다른 알레르겐, 예컨대 땅콩 또는 HDM에 대한 감작화를 예방하였다. 이것은 EPIT에 의한 우유에 대한 효과적인 탈감작화 과정 후, 처리된 동물이 PPE에 대한 감작화로부터 보호되고, 내성 반응은 특이적 IgG2a의 높은 생성 및 재활성화된 비장세포에 의해 분비된 적은 수준의 Th2 사이토카인과 함께 수득되었다는 것을 보여준다. 게다가, 땅콩에 대한 탈감작화 프로코콜은 식도에서 매우 낮은 호산구 침윤을 유도하였다.

그러므로 상기 결과는 EPIT 치료가 대상체에서의 추가의 알레르기에 대항하여 유효한 보호를 유도할 수 있음을 입증한다.

Claims

우유 알레르겐을 포함하는 조성물로서,
우유에 검출된 알레르기를 가진 소아를 치료하는 데에 사용함으로써 소아에게서 상이한 식품 알레르겐에 대한 추가적인 알레르기가 발달되는 것을 예방하기 위한 조성물이고,
상기 조성물은 소아에게 경피적으로 투여되며, 상기 투여는 상이한 식품 알레르겐에 대해 하나 이상의 추가적인 알레르기가 발달하는 것으로부터 상기 소아를 보호하는 조성물.
제1항에 있어서,
우유 알레르기는 상기 소아에서 첫번째로 검출된 알레르기이고, 우유 알레르겐이 상기 첫번째 알레르기 반응의 검출 또는 확인 시에 투여되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 소아가 영아 또는 유아인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
우유 알레르겐이 반복적으로 적용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
우유 알레르겐이 아쥬반트의 부재 하에 적용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
우유 알레르겐이 피부의 미손상 영역 상에 적용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
우유 알레르겐이 비-외과적 밀봉 패치 장치를 사용하여 적용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
우유 알레르겐이 3 내지 36개월의 기간 동안 반복적으로 적용되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,
복합 식품 알레르기의 발달로부터 보호하기 위한 조성물.
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