KR102062664B1 - 시식성 수시렁이의 동정용 프라이머 세트 및 이를 이용한 동정 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 시식성 수시렁이 동정용 조성물, 이를 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 키트 및 이를 이용한 시식성 수시렁이 동정 방법에 관한 것으로, 본 발명의 방법을 이용하는 경우 시식성 수시렁이의 COI(Cytochrome c Oxidase Subunit I) 유전자의 전체 염기서열을 증폭시킴으로써, 시식성 수시렁이의 종을 동정하는 용도로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 시식성 수시렁이 동정용 조성물, 이를 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 키트 및 이를 이용한 시식성 수시렁이 동정 방법에 관한 것이다.
사망 시간 또는 사후 경과 시간(postmortem interval; PMI)의 추정은 시신이 발생한 사건에서 매우 중요한 일이다. 인간을 포함한 모든 동물이 사망한 후에 시작되는 부패는 장내 세균(intestinal flora)과 시식성 절지 동물의 개입으로 진행되는데, 부패의 정도에 따라 시체에 유입하는 시식성 곤충들(necrophagous insects)의 종(species)이 다르다.
시식성 곤충에는 흔히 알고 있는 파리 외에도 시식성 딱정벌레가 있다. 딱정벌레는 일반적으로 유충 기간이 파리류보다 긴 것으로 알려져 있다. 이는 딱정벌레가 최소 사후 경과 시간의 추정에 있어서 초기 부패 단계뿐만 아니라 후기 부패 단계에서도 유용함을 의미한다(Midgley et al. 2010).
특히, 시식성 딱정벌레 중 수시렁이과(Dermestidae) 수시렁이아과(Dermestinae)의 수시렁이속(Dermestes)은 법의학적으로 중요한 스킨 비틀(skin beetles)로 알려져 있으며, 시신을 단 24 일만에 백골화할 수 있다(Byrd and Castner, 2010). 수시렁이속의 유충은 따뜻한 달의 실내에서 백골화 단계나 건조 단계의 시신에 일반적으로 발견된다(Byrd and Castner, 2010).
이러한 수시렁이속의 법과학적 중요성 때문에 수많은 사육데이터, 사례 연구, 생물학적/법률 절차상의 검토, 성충의 형태학적 검색 표(Hinton, 1945; Peacock, 1993) 및 유충의 형태학적 검색 표(Zhantiev, 1998 and 1999)가 발표되었다. 하지만, 수시렁이속의 종 확인의 어려움은 여전히 다양한 생물학적 정보의 법과학적 적용을 방해하는 요인 중 하나로 인식되고 있으며, 특히 유충의 경우 종의 판별이 매우 어려운 문제가 있다.
본 발명자들은 시식성 수시렁이의 종을 동정하는 방법을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 프라이머 내지 서열번호 6의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트를 이용하는 경우 시식성 수시렁이의 COI(Cytochrome c Oxidase Subunit I) 유전자의 전체 염기서열을 증폭시킬 수 있음을 규명함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 목적은 시식성 수시렁이 동정용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 시식성 수시렁이 동정용 조성물을 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 키트를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 시식성 수시렁이 동정 방법을 제공하는 것이다.
본 발명자들은 시식성 수시렁이의 종을 동정하는 방법을 개발하고자 예의 연구 노력하였다. 그 결과, 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 프라이머 내지 서열번호 6의 염기서열로 이루어진 프라이머 세트를 이용하는 경우 시식성 수시렁이의 COI(Cytochrome c Oxidase Subunit I) 유전자의 전체 염기서열을 증폭시킬 수 있음을 규명하였다.
본 발명은 시식성 수시렁이 동정용 조성물, 이를 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 키트 및 이를 이용한 시식성 수시렁이 동정 방법에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.
본 발명의 일 양태는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제1 프라이머 세트; 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 4의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제2 프라이머 세트; 및 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 6의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제3 프라이머 세트를 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 조성물에 관한 것이다.
본 명세서에서 "시식성 수시렁이"는 시체에 산란되어 부화하여 성장하는 수시렁이를 의미하고, 수시렁이의 성체 및 유충을 포함한다.
상기 시식성 수시렁이는 수시렁이(Dermestes coarctatus), 어리암검은수시렁이(Dermestes frischi), 암갈색수시렁이(Dermestes haemorrhoidalis), 암검은수시렁이(Dermestes maculatus), 검정수시렁이(Dermestes tesselatocollis) 또는 홍띠수시렁이(Dermests vorax)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서 용어 "프라이머"는 짧은 자유 3 말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 핵산 서열로 식물체 핵산의 상보적인 주형(template)과 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고, 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다.
상기 제1 프라이머 세트는 시식성 수시렁이의 tRNA-Trp 유전자를 참조하여 tRNA-Trp~tRNA-Cys~tRNA-Tyr~COI 유전자의 545 번째 염기쌍을 증폭시킬 수 있도록 설계되었다.
상기 제2 프라이머 세트는 시식성 수시렁이의 COI(Cytochrome c Oxidase Subunit I) 유전자를 참조하여 COI 유전자의 364 번째 염기쌍~1298 번째 염기쌍을 증폭시킬 수 있도록 설계되었다.
상기 제3 프라이머 세트는 tRNA-Leu 및 COII(Cytochrome c Oxidase Subunit II) 유전자를 참조하여 COI 유전자의 966 번째 염기쌍~tRNA-Leu~COII 유전자의 10 번째 염기쌍을 증폭시킬 수 있도록 설계되었다.
본 발명의 다른 일 양태는 서열번호 1의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제1 프라이머 세트; 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 4의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제2 프라이머 세트; 및 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 6의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제3 프라이머 세트를 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 조성물을 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 키트에 관한 것이다.
상기 키트는 시료로부터 시식성 수시렁이를 동정하는데 사용될 수 있다.
상기 키트는 상기 제1 프라이머 세트, 제2 프라이머 세트 및 제3 프라이머 세트뿐만 아니라 분석방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성 성분 조성물, 용액 또는 장치가 포함될 수 있다.
상기 키트는 PCR 분석을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있고, 상기 각각의 프라이머 세트 외에도 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액(pH 및 마그네슘 농도는 다양), 데옥시뉴클레오타이드(dNTPs), Taq-폴리머라아제와 같은 효소, DNase, RNAse 억제제, DEPC-수(DEPCwater) 및 멸균수 등을 포함할 수 있다.
상기 키트가 PCR 분석에 사용되는 경우, 별도로 cDNA를 수득할 필요 없이 시료로부터 바로 PCR 증폭산물을 수득하여 아가로오스 겔 전기영동(agarose gel electrophoresis) 등의 방법으로 분리할 수 있다.
상기 키트는 특정한 형태로 한정되는 것은 아니며, 다양한 형태로 구현될 수 있다. 예를 들어, 상기 키트는 용기(예컨대, 일회용 PCR 튜브 등)에 담겨 있는 동결 건조된(lyophilized) 프라이머 세트를 포함할 수 있다. 2 개 이상의 프라이머 세트를 포함하는 경우 각각의 프라이머 세트가 개별적으로 각각의 튜브에 담겨 있을 수 있다.
상기 시료는 수시렁이의 성충 또는 유충이 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 또 다른 일 양태는 하기의 단계를 포함하는 시식성 수시렁이 동정 방법에 관한 것이다.
서열번호 1의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제1 프라이머 세트; 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 4의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제2 프라이머 세트; 및 서열번호 5의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 6의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제3 프라이머 세트를 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 조성물을 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 키트를 이용하여 시료로부터 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction; PCR) 증폭산물을 수득하는 증폭 단계; 및
PCR 증폭산물을 분석하는 분석 단계.
상기 시식성 수시렁이 동정용 조성물 및 이를 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 키트의 중복되는 내용은 본 명세서의 복잡성을 고려하여 생략한다.
상기 시료는 수시렁이의 성충 또는 유충이 사용될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 분석은 예를 들어, 생어 염기서열 분석(Sanger Sequencing) 방법에 의해 수행될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 방법은 시식성 수시렁이의 COI(Cytochrome c Oxidase Subunit I) 유전자(1545 개의 염기쌍)의 염기서열을 증폭시킴으로써, 시식성 수시렁의 종을 동정할 수 있다.
상기 시식성 수시렁이는 수시렁이(Dermestes coarctatus), 어리암검은수시렁이(Dermestes frischi), 암갈색수시렁이(Dermestes haemorrhoidalis), 암검은수시렁이(Dermestes maculatus), 검정수시렁이(Dermestes tesselatocollis) 또는 홍띠수시렁이(Dermests vorax)일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명은 시식성 수시렁이 동정용 조성물, 이를 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 키트 및 이를 이용한 시식성 수시렁이 동정 방법에 관한 것으로, 본 발명의 방법을 이용하는 경우 시식성 수시렁이의 COI(Cytochrome c Oxidase Subunit I) 유전자의 전체 염기서열을 증폭시킴으로써, 시식성 수시렁이의 종을 동정하는 용도로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 동정용 제1 프라이머 세트를 이용한 시식성 수시렁이 6종의 중합효소연쇄반응 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 동정용 제2 프라이머 세트를 이용한 시식성 수시렁이 6종의 중합효소연쇄반응 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 동정용 제3 프라이머 세트를 이용한 시식성 수시렁이 6종의 중합효소연쇄반응 결과이다.
도 4A는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 1-288번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4B는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 289-576번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4C는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 577-864번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4D는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 865-1104번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4E는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 1105-1344번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4F는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 1345-1545번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 동정용 제2 프라이머 세트를 이용한 시식성 수시렁이 6종의 중합효소연쇄반응 결과이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 동정용 제3 프라이머 세트를 이용한 시식성 수시렁이 6종의 중합효소연쇄반응 결과이다.
도 4A는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 1-288번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4B는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 289-576번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4C는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 577-864번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4D는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 865-1104번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4E는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 1105-1344번째 염기쌍에 대한 결과이다.
도 4F는 본 발명의 일 실시예에 따른 시식성 수시렁이 6종의 동정 결과로, COI 유전자 1545 염기쌍 중 1345-1545번째 염기쌍에 대한 결과이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 프라이머 제작
시식성 수시렁이의 COI(Cytochrome C Oxidase Subunit I) 유전자 및 tRNA-Leucine 유전자의 염기서열을 MEGA 7.0.25로 분석하고, primer 3 Web 0.4.0 프로그램을 사용하여 프라이머를 설계하였다. 각 시식성 수시렁이 종의 염기서열은 National Center for Biotechnology Information(NCBI) GenBank에서 얻거나 프라이머를 이용하여 증폭된 증폭산물의 염기서열을 분석하여 얻었으며, 제작한 프라이머는 하기 표 1에 나타내었다.
| 프라이머 세트 | 서열번호 | 염기서열(5'-3') | 증폭산물 크기(bp) | |
| 1 | 1 | 정방향 | AACTGATAGCCTTCAAAGC | 706 |
| 2 | 역방향 | GAATAACTCCTGATCGAATACC | ||
| 2 | 3 | 정방향 | GCAGGAACAGGATGAACAG | 926 |
| 4 | 역방향 | TAACCTTTTTTCCTCAACACTT | ||
| 3 | 5 | 정방향 | ATGATTAGCAACACTTCATGG | 660 |
| 6 | 역방향 | TATATTTCAATTTGCTATTTCTAA | ||
실험예 1. DNA의 분리
사체에서 발견된 하기 6 종의 수시렁이 성충을 이용하였다: 수시렁이(Dermestes coarctatus), 어리암검은수시렁이(Dermestes frischi), 암갈색수시렁이(Dermestes haemorrhoidalis), 암검은수시렁이(Dermestes maculatus), 검정수시렁이(Dermestes tesselatocollis) 및 홍띠수시렁이(Dermests vorax). Geneall Tissue SV Mini Kit(Geneall, Seoul, Korea)에서 제공하는 근접한 샘플 유형의 방법에 따라 수시렁이로부터 DNA를 분리하였으며, NanoDrop 2000c Spectrophotometer (Thermo Fisher Scientific, Wilmington, Delaware, USA)를 이용하여 DNA 농도를 측정하였다. 3차 증류수를 이용하여 DNA 용액을 실험 농도(10 ng/uL)까지 희석하고 사용 시까지 -20 ℃에서 보관하였다.
실험예 2. 중합효소연쇄반응
상기 실험예 1의 6 종의 DNA에 대하여, 총 부피 20 uL를 기준으로 DNA 1 uL, 2X TOPsimple? PreMIX-HOT(Enzynomics, Korea) 10 uL, 프라이머 세트(제1 프라이머 세트 내지 제3 프라이머 세트) 0.8 uL(forward 프라이머 0.4 uL, reverse 프라이머 0.4 uL) 및 증류수(8.2 uL)를 이용하여 중합효소연쇄반응(PCR)을 수행하였다. 구체적으로, 95 ℃에서 10 분간 초기 변성 공정 1 사이클(cycle) 후, 95 ℃에서 30 초 변성; 45 ℃에서 30 초 어닐링; 및 72 ℃에서 60 초 연장 공정을 40 사이클 수행한 뒤 최종적으로 72 ℃에서 15 분 동안 반응시켰다. 증폭산물(amplicon)은 2 % 겔 전기영동을 수행하였다.
도 1 내지 도 3에서 확인할 수 있듯이, 제1 프라이머 세트 내지 제3 프라이머 세트에서 수시렁이(Dco), 어리암검은수시렁이(Dfr), 암갈색수시렁이(Dha), 암검은수시렁이(Dma), 검정수시렁이(Dte) 및 홍띠수시렁이(Dvo) 모두 예상된 사이즈에서 증폭되는 것을 확인하였다.
실험예 3. 생어 염기서열 분석(Sanger Sequencing)
상기 실험예 2의 증폭된 증폭산물 염기서열은 생어 염기서열 분석(Sanger Sequencing) 방법을 사용하여 분석하였다.
도 4A 내지 4F에서 확인할 수 있듯이, 분석으로 얻은 총 3 개의 세트로 증폭산물의 염기서열을 조합(assemble)하여 시식성 수시렁이 6 종의 COI 유전자 1545 염기쌍의 염기서열을 확인하였다.
소결
상기 실시예들에 따라 중합효소연쇄반응 및 생어 염기서열 분석을 수행할 경우, 효율적으로 시식성 수시렁이의 특정 종을 동정할 수 있음을 확인하였다.
<110> Korea University Research and Business Foundation
<120> Primer sets for identifying species of necrophagous dermestidae
<130> PN180308
<160> 6
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer 1F
<400> 1
aactgatagc cttcaaagc 19
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer 1R
<400> 2
gaataactcc tgatcgaata cc 22
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer 2F
<400> 3
gcaggaacag gatgaacag 19
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer 2R
<400> 4
taaccttttt tcctcaacac tt 22
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer 3F
<400> 5
atgattagca acacttcatg g 21
<210> 6
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer 3R
<400> 6
tatatttcaa tttgctattt ctaa 24
Claims (5)
- 시식성 수시렁이의 COI DNA 바코딩 영역을 증폭하기 위한 중합효소연쇄반응용 프라이머 세트를 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 조성물로서,
상기 중합효소연쇄반응용 프라이머 세트는,
서열번호 1의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제1 프라이머 세트;
서열번호 3의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 4의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제2 프라이머 세트; 및
서열번호 5의 염기서열로 이루어진 정방향 프라이머 및 서열번호 6의 염기서열로 이루어진 역방향 프라이머로 이루어진 제3 프라이머 세트를 포함하는 것인, 시식성 수시렁이 동정용 조성물. - 제 1 항에 있어서, 상기 시식성 수시렁이는 수시렁이(Dermestes coarctatus), 어리암검은수시렁이(Dermestes frischi), 암갈색수시렁이(Dermestes haemorrhoidalis), 암검은수시렁이(Dermestes maculatus), 검정수시렁이(Dermestes tesselatocollis) 및 홍띠수시렁이(Dermests vorax)로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 조성물.
- 제 1 항의 조성물을 포함하는 시식성 수시렁이 동정용 키트.
- 하기의 단계를 포함하는 시식성 수시렁이 동정 방법:
제 3 항의 키트를 이용하여 시료로부터 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction; PCR) 증폭산물을 수득하는 증폭 단계; 및
PCR 증폭산물을 분석하는 분석 단계. - 제 4 항에 있어서, 상기 시식성 수시렁이는 수시렁이(Dermestes coarctatus), 어리암검은수시렁이(Dermestes frischi), 암갈색수시렁이(Dermestes haemorrhoidalis), 암검은수시렁이(Dermestes maculatus), 검정수시렁이(Dermestes tesselatocollis) 및 홍띠수시렁이(Dermests vorax)로 이루어진 군으로부터 선택된 것인, 방법.
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113215305A (zh) * | 2021-06-24 | 2021-08-06 | 福州海关技术中心 | 鉴定黄水仙的dna特异性位点及鉴定黄水仙的方法和应用 |
| CN116694781A (zh) * | 2023-07-04 | 2023-09-05 | 苏州大学 | 线粒体基因COI与核基因28SrDNA联合鉴定嗜尸性甲虫物种的方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20090054965A (ko) | 2006-07-21 | 2009-06-01 | 파이어니어 하이-브레드 인터내셔날 인코포레이티드 | 신규한 유전자를 동정하는 방법 |
| KR20110126925A (ko) * | 2010-05-18 | 2011-11-24 | 한국생명공학연구원 | 깍지벌레류의 미토콘드리아 ｃｏｉ 유전자 ｄｎａ 바코딩 영역을 증폭하기 위한 중합효소연쇄반응용 프라이머 |
| KR20150050062A (ko) * | 2013-10-31 | 2015-05-08 | 경북대학교 산학협력단 | 온실가루이 진단을 위한 특이 프라이머 및 이의 용도 |
-
2018
- 2018-11-12 KR KR1020180138405A patent/KR102062664B1/ko active IP Right Grant
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20090054965A (ko) | 2006-07-21 | 2009-06-01 | 파이어니어 하이-브레드 인터내셔날 인코포레이티드 | 신규한 유전자를 동정하는 방법 |
| KR20110126925A (ko) * | 2010-05-18 | 2011-11-24 | 한국생명공학연구원 | 깍지벌레류의 미토콘드리아 ｃｏｉ 유전자 ｄｎａ 바코딩 영역을 증폭하기 위한 중합효소연쇄반응용 프라이머 |
| KR20150050062A (ko) * | 2013-10-31 | 2015-05-08 | 경북대학교 산학협력단 | 온실가루이 진단을 위한 특이 프라이머 및 이의 용도 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Shuai Wang et al., Veterinary Parasitology, 184, pp.392-397, 2012. * |
| Zheng Sizhu et al., Mitochondrial DNA part A, 27(), pp.4498-4502, 2016. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113215305A (zh) * | 2021-06-24 | 2021-08-06 | 福州海关技术中心 | 鉴定黄水仙的dna特异性位点及鉴定黄水仙的方法和应用 |
| CN116694781A (zh) * | 2023-07-04 | 2023-09-05 | 苏州大学 | 线粒体基因COI与核基因28SrDNA联合鉴定嗜尸性甲虫物种的方法 |
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