KR101740163B1 - 뇌경색 예방과 치료용 약제 제조에서 3-n-부틸-1-이소인돌리논 화합물의 사용방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화학식I의 표시와 같이 화합물 3-n-부틸-1-이소인돌리논의 뇌경색 예방과 치료 약물 제조 중의 사용과 관련된다. 이 화합물은 고체 결정체 구조이기에 유사 약물 부틸프탈라이드의 기름형 액체 형태에 비해 제제 영역에서 매우 큰 자유성이 있고, 임상용 약물에 더 많은 선택을 제공하고 약물 사용 원가를 낮추어 준다.

Description

뇌경색 예방과 치료용 약제 제조에서 3-n-부틸-1-이소인돌리논 화합물의 사용방법{USE OF 3-N-BUTYL-1-ISOINDOLINONE IN PREPARATION OF DRUGS FOR PREVENTING AND TREATING CEREBRAL INFARCTION}

본 발명은 화합물 의약 영역에 속하며, 구체적으로 3-n-부틸-1-이소인돌리논과 3-n-부틸-1-이소인돌리논을 함유한 약용 조성물의 뇌경색 예방과 치료를 위한 약물 제조 중의 사용방법에 관한 것이다.

뇌경색 (cerebral infarction, CI)을 일명 대뇌 허혈성 뇌졸증(cerebral ischemic stroke, CIS)이라 하며 국부 뇌조직이 혈액 순환 장애로 인해 허혈, 산소 결핍으로 인해 연화되어 괴사하는 것을 말한다. 뇌경색은 주로 뇌에 피를 공급하는 동맥에 아테롬성 동맥경화와 혈전이 형성되어 혈관 협소되어 막힘을 초래하여 국부성 급성 뇌 혈액 공급 부족을 유발하여 질병을 일으킨다. 이외에도 이상 물체(고체, 액체, 기체)가 혈액 순환을 따라 뇌동맥 또는 뇌 혈액순환 경부 동맥에 들어가 혈류가 막히거나 혈류량이 감소되어 상응한 지배구역 뇌조직의 연화와 괴사를 초래하는 경우도 있다.

뇌경색은 인류 생명 건강을 위협하는 3대 질환중 하나이며 심장병과 암의 뒤를 잇는다. 뇌경색 환자의 불구율이 매우 높은데 75%에 달하며 환자에 막대한 고통을 가져다줌과 동시에 가족에는 무거운 경제적 부담을 안겨준다. 따라서 이상적인 뇌경색 치료 약물을 찾아내는 것은 의약 영역의 뜨거운 분야 중 하나이다.

현재 급성 허혈성 뇌경색에 대한 공인하는 가장 효과적인 치료 방법으로 혈전용해술을 들 수 있다. 자주 보는 제제로는 조직형 플라스미노겐 부활체(rt-PA)이지만 치료시 높은 두개골 내 출혈 확률이 발생하고 가격 또한 비싸다. 이외에도 많은 뇌 보호제의 임상 치료 효과도 이상적이지 못하고, 엄중한 부작용도 동반한다.

20세기 90년대 이래 유명한 신경 약리학가 풍역박은 끈질긴 노력 끝에 급성 허혈성 뇌경색을 치료하는 혁신적인 약물인 부틸프탈라이드를 연구해냈는바 상품명은 언비푸이다. 언비푸 역시 청호소, 쌍환순의 뒤를 잇는 중국의 세 번째로 되는 자주적 지적소유권의 화학약물이다. 약물 효과와 약리 작용 매커니즘 연구를 거쳐 발견한 바에 따르면 부틸프탈라이드는 뇌혈류를 개선할 수 있는 외에 뇌 허혈의 여러 가지 병리 절차를 차단하는 뇌 보호 약물로 밝혀졌다. 이 약물은 천연 식물을 적용, 최초로 남방 미나라씨의 추출물에서 발견하였고, 후에 인공 화학 합성을 거쳤다. 여리기의 임상 시험 결과 좋은 치료 효과가 있었고 안전성이 높아 사용에 편리하였고, 불량 반응도 적었다.

부틸프탈라이드는 멀티 타깃 항 뇌허혈 약물로 그 역할 매커니즘은 아래 몇 가지 측면이 있다. 1. 미토콘드리아 기능을 개선하고 뇌혈관 내피 NO와 PGI2 수준을 높여 주고, 글루탐산 방출을 억제한다. 2. 국부 뇌 혈유량과 뇌 미세순환 및 뇌 허혈 에너지 대사 고갈을 개선하고 뇌 허혈로 인한 뇌수종 증상을 억제한다. 3. 뇌세포 내 아라키 돈산 함량과 칼슘 농도를 낮추고 산소 자유기를 억제하며 항산화 효소의 활성을 제고한다. 4. 항 혈전 형성과 항 혈소판 집결로 뇌 허혈로 인한 기억력 장애를 개선하고, 신경 기능 손실을 개선하며 뇌폐색 면적을 줄인다. 중국 특허 CN1257706 A는 부틸프탈라이드가 항 뇌혈전 형성 및 항 혈소판 집중 약물에서의 응용에 대해 공개하였고, 중국 특허 CN102008464 A는 부틸프탈라이드의 뇌경색 예방과 치료 약물 제조과정에서의 응용을 공개하였다.

비록 부틸프탈라이드가 대뇌 허혈성 뇌졸증 치료에서 뚜렷한 효능이 있다고 하지만 그 성상은 기름모양의 액체로 물에 용해되지 않고, 따라서 액체 제제로 만들어 기름에 용해시켜야만 하는바, 그 제제 유형은 매우 큰 제약을 받게 된다.

중국 특허 CN1257706 A 중국 특허 CN102008464 A

본 발명은 일종 부틸프탈라이드와 구조가 유사한 화합물인 3-n-부틸-1-이소인돌리논을 합성하여 -NH-로써 그중의 -O-를 합성하더라도 그 이중 링 구조를 개변하지 않고 흰색의 결정체 고체를 얻을 수 있는바 이는 제제 요구에 유리하다. 이 화합물은 부틸프탈라이드 구조와 분자량 모두 매우 근사하기에 부틸프탈라이드와 유사한 약물 역할이 있을 것으로 추측된다. 약효학을 통해 연구한 사실 역시 표명하는 바에 따르면 3-n-부틸-1-이소인돌리논은 국부 뇌허혈로 인한 뇌경색 치료에서 뚜렷한 역할을 하였고, 부틸프탈라이드치료 효과와 뚜렷한 통계학 차이가 없었다. 따라서 본 발명의 화합물 3-n-부틸-1-이소인돌리논은 부틸프탈라이드의 뇌허혈 치료 역할을 보유함과 동시에 부틸프탈라이드 제제의 결함도 해결하여 임상에서 뇌허혈로 기인되는 질병 치료에서 중요한 의미가 있다.

기존의 기술에서 부틸프탈라이드 응용에 대한 연구가 부족한 점을 극복하기 위해 본 발명에서 일종 화학식I과 같이 화합물 3-n-부틸-1-이소인돌리논의 뇌경색 예방과 치료 제제 제조와 관련한 사용 방법을 제공한다. 약효학 실험 증명을 통해 그 뇌허혈 예방 또는 치료에서 부틸프탈라이드와 통계학적 차이가 없다. 동시에 이는 결정형 고체 구조이기에 제제 측면에서 넓은 선택 공간이 있고 부틸프탈라이드의 제제 측면에서의 제약 요소도 해결하여 공업화 생산과 약물 사용 원가 절감에서 매우 중대한 의미가 있다.

본 발명의 상술한 목적은 아래 기술방안을 통해 실현할 수 있다:

본 발명은 구체적으로 3-n-부틸-1-이소인돌리논을 함유하여 국부 허혈로 기인되는 뇌경색 약물 치료 또는 약용 조성물의 용도에 사용된다.

본 발명에서 연구를 거쳐 발견한 바에 따르면 3-n-부틸-1-이소인돌리논은 대뇌 허혈성 뇌졸증 치료에서 디부틸프탈레이트와 비교하면 통계학적 차이가 존재하지 않는다.

본 발명에서 실험용 쥐들에 대한 인위적 중대뇌동맥 폐색(MCAO)을 통해 3-n-부틸-이소인돌리논의 항 뇌허혈 역할을 관찰하였다. MCAO모형은 3개 그룹으로 나누었다, 각각: 1) 음성 대조그룹, 식물유3ml/kg; 2) 3-n-부틸-1-이소인돌리논, 30mg/kg; 3) 부틸프탈라이드 양성 대조그룹, 30mg/kg. 이 3개 그룹의 약물 투여 방식은 모두 복강 주사이다. 체중 250g 좌우의 수컷 SD 쥐를 선택하여 허혈 15min 후 약물을 투여하였다. 색전 2h 후 다시 24h 투여하고, 뇌 절편을 떼어내 TTC 염색을 실시하였다. 염색 결과는 이미지 제이(image J) 소프트웨어를 사용하여 처리하고 폐색 면적을 계산하였고, 모든 그룹에 대한 비교를 실시하였다. 결과에 따르면 공백그룹의 평균 폐색 면적은 24.430%였고, 3-n-부틸-1-이소인돌리논 그룹의 평균 폐색 면적은 14.365%, 부틸프탈라이드 그룹의 평균 폐색 면적은 14.402%였다. 통계 결과가 표명하는 바에 따르면 3-n-부틸-1-이소인돌리논의 뇌 허혈에 대한 치료 효과는 부틸프탈라이드에 비해 뚜렷한 통계학 차이가 없었다.

본 발명의 결과는 3-n-부틸-1-이소인돌리논이 매우 좋은 뇌허혈 치료 효능이 있음을 증명할 뿐만 아니라 그 자체는 결정형 고체 구조이기에 부틸프탈라이드의 기름형 액체 구조에 비해 제제 영역에서 매우 큰 선택의 여지가 있음을 보여 준다. 따라서 3-n-부틸-1-이소인돌리논은 넓은 응용 전망이 있다.

본 발명은 활성 성분을 함유한 본 발명 화합물과 약학에서 접수 가능한 부형제 또는 보조재료의 약용 조성물과 관계된다. 통상적으로 본 발명에서의 약용 조성물에는 0.1-95% 중량의 본 발명 화합물을 함유한다.

본 발명에서의 화합물의 약용 조성물은 본 영역에서 공지한 방법에 따라 제조할 수 있다. 이 목적에 사용하는 경우 필요하다면 본 발명의 화합물과 일종 또는 여러가지 액체 약물 부형제와/또는 보조재료를 결합하여 인류 약물 또는 수의 약물로서 사용할 수 있는 적당한 시용 형식이나 제량 형식으로 제조할 수 있다.

본 발명의 화합물은 결정체 형태이기에 제제 측면에서 이 화합물이거나 이 화합물의 약용 조성물으로 액체 제형, 기체 제형, 반고체 제형과 고체 제형으로 제조할 수 있다. 예컨대, 액체 제형은 순수 용액류, 유제 제형, 서스펜드 제형, 미립자 제형, 콜로이드 제형 등을 들 수 있다; 기체 제제는 에어로졸, 분무제, 분말제일 수 있고; 반고체 제제는 복고자, 외용 연고제, 파스타 등일 수 있으며; 고체 제형은 정제, 캡슐, 적환, 환약, 가루, 좌약, 과립형, 냉동간분 침제 등일 수 있다.

본 발명 화합물 또는 이 화합물을 함유한 약용 조성물은 단위 제량 방식으로 약물을 투입할 수 있고, 투입 도경은 장도 또는 비장도일 수도 있다. 예컨대, 구복, 근육, 피하, 비강, 구강점막, 피부, 복막, 직장 등이다.

본 발명의 화합물 또는 이 화합물을 함유한 약용 조성물의 투약 도경은 주사 투입일 수 있으며 여기에는 정맥주사, 근육주사, 피하주사, 피내주사 및 혈외주사 등을 포함한다.

본 발명의 화합물 또는 이 화합물을 함유한 약용 조성물은 보통 제제로 제조할 수도 있고, 방출 조절과 과녁 제제 및 각종 미립자 투약 시스템으로도 만들 수 있다.

단위 투약 제형을 정제로 정제하기 위해 본 영역의 공지한 각종 캐리어를 광범위하게 사용할 수 있다. 캐리어와 관련한 예를 든다면 희석제와 흡수제, 예컨대 녹말, 텍스트린, 황산칼슘, 유당, 마니톨, 자당, 염화나트륨, 포도당, 요소, 탄산칼슘, 카올린, 미세 결정체 생물소, 탄산알루미늄 등; 습윤제와 접착제, 예컨대 물, 글리세린, 폴리에틸렌 글리콜, 에탄올, 프로판올, 녹말풀, 텍스트린, 시럽, 꿀, 포도당용액, 아카시아 점액(mucilago acaciae), 젤라틴(gelatine size), 나트륨 카르복시 메틸 셀룰로오스, 셸락(gum lac), 셀로솔브, 인산칼륨, 폴리비닐 피롤리돈 등; 붕해제, 예컨대 건조 녹말, 해조 산염, 한천가루, 갈조녹말, 탄산수소 나트륨과 구연산, 탄산칼슘, 폴리옥시에틸렌 지방산 솔비톨에스텔, 소듐 도데실 설페이트, 셀로솔브, 에토셀 등; 붕해 억제제, 예컨대 자당, 스테아린 글리세린 에스테르, 카카오 버터, 수소화 유 등; 흡수 촉진제, 예컨대 사기암모니아늄, 소디움 라우릴 설페이트 등; 윤활제, 예컨대 활석분, 이산화규소, 옥수수 녹말, 경지산염, 붕산, 액체파라핀, 폴리에틸렌 글리콜 등이 있다. 그외에도 정제를 진일보로 코우팅 정으로 만들 수 있다, 예컨대 당코우팅 정, 박막코우팅 정, 장코우팅 정 또는 두겹 정과 여러겹 정이다.

투약 단위를 환약으로 만들려면 본 영역의 공지한 각종 캐리어를 광범위하게 사용할 수 있다. 예컨대 희석제와 흡수제, 예를 들면 포도당, 유당, 녹말, 카카오 버터, 수소화 식물유, 폴리비닐 피롤리돈, 고령토, 활석분 등; 접착제, 예를 들면 아라비아고무, 트래거캔스고무, 젤라틴, 에탄올, 꿀, 액당, 쌀풀 또는 밀가루풀 등; 붕해제, 예를 들면 한천가루, 건조 녹말, 해조 산염, 소듐 도데실 설페이트, 셀로솔브, 에토셀 등이다.

투약 유닛을 캡슐로 제조하기 위해 유효 성분을 본 발명의 화합물과 상술한 각종 캐리어와 혼합하고, 이를 통해 얻은 혼합물을 경질의 젤라틴 캡술 또는 연질 캡슐에 넣을 수 있고, 유효 성분으로 본 발명 화합물을 이용하여 마이크로 캡슐로 만들며, 서스펜드는 수성 매개질 속에서 서스펜드 제제를 형성되어 경질 캡슐에 넣거나 주사제로 만들어 사용할 수도 있다.

본 발명에서의 화합물로 만든 주사용 제제, 예컨대 용액, 서스펜드제 용액, 유제, 냉동 간분 침제 등 이와 같은 제제는 함수일 수도 있고 비수일 수도 있으며, 일종과/또는 여러 종 약효학에서 접수 가능한 캐리어, 희석제, 접착제, 윤활제, 방부제, 표면활성제 또는 분산제를 함유할 수 있다. 예컨대 희석제는 자수, 에탄올, 폴리에틸렌 글리콜, 1, 3-프로필렌 글리콜, 애톡실기 이소스테아릴 알코올, 복산화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 지방산솔비톨 에스테르 등을 선택할 수 있다. 또한, 등장주사액을 제조하기 위해 주사용 제제에 적당량의 염화나트륨, 포도당 또는 글리세린을 첨가할 수 있고, 그외 상규 보조용매, 완충제, pH조절제 등을 첨가할 수도 있다. 이와 같은 보조재료는 본 영역에서 자주 사용한다.

그리고 필요하다면 약물제제에 착색제, 방부제, 향료, 방취제, 감미료 또는 기타 재료를 첨가할 수도 있다.

약물 사용 목적에 도달하고 치료 효과를 극대화하기 위해 본 발명에서의 약물 또는 약물 조성물은 임의의 공지한 투약 방법으로 투약할 수 있다.

본 발명의 화합물 약물 조성물 투약 제량은 많은 요소에 의해 결정된다. 예를들면 필요한 질병 예방 또는 치료 성질과 엄중한 정도, 환자나 동물의 성별, 연령, 체중, 성격 및 개체 반응, 투약도경, 투약 횟수, 치료 목적 등이다. 따라서 본 발명의 치료 제량은 큰 범위에서 변화가 있을 수 있다. 일반적으로 본 발명중 약학 성분 사용 제량은 본 영역의 기술자에 공지된 사실이다. 본 발명의 화합물 조성물 중 최후 제제에 함유된 실제 약물 수량에 근거하여 적당히 조절을 통해 치료 효과 제량의 요구에 도달하는 방식으로 본 발명의 예방과 치료 목적에 이를 수 있다. 본 발명의 화합물 매일 적당한 제량 범위는 0.1-100mg/kg 체중을 우선 적용하고, 더욱 우선 적용 범위는 0.1-100mg/일/명이다. 상술한 제량은 단일 제량 형식이거나 여러 개로 나눌 수 있다. 예하면 2, 3 또는 4개 제량 형식으로 투약할 경우 이는 투약 의사의 임상 경험 및 운용을 포함한 기타 치료 수단의 투약방안의 제약을 받을 수 있다.

매 한 가지 치료에 필요한 총 제량은 여러 회로 나누거나 일차 제량으로 투약한다. 본 발명의 화합물 또는 조성물은 단독으로 복용하거나, 기타 치료 약물 또는 증상에 따른 약물과 함께 사용할 수 있고 제량을 조절할 수도 있다.

본 발명의 결과는 3-n-부틸-1-이소인돌리논이 매우 좋은 뇌허혈 치료 효능이 있음을 증명할 뿐만 아니라 그 자체는 결정형 고체 구조이기에 부틸프탈라이드의 기름형 액체 구조에 비해 제제 영역에서 매우 큰 선택의 여지가 있음을 보여 준다. 따라서 3-n-부틸-1-이소인돌리논은 넓은 응용 전망이 있다.

도 1은 공백 대조그룹 쥐에 대한 MCAO 2h 후 다시 24h 투입 후 뇌절편 염색 결과 디지털사진이다.
도 2는 3-n-부틸-1-이소인돌리논 그룹 쥐에 대한 MCAO 2h 후 다시 24h 투입 후의 뇌절편 염색 결과 디지털사진이다.
도면 3은 부틸프탈라이드양성 대조그룹 쥐에 대한 MCAO 2h 후 다시 24h 투입 후의 뇌절편 염색결과 디지털사진이다.
도 4는 공백 대조 그룹, 3-n-부틸-1-이소인돌리논 그룹, 부틸프탈라이드 그룹의 쥐에 대한 MCAO 2h 후 다시 24h 투입 후의 행위학 평점주상도이다.
도 5는 공백 대조 그룹, 3-n-부틸-1-이소인돌리논 그룹, 부틸프탈라이드 그룹의 쥐에 대한 MCAO 허혈 2h 후 다시 24h 투입 후의 뇌경색 면적 백분비 주상도이다.

이하 실시예를 통해 본 발명에 대한 상세한 기술을 하기로 한다. 단, 이는 본 발명에 대한 제한이 아니다.

실시예1 3-n-부틸-1-이소인돌리논 정제 제조

[처방]

3-n-부틸-1-이소인돌리논 20g

녹말 20g

에탄올(50%) 적당량

소디움카르복시메틸 전분 3g

스테아르산마그네슘 0.3g

200 편제량

처방량에 따라 3-n-부틸-1-이소인돌리논을 정확하게 무게를 달고 분말로 만든 후 100 쉬의 체에 쳐서 준비해 둔다. 녹말을 정확하게 무게를 단 후 100눈의 체에 친다. 선별 후의 3-n-부틸-1-이소인돌리논, 녹말을 균일하게 혼합하고, 적당량의 50% 에탄올을 넣어 연성 재료로 만들고, 18 쉬 나이론 체로 과립을 만든 후 60-70℃에서 건조시킨다. 다시 18메쉬 체로 고르고 소디움카르복시메틸 전분, 스테아르산마그네슘을 넣어 균일하게 섞고, Φ8mm 펀치다이로 압축해 낸다.

실시예2 3-n-부틸-1-이소인돌리논 경질 캡슐 제조

[처방]

3-n-부틸-1-이소인돌리논 20g

녹말 20g

에탄올(50%) 적당량

소디움카르복시메틸 전분 3g

스테아르산마그네슘 0.3g

200정

습식 제조법은 실시예 1과 동일하다. 처방량에 따라 3-n-부틸-1-이소인돌리논을 정확하게 무게를 달고 분말로 만든 후 100 쉬의 체에 쳐서 준비해 둔다. 항중 녹말을 정확하게 무게를 단 후 100 쉬의 체에 친다. 선별 후의 3-n-부틸-1-이소인돌리논, 녹말을 균일하게 혼합하고, 적당량의 50% 에탄올을 넣어 연성 재료로 만들고, 18 메쉬 나이론 체로 과립을 만든 후 60-70℃에서 건조시킨다. 다시 18메쉬 체로 고르고 소디움카르복시메틸 전분, 스테아르산마그네슘을 넣어 균일하게 섞고, Φ8mm 펀치다이로 압축해 낸다.

실시예3 3-n-부틸-1-이소인돌리논 제조

제조한 3-n-부틸-1-이소인돌리논 1g, 식물유 10g, 폴리 글리세린산 에스테르 1g을 취하여 혼합한 후 연마기에서 균일하게 혼합하여 연성 캡슐 내용물을 얻는다. 젤라틴: 글리세린: 물: 차광제=1:0.4: 0.8:0.01를 캡슐 재료로 사용한다. 압축 성형법으로 연질 캡슐을 제조하고, 연질 캡슐은 냉풍 고체화, 건조를 통해 적당한 용제로 세척 후 건조하여 연질 캡슐 100정을 얻는다.

실시예4 3-n-부틸-1-이소인돌리논 냉동간분의 제조

제조한 3-n-부틸-1-이소인돌리논 1g을 800ml 주사용액에 넣어 용해 시킨 후 마니톨 6g을 넣어 충분히 용해시키고, 주사용 물을 1000ml까지 추가한다. 활성탄 탄제거 후 미세 필터를 경과하고 7ml 페니실린병에 나눠 담는다. 매병 용량은 4ml로 하고 틀어 막은 후 냉동건조, 마개 밀봉을 통해 얻는다. 규격은 4mg/병이다.

실시예5 3-n-부틸-1-이소인돌리논 주사제 제조

제조한 3-n-부틸-1-이소인돌리논 1g 및 염화나트륨 9g에 주사용액 약 900ml를 넣은 후 PH를 6.5-7.2까지 조절하고, 3g 침용탄을 넣어 균일하게 혼합한다. 15분 끓인 후 용액이 뜨거울 때 여과하여 탄을 제거하고, 0.22μm 미세구멍을 통해 정밀 여과한다. 주사용액을 1000ml까지 넣은 후 액체 투명도를 검사하고 합격 후 5ml 앰플병에 넣어 밀봉하고 110℃에서 30분간 가압 멸균하면 된다.

실시예6 3-n-부틸-1-이소인돌리논의 대뇌중 동맥 색전(MCAO) 쥐의 뇌경색 체적에 대한 영향

(1) 실험용 쥐들에 대한 인위적 중대뇌동맥 폐색 모형(MCAO) 제조

체중 250-270g인 숫컷 SD 쥐를 선택한다. 실온은 25℃ 정도를 유지하고 수술 전 12h 금식시키고 물은 제한하지 않는다. 롱가(Longa) 등 방법으로 MCAO 모형을 제조한다. 10%의 클로랄하이드레이트로 본강 주사를 통해 쥐를 마취시키되 제량은 350mg/kg이다. 고정판에 쥐를 반듯이 눕힌 후 백열등을 비추어 쥐의 체온을 37±0.5℃로 유지시킨다. 목 바로 가운데의 털을 깎아내고 소독 후 피부를 절개하고 우측 목부위 총동맥(CCA), 경외 동맥(ECA) 및 경내 동맥(ICA)을 세심하게 분리한다. ECA를 절단한 후 동강이를 ICA와 일직선이 되도록 당겨서 봉합선을 삽입한다. 삽입 깊이는 약19.0±5mm로 한다. 2h후 봉합선을 조심스럽게 빼내고 재주입을 하여 잘 꿰맨 후 쥐굴에 놓아 준다. 다시 24h 후 뇌절편을 취하여 염색한다.

(2) 실험 그룹 및 투약

쥐를 3개 그룹으로 나누고, 그룹별로 10 마리씩 하여 각각: 1)공백 대조 그룹, 식물유 3ml/kg; 2)3-n-부틸-1-이소인돌리논 그룹, 30mg/kg; 3)디부틸프탈레이트 양성 대조 그룹, 30mg/kg. 전부의 그룹 투약 방식은 복강 주사이고, 모델링 15min 후 투약한다.

(3) 신경행위학 평점

제아 롱가(Zea Longa) 평가를 참고하여 동물에 대한 모델링 2h 및 24h 투입 후 죽기 전에 행위학을 관찰한다. 쥐의 꼬리를 잡아 지하 1자 높이로 들어올려 좌측 앞발 상황을 관찰한다. 쥐를 평탄한 지면에 놓은 후 각각 좌우 양측으로 두 어깨를 밀어 양측 항력에 차이가 있는지 여부를 비교한다. 쥐를 평탄한 지면에 놓은 후 자유 활동을 하게 하여 걸음걸이를 관찰한다. 4급 평점법(0-5점)을 적용하여 점수가 높을수록 신경행위 손상이 더 엄중함을 설명해준다.

1．행위가 완전히 정상이면 0점을 기입한다.

2．꼬리를 잡아 들어올려서 수술 맞은편 앞발이 안으로 돌거나 가두어지면 1점을 기입한다.

3．쥐를 지면에 놓은 후 손으로 양측을 눌러 항력을 검사한다. 수술 맞은편 항력이 하강하면 2점을 기입한다.

4．쥐를 지면에 놓은 후 걸음걸이를 관찰하여 수술 맞은편을 중심으로 맴돌면 3점을 기입한다.

5．손상이 극히 엄중하여 자유 활동이 불가능하면 4점을 기입한다.

점수가 높을수록 뇌손상이 더 엄중하고, 손상이 너무 가볍거나 너무 심하면 정식 시험 모형으로 삼을 수 없다. 모형 선택 기준은 모델링 2h후 실을 뽑기 전 신경행위학 점수 3점으로 하고, 뚜렷게 맴도는 것을 볼 수 있어야 한다.

MCAO 쥐 모형에 다시 24h 주입 후 쥐에 대한 신경행동학 평점을 한 후 상세히 기록한다.

(4) 뇌경색 면적 측정과 계산

재 주입 24h 후 쥐가 죽으면 뇌를 취하여 배양접시에 놓는다. 신속히 뇌조직을 취하여 -20℃ 냉장고에 넣었다가 20분 후에 꺼낸다. 후구, 소뇌와 저위치 뇌간을 제거한고, 대략 2mm 간격으로 합계 5회 칼집을 주어 6개의 대뇌 연속 관상 절편으로 만든다. 배양접시에 2%의 TTC 염액을 넣어 액체 표면이 뇌조각을 완전히 잠기게 한다. 37℃ 항온에서 직사광선을 피하여 25-30분 배양하고, 그 사이 5분 간격으로 뇌를 한 번씩 뒤집어준다. TTC 염색 후의 뇌조각은 정상조직이 붉은 색을 띠고, 허혈 구역은 흰색을 띤다. 염색 완료 후 주사기로 TTC 용액을 제거하고 뇌조각이 잠길 수 있는 포르말린용액을 주입하고, 직사광선을 피하여 방치한다. 24h 후 이미 고체화된 뇌조각을 꺼내 푸른색 배경에 놓고 배열한 후 사진을 찍어 저장한다. 이미지 분석시스템 소프트웨어(image J)로 이미지를 처리하고, 각각 괴사 면적과 뇌조각 총 면적을 계산하고, 뇌경색 백분비를 계산한다. 구체 공식: 뇌경색 백분비(%)=(괴사 면적/뇌조각 총 면적)×100%. 각 조각마다 두께가 모두 2cm로 하여 괴사 면적은 일정한 정도에서 괴사 체적을 대표한다.

(5)실험결과

신경행위학 평점결과에 따르면 용제 대조 그룹 신경행위학 평점에서 0점인 상황이 나타나지 않았고, 2점 또는 3점이 대부분을 차지하였다. 부분 쥐는 꼬리를 들었을 때 좌측 앞다리를 안으로 가두었고, 배척을 받았을 때의 수술 맞은편 저항력이 내려갔다. 이와 같은 상황에서 평점은 2점으로 하였다. 일부 쥐는 맴도는 현상이 나타났는데 평점은 3점으로 하였다. 그외 일부 쥐의 증상이 매우 심하여 땅에 주저 앉은 후 행동이 곤란하였는바 평점은 4점으로 하였다. 시험실 데이터는 통계학 소프트웨어 SPSS17.0을 사용하여 처리하였고, 일원배치분산분석법(ANOVA)을 적용하여 각 그룹간 신경행위학 차이를 비교한 결과 3-n-부틸-1-이소인돌리논의 신경행동 완화 역할은 공백 그룹에 비해 매우 뚜렷한 차이(P=0.003<0.01)를 보였고, 부틸프탈라이드 그룹에 비해서는 뚜렷한 차이(P=0.384>0.05)가 없었으며, 부틸프탈라이드 그룹의 신경행위 완화 역할은 공백 그룹에 비해 현저한 차이(P=0.031<0.05)가 있었다.

신경행위학 평점 결과로부터 결론을 도출한다면, 3-n-부틸-1-이소인돌리논과 부틸프탈라이드의 쥐의 국부 뇌허혈로 인해 초래되는 증상에 대해 일정한 완화 역할을 하였고, 3-n-부틸-1-이소인돌리논의 완화 역할은 부틸프탈라이드보다 조금 나았다. 이는 뒤에 이은 뇌조각 염색 실험 결과와도 일치하였는바 이는 약물의 신경행위에 대한 개선 역할이 괴사 면적 축소 역할과 평행을 이룬 것과 관련이 있음을 의미한다.

3-n-부틸-1-이소인돌리논의 MCAO쥐 뇌경색 체적에 대한 영향은 실험결과도면 표시와 같다.

모든 그룹의 쥐 뇌조각은 이미지 제이(image J)로 통계한 괴사 면적과 조각 총 면적이며, 괴사율 계산은 통계학 소프트웨어 SPSS 17.0으로 데이터에 대한 처리를 한 결과: 3-n-부틸-1-이소인돌리논 그룹의 괴사구간 축소 역할이 매우 뚜렷하였고, 부틸프탈라이드 그룹의 양성 대조그룹에 비해서도 조금 나은 편이었다. 용제 대조 그룹에 비해 괴사 체적은 41.199% 축소되어 효과가 매우 뚜렷하였다. 일원배치분산분석법(ANOVA)을 적용하여 3그룹의 MCAO쥐 뇌경색 구역 감소 역할 크기를 비교한 결과 3-n-부틸-1-이소인돌리논 그룹의 뇌경색 구역 면적 축소 역할은 공백 그룹과 비교하여 매우 뚜렷한 통계학 차이(P<0.001)를 보였고, 부틸프탈라이드 그룹과의 차이는 통계학 의미(P=0.989)가 없었으며, 부틸프탈라이드 그룹은 공백 그룹에 비교하여 현저한 통계학 차이(P<0.01)를 보였다.

이상 결과가 설명하는 바와 같이 3-n-부틸-1-이소인돌리논은 허혈성 뇌경색에 일정한 치료 효능이 있으며 임상 뇌경색의 치료에서 중대한 의미가 있다.

Claims (7)

1. 아래 화학식 I의 표시와 같은 3-n-부틸-1-이소인돌리논 화합물의 사용방법으로서, 뇌경색 예방과 치료용 약제 제조에서 아래 화학식 I의 표시와 같은 3-n-부틸-1-이소인돌리논 화합물의 사용방법.
   

   
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 뇌경색은 국부 허혈성으로 인해 기인된 것을 특징으로 하는 화합물의 사용방법.
4. 제1항에 있어서,
   상기 화합물의 유효 치료제량은: 0.1-100mg/kg/일인 것을 특징으로 하는 화합물의 사용방법.
5. 약용 조성물로서,
   아래 화학식I의 표시와 같은 3-n-부틸-1-이소인돌리논 유효치료량 및 약용 캐리어 또는 부형제를 포함하며,
   상기 약용 조성물은 국부 뇌 허혈성으로 기인되는 뇌경색 예방 및 치료용 약제 제조에 사용되는 것을 특징으로 하는 약용 조성물.
   

   
6. 제5항에 있어서,
   상기 약용 조성물에는 정제, 캡슐, 주사제, 과립, 환약, 산제 중에서 선택되는 어느 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는 약용 조성물.
7. 삭제

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