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KR101615715B1 - Ｉｌ-６에 대한 항체 및 이의 용도 - Google Patents

Ｉｌ-６에 대한 항체 및 이의 용도 Download PDF

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KR101615715B1
KR101615715B1 KR1020097026636A KR20097026636A KR101615715B1 KR 101615715 B1 KR101615715 B1 KR 101615715B1 KR 1020097026636 A KR1020097026636 A KR 1020097026636A KR 20097026636 A KR20097026636 A KR 20097026636A KR 101615715 B1 KR101615715 B1 KR 101615715B1
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antibody
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KR20100028569A (ko
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레온 가르시아-마르티네즈
안네 엘리자베쓰 카르발로 젠센
케이티 올슨
벤 두트차
에단 오잘라
존 라탐
브라이언 코바세비치
제프리 티.엘. 스미쓰
Original Assignee
앨더바이오 홀딩스 엘엘씨
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Publication date
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Abstract

본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 이의 단편에 관한 것이다. 본 발명의 또 다른 구체예는 본원에 기재된 VH, VL 및 CDR 폴리펩티드의 서열을 포함하는 본원에 기재된 항체 및 이의 결합 단편, 및 이를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 하나 이상의 기능성 또는 검출가능한 부분에 컨쥬게이션된 항-IL-6 항체 및 이의 결합 단편을 고려한다. 본 발명은 또한 항-IL-6 항체 및 이의 결합 단편을 제조하는 방법을 고려한다. 본 발명의 구체예는 또한 IL-6과 관련된 질병 및 장애의 진단, 평가 및 치료를 위한 항-IL-6 항체 및 이의 결합 단편의 용도에 관한 것이다. 이러한 항체는 가용성 IL-6, 세포 표면 발현 IL-6, IL-6/IL-6R 중 하나 이상에 결합할 수 있고/있거나, IL-6과 IL-6R의 회합, IL-6/IL-6R 및 gp130의 회합 및/또는 IL-6/IL-6R/gp130 중합체의 형성을 방지함으로써 상기 중 어느 하나와 관련된 생물학적 효과를 억제할 수 있다.

Description

ＩＬ-６에 대한 항체 및 이의 용도{ANTIBODIES TO IL-6 AND USE THEREOF}
본 출원은 전체 개시내용이 참조로서 본원에 포함되는 2007년 5월 21일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 제 60/924,550호를 우선권으로 주장한다.
발명의 배경
발명의 분야
본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 및 이의 단편에 관한 것이다. 본 발명은 또한 IL-6과 관련된 질병 및 장애의 스크리닝 방법, 및 상기 항체 및 이의 단편을 투여함으로써 IL-6과 관련된 질병 또는 장애를 예방하거나 치료하는 방법에 관한 것이다.
관련 분야의 기술
인터루킨-6(이후, "IL-6")(인터페론-β2; B-세포 분화 인자; B-세포 자극 인자-2; 간세포 자극 인자; 하이브리도마 성장 인자; 및 형질세포종 성장 인자로도 공지됨)은 급성 염증 반응의 조절, B-세포 및 T-세포 분화를 포함하는 특정 면역 반응의 조절, 골 대사, 혈소판형성, 표피 증식, 월경, 신경 세포 분화, 신경보호, 노화, 암, 및 알츠하이머병에서 발생하는 염증 반응과 같은 다양한 생물학적 과정에 관여하는 다기능성 사이토카인이다. 예를 들어, 문헌[A. Papassotiropoulos, et al, Neurobiology of Aging, 22:863-871 (2001)]을 참조하라.
IL-6은 신호 전달 당단백질 gp130 및 IL-6 수용체("IL-6R")(gp80으로도 공지됨)의 하나 이상의 서브유닛으로 구성되는 수용체 복합체를 통한 세포 반응을 촉진하는 사이토카인 족 일원이다. IL-6R은 또한 가용성 형태("sIL-6R")로 존재할 수 있다. IL-6은 IL-6R에 결합한 후, 신호 전달 수용체 gp130을 이합체화시킨다. 예를 들어, 문헌[Jones, SA, J. Immunology, 175:3463-3468 (2005)]을 참조하라.
인간에서, IL-6을 엔코딩하는 유전자는 5개의 엑손 및 4개의 인트론으로 구성되고, 7p21에서 염색체 7의 짧은 암(arm)에 대해 맵핑되어 있다. IL-6 RNA의 번역 및 번역 후 가공은 성숙 형태에서 184개의 아미노산을 갖는 21 내지 28 kDa의 단백질을 형성시킨다. 문헌[A. Papassotiropoulos, et al , Neurobiology of Aging, 22:863-871 (2001)]을 참조하라.
하기에 보다 상세하게 기재되는 바와 같이, IL-6은 피로, 악액질, 자가면역 질병, 골격계의 질병, 암, 심장병, 비만, 당뇨병, 천식, 알츠하이머병 및 다발성 경화증을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 질병 및 장애의 발달에서 역할을 하는 것으로 생각된다. 광범위한 질병 및 장애에서 IL-6의 지각된 관련성으로 인해, IL-6과 관련된 질병을 예방하거나 치료하는데 유용한 조성물 및 방법, 뿐만 아니라 IL-6과 관련된 질병 또는 장애를 갖는 환자를 확인하기 위한 스크리닝 방법이 당 분야에 필요하다. 특히 바람직한 항-IL-6 조성물은 환자에게 투여시 최소 또는 최소화되는 부작용을 갖는 것이다. IL-6과 관련된 질병 또는 장애를 감소시키거나 억제하는 조성물 또는 방법은 상기 질병 또는 장애를 감소시키거나 억제하는 것이 필요한 환자에 대해 이롭다.
본 발명의 개요
본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 특정 항체 및 이의 단편, 특히 특정 에피토프 특이성 및/또는 기능적 특성을 갖는 항체에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예는 IL-6 및/또는 IL-6/IL-6R 복합체에 결합할 수 있는 특정 인간화 항체 및 이의 단편을 포함한다. 이러한 항체는 가용성 IL-6 또는 세포 표면 발현 IL-6에 결합할 수 있다. 또한, 이러한 항체는 IL-6, IL-6/IL-6R 복합체, IL-6/IL-6R/gp130 복합체 및/또는 IL-6/IL-6R/gp130의 중합체 중 하나 이상의 형성 또는 이의 생물학적 효과를 억제할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예는 본원에 기재된 VH, VL 및 CDR 폴리펩티드의 서열을 포함하는 본원에 기재된 항체, 및 이를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 더욱 특정한 구체예에서, 상기 항체는 gp130 활성화를 차단하고/하거나, 50 피코몰 미만의 결합 친화성(Kds) 및/또는 10-4S-1 이하의 Koff 값을 가질 것이다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 항체 및 이의 인간화된 형태는 토끼 면역 세포(B 림프구)로부터 유래될 것이고, 이는 인간 점라인(germ line) 서열에 대한 상동성(서열 동일성)을 기초로 하여 선택될 수 있다. 이러한 항체는 최소의 서열 변형을 요하거나, 서열 변형을 요하지 않을 수 있고, 이에 의해 인간화 후에 기능적 특성의 유지가 촉진된다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 IL-6 유도 T1165 증식 검정, IL-6 자극 HepG2 합토글로빈(haptoglobin) 생성 검정 등과 같은 기능성 검정에서의 활성을 기초로 하여 선택될 수 있다. 본 발명의 한 추가 구체예는, 예를 들어, 토끼 면역 세포로부터 유래된 VH, VL 및 CDR 폴리펩티드를 포함하는 항-IL-6 항체로부터의 단편 및 이를 엔코딩하는 폴리누클레오티드, 뿐만 아니라 IL-6 및/또는 IL-6/IL-6R 복합체 또는 IL-6/IL-6R/gp130 복합체 및/또는 이의 중합체를 인지할 수 있는 신규한 항체 및 폴리펩티드 조성물의 생성에서의 상기 항체 단편 및 이를 엔코딩하는 폴리누클레오티드의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 하나 이상의 기능성 또는 검출가능한 부분에 컨쥬게이션된 항-IL-6 항체 및 이의 결합 단편의 컨쥬게이트를 고려한다. 본 발명은 또한 상기 인간화 항-IL-6 또는 항-IL-6/IL-6R 복합체 항체 및 이의 결합 단편을 제조하는 방법을 고려한다. 한 구체예에서, 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 및 scFv 단편을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 구체예는 IL-6 또는 이의 이상 발현과 관련된 질병 및 장애의 진단, 평가 및 치료를 위한 항-IL-6 항체의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 IL-6 또는 이의 이상 발현과 관련된 질병 및 장애의 진단, 평가 및 치료를 위한 항-IL-6 항체의 단편의 용도를 고려한다. 본 발명의 항체의 바람직한 용도는 피로와 관련된 암, 및/또는 악액질 및 류머티스 관절염의 치료 및 예방이다.
본 발명의 다른 구체예는 재조합 숙주 세포, 바람직하게는 이배수체(diploid) 효모, 예를 들어, 이배수체 피키아(Pichia) 및 다른 효모 균주에서의 항-IL-6 항체의 생성에 관한 것이다.
여러 관점의 도면의 간단한 설명
도 1은 다수의 독특한 에피토프가 항체 선택 프로토콜에 의해 제조된 항-IL-6 항체 수집물에 의해 인지되는 것을 도시한다. 에피토프 변이성이 항체-IL-6 결합 경쟁 연구에 의해 확인되었다(ForteBio Octet).
도 2는 토끼 항체의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 서열 및 동종 인간 서열 및 최종 인간화 서열 사이의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 서열의 정렬을 도시한다. 프레임워크 영역은 FR1-FR4로 확인된다. 상보성 결정 영역은 CDR1-CDR3로 확인된다. 아미노산 잔기는 도시된 바와 같이 번호가 매겨졌다. 최초 토끼 서열은 가변 경쇄 및 가변 중쇄 서열 각각에 대해 RbtVL 및 RbtVH로 언급된다. 프레임워크 1로부터 프레임워크 3의 말단에 걸친 가장 유사한 인간 점라인 항체 서열 중 3개가 그 아래의 토끼 서열과 정렬된다. 토끼 서열과 가장 유사한 것으로 간주되는 인간 서열이 처음으로 도시된다. 이러한 예에서, 가장 유사한 서열은 경쇄에 대해 L12A이고, 중쇄에 대해 3-64-04이다. 인간 CDR3 서열은 도시되지 않았다. 가장 근접한 인간 프레임워크 4 서열은 그 아래의 토끼 프레임워크 4 서열과 정렬된다. 수직 방향의 대시(dash)는 토끼 잔기가 동일 위치의 인간 잔기 중 하나 이상과 동일한 잔기를 나타낸다. 굵은 글씨의 잔기는 상기 위치의 인간 잔기가 동일 위치의 토끼 잔기와 동일한 것을 나타낸다. 최종 인간화 서열은 가변 경쇄 및 가변 중쇄 서열 각각에 대해 VLh 및 VHh로 언급된다. 밑줄이 있는 잔기는 잔기가 상기 위치의 토끼 잔기와 동일하나, 3개의 정렬된 인간 서열 내의 상기 위치의 인간 잔기와는 상이한 것을 나타낸다.
도 3은 예시적 IL-6 프로토콜에 대한 항원 특이성과 생성된 IgG 사이의 높은 상관관계를 입증한다. 11개 중 9개의 웰은 항원 인지와의 특이적 IgG 상관관계를 나타내었다.
도 4는 100μg/kg의 인간 IL-6의 피하 투여 1시간 후에 다양한 용량으로 정맥내 투여된 항체 Ab1에 대한 α-2-마크로글로불린(A2M) 용량 반응 곡선을 제공한다.
도 5는 항체 Ab1 진행군 대 대조군에 대한 생존 데이터를 제공한다.
도 6은 항체 Ab1 퇴행군 대 대조군에 대한 추가 생존 데이터를 제공한다.
도 7은 3일마다의 10mg/kg i.v.의 폴리클로날 인간 IgG(270-320mg 종양 크기) 대 3일마다의 10mg/kg i.v.의 항체 Ab1(270-320mg 종양 크기)에 대한 생존 데이터를 제공한다.
도 8은 3일마다의 10mg/kg i.v.의 폴리클로날 인간 IgG(400-527mg 종양 크기) 대 3일마다의 10mg/kg i.v.의 항체 Ab1(400-527mg 종양 크기)에 대한 생존 데이터를 제공한다.
도 9는 항체 Ab1의 약동학 프로파일을 제공한다. 항체 Ab1의 혈장 수준은 항원 포획 ELISA를 통해 정량되었다. 이러한 단백질은 다른 전장 인간화 항체와 일치하는 12 내지 17일의 반감기를 나타낸다.
도 10 A-D는 항체 Ab4, Ab3, Ab8 및 Ab2 각각에 대한 결합 데이터를 제공한다. 도 10 E는 항체 Ab1, Ab6 및 Ab7에 대한 결합 데이터를 제공한다.
도 11에는 표 형태의 도 10 A-E의 결합 데이터가 요약되어 있다.
도 12는 실시예 14의 펩티드 맵핑 실험에서 사용된 15개의 아미노산 펩티드의 서열을 제시한다.
도 13은 실시예 14에서 제조된 블롯(blot)의 결과를 제시한다.
도 14는 실시예 14에서 제조된 블롯의 결과를 제시한다.
바람직한 구체예의 상세한 설명
정의
본 발명은 특정 방법, 프로토콜, 세포주, 동물 종 또는 속, 및 기재된 시약에 제한되는 것이 아니라, 다양할 수 있음이 이해되어야 한다. 또한, 본원에서 사용된 용어는 단지 특정 구체예를 기재하기 위한 것이며, 첨부되는 청구의 범위에 의해서만 제한되는 본 발명의 범위를 제한하고자 함이 아님이 이해되어야 한다.
본원에서 사용되는 단수 형태("a", "and" 및 "the")는 문맥에서 달리 명백히 기술되지 않는 경우 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포"에 대한 언급은 다수의 상기 세포를 포함하고, "단백질"에 대한 언급은 하나 이상의 단백질 및 당업자에게 공지된 상기 단백질의 동등물 등을 포함한다. 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 달리 명백히 지시되지 않는 경우 본 발명이 속하는 분야의 당업자에게 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
인터루킨-6( IL -6): 본원에서 사용되는 인터루킨-6(IL-6)은 유전자은행 단백질 등록 번호(GenBank Protein Accession No.) NP_000591에서 이용가능한 하기 212개의 아미노산 서열 뿐만 아니라, 하기 IL-6 아미노산 서열의 임의의 프레-프로(pre-pro), 프로- 및 성숙 형태, 및 돌연변이 및 하기 서열의 대립유전자 변이체를 포함하는 변이체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00001
메이팅 ( Mating ) 적격 효모 종: 본 발명에서, 메이팅 적격 효모는 배지에서 성장될 수 있는 임의의 이배수체 또는 사배수체 효모를 광범위하게 포함한다. 이러한 효모 종은 일배수체, 이배수체 또는 사배수체 형태로 존재할 수 있다. 제공된 배수체의 세포는 적절한 조건하에서 이러한 형태의 무한정한 수의 세대로 증식할 수 있다. 이배수체 세포는 또한 포자 형성을 하여 일배수체 세포를 형성할 수 있다. 연속적인 메이팅은 추가의 메이팅 또는 이배수체 균주의 융합을 통해 사배수체 균주를 발생시킬 수 있다. 본 발명에서, 이배수체 또는 다배수체 효모 세포는 바람직하게는 메이팅 또는 스페로플라스트(spheroplast) 융합에 의해 생성된다.
본 발명의 한 구체예에서, 메이팅 적격 효모는 아륵시오지마(Arxiozyma); 아스코보트리오지마(Ascobotryozyma); 시테로마이세스(Citeromyces); 데바리오마이세스(Debaryomyces); 데케라(Dekkera); 에레모테슘(Eremothecium); 이사첸키아(Issatchenkia); 카자크스타니아(Kazachstania); 클루이베로마이세스(Kluyveromyces); 코다마에아(Kodamaea); 로데로마이세스(Lodderomyces); 파키솔렌(Pachysolen); 피키아(Pichia); 사카로마이세스(Saccharomyces); 사투르니스포 라(Saturnispora); 테트라피시스포라(Tetrapisispora); 토룰라스포라(Torulaspora); 윌리옵시스(Williopsis); 및 자이고사카로마이세 스(Zygosaccharomyces)의 속(genus)을 포함하는 다수의 효모균과(Saccharomycetaceae) 족이다. 본 발명에 잠재적으로 유용한 다른 유형의 효모는 야로위아(Yarrowia), 로도스포리듐(Rhodosporidium), 캔디다(Candida), 한세눌라(Hansenula), 필로바슘(Filobasium), 필로바시델라(Filobasidellla), 스포리디오볼루스(Sporidiobolus), 불레라(Bullera), 류코스포리듐(Leucosporidium) 및 필로바시델라(Filobasidella)를 포함한다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 메이팅 적격 효모는 다수의 피키아 속이다. 본 발명의 한 추가의 바람직한 구체예에서, 피키아 속의 메이팅 적격 효모는 하기 종 중 하나이다: 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 피키아 메타놀리카(Pichia methanolica), 및 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha)(피키아 앙구스타(Pichia angusta)). 본 발명의 한 특정한 바람직한 구체예에서, 피키아 속의 메이팅 적격 효모는 피키아 파스토리스 종이다.
일배수체 효모 세포: 일반적인 유전체(염색체) 전량의 각각의 유전자의 단일 카피를 갖는 세포.
다배수체 효모 세포: 일반적인 유전체(염색체) 전량의 1개 이상의 카피를 갖는 세포.
이배수체 효모 세포: 통상적으로 2개의 일배수체 세포의 융합(메이팅) 과정에 의해 형성된, 일반적인 유전체 전량의 본질적으로 모든 유전자의 2개의 카피(대립유전자)를 갖는 세포.
사배수체 효모 세포: 통상적으로 2개의 일배수체 세포의 융합(메이팅) 과정에 의해 형성된, 일반적인 유전체 전량의 본질적으로 모든 유전자의 4개의 카피(대립유전자)를 갖는 세포. 사배수체는 2개, 3개, 4개, 또는 이 이상의 상이한 발현 카세트를 가질 수 있다. 이러한 사배수체는 동형접합 이주성(heterothallic) a/a 및 알파/알파 이배수체의 선택적 메이팅에 의해 S. 세레비지에(S. cerevisiae)에서 수득되고, 영양요구 이배수체를 수득하기 위한 일배수체의 연속 메이팅에 의해 피키아에서 수득될 수 있다. 예를 들어, [met his] 일배수체는 [ade his] 일배수체와 메이팅되어 이배수체 [his]가 수득될 수 있고; [met arg] 일배수체는 [ade arg] 일배수체와 메이팅되어 이배수체 [arg]가 수득될 수 있고; 이후, 이배수체 [his]와 이배수체 [arg]가 메이팅되어 사배수체 원시영양체(prototroph)가 수득될 수 있다. 이배수체 세포의 이점 및 용도에 대한 언급이 사배수체 세포에도 적용될 수 있음이 당업자에게 이해될 것이다.
효모 메이팅: 2개의 일배수체 효모 세포가 자연적으로 융합하여 1개의 이배수체 효모 세포를 형성하는 과정.
감수분열: 이배수체 효모 세포가 감소하는 분열을 겪어 4개의 일배수체 포자(spore) 생성물을 형성하는 과정. 각각의 포자는 이후 발아하여, 일배수체의 무성 성장하는 세포주를 형성할 수 있다.
선택 마커: 선택 마커는, 예를 들어, 형질전환 사건을 통해 유전자를 수여받는 세포에 대해 성장 표현형(물리적 성장 특징)을 부여하는 유전자 또는 유전자 단편이다. 선택 마커는 이러한 선택 마커 유전자를 수여받지 않은 세포가 성장할 수 없는 조건하에서 선택적 성장 배지에서 세포가 생존하고 성장하는 것을 가능케 한다. 선택 마커 유전자는 일반적으로 양성 선택 마커 유전자, 예를 들어, 세포에 대해 항생제 또는 기타 약물, 온도(2개의 ts 돌연변가 교차되거나 하나의 ts 유전자가 형질전환되는 경우)에 대한 내성을 부여하는 유전자; 음성 선택 마커 유전자, 예를 들어, 생합성 유전자를 갖지 않는 모든 세포에 필요한 특정 영양소 없이 배지에서 성장하는 능력을 세포에 수여하는 생합성 유전자, 또는 야생형 유전자를 갖지 않는 세포가 성장할 수 없는 능력을 세포에 수여하는 돌연변이된 생합성 유전자 등을 포함하는 여러 유형에 해당한다. 적합한 마커는 ZEO; G418; LYS3; MET1; MET3a; ADE1; ADE3; URA3 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
발현 벡터: 이러한 DNA 벡터는 표적 숙주 세포 내의 외래 단백질의 발현을 위한 조작을 돕는 요소를 함유한다. 편리하게는, 형질전환을 위한 서열의 조작 및 DNA의 생성은 처음 박테리아 숙주, 예를 들어, E. 콜리(E. coli)에서 수행되고, 보통 벡터는 박테리아 복제 기점 및 적절한 박테리아 선택 마커를 포함하는 상기 조작을 돕는 서열을 포함할 것이다. 선택 마커는 선택 배양 배지에서 성장된 형질전환된 숙주 세포의 생존 또는 성장에 필요한 단백질을 엔코딩한다. 선택 유전자를 함유하는 벡터로 형질전환되지 않은 숙주 세포는 배양 배지에서 생존하지 않을 것이다. 통상적인 선택 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소에 대해 내성을 수여하거나, (b) 영양요구 결핍을 보충하거나, (c) 복합 배지로부터 이용가능하지 않은 중요한 영양소를 공급하는 단백질을 엔코딩한다. 효모의 형질전환을 위한 예시적인 벡터 및 방법은, 예를 들어, 문헌[Burke, D., Dawson, D., & Stearns, T. (2000). Methods in yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual. Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press]에 기재되어 있다.
본 발명의 방법에 사용하기 위한 발현 벡터는 혈질전환된 효모 균주를 확인하기 위한 선택 영양요구 또는 약물 마커를 포함하는 효모 특이적 서열을 추가로 포함할 것이다. 약물 마커는 효모 숙주 세포에서 벡터의 카피수를 증폭시키는데 추가로 사용될 수 있다.
관심 폴리펩티드 코딩 서열은 효모 세포에서의 폴리펩티드의 발현을 제공하는 전사 및 번역 조절 서열에 작동가능하게 연결된다. 이러한 벡터 구성요소는 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다: 인핸서 구성요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열. 폴리펩티드의 분비를 위한 서열, 예를 들어, 신호 서열 등이 또한 포함될 수 있다. 발현 벡터가 효모 유전체로 종종 통합됨에 따라 효모 복제 기점은 임의적이다.
본 발명의 한 구체예에서, 관심 폴리펩티드는 효모 이배수체 세포로부터의 폴리펩티드의 최적화된 분비를 제공하는 서열에 작동가능하게 연결되거나 융합된다.
핵산은 또 다른 핵산 서열과의 기능적 상관관계로 배치되는 경우에 "작동가능하게 연결"된다. 예를 들어, 신호 서열에 대한 DNA가 폴리펩티드의 분비에 관여하는 프레단백질(preprotein)로 발현되는 경우에 폴리펩티드를 위한 DNA에 작동가능하게 연결되고; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 주는 경우에 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열이 인접하며, 분비 선도서열(leader)의 경우 판독틀(reading frame)에 인접한 것을 의미한다. 그러나, 인핸서에 인접하지는 않는다. 연결은 편리한 제한 부위에서 라이게이션에 의해 달성되거나, 대안적으로 당업자에게 친숙된 PCR/재조합 방법을 통해 달성된다(GatewayR Technology; Invitrogen, Carlsbad California). 이러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고누클레오티드 어댑터(adapter) 또는 링커가 통상적인 실시에 따라 사용된다.
프로모터는 작동가능하게 연결되어 특정 핵산 서열의 전사 및 번역을 조절하는, 구조 유전자(일반적으로, 약 100 내지 1000 bp 이내)의 시작 코돈에 대해 업스트림(5')에 위치된 비번역 서열이다. 이러한 프로모터는 유도성(inducible) 프로모터, 항시발현(constitutive) 프로모터, 및 억제성(repressible) 프로모터(억제자의 부재에 대한 반응으로 전사 수준을 증가시킴)의 여러 부류에 해당한다. 유도성 프로모터는, 예를 들어, 영양소의 존재 또는 부재 또는 온도의 변화와 같은 배양 배지에서의 일부 변화에 대한 반응으로, 조절하에서 증가된 수준의 DNA로부터의 전사를 개시시킬 수 있다.
효모 프로모터 단편은 또한 상동 재조합 및 효모 유전체 내의 동일 부위로의 발현 벡터의 통합을 위한 부위를 제공할 수 있고; 대안적으로, 선택 마커가 상동 재조합을 위한 부위로 사용된다. 피키아 형질전환은 문헌[Cregg et al. (1985) Mol. Cell . Biol. 5:3376-3385]에 기재되어 있다.
피키아로부터의 적합한 프로모터의 예는 AOX1 및 프로모터(Cregg et al . (1989) Mol . Cell . Biol. 9:1316-1323); ICL1 프로모터(Menendez et al . (2003) Yeast 20(13): 1097-108); 글리세르알데히드-3-포스페이트 데히드로게나아제 프로모터(GAP)(Waterham et al . (1997) Gene 186(1):37-44); 및 FLD1 프로모터(Shen et al. (1998) Gene 216(1):93-102)를 포함한다. GAP 프로모터는 강한 항시발현 프로모터이고, AOX 및 FLD1 프로모터는 유도성 프로모터이다.
다른 효모 프로모터는 ADH1, 알코올 데히드로게나아제 Ⅱ, GAL4, PHO3, PHO5, Pyk, 및 이로부터 유래된 키메라 프로모터를 포함한다. 추가로, 포유동물, 곤충, 식물, 파충류, 양서류, 바이러스 및 조류 프로모터와 같은 비-효모 프로모터가 본 발명에 사용될 수 있다. 대부분, 통상적으로 프로모터는 포유동물 프로모터(발현된 유전자에 대해 잠재적으로 내인성임)를 포함하거나, 효모 시스템에서 효과적인 전사를 제공하는 효모 또는 바이러스 프로모터를 포함할 것이다.
관심 폴리펩티드는 직접적으로 재조합적으로 생성될 뿐만 아니라, 이종성 폴리펩티드, 예를 들어, 신호 서열 또는 성숙 단백질 또는 폴리펩티드의 N-말단에 특정 절단 부위를 갖는 다른 폴리펩티드를 갖는 융합 폴리펩티드로 생성될 수 있다. 일반적으로, 신호 서열은 벡터의 구성요소일 수 있거나, 이는 벡터에 삽입되는 폴리펩티드 코딩 서열의 일부일 수 있다. 선택된 이종성 신호 서열은 바람직하게는 숙주 세포 내에서 이용가능한 표준 경로 중 하나를 통해 인지되고 가공되는 것이다. S. 세레비지에 알파 인자 프레-프로 신호는 P. 파스토리스로부터 다양한 재조합 단백질의 분비에 효과적인 것으로 입증되었다. 다른 효모 신호 서열은 알파 메이팅 인자 신호 서열, 인버타아제(invertase) 신호 서열, 및 다른 분비되는 효모 폴리펩티드로부터 유래된 신호 서열을 포함한다. 추가로, 이러한 신호 펩티드 서열은 이배수체 효모 발현 시스템에서 향상된 분비를 제공하도록 공학처리될 수 있다. 다른 관심 분비 신호는 또한 분비되는 단백질에 이종성일 수 있는 포유동물 신호 서열을 포함하거나, 분비되는 단백질에 대한 천연 서열일 수 있다. 신호 서열은 프레-펩티드 서열을 포함하고, 몇몇 예에서, 이는 프로펩티드 서열을 포함할 수 있다. 많은 이러한 신호 서열은 당 분야에 공지되어 있으며, 이는 면역글로불린 사슬에서 발견되는 신호 서열, 예를 들어, K28 프레프로독소 서열, PHA-E, FACE, 인간 MCP-1, 인간 혈청 알부민 신호 서열, 인간 Ig 중쇄, 인간 Ig 경쇄 등을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Hashimoto et . al . Protein Eng 11(2) 75 (1998); and Kobayashi et . al . Therapeutic Apheresis 2(4) 257 (1998)]을 참조하라.
전사는 벡터로 전사 활성제 서열을 삽입함으로써 증가될 수 있다. 이러한 활성제는 프로모터 상에서 작용하여 전사를 증가시키는, 보통 약 10 내지 300 bp의 DNA의 시스-작용 구성요소이다. 전사 인핸서는 비교적 배양 및 위치 독립적이며, 이는 인트론 뿐만 아니라 코딩 서열 자체 내에서 전사 유닛에 대해 5' 및 3'에서 발견된다. 인핸서는 코딩 서열의 5' 또는 3' 위치에서 발현 벡터로 스플라이싱될 수 있으나, 바람직하게는 프로모터로부터 5' 위치에 위치된다.
진핵생물 숙주 세포에서 사용되는 발현 벡터는 또한 전사 종결 및 mRNA의 안정화에 필요한 서열을 함유할 수 있다. 이러한 서열은 통상적으로 진핵생물 또는 바이러스 DNA 또는 cDNA의 비번역 영역에서 번역 종결 코돈에 대해 3'으로부터 이용가능하다. 이러한 영역은 mRNA의 비번역 부분에서 아데닐중합체 형성된 단편으로 전사된 누클레오티드 세그먼트를 함유한다.
상기 열거된 구성요소 중 하나 이상을 함유하는 적합한 벡터의 제작은 표준 라이게이션 기술 또는 PCR/재조합 방법을 이용한다. 분리된 플라스미드 또는 DNA 단편은 필요한 플라스미드를 생성시키기 위해 요망되는 형태로 또는 재조합 방법을 통해 분할되고, 맞춤화되고, 다시 라이게이션된다. 제작된 플라스미드 내의 정확한 서열을 확인하기 위한 검정을 위해, 라이게이션 혼합물이 숙주 세포를 형질전환시키는데 사용되고, 적절한 경우 항생제 내성(예를 들어, 앰피실린 또는 제오신)에 의해 성공적인 형질전환주(transformant)가 선택된다. 형질전환주로부터 플라스미드가 제조되고, 제한 엔도누클레아제 절단에 의해 분석되고/되거나 서열분석된다.
단편의 제한 및 라이게이션에 대한 대안으로서, 벡터에 DNA 서열을 삽입하기 위해 att 부위에 기초한 재조합 방법 및 재조합 효소가 사용될 수 있다. 이러한 방법은, 예를 들어, 문헌[Landy (1989) Ann.Rev.Biochem. 55:913-949]에 기재되어 있으며; 이는 당 분야의 당업자에게 공지되어 있다. 이러한 방법은 람다 및 E. 콜리에 의해 엔코딩된 재조합 단백질의 혼합물에 의해 매개되는 분자간 DNA 재조합을 이용한다. 재조합은 상호작용 DNA 분자 상의 특정 부착(att) 부위 사이에 발생한다. att 부위의 설명을 위해서는, 문헌[Weisberg and Landy (1983) Site-Specific Recombination in Phage Lambda, in Lambda Ⅱ, Weisberg, ed.(Cold Spring Harbor, NY:Cold Spring Harbor Press), pp.211-250]을 참조하라. 재조합 부위에 플랭킹(flanking)된 DNA 세그먼트는 전환되어, 재조합 후, att 부위가 각각의 모(parental) 벡터에 의해 제공된 서열을 포함하는 하이브리드 서열이 된다. 재조합은 임의의 토폴로지(topology)의 DNA 사이에 발생할 수 있다.
Att 부위는 적절한 벡터로 관심 서열을 라이게이션시키고; 특정 프라이머의 사용을 통해 att B 부위를 함유하는 PCR 생성물을 생성시키고; att 부위를 함유하는 적절한 벡터로 클로닝된 cDNA 라이브러리를 생성시키는 것 등에 의해 관심 서열로 도입될 수 있다.
본원에서 사용되는 폴딩(folding)은 폴리펩티드 및 단백질의 3차원 구조를 의미하고, 여기서 아미노산 잔기 사이의 상호작용이 구조를 안정화시키는 역할을 한다. 구조 결정에서 비-공유 상호작용이 중요한데 반해, 보통 관심 단백질은 2개의 시스테인 잔기에 의해 형성된 분자내 및/또는 분자간 공유 이황화 결합을 가질 것이다. 천연 발생 단백질 및 폴리펩티드 또는 이의 유도체 및 변이체에 대해, 적절한 폴딩은 통상적으로 최적의 생물학적 활성을 발생시키는 배열이며, 이는 편리하게는 활성, 예를 들어, 리간드 결합, 효소 활성 등에 대한 검정에 의해 모니터될 수 있다.
몇몇 예에서, 예를 들어 요망되는 생성물이 합성 기원인 경우, 생물학적 활성에 기초한 검정은 거의 의미가 없을 것이다. 이러한 분자의 적절한 폴딩은 물리적 특성, 효과적인 고려사항, 모델링 연구 등을 기초로 하여 결정될 수 있다.
발현 숙주는 폴딩 및 이황화 결합 형성을 향상시키는 하나 이상의 효소, 즉, 폴다아제(foldase), 샤페로닌(chaperonin) 등을 엔코딩하는 서열의 도입에 의해 추가로 변형될 수 있다. 이러한 서열은 당 분야에 공지된 벡터, 마커 등을 이용하여 효모 숙주 세포에서 항시발현적 또는 유도적으로 발현될 수 있다. 바람직하게는, 요망되는 패턴의 발현에 충분한 전사 조절 구성요소를 포함하는 서열이 표적화된 방법을 통해 효모 유전체로 안정적으로 통합된다.
예를 들어, 진핵생물 PDI는 단백질 시스테인 산화 및 이황화 결합 이성화(isomerization)의 효과적인 촉매일 뿐만 아니라, 이는 샤페론 활성을 나타낸다. PDI의 공동 발현은 다수의 이황화 결합을 갖는 활성 단백질의 생성을 촉진할 수 있다. 또한, 흥미로운 것은 BIP(면역글로불린 중쇄 결합 단백질); 시클로필린(cyclophilin) 등의 발현이다. 본 발명의 한 구체예에서, 일배수체(haploid) 모 균주 각각은 별개의 폴딩 효소를 발현하고, 예를 들어, 하나의 균주는 BIP를 발현할 수 있고, 다른 균주는 PDI 또는 이의 조합물을 발현할 수 있다.
용어 "요망되는 단백질" 또는 "표적 단백질"은 상호교환적으로 사용되고, 이는 일반적으로 본원에 기재된 인간화 항체 또는 이의 결합 단편을 의미한다. 용어 "항체"는 에피토프에 대해 적합되고 이를 인지하는 특정 형태를 갖는 분자 구조를 함유하는 임의의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 하나 이상의 비-공유 결합 상호작용은 분자 구조와 에피토프 사이의 복합체를 안정화시킨다. 전형적인 항체 분자는 면역글로불린이며, 모든 공급원, 예를 들어, 인간, 설치류, 토끼, 소, 양, 돼지, 개, 다른 포유동물, 닭, 다른 조류 등으로부터의 모든 유형의 면역글로불린, IgG, IgM, IgA, IgE, IgD 등이 "항체"로 간주된다. 본 발명의 따른 출발 물질로서 유용한 항체를 생성하기 위한 바람직한 공급원은 토끼이다. 다수의 항체 코딩 서열이 기재되었으며; 그 밖의 것들이 당 분야에 널리 공지된 방법에 의해 발생될 수 있다. 이의 예는 키메라 항체, 인간 항체 및 기타 비-인간 포유동물 항체, 인간화 항체, 단일 사슬 항체, 예를 들어, scFvs, 카멜바디(camelbody), 나노바디(nanobody), IgNAR(상어로부터 유래된 단일 사슬 항체), 소-모듈 면역약물(small-modular immunopharmaceutical, SMIP), 및 항체 단편, 예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2 등을 포함한다. 문헌[Streltsov VA, et al ., Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype, Protein Sci. 2005 Nov;14(11):2901-9. Epub 2005 Sep 30; Greenberg AS, et al ., A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature. 1995 Mar 9;374(6518): 168-73; Nuttall SD, et al, Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display of protein loop libraries, Mol Immunol. 2001 Aug;38(4):313-26; Hamers-Casterman C, et al, Naturally occurring antibodies devoid of light chains, Nature. 1993 Jun 3;363(6428):446-8; Gill DS, et al ., Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr Opin Biotechnol. 2006 Dec;17(6):653-8. Epub 2006 Oct 19]을 참조하라.
예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편은 유전 공학에 의해 생성될 수 있다. 이러한 기술에서, 다른 방법과 함께, 항체 생성 세포는 요망되는 항원 또는 면역원에 대해 감작된다. 항체 생성 세포로부터 분리된 메신저 RNA가 PCR 증폭을 이용하여 cDNA를 제조하기 위한 주형으로 사용된다. 최초 항원 특이성을 보유하는 1개의 중쇄 유전자 및 1개의 경쇄 유전자를 각각 함유하는 벡터의 라이브러리가 발현 벡터로의 증폭된 면역글로불린 cDNA의 적합한 섹션의 삽입에 의해 생성된다. 중쇄 유전자 라이브러리와 경쇄 유전자 라이브러리를 조합시킴으로써 조합 라이브러리가 제작된다. 이는 중쇄 및 경쇄를 공동 발현하는 클론의 라이브러리를 발생시킨다(항체 분자의 Fab 단편 또는 항원 결합 단편과 유사함). 이러한 유전자를 갖는 벡터는 숙주 세포로 공동 트랜스펙션된다. 항체 유전자 합성이 트랜스펙션된 숙주에서 유도되는 경우, 중쇄 및 경쇄 단백질은 스스로 어셈블리되어, 항원 또는 면역원을 이용한 스크리닝에 의해 검출될 수 있는 활성 항체가 생성된다.
관심 항체 코딩 서열은 천연 서열 뿐만 아니라, 유전 부호의 축퇴성(degeneracy)에 의해 개시된 핵산과 서열이 동일하지 않은 핵산에 의해 엔코딩된 것, 및 이의 변이체를 포함한다. 변이체 폴리펩티드는 아미노산(aa) 치환, 첨가 또는 결실을 포함할 수 있다. 아미노산 치환은 보존성 아미노산 치환 또는 비-필수 아미노산을 제거하는 치환, 예를 들어, 당화 부위를 변화시키거나, 기능에 필요하지 않은 1개 이상의 시스테인 잔기의 치환 또는 결실에 의해 잘못된 폴딩을 최소화시키는 치환일 수 있다. 변이체는 단백질의 특정 영역(예를 들어, 기능성 도메인, 촉매 아미노산 잔기 등)의 생물학적 활성을 보유하거나, 향상된 생물학적 활성을 갖도록 디자인될 수 있다. 변이체는 또한 본원에 기재된 폴리펩티드의 단편, 특히 생물학적 활성 단편 및/또는 기능성 도메인에 해당하는 단편을 포함한다. 클로닝된 유전자의 시험관내 돌연변이유발을 위한 기술이 공지되어 있다. 본 발명에 또한 포함되는 것은 단백질분해성 분해에 대한 내성을 개선시키거나, 가용성 특성을 적합화시키거나, 치료제로서 보다 적합하게 하기 위한 통상적인 분자 생물학적 기술을 이용하여 변형된 폴리펩티드이다.
키메라 항체는 한 종의 항체 생성 세포로부터 수득된 가변 경쇄 및 중쇄 영역(VL 및 VH)과 또 다른 종으로부터의 불변 경쇄 및 중쇄 영역을 조합시킴으로써 재조합 수단에 의해 제조될 수 있다. 통상적으로, 키메라 항체는 주로 인간 도메인을 갖는 항체를 생성시키기 위해 설치류 또는 토끼 가변 영역 및 인간 불변 영역을 이용한다. 이러한 키메라 항체의 생성은 당 분야에 널리 공지되어 있고, 이는 표준 수단에 의해 달성될 수 있다(예를 들어, 전체내용이 참조로서 본원에 포함되는 미국 특허 번호 제 5,624,659호에 기재되어 있음). 본 발명의 키메라 항체의 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgG10, IgG11, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16, IgG17, IgG18 또는 IgG19 불변 영역으로부터 선택될 수 있음이 추가로 고려된다.
인간화 항체는 더욱 더 인간과 유사한 면역글로불린 도메인을 함유하도록 공학처리되고, 이는 동물 유래 항체의 상보성 결정 영역만을 포함한다. 이는 모노클로날 항체의 가변 영역의 과가변 루프의 서열을 주의깊게 검사하고, 상기 서열을 인간 항체 사슬의 구조에 적합화시킴으로써 달성된다. 면(face)적으로 복잡하나, 상기 공정은 실제로는 간단하다. 예를 들어, 전체내용이 참조로서 본원에 포함되는 미국 특허 번호 제 6,187,287호를 참조하라.
완전한 면역글로불린(또는 이의 재조합 대응물)에 더하여, 에피토프 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 단편(예를 들어, Fab', F(ab')2, 또는 다른 단편)이 합성될 수 있다. 재조합 면역글로불린 기술을 이용하여 "단편" 또는 최소 면역글로불린이 디자인될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 사용하기 위한 "Fv" 면역글로불린은 융합된 가변 경쇄 영역 및 가변 중쇄 영역을 합성함으로써 생성될 수 있다. 항체의 조합물, 예를 들어, 2개의 별개의 Fv 특이성을 포함하는 디아바디(diabody)가 또한 관심 대상이다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, SMIP(소분자 면역약물), 카멜바디, 나노바디, 및 IgNAR가 면역글로불린 단편에 포함된다.
면역글로불린 및 이의 단편은, 예를 들어, 효과기 부분, 예를 들어, 화학 링커, 검출가능한 부분, 예를 들어, 형광 염료, 효소, 독소, 기질, 생물발광 물질, 방사성 물질, 화학발광 부분 등을 첨가하여 번역후 변형될 수 있거나, 특정 결합 부분, 예를 들어, 스트렙타비딘, 아비딘 또는 비오틴 등이 본 발명의 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. 추가 효과기 분자의 예는 하기에 제공된다.
용어 "장기간 동안 요망되는 분비 이종성 폴리펩티드를 안정적으로 발현하거나 발현하는 다배수체 효모"는 적어도 수일에서 1주, 바람직하게는 적어도 1개월, 더욱 바람직하게는 적어도 1-6개월, 더욱 더 바람직하게는 1년 이상 동안 역치 발현 수준, 통상적으로 적어도 10-25 mg/리터, 바람직하게는 실질적으로 이를 초과하는 수준으로 상기 폴리펩티드를 분비하는 효모 배양물을 의미한다.
용어 "요망되는 양의 재조합 폴리펩티드를 분비하는 다배수체 효모 배양물"은 안정적으로 또는 장기간 동안 적어도 10-25 mg/리터, 더욱 바람직하게는 적어도 50-500 mg/리터, 가장 바람직하게는 500-1000 mg/리터 이상의 이종성 폴리펩티드를 분비하는 배양물을 의미한다.
유전 부호에 따른 폴리누클레오티드 서열의 번역이 폴리펩티드 서열을 발생시키는 경우(즉, 폴리누클레오티드 서열이 폴리펩티드 서열을 "엔코딩"함) 폴리누클레오티드 서열이 폴리펩티드 서열에 "대응되고", 2개의 서열이 동일한 폴리누클레오티드 서열을 엔코딩하는 경우 하나의 폴리누클레오티드 서열이 또 다른 폴리누클레오티드 서열에 "대응된다".
DNA 제작물의 "이종성" 영역 또는 도메인은 사실상 보다 큰 분자와 함께 발견되지 않는 보다 큰 DNA 분자 내의 DNA의 확인가능한 세그먼트이다. 따라서, 이종성 영역이 포유동물 유전자를 엔코딩하는 경우, 유전자는 보통 공급원 유기체의 유전체 내의 포유동물 유전체 DNA에 플랭킹되지 않는 DNA에 의해 플랭킹될 것이다. 이종성 영역의 또 다른 예는 코딩 서열 자체가 자연적으로 발견되지 않는 제작물(예를 들어, 유전체 코딩 서열이 인트론, 또는 천연 유전자와 상이한 코돈을 갖는 합성 서열을 함유하는 cDNA)이다. 대립유전자 변화 또는 천연 발생 돌연변이 사건은 본원에 정의된 DNA의 이종성 영역을 발생시키지 않는다.
"코딩 서열"은 (유전 부호의 관점에서) 단백질 또는 펩티드 서열에 대응되거나 이를 엔코딩하는 코돈의 인-프레임(in-frame) 서열이다. 2개의 코딩 서열은 서열 또는 이의 상보성 서열이 동일한 아미노산 서열을 엔코딩하는 경우에 서로 대응된다. 적절한 조절 서열과 함께 코딩 서열이 전사되고, 폴리펩티드로 번역될 수 있다. 아데닐중합체형성 신호 및 전사 종결 서열은 보통 코딩 서열의 3'에 위치될 것이다. "프로모터 서열"은 세포 내의 RNA 중합효소에 결합할 수 있고, 다운스트림(3' 방향) 코딩 서열의 전사를 개시할 수 있는 DNA 조절 영역이다. 프로모터 서열은 통상적으로 코딩 서열의 전사에 영향을 주는 조절 분자(예를 들어, 전사 인자)의 결합을 위한 추가 부위를 함유한다. 코딩 서열은 RNA 중합효소가 세포 내의 프로모터 서열에 결합하고, 코딩 서열을 mRNA로 전사한 후, 차례로 mRNA가 코딩 서열에 의해 엔코딩되는 단백질로 번역되는 경우, 프로모터 서열의 "제어 하"에 있거나 프로모터에 "작동가능하게 연결"된다.
벡터는 외래 물질, 예를 들어, DNA, RNA 또는 단백질을 유기체 또는 숙주 세포에 도입시키는데 사용된다. 통상적인 벡터는 재조합 바이러스(폴리누클레오티드용) 및 리포솜(폴리펩티드용)을 포함한다. "DNA 벡터"는 부착된 세그먼트의 복제가 발생하도록 또 다른 폴리누클레오티드 세그먼트가 부착될 수 있는 레플리콘, 예를 들어, 플라스미드, 파아지 또는 코스미드이다. "발현 벡터"는 적합한 숙주 세포에 의해 폴리펩티드 합성을 유도시키는 조절 서열을 함유하는 DNA 벡터이다. 이는 보통 RNA 중합효소가 결합하고 mRNA의 전사를 개시하는 프로모터, 뿐만 아니라 mRNA의 폴리펩티드(들)로의 번역을 유도하는 리보솜 결합 부위 및 개시 신호를 의미한다. 적절한 부위 및 정확한 해독틀 내에 발현 벡터 내로의 폴리누클레오티드 서열의 통합 후, 벡터에 의한 적절한 숙주 세포의 형질전환은 상기 폴리누클레오티드 서열에 의해 엔코딩되는 폴리펩티드의 생성을 가능하게 한다.
폴리누클레오티드 서열의 "증폭"은 특정 핵산 서열의 다수의 카피의 시험관내 생성이다. 증폭된 서열은 보통 DNA의 형태이다. 상기 증폭을 수행하기 위한 다양한 기술이 문헌[Van Brunt (1990, Bio/Technol., 8(4):291-294)]의 종설(review article)에 기재되어 있다. 중합효소 연쇄 반응 또는 PCR은 핵산 증폭의 표본(prototype)이며, 본원에서의 PCR의 사용은 다른 적합한 증폭 기술의 예시로 간주되어야 한다.
척추동물에서의 항체의 일반 구조는 현재 널리 이해되어 있다(Edelman, G. M., Ann. N.Y. Acad. Sci., 190: 5 (1971)). 항체는 약 23,000 달톤의 분자량의 2개의 동일한 가벼운 폴리펩티드 사슬("경쇄"), 및 53,000-70,000 달톤의 분자량의 2개의 동일한 무거운 사슬("중쇄")로 구성된다. 4개의 사슬은 "Y" 형태로 이황화 결합에 의해 연결되며, 여기서 경쇄는 "Y" 형태의 입구에서 시작하는 중쇄를 일괄한다. "Y" 형태의 "분지" 부분은 Fab 영역으로 명명되며, "Y" 형태의 줄기 부분은 Fc 영역으로 명명된다. 아미노산 배향은 "Y" 형태의 상부의 N-말단으로부터 각각의 사슬의 하부의 C-말단으로 향하게 된다. N-말단은 항원에 대한 특이성을 유발하고, 약 100개의 아미노산 길이의 항원에 대한 특이성을 갖는 가변 영역을 갖고, 이는 경쇄와 중쇄 사이, 및 항체마다 약간의 변화가 존재한다.
가변 영역은 사슬의 나머지 길이에 걸치고, 항체의 특정 부류에서 항체의 특이성(즉, 항원이 이를 유발시킴)과 관련하여 변화하지 않는 불변 영역으로 각각의 사슬에서 연결된다. 면역글로불린 분자의 부류를 결정하는 5개의 공지된 주요 부류의 불변 영역(γ, μ, α, δ 및 ε(감마, 뮤, 알파, 델타 및 엡실론) 중쇄 불변 영역에 해당하는 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE)이 존재한다. 불변 영역 또는 부류는 보체의 활성화를 포함하는 항체의 후속 효과기 기능(Kabat, E. A., Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry, 2nd Ed., p. 413-436, Holt, Rinehart, Winston (1976)), 및 다른 세포 반응(Andrews, D. W., et al ., Clinical Immunobiology, pp 1-18, W. B. Sanders (1980); Kohl, S., et al ., Immunology, 48: 187 (1983))을 결정하며; 가변 영역은 이와 반응하는 항원을 결정한다. 경쇄는 κ (카파) 또는 λ (람다)로 분류된다. 각각의 중쇄 부류는 카파 또는 람다 경쇄와 쌍을 이룰 수 있다. 경쇄 및 중쇄는 서로 공유 결합되고, 2개의 중쇄의 "꼬리(tail)" 부분은 면역글로불린이 하이브리도마 또는 B 세포에 의해 생성되는 경우 공유 이황화 결합에 의해 서로 결합된다.
표현 "가변 영역" 또는 "VR"은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여되는 항체 내의 경쇄 및 중쇄의 각각의 쌍 내의 영역을 의미한다. 각각의 중쇄는 하나의 말단에 가변 도메인(VH), 및 이에 후속하여 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각각의 경쇄는 한 말단에 가변 도메인(VL) 및 다른 말단에 불변 도메인을 갖고; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 첫번째 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다.
표현 "상보성 결정 영역", "과가변 영역" 또는 "CDR"은 항체의 경쇄 또는 중쇄의 가변 영역에서 발견되는 과가변 또는 상보성 결정 영역(CDR) 중 하나 이상을 의미한다(문헌[Kabat, E. A. et al ., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)] 참조). 이러한 표현은 카밧 등(Kabat et al.)에 의해 정의된 과가변 영역("Sequences of Proteins of Immunological Interest," Kabat E., et al ., US Dept. of Health and Human Services, 1983) 또는 항체의 3차원 구조 내의 과가변 루프(Chothia and Lesk, J Mol. Biol. 196 901-917 (1987))를 포함한다. 각각의 사슬 내의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 근접하여 고정되며, 다른 사슬로부터의 CDR과 함께 항원 결합 부위의 형성에 기여한다. CDR 내에는 항체-항원 상호작용에서 CDR에 의해 이용되는 중요한 접촉 잔기인 선택성 결정 영역(SDR)으로 기재되는 선택 아미노산이 존재한다(Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005)).
표현 "프레임워크 영역" 또는 "FR"은 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역 내의 프레임워크 영역 중 하나 이상을 의미한다(문헌[Kabat, E. A. et al ., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)] 참조). 이러한 표현은 항체의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역 내의 CDR 사이에 삽입된 아미노산 서열을 포함한다.
항- IL -6 항체 및 이의 결합 단편
본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00002
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00003
본 발명은 서열 목록 번호:2의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:4; 서열 목록 번호:5; 및 서열 목록 번호:6의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:3의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:7; 서열 목록 번호:8; 및 서열 목록 번호:9의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:2의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:4; 서열 목록 번호:5; 및 서열 목록 번호:6의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:3의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:7; 서열 목록 번호:8; 및 서열 목록 번호:9의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:2의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:3의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:2의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:4; 서열 목록 번호:5; 및 서열 목록 번호:6의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:3의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:7; 서열 목록 번호:8; 및 서열 목록 번호:9의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:2의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:3의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:2의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:4; 서열 목록 번호:5; 및 서열 목록 번호:6); 및 서열 목록 번호:3의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:7; 서열 목록 번호:8; 및 서열 목록 번호:9) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 서열 목록 번호:18 또는 서열 목록 번호:19의 중쇄 폴리펩티드 서열 중 어느 하나가 서열 목록 번호:3의 중쇄 폴리펩티드를 대체하고; 서열 목록 번호:20의 경쇄 폴리펩티드 서열이 서열 목록 번호:2의 경쇄 폴리펩티드 서열을 대체하고; 서열 목록 번호:120의 중쇄 CDR 서열이 서열 목록 번호:8의 중쇄 CDR 서열을 대체하는 변이체를 고려한다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:2 및 서열 목록 번호:3, 또는 본 단락으로부터 네번째 위의 단락에 기재된 서열 목록 번호의 서열을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab1이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00004
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00005
본 발명은 서열 목록 번호:21의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:23; 서열 목록 번호:24; 및 서열 목록 번호:25의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:22의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:26; 서열 목록 번호:27; 및 서열 목록 번호:28의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:21의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:23; 서열 목록 번호:24; 및 서열 목록 번호:25의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:22의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:26; 서열 목록 번호:27; 및 서열 목록 번호:28의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:21의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:22의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:21의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:23; 서열 목록 번호:24; 및 서열 목록 번호:25의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:22의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:26; 서열 목록 번호:27; 및 서열 목록 번호:28의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:21의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:22의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:21의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:23; 서열 목록 번호:24; 및 서열 목록 번호:25); 및 서열 목록 번호:22의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:26; 서열 목록 번호:27; 및 서열 목록 번호:28) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:21 및 서열 목록 번호:22를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab2이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00006
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00007
본 발명은 서열 목록 번호:37의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:39; 서열 목록 번호:40; 및 서열 목록 번호:41의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:38의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:42; 서열 목록 번호:43; 및 서열 목록 번호:44의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:37의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:39; 서열 목록 번호:40; 및 서열 목록 번호:41의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:38의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:42; 서열 목록 번호:43; 및 서열 목록 번호:44의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:37의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:38의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:37의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:39; 서열 목록 번호:40; 및 서열 목록 번호:41의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:38의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:42; 서열 목록 번호:43; 및 서열 목록 번호:44의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:37의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:38의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:37의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:39; 서열 목록 번호:40; 및 서열 목록 번호:41); 및 서열 목록 번호:38의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:42; 서열 목록 번호:43; 및 서열 목록 번호:44) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:37 및 서열 목록 번호:38을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab3이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00008
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00009
본 발명은 서열 목록 번호:53의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:55; 서열 목록 번호:56; 및 서열 목록 번호:57의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:54의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:58; 서열 목록 번호:59; 및 서열 목록 번호:60의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재되는 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:53의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:55; 서열 목록 번호:56; 및 서열 목록 번호:57의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:54의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:58; 서열 목록 번호:59; 및 서열 목록 번호:60의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:53의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:54의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:53의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:55; 서열 목록 번호:56; 및 서열 목록 번호:57의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:54의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:58; 서열 목록 번호:59; 및 서열 목록 번호:60의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:53의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:54의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:53의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:55; 서열 목록 번호:56; 및 서열 목록 번호:57); 및 서열 목록 번호:54의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:58; 서열 목록 번호:59; 및 서열 목록 번호:60) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:53 및 서열 목록 번호:54를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab4이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00010
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00011
본 발명은 서열 목록 번호:69의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:71; 서열 목록 번호:72; 및 서열 목록 번호:73의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:70의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 이의 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:74; 서열 목록 번호:75; 및 서열 목록 번호:76의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:69의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:71; 서열 목록 번호:72; 및 서열 목록 번호:73의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:70의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:74; 서열 목록 번호:75; 및 서열 목록 번호:76의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:69의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 서열 목록 번호:70의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:69의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:71; 서열 목록 번호:72; 및 서열 목록 번호:73의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:70의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:74; 서열 목록 번호:75; 및 서열 목록 번호:76의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:69의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:70의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:69의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:71; 서열 목록 번호:72; 및 서열 목록 번호:73); 및 서열 목록 번호:70의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:74; 서열 목록 번호:75; 및 서열 목록 번호:76) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:69 및 서열 목록 번호:70을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab5이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00012
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00013
본 발명은 서열 목록 번호:85의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:87; 서열 목록 번호:88; 및 서열 목록 번호:89의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:86의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:90; 서열 목록 번호:91; 및 서열 목록 번호:92의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:85의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:87; 서열 목록 번호:88; 및 서열 목록 번호:89의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:86의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:90; 서열 목록 번호:91; 및 서열 목록 번호:92의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:85의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:86의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:85의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:87; 서열 목록 번호:88; 및 서열 목록 번호:89의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:86의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:90; 서열 목록 번호:91; 및 서열 목록 번호:92의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:85의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:86의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:85의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:87; 서열 목록 번호:88; 및 서열 목록 번호:89); 및 서열 목록 번호:86의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:90; 서열 목록 번호:91; 및 서열 목록 번호:92) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:85 및 서열 목록 번호:86을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab6이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00014
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00015
본 발명은 서열 목록 번호:101의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:103; 서열 목록 번호:104; 및 서열 목록 번호:105의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:102의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:106; 서열 목록 번호:107; 및 서열 목록 번호:108의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:101의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:103; 서열 목록 번호:104; 및 서열 목록 번호:105의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:102의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:106; 서열 목록 번호:107; 및 서열 목록 번호:108의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:101의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:102의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:101의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:103; 서열 목록 번호:104; 및 서열 목록 번호:105의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:102의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:106; 서열 목록 번호:107; 및 서열 목록 번호:108의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:101의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:102의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:101의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:103; 서열 목록 번호:104; 및 서열 목록 번호:105); 및 서열 목록 번호:102의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:106; 서열 목록 번호:107; 및 서열 목록 번호:108) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 서열 목록 번호:117 또는 서열 목록 번호:118의 중쇄 폴리펩티드 서열 중 어느 하나가 서열 목록 번호:102의 중쇄 폴리펩티드를 대체하고; 서열 목록 번호:119의 경쇄 폴리펩티드 서열이 서열 목록 번호:101의 경쇄 폴리펩티드 서열을 대체하고; 서열 목록 번호:121의 중쇄 CDR 서열이 서열 목록 번호:107의 중쇄 CDR 서열을 대체하는 변이체를 고려한다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:101 및 서열 목록 번호:102, 또는 본 단락으로부터 여덟번째 위의 단락에 기재된 대안적 서열 목록 번호의 서열을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab7이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00016
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00017
본 발명은 서열 목록 번호:122의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:124; 서열 목록 번호:125; 및 서열 목록 번호:126의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:123의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:127; 서열 목록 번호:128; 및 서열 목록 번호:129의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:122의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:124; 서열 목록 번호:125; 및 서열 목록 번호:126의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:123의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:127; 서열 목록 번호:128; 및 서열 목록 번호:129의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:122의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:123의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:122의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역에 해당하는 서열 목록 번호:124; 서열 목록 번호:125; 및 서열 목록 번호:126의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:123의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역에 해당하는 서열 목록 번호:127; 서열 목록 번호:128; 및 서열 목록 번호:129의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:122의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:123의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:122의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:124; 서열 목록 번호:125; 및 서열 목록 번호:126); 및 서열 목록 번호:123의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:127; 서열 목록 번호:128; 및 서열 목록 번호:129) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:122 및 서열 목록 번호:123을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab8이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00018
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00019
본 발명은 서열 목록 번호:138의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:140; 서열 목록 번호:141; 및 서열 목록 번호:142의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:139의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:143; 서열 목록 번호:144; 및 서열 목록 번호:145의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:138의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:140; 서열 목록 번호:141; 및 서열 목록 번호:142의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:139의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:143; 서열 목록 번호:144; 및 서열 목록 번호:145의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:138의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:139의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:138의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:140; 서열 목록 번호:141; 및 서열 목록 번호:142의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:139의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:143; 서열 목록 번호:144; 및 서열 목록 번호:145의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:138의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:139의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:138의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:140; 서열 목록 번호:141; 및 서열 목록 번호:142); 및 서열 목록 번호:139의 가변성 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:143; 서열 목록 번호:144; 및 서열 목록 번호:145) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:138 및 서열 목록 번호:139를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab9이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00020
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00021
본 발명은 서열 목록 번호:154의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:156; 서열 목록 번호:157; 및 서열 목록 번호:158의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:155의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:159; 서열 목록 번호:160; 및 서열 목록 번호:161의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:154의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:156; 서열 목록 번호:157; 및 서열 목록 번호:158의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:155의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:159; 서열 목록 번호:160; 및 서열 목록 번호:161의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:154의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:155의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 단편은 서열 목록 번호:154의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 이의 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:156; 서열 목록 번호:157; 및 서열 목록 번호:158의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:155의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:159; 서열 목록 번호:160; 및 서열 목록 번호:161의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:154의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:155의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:154의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:156; 서열 목록 번호:157; 및 서열 목록 번호:158); 및 서열 목록 번호:155의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:159; 서열 목록 번호:160; 및 서열 목록 번호:161) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:154 및 서열 목록 번호:155를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab10이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-16에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00022
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함하는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00023
본 발명은 서열 목록 번호:170의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:172; 서열 목록 번호:173; 및 서열 목록 번호:174의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:171의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:175; 서열 목록 번호:176; 및 서열 목록 번호:177의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:170의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:172; 서열 목록 번호:173; 및 서열 목록 번호:174의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:171의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:175; 서열 목록 번호:176; 및 서열 목록 번호:177의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:170의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:171의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:170의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:172; 서열 목록 번호:173; 및 서열 목록 번호:174의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:171의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:175; 서열 목록 번호:176; 및 서열 목록 번호:177의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:170의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:171의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:170의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:172; 서열 목록 번호:173; 및 서열 목록 번호:174); 및 서열 목록 번호:171의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:175; 서열 목록 번호:176; 및 서열 목록 번호:177) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 서열 목록 번호:170 및 서열 목록 번호:171을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab11이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00024
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00025
본 발명은 서열 목록 번호:186의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:188; 서열 목록 번호:189; 및 서열 목록 번호:190의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:187의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:191; 서열 목록 번호:192; 및 서열 목록 번호:193의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:186의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:188; 서열 목록 번호:189; 및 서열 목록 번호:190의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:187의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:191; 서열 목록 번호:192; 및 서열 목록 번호:193의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:186의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:187의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:186의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:188; 서열 목록 번호:189; 및 서열 목록 번호:190의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:187의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:191; 서열 목록 번호:192; 및 서열 목록 번호:193의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:186의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:187의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:186의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:188; 서열 목록 번호:189; 및 서열 목록 번호:190); 및 서열 목록 번호:187의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:191; 서열 목록 번호:192; 및 서열 목록 번호:193) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:186 및 서열 목록 번호:187을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab12이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00026
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00027
본 발명은 서열 목록 번호:202의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:204; 서열 목록 번호:205; 및 서열 목록 번호:206의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:203의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:207; 서열 목록 번호:208; 및 서열 목록 번호:209의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:202의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:204; 서열 목록 번호:205; 및 서열 목록 번호:206의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:203의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:207; 서열 목록 번호:208; 및 서열 목록 번호:209의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:202의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:203의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:202의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:204; 서열 목록 번호:205; 및 서열 목록 번호:206의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:203의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:207; 서열 목록 번호:208; 및 서열 목록 번호:209의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:202의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:203의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:202의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:204; 서열 목록 번호:205; 및 서열 목록 번호:206); 및 서열 목록 번호:203의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:207; 서열 목록 번호:208; 및 서열 목록 번호:209) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:202 및 서열 목록 번호:203을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 하나 이상을 포함하는 Ab13이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00028
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00029
본 발명은 서열 목록 번호:218의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:220; 서열 목록 번호:221; 및 서열 목록 번호:222의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:219의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:223; 서열 목록 번호:224; 및 서열 목록 번호:225의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:218의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:220; 서열 목록 번호:221; 및 서열 목록 번호:222의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:219의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:223; 서열 목록 번호:224; 및 서열 목록 번호:225의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:218의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:219의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:218의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:220; 서열 목록 번호:221; 및 서열 목록 번호:222의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:219의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:223; 서열 목록 번호:224; 및 서열 목록 번호:225의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:218의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:219의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:218의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:220; 서열 목록 번호:221; 및 서열 목록 번호:222); 및 서열 목록 번호:219의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:223; 서열 목록 번호:224; 및 서열 목록 번호:225) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:218 및 서열 목록 번호:219를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab14이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00030
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00031
본 발명은 서열 목록 번호:234의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:236; 서열 목록 번호:237; 및 서열 목록 번호:238의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:235의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:239; 서열 목록 번호:240; 및 서열 목록 번호:241의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:234의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:236; 서열 목록 번호:237; 및 서열 목록 번호:238의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:235의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:239; 서열 목록 번호:240; 및 서열 목록 번호:241의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:234의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:235의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:234의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:236; 서열 목록 번호:237; 및 서열 목록 번호:238의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:235의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:239; 서열 목록 번호:240; 및 서열 목록 번호:241의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:234의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:235의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:234의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:236; 서열 목록 번호:237; 및 서열 목록 번호:238); 및 서열 목록 번호:235의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:239; 서열 목록 번호:240; 및 서열 목록 번호:241) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:234 및 서열 목록 번호:235을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab15이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00032
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00033
본 발명은 서열 목록 번호:250의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:252; 서열 목록 번호:253; 및 서열 목록 번호:254의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:251의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:255; 서열 목록 번호:256; 및 서열 목록 번호:257의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재되는 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:250의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:252; 서열 목록 번호:253; 및 서열 목록 번호:254의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:251의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:255; 서열 목록 번호:256; 및 서열 목록 번호:257의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:250의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:251의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:250의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:252; 서열 목록 번호:253; 및 서열 목록 번호:254의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:251의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:255; 서열 목록 번호:256; 및 서열 목록 번호:257의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:250의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:251의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:250의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:252; 서열 목록 번호:253; 및 서열 목록 번호:254); 및 서열 목록 번호:251의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:255; 서열 목록 번호:256; 및 서열 목록 번호:257) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:250 및 서열 목록 번호:251를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab16이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00034
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00035
본 발명은 서열 목록 번호:266의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:268; 서열 목록 번호:269; 및 서열 목록 번호:270의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:267의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:271; 서열 목록 번호:272; 및 서열 목록 번호:273의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:266의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:268; 서열 목록 번호:269; 및 서열 목록 번호:270의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:267의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:271; 서열 목록 번호:272; 및 서열 목록 번호:273의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:266의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:267의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:266의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:268; 서열 목록 번호:269; 및 서열 목록 번호:270의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:267의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:271; 서열 목록 번호:272; 및 서열 목록 번호:273의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:266의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:267의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:266의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:268; 서열 목록 번호:269; 및 서열 목록 번호:270); 및 서열 목록 번호:267의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:271; 서열 목록 번호:272; 및 서열 목록 번호:273) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:266 및 서열 목록 번호:267을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab17이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00036
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00037
본 발명은 서열 목록 번호:282의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:284; 서열 목록 번호:285; 및 서열 목록 번호:286의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:283의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:287; 서열 목록 번호:288; 및 서열 목록 번호:289의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:282의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:284; 서열 목록 번호:285; 및 서열 목록 번호:286의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:283의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:287; 서열 목록 번호:288; 및 서열 목록 번호:289의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:282의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:283의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:282의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:284; 서열 목록 번호:285; 및 서열 목록 번호:286의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:283의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:287; 서열 목록 번호:288; 및 서열 목록 번호:289의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:282의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:283의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:282의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:284; 서열 목록 번호:285; 및 서열 목록 번호:286); 및 서열 목록 번호:283의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:287; 서열 목록 번호:288; 및 서열 목록 번호:289) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:282 및 서열 목록 번호:283을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab18이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00038
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00039
본 발명은 서열 목록 번호:298의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:300; 서열 목록 번호:301; 및 서열 목록 번호:302의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:299의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:303; 서열 목록 번호:304; 및 서열 목록 번호:305의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:298의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:300; 서열 목록 번호:301; 및 서열 목록 번호:302의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:299의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:303; 서열 목록 번호:304; 및 서열 목록 번호:305의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:298의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:299의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:298의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:300; 서열 목록 번호:301; 및 서열 목록 번호:302의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:299의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:303; 서열 목록 번호:304; 및 서열 목록 번호:305의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:298의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:299의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:298의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:300; 서열 목록 번호:301; 및 서열 목록 번호:302); 및 서열 목록 번호:299의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:303; 서열 목록 번호:304; 및 서열 목록 번호:305) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:298 및 서열 목록 번호:299를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab19이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00040
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00041
본 발명은 서열 목록 번호:314의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:316; 서열 목록 번호:317; 및 서열 목록 번호:318의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:315의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:319; 서열 목록 번호:320; 및 서열 목록 번호:321의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:314의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:316; 서열 목록 번호:317; 및 서열 목록 번호:318의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:315의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:319; 서열 목록 번호:320; 및 서열 목록 번호:321의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:314의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:315의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 단편은 서열 목록 번호:314의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 이의 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:316; 서열 목록 번호:317; 및 서열 목록 번호:318의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:315의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:319; 서열 목록 번호:320; 및 서열 목록 번호:321의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:314의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:315의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:314의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:316; 서열 목록 번호:317; 및 서열 목록 번호:318); 및 서열 목록 번호:315의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:319; 서열 목록 번호:320; 및 서열 목록 번호:321) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:314 및 서열 목록 번호:315를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab20이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-16에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00042
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함하는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00043
본 발명은 서열 목록 번호:330의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:332; 서열 목록 번호:333; 및 서열 목록 번호:334의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:331의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:335; 서열 목록 번호:336; 및 서열 목록 번호:337의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:330의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:332; 서열 목록 번호:333; 및 서열 목록 번호:334의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:331의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:335; 서열 목록 번호:336; 및 서열 목록 번호:337의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:330의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:331의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:330의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:332; 서열 목록 번호:333; 및 서열 목록 번호:334의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:331의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:335; 서열 목록 번호:336; 및 서열 목록 번호:337의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:330의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:331의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:330의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:332; 서열 목록 번호:333; 및 서열 목록 번호:334); 및 서열 목록 번호:331의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:335; 서열 목록 번호:336; 및 서열 목록 번호:337) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 서열 목록 번호:330 및 서열 목록 번호:331을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab21이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00044
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00045
본 발명은 서열 목록 번호:346의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:348; 서열 목록 번호:349; 및 서열 목록 번호:350의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:347의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:351; 서열 목록 번호:352; 및 서열 목록 번호:353의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:346의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:348; 서열 목록 번호:349; 및 서열 목록 번호:350의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:347의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:351; 서열 목록 번호:352; 및 서열 목록 번호:353의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:346의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:347의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:346의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:348; 서열 목록 번호:349; 및 서열 목록 번호:350의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:347의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:351; 서열 목록 번호:352; 및 서열 목록 번호:353의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:346의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:347의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:346의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:348; 서열 목록 번호:349; 및 서열 목록 번호:350); 및 서열 목록 번호:347의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:351; 서열 목록 번호:352; 및 서열 목록 번호:353) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:346 및 서열 목록 번호:347을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab22이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00046
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00047
본 발명은 서열 목록 번호:362의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:364; 서열 목록 번호:365; 및 서열 목록 번호:366의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:363의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:367; 서열 목록 번호:368; 및 서열 목록 번호:369의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재되는 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:362의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:364; 서열 목록 번호:365; 및 서열 목록 번호:366의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:363의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:367; 서열 목록 번호:368; 및 서열 목록 번호:369의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:362의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:363의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:362의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:364; 서열 목록 번호:365; 및 서열 목록 번호:366의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:363의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:367; 서열 목록 번호:368; 및 서열 목록 번호:369의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:362의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:363의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:362의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:364; 서열 목록 번호:365; 및 서열 목록 번호:366); 및 서열 목록 번호:363의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:367; 서열 목록 번호:368; 및 서열 목록 번호:369) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:362 및 서열 목록 번호:363을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab23이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00048
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00049
본 발명은 서열 목록 번호:378의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:380; 서열 목록 번호:381; 및 서열 목록 번호:382의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:379의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 이의 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:383; 서열 목록 번호:384; 및 서열 목록 번호:385의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:378의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:380; 서열 목록 번호:381; 및 서열 목록 번호:382의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:379의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:383; 서열 목록 번호:384; 및 서열 목록 번호:385의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:378의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 서열 목록 번호:379의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:378의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:380; 서열 목록 번호:381; 및 서열 목록 번호:382의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:379의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:383; 서열 목록 번호:384; 및 서열 목록 번호:385의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:378의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:379의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:378의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:380; 서열 목록 번호:381; 및 서열 목록 번호:382); 및 서열 목록 번호:379의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:383; 서열 목록 번호:384; 및 서열 목록 번호:385) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:378 및 서열 목록 번호:379를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab24이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00050
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00051
본 발명은 서열 목록 번호:394의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:396; 서열 목록 번호:397; 및 서열 목록 번호:398의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:395의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:399; 서열 목록 번호:400; 및 서열 목록 번호:401의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재되는 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:394의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:396; 서열 목록 번호:397; 및 서열 목록 번호:398의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:395의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:399; 서열 목록 번호:400; 및 서열 목록 번호:401의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:394의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:395의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:394의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:396; 서열 목록 번호:397; 및 서열 목록 번호:398의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:395의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:399; 서열 목록 번호:400; 및 서열 목록 번호:401의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:394의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:395의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:394의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:396; 서열 목록 번호:397; 및 서열 목록 번호:398); 및 서열 목록 번호:395의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:399; 서열 목록 번호:400; 및 서열 목록 번호:401) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:394 및 서열 목록 번호:395를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab25이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00052
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00053
본 발명은 서열 목록 번호:410의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:412; 서열 목록 번호:413; 및 서열 목록 번호:414의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:411의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:415; 서열 목록 번호:416; 및 서열 목록 번호:417의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:410의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:412; 서열 목록 번호:413; 및 서열 목록 번호:414의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:411의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:415; 서열 목록 번호:416; 및 서열 목록 번호:417의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:410의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:411의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:410의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:412; 서열 목록 번호:413; 및 서열 목록 번호:414의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:411의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:415; 서열 목록 번호:416; 및 서열 목록 번호:417의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:410의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:411의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:410의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:412; 서열 목록 번호:413; 및 서열 목록 번호:414); 및 서열 목록 번호:411의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:415; 서열 목록 번호:416; 및 서열 목록 번호:417) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:410 및 서열 목록 번호:411을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab26이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00054
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00055
본 발명은 서열 목록 번호:426의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:428; 서열 목록 번호:429; 및 서열 목록 번호:430의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:427의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:431; 서열 목록 번호:432; 및 서열 목록 번호:433의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:426의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:428; 서열 목록 번호:429; 및 서열 목록 번호:430의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:427의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:431; 서열 목록 번호:432; 및 서열 목록 번호:433의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:426의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:427의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:426의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:428; 서열 목록 번호:429; 및 서열 목록 번호:430의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:427의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:431; 서열 목록 번호:432; 및 서열 목록 번호:433의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:426의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:427의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:426의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:428; 서열 목록 번호:429; 및 서열 목록 번호:430); 및 서열 목록 번호:427의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:431; 서열 목록 번호:432; 및 서열 목록 번호:433) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:426 및 서열 목록 번호:427을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab27이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00056
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00057
본 발명은 서열 목록 번호:442의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:444; 서열 목록 번호:445; 및 서열 목록 번호:446의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:443의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:447; 서열 목록 번호:448; 및 서열 목록 번호:449의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:442의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:444; 서열 목록 번호:445; 및 서열 목록 번호:446의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:443의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:447; 서열 목록 번호:448; 및 서열 목록 번호:449의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:442의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:443의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:442의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역에 해당하는 서열 목록 번호:444; 서열 목록 번호:445; 및 서열 목록 번호:446의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:443의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역에 해당하는 서열 목록 번호:447; 서열 목록 번호:448; 및 서열 목록 번호:449의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:442의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:443의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:442의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:444; 서열 목록 번호:445; 및 서열 목록 번호:446); 및 서열 목록 번호:443의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:447; 서열 목록 번호:448; 및 서열 목록 번호:449) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:442 및 서열 목록 번호:443을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab28이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00058
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00059
본 발명은 서열 목록 번호:458의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:460; 서열 목록 번호:461; 및 서열 목록 번호:462의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:459의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:463; 서열 목록 번호:464; 및 서열 목록 번호:465의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:458의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:460; 서열 목록 번호:461; 및 서열 목록 번호:462의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:459의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:463; 서열 목록 번호:464; 및 서열 목록 번호:465의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:458의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:459의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 단편은 서열 목록 번호:458의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 이의 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:460; 서열 목록 번호:461; 및 서열 목록 번호:462의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:459의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:463; 서열 목록 번호:464; 및 서열 목록 번호:465의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:458의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:459의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:458의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:460; 서열 목록 번호:461; 및 서열 목록 번호:462); 및 서열 목록 번호:459의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:463; 서열 목록 번호:464; 및 서열 목록 번호:465) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:458 및 서열 목록 번호:459를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab29이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-16에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00060
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함하는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00061
본 발명은 서열 목록 번호:474의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:476; 서열 목록 번호:477; 및 서열 목록 번호:478의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:475의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:479; 서열 목록 번호:480; 및 서열 목록 번호:481의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:474의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:476; 서열 목록 번호:477; 및 서열 목록 번호:478의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:475의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:479; 서열 목록 번호:480; 및 서열 목록 번호:481의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:474의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:475의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:474의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:476; 서열 목록 번호:477; 및 서열 목록 번호:478의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:475의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:479; 서열 목록 번호:480; 및 서열 목록 번호:481의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:474의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:475의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:474의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:476; 서열 목록 번호:477; 및 서열 목록 번호:478); 및 서열 목록 번호:475의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:479; 서열 목록 번호:480; 및 서열 목록 번호:481) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 서열 목록 번호:474 및 서열 목록 번호:475을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab30이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재된 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00062
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재된 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00063
본 발명은 서열 목록 번호:490의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:492; 서열 목록 번호:493; 및 서열 목록 번호:494의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:491의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:495; 서열 목록 번호:496; 및 서열 목록 번호:497의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:490의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:492; 서열 목록 번호:493; 및 서열 목록 번호:494의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:491의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:495; 서열 목록 번호:496; 및 서열 목록 번호:497의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:490의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:491의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:490의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:492; 서열 목록 번호:493; 및 서열 목록 번호:494의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:491의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:495; 서열 목록 번호:496; 및 서열 목록 번호:497의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:490의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:491의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:490의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:492; 서열 목록 번호:493; 및 서열 목록 번호:494); 및 서열 목록 번호:491의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:495; 서열 목록 번호:496; 및 서열 목록 번호:497) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:490 및 서열 목록 번호:491을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab31이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00064
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00065
본 발명은 서열 목록 번호:506의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:508; 서열 목록 번호:509; 및 서열 목록 번호:510의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:507의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:511; 서열 목록 번호:512; 및 서열 목록 번호:513의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재되는 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:506의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:508; 서열 목록 번호:509; 및 서열 목록 번호:510의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:507의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:511; 서열 목록 번호:512; 및 서열 목록 번호:513의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:506의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:507의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:506의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:508; 서열 목록 번호:509; 및 서열 목록 번호:510의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:507의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:511; 서열 목록 번호:512; 및 서열 목록 번호:513의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:506의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:507의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:506의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:508; 서열 목록 번호:509; 및 서열 목록 번호:510); 및 서열 목록 번호:507의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:511; 서열 목록 번호:512; 및 서열 목록 번호:513) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:506 및 서열 목록 번호:507을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab32이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00066
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00067
본 발명은 서열 목록 번호:522의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:524; 서열 목록 번호:525; 및 서열 목록 번호:526의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:523의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 이의 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:527; 서열 목록 번호:528; 및 서열 목록 번호:529의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:522의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:524; 서열 목록 번호:525; 및 서열 목록 번호:526의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:523의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:527; 서열 목록 번호:528; 및 서열 목록 번호:529의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:522의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 서열 목록 번호:523의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:522의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:524; 서열 목록 번호:525; 및 서열 목록 번호:526의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:523의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:527; 서열 목록 번호:528; 및 서열 목록 번호:529의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:522의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:523의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:522의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:524; 서열 목록 번호:525; 및 서열 목록 번호:526); 및 서열 목록 번호:523의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:527; 서열 목록 번호:528; 및 서열 목록 번호:529) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:522 및 서열 목록 번호:523를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab33이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00068
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00069
본 발명은 서열 목록 번호:538의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:540; 서열 목록 번호:541; 및 서열 목록 번호:542의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:539의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:543; 서열 목록 번호:544; 및 서열 목록 번호:545의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:538의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:540; 서열 목록 번호:541; 및 서열 목록 번호:542의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:539의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:543; 서열 목록 번호:544; 및 서열 목록 번호:545의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:538의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:539의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:538의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:540; 서열 목록 번호:541; 및 서열 목록 번호:542의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:539의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:543; 서열 목록 번호:544; 및 서열 목록 번호:545의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:538의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:539의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:538의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:540; 서열 목록 번호:541; 및 서열 목록 번호:542); 및 서열 목록 번호:539의 가변성 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:543; 서열 목록 번호:544; 및 서열 목록 번호:545) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:538 및 서열 목록 번호:539를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab34이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00070
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00071
본 발명은 서열 목록 번호:554의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:556; 서열 목록 번호:557; 및 서열 목록 번호:558의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:555의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:559; 서열 목록 번호:560; 및 서열 목록 번호:561의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:554의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:556; 서열 목록 번호:557; 및 서열 목록 번호:558의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:555의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:559; 서열 목록 번호:560; 및 서열 목록 번호:561의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:554의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:555의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체 단편은 서열 목록 번호:554의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 이의 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:556; 서열 목록 번호:557; 및 서열 목록 번호:558의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:555의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:559; 서열 목록 번호:560; 및 서열 목록 번호:561의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:554의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:555의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:554의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:556; 서열 목록 번호:557; 및 서열 목록 번호:558); 및 서열 목록 번호:555의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:559; 서열 목록 번호:560; 및 서열 목록 번호:561) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:554 및 서열 목록 번호:555를 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab35이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 IL-16에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 갖는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00072
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖고, 하기 기재되는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함하는 항체를 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00073
본 발명은 서열 목록 번호:570의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:572; 서열 목록 번호:573; 및 서열 목록 번호:574의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:571의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:575; 서열 목록 번호:576; 및 서열 목록 번호:577의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는 항체를 추가로 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:570의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:572; 서열 목록 번호:573; 및 서열 목록 번호:574의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 및/또는 서열 목록 번호:571의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:575; 서열 목록 번호:576; 및 서열 목록 번호:577의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상, 또는 상기 폴리펩티드 서열의 조합물을 포함하는, 다른 항체, 예를 들어, 키메라 항체를 고려한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체는 상기 기재된 CDR 및 가변 중쇄 및 경쇄 서열의 조합물을 포함한다.
본 발명은 또한 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:570의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항체 단편은 서열 목록 번호:571의 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:570의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:572; 서열 목록 번호:573; 및 서열 목록 번호:574의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:571의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)에 해당하는 서열 목록 번호:575; 서열 목록 번호:576; 및 서열 목록 번호:577의 폴리펩티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 단편 중 하나 이상을 포함하는 항체 단편을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편은 서열 목록 번호:570의 가변 경쇄 영역; 서열 목록 번호:571의 가변 중쇄 영역; 서열 목록 번호:570의 가변 경쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:572; 서열 목록 번호:573; 및 서열 목록 번호:574); 및 서열 목록 번호:571의 가변 중쇄 영역의 상보성 결정 영역(서열 목록 번호:575; 서열 목록 번호:576; 및 서열 목록 번호:577) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어, 모두의 항체 단편을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 항-IL-6 항체는 서열 목록 번호:570 및 서열 목록 번호:571을 포함하고, 본원에 기재된 생물학적 활성 중 하나 이상을 갖는 Ab36이다.
이러한 항체 단편은 비제한 적인 예로 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 및 단일 사슬 Fv 항체 형태 중 하나 이상으로 존재할 수 있다. 한 바람직한 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체는 하기 기재된 서열을 포함하는 카파 불변 경쇄 서열을 추가로 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00074
또 다른 바람직한 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체는 하기 기재된 서열을 포함하는 감마-1 불변 중쇄 폴리펩티드 서열을 추가로 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00075
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555 및 571로 구성된 군으로부터 선택된 VH 폴리펩티드 서열을 포함하고; 서열 목록 번호:2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554 및 570으로 구성된 군으로부터 선택된 VL 폴리펩티드 서열을 추가로 포함하는 분리된 항-IL-6 항체, 또는 상기 VH 또는 VL 폴리펩티드 내의 프레임워크 잔기(FR 잔기) 중 하나 이상이 IL-6에 특이적으로 결합하는 항-IL-6 항체를 발생시키는 또 다른 아미노산 잔기로 치환된 상기 항-IL-6 항체의 변이체를 고려한다. 본 발명은 상기 항체의 인간화 및 키메라 형태를 고려한다. 키메라 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgG10, IgG11, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16, IgG17, IgG18 또는 IgG19 불변 영역으로부터 유래된 Fc를 포함할 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 항체 또는 VH 또는 VL 폴리펩티드는 본원에 언급된 인간화 방법의 개시 전에 하나 이상의 토끼 B 세포 집단으로부터 유래되거나 이로부터 선택된다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 항-IL-6 항체 및 이의 단편은 인간 IL-6 단백질의 영장류 동족체에 대해 결합 특이성을 갖는다. 인간 IL-6 단백질의 영장류 동족체의 비제한적 예는 마카카 파스시쿨라리스(Macaca fascicularis)(시노몰구스 원숭이(cynomolgus monkey)로도 공지되어 있음) 및 레수스 원숭이(Rhesus monkey)으로부터 수득된 IL-6이다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 항-IL-6 항체 및 이의 단편은 IL-6과 IL-6R의 결합, 및/또는 IL-6/IL-6R/gp130 복합체의 생성, 및/또는 IL-6/IL-6R/gp130 중합체의 생성을 억제하고/하거나, IL-6과 IL-6R의 결합, 및/또는 IL-6/IL-6R/gp130 복합체의 생성, 및/또는 IL-6/IL-6R/gp130 중합체의 생성 중 하나 이상의 생물학적 효과를 길항시킨다.
본원의 상기 단락에 언급된 바와 같이, 항체 및 이의 단편은 효과기 부분, 예를 들어, 화학 링커, 검출가능한 부분, 예를 들어, 형광 염료, 효소, 기질, 생물발광 물질, 방사성 물질 및 화학발광 부분, 또는 기능성 부분, 예를 들어, 스트렙타비딘, 아비딘, 비오틴, 세포독소, 세포독성제 및 방사성 물질을 첨가하기 위해 번역 후 변형될 수 있다.
검출가능한 부분과 관련하여, 추가의 예시적 효소는 호스라디쉬 퍼옥시다아제(horseradish peroxidase), 아세틸콜린스테라아제, 알칼리성 포스파타아제, 베타-갈락토시다아제 및 루시퍼라아제를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 추가의 예시적 형광 물질은 로다민, 플루오레세인(fluorescein), 플루오레세인 이소티오시아네이트, 움벨리페론(umbelliferone), 디클로로트리아지닐아민, 피코에리트린 및 단실 클로라이드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 추가의 예시적 화학발광 부분은 루미놀을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 추가의 예시적 생물발광 물질은 루시페린 및 애큐오린(aequorin)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 추가의 예시적 방사성 물질은 요오드 125(125I), 탄소 14(14C), 황 35(35S), 트리튬(3H) 및 인 32(32P)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
기능성 부분과 관련하여, 예시적인 세포독성제는 메토트렉세이트, 아미놉테린, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진; 알킬화제, 예를 들어, 메클로르에타민, 티오에파(thioepa) 클로람부실, 멜팔란, 카무스틴(BSNU), 미토마이신 C, 로무스틴(CCNU), 1-메틸니트로소우레아, 시클로토스파미드(cyclothosphamide), 메클로르에타민, 부술판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C, 시스-디클로로디아민 백금(Ⅱ)(DDP) 시스플라틴 및 카르보플라틴(파라플라틴)을 포함하나, 이에 제한되지는 않고; 안트라사이클린(anthracycline)은 다우노루비신(이전에는, 다우노마이신), 독소루비신(아드리아마이신), 데토루비신(detorubicin), 카르미노마이신(carminomycin), 이다루비신(idarubicin), 에피루비신, 미톡산트론 및 비산트렌(bisantrene)을 포함하고; 항생제는 닥티노마이신(악티노마이신 D), 블레오마이신, 칼리키마이신(calicheamicin), 미트라마이신 및 안트라마이신(AMC)을 포함하고; 세포분열 억제제(antimytotic agent)는 빈카 알칼로이드, 빈크리스틴 및 빈블라스틴을 포함한다. 다른 세포독성제는 파클리탁셀(탁솔), 리신, 슈도모나스(pseudomonas) 외독소, 젬시타빈, 시토칼라신 B, 그래미시딘 D, 에티디움 브로마이드, 에메틴, 에토포시드, 테노포시드(tenoposide), 콜히친, 디히드록시 안트라신 디온, 1-데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 퓨로마이신, 프로카르바진, 히드록시우레아, 아스파라기나아제, 코르티코스테로이드, 마이토탄(mytotane)(O,P'-(DDD)), 인터페론, 및 상기 세포독성제의 혼합물을 포함한다.
추가의 세포독성제는 화학요법제, 예를 들어, 카르보플라틴, 시스플라틴, 파클리탁셀, 젬시타빈, 칼리키마이신(calicheamicin), 독소루비신, 5-플루오로우라실, 미토마이신 C, 악티노마이신 D, 시클로포스파미드, 빈크리스틴 및 블레오마이신을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 식물 및 박테리아로부터의 독성 효소, 예를 들어, 리신, 디프테리아 독소 및 슈도모나스 독소는 인간화 항체 또는 이의 결합 단편에 컨쥬게이션되어 세포 유형 특이적 사멸 시약(cell-type-specific-killing reagent)이 생성될 수 있다(Youle, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5483 (1980); Gilliland, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:4539 (1980); Krolick, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5419 (1980)).
기타 세포독성제는 미국 특허 제 6,653,104호(Goldenberg)에 기재되어 있는 바와 같이 세포독성 리보누클레아제를 포함한다. 본 발명의 구체예는 또한 알파 또는 베타 입자를 방출하는 방사선핵종이 복합체-형성 작용제의 사용 또는 이의 사용 없이 항체 또는 이의 결합 단편에 안정적으로 커플링된, 방사성면역컨쥬게이트(radioimmunoconjugate)에 관한 것이다. 이러한 방사선핵종은 베타-방출기, 예를 들어, 인-32(32P), 스칸듐-47(47Sc), 구리-67(67Cu), 갈륨-67(67Ga), 이트륨-88(88Y), 이트륨-90(90Y), 요오드-125(125I), 요오드-131(131I), 사마륨-153(153Sm), 루테튬-177(177Lu), 레늄-186(186Re) 또는 레늄-188(188Re), 및 알파-방출기, 예를 들어, 아스타틴-211(211At), 납-212(212Pb), 비스무트-212(212Bi) 또는 비스무트-213(213Bi) 또는 악티늄-225(225Ac)을 포함한다.
항체 또는 이의 결합 단편을 검출가능한 부분 등에 컨쥬게이션시키는 방법은 당 분야에 공지되어 있고, 이는, 예를 들어, 문헌[Hunter et al, Nature 144:945 (1962); David et al, Biochemistry 13:1014 (1974); Pain et al, J. Immunol. Meth. 40:219 (1981); and Nygren, J., Histochem. and Cytochem. 30:407 (1982)]에 기재되어 있다.
본원에 기재된 구체예는 본원에 기재된 항체, 항체 단편, 디아바디(diabody), SMIP, 카멜바디(camelbody), 나노바디(nanobody), IgNAR, 폴리펩티드, 다양한 영역 및 CDR에 대해 실질적으로 상동성인 변이체 및 동등물을 추가로 포함한다. 이들은, 예를 들어, 보존성 치환 돌연변이(즉, 하나 이상의 아미노산의 유사한 아미노산으로의 치환)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 보존성 치환은 한 아미노산의 동일한 일반 부류 내의 또 다른 아미노산으로의 치환, 예를 들어, 하나의 산성 아미노산의 또 다른 산성 아미노산으로의 치환, 하나의 염기성 아미노산의 또 다른 염기성 아미노산으로의 치환, 또는 하나의 중성 아미노산의 또 다른 중성 아미노산으로의 치환을 의미한다. 보존성 아미노산 치환이 의미하는 것은 당 분야에 널리 공지되어 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 본원에 기재된 항체 단편, 가변 영역 및 CDR의 폴리펩티드 서열 중 어느 하나 이상에 대해 90% 이상의 상동성을 갖는 폴리펩티드 서열을 고려한다. 더욱 바람직하게는, 본 발명은 본원에 기재된 항체 단편, 가변 영역 및 CDR의 폴리펩티드 서열 중 어느 하나 이상에 대해 95% 이상의 서열 상동성, 더욱 더 바람직하게는 98% 이상의 서열 상동성, 더욱 더 바람직하게는 99% 이상의 서열 상동성을 갖는 폴리펩티드 서열을 고려한다. 핵산 및 아미노산 서열 사이의 상동성을 결정하는 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 항-IL-6 활성을 추가로 갖는 본원에 기재된 항체 단편, 가변 영역 및 CDR의 상기 언급된 폴리펩티드 동족체를 추가로 고려한다. 항-IL-6 활성의 비제한적인 예는 본원의 이후의 단락에 기재될 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 전술한 서열 중 어느 것에 결합하는 항-개별특이형(anti-idiotypic) 항체의 생성 및 용도를 추가로 고려한다. 한 예시적 구체예에서, 이러한 항-개별특이형 항체는 항-IL-6 항체의 효과를 조절하거나, 감소시키거나, 중화시키기 위해 항-IL-6 항체가 투여된 피검체에 투여될 수 있다. 이러한 항-개별특이형 항체는 또한 항-IL-6 항체의 존재를 특징으로 하는 자가면역 질병의 치료에 유용할 수 있다. 상기 항-개별특이형 항체의 추가의 예시적인 용도는, 예를 들어, 피검체의 혈액 또는 다른 체액에 존재하는 항-IL-6 항체의 수준을 모니터하기 위한 본 발명의 항-IL-6 항체의 검출이다.
본 발명은 또한 본원에 기재된 다른 폴리누클레오티드 서열 중 어느 것으로 치환된 본원에 기재된 폴리펩티드 또는 폴리누클레오티드 서열 중 어느 것을 포함하는 항-IL-6 항체를 고려한다. 예를 들어, 비제한적으로, 본 발명은 본원에 기재된 가변 경쇄 및 가변 중쇄 서열 중 어느 것의 조합물을 포함하는 항체를 고려하고, 본원에 기재된 CDR 서열 중 어느 것의 본원에 기재된 다른 CDR 서열 중 어느 것으로의 치환에 의해 생성된 항체를 추가로 고려한다.
본 발명의 추가의 예시적 구체예
또 다른 구체예에서, 본 발명은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35 및 Ab36으로 구성된 군으로부터 선택된 항-인간 IL-6 항체가 결합하는 무손상 인간 IL-6 폴리펩티드 또는 이의 단편 상의 선형(linear) 또는 입체형태적(conformational) 에피토프(들)과 동일한 에피토프(들)에 특이적으로 결합하고/하거나, 상기 선형 또는 입체형태적 에피토프(들)로의 결합에 대해 경쟁하는 하나 이상의 항-인간 IL-6 항체 또는 항체 단편을 고려한다. 한 바람직한 구체예에서, 항-인간 IL-6 항체 또는 단편은 Ab1이 결합하는 무손상 인간 IL-6 폴리펩티드 또는 이의 단편 상의 선형 또는 입체형태적 에피토프(들)과 동일한 에피토프(들)에 특이적으로 결합하고/하거나, 상기 선형 또는 입체형태적 에피토프(들)로의 결합에 대해 경쟁한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, Ab1이 결합하는 무손상 IL-6 폴리펩티드 또는 이의 단편 상의 선형 또는 입체형태적 에피토프와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-인간 IL-6 항체는 천연 인간 IL-6 폴리펩티드의 전장에 걸친 중첩 선형 펩티드 단편을 이용하는 에피토프 맵핑에 의해 확인된 IL-6 에피토프(들)에 결합한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6 에피토프는 아미노산 잔기 37-51, 아미노산 잔기 70-84, 아미노산 잔기 169-183, 아미노산 잔기 31-45 및/또는 아미노산 잔기 58-72를 각각 포함하는 것으로부터 선택된 IL-6 단편에 포함된 하나 이상의 잔기를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35 및 Ab36으로부터 선택된 항-IL-6 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 본원에 기재된 항체 또는 항체 단편이 결합하는 IL-6 에피토프와 동일한 IL-6 에피토프에 결합하고/하거나, 상기 IL-6에 대한 결합에 대해 항-IL-6 항체와 경쟁하는 항-IL-6 항체에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 또한 서열 목록 번호:3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555 및 571로 구성된 군으로부터 선택된 VH 폴리펩티드 서열 내에 함유된 CDR 중 하나 이상 및/또는 서열 목록 번호:2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554 및 570으로 구성된 VL 폴리펩티드 서열에 함유된 CDR 중 하나 이상을 포함하는 분리된 항-IL-6 항체 또는 항체 단편에 관한 것이다.
본 발명의 한 구체예에서, 상기 두 단락에서 논의된 항-인간 IL-6 항체는 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35 및 Ab36으로 구성된 군으로부터 선택된 항-인간 IL-6 항체에 함유된 것과 동일한, 각각의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 영역 내의 2개 이상의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다.
한 바람직한 구체예에서, 상기 논의된 항-인간 IL-6 항체는 Ab1에 함유된 것과 동일한, 각각의 가변 경쇄 및 중쇄 영역 내의 2개 이상의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 상기 논의된 항-인간 IL-6 항체의 CDR 모두는 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13, Ab14, Ab15, Ab16, Ab17, Ab18, Ab19, Ab20, Ab21, Ab22, Ab23, Ab24, Ab25, Ab26, Ab27, Ab28, Ab29, Ab30, Ab31, Ab32, Ab33, Ab34, Ab35 및 Ab36으로 구성된 군으로부터 선택된 항-인간 IL-6 항체에 함유된 CDR과 동일하다. 본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 상기 논의된 항-인간 IL-6 항체의 CDR 모두는 Ab1에 함유된 CDR과 동일하다.
본 발명은 상기 논의된 하나 이상의 항-인간 IL-6 항체가 비-당화되고; 상기 항체가 효과기 기능, 반감기, 단백질 분해 및/또는 당화를 변경시키도록 변형된 Fc 영역을 함유하고; 상기 항체가 인간, 인간화, 단일 사슬 또는 키메라 항체이고; 상기 항체가 토끼(모) 항-인간 IL-6 항체로부터 유래된 인간화 항체임을 추가로 고려한다.
본 발명은 하나 이상의 항-인간 IL-6 항체를 추가로 고려하고, 여기서 상기 항체의 가변 경쇄 영역 및 가변 중쇄 영역 내의 프레임워크 영역(FR) 각각은 변형되지 않거나, 가변 경쇄 또는 중쇄 영역 내의 2개 또는 3개 이하의 인간 FR 잔기의 모 토끼 항체의 상응하는 FR 잔기로의 치환에 의해 변형된 인간 FR이고, 상기 인간 FR은 라이브러리 내에 함유된 다른 인간 점라인(germline) 항체 서열에 비한 상응하는 토끼 가변 중쇄 또는 경쇄 영역에 대한 보다 높은 수준의 상동성을 기초로 하여 인간 점라인 항체 서열의 라이브러리로부터 선택된 인간 가변 중쇄 및 경쇄 항체 서열로부터 유래되었다.
본 발명의 한 구체예에서, 항-인간 IL-6 항체 또는 이의 단편은 IL-6 발현 인간 세포, 및/또는 IL-6을 발현하는 세포와 관련된 질병을 갖는 환자의 인간 세포 상에서 발현되거나 이에 의해 발현된 IL-6을 포함하는 생체내 순환 가용성 IL-6 분자에 특이적으로 결합한다.
또 다른 구체예에서, 상기 질병은 전신 피로, 운동 유발 피로, 암 관련 피로, 염증 질병 관련 피로, 만성 피로 증후군, 암 관련 악액질, 심장 관련 악액질, 호흡 관련 악액질, 신장 관련 악액질, 연령 관련 악액질, 류머티스 관절염, 전신홍반루푸스(SLE), 전신 소아 특발성 관절염, 건선, 건선성 관절병증, 강직성 척추염, 염증성 장질병(IBD), 류머티스성 다발성 근육통, 거세포 동맥염, 자가면역 혈관염, 이식편대숙주병(GVHD), 쇼그렌 증후군, 성인형 스틸병(adult onset Still's disease), 류머티스 관절염, 전신 소아 특발성 관절염, 골관절염, 골다공증, 골의 파제트병, 골관절염, 다발성 골수종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 전립선암, 백혈병, 신장 세포암, 다중심 캐슬만씨 병, 난소암, 암 화학요법에서의 약물 내성, 암 화학요법 독성, 허혈성 심질환, 죽상경화증, 비만, 당뇨, 천식, 다발성 경화증, 알츠하이머병, 뇌혈관질환, 열, 급성기 반응, 알레르기, 빈혈, 염증의 빈혈(만성 질병의 빈혈), 고혈압, 우울증, 만성 질환과 관련된 우울증, 혈전증, 혈소판증가증, 급성 심부전, 대사 증후군, 유산, 비만, 만성 전립선염, 사구체신염, 골반 염증성 질환, 재관류 손상, 이식 거부, 이식편대숙주병(GVHD), 조류 인플루엔자, 천연두, 범유행성 인플루엔자, 성인성 호흡곤란증후군(ARDS), 중증급성호흡증후군(SARS), 패혈증 및 전신 염증 반응 증후군(SIRS)으로부터 선택된다. 한 바람직한 구체예에서, 상기 질병은 암, 염증성 장애, 바이러스 장애 또는 자가면역 장애로부터 선택된다. 한 특히 바람직한 구체예에서, 상기 질병은 관절염, 악액질 및 소모 증후군이다.
본 발명은 검출가능한 라벨 또는 치료제에 직접 또는 간접적으로 부착된 항-인간 IL-6 항체 또는 이의 단편을 추가로 고려한다.
본 발명은 또한 효모 또는 인간 선호 코돈을 포함하거나 대안적으로 이로 구성되는 것을 포함하는, 상기 기재된 항-인간 IL-6 항체 또는 항체 단편의 발현을 발생시키는 하나 이상의 핵산 서열을 고려한다. 본 발명은 또한 상기 핵산 서열(들)을 포함하는 벡터(플라스미드 또는 재조합 바이러스 벡터를 포함함)를 고려한다. 본 발명은 또한 포유동물, 효모, 박테리아 및 곤충 세포를 포함하는, 상기 기재된 항체 중 하나 이상을 발현하는 숙주 세포 또는 재조합 숙주 세포를 고려한다. 한 바람직한 구체예에서, 숙주 세포는 효모 세포이다. 한 추가의 바람직한 구체예에서, 효모 세포는 이배수체 효모 세포이다. 한 더욱 바람직한 구체예에서, 효모 세포는 피키아 효모이다.
본 발명은 또한 치료적 유효량의 하나 이상의 항-인간 IL-6 항체 또는 이의 단편을 IL-6 발현 세포와 관련된 질병 또는 질환을 갖는 환자에 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법을 고려한다. 치료될 수 있는 질병은 상기 기재된 비제한적인 목록에 제시된다. 한 바람직한 구체예에서, 질병은 암, 자가면역 질병 또는 염증성 질환으로부터 선택된다. 한 특히 바람직한 구체예에서, 질병은 암 또는 바이러스 감염이다. 또 다른 구체예에서, 치료는 또 다른 치료제, 또는 화학요법, 방사선요법, 사이토카인 투여 또는 유전자요법으로부터 선택된 요법의 투여 및 수행을 추가로 포함한다.
본 발명은 진단적 유효량의 하나 이상의 항-인간 IL-6 항체를 투여하는 단계를 포함하는, IL-6를 발현하는 세포의 존재를 검출하는 생체내 화상진찰 방법을 추가로 고려한다. 한 구체예에서, 상기 투여는 IL-6 발현 질병 부위에서 항체의 검출을 촉진하는 방사선핵종 또는 형광단의 투여를 추가로 포함한다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 생체내 화상진찰 방법은 IL-6 발현 종양 또는 전이를 검출하거나, IL-6 발현 세포와 관련된 자가면역 장애의 부위의 존재를 검출하는데 사용된다. 한 추가 구체예에서, 상기 생체내 화상진찰 방법의 결과는 방사선요법, 화학요법 또는 이의 조합을 포함하는 치료 요법을 포함하는 적절한 치료 요법의 디자인을 돕는데 사용된다.
항- IL -6 항체 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:2의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00076
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:3의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00077
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:2의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:12; 서열 목록 번호:13; 및 서열 목록 번호:14의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:3의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:15; 서열 목록 번호:16; 및 서열 목록 번호:17의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:2의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:10; 서열 목록 번호:3의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:11; 서열 목록 번호:10의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:12; 서열 목록 번호:13; 및 서열 목록 번호:14); 및 서열 목록 번호:11의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:15; 서열 목록 번호:16; 및 서열 목록 번호:17) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:21의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
Figure 112009078884536-pct00078
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:22의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00079
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:21의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:31; 서열 목록 번호:32; 및 서열번호 33의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:22의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:34; 서열 목록 번호:35; 및 서열 목록 번호:36의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:21의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:29; 서열 목록 번호:22의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:30; 서열 목록 번호:29의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:31; 서열 목록 번호:32; 및 서열 목록 번호:33); 및 서열 목록 번호:30의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:34; 서열 목록 번호:35; 및 서열 목록 번호:36) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:37의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00080
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:38의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00081
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:37의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:47; 서열 목록 번호:48; 및 서열 목록 번호:49의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:38의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:50; 서열 목록 번호:51; 및 서열 목록 번호:52의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:37의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:45; 서열 목록 번호:38의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:46; 서열 목록 번호:37의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:47; 서열 목록 번호:48; 및 서열 목록 번호:49); 및 서열 목록 번호:38의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:50; 서열 목록 번호:51; 및 서열 목록 번호:52) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:53의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00082
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:54의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00083
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:53의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:63; 서열 목록 번호:64; 및 서열 목록 번호:65의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:54의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:66; 서열 목록 번호:67; 및 서열 목록 번호:68의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:53의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:61; 서열 목록 번호:54의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:62; 서열 목록 번호:53의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:63; 서열 목록 번호:64; 및 서열 목록 번호:65); 및 서열 목록 번호:54의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:66; 서열 목록 번호:67; 및 서열 목록 번호:68) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:69의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00084
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:70의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00085
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:69의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:79; 서열 목록 번호:80; 및 서열 목록 번호:81의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:70의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:82; 서열 목록 번호:83; 및 서열 목록 번호:84의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:69의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:77; 서열 목록 번호:70의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:78; 서열 목록 번호:69의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:79; 서열 목록 번호:80; 및 서열 목록 번호:81); 및 서열 목록 번호:70의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:82; 서열 목록 번호:83; 및 서열 목록 번호:84) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:85의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00086
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:86의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00087
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:85의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:95; 서열 목록 번호:96; 및 서열 목록 번호:97의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:86의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:98; 서열 목록 번호:99; 및 서열 목록 번호:100의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열번호 85의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:93; 서열변호 86의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:94; 서열 목록 번호:85의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:95; 서열 목록 번호:96; 및 서열 목록 번호:97); 및 서열 목록 번호:86의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:98; 서열 목록 번호:99; 및 서열 목록 번호:100) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:101의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00088
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:102의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00089
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:101의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:111; 서열 목록 번호:112; 및 서열 목록 번호:113의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:102의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:114; 서열 목록 번호:115; 및 서열 목록 번호:116의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:101의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:109; 서열번호 102의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:110; 서열 목록 번호:101의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:111; 서열 목록 번호:112; 및 서열 목록 번호:113); 및 서열 목록 번호:102의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:114; 서열 목록 번호:115; 및 서열 목록 번호:116) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:122의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00090
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:123의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00091
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:122의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:132; 서열 목록 번호:133; 및 서열 목록 번호:134의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:123의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:135; 서열 목록 번호:136; 및 서열 목록 번호:137의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:122의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:130; 서열 목록 번호:123의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:131; 서열 목록 번호:122의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:132; 서열 목록 번호:133; 및 서열 목록 번호:134); 및 서열 목록 번호:123의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:135; 서열 목록 번호:136; 및 서열 목록 번호:137) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:138의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00092
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:139의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00093
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:138의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:148; 서열 목록 번호:149; 및 서열 목록 번호:150의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:139의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:151; 서열 목록 번호:152; 및 서열 목록 번호:153의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함한 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:138의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:146; 서열 목록 번호:139의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:147; 서열 목록 번호:138의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:148; 서열 목록 번호:149; 및 서열 목록 번호:150); 및 서열 목록 번호:139의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:151; 서열 목록 번호:152; 및 서열 목록 번호:153) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:154의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00094
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:155의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00095
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:154의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:164; 서열 목록 번호:165; 및 서열 목록 번호:166의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:155의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:167; 서열 목록 번호:168; 및 서열 목록 번호:169의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:154의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:162; 서열 목록 번호:155의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:163; 서열 목록 번호:154의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:164; 서열 목록 번호:165; 및 서열 목록 번호:166); 및 서열 목록 번호:155의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:167; 서열 목록 번호:168; 및 서열 목록 번호:169) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:170의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00096
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:171의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00097
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:170의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:180; 서열 목록 번호:181; 및 서열 목록 번호:182의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:171의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:183; 서열 목록 번호:184; 및 서열 목록 번호:185의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:170의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:178; 서열 목록 번호:171의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:179; 서열 목록 번호:170의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:180; 서열 목록 번호:181; 및 서열 목록 번호:182); 및 서열 목록 번호:171의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:183; 서열 목록 번호:184; 및 서열 목록 번호:185) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:186의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00098
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:187의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00099
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:186의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:196; 서열 목록 번호:197; 및 서열 목록 번호:198의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:187의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:199; 서열 목록 번호:200; 및 서열 목록 번호:201의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:186의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:194; 서열 목록 번호:187의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:195; 서열 목록 번호:186의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:196; 서열 목록 번호:197; 및 서열 목록 번호:198); 및 서열 목록 번호:187의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:199; 서열 목록 번호:200; 및 서열 목록 번호:201) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:202의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00100
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:203의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00101
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:202의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:212; 서열 목록 번호:213; 및 서열 목록 번호:214의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:203의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:215; 서열 목록 번호:216; 및 서열 목록 번호:217의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:202의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:210; 서열 목록 번호:203의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:211; 서열 목록 번호:202의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:212; 서열 목록 번호:213; 및 서열 목록 번호:214); 및 서열 목록 번호:203의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:215; 서열 목록 번호:216; 및 서열 목록 번호:217) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:218의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00102
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:219의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00103
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:218의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:228; 서열 목록 번호:229; 및 서열 목록 번호:230의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:219의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:231; 서열 목록 번호:232; 및 서열 목록 번호:233의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:218의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:226; 서열 목록 번호:219의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:227; 서열 목록 번호:218의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:228; 서열 목록 번호:229; 및 서열 목록 번호:230); 및 서열 목록 번호:219의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:231; 서열 목록 번호:232; 및 서열 목록 번호:233) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:234의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00104
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:235의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00105
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:234의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:244; 서열 목록 번호:245; 및 서열 목록 번호:246의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:235의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:247; 서열 목록 번호:248; 및 서열 목록 번호:249의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:234의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:242; 서열 목록 번호:235의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:243; 서열 목록 번호:234의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:244; 서열 목록 번호:245; 및 서열 목록 번호:246); 및 서열 목록 번호:235의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:247; 서열 목록 번호:248; 및 서열 목록 번호:249) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:250의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00106
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:251의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00107
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:250의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:260; 서열 목록 번호:261; 및 서열 목록 번호:262의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:251의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:263; 서열 목록 번호:264; 및 서열 목록 번호:265의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:250의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:258; 서열 목록 번호:251의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:259; 서열 목록 번호:250의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:260; 서열 목록 번호:261; 및 서열 목록 번호:262); 및 서열 목록 번호:251의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:263; 서열 목록 번호:264; 및 서열 목록 번호:265) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:266의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00108
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:267의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00109
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:266의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:276; 서열 목록 번호:277; 및 서열 목록 번호:278의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:267의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:279; 서열 목록 번호:280; 및 서열 목록 번호:281의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:266의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:274; 서열 목록 번호:267의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:275; 서열 목록 번호:266의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:276; 서열 목록 번호:277; 및 서열 목록 번호:278); 및 서열 목록 번호:267의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:279; 서열 목록 번호:280; 및 서열 목록 번호:281) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:282의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00110
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:283의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00111
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:282의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:292; 서열 목록 번호:293; 및 서열 목록 번호:294의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:283의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:295; 서열 목록 번호:296; 및 서열 목록 번호:297의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:282의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:290; 서열 목록 번호:283의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:291; 서열 목록 번호:282의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:292; 서열 목록 번호:293; 및 서열 목록 번호:294); 및 서열 목록 번호:283의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:295; 서열 목록 번호:296; 및 서열 목록 번호:297) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:298의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00112
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:299의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00113
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:298의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:308; 서열 목록 번호:309; 및 서열 목록 번호:310의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:299의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:311; 서열 목록 번호:312; 및 서열 목록 번호:313의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:298의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:306; 서열 목록 번호:299의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:307; 서열 목록 번호:298의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:308; 서열 목록 번호:309; 및 서열 목록 번호:310); 및 서열 목록 번호:299의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:311; 서열 목록 번호:312; 및 서열 목록 번호:313) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:314의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00114
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:315의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00115
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:314의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:324; 서열 목록 번호:325; 및 서열 목록 번호:326의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:315의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:327; 서열 목록 번호:328; 및 서열 목록 번호:329의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:314의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:322; 서열 목록 번호:315의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:323; 서열 목록 번호:314의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:324; 서열 목록 번호:325; 및 서열 목록 번호:326); 및 서열 목록 번호:315의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:327; 서열 목록 번호:328; 및 서열 목록 번호:329) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:330의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리펩티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00116
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:331의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00117
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:330의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:340; 서열 목록 번호:341; 및 서열 목록 번호:342의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:331의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:343; 서열 목록 번호:344; 및 서열 목록 번호:345의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:330의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:338; 서열 목록 번호:331의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:339; 서열 목록 번호:330의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:340; 서열 목록 번호:341; 및 서열 목록 번호:342); 및 서열 목록 번호:331의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:343; 서열 목록 번호:344; 및 서열 목록 번호:345) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:346의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00118
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:347의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00119
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:346의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:356; 서열 목록 번호:357; 및 서열 목록 번호:358의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:347의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:359; 서열 목록 번호:360; 및 서열 목록 번호:361의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:346의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:354; 서열 목록 번호:347의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:355; 서열 목록 번호:346의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:356; 서열 목록 번호:357; 및 서열 목록 번호:358); 및 서열 목록 번호:347의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:359; 서열 목록 번호:360; 및 서열 목록 번호:361) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:362의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00120
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:363의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00121
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:362의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:372; 서열 목록 번호:373; 및 서열 목록 번호:374의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:363의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:375; 서열 목록 번호:376; 및 서열 목록 번호:377의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:362의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:370; 서열 목록 번호:363의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:371; 서열 목록 번호:362의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:372; 서열 목록 번호:373; 및 서열 목록 번호:374); 및 서열 목록 번호:363의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:375; 서열 목록 번호:376; 및 서열 목록 번호:377) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:378의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00122
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:379의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00123
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:378의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:388; 서열 목록 번호:389; 및 서열 목록 번호:390의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:379의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:391; 서열 목록 번호:392; 및 서열 목록 번호:393의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:378의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:386; 서열 목록 번호:379의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:387; 서열번호 378의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:388; 서열 목록 번호:389; 및 서열 목록 번호:390); 및 서열 목록 번호:379의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:391; 서열 목록 번호:392; 및 서열 목록 번호:393) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:394의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00124
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:395의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00125
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:394의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:404; 서열 목록 번호:405; 및 서열 목록 번호:406의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:395의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:407; 서열 목록 번호:408; 및 서열 목록 번호:409의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:394의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:402; 서열 목록 번호:395의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:403; 서열 목록 번호:394의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:404; 서열 목록 번호:405; 및 서열 목록 번호:406); 및 서열 목록 번호:395의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:407; 서열 목록 번호:408; 및 서열 목록 번호:409) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:410의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00126
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:411의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00127
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:410의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:420; 서열 목록 번호:421; 및 서열 목록 번호:422의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:411의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:423; 서열 목록 번호:424; 및 서열 목록 번호:425의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:410의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:418; 서열 목록 번호:411의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:419; 서열 목록 번호:410의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:420; 서열 목록 번호:421; 및 서열 목록 번호:422); 및 서열 목록 번호:411의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:423; 서열 목록 번호:424; 및 서열 목록 번호:425) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:426의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00128
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:427의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00129
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:426의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:436; 서열 목록 번호:437; 및 서열 목록 번호:438의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:427의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:439; 서열 목록 번호:440; 및 서열 목록 번호:441의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:426의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:434; 서열 목록 번호:427의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:435; 서열 목록 번호:426의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:436; 서열 목록 번호:437; 및 서열 목록 번호:438); 및 서열 목록 번호:427의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:439; 서열 목록 번호:440; 및 서열 목록 번호:441) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:442의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00130
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:443의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00131
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:442의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:452; 서열 목록 번호:453; 및 서열 목록 번호:454의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:443의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:455; 서열 목록 번호:456; 및 서열 목록 번호:457의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:442의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:450; 서열 목록 번호:443의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:451; 서열 목록 번호:442의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:452; 서열 목록 번호:453; 및 서열 목록 번호:454); 및 서열 목록 번호:443의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:455; 서열 목록 번호:456; 및 서열 목록 번호:457) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:458의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00132
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:459의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00133
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:458의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:468; 서열 목록 번호:469; 및 서열 목록 번호:470의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:459의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:471; 서열 목록 번호:472; 및 서열 목록 번호:473의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:458의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:466; 서열 목록 번호:459의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:467; 서열 목록 번호:458의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:468; 서열 목록 번호:469; 및 서열 목록 번호:470); 및 서열 목록 번호:459의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:471; 서열 목록 번호:472; 및 서열 목록 번호:473) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:474의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00134
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:475의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00135
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:474의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:484; 서열 목록 번호:485; 및 서열 목록 번호:486의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:475의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:487; 서열 목록 번호:488; 및 서열 목록 번호:489의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:474의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:482; 서열 목록 번호:475의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:483; 서열 목록 번호:474의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:484; 서열 목록 번호:485; 및 서열 목록 번호:486); 및 서열 목록 번호:475의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:487; 서열 목록 번호:488; 및 서열 목록 번호:489) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:490의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00136
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:491의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00137
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:490의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:500; 서열 목록 번호:501; 및 서열 목록 번호:502의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:491의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:503; 서열 목록 번호:504; 및 서열 목록 번호:505의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:490의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:498; 서열 목록 번호:491의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:499; 서열 목록 번호:490의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:500; 서열 목록 번호:501; 및 서열 목록 번호:502); 및 서열 목록 번호:491의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:503; 서열 목록 번호:504; 및 서열 목록 번호:505) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:506의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00138
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:507의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00139
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:506의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:516; 서열 목록 번호:517; 및 서열 목록 번호:518의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:507의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:519; 서열 목록 번호:520; 및 서열 목록 번호:521의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:506의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:514; 서열 목록 번호:507의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:515; 서열 목록 번호:506의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:516; 서열 목록 번호:517; 및 서열 목록 번호:518); 및 서열 목록 번호:507의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:519; 서열 목록 번호:520; 및 서열 목록 번호:521) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:522의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00140
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:523의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00141
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:522의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:532; 서열 목록 번호:533; 및 서열 목록 번호:534의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:523의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:535; 서열 목록 번호:536; 및 서열 목록 번호:537의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:522의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:530; 서열 목록 번호:523의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:531; 서열 목록 번호:522의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:532; 서열 목록 번호:533; 및 서열 목록 번호:534); 및 서열 목록 번호:523의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:535; 서열 목록 번호:536; 및 서열 목록 번호:537) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:538의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00142
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:539의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00143
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:538의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:548; 서열 목록 번호:549; 및 서열 목록 번호:550의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:539의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:551; 서열 목록 번호:552; 및 서열 목록 번호:553의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:538의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:546; 서열 목록 번호:539의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:547; 서열 목록 번호:538의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:548; 서열 목록 번호:549; 및 서열 목록 번호:550); 및 서열 목록 번호:539의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:551; 서열 목록 번호:552; 및 서열 목록 번호:553) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:554의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00144
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:555의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00145
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:554의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:564; 서열 목록 번호:565; 및 서열 목록 번호:566의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:555의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:567; 서열 목록 번호:568; 및 서열 목록 번호:569의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리누클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:554의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:562; 서열 목록 번호:555의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:563; 서열 목록 번호:554의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:564; 서열 목록 번호:565; 및 서열 목록 번호:566); 및 서열 목록 번호:555의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:567; 서열 목록 번호:568; 및 서열 목록 번호:569) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 추가로 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:570의 가변 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00146
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:571의 가변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다:
Figure 112009078884536-pct00147
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:570의 가변 경쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:580; 서열 목록 번호:581; 및 서열 목록 번호:582의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:571의 가변 중쇄 서열의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역)을 엔코딩하는 폴리누클레오티드에 해당하는 서열 목록 번호:583; 서열 목록 번호:584; 및 서열 목록 번호:585의 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명은 또한 본원에 기술된 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 중 하나 이상을 포함하는 폴리클레오티드 서열을 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 항체의 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:570의 경쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:578; 서열 목록 번호:571의 중쇄 가변 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열 목록 번호:579; 서열 목록 번호:570의 경쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:580; 서열 목록 번호:581; 및 서열 목록 번호:582); 및 서열 목록 번호:571의 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역을 엔코딩하는 폴리누클레오티드(서열 목록 번호:583; 서열 목록 번호:584; 및 서열 목록 번호:585) 중 1개, 2개, 3개 이상, 예를 들어 모두의 항체 단편을 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하거나, 대안적으로 이로 구성된다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:586의 카파 불변 경쇄 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 추가로 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00148
본 발명의 다른 구체예에서, 본 발명의 폴리누클레오티드는 서열 목록 번호:588의 감마-1 불변 중쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 하기 폴리누클레오티드 서열을 추가로 포함한다:
Figure 112009078884536-pct00149
한 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555 및 571로부터 선택된 항-IL-6 VH 항체 아미노산 서열을 엔코딩하거나, 하나 이상의 프레임워크 잔기(FR 잔기)가 토끼 항-IL-6 항체 VH 폴리펩티드의 상응하는 위치에 존재하는 아미노산으로 치환되거나 보존성 아미노산 치환으로 치환된 상기 항-IL-6 VH 항체 아미노산 서열의 변이체를 엔코딩하는 폴리누클레오티드를 포함하는 분리된 폴리누클레오티드에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554 및 570의 항-IL-6 VL 항체 아미노산 서열을 엔코딩하거나, 하나 이상의 프레임워크 잔기(FR 잔기)가 토끼 항-IL-6 항체 VL 폴리펩티드의 상응하는 위치에 존재하는 아미노산으로 치환되거나 보존성 아미노산 치환으로 치환된 상기 항-IL-6 VL 항체 아미노산 서열의 변이체를 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열을 포함하는 분리된 폴리누클레오티드에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 서열 목록 번호:2 및 서열 목록 번호:3; 서열 목록 번호:2 및 서열 목록 번호:18; 서열 목록 번호:2 및 서열 목록 번호:19; 서열 목록 번호:20 및 서열 목록 번호:3; 서열 목록 번호:20 및 서열 목록 번호:18; 서열 목록 번호:20 및 서열 목록 번호:19; 서열 목록 번호:21 및 서열 목록 번호:22; 서열 목록 번호:37 및 서열 목록 번호:38; 서열 목록 번호:53 및 서열 목록 번호:54; 서열 목록 번호:69 및 서열 목록 번호:70; 서열 목록 번호:85 및 서열 목록 번호:86; 서열 목록 번호:101 및 서열 목록 번호:102; 서열 목록 번호:101 및 서열 목록 번호:117; 서열 목록 번호:101 및 서열 목록 번호:118; 서열 목록 번호:119 및 서열 목록 번호:102; 서열 목록 번호:119 및 서열 목록 번호:117; 서열 목록 번호:119 및 서열 목록 번호:118; 서열 목록 번호:122 및 서열 목록 번호:123; 서열 목록 번호:138 및 서열 목록 번호:139; 서열 목록 번호:154 및 서열 목록 번호:155; 서열 목록 번호:170 및 서열 목록 번호:171; 서열 목록 번호:186 및 서열 목록 번호:187; 서열 목록 번호:202 및 서열 목록 번호:203; 서열 목록 번호:218 및 서열 목록 번호:219; 서열 목록 번호:234 및 서열 목록 번호:235; 서열 목록 번호:250 및 서열 목록 번호:251; 서열 목록 번호:266 및 서열 목록 번호:267; 서열 목록 번호:282 및 서열 목록 번호:283; 서열 목록 번호:298 및 서열 목록 번호:299; 서열 목록 번호:314 및 서열 목록 번호:315; 서열 목록 번호:330 및 서열 목록 번호:331; 서열 목록 번호:346 및 서열 목록 번호:347; 서열 목록 번호:362 및 서열 목록 번호:363; 서열 목록 번호:378 및 서열 목록 번호:379; 서열 목록 번호:394 및 서열 목록 번호:395; 서열 목록 번호:410 및 서열 목록 번호:411; 서열 목록 번호:426 및 서열 목록 번호:427; 서열 목록 번호:442 및 서열 목록 번호:443; 서열 목록 번호:458 및 서열 목록 번호:459; 서열 목록 번호:474 및 서열 목록 번호:475; 서열 목록 번호:490 및 서열 목록 번호:491; 서열 목록 번호:506 및 서열 목록 번호:507; 서열 목록 번호:522 및 서열 목록 번호:523; 서열 목록 번호:538 및 서열 목록 번호:539; 서열 목록 번호:554 및 서열 목록 번호:555; 또는 서열 목록 번호:570 및 서열 목록 번호:571에 함유된 폴리펩티드를 엔코딩하는 서열을 포함하는 하나 이상의 이종성 폴리누클레오티드에 관한 것이다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 항-IL-6 항체로부터 유래된 하나 이상의 CDR 폴리펩티드를 함유하는 폴리펩티드를 발현하는 분리된 폴리누클레오티드에 관한 것으로서, 여기서 상기 발현된 폴리펩티드는 단독으로 IL-6에 특이적으로 결합하거나, 항-IL-6 항체로부터 유래된 하나 이상의 CDR 폴리펩티드를 함유하는 폴리펩티드를 발현하는 또 다른 폴리누클레오티드 서열과 함께 발현되는 경우 IL-6에 특이적으로 결합하며, 상기 하나 이상의 CDR은 서열 목록 번호:3, 18, 19, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 117, 118, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331, 347, 363, 379, 395, 411, 427, 443, 459, 475, 491, 507, 523, 539, 555, 571; 2, 20, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 119, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 458, 474, 490, 506, 522, 538, 554 및 570에 함유된 VL 또는 VH 폴리펩티드에 함유된 것으로부터 선택된다.
상기 폴리누클레오티드를 포함하는 숙주 세포 및 벡터가 또한 고려된다.
본 발명은 추가로 가변 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 서열을 엔코딩하는 폴리누클레오티드 서열, 본원에 기술된 개개의 상보성 결정 영역(CDR, 또는 과가변 영역), 및 상기 서열을 포함하는 숙주 세포를 고려한다. 본 발명의 한 구체예에서, 숙주 세포는 효모 세포이다. 본 발명의 다른 구체예에서, 효모 숙주 세포는 피키아 속에 속한다.
항- IL -6 활성
상기에 기술된 바와 같이, IL-6은 신호 전달 당단백질 gp130 및 IL-6 수용체 (IL-6R)의 하나 이상의 서브유닛으로 구성되는 수용체 복합체를 통해 세포 반응을 촉진시키는 사이토카인의 패밀리의 일원이다. IL-6R은 또한 가용성 형태 (sIL-6R)로 존재할 수 있다. IL-6는 IL-6R에 결합하고, 이후 신호 전달 수용체 gp130을 이합체화시킨다.
본 발명의 항-IL-6 항체 또는 이의 IL-6 결합 단편은 항-IL-6 활성을 나타냄으로써 유용한 것으로 여겨진다. 본 발명의 한 비제한적인 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체 또는 이의 IL-6 결합 단편은 가용성 IL-6 또는 세포 표면 발현 IL-6일 수 있는 IL-6에 결합함으로써 항-IL-6 활성을 나타내고/내거나, IL-6R에 대한 IL-6의 결합 및/또는 gp130 신호 전달 당단백질의 활성화(이합체화) 및 IL-6/IL-6R/gp130 중합체의 형성 및 상기 기술된 것 중 임의의 생물학적 효과를 방지하거나 억제할 수 있다. 본 발명의 IL-6 항체는 특정 항체가 IL-6에 결합하는 장소(즉, 에피토프) 및/또는 전술한 IL-6 복합체 및/또는 중합체의 형성 및 이의 생물학적 효과에 영향을 미치는 방식을 기초로 하여 상이한 길항 활성을 가질 수 있다. 그 결과, 본 발명에 따른 다양한 IL-6 항체는, 예를 들어, 류머티스 관절염과 같은 실질적인 가용성 IL-6의 형성 및 축적을 포함하는 질환을 예방하거나 치료하기에 보다 적합할 수 있는 반면, 다른 항체는 IL-6/IL-6R/gp130 또는 IL-6/IL-6R/gp130 중합체의 예방이 요망되는 치료 결과인 치료에서 바람직할 수 있다. 이는 결합 및 다른 검정들로 결정될 수 있다.
본 발명의 항-IL-6 항체, 및 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 이의 단편의 항-IL-6 활성은 또한 IL-6에 대한 이들의 결합 강도 또는 이들의 친화성에 의해 기술될 수 있다. 이는 또한 이들의 치료학적 특성에 영향을 미칠 수 있다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체, 및 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 이의 단편은 5×10-7, 10-7, 5×10-8, 10-8, 5×10-9, 10-9, 5×10-10, 10-10, 5×10-11, 10-11, 5×10-12, 10-12, 5×10-13, 10-13, 5×10-14, 10-14, 5×10-15 또는 10-15 이하의 해리 상수 (KD)로 IL-6에 결합한다. 바람직하게는, 항-IL-6 항체 및 이의 단편은 5×1O-10 이하의 해리 상수로 IL-6에 결합한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체, 및 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 이의 단편의 항-IL-6 활성은 10-4S-1, 5×10-5S-1, 10-5S-1, 5×10-6S-1, 10-6S-1, 5×10-7S-1 또는 10-7S-1 이하의 분리 속도(off-rate)로 IL-6에 결합한다. 본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체, 및 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 이의 단편은 선형 또는 입체형태적 IL-6 에피토프에 결합한다.
본 발명의 한 추가 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체, 및 IL-6에 대한 결합 특이성을 갖는 이의 단편의 항-IL-6 활성은 IL-6와 관련된 증상을 개선시키거나 감소시키거나, 대안적으로 이와 관련된 질병 및 장애를 치료하거나 예방함으로써 항-IL-6 활성을 나타낸다. IL-6과 관련된 질병 및 장애의 비제한적인 예는 하기에 기술된다. 언급된 바와 같이, 암 관련 피로, 악액질 및 류머티스 관절염은 본 발명의 IL-6 항체에 대한 바람직한 적응증이다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본원에 기술된 항-IL-6 항체, 또는 이의 IL-6 결합 단편은 IL-6R 또는 gp-130 신호 전달 당단백질에 대한 결합 특이성을 갖지 않는다.
B 세포 스크리닝 및 분리
한 구체예에서, 본 발명은 하나 이상의 항원 특이적 세포를 분리하는데 사용될 수 있는 항원 특이적 B 세포의 클론 집단을 분리시키는 방법을 제공한다. 하기 기재되고 예시되는 바와 같이, 상기 방법은 별개로, 조합되어, 순차적으로, 반복적으로, 또는 주기적으로 사용될 수 있는 일련의 배양 및 선택 단계를 포함한다. 바람직하게는, 상기 방법은 요망되는 항원에 특이적인 모노클로날 항체, 또는 이러한 항체에 해당하는 핵산 서열을 생성시키는데 사용될 수 있는 하나 이상의 항원 특이적 세포를 분리하는데 사용된다.
한 구체예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 방법을 제공한다:
a. 하나 이상의 항원 특이적 B 세포를 포함하는 세포 집단을 제조하는 단계;
b. 예를 들어, 크로마토그래피에 의해 세포 집단을 부화시킴으로써, 하나 이상의 항원 특이적 B 세포를 포함하는 부화된 세포 집단을 형성시키는 단계;
c. 부화된 B 세포 집단으로부터 단일 B 세포를 분리시키는 단계; 및
d. 단일 B 세포가 항원에 특이적인 항체를 생성하는지의 여부를 결정하는 단계.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 단일한 항체 생성 B 세포를 분리시키는 방법에 대한 개선을 제공하며, 이러한 개선은 면역화되거나 항원에 대해 자연 노출된 숙주로부터 수득된 B 세포 집단을 부화시키는 것을 포함하고, 이러한 부화 단계는 임의의 선택 단계에 선행하고, 하나 이상의 배양 단계를 포함하고, 상기 항원에 특이적인 단일한 모노클로날 항체를 생성하는 B 세포의 클론 집단을 발생시킨다.
본 출원 전체에 걸쳐, "B 세포의 클론 집단"은 요망되는 항원에 특이적인 단일 항체만을 분비하는 B 세포의 집단을 의미한다. 즉, 상기 세포는 요망되는 항원에 특이적인 단지 하나의 유형의 모노클로날 항체를 생성한다.
본 출원에서, 세포 집단의 세포를 "부화시키는 것"은 혼합된 세포 집단, 예를 들어, 요망되는 항원에 대해 면역화된 숙주로부터 유래된 B 세포 함유 분리물 내에 함유된 요망되는 세포, 통상적으로 항원 특이적 세포의 빈도를 증가시키는 것을 의미한다. 따라서, 부화된 세포 집단은 부화 단계의 결과로서 보다 높은 빈도의 항원 특이적 세포를 갖는 세포 집단을 포함하나, 이러한 세포 집단은 상이한 항체를 함유하고 생성할 수 있다.
일반적인 용어 "세포 집단"은 부화 전 및 부화 후 세포 집단을 포함하나, 다수의 부화 단계가 수행되는 경우, 세포 집단이 부화 전 및 부화 후 모두에 존재할 수 있음을 명심해야 한다. 예를 들어, 한 구체예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 방법을 제공한다:
a. 면역화된 숙주로부터 세포 집단을 수거하여 수거된 세포 집단을 수득하는 단계;
b. 수거된 세포 집단으로부터 하나 이상의 단일 세포 현탁액을 생성하는 단계;
c. 하나 이상의 단일 세포 현탁액을 부화시켜 제 1의 부화된 세포 집단을 형성시키는 단계;
d. 제 1의 부화된 세포 집단을 부화시켜 제 2의 부화된 세포 집단을 형성시키는 단계;
e. 제 2의 부화된 세포 집단을 부화시켜 제 3의 부화된 세포 집단을 형성시키는 단계; 및
f. 제 3의 부화된 세포 집단의 항원 특이적 세포에 의해 생성된 항체를 선택하는 단계.
각각의 세포 집단은 다음 단계에 직접 사용될 수 있거나, 이는 장기 또는 단기 저장 또는 이후의 단계를 위해 부분적으로 또는 전체적으로 동결될 수 있다. 또한, 세포 집단으로부터의 세포는 개별적으로 현탁되어 단일 세포 현탁액이 생성될 수 있다. 단일 세포 현탁액은 부화될 수 있으므로, 단일 세포 현탁액은 부화 전 세포 집단으로 제공될 수 있다. 이후, 하나 이상의 항원 특이적 단일 세포 현탁액은 함께 부화된 세포 집단을 형성하고; 상기 항원 특이적 단일 세포 현탁액은, 예를 들어, 추가 분석 및/또는 항체 생성을 위해 다시 플레이팅되는 것과 같이 그룹화될 수 있다.
한 구체예에서, 본 발명은 약 50% 내지 약 100% 또는 이 범위 내의 증분(increment)인 항원 특이적 세포 빈도를 갖는 부화된 세포 집단을 생성시키기 위해 세포 집단을 부화시키는 방법을 제공한다. 바람직하게는, 분화된 세포 집단은 약 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 항원 특이적 세포 빈도를 갖는다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 세포 집단을 부화시킴으로써 항원 특이적 세포의 빈도가 약 2배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배 이상 또는 이 범위 내의 증분으로 증가되는 방법을 제공한다.
본 출원 전체에 걸쳐, 용어 "증분"은 다양한 정도의 정밀도의 숫자 값, 예를 들어, 10, 1, 0.1, 0.01 등에 가장 가까운 숫자 값을 규정하는데 사용된다. 증분은 임의의 측정가능한 정도의 정밀도로 반올림될 수 있고, 증분은 범위의 양측에서 동일한 정도의 정밀도로 반올림될 필요는 없다. 예를 들어, 1 내지 100의 범위 또는 이 범위 내의 증분은 20 내지 80, 5 내지 50, 및 0.4 내지 98과 같은 범위를 포함한다. 범위가 제한이 없는 경우, 예를 들어, 100 이하의 범위인 경우, 이 범위 내의 증분은 100 내지 측정가능한 한도 사이의 증분을 의미한다. 예를 들어, 100 이하 또는 이 범위 내의 증분은 특징, 예를 들어, 온도가 0에 의해 제한되지 않는 경우 0 내지 100 또는 이 범위 내의 증분을 의미한다.
항원 특이성은 임의의 항원과 관련하여 측정될 수 있다. 항원은 펩티드, 단백질 또는 이의 단편; 탄수화물; 유기 및 무기 분자; 동물 세포, 박테리아 세포 및 바이러스에 의해 생성된 수용체; 효소; 생물학적 경로의 효능제 및 길항제; 호르몬; 및 사이토카인을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 항체가 결합할 수 있는 임의의 물질일 수 있다. 예시적인 항원은 IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-α, IFN-γ, BAFF, CXCL13, IP-10, VEGF, EPO, EGF, HRG, 간세포 성장 인자(HGF) 및 헵시딘(Hepcidin)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 항원은 IL-6, IL-13, TNF-α, VEGF-α, 간세포 성장 인자(HGF) 및 헵시딘을 포함한다. 하나 이상의 부화 단계를 이용하는 방법에서, 각각의 부화 단계에서 사용되는 항원은 다른 항원과 동일하거나 상이할 수 있다. 동일한 항원을 이용한 다수의 부화 단계는 크고/크거나 다양한 집단의 항원 특이적 세포를 생성할 수 있고; 상이한 항원을 이용한 다수의 부화 단계는 다양한 항원에 대한 교차 특이성을 갖는 부화된 세포 집단을 생성할 수 있다.
세포 집단의 부화는 항원 특이적 세포를 분리시키기 위한 당 분야에 공지된 임의의 세포 선택 수단에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 세포 집단은 크로마토그래피 기술, 예를 들어, 밀텐이(Miltenyi) 비드 또는 자기 비드 기술에 의해 부화될 수 있다. 비드는 관심 항원에 직접 또는 간접적으로 부착될 수 있다. 한 바람직한 구체예에서, 세포 집단의 부화 방법은 하나 이상의 크로마토그래피 부화 단계를 포함한다.
세포 집단은 또한 당 분야에 공지된 임의의 항원 특이적 검정 기술, 예를 들어, ELISA 검정 또는 할로 검정(halo assay)에 의해 수행되어 부화될 수 있다. ELISA 검정은 선택적 항원 고정(예를 들어, 스트렙타비딘, 아비딘 또는 뉴트라비딘 코팅된 플레이트에 의한 비오티닐화된 항원 포획), 비특이적 항원 플레이트 코팅, 및 항원 조립(build-up) 전략(예를 들어, 이형성(heteromeric) 단백질-항원 복합체를 생성시키기 위한 선택적 항원 포획 후의 결합 파트너 첨가)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 항원은 고체 매트릭스 또는 지지체, 예를 들어, 컬럼에 직접 또는 간접적으로 부착될 수 있다. 할로 검정은 세포와 항원 로딩된 비드를 접촉시키는 것을 포함하고, 숙주에 특이적인 라벨링된 항-숙주 항체가 B 세포를 수거하기 위해 사용된다. 라벨은, 예를 들어, 형광단일 수 있다. 한 구체예에서, 하나 이상의 검정 부화 단계가 하나 이상의 단일 세포 현탁액에 대해 수행된다. 또 다른 구체예에서, 세포 집단을 부화시키는 방법은 하나 이상의 크로마토그래피 부화 단계 및 하나 이상의 검정 부화 단계를 포함한다.
크기 또는 밀도에 의한 세포 집단의 "부화" 방법은 당 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허 제 5,627,052호를 참조하라. 이러한 단계는 항원 특이성에 의한 세포 집단의 부화와 함께 본 발명에서 이용될 수 있다.
본 발명의 세포 집단은 항원을 인지할 수 있는 하나 이상의 세포를 함유한다. 항원 인지 세포는 B 세포, 혈장 세포 및 이의 후손(progeny)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 한 구체예에서, 본 발명은 단일 유형의 항원 특이적 B 세포를 함유하는 클론 세포 집단을 제공하고, 즉, 세포 집단은 요망되는 항원에 특이적인 단일 모노클로날 항체를 생성한다.
이러한 구체예에서, B 세포의 클론성 항원 특이적 집단은 본원에 제공된 신규한 배양물 및 선택 프로토콜에 의해 수득되는 항원 특이적 항체 분비 세포로 주로 구성되는 것으로 생각된다. 따라서, 본 발명은 또한 하나 이상의 항원 특이적 항체 분비 세포를 함유하는 부화된 세포 집단을 수득하는 방법을 제공한다. 한 구체예에서, 본 발명은 약 50% 내지 약 100% 또는 이 범위 내의 증분, 또는 약 60%, 70%, 80%, 90% 이상 또는 100%의 항원 특이적 항체 분비 세포를 함유하는 부화된 세포 집단을 제공한다.
한 구체예에서, 본 발명은 임의의 선택 단계, 예를 들어, 세포 집단으로부터 특정 B 세포를 선택하고/하거나 특정 세포에 의해 생성된 항체를 선택하기 전에 숙주로부터 수득된 세포 집단을 부화시킴으로써 단일 B 세포를 분리시키는 방법을 제공한다. 부화 단계는 1, 2, 3 또는 이 이상의 단계로 수행될 수 있다. 한 구체예에서, 단일 B 세포가 항원 특이성 및/또는 요망되는 특성을 갖는 항체를 분비하는지의 여부를 확인하기 전에 부화된 세포 집단으로부터 단일 B 세포가 분리된다.
한 구체예에서, 세포 집단을 부화시키는 방법이 항체 생성 및/또는 선택을 위한 방법에 사용된다. 따라서, 본 발명은 항체를 선택하기 전에 세포 집단을 부화시키는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 하나 이상의 항원 특이적 세포를 포함하는 세포 집단을 제조하는 단계, 하나 이상의 항원 특이적 세포를 분리시켜 세포 집단을 부화시킴으로써 부화된 세포 집단을 형성시키는 단계, 및 하나 이상의 항원 특이적 세포로부터 항체 생성을 유도하는 단계를 포함할 수 있다. 한 바람직한 구체예에서, 부화된 세포 집단은 하나 이상의 항원 특이적 세포를 함유한다. 한 구체예에서, 부화된 집단의 각각의 항원 특이적 세포는 항체 생성 세포를 분리시키고/시키거나 항원 특이적 B 세포를 이용하여 항체, 또는 이러한 항체에 상응하는 핵산 서열을 생성시키기 전에 클론성의 상기 항원 특이적 B 세포 집단을 생성시키는 조건하에서 배양된다. 항체가 낮은 빈도의 항원 특이적 세포를 갖는 세포 집단으로부터 생성되는 종래 기술과는 대조적으로, 본 발명은 높은 빈도의 항원 특이적 세포로부터의 항체 선택을 가능케 한다. 항체 선택 전에 부화 단계가 이용되므로, 항체 생성에 사용되는 대부분의 세포, 바람직하게는 사실상 모든 세포가 항원 특이적 세포이다. 증가된 빈도의 항원 특이성을 갖는 세포 집단으로부터 항체를 생성시킴으로써, 항체의 양 및 다양성이 증가된다.
본 발명의 항체 선택 방법에서, 항체는 바람직하게는 항원 특이적 B 세포의 클론 집단을 발생시키는 부화 단계 및 배양 단계 후에 선택된다. 상기 방법은 하나 이상의 분리된 항원 특이적 세포로부터의 선택 항체 또는 이의 부분을 서열분석하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 서열분석을 위한 당 분야에 공지된 임의의 방법이 수행될 수 있고, 이는 중쇄, 경쇄, 가변 영역(들) 및/또는 상보성 결정 영역(들)(CDR)을 서열분석하는 것을 포함할 수 있다.
부화 단계에 더하여, 항체 선택 방법은 또한 항원 인지 및/또는 항체 기능성(functionality)에 대해 세포 집단을 스크리닝하는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 요망되는 항체는 특정 구조적 특징, 예를 들어, 특정 구조의 특정 에피토프 또는 모방체(mimicry)에 대한 결합; 길항제 또는 효능제 활성; 또는 중화 활성, 예를 들어, 항원과 리간드 사이에 결합을 억제하는 활성을 가질 수 있다. 한 구체예에서, 항체 기능성 스크리닝은 리간드 의존성이다. 항체 기능성에 대한 스크리닝은 항원 리간드와 재조합 수용체 단백질의 천연 상호작용을 재생성시키는 시험관내 단백질-단백질 상호작용 검정; 및 리간드 의존성이고, 용이하게 모니터(예를 들어, 증식 반응)되는 세포 기재 반응을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 한 구체예에서, 항체 선택 방법은 억제 농도(IC50)를 측정함으로써 항체 기능성에 대해 세포 집단을 스크리닝하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 하나 이상의 분리된 항원 특이적 세포는 약 100, 50, 30, 25, 10 μg/mL 미만 또는 이 범위 내의 증분의 IC50을 갖는 항체를 생성한다.
부화 단계에 더하여, 항체 선택을 위한 방법은 또한 항체 결합 강도에 대해 세포 집단을 스크리닝하는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다. 항체 결합 강도는 당 분야에 공지된 임의의 방법(예를 들어, 비아코어(Biacore))에 의해 측정될 수 있다. 한 구체예에서, 하나 이상의 분리된 항원 특이적 세포는 높은 항원 친화성, 예를 들어, 약 5x10-10 M-1 미만, 바람직하게는 약 1x10-13 내지 5x10-10, 1x10-12 내지 1x10-10, 1x10-12 내지 7.5x10-11, 1x10-11 내지 2x10-11, 약 1.5x10-11 이하, 또는 이 범위 내의 증분의 해리 상수(Kd)를 갖는 항체를 생성한다. 이러한 구체예에서, 항체는 친화성 성숙된 걸로 표현된다. 한 바람직한 구체예에서, 항체의 친화성은 파노렉스(Panorex®)(에드레콜로맙(edrecolomab)), 리툭산(Rituxan®)(리툭시맙(rituximab)), 헤르셉틴(Herceptin®)(트라즈투주맙(traztuzumab)), 밀로타르그(Mylotarg®)(젠투주맙(gentuzumab)), 캠파스(Campath®)(알렘투주맙(alemtuzumab)), 제발린(Zevalin™)(이브리투모맙(ibritumomab)), 에르비툭스(Erbitux™)(세툭시맙(cetuximab)), 아바스틴(Avastin™)(베비시주맙(bevicizumab)), 랍티바(Raptiva™)(에팔리주맙(efalizumab)), 레미케이드(Remicade®)(인플릭시맙(infliximab)), 후미라(Humira™)(아달리무맙(adalimumab)) 및 크졸레어(Xolair™)(오말리주맙(omalizumab)) 중 어느 하나의 친화성과 동등하거나 이보다 높다. 바람직하게는, 항체의 친화성은 후미라™의 친화성과 동등하거나 이보다 높다. 항체의 친화성은 또한 공지된 친화성 성숙 기술에 의해 증가될 수 있다. 한 구체예에서, 항체 기능성 및 항체 결합 강도 중 하나 이상, 바람직하게는 둘 모두에 대해 하나 이상의 세포 집단이 스크리닝된다.
부화 단계에 더하여, 항체 선택 방법은 또한 항체 서열 상동성, 특히 인간 상동성에 대해 세포 집단을 스크리닝하는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 하나 이상의 분리된 항원 특이적 세포는 약 50% 내지 약 100% 또는 이 범위 내의 증분, 또는 약 60%, 70%, 80%, 85%, 90% 또는 95%를 초과하는 상동성의 인간 항체에 대한 상동성을 갖는 항체를 생성한다. 항체는 CDR 이식 또는 선택성 결정 잔기 이식(SDR)과 같은 당 분야에 공지된 기술에 의해 인간 서열에 대한 상동성을 증가시키기 위해 인간화될 수 있다.
또 다른 구체예에서, 본 발명은 또한 IC50, Kd 및/또는 상동성에 의한 상기 기재된 임의의 구체예에 따른 항체 자체를 제공한다.
본원에 기재된 B 세포 선택 프로토콜은 요망되는 표적 항원에 특이적인 항체 분비 B 세포 및 모노클로날 항체를 수득하기 위한 다른 방법에 비해 다수의 고유의 장점을 갖는다. 이러한 장점은 하기를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다:
첫번째로, 상기 선택 절차가 요망되는 항원, 예를 들어, IL-6 또는 TNF-α와 함께 사용되는 경우, 상기 방법이 항체의 충분히 포괄적인 보충물, 즉 항원의 다양한 상이한 에피토프에 결합하는 항체로 보이는 것을 발생시킬 수 있는 항원 특이적 B 세포를 재현가능하게 발생시키는 것으로 밝혀졌다. 이론에 의해 한정하고자 하는 바는 아니지만, 포괄적이 보충물인 최초 B 세포 회수 전에 수행되는 항원 부화 단계에 기인되는 것으로 가정된다. 더욱이, 이러한 장점은 다양한 특성을 갖는 항체의 분리 및 선택을 가능케 하는데, 이는 상기 특성이 특정 항체의 에피토프 특이성에 따라 다양할 수 있기 때문이다.
두번째로, B 세포 선택 프로토콜이 비교적 높은 결합 친화성, 즉 피코몰 또는 이보다 나은 항원 결합 특이성으로 요망되는 항원에 일반적으로 결합하는 단일 모노클로날 항체를 분비하는 단일 B 세포 또는 이의 후손을 함유하는 클론성 B 세포 배양물을 재현가능하게 생성시키는 것으로 밝혀졌다. 대조적으로, 종래의 항체 선택 방법은 비교적 별로 높지 않은 친화성 항체를 생성시키는 경향이 있고, 이에 따라 치료 잠재성을 갖는 항체를 분리시키기 위한 광범위한 스크리닝 과정을 필요로 한다. 이론으로 한정하고자 하는 바는 아니지만, 상기 프로토콜이 항원 표적에 특이적인 높은 친화성의 단일 모노클로날 항체를 분비하는 회수되는 클론 B 세포의 능력 및 경향을 향상시킬 수 있는, 숙주의 생체내 B 세포 면역화(일차 면역화) 및 이후의 제 2의 시험관내 B 세포 자극(이차 항원 프라이밍 단계) 둘 모두를 발생시키는 것으로 가정된다.
세번째로, B 세포 선택 프로토콜이 평균적으로 요망되는 표적에 대해 높은 선택성(항원 특이성)의 IgG를 생성시키는 부화된 B 세포를 발생시키는 것으로 관찰(본원에서 IL-6 특이적 B 세포로 제시됨)되었다. 상기 방법에 의해 회수된 항원 부화된 B 세포는 상기 논의된 바와 같이 에피토프 특이성의 요망되는 충분한 보충물을 발생시킬 수 있는 B 세포를 함유하는 것으로 생각된다.
네번째로, 작은 항원, 즉 100개 이하의 아미노산, 예를 들어, 5-50개의 아미노산 길이의 펩티드와 함께 사용되는 경우에 B 세포 선택 프로토콜이 작은 항원, 예를 들어, 펩티드에 대한 높은 친화성의 단일 항체를 분비하는 클론성 B 세포를 재현가능하게 발생시키는 것이 관찰되었다. 이는 일반적으로 매우 어렵고, 노동 집약적이고, 때때로 작은 펩티드에 대한 높은 친화성의 항체를 생성시키는 것이 실행가능하지 않으므로, 매우 놀라운 일이다. 따라서, 본 발명은 요망되는 펩티드 표적, 예를 들어, 바이러스, 박테리아 또는 자가항원 펩티드에 대한 치료 항체를 생성시킴으로써 매우 별개의 결합 특성을 갖는 모노클로날 항체를 생성시키거나, 심지어 다양한 펩티드 표적, 예를 들어 다양한 바이러스 균주에 대한 모노클로날 항체의 칵테일(cocktail)을 생성시키는데 사용될 수 있다. 이러한 장점은 요망되는 결합가를 갖는 치료 또는 예방 백신, 예를 들어, 다양한 HPV 균주에 대해 보호 면역을 유도하는 HPV 백신의 생성의 상황에서 특히 유용할 수 있다.
다섯번째로, 특히 토끼로부터 유래된 B 세포와 함께 사용되는 경우 B 세포 선택 프로토콜은 잠재적 면역원성 우려를 배제시키기 위해, 내인성 인간 면역글로불린과 매우 유사(아미노산 수준에서 약 90% 유사함)하고, 인간 면역글로불린과 매우 유사한 길이를 가짐으로써 서열 변형을 거의 요하지 않거나 서열 변형을 요하지 않는(통상적으로, 대부분 단지 몇개의 CDR 잔기가 모 항체 서열에서 변형될 수 있고, 프레임워크 외인성 잔기가 도입되지 않음) CDR을 함유하는 항원 특이적 항체 서열을 재현가능하게 생성시키는 경향이 있다. 특히, 바람직하게는 재조합 항체는 항체 인지에 필요한 숙주(토끼) CDR1 및 CDR2 잔기 및 전체 CDR3 만을 함유할 것이다. 이에 의해, B 세포 및 항체 선택 프로토콜에 따라 생성된 회수된 항체 서열의 높은 항원 결합 친화성은 인간화를 이용하고도 무손상 또는 실질적으로 무손상으로 유지된다.
요컨대, 상기 방법은 기존에 공지된 것보다 효과적인 프로토콜의 사용에 의해 보다 별개의 에피토프에 대해 높은 결합 친화성을 나타내는 항체를 생성시키는데 사용될 수 있다.
한 특정 구체예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 방법에 의해 요망되는 항원에 특이적인 항체를 분비하고, 친화성, 결합력, 세포용해 활성 등과 같은 하나 이상의 요망되는 기능적 특성을 임의로 갖는 단일 B 세포를 확인하기 위한 방법을 제공한다:
a. 항원에 대해 숙주를 면역화시키는 단계;
b. 숙주로부터 B 세포를 수거하는 단계;
c. 항원 특이적 세포의 빈도를 증가시키기 위해 수거된 B 세포를 부화시키는 단계;
d. 하나 이상의 단일 세포 현탁액을 생성시키는 단계;
e. 배양 웰당 단일 항원 특이적 B 세포의 생존에 유리한 조건하에서 단일 세포 현탁액으로부터의 아집단을 배양하는 단계;
f. 아집단으로부터 B 세포를 분리시키는 단계; 및
g. 단일 B 세포가 항원에 특이적인 항체를 생성하는 지의 여부를 결정하는 단계.
통상적으로, 이러한 방법은 요망되는 항체를 엔코딩하는 폴리펩티드 및 핵산 서열을 분리하고, 전체적 또는 부분적으로 서열분석하는 추가 단계를 추가로 포함할 것이다. 이러한 서열 또는 이의 변형된 형태 또는 일부는 요망되는 항원에 대한 재조합 항체를 생성시키기 위해 요망되는 숙주 세포에서 발현될 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, B 세포의 클론 집단은 요망되는 항원에 대한 항체를 생성하는 항체 분비 B 세포를 주로 포함하는 것으로 생각된다. 여러 항원 및 다양한 B 세포 집단으로 수득된 실험 결과에 기초하여, 본 발명에 따라 생성된 클론으로 생성된 B 세포 및 이로부터 유래된 분리된 항원 특이적 B 세포가, 배양된 항원 특이적 B 세포로부터 모노클로날 항체가 유래되는 다른 방법에 비해 통상적으로 비교적 높은 친화성을 갖고, 또한 높은 에피토프 가변성의 모노클로날 항체의 선택이 효과적 및 재현가능하게 발생될 수 있는 모노클로날 항체를 분비하는 것으로 생각된다. 한 예시적 구체예에서, 상기 B 세포 선택 방법에 사용된 면역 세포 집단은 토끼로부터 유래될 것이다. 그러나, 비인간 및 인간 숙주를 포함하는, 항체를 생성하는 다른 숙주가 면역 B 세포의 공급원으로 대안적으로 사용될 수 있다. B 세포의 공급원으로서 토끼의 사용은 상기 방법에 의해 유래될 수 있는 모노클로날 항체의 다양성을 향상시킬 수 있는 것으로 생각된다. 또한, 본 발명에 따른 토끼로부터 유래된 항체 서열은 통상적으로 인간 항체 서열에 대해 높은 정도의 서열 동일성을 갖는 서열을 가지며, 이는 항원성을 거의 갖지 않으므로 이들을 인간에서의 사용에 선호되도록 한다. 인간화 과정에서, 최종 인간화 항체는 이식에 사용되는 인간 표적 서열에 비한 이들의 특성으로 인해 매우 다양한 숙주 CDR 잔기의 서브셋에 보통 제한되는, 훨씬 적은 외래/숙주 잔기 함량을 함유한다. 이는 인간화 항체 단백질에서의 완전한 활성의 회수 가능성을 향상시킨다.
본원에 기재된 부화 단계를 이용한 항체 선택 방법은 면역화된 숙주로부터 면역 세포 함유 세포 집단을 수득하는 단계를 포함한다. 면역화된 숙주로부터 면역 세포 함유 세포 집단을 수득하는 방법은 당 분야에 공지되어 있고, 이는 일반적으로 숙주에서 면역 반응을 유도하고, 숙주로부터 세포를 수거하여 하나 이상의 세포 집단을 수득하는 것을 포함한다. 반응은 요망되는 항원에 대해 숙주를 면역화시킴으로써 유도될 수 있다. 대안적으로, 상기 면역 세포의 공급원으로 사용되는 숙주는 박테리아 또는 바이러스와 같은 특정 병원체에 감염된 개체와 같이 요망되는 항원에 자연 노출되거나, 대안적으로 개체가 걸린 암에 대한 특정 항체 반응에 마운팅된다.
숙주 동물은 당 분야에 널리 공지되어 있고, 이는 기니아 피그, 토끼, 마우스, 래트, 비인간 영장류, 인간 뿐만 아니라 다른 포유동물 및 설치류, 닭, 소, 돼지, 염소 및 양을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, 숙주는 포유동물, 더욱 바람직하게는 토끼, 마우스, 래트 또는 인간이다. 항원에 노출되는 경우, 숙주는 항원에 대한 천연 면역 반응의 일부로서 항체를 생성한다. 언급된 바와 같이, 면역 반응은 질병의 결과로서 자연 발생할 수 있거나, 이는 항원을 이용한 면역화에 의해 유도될 수 있다. 면역화는 당 분야에 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 면역 반응을 향상시키는 작용제, 예를 들어, 완전 또는 불완전 프로인트 애주번트와 함께 또는 이의 부재하에서 항원의 1회 이상의 주입에 의해 수행될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명은 또한 비장내(intrasplenic) 면역화를 고려한다. 생체내에서의 숙주 동물의 면역화에 대한 대안으로서, 상기 방법은 시험관내에서 숙주 세포 배양물을 면역화시키는 것을 포함할 수 있다.
면역 반응의 허용 시간(예를 들어, 혈청 항체 검출에 의해 측정됨) 후, 하나 이상의 세포 집단을 수득하기 위해 숙주 동물 세포가 수거된다. 한 바람직한 구체예에서, 수거된 세포 집단은 항체 결합 강도 및/또는 항체 기능성에 대해 스크리닝된다. 수거된 세포 집단은 바람직하게는 비장, 림프절, 골수 및/또는 말초혈 단핵 세포(PBMC) 중 하나 이상으로부터 유래된다. 세포는 하나 이상의 공급원으로부터 수거되고, 풀링(pooling)될 수 있다. 특정 항원에 대해 특정 공급원이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 비장, 림프절 및 PBMC가 IL-6에 대해 바람직하고; 림프절이 TNF에 대해 바람직하다. 세포 집단은 면역화 후 20일 내지 약 90일 또는 이 범위 내의 증분, 바람직하게는 약 50일 내지 약 60일 후에 수거된다. 수거된 세포 집단 및/또는 이로부터의 단일 세포 현탁액은 항체 선택을 위해 부화되고/되거나, 스크리닝되고/되거나, 배양될 수 있다. 수거된 세포 집단 내의 항원 특이적 세포의 빈도는 보통 약 1% 내지 약 5%, 또는 이 범위 내의 증분이다.
한 구체예에서, 수거된 세포 집단으로부터의 단일 세포 현탁액이 바람직하게는 밀텐이(Miltenyi) 비드를 이용함으로써 부화된다. 약 1% 내지 약 5%의 항원 특이적 세포의 빈도를 갖는 수거된 세포 집단으로부터, 100%에 도달하는 항원 특이적 세포의 빈도를 갖는 부화된 세포 집단이 유래된다.
부화 단계를 이용하는 항체 선택 방법은 부화된 세포 집단으로부터의 하나 이상의 항원 특이적 세포로부터 항체를 생성하는 단계를 포함한다. 시험관내에서 항체를 생성하는 방법은 당 분야에 널리 공지되어 있고, 임의의 적절한 방법이 이용될 수 있다. 한 구체예에서, 부화된 세포 집단, 예를 들어, 수거된 세포 집단으로부터의 항원 특이적 단일 세포 현탁액이 다양한 세포 밀도, 예를 들어, 웰당 50, 100, 250, 500, 또는 1 내지 1000개의 세포 사이의 기타 증분으로 플레이팅된다. 바람직하게는, 아집단은 약 10,000개 이하의 항원 특이적 항원 분비 세포, 더욱 바람직하게는 약 50-10,000, 약 50-5,000, 약 50-1,000, 약 50-500, 약 50-250개의 항원 특이적 항체 분비 세포, 또는 이 범위 내의 증분을 포함한다. 이후, 상기 아집단은 바람직하게는 배양 웰당 단일 증식 항체 분비 세포의 생존에 유리한 조건하에서 영양세포층(feeder layer) 상에서 적절한 배지(예를 들어, 활성화된 T 세포 적응용 배지(conditioned medium), 특히 1-5% 활성화 토끼 T 세포 적응용 배지)와 함께 배양된다. 일반적으로 방사선 조사된 세포 물질, 예를 들어, EL4B 세포를 포함하는 영양세포층은 세포 집단의 일부를 구성하지 않는다. 세포는 항체 생성에 충분한 시간, 예를 들어, 약 1일 내지 약 2주, 약 1일 내지 약 10일, 약 3일 이상, 약 3 내지 약 5일, 약 5일 내지 약 7일, 약 7일 이상, 또는 이 범위 내의 증분 동안 적절한 배지에서 배양된다. 한 구체예에서, 1개 이상의 아집단이 동시에 배양된다. 바람직하게는, 단일 항체 생성 세포 및 이의 후손이 각각의 웰에서 생존함으로써 각각의 웰에서 항원 특이적 B 세포의 클론 집단이 생성된다. 이러한 단계에서, 클론 집단에 의해 생성된 면역글로불린 G(IgG)는 항원 특이성과 매우 상관이 있다. 한 바람직한 구체예에서, IgG는 약 50% 초과, 더욱 바람직하게는 70%, 85%, 90%, 95%, 99% 초과 또는 이 범위 내의 증분의 항원 특이성과의 상관관계를 나타낸다. IL-6에 대한 예시적 상관관계를 입증하는 도 3을 참조하라. 상기 상관관계는 제한된 조건하에서 B 세포 배양물을 조직하여 웰당 단일 항원 특이적 항체 생성물을 확립시킴으로써 입증되었다. 일반 IgG 합성에 대한 항원 특이성을 비교하였다. 3개의 집단이 관찰되었다: 단일 포맷의 항원(비오티닐화 및 직접 코팅)을 인지한 IgG, 고정에 상관 없이 검출가능한 IgG 및 항원 인지, 및 IgG 단독 생성. IgG 생성은 항원 특이성과 매우 상관관계가 있었다.
항체를 함유하는 상층액이 임의로 수거되고, 이는 상기 기재된 단계에 따른 항체 선택을 위해 부화되고/되거나, 스크리닝되고/되거나, 배양될 수 있다. 한 구체예에서, 상층액은 부화(바람직하게는, 항원 특이성 검정, 특히 ELISA 검정에 의함)되고/되거나 항체 기능성에 대해 스크리닝된다.
또 다른 구체예에서, 요망되는 분비된 모노클로날 항체의 존재를 검출하기 위해 스크리닝되는 상기 기재된 상층액으로부터의 부화된, 바람직하게는 클론성인 항원 특이적 B 세포 집단은 클론성 B 세포 집단에서 단일 항체 생성 B 세포의 존재를 확인하기 위한 적절한 검정에서 이후에 시험되는 소수의 B 세포, 바람직하게는 단일 B 세포의 분리에 사용된다. 한 구체예에서, 약 1 내지 약 20개의 세포, 바람직하게는 약 15, 12, 10, 5 또는 3개 미만의 세포, 또는 이 범위 내의 증분, 가장 바람직하게는 단일 세포가 클론성 B 세포 집단으로부터 분리된다. 바람직하게는, 항원 특이성 검정, 특히 할로 검정에 의해 스크리닝이 수행된다. 할로 검정은 전장 단백질 또는 이의 단편으로 수행될 수 있다. 항체 함유 상층액이 또한 항원 결합 친화성; 항원-리간드 결합의 효능작용(agonism) 또는 길항작용(antagonism), 및 특정 표적 세포 유형의 증폭의 유도 또는 억제; 표적 세포의 용해의 유도 또는 억제, 및 상기 항원을 수반하는 생물학적 경로의 유도 또는 억제 중 하나 이상에 대해 스크리닝될 수 있다.
확인된 항원 특이적 세포는 요망되는 모노클로날 항체를 엔코딩하는 상응하는 핵산 서열을 유도하는데 사용될 수 있다(AluⅠ 소화효소가 웰당 단일 모노클로날 항체 유형만이 생성된 것을 확인할 수 있음). 상기 언급된 바와 같이, 상기 서열은 인간 의약에서의 사용을 위해 적합화되도록 하기 위해, 예를 들어, 인간화에 의해 돌연변이될 수 있다.
언급된 바와 같이, 상기 과정에 사용되는 부화된 B 세포 집단은 또한 반복되거나 상이한 순서로 수행될 수 있는 상기 기재된 단계에 따른 항체 선택을 위해 추가로 부화되고/되거나, 스크리닝되고/되거나, 배양될 수 있다. 한 바람직한 구체예에서, 부화된 바람직하게는 클론성 항원 특이적 세포 집단 중 하나 이상의 세포가 항체 선택을 위해 분리되고, 배양되고, 사용된다.
따라서, 한 구체예에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 방법을 제공한다:
a. 면역화된 숙주로부터 세포 집단을 수거하여 수거된 세포 집단을 수득하는 단계;
b. 수거된 세포 집단으로부터 하나 이상의 단일 세포 현탁액을 생성시키는 단계;
c. 바람직하게는 크로마토그래피에 의해 하나 이상의 단일 세포 현탁액을 부화시켜, 제 1의 부화된 세포 집단을 형성시키는 단계;
d. 바람직하게는 ELISA 검정에 의해 제 1의 부화된 세포 집단을 부화시켜, 바람직하게는 클론성인, 즉 항원 특이적 B 세포의 단일 유형만을 함유하는 제 2의 부화된 세포 집단을 형성시키는 단계;
e. 바람직하게는 할로 검정에 의해 제 2의 부화된 세포 집단을 부화시켜, 요망되는 항원에 특이적인 항체를 생성하는 단일 또는 적은 수의 B 세포를 함유하는 제 3의 부화된 세포 집단을 형성시키는 단계; 및
f. 제 3의 부화된 세포 집단으로부터 분리된 항원 특이적 세포에 의해 생성된 항체를 선택하는 단계.
상기 방법은 항체 결합 강도(친화성, 결합력) 및/또는 항체 기능성에 대해 수거된 세포 집단을 스크리닝하는 하나 이상의 단계를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 스크리닝 단계는 확인된 항원 특이적 B 세포에 의해 생성된 항체가 최소 항원 결합 친화성을 갖는 항체를 생성하는 지의 여부, 상기 항체가 리간드에 대한 요망되는 항원의 결합을 효능화시키거나 길항시키는 지의 여부; 상기 항체가 특정 세포 유형의 증식을 유도하거나 억제하는 지의 여부; 상기 항체가 표적 세포에 대한 세포용해 반응을 유도하거나 유발하는 지의 여부; 상기 항체가 특정 에피토프에 결합하는 지의 여부; 및 상기 항체가 상기 항원을 수반하는 특정 생물학적 경로 또는 경로들을 조정(억제 또는 효능화)하는 지의 여부를 검출하는 임의의 방법을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
유사하게, 상기 방법은 항체 결합 강도 및/또는 항체 기능성에 대해 제 2의 부화된 세포 집단을 스크리닝하는 하나 이상의 단계를 포함할 수 있다.
상기 방법은 선택된 항체의 폴리펩티드 서열 또는 상응하는 핵산 서열을 서열분석하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 상기 방법은 또한 선택된 항체의 서열, 이의 단편 또는 유전적으로 변형된 형태를 이용하여 재조합 항체를 생성시키는 단계를 포함할 수 있다. 요망되는 특성을 보유시키기 위해 항체 서열을 돌연변이화시키는 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있고, 이는 인간화, 키메라화(chimerization), 단일 사슬 항체의 생성을 포함하고; 이러한 돌연변이 방법은 요망되는 효과기 기능, 면역원성, 안정성, 당화의 제거 또는 추가 등을 갖는 재조합 항체를 발생시킬 수 있다. 재조합 항체는 포유동물 세포, 예를 들어, CHO, COS, BHK, HEK-293, 박테리아 세포, 효모 세포, 식물 세포, 곤충 세포 및 양서류 세포를 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적절한 재조합 세포에 의해 생성될 수 있다. 한 구체예에서, 항체는 다배수체 효모 세포, 즉 이배수체 효모 세포, 특히 피키아에서 발현된다.
한 구체예에서, 상기 방법은 하기 단계를 포함한다:
a. 항원에 대해 숙주를 면역화시켜, 숙주 항체를 생성시키는 단계;
b. 항원 특이성 및 중화에 대해 숙주 항체를 스크리닝하는 단계;
c. 숙주로부터 B 세포를 수거하는 단계;
d. 수거된 B 세포를 부화시켜, 증가된 빈도의 항원 특이적 세포를 갖는 부화된 세포 집단을 생성시키는 단계;
e. 단일 B 세포의 생존에 유리한 조건하에서 부화된 세포 집단으로부터 하나 이상의 아집단을 배양하여, 하나 이상의 배양 웰에서 클론 집단을 생성시키는 단계;
f. 상기 클론 집단이 상기 항원에 특이적인 항체를 생성하는 지의 여부를 결정하는 단계;
g. 단일 B 세포를 분리시키는 단계; 및
h. 단일 B 세포에 의해 생성된 항체의 핵산 서열을 서열분석하는 단계.
항체를 인간화시키는 방법
본 발명의 또 다른 구체예에서, 항체 중쇄 및 경쇄를 인간화시키는 방법이 제공된다. 이러한 구체예에서, 중쇄 및 경쇄의 인간화를 위해 하기 방법이 후속된다:
경쇄
1. 신호 펩티드 서열 이후의 첫번째 것인 아미노산을 확인한다. 이는 프레임워크 1의 시작점이다. 신호 펩티드는 첫번째 개시 메티오닌에서 시작하고, 이는 통상적으로 토끼 경쇄 단백질 서열에 대해 22개의 아미노산 길이이나 반드시 이러한 것은 아니다. 성숙 폴리펩티드의 시작점은 또한 N-말단 단백질 서열분석에 의해 실험적으로 결정될 수 있거나, 예측 알고리듬을 이용하여 예측될 수 있다. 이는 또한 당업자에 의해 고전적으로 정의된 바와 같은 프레임워크 1의 시작점이다.
예: 'AYDM...'으로 시작하는, 도 2의 RbtVL 아미노산 잔기 1.
2. 프레임워크 3의 종결점을 확인한다. 이는 통상적으로 프레임워크 1의 시작점 이후의 86-90번째 아미노산이고, 통상적으로 2개의 티로신 잔기가 선행된 시스테인 잔기이다. 이는 당업자에 의해 고전적으로 정의된 바와 같은 프레임워크 3의 종결점이다.
예: 'TYYC'로 종결되는, 도 2의 RbtVL 아미노산 잔기 88
3. 상기 정의된 바와 같이 프레임워크 1의 시작점으로부터 프레임워크 3의 종결점까지의 폴리펩티드의 토끼 경쇄 서열을 이용하고, 가장 유사한 인간 항체 단백질 서열에 대해 서열 상동성 연구를 수행한다. 이는 면역원성의 가능성을 감소시키기 위한 항체 성숙 전의 인간 점라인 서열에 대한 연구일 것이나, 임의의 인간 서열이 사용될 수 있다. 통상적으로, BLAST와 같은 프로그램이 가장 상동성에 대해 서열 데이터베이스를 연구하는데 사용될 수 있다. 인간 항체 서열의 데이터베이스는 NCBI(미국 국립생물정보센터)와 같은 다양한 정보원으로부터 발견될 수 있다.
예: 도 2의 1 내지 88번의 잔기로부터의 RbtVL 아미노산 서열은 인간 항체 점라인 데이터베이스에 대해 BLAST 처리된 것이다. 상부의 3개의 독특한 복귀된 서열이 도 2에 L12A, V1 및 Vx02로 도시된다.
4. 일반적으로, 가장 상동성인 인간 점라인 가변 경쇄 서열이 인간화를 위한 기초로서 이후에 사용된다. 그러나, 당업자는 서열 갭(gap) 및 프레임워크 유사성을 포함하는 다른 요인에 기초하여 상동성 알고리듬에 의해 결정된 가장 상동성인 것이 아닌 또 다른 서열을 사용하는 것을 결정할 수 있다.
예: 도 2에서, L12A가 가장 상동성인 인간 점라인 가변 경쇄 서열이었고, 이는 RbtVL의 인간화를 위한 기초로 사용된다.
5. 경쇄 인간화에 사용되는 인간 동족체에 대해 프레임워크 및 CDR 배열(FR1, FR2, FR3, CDR1 & CDR2)을 결정한다. 이는 당 분야에 기재된 바와 같은 전통적인 배치를 이용한다. 프레임워크 및 CDR 영역의 배치를 유지하면서 토끼 가변 경쇄 서열과 인간 동족체를 정렬시킨다.
예: 도 2에서, RbtVL 서열은 인간 상동성 서열 L12A와 정렬되고, 프레임워크 및 CDR 도메인이 표시된다.
6. 인간 상동성 경쇄 서열 CDR1 및 CDR2 영역을 토끼 서열로부터의 CDR1 및 CDR2 서열로 대체한다. 토끼 및 인간 CDR 서열 사이에 길이의 차이가 존재하는 경우, 전체 토끼 CDR 서열 및 이의 길이를 이용한다. 보다 작거나 큰 서열 교환이 수행되거나, 특정 잔기(들)이 변경되는 경우, 생성되는 인간화 항체의 특이성, 친화성 및/또는 면역원성이 변경되지 않는 것이 가능하며, 본원에 기재된 교환이 성공적으로 이용되었으나, 다른 교환이 허용될 수 있는 가능성은 배제하지 않는다.
예: 도 2에서, 인간 상동성 가변 경쇄 L12A의 CDR1 및 CDR2 아미노산 잔기가 RbtVL 토끼 항체 경쇄 서열로부터의 CDR1 및 CDR2 아미노산 서열로 대체된다. 인간 L12A 프레임워크 1, 2 및 3은 변경되지 않는다. 생성되는 인간화 서열은 1 내지 88번 잔기로부터의 VLh로 하기에 도시된다. L12A 인간 서열과 상이한 단지 1개의 잔기에 밑줄이 있고, 따라서 토끼 유래 아미노산 잔기인 것을 유의하라. 이러한 예에서, 88개의 잔기 중 단지 8개가 인간 서열과 상이하다.
7. 단계 6에서 생성된 신규한 하이브리드 서열의 프레임워크 3 이후에 토끼 경쇄 항체 서열의 전체 CDR3를 부착시킨다. CDR3 서열은 다양한 길이일 수 있으나, 이는 통상적으로 9 내지 15개의 아미노산 길이이다. CDR3 영역 및 이후의 프레임워크 4 영역 시작점이 고전적으로 규정되고, 이는 당업자에 의해 확인가능하다. 통상적으로, 프레임워크 4의 시작점, 및 이에 따른 CDR3의 종결점 이후는 서열 'FGGG...'로 구성되나, 이러한 잔기에 일부 변화가 존재할 수 있다.
예: 도 2에서, RbtVL의 CDR3(89-100번의 아미노산 잔기)는 VLh로 표시된 인간화 서열 내의 프레임워크 3의 종결점 이후에 첨가된다.
8. 통상적으로 가변 경쇄의 최종 11개의 아미노산 잔기이고, 상기 단계 7에 표시된 바와 같이 시작하고, 통상적으로 아미노산 서열 '...VVKR'로 종결되는 토끼 경쇄 프레임워크 4는 보통 점라인 서열로부터의 가장 근접한 인간 경쇄 프레임워크 4 동족체로 대체된다. 종종, 이러한 인간 경쇄 프레임워크 4는 서열 'FGGGTKVEIKR'이다. 가장 상동성이 아니거나 달리 상이한 다른 인간 경쇄 프레임워크 4 서열이 생성되는 인간화 항체의 특이성, 친화성 및/또는 면역원성에 영향을 주지 않고 사용될 수 있는 것이 가능하다. 이러한 인간 경쇄 프레임워크 4 서열이 상기 단계 7로부터의 CDR3 서열 바로 이후의 가변 경쇄 인간화 서열의 종결점에 첨가된다. 이는 이제 가변 경쇄 인간화 아미노산 서열의 종결점이 된다.
예: 도 2에서, RbtVL 토끼 경쇄 서열의 프레임워크 4(FR4)가 동종성 인간 FR4 서열 상에 제시된다. 인간 FR4 서열이 상기 단계 7에서 첨가된 CDR3 영역의 종결점 바로 이후의 인간화 가변 경쇄 서열(VLh)에 첨가된다.
중쇄
1. 신호 펩티드 서열 이후의 첫번째 것인 아미노산을 확인한다. 이는 프레임워크 1의 시작점이다. 신호 펩티드는 첫번째 개시 메티오닌에서 시작하고, 이는 통상적으로 토끼 중쇄 단백질 서열에 대해 19개의 아미노산 길이이다. 항상 그러한 것은 아니지만 통상적으로, 토끼 중쇄 신호 펩티드의 최종 3개의 아미노산 잔기는 '...VQC'이고, 프레임워크 1의 시작점이 후속된다. 성숙 폴리펩티드의 시작점은 또한 N-말단 단백질 서열분석에 의해 실험적으로 결정될 수 있거나, 예측 알고리듬을 이용하여 예측될 수 있다. 이는 또한 당업자에 의해 고전적으로 정의된 바와 같은 프레임워크 1의 시작점이다.
예: 'QEQL...'로 시작하는, 도 2의 RbtVH 아미노산 잔기 1.
2. 프레임워크 3의 종결점을 확인한다. 이는 통상적으로 프레임워크 1의 시작점 이후의 95-100개의 아미노산이고, 통상적으로 '...CAR'(알라닌은 또한 발린일 수 있음)의 최종 서열을 갖는다. 이는 당업자에 의해 고전적으로 정의된 바와 같은 프레임워크 3의 종결점이다.
예: ' ...FCVR'로 종결되는, 도 2의 RbtVH 아미노산 잔기 98.
3. 상기 정의된 바와 같이 프레임워크 1의 시작점으로부터 프레임워크 3의 종결점까지의 폴리펩티드의 토끼 중쇄 서열을 이용하고, 가장 유사한 인간 항체 단백질 서열에 대해 서열 상동성 연구를 수행한다. 이는 면역원성의 가능성을 감소시키기 위한 항체 성숙 전의 인간 점라인 서열에 대한 연구일 것이나, 임의의 인간 서열이 사용될 수 있다. 통상적으로, BLAST와 같은 프로그램이 가장 상동성에 대해 서열 데이터베이스를 연구하는데 사용될 수 있다. 인간 항체 서열의 데이터베이스는 NCBI(미국 국립생물정보센터)와 같은 다양한 정보원으로부터 발견될 수 있다.
예: 도 2의 1 내지 98번의 잔기로부터의 RbtVH 아미노산 서열은 인간 항체 점라인 데이터베이스에 대해 BLAST 처리된 것이다. 상부의 3개의 독특한 복귀된 서열이 도 2에 3-64-04, 3-66-04 및 3-53-02로 도시된다.
4. 일반적으로, 가장 상동성인 인간 점라인 가변 중쇄 서열이 인간화를 위한 기초로서 이후에 사용된다. 그러나, 당업자는 서열 갭 및 프레임워크 유사성을 포함하는 다른 요인에 기초하여 상동성 알고리듬에 의해 결정된 가장 상동성인 것이 아닌 또 다른 서열을 사용하는 것을 결정할 수 있다.
예: 도 2에서, 3-64-04가 가장 상동성인 인간 점라인 가변 중쇄 서열이었고, 이는 RbtVH의 인간화를 위한 기초로 사용된다.
5. 중쇄 인간화에 사용되는 인간 동족체에 대해 프레임워크 및 CDR 배열(FR1, FR2, FR3, CDR1 & CDR2)을 결정한다. 이는 당 분야에 기재된 바와 같은 전통적인 배치를 이용한다. 프레임워크 및 CDR 영역의 배치를 유지하면서 토끼 가변 중쇄 서열과 인간 동족체를 정렬시킨다.
예: 도 2에서, RbtVH 서열은 인간 상동성 서열 3-64-04와 정렬되고, 프레임워크 및 CDR 도메인이 표시된다.
6. 인간 상동성 중쇄 서열 CDR1 및 CDR2 영역을 토끼 서열로부터의 CDR1 및 CDR2 서열로 대체한다. 토끼 및 인간 CDR 서열 사이에 길이의 차이가 존재하는 경우, 전체 토끼 CDR 서열 및 이의 길이를 이용한다. 또한, 인간 중쇄 프레임워크 1 영역의 최종 3개의 아미노산을 토끼 중쇄 프레임워크 1의 최종 3개의 아미노산으로 대체하는 것이 필요할 수 있다. 항상 그러한 것은 아니지만 통상적으로, 토끼 중쇄 프레임워크 1에서, 상기 3개의 서열은 글리신 잔기에 선행하는 세린 잔기에 후속된다. 또한, 인간 중쇄 프레임워크 2 영역의 최종 아미노산을 토끼 중쇄 프레임워크 2의 최종 아미노산으로 대체하는 것이 필요할 수 있다. 항상 그러한 것은 아니지만 통상적으로, 이는 토끼 중쇄 프레임워크 2 내의 이소루신 잔기가 선행하는 글리신 잔기이다. 보다 작거나 큰 서열 교환이 수행되거나, 특정 잔기(들)이 변경되는 경우, 생성되는 인간화 항체의 특이성, 친화성 및/또는 면역원성이 변경되지 않는 것이 가능하며, 본원에 기재된 교환이 성공적으로 이용되었으나, 다른 교환이 허용될 수 있는 가능성은 배제하지 않는다. 예를 들어, 트립토판 아미노산 잔기가 통상적으로 토끼 중쇄 CDR2 영역의 종결점 4개 잔기 앞에 발생하는 반면, 인간 중쇄 CDR2에서 이러한 잔기는 통상적으로 세린 잔기이다. 이러한 위치에서 상기 토끼 트립토판 잔기를 인간 세린 잔기로 변경시키는 것은 인간화 항체의 친화성 또는 결합력에 대해 최소의 영향을 갖거나 영향을 미치지 않는 것으로 입증되었으므로, 인간화 서열 내의 토끼 서열 유래 아미노산 잔기의 함량을 추가로 최소화한다.
예: 도 2에서, 토끼 서열에서 트립토판(63번 위치)이고 인간 서열 내의 동일 위치에서 세린이며, 인간 세린 잔기로서 유지되는 박스 내의 잔기를 제외하고는, 인간 상동성 가변 중쇄의 CDR1 및 CDR2 아미노산 잔기가 RbtVH 토끼 항체 경쇄 서열로부터의 CDR1 및 CDR2 아미노산 서열로 대체된다. CDR1 및 CDR2 변경에 더하여, 프레임워크 1의 최종 3개의 아미노산(위치 28-30) 뿐만 아니라 프레임워크 2의 최종 잔기(위치 49)가 인간 대신 토끼 아미노산 잔기로 보유된다. 생성되는 인간화 서열은 1 내지 98번 잔기로부터의 VHh로 하기에 도시된다. 3-64-04 인간 서열과 상이한 단지 1개의 잔기에 밑줄이 있고, 따라서 토끼 유래 아미노산 잔기인 것을 유의하라. 이러한 예에서, 98개의 잔기 중 단지 15개가 인간 서열과 상이하다.
7. 단계 6에서 생성된 신규한 하이브리드 서열의 프레임워크 3 이후에 토끼 중쇄 항체 서열의 전체 CDR3를 부착시킨다. CDR3 서열은 다양한 길이일 수 있으나, 이는 통상적으로 5 내지 19개의 아미노산 잔기 길이이다. CDR3 영역 및 이후의 프레임워크 4 영역 시작점이 고전적으로 규정되고, 이는 당업자에 의해 확인가능하다. 통상적으로, 프레임워크 4의 시작점, 및 이에 따른 CDR3의 종결점 이후는 서열 WGXG...(여기서, X는 보통 Q 또는 P임)로 구성되나, 이러한 잔기에 일부 변화가 존재할 수 있다.
예: RbtVH의 CDR3(99-110번의 아미노산 잔기)는 VHh로 표시된 인간화 서열 내의 프레임워크 3의 종결점 이후에 첨가된다.
8. 통상적으로 가변 중쇄의 최종 11개의 아미노산 잔기이고, 상기 단계 7에 표시된 바와 같이 시작하고, 통상적으로 아미노산 서열 '...TVSS'로 종결되는 토끼 중쇄 프레임워크 4는 보통 점라인 서열로부터의 가장 근접한 인간 중쇄 프레임워크 4 동족체로 대체된다. 종종, 이러한 인간 중쇄 프레임워크 4는 서열 'WGQGTLVTVSS'이다. 가장 상동성이 아니거나 달리 상이한 다른 인간 중쇄 프레임워크 4 서열이 생성되는 인간화 항체의 특이성, 친화성 및/또는 면역원성에 영향을 주지 않고 사용될 수 있는 것이 가능하다. 이러한 인간 중쇄 프레임워크 4 서열이 상기 단계 7로부터의 CDR3 서열 바로 이후의 가변 중쇄 인간화 서열의 종결점에 첨가된다. 이는 이제 가변 중쇄 인간화 아미노산 서열의 종결점이 된다.
예: 도 2에서, RbtVH 토끼 중쇄 서열의 프레임워크 4(FR4)가 동종성 인간 중쇄 FR4 서열 상에 제시된다. 인간 FR4 서열이 상기 단계 7에서 첨가된 CDR3 영역의 종결점 바로 이후의 인간화 가변 중쇄 서열(VHh)에 첨가된다.
항체 및 이의 단편을 생성하는 방법
본 발명은 또한 본원에 기재된 항체 또는 이의 단편의 생성에 관한 것이다. 본원에 기재된 항체 또는 이의 단편에 해당하는 재조합 폴리펩티드는 메이팅 적격 효모의 다배수체, 바람직하게는 이배수체 또는 사배수체 균주로부터 분비된다. 한 예시적 구체예에서, 본 발명은 다배수체 효모를 포함하는 배양물을 이용하여 장기간, 즉 적어도 수일 내지 1주, 더욱 바람직하게는 적어도 1개월 또는 수개월, 더욱 더 바람직하게는 적어도 6개월 내지 1년 또는 이 이상 동안 분비 형태의 상기 재조합 폴리펩티드를 생성하는 방법에 관한 것이다. 이러한 다배수체 효모 배양물은 적어도 10-25 mg/리터의 폴리펩티드, 더욱 바람직하게는 적어도 50-250 mg/리터, 더욱 더 바람직하게는 적어도 500-1000 mg/리터, 가장 바람직하게는 리터당 1g 또는 이 이상으로 재조합 폴리펩티드(들)을 발현할 것이다.
본 발명의 한 구체예에서, 유전적으로 명료한 효모 일배수체 세포 쌍이 요망되는 이종중합체 단백질의 서브유닛을 포함하는 발현 벡터를 이용하여 형질전환된다. 1개의 일배수체 세포는 제 1 발현 벡터를 포함하고, 제 2 일배수체 세포는 제 2 발현 벡터를 포함한다. 또 다른 구체예에서, 이배수체 효모 세포는 재조합 폴리펩티드 중 하나 이상의 발현 및 분비를 위해 제공되는 하나 이상의 발현 벡터로 형질전환될 것이다. 또 다른 구체예에서, 단일 일배수체 세포는 하나 이상의 벡터로 형질전환될 수 있고, 융합 또는 메이팅 전략에 의한 다배수체 효모를 생성시키는데 사용될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 이배수체 효모 배양물은 요망되는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드들의 발현 및 분비를 위해 제공되는 하나 이상의 벡터로 형질전환될 수 있다. 이러한 벡터는, 예를 들어, 상동 재조합을 통하거나, Cre/Lox 또는 Flp/Frt와 같은 재조합효소(recombinase)를 이용하여 효모 세포의 유전체로 무작위적으로 통합되는 선형화된 플라스미드 또는 다른 선형 DNA 생성물과 같은 벡터를 포함할 수 있다. 임의로, 이종삼합체, 이종사합체 등의 합성을 위해, 추가 발현 벡터가 일배수체 또는 이배수체 세포로 도입될 수 있거나; 제 1 또는 제 2 발현 벡터가 추가 코딩 서열을 포함할 수 있다. 동일하지 않은 폴리펩티드의 발현 수준은 적절한 선택, 벡터 카피수, 프로모터 강도 및/또는 유도 등을 통해 개별적으로 교정될 수 있거나, 조정될 수 있다. 형질전환된 일배수체 세포는 유전적으로 교잡되거나 융합된다. 생성된 이배수체 또는 사배수체 균주는 본원에 기재된 충분히 어셈블리되고 생물학적으로 기능성인 단백질, 인간화 항체 또는 이의 단편을 생성하고 분비시키는데 이용된다.
단백질 생성을 위한 이배수체 또는 사배수체 세포의 용도는 예기치 않은 이점을 제공한다. 세포는 일배수체 세포의 성장에 유해할 수 있는 조건에서, 생성 목적, 즉, 증가(scaled up), 연장된 기간에 대해 성장될 수 있고, 상기 조건은 높은 세포 밀도; 최소 배지에서의 성장; 저온에서의 성장; 선택압의 부재하에서의 안정적인 성장을 포함할 수 있으며, 이는 시간이 지남에 따라 이종성 유전자 서열의 온전성의 유지 및 높은 수준의 발현의 유지를 제공할 수 있다. 이론으로 한정하고자 하는 바는 아니지만, 본 발명자들은 상기 이점이 적어도 부분적으로는 2개의 별개의 모 일배수체 균주로부터의 이배수체 균주의 생성으로부터 발생하는 것으로 이론을 세웠다. 상기 일배수체 균주는 다수의 작은 독립영양 돌연변이를 포함할 수 있고, 상기 돌연변이는 이배수체 또는 사배수체에서 상보적이 되어, 높은 선택 조건하에서의 성장 및 향상된 생성을 가능하게 한다.
형질전환된 메이팅 적격 일배수체 효모 세포는 요망되는 단백질의 서브유닛 페어링(pairing)을 가능하게 하는 유전적 방법을 제공한다. 일배수체 효모 균주는 하나의 폴리펩티드 사슬의 합성을 유도하는 제 1 벡터, 및 제 2의 동일하지 않은 폴리펩티드 사슬의 합성을 유도하는 제 2 벡터의 2개의 발현 벡터 각각으로 형질전환된다. 2개의 일배수체 균주는 메이팅되어, 최적화된 표적 단백질 생성물이 수득될 수 있는 이배수체 숙주를 제공한다.
임의로, 추가의 동일하지 않은 코딩 서열(들)이 제공된다. 이러한 서열은 추가 발현 벡터 상에 존재할 수 있거나, 제 1 또는 제 2 발현 벡터 상에 존재할 수 있다. 당 분야에 공지된 바와 같이, 다수의 코딩 서열이 개별적 프로모터로부터 독립적으로 발현되 수 있거나; ATG와 같은 시스트론(단백질 코딩 서열)의 개시 코돈으로의 직접적인 내부 리보솜 진입을 촉진시킴으로써 유전자의 cap-독립적 번역을 발생시키는 요소인 "내부 리보솜 진입 부위" 또는 "IRES"의 포함을 통해 협동적으로 발현될 수 있다. 효소에서의 IRES 요소의 기능은 문헌[Thompson et al. (2001) P.N.A.S. 98:12866-12868]에 기재되어 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 항체 서열은 IgA의 향상된 안정성을 제공하는 분비 J 사슬과 함께 생성된다(미국 특허 번호 제 5,959,177호; 및 제 5,202,422호 참조).
한 바람직한 구체예에서, 2개의 일배수체 효모 균주는 각각 영양요구 균주이고, 이는 일배수체 세포의 성장을 위해 배지의 보충을 필요로 한다. 영양요구 균주의 쌍은 상보적이어서, 이배수체 생성물은 일배수체 세포에 필요한 보충의 부재하에서 성장할 것이다. 아미노산(예를 들어, met, lys, his, arg 등), 누클레오시드(예를 들어, ura3, ade1, 등) 등에 대한 요구를 포함하는 다양한 상기 유전 마커가 효모에 대해 공지되어 있다. 아미노산 마커가 본 발명의 방법에 바람직할 수 있다. 대안적으로, 요망되는 벡터를 함유하는 이배수체 세포는 다른 수단, 예를 들어, 다른 마커, 예를 들어, 녹색 형광 단백질, 항생제 내성 유전자, 다양한 우성 선택 마커 등의 사용에 의해 선택될 수 있다.
2개의 형질전환된 일배수체 세포는 유전적으로 교잡될 수 있고, 상기 메이팅 사건으로부터 발생하는 이배수체 균주는 이들의 하이브리드 영양 요구 및/또는 항생제 내성 스펙트럼에 의해 선택된다. 대안적으로, 2개의 형질전환된 일배수체 균주의 집단은 스페로플라스트화되고, 융합되고, 이배수체 후손이 재생되고, 선택된다. 어느 한 방법에 의해, 이배수체 균주는 이의 모(parent)와 상이한 배지에서 성장하는 능력에 기초하여 확인되고 선택적으로 성장될 수 있다. 예를 들어, 이배수체 세포는 항생제를 포함할 수 있는 최소 배지에서 성장될 수 있다. 이배수체 합성 전략은 특정한 장점을 갖는다. 이배수체 균주는 기저 돌연변이에 대해 폭넓은 상보성을 통해 이종성 단백질의 향상된 수준을 생성시키는 잠재성을 갖고, 이는 재조합 단백질의 생성 및/또는 분비에 영향을 줄 수 있다. 또한, 일단 안정적인 균주가 수득되면, 상기 균주를 선택하기 위해 사용되는 임의의 항생제가 성장 배지에 계속적으로 존재해야 할 필요는 없다.
상기 언급된 바와 같이, 몇몇 구체예에서, 일배수체 효모는 단일 또는 다수의 벡터로 형질전환되고, 형질전환되지 않은 세포와 메이팅되거나 융합되어, 벡터 또는 벡터들을 함유하는 이배수체 세포가 생성될 수 있다. 다른 구체예에서, 이배수체 효모 세포는 이배수체 효모 세포에 의해 요망되는 이종성 폴리펩티드의 발현 및 분비를 제공하는 하나 이상의 벡터로 형절전환될 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 2개의 일배수체 균주가 폴리펩티드의 라이브러리, 예를 들어, 항체 중쇄 또는 경쇄의 라이브러리로 형질전환된다. 폴리펩티드를 합성하는 형질전환된 일배수체 세포는 상보성 일배수체 세포와 메이팅된다. 생성된 이배수체 세포는 기능성 단백질에 대해 스크리닝된다. 이배수체 세포는 기능 시험을 위한 폴리펩티드의 매우 많은 수의 조합물과 함께 발생시키는 신속하고, 편리하고, 저렴한 수단을 제공한다. 이러한 기술은 최적화된 서브유닛 합성 수준이 기능성 단백질 발현 및 분비에 중요한 이종이합체 단백질 생성의 발생에 특히 적용될 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 2개의 서브유닛의 발현 수준 비가 생성물 발생을 최대화시키기 위해 조절된다. 이종이합체 서브유닛 단백질 수준은 최종 생성물 발생에 영향을 주는 것으로 이전에 밝혀졌다(Simmons LC, J Immunol Methods. 2002 May 1;263(1-2):133-47). 발현 벡터 상에 존재하는 마커에 대한 선택에 의해 메이팅 단계 전에 조절이 달성될 수 있다. 벡터의 카피 수를 안정적으로 증가시킴으로써, 발현 수준이 증가될 수 있다. 몇몇 경우에, 폴리펩티드의 서브유닛 사이의 균형을 이룬 비율에 도달시키기 위해 다른 사슬에 비해 하나의 사슬의 수준을 증가시키는 것이 바람직할 수 있다. 제오신 내성 마커, G418 내성 마커 등과 같은 항생제 내성 마커가 상기 목적에 유용하고, 이는 제오신 또는 G418의 보다 높은 수준에 대해 내성인 형질전환체를 선택함으로써 균주 내에 다수의 통합된 카피의 발현 벡터를 함유하는 균주의 부화 수단을 제공한다. 서브유닛 유전자의 적절한 비, 예를 들어, 1:1; 1:2 등이 효과적인 단백질 생성에 중요할 수 있다. 동일한 프로모터가 둘 모두의 서브유닛을 전사시키는데 사용되는 경우에도, 많은 다른 요인이 발현되는 단백질의 최종 수준에 기여할 수 있고, 따라서 다른 것에 비해 하나의 엔코딩된 유전자의 카피수를 증가시키는데 유용할 수 있다. 대안적으로, 단일 카피 벡터 균주에 비해 보다 높은 수준의 폴리펩티드를 생성하는 이배수체 균주는 2개 모두가 발현 벡터의 다수의 카피를 갖는 2개의 일배수체 균주를 메이팅시킴으로써 생성된다.
숙주 세포는 상기 기재된 발현 벡터로 형질전환되고, 메이팅되어 이배수체 균주가 생성되며, 프로모터를 유도하고, 형질전환체를 선택하고, 요망되는 서열을 엔코딩하는 유전자를 증폭시키는데 적합하게 변형된 통상적인 영양 배지에서 배양된다. 효모의 성장에 적합한 다수의 최소 배지가 당 분야에 공지되어 있다. 이러한 배지 중 임의의 배지가 필요에 따라 염(예를 들어, 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘 및 인산염), 완충액(예를 들어, 인산염, HEPES), 누클레오시드(예를 들어, 아데노신 및 티미딘), 항생제, 미량 원소, 및 글루코오스 또는 등가 에너지원으로 보충될 수 있다. 당업자에게 공지된 임의의 다른 필요한 보충물이 또한 적절한 농도로 포함될 수 있다. 온도, pH 등과 같은 배양 조건은 발현을 위해 선택된 숙주 세포에서 이전에 사용된 조건이며, 이는 당업자에게 명백할 것이다.
분비되는 단백질은 배양 배지로부터 회수된다. 페닐 메틸 술포닐 플루오라이드(PMSF)와 같은 프로테아제 억제제가 정제 동안 단백질분해성 분해를 억제하는데 유용할 수 있고, 외래 오염물질의 성장을 방지하기 위해 항생제가 포함될 수 있다. 조성물은 당 분야에 공지된 방법을 이용하여 농축되고, 여과되고, 투석되고, 기타 작업이 수행될 수 있다.
본 발명의 이배수체 세포는 생성 목적을 위해 성장된다. 이러한 생성 목적은 바람직하게는 기형성(preformed) 아미노산 또는 다른 복합 생체분자가 결핍된 배지인 최소 배지, 예를 들어, 질소원으로 암모니아, 및 에너지 및 탄소원으로 글루코오스, 및 인산염, 칼슘 등의 공급원으로 염을 포함하는 배지에서의 성장을 포함한다. 바람직하게는, 이러한 생성 배지는 항생제, 아미노산, 퓨린, 피리미딘 등과 같은 선택적 작용제가 결핍되어 있다. 이배수체 세포는 높은 세포 밀도, 예를 들어, 약 50 g/L 이상, 더욱 보통으로 약 100 g/L 이상으로 성장될 수 있고; 상기 밀도는 약 300, 약 400 및 약 500 g/L 이상일 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 생성 목적을 위한 상기 세포의 성장은 낮은 온도에서 수행되며, 이러한 온도는 대수증식기 동안, 정지기 동안, 또는 둘 모두 동안에 낮아질 수 있다. 용어 "저온"은 약 15℃ 이상, 더욱 보통으로 약 17℃ 이상, 약 20℃일 수 있고, 이러한 온도는 보통 약 25℃이하, 더욱 보통으로 약 22℃ 이하이다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 저온은 보통 약 28℃ 이하이다. 성장 온도는 생성 배양물에서의 전장의 분비된 단백질의 생성에 영향을 줄 수 있고, 배양 성장 온도를 증가시키는 것은 무손상 생성물 수율을 강하게 향상시킨다. 감소된 온도는 세포 프로테아제 분해의 감소와 함께, 숙주에 의해 이용되는 폴딩 및 번역후 가공 경로를 통해 표적 생성물을 발생시키는 세포내 트래피킹(trafficking)을 돕는 것으로 보인다.
본 발명의 방법은 분비되는 활성 단백질, 바람직하게는 포유동물 단백질의 발현을 제공한다. 한 구체예에서, 본원에서 사용되는 분비되는 "활성 항체"는 이의 인지체(cognate) 항원에 정확하게 결합하는, 2개 이상의 적절하게 쌍을 이룬 사슬의 정확하게 폴딩된 중합체를 의미한다. 활성 단백질의 발현 수준은 보통 약 10-50 mg/리터 이상의 배양물, 더욱 보통으로는 약 100 mg/리터 이상, 바람직하게는 약 500 mg/리터 이상, 1000 mg/리터 이상의 배양물이다.
본 발명의 방법은 생성 동안 숙주 및 이종성 코딩 서열의 증가된 안정성을 제공할 수 있다. 안정성은, 예를 들어, 고수준의 발현 시간의 유지에 의해 입증되며, 발현의 시작 수준은 약 20회의 계대, 50회의 계대, 100회의 계대 또는 이 이상에 걸쳐 약 20% 이하, 보통 10% 이하가 감소되고, 이러한 시작 수준은 약 5% 이하가 감소될 수 있다.
균주 안정성은 또한 시간에 따른 이종성 유전자 서열 온전성의 유지를 제공하고, 여기서 활성 코딩 서열 및 필수 전사 조절 요소의 서열이 약 20회의 계대, 50회의 계대, 100회의 계대 또는 이 이상에 걸쳐 약 99% 이상의 이배수체 세포, 보통으로 약 99.9% 이상의 이배수체 세포, 바람직하게는 약 99.99% 이상의 이배수체 세포로 유지된다. 바람직하게는, 실질적으로 모든 이배수체 세포가 활성 코딩 서열 및 필수 전사 조절 요소의 서열을 유지한다.
항체를 생성하는 다른 방법이 당업자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 키메라 항체를 생성하는 방법이 현재 당 분야에 널리 공지되어 있다(예를 들어, U.S. Patent No. 4,816,567 to Cabilly et al.; Morrison et al., P.N.A.S. USA, 81:8651-55 (1984); Neuberger, M.S. et al., Nature, 314:268-270 (1985); Boulianne, G.L. et al., Nature, 312:643-46 (1984) 참조, 이들 각각의 전체내용은 참조로서 본원에 포함됨).
마찬가지로, 인간화 항체를 생성하는 다른 방법이 현재 당 분야에 널리 공지되어 있다(예를 들어, U.S. Patent Nos. 5,530,101, 5,585,089, 5,693,762, 및 6,180,370 to Queen et al; U.S. Patent Nos. 5,225,539 및 6,548,640 to Winter; U.S. Patent Nos. 6,054,297, 6,407,213 및 6,639,055 to Carter et al; U.S. Patent No. 6,632,927 to Adair; Jones, P.T. et al, Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann, L., et al, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen, M, et al, Science, 239:1534-36 (1988) 참조, 이들 각각의 전체내용은 참조로서 본원에 포함됨).
IL-6 결합 특이성을 갖는 본 발명의 항체 폴리펩티드는 또한 당업자에게 널리 공지된 통상적인 기술을 이용하여, 오페론 및, 항체 특이성에 필요한 CDR을 엔코딩하는 DNA 서열이 비인간 세포 공급원, 바람직하게는 토끼 B 세포 공급원으로부터 유래되는 반면 항체 사슬의 나머지 부분을 엔코딩하는 DNA 서열이 인간 세포 공급원으로부터 유래되는, 항체 중쇄를 엔코딩하는 DNA 서열을 함유하는 발현 벡터를 제작함으로써 생성될 수 있다.
제 2의 발현 벡터가 당업자에게 널리 공지된 동일한 통상적인 수단을 이용하여 생성되고, 상기 발현 벡터는 오페론, 및 항체 특이성에 필요한 CDR을 엔코딩하는 DNA 서열이 비인간 세포 공급원, 바람직하게는 토끼 B 세포 공급원으로부터 유래되는 반면 항체 사슬의 나머지 부분을 엔코딩하는 DNA 서열이 인간 세포 공급원으로부터 유래되는, 항체 경쇄를 엔코딩하는 DNA 서열을 함유한다.
발현 벡터는 트랜스펙션된 숙주 세포를 생성하기 위해 당업자에게 널리 공지된 통상적인 기술에 의해 숙주 세포에 트랜스펙션되고, 상기 트랜스펙션된 숙주 세포는 상기 항체 폴리펩티드를 생성시키기 위해 당업자에게 널리 공지된 통상적인 기술에 의해 배양된다.
숙주 세포는 오페론 및 경쇄 유래 폴리펩티드를 엔코딩하는 DNA를 함유하는 제 1 발현 벡터, 및 오페론 및 중쇄 유래 폴리펩티드를 엔코딩하는 DNA를 함유하는 제 2 벡터인 상기 기재된 2개의 발현 벡터로 공동 트랜스펙션될 수 있다. 2개의 벡터는 다양한 선택 마커를 함유하나, 바람직하게는 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 실질적으로 동등한 발현을 달성한다. 대안적으로, 단일 벡터가 사용될 수 있고, 상기 벡터는 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 둘 모두를 엔코딩하는 DNA를 포함한다. 중쇄 및 경쇄의 코딩 서열은 cDNA를 포함할 수 있다.
항체 폴리펩티드를 발현하는데 사용되는 숙주 세포는 박테리아 세포, 예를 들어, E. 콜리(E. coli) 또는 진핵생물 세포일 수 있다. 본 발명의 한 특정한 바람직한 구체예에서, 상기 목적을 위한 널리 규정된 유형의 포유동물 세포, 예를 들어, 골수종 세포 또는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주가 사용될 수 있다.
벡터가 제작될 수 있는 일반적인 방법인, 숙주 세포를 생성하는데 필요한 트랜스펙션 방법 및 상기 숙주 세포로부터 항체 폴리펩티드를 생성하기 위해 필요한 배양 방법 모두는 통상적인 기술을 포함한다. 바람직하게는 항체를 생성하는데 사용되는 세포주는 포유동물 세포주이나, 임의의 다른 적합한 세포주, 예를 들어, 박테리아 세포주, 예를 들어, E. 콜리 유래 박테리아 균주, 또는 효모 세포주가 대안적으로 사용될 수 있다.
유사하게, 생성된 후, 항체 폴리펩티드는 당 분야의 표준 절차, 예를 들어, 교차 흐름 여과(cross-flow filtration), 황산암모늄 침전, 친화성 컬럼 크로마토그래피 등에 따라 정제될 수 있다.
본원에 기재된 항체 폴리펩티드는 또한 본 발명의 항체 폴리펩티드와 동일한 치료 적용에 유용한 펩티드 또는 비-펩티드 모방체(mimetics)의 디자인 및 합성에 사용될 수 있다. 예를 들어, 전체 내용이 참조로서 본원에 포함되는 문헌[Saragobi et al, Science, 253:792-795 (1991)]을 참조하라.
스크리닝 검정
본 발명은 또한 IL-6 관련 질병 또는 장애의 증상을 나타내는 환자에서 IL-6과 관련된 질병 또는 장애의 확인을 돕도록 디자인된 스크리닝 검정을 포함한다.
본 발명의 한 구체예에서, 본 발명의 항-IL-6 항체 또는 이의 IL-6 결합 단편이 IL-6과 관련된 질병 또는 장애의 증상을 나타내는 환자로부터 수득된 생물학적 샘플에서 IL-6의 존재를 검출하는데 사용된다. IL-6의 존재, 또는 동등한 생물학적 샘플에서의 질병전 수준과 비교하는 경우의 IL-6의 상승된 수준이 IL-6과 관련된 질병 또는 장애를 진단하는데 이로울 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예는 번역후 변형된 항-IL-6 항체 또는 이의 결합 단편을 이용하여 환자로부터의 생물학적 샘플 내에서의 IL-6 발현의 수준을 검정하는 것을 포함하는, 본원에서 확인된 IL-6 관련 질병 또는 장애의 증상을 나타내는 환자에서 IL-6과 관련된 질병 또는 장애의 진단을 돕는 진단 또는 스크리닝 검정을 제공한다. 항-IL-6 항체 또는 이의 결합 단편은 본 명세서에 이전에 기술된 것과 같은 검출가능한 부분을 포함하도록 번역후 변형될 수 있다.
생물학적 샘플 내의 IL-6 수준은 본원에 기재된 변형된 항-IL-6 항체 또는 이의 결합 단편을 이용하고, IL-6의 표준 수준(예를 들어, 정상적인 생물학적 샘플 내의 수준)에 대한 생물학적 샘플 내의 IL-6의 수준을 비교하여 결정된다. 숙련된 임상의는 일부 변이성이 정상적인 생물학적 샘플 사이에 존재할 수 있고, 결과 평가시에 고려해야 하는 것을 이해할 것이다.
상기 인용된 검정은 또한 환자의 IL-6 수준이, 예를 들어, 치료 요법을 이용하여 변화되는지의 여부를 확인하기 위해 질병 또는 장애를 모니터하는데 유용할 수 있고, 여기서 IL-6 관련 질병 또는 장애를 갖는 것으로 생각되는 환자로부터의 생물학적 샘플에서 수득된 IL-6의 수준이 동일 환자로부터의 이전의 생물학적 샘플 내의 IL-6의 수준과 비교된다.
본 발명은 또한 진단적 유효량의 진단 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, IL-6을 발현하는 세포의 존재를 검출하는 생체내 화상진찰(imaging) 방법에 관한 것이다. 상기 생체내 화상진찰은, 예를 들어, IL-6 발현 종양 또는 전이, 및 IL-6 발현 염증 부위의 검출 및 화상진찰에 유용하고, 효과적인 암 또는 관절염 치료 프로토콜의 디자인을 위한 계획 요법의 일부로 사용될 수 있다. 치료 프로토콜은, 예를 들어, 방사선요법, 화학요법, 사이토카인 요법, 유전자요법, 및 항체요법, 뿐만 아니라 항-IL-6 항체 또는 이의 단편 요법 중 하나를 포함할 수 있다.
숙련된 임상의는 생물학적 샘플이 혈청, 혈장, 뇨, 타액, 점액, 흉수(pleural fluid), 윤활액 및 척수액을 포함하나, 이에 제한되지 않음을 이해할 것이다.
IL -6과 관련된 질병 및 장애를 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는 방법
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 IL-6과 관련된 질병 및 장애를 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 본원에 기재된 항IL-6 항체 또는 이의 단편은 또한 하기에 더욱 상세하게 기재되는 약학적 조성물의 형태로, IL-6과 관련된 질병 및 장애의 치료가 필요한 환자에 치료적 유효량으로 투여될 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 피로와 관련된 질병 및 장애를 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 피로와 관련된 질병 및 장애는 전신 피로, 운동 유발 피로, 암 관련 피로, 염증 질병 관련 피로 및 만성 피로 증후군을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 문헌[Esper DH, et al, The cancer cachexia syndrome: a review of metabolic and clinical manifestations, Nutr Clin Pract., 2005 Aug;20 (4):369-76; Vgontzas AN, et al, IL-6 and its circadian secretion in humans, Neuroimmunomodulation, 2005;12(3):131-40; Robson-Ansley, PJ, et al, Acute interleukin-6 administration impairs athletic performance in healthy, trained male runners, Can J Appl Physiol., 2004 Aug;29(4):411-8; Shephard RJ., Cytokine responses to physical activity, with particular reference to IL-6: sources, actions, and clinical implications, Crit Rev Immunol., 2002;22(3): 165-82; Arnold, MC, et al, Using an interleukin-6 challenge to evaluate neuropsychological performance in chronic fatigue syndrome, Psychol Med., 2002 Aug;32(6): 1075-89; Kurzrock R., The role of cytokines in cancer-related fatigue, Cancer, 2001 Sep 15;92(6 Suppl): 1684-8; Nishimoto N, et al, Improvement in Castleman's disease by humanized anti-interleukin-6 receptor antibody therapy, Blood, 2000 Jan 1; 95 (1):56-61; Vgontzas AN, et al, Circadian interleukin-6 secretion and quantity and depth of sleep, J Clin Endocrinol Metab., 1999 Aug;84(8):2603-7; and Spath-Schwalbe E, et al, Acute effects of recombinant human interleukin 6 on endocrine and central nervous sleep functions in healthy men, J Clin Endocrinol Metab., 1998 May;83(5): 1573-9; 이들 각각의 전체내용은 참조로서 본원에 포함됨]을 참조하라.
본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 악액질을 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 악액질과 관련된 질병 및 장애는 암 관련 악액질, 심장 관련 악액질, 호흡 관련 악액질, 신장 관련 악액질 및 연령 관련 악액질을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 문헌[Barton, BE., Interleukin-6 and new strategies for the treatment of cancer, hyperproliferative diseases and paraneoplastic syndromes, Expert Opin Ther Targets, 2005 Aug;9(4):737-52; Zaki MH, et al, CNTO 328, a monoclonal antibody to IL-6, inhibits human tumor-induced cachexia in nude mice, Int J Cancer, 2004 Sep 10;111(4):592-5; Trikha M, et al, Targeted anti- interleukin-6 monoclonal antibody therapy for cancer: a review of the rationale and clinical evidence, Clin Cancer Res., 2003 Oct 15;9(13):4653-65; Lelli G, et al, Treatment of the cancer anorexia-cachexia syndrome: a critical reappraisal, J Chemother., 2003 Jun;15(3):220-5; Argiles JM, et al, Cytokines in the pathogenesis of cancer cachexia, Curr Opin Clin Nutr Metab Care, 2003 Jul;6(4):401-6; Barton BE., IL-6-like cytokines and cancer cachexia: consequences of chronic inflammation, Immunol Res., 2001;23(1):41-58; Yamashita JI, et al, Medroxyprogesterone acetate and cancer cachexia: interleukin-6 involvement, Breast Cancer, 2000;7(2): 130-5; Yeh SS, et al, Geriatric cachexia: the role of cytokines, Am J Clin Nutr., 1999 Aug;70(2): 183-97; Strassmann G, et al, Inhibition of experimental cancer cachexia by anti-cytokine and anti-cytokine-receptor therapy, Cytokines Mol Ther., 1995 Jun;1(2):107-13; Fujita J, et al, Anti-interleukin-6 receptor antibody prevents muscle atrophy in colon-26 adenocarcinoma-bearing mice with modulation of lysosomal and ATP-ubiquitin-dependent proteolytic pathways, Int J Cancer, 1996 Nov 27;68(5):637-43; Tsujinaka T, et al, Interleukin 6 receptor antibody inhibits muscle atrophy and modulates proteolytic systems in interleukin 6 transgenic mice, J Clin Invest., 1996 Jan 1;97(1): 244-9; Emilie D, et al, Administration of an anti-interleukin-6 monoclonal antibody to patients with acquired immunodeficiency syndrome and lymphoma: effect on lymphoma growth and on B clinical Symptoms, Blood, 1994 Oct 15;84 (8):2472-9; and Strassmann G, et al, Evidence for the involvement of interleukin 6 in experimental cancer cachexia, J Clin Invest., 1992 May;89(5): 1681-4; 이들 각각의 전체내용은 참조로서 본원에 포함됨]을 참조하라.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 자가면역 질병 또는 장애를 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 자가면역과 관련된 질병 및 장애는 류머티스 관절염, 전신홍반루푸스(SLE), 전신 소아 특발성 관절염, 건선, 건선성 관절병증, 강직성 척추염, 염증성 장질병(IBD), 류머티스성 다발성 근육통, 거세포 동맥염, 자가면역 혈관염, 이식편대숙주병(GVHD), 쇼그렌 증후군, 성인형 스틸병(adult onset Still's disease)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 본원에 기재된 인간화 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 류머티스 관절염 및 전신 소아 특발성 관절염을 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 예를 들어, 문헌[Nishimoto N., Clinical studies in patients with Castleman's disease, Crohn's disease, and rheumatoid arthritis in Japan, Clin Rev Allergy Immunol., 2005 Jun;28(3):221-30; Nishimoto N, et al, Treatment of rheumatoid arthritis with humanized anti-interleukin-6 receptor antibody: a multicenter, double-blind, placebo-controlled trial, Arthritis Rheum., 2004 Jun;50(6): 1761-9; Choy E., Interleukin 6 receptor as a target for the treatment of rheumatoid arthritis, Ann Rheum Dis., 2003 Nov;62 Suppl 2:ii68-9; Nishimoto N, et al, Toxicity, pharmacokinetics, and dose-finding study of repetitive treatment with the humanized anti-interleukin 6 receptor antibody MRA in rheumatoid arthritis. 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본 발명의 또 다른 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 골격계와 관련된 질병 또는 장애를 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 골격계와 관련된 질병 및 장애는 골관절염, 골다공증 및 골의 파제트병을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 본원에 기재된 인간화 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 골관절염을 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 예를 들어, 문헌[Malemud CJ., Cytokines as therapeutic targets for osteoarthritis, BioDrugs, 2004;18(1):23-35; Westacott CI, et al, Cytokines in osteoarthritis: mediators or markers of joint destruction?, Semin Arthritis Rheum., 1996 Feb;25(4):254-72; Sugiyama T., Involvement of interleukin-6 and prostaglandin E2 in particular osteoporosis of postmenopausal women with rheumatoid arthritis, J Bone Miner Metab., 2001; 19(2): 89-96; Abrahamsen B, et al, Cytokines and bone loss in a 5-year longitudinal study - hormone replacement therapy suppresses serum soluble interleukin-6 receptor and increases interleukin-1-receptor antagonist: the Danish Osteoporosis Prevention Study, J Bone Miner Res., 2000 Aug;15(8):1545-54; Straub RH, et al, Hormone replacement therapy and interrelation between serum interleukin-6 and body mass index in postmenopausal women: a population-based study, J Clin Endocrinol Metab., 2000 Mar;85(3):1340-4; Manolagas SC, The role of IL-6 type cytokines and their receptors in bone, Ann N Y Acad Sci., 1998 May 1;840: 194-204; Ershler WB, et al, Immunologic aspects of osteoporosis, Dev Comp Immunol., 1997 Nov-Dec;21(6):487-99; Jilka RL, et al, Increased osteoclast development after estrogen loss: mediation by interleukin-6, Science, 1992 Jul 3;257(5066):88-91; Kallen KJ, et al, New developments in IL-6 dependent biology and therapy: where do we stand and what are the options?, Expert Opin Investig Drugs, 1999 Sep;8(9): 1327-49; Neale SD, et al, The influence of serum cytokines and growth factors on osteoclast formation in Paget's disease, QJM, 2002 Apr;95 (4):233 - 40; Roodman GD, Osteoclast function In Paget's disease and multiple myeloma, Bone, 1995 Aug;17(2 Suppl):57S-61S; Hoyland JA, et al, Interleukin-6, IL-6 receptor, and IL-6 nuclear factor gene expression in Paget's disease, J Bone Miner Res., 1994 Jan;9(1):75-80; and Roodman GD, et al, Interleukin 6. A potential autocrine/paracrine factor in Paget's disease of bone, J Clin Invest., 1992 Jan;89(1):46-52; 이들 각각의 전체내용은 참조로서 본원에 포함됨]을 참조하라.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 암과 관련된 질병 및 장애를 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 암과 관련된 질병 및 장애는 다발성 골수종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 전립선암, 백혈병, 신장 세포암, 다중심 캐슬만씨 병, 난소암, 암 화학요법에서의 약물 내성 및 암 화학요법 독성을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 문헌[Hirata T, et al, Humanized anti-interleukin-6 receptor monoclonal antibody induced apoptosis of fresh and cloned human myeloma cells in vitro, Leuk Res., 2003 Apr;27(4):343-9, Bataille R, et al, Biologic effects of anti-interleukin-6 murine monoclonal antibody in advanced multiple myeloma, Blood, 1995 Jul 15;86 (2):685-91; Goto H, et al, Mouse anti-human interleukin-6 receptor monoclonal antibody inhibits proliferation of fresh human myeloma cells in vitro, Jpn J Cancer Res., 1994 Sep;85(9):958-65; Klein B, et al, Murine anti-interleukin-6 monoclonal antibody therapy for a patient with plasma cell leukemia, Blood, 1991 Sep 1;78(5):1198-204; Mauray S, et al, Epstein-Barr virus-dependent lymphoproliferative disease: critical role of IL-6, Eur J Immunol., 2000 Jul;30(7):2065-73; 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이들 각각의 전체내용은 참조로서 본원에 포함됨]을 참조하라.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 허혈성 심질환, 죽상경화증, 비만, 당뇨, 천식, 다발성 경화증, 알츠하이머병, 뇌혈관질환, 열, 급성기 반응, 알레르기, 빈혈, 염증의 빈혈(만성 질병의 빈혈), 고혈압, 우울증, 만성 질환과 관련된 우울증, 혈전증, 혈소판증가증, 급성 심부전, 대사 증후군, 유산, 비만, 만성 전립선염, 사구체신염, 골반 염증성 질환, 재관류 손상, 및 이식 거부를 치료하거나 예방하고, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 예를 들어, 문헌[Tzoulaki I, et al, C-reactive protein, interleukin-6, and soluble adhesion molecules as predictors of progressive peripheral atherosclerosis in the general population: Edinburgh Artery Study, Circulation, 2005 Aug 16;112(7):976-83, Epub 2005 Aug 8; Rattazzi M, et al, C-reactive protein and interleukin-6 in vascular disease: culprits or passive bystanders?, J Hypertens., 2003 Oct;21(10): 1787-803; Ito T, et al, HMG-CoA reductase inhibitors reduce interleukin-6 synthesis in human vascular smooth muscle cells, Cardiovasc Drugs Ther., 2002 Mar; 16(2):121-6; Stenvinkel P, et al, Mortality, malnutrition and atherosclerosis in ESRD: what is the role of interleukin-6?, Kidney hit Suppl., 2002 May;(80):103-8; Yudkin JS, et al, Inflammation, obesity, stress and coronary heart disease: is interleukin-6 the link?, Atherosclerosis, 2000 Feb;148(2):209-14; Huber SA, et al, Interleukin-6 exacerbates early atherosclerosis in mice, Arterioscler Thromb Vase Biol., 1999 Oct;19(10):2364-7; Kado S, et al, Circulating levels of interleukin-6, its soluble receptor and interleukin-6/interleukin-6 receptor complexes in patients with type 2 diabetes mellitus, Acta Diabetol.,1999 Jun;36(1-2):67-72; Sukovich DA, et al, Expression of interleukin-6 in atherosclerotic lesions of male ApoE-knockout mice: inhibition by 17beta-estradiol, Arterioscler Thromb Vase Biol.,1998 Sept;8(9):1498-505; Klover PJ, et al, Interleukin-6 depletion selectively improves hepatic insulin action in obesity, Endocrinology, 2005 Aug;146(8):3417-27, Epub 2005 Apr 21; Lee YH, et al, The evolving role of inflammation in obesity and the metabolic syndrome, Curr Diab Rep., 2005 Feb;5(1):70-5; Diamant M, et al, The association between abdominal visceral fat and carotid stiffness is mediated by circulating inflammatory markers in uncomplicated type 2 diabetes, J Clin Endocrinol Metab., 2005 Mar;90(3): 1495-501, Epub 2004 Dec 21; 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Smith CJ, et al, Peak plasma interleukin-6 and other peripheral markers of inflammation in the first week of ischaemic stroke correlate with brain infarct volume, stroke severity and long-term outcome, BMC Neurol., 2004 Jan 15;4:2; Vila N, et al, Proinflammatory cytokines and early neurological worsening in ischemic stroke, Stroke, 2000 Oct;31(10):2325-9; and Tarkowski E, et al, Early intrathecal production of interleukin-6 predicts the size of brain lesion in stroke, Stroke, 1995 Aug;26(8): 1393-8; 이들 각각의 전체내용은 참조로서 본원에 포함됨]을 참조하다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 사이토카인 발작(cytokine storm)과 관련된 질병 및 장애를 치료하거나 예방하거나, 이의 증상을 개선시키거나 감소시키는데 유용하다. 사이토카인 발작과 관련된 질병 및 장애는 이식편대숙주병(GVHD), 조류 인플루엔자, 천연두, 범유행성 인플루엔자, 성인성 호흡곤란증후군(ARDS), 중증급성호흡증후군(SARS), 패혈증 및 전신 염증 반응 증후군(SIRS)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 예를 들어, 문헌[Cecil, R. L., Goldman, L., & Bennett, J. C. (2000). Cecil textbook of medicine. Philadelphia: W.B. Saunders; Ferrara JL, et al., Cytokine storm of graft-versus-host disease: a critical effector role for interleukin-1, Transplant Proc. 1993 Feb;25(1 Pt 2): 1216-7; Osterholm MT, Preparing for the Next Pandemic, N Engl J Med. 2005 May 5;352(18): 1839-42; Huang KJ, et al., An interferon-gamma-related cytokine storm in SARS patients, J Med Virol. 2005 Feb;75(2):185-94; and Cheung CY, et al., Induction of proinflammatory cytokines in human macrophages by influenza A (H5N1) viruses: a mechanism for the unusual severity of human disease? Lancet. 2002 Dec 7;360(9348):1831-7]을 참조하라.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 단편은 각성 보조제로 유용하다.
투여
본 발명의 한 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 IL-6 결합 단편 뿐만 아니라 상기 항체 단편의 조합물은 수용 피검체의 체중에 대해 약 0.1 내지 20 mg/kg, 예를 들어, 약 0.4 mg/kg, 약 0.8 mg/kg, 약 1.6 mg/kg, 또는 약 4 mg/kg의 농도로 피검체에 투여된다. 본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 IL-6 결합 단편 뿐만 아니라 상기 항체 단편의 조합물은 수용 피검체의 체중에 대해 약 0.4 mg/kg의 농도로 피검체에 투여된다. 본 발명의 한 바람직한 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 IL-6 결합 단편 뿐만 아니라 상기 항체 단편의 조합물은 26주 이하에 1회, 예를 들어, 16주 이하에 1회, 8주 이하에 1회, 또는 4주 이하에 1회의 빈도로 수용 피검체에 투여된다.
유효 투여량은 수용 피검체의 특성, 예를 들어, 연령, 성별, 임신 상태, 신체질량지수, 탈지방체중, 조성물이 제공되는 질환 또는 질환들, 조성물의 대사 또는 내성에 영향을 미칠 수 있는 수용 피검체의 다른 건강 상태, 수용 피검체 내의 IL-6의 수준, 및 조성물에 대한 내성(예를 들어, 조성물에 대한 항체를 발생시키는 환자로부터 발생됨)에 좌우될 수 있는 것이 이해된다. 당업자는 통상적인 실험을 통해, 예를 들어, 본원의 명세서 및 문헌[Goodman, L. S., Gilman, A., Brunton, L. L., Lazo, J. S., & Parker, K. L. (2006). Goodman & Gilman's the pharmacological basis of therapeutics. New York: McGraw-Hill; Howland, R. D., Mycek, M. J., Harvey, R. A., Champe, P. C, & Mycek, M. J. (2006). Pharmacology. Lippincott's illustrated reviews. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins; and Golan, D. E. (2008). Principles of pharmacology: the pathophysiologic basis of drug therapy. Philadelphia, Pa., [etc.]: Lippincott Williams & Wilkins]의 교시내용에 의해 안내되는 통상적인 실험을 통해 유효 투여량 및 투여 빈도를 결정할 수 있을 것이다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 IL-6 결합 단편 뿐만 아니라 상기 항체 단편의 조합물은 약학적 제형으로 피검체에 투여된다.
"약제 조성물"은 포유동물로의 투여에 적합한 화학적 또는 생물학적 조성물을 의미한다. 이러한 조성물은 협측, 피내(epicutaneous), 경막외, 흡입, 동맥내, 심장내, 뇌혈관내, 피내(intradermal), 근내, 비내, 안구내, 복막내, 척추내, 경막내, 정맥내, 경구, 비경구, 관장제 또는 좌약을 통한 직장내, 피하(subcutaneous), 피하(subdermal), 설하, 경피 및 경점막을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 경로 중 하나 이상을 통한 투여를 위해 특이적으로 제형화될 수 있다. 또한, 투여는 주사, 분말, 액체, 겔, 점적 또는 다른 투여 수단에 의해 발생할 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 본원에 기재된 항-IL-6 항체 또는 이의 IL-6 결합 단편 뿐만 아니라 상기 항체 단편의 조합물은 하나 이상의 활성제와 조합하여 임의로 투여될 수 있다. 이러한 활성제는 진통제, 해열제, 항염증제, 항생제, 항바이러스제 및 항사이토카인 작용제를 포함한다. 활성제는 TNF-α, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-α, IFN-γ, BAFF, CXCL13, IP-10, VEGF, EPO, EGF, HRG, 간세포 성장 인자(HGF), 헵시딘(Hepcidin), 예를 들어, 상기중 어느 것에 대해 반응성인 항체, 및 상기의 수용체 중 어느 것에 대해 반응성인 항체의 효능제, 길항제 및 조정자를 포함한다. 활성제는 또한 2-아릴프로피온산, 아세클로페낙(Aceclofenac), 아세메타신(Acemetacin), 아세틸살리실산(아스피린), 알클로페낙(Alclofenac), 알미노프로펜(Alminoprofen), 아목시프린(Amoxiprin), 암피론(Ampyrone), 아릴알카노산(Arylalkanoic acid), 아자프로파존(Azapropazone), 베노릴레이트(Benorylate)/베노릴레이트(Benorilate), 베녹사프로펜(Benoxaprofen), 브롬페낙(Bromfenac), 카프로펜(Carprofen), 셀레콕시브(Celecoxib), 콜린 마그네슘 살리실레이트, 클로페존(Clofezone), COX-2 억제제, 덱시부프로펜(Dexibuprofen), 덱스케토프로펜(Dexketoprofen), 디클로페낙(Diclofenac), 디플루니살(Diflunisal), 드록시캄(Droxicam), 에테자미드(Ethenzamide), 에토돌락(Etodolac), 에토리콕시브(Etoricoxib), 파이슬라민(Faislamine), 페남산(fenamic acid), 펜부펜(Fenbufen), 페노프로펜(Fenoprofen), 플루페남산(Flufenamic acid), 플루녹사프로펜(Flunoxaprofen), 플루르비프로펜(Flurbiprofen), 이부프로펜(Ibuprofen), 이부프록삼(Ibuproxam), 인도메타신(Indometacin), 인도프로펜(Indoprofen), 케부존(Kebuzone), 케토프로펜(Ketoprofen), 케토롤락(Ketorolac), 로르녹시캄(Lornoxicam), 록소프로펜(Loxoprofen), 루미라콕시브(Lumiracoxib), 마그네슘 살리실레이트, 메클로페남산(Meclofenamic acid), 메페남산(Mefenamic acid), 멜록시캄(Meloxicam), 메타미졸(Metamizole), 메틸 살리실레이트(Methyl salicylate), 모페부타존(Mofebutazone), 나부메톤(Nabumetone), 나프록센(Naproxen), N-아릴안트라닐산, 옥사메타신(Oxametacin), 옥사프로진(Oxaprozin), 옥시캄스(Oxicams), 옥시펜부타존(Oxyphenbutazone), 파레콕시브(Parecoxib), 페나존(Phenazone), 페닐부타존(Phenylbutazone), 페닐부타존(Phenylbutazone), 피록시캄(Piroxicam), 피르프로펜(Pirprofen), 프로펜스(profens), 프로글루메타신(Proglumetacin), 피라졸리딘 유도체, 로페콕시브(Rofecoxib), 살리실 살리실레이트, 살리실아미드, 살리실레이트, 술핀피라존(Sulfinpyrazone), 술린닥(Sulindac), 수프로펜(Suprofen), 테녹시캄(Tenoxicam), 티아프로펜산(Tiaprofenic acid), 톨페남산(Tolfenamic acid), 톨메틴(Tolmetin), 및 발데콕시브(Valdecoxib)를 포함한다. 항생제는 아미카신(Amikacin), 아미노글리코시드, 아목시실린(Amoxicillin), 앰피실린, 안사마이신(Ansamycins), 아르스페나민(Arsphenamine), 아지트로마이신(Azithromycin), 아즐로실린(Azlocillin), 아즈트레오남(Aztreonam), 박시트라신(Bacitracin), 카르바세펨(Carbacephem), 카르바페넴(Carbapenems), 카르베니실린(Carbenicillin), 세파클로르(Cefaclor), 세파드록실(Cefadroxil), 세팔렉신(Cefalexin), 세팔로틴(Cefalothin), 세팔로틴(Cefalotin), 세파만돌(Cefamandole), 세파졸린(Cefazolin), 세프디니르(Cefdinir), 세프디토렌(Cefditoren), 세페핌(Cefepime), 세픽심(Cefixime), 세포페라존(Cefoperazone), 세포탁심(Cefotaxime), 세폭시틴(Cefoxitin), 세프포독심(Cefpodoxime), 세프프로질(Cefprozil), 세프타지딤(Ceftazidime), 세프티부텐(Ceftibuten), 세프티족심(Ceftizoxime), 세프토비프롤(Ceftobiprole), 세프트리아존(Ceftriaxone), 세푸록심(Cefuroxime), 세팔로스포린(Cephalosporins), 클로람페니콜(Chloramphenicol), 실라스타틴(Cilastatin), 시프로플록사신(Ciprofloxacin), 클라리트로마이신(Clarithromycin), 클린다마이신(Clindamycin), 클록사실린(Cloxacillin), 콜리스틴(Colistin), 코-트리목사졸(Co-trimoxazole), 달포프리스틴(Dalfopristin), 데메클로시클린(Demeclocycline), 디클록사실린(Dicloxacillin), 디리트로마이신(Dirithromycin), 도리페넴(Doripenem), 독시시클린(Doxycycline), 에녹사신(Enoxacin), 에르타페넴(Ertapenem), 에리트로마이신(Erythromycin), 에탐부톨(Ethambutol), 플루클록사실린(Flucloxacillin), 포스포마이신(Fosfomycin), 푸라졸리돈(Furazolidone), 퓨시드산(Fusidic acid), 가티플록사신(Gatifloxacin), 겔다나마이신(Geldanamycin), 겐타미신(Gentamicin), 글리코펩티드, 허비마이신(Herbimycin), 이미페넴(Imipenem), 이소니아지드(Isoniazid), 카나마이신, 레보플록사신(Levofloxacin), 린코마이신(Lincomycin), 리네졸리드(Linezolid), 로메플록사신(Lomefloxacin), 로라카르베프(Loracarbef), 마크롤리드(Macrolides), 마페니드(Mafenide), 메로페넴(Meropenem), 메티실린(Meticillin), 메트로니다졸(Metronidazole), 메즐로실린(Mezlocillin), 메노시클린(Minocycline), 모노박탐(Monobactams), 목시플록사신(Moxifloxacin), 무피로신(Mupirocin), 나프실린(Nafcillin), 네오마이신, 네틸미신(Netilmicin), 니트로푸란토인(Nitrofurantoin), 노르플록사신(Norfloxacin), 오플록사신(Ofloxacin), 옥사실린(Oxacillin), 옥시테트라시클린(Oxytetracycline), 파로모마이신(Paromomycin), 페니실린, 페니실린들, 피페라실린(Piperacillin), 플라텐시마이신(Platensimycin), 폴리믹신 B(Polymyxin B), 폴리펩티드, 프론토실(Prontosil), 피라진아미드(Pyrazinamide), 퀴놀론(Quinolones), 퀴누프리스틴(Quinupristin), 리팜피신(Rifampicin), 리팜핀(Rifampin), 록시트로마이신(Roxithromycin), 스펙티노마이신(Spectinomycin), 스트렙토마이신(Streptomycin), 술파세타미드(Sulfacetamide), 술파메티졸(Sulfamethizole), 술파닐이미드(Sulfanilimide), 술파살라진(Sulfasalazine), 술피속사졸(Sulfisoxazole), 술폰아미드(Sulfonamides), 테이코플라닌(Teicoplanin), 텔리트로마이신(Telithromycin), 테트라시클린(Tetracycline), 테트라시클린들, 티카르실린(Ticarcillin), 티니다졸(Tinidazole), 토브라마이신(Tobramycin), 트리메토프림(Trimethoprim), 트리메토프림-술파메톡사졸(Sulfamethoxazole), 트롤레안도마이신(Troleandomycin), 트로바플록사신(Trovafloxacin) 및 반코마이신(Vancomycin)을 포함한다. 활성제는 또한 알도스테론(Aldosterone), 베클로메타손(Beclometasone), 베타메타손(Betamethasone), 코르티코스테로이드(Corticosteroids), 코르티솔(Cortisol), 코르티손 아세테이트(Cortisone acetate), 데옥시코르티코스테론 아세테이트(Deoxycorticosterone acetate), 덱사메타손(Dexamethasone), 플루드로코르티손 아세테이트(Fludrocortisone acetate), 글루코코르티코이드(Glucocorticoids), 히드로코르티손(Hydrocortisone), 메틸프레드니솔론(Methylprednisolone), 프레드니솔론(Prednisolone), 프레드니손(Prednisone), 스테로이드, 및 트리암시놀론을 포함한다. 항바이러스제는 아바카버(abacavir), 아시클로버(aciclovir), 아시클로버(acyclovir), 아데포버(adefovir), 아만타딘(amantadine), 암프레나버(amprenavir), 항레트로바이러스제 고정 용량 조합물, 항레트로바이러스제 상승작용 증강인자, 아르비돌(arbidol), 아타자나버(atazanavir), 아트리플라(atripla), 브리부딘(brivudine), 시도포버(cidofovir), 콤비버(combivir), 다루나버(darunavir), 델라비르딘(delavirdine), 디다노신(didanosine), 도코사놀(docosanol), 에독수딘(edoxudine), 에파비렌즈(efavirenz), 엠트리시타빈(emtricitabine), 엔푸비르티드(enfuvirtide), 엔테카버(entecavir), 유입 억제제(entry inhibitors), 팜시클로버(famciclovir), 포미비르센(fomivirsen), 포삼프레나버(fosamprenavir), 포스카르넷(foscarnet), 포스포넷(fosfonet), 융합 억제제, 간시클로버(ganciclovir), 가르다실(gardasil), 이바시타빈(ibacitabine), 이독수리딘(idoxuridine), 이미퀴모드(imiquimod), 이무노버(imunovir), 인디나버(indinavir), 이노신(inosine), 통합효소(integrase) 억제제, 인터페론, 인터페론 타입 Ⅰ, 인터페론 타입 Ⅱ, 인터페론 타입 Ⅲ, 라미부딘(lamivudine), 로피나버(lopinavir), 로비리드(loviride), 마라비록(maraviroc), MK-0518, 모록시딘(moroxydine), 넬피나버(nelfinavir), 네비라핀(nevirapine), 넥사버(nexavir), 누클레오시드 유사체, 오셀타미버(oseltamivir), 펜시클로버(penciclovir), 페라미버(peramivir), 플레코나릴(pleconaril), 포도필로톡신(podophyllotoxin), 프로테아제 억제제, 역전사효소 억제제, 리바비린(ribavirin), 리만타딘(rimantadine), 리토나버(ritonavir), 사퀴나버(saquinavir), 스타부딘(stavudine), 테노포버(tenofovir), 테노포버 디소프록실(tenofovir disoproxil), 티프라나버(tipranavir), 트리플루리딘(trifluridine), 트리지버(trizivir), 트로만타딘(tromantadine), 트루바다(truvada), 발라시클로버(valaciclovir), 발간시클로버(valganciclovir), 비크리비록(vicriviroc), 비다라빈(vidarabine), 비라미딘(viramidine), 잘시타빈(zalcitabine), 자나미버(zanamivir), 및 지도부딘(zidovudine)을 포함한다. 상기 활성제의 임의의 적합한 조합물이 또한 고려된다.
"약학적 부형제" 또는 "약학적으로 허용되는 부형제"는 활성 치료제가 제형화되는 담체, 보통 액체이다. 본 발명의 한 구체예에서, 활성 치료제는 본원에 기재된 인간화 항체 또는 이의 하나 이상의 단편이다. 부형제는 화학적 및/또는 생물학적 안정성을 제공하고 특징을 나타낼 수 있으나, 일반적으로 제형에 임의의 약리학적 활성을 제공하지 않는다. 예시적 제형은 참조로서 포함되는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Ed., Grennaro, A., Ed., 1995]에서 발견될 수 있다.
본원에서 사용되는 "약학적으로 허용되는 담체" 또는 "부형제"는 생리학적으로 양립되는 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항균제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제를 포함한다. 한 구체예에서, 담체는 비경구 투여에 적합하다. 대안적으로, 담체는 정맥내, 복막내, 근내 또는 설하 투여에 적합할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 멸균 주사용수 또는 분산제의 즉석 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산제 및 멸균 분말을 포함한다. 약학적 활성 물질을 위한 상기 매질 및 작용제의 용도는 당 분야에 널리 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 작용제가 활성 화합물과 양립되지 않는 경우를 제외하고는, 본 발명의 약제 조성물에서의 이의 용도가 고려된다. 보충 활성 화합물이 또한 조성물에 포함될 수 있다.
약제 조성물은 통상적으로 제조 및 보관 조건하에서 멸균되고 안정적이어야 한다. 본 발명은 약제 조성물이 동결건조된 형태로 존재하는 것을 고려한다. 조성물은 용액, 마이크로에멀젼, 리포솜 또는 높은 약물 농도에 적합한 다른 정연한 구조로 제형화될 수 있다. 담체는, 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 본 발명은 약제 조성물에서의 안정화제의 포함을 추가로 고려한다.
많은 경우에, 조성물 내에 등장화제, 예를 들어, 당, 폴리알코올, 예를 들어, 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사용 조성물의 장기간의 흡수가 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 겔라틴을 조성물에 포함시킴으로써 발생될 수 있다. 더욱이, 알칼리 폴리펩티드가 시간 방출 제형, 예를 들어, 서방형 중합체를 포함하는 조성물로 제형화될 수 있다. 활성 화합물은 신속한 방출에 대해 화합물을 보호하는 담체와 함께, 예를 들어, 이식 및 미세피막화 전달 시스템을 포함하는 조절 방출 제형으로 제조될 수 있다. 생물분해성의 생체적합 중합체, 예를 들어, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안하이드라이드(polyanhydride), 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 폴리락트산 및 폴리락틱(polylactic), 폴리글리콜산 공중합체(PLG)가 사용될 수 있다. 상기 제형을 제조하기 위한 많은 방법이 당업자에게 공지되어 있다.
인용된 구체예 각각에 대해, 화합물은 다양한 투여 형태로 투여될 수 있다. 당업자에게 공지된 임의의 생물학적으로 허용되는 투여 형태 및 이의 조합이 고려된다. 이러한 투여 형태의 예는 재구성가능한 분말, 엘릭시르(elixir), 액체, 용액, 현탁액, 에멀젼, 분말, 과립, 미립자, 극미립자, 분산성 과립, 카세제(cachet), 흡입제, 에어로졸 흡입제, 패치(patch), 미립자 흡입제, 임플란트, 데포(depot) 임플란트, 주사가능물질(피하, 근내, 정맥내 및 피내 포함), 주입액, 및 이의 조합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 다양한 예시된 구체예의 상기 기재는 총망라되거나, 본 발명을 기재된 엄밀한 형태로 제한하고자 함이 아니다. 본 발명의 특정 구체예 및 이에 대한 실시예는 예시의 목적으로 본원에 기재된 것으로, 관련 분야의 당업자가 인지하는 바와 같이 본 발명의 범위 내에서 다양한 동등한 변형이 가능하다. 본 발명에 제공된 교시내용은 상기 기재된 실시예가 아닌 다른 목적에 적용될 수 있다.
상기 상세한 설명의 견지에서 상기 및 다른 변형이 본 발명에 이루어질 수 있다. 일반적으로, 하기 청구항에서, 사용된 용어는 본 발명을 명세서 및 청구항에 기재된 특정 구체예로 제한하는 것으로 해석되어선 안된다. 따라서, 본 발명은 개시내용에 의해 제한되지 않고, 대신 본 발명의 범위는 오로지 하기 청구항에 의해 결정되어야 한다.
본 발명은 전술한 기재 및 실시예에 특별히 기재된 것이 아닌 방식으로 실시될 수 있다. 본 발명의 다수의 변형 및 변화가 상기 교시내용에 비추어 가능하며, 따라서 이는 첨부되는 청구항의 범위에 해당한다.
항원 특이적 B 세포의 클론 집단을 수득하기 위한 방법과 관련된 특정 교시내용이 전체내용이 참조로서 본원에 포함되는 2006년 5월 19일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 60/801,412호에 기재되어 있다.
토끼 유래 모노클로날 항체의 인간화 및 항원 결합 친화성을 유지시키기 위한 바람직한 서열 변형과 관련된 특정 교시내용이 전체내용이 참조로서 본원에 포함되는 2008년 5월 21일에 출원된 "신규한 토끼 항체 인간화 방법 및 인간화 토끼 항체(Novel Rabbit Antibody Humanization Method and Humanized Rabbit Antibodies)"를 표제로 하는, 대리인 도켓 번호 67858.701802에 해당하는 국제 출원 번호 에 기재되어 있다.
메이팅 적격 효모 및 해당 방법을 이용하여 항체 또는 이의 단편을 생성하는 것과 관련된 특정 교시내용이 전체내용이 참조로서 본원에 포함되는 2006년 5월 8일에 출원된 미국 특허 출원 번호 제 11/429,053호(미국 특허 출원 공보 제 US2006/0270045호)에 기재되어 있다.
IL-6 항체, 메이팅 적격 효모 및 해당 방법을 이용한 항체 또는 이의 단편을 생성하는 방법과 관련된 특정 교시내용이 전체내용이 참조로서 본원에 포함되는 2007년 5월 21일에 출원된 미국 가특허 출원 번호 제 60/924,550호에 기재되어 있다.
특정 항-IL-6 항체 폴리누클레오티드 및 폴리펩티드가 본 특허 출원에 수반되는 서열 목록에 기재되어 있고, 상기 서열 목록의 기재내용은 전체내용이 참조로서 본원에 포함된다.
발명의 배경, 상세한 설명 및 실시예에서 언급된 각각의 문헌(특허, 특허 출원, 저널 기사, 초록, 소책자, 서적 또는 다른 명세)의 전체 개시내용은 전체내용이 참조로서 본원에 포함된다.
하기 실시예는 본 발명을 제조하고 이용하는 방법의 완전한 명세 및 기재를 당업자에게 제공하기 위해 제시되며, 본 발명으로 간주되는 것의 범위를 제한하고자 함이 아니다. 사용된 수(예를 들어, 양, 온도, 농도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력하였으나, 이에 대한 일부 실험 오차 및 편차가 허용되어야 한다. 달리 지정되지 않는 경우, 부(part)는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이고, 온도는 섭씨 온도이고; 압력은 대기압이거나 대기압 근처이다.
실시예 1: 부화된 항원 특이적 B 세포 항체 배양물의 생성
관심 표적 항원에 대한 천연 면역 반응을 개발하기 위해 전통적인 항체 숙주 동물을 면역화시킴으로써 항체 패널(panel)을 유도한다. 통상적으로, 면역화에 사용되는 숙주는 유사한 성숙 과정을 이용하여 항체를 생성하고, 동등한 다양성, 예를 들어, 에피토프 다양성의 항체를 생성하는 항원 특이적 B 세포의 집단을 제공하는 토끼 또는 기타 숙주이다. 최초 항원 면역화는 완전 프로인트 애주번트(Freund's adjuvant)(CFA)를 이용하여 수행될 수 있고, 후속 부스트(boost)는 불완전 애주번트로 수행될 수 있다. 면역화 약 50-60일, 바람직하게는 55일 후, 항체 역가를 시험하고, 적절한 역가가 확립된 경우 항체 선택(ABS) 과정을 개시한다. ABS 개시를 위한 2개의 중요한 기준은 폴리클로날 혈청에서의 효능 있는 항원 인지 및 기능 변형 활성이다.
양성 항체 역가가 확립된 시점에서, 동물을 희생시키고, B 세포 공급원을 분리시킨다. 이러한 공급원은 비장, 림프절, 골수 및 말초혈 단핵 세포(PBMS)를 포함한다. 단일 세포 현탁액이 생성되고, 세포 현탁액을 세척하여, 저온에서의 장기간 보관에 대해 양립되도록 만든다. 이후, 세포는 통상적으로 동결된다.
항체 확인 과정을 개시하기 위해, 동결 세포 현탁액의 작은 분획을 해동하고, 세척하고, 조직 배양 배지에 둔다. 이후, 이러한 현탁액을 동물 면역 반응을 발생시키기 위해 사용된 항원의 비오티닐화된 형태와 혼합하고, 밀텐이(Miltenyi) 자기 비드 세포 선택 방법을 이용하여 항원 특이적 세포를 회수한다. 스트렙타비딘 비드를 이용하여 특정 부화를 수행한다. 부화된 집단을 회수하고, 특정 B 세포 분리의 다음 단계를 진행한다.
실시예 2: 클론성 항원 특이적 B 세포 함유 배양물의 생성
실시예 1에 따라 생성된 부화된 B 세포를 이후 96 웰 미세역가 플레이트 중에 웰당 다양한 세포 밀도로 플레이팅한다. 일반적으로, 이는 군 당 10개의 플레이트와 함께, 웰당 50, 100, 250 또는 500개의 세포이다. 배지에 50K의 동결된 방사선 조사된 EL4B 공급자 세포와 함께 4% 활성화된 토끼 T 세포 적응용 배지(conditioned media)를 보충한다. 이러한 배양물을 5-7일 동안 흔들리지 않게 두고, 분비된 항체를 함유하는 상층액을 수거하고, 별도의 검정 환경에서 표적 특성에 대해 평가한다. 잔여 상층액을 그대로 두고, 플레이트를 -70℃에서 동결시킨다. 이러한 조건하에서, 배양 과정은 통상적으로 항원 특이적 B 세포의 클론 집단을 포함하는 혼합된 세포 집단을 함유하는 웰을 발생시키며, 즉 단일 웰은 요망되는 항원에 특이적인 단일한 모노클로날 항체만을 함유할 것이다.
실시예 3: 요망되는 특이성 및/또는 기능적 특성의 모노클로날 항체에 대한 항체 상층액의 스크리닝
실시예 2에 따라 생성된 클론성 항원 특이적 B 세포 집단을 함유하는 웰로부터 유래된 항체 함유 상층액을 ELISA 방법을 이용하여 항원 인지에 대해 먼저 스크리닝한다. 이는 선택적 항원 고정(예를 들어, 스트렙타비딘 코팅된 플레이트에 의한 비오티닐화된 항원 포획), 비특이적 항원 플레이트 코팅, 또는 대안적으로 항원 조립(build-up) 전략(예를 들어, 선택적 항원 포획 후의 이형성(heteromeric) 단백질-항원 복합체를 생성시키기 위한 결합 파트너 첨가)을 통한 항원 플레이트 코팅을 포함한다. 이후, 항원 양성 웰 상층액을 리간드에 대해 엄격하게 의존적인 기능 변형 검정에서 임의로 시험한다. 하나의 이러한 예는 항원 리간드와 재조합 수용체 단백질의 자연 상호작용을 재생시키는 시험관내 단백질-단백질 상호작용 검정이다. 대안적으로, 리간드 의존적이고 용이하게 모니터(예를 들어, 증식 반응)되는 세포 기반 반응을 이용한다. 현저한 항원 인지 및 효능을 나타내는 상층액은 양성 웰로 간주한다. 이후, 본래의 양성 웰로부터 유래된 세포를 항체 회수 단계로 이동시킨다.
실시예 4: 단일한 요망되는 항원 특이성의 항체 생성 B 세포의 회수
단일 항체 서열을 분비하는 항원 특이적 B 세포(실시예 2 또는 3에 따라 생성됨)의 클론 집단을 함유하는 웰로부터 세포를 분리한다. 이후, 단일한 항체 분비 세포를 분리시키기 위해 분리된 세포를 검정한다. 다이날(Dynal) 스트렙타비딘 비드를 세포 생활력과 양립되는 항원 함유 마이크로비드를 제조하기 위해 완충된 배지 하에서 비오티닐화된 표적 항원으로 코팅한다. 다음으로, 항원 로딩된 비드, 양성 웰로부터의 항체 생성 세포, 및 플루오레세인(fluorescein) 이소티오시아네이트(FITC) 라벨링된 항-숙주 H&L IgG 항체(언급된 바와 같이, 숙주는 임의의 포유동물 숙주, 예를 들어, 토끼, 마우스, 래트 등일 수 있음)를 37℃에서 함께 인큐베이션한다. 이후, 이러한 혼합물을 유리 슬라이드 상으로 분취량으로 다시 피펫팅(pipetting)하여, 각각의 분취량이 평균적으로 단일한 항체 생성 B 세포를 갖도 록 한다. 이후, 형광 현미경 검사를 통해 항원 특이적 항체 분비 세포를 검출한다. 분비된 항체는 결합된 항원으로 인해 인접한 비드로 국소적으로 농축되고, 강한 형광 신호를 기초로 하여 국소화 정보를 제공한다. 항체 분비 세포를 분비 세포에 인접하여 형성된 항체-항원 복합체의 FITC 검출을 통해 확인한다. 이후, 이러한 복합체의 중심에서 발견된 단일 세포를 미세조작기(micromanipulator)를 이용하여 회수한다. 세포를 항체 서열 회수가 개시될때까지 -80℃에서의 보관을 위해 에펜도르프(eppendorf) PCR 튜브에서 급속 동결시킨다.
실시예 5: 항원 특이적 B 세포로부터 항체 서열의 분리
항체 서열을 실시예 4에 따라 생성된 단일한 분리된 B-세포 또는 실시예 2에 따라 수득된 클론성 B 세포 집단으로부터 분리된 항원 특이적 B 세포로부터 조합 RT-PCR 기반 방법을 이용하여 회수한다. 표적 면역글로불린 유전자(중쇄 및 경쇄), 예를 들어, 토끼 면역글로불린 서열의 보존 및 불변 영역에서 어닐링하도록 프라이머를 디자인하고, 항체 서열을 수득하기 위해 2단계의 네스티드(nested) PCR 회수 단계를 사용한다. 회수 및 크기 온전성을 위해 각각의 웰로부터의 앰플리콘을 분석한다. 이후, 생성된 단편을 서열 클론형성능(clonality)을 핑거프린팅(fingerprinting)하기 위해 AluⅠ으로 절단시킨다. 동일한 서열은 전기영동 분석에서 공통의 단편화 패턴을 나타낸다. 유의하게, 세포 클론형성능을 입증하는 상기 공통의 단편화 패턴은 일반적으로 본래 1000 세포/웰 이하로 플레이팅된 웰에서도 관찰된다. 이후, 본래의 중쇄 및 경쇄 앰플리콘 단편을 HindⅢ 및 XhoⅠ 또는 HindⅢ 및 BsiWⅠ로 제한 효소 절단하여, 클로닝을 위한 각각의 DNA 단편을 제 조한다. 이후, 생성된 절단물을 발현 벡터로 라이게이션하고, 플라스미드 증식 및 생성을 위해 박테리아로 형질전환시킨다. 서열 특성규정을 위해 콜로니를 선택한다.
실시예 6: 요망되는 항원 특이성 및/또는 기능적 특성의 모노클로날 항체의 재조합 생성
단일한 모노클로날 항체를 함유하는 각각의 웰에 대해 정확한 전장 항체 서열을 확립시키고, 키아젠(Qiagen) 고상 방법을 이용하여 미니프렙(miniprep) DNA를 제조한다. 이후, 이러한 DNA를 포유동물 세포를 트랜스펙션시키는데 사용하여 재조합 전장 항체를 생성시킨다. 미정제 항체 생성물을 본래의 특성이 재조합 항체 단백질에서 발견되는지 확인하기 위해 항원 인지 및 기능적 특성에 대해 시험한다. 적절한 경우, 대규모의 일시적 포유동물 트랜스펙션을 완료시키고, 항체를 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 통해 정제한다. 표준 방법(예를 들어, 비아코어(Biacore)) 뿐만 아니라 효능 검정에서의 IC50을 이용하여 Kd를 평가한다.
실시예 7: 인간 IL -6에 결합하는 항체의 제조
본원에 기재된 항체 선택 프로토콜을 이용함으로써, 항체의 광범위한 패널을 생성시킬 수 있다. 항체는 IL-6에 대해 높은 친화성(한자리 내지 두자리 수의 pM Kd)을 갖고, 다세포 기반 스크리닝 시스템(T1165 및 HepG2)에서 IL-6의 효능있는 길항작용을 입증한다. 또한, 항체의 수집물은 IL-6에 의해 유도되는 과정에 대한 별개의 방식의 길항작용을 나타낸다.
면역화 전략
토끼를 huIL-6(R&R)으로 면역화시켰다. 면역화는 완전 프로인트 애주번트(CFA)(Sigma) 중에서의 100 μg의 첫번째 피하(sc) 주사 후의, 2주 간격의 불완전 프로인트 애주번트(IFA)(Sigma) 중에서의 각각 50 μg의 2회의 부스트로 구성되었다. 동물을 55일째에 채혈하고, T1165 세포주를 이용하여 ELISA(항원 인지) 및 비-방사성 증식 검정(Promega)에 의해 혈청 역가를 결정하였다.
항체 선택 역가 평가
4℃에서 밤새 이뮬론 4(Immulon 4) 플레이트(Thermo)를 인산염 완충 염수(PBS, Hyclone) 중의 1 μg/ml의 huIL-6(50 μl/웰)으로 코팅시킴으로써 항원 인지를 결정하였다. 검정일에, 플레이트를 PBS/Tween 20(PBST tablets, Calbiochem)으로 3회 세척하였다. 이후, 플레이트를 37℃에서 30분 동안 PBS 중의 200 μl/웰의 0.5% 어류 피부 젤라틴(fish skin gelatin)(FSG, Sigma)으로 블로킹시켰다. 블로킹 용액을 제거하고, 플레이트를 블로팅(blotting)시켰다. 혈청 샘플을 1:100의 시작 희석(모든 희석액은 FSG 50 μl/웰에서 제조함)으로 제조(채혈 및 채혈전)한 후, 플레이트 전역(컬럼 12는 백그라운드 대조군을 위해 블랭크(blank)로 두었음)에서 1:10 희석시켰다. 플레이트를 37℃에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 PBS/Tween 20으로 3회 세척하였다. 1:5000 희석된 염소 항-토끼 FC-HRP(Pierce)를 모든 웰(50 μl/웰)에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 상기 기재된 바와 같이 세척하였다. 50 μl/웰의 TMB-스테이블 스톱(Stable stop)(Fitzgerald Industries)을 플레이트에 첨가하였고, 일반적으로 3 내지 5분 동안 색이 발달하도록 하였다. 발달 반응을 50 μl/웰 의 0.5 M HCl을 이용하여 중지시켰다. 플레이트를 450 nm에서 판독하였다. 광학 밀도(OD) 대 희석을 그래프 패드 프리즘(Graph Pad Prizm) 소프트웨어를 이용하여 작도하고, 역가를 결정하였다.
기능적 역가 평가
샘플의 기능적 활성을 T1165 증식 검정으로 결정하였다. T1165 세포를 Hepes, 피루브산 나트륨, 중탄산나트륨, L-글루타민, 높은 글루코오스, 페니실린/스트렙토마이신, 10% 열 불활성화 우태아 혈청(FBS)(모두 하이클론(Hyclone)사로부터 공급), 2-머캅토에탄올(Sigma), 및 10 ng/ml의 huIL-6(R&D)이 보충된 변형된 RPMI 배지(Hyclone)에서 통상적으로 유지시켰다. 검정일에, 트립판 블루(trypan blue)(Invitrogen)로 세포 생활력을 결정하고, 세포를 20,000 세포/웰의 고정 밀도로 시딩하였다. 시딩 전에, 세포를 인간-IL-6이 없는 상기 기재된 배지로 2회 세척(5분 동안 13000 rpm에서의 원심분리 및 상층액의 폐기에 의함)하였다. 마지막 세척 후, 세포를 50 μl/웰에 상당하는 부피의 세척에 사용된 것과 동일한 배지에 재현탁시켰다. 세포를 실온에 따로 챙겨 두었다.
둥근 바닥 96-웰 플레이트(Costar)에서, 혈청 샘플을 1:100에서 시작하여 첨가한 후, 5개의 복제물(replicate)로 30 μl/웰로 플레이트(컬럼 2 내지 10) 전역에서 1:10 희석시켰다(B 내지 F열: 희석은 huIL-6을 갖지 않는 상기 기재된 배지 중에서 이루어짐). 컬럼 11은 IL-6 대조군을 위해 배지만을 함유하였다. 4x 농도의 최종 EC50(이전에 결정된 농도)에서의 30 μl/웰의 huIL-6을 모든 웰에 첨가하였다(huDL-6은 상기 기재된 배지 중에서 희석됨). 웰을 37℃에서 1시간 동안 인큐 베이션하여 항체 결합이 발생되도록 하였다. 1시간 후, 50 μl/웰의 항체-항원(Ab-Ag) 복합체를 둥근 바닥 플레이트에 배열된 플레이트 맵 포맷에 따라 편평 바닥 96-웰 플레이트(Costar)로 옮겼다. G열에서, 50 μl/웰의 배지를 백그라운드 대조군을 위해 모든 웰(컬럼 2 내지 11)에 첨가하였다. 따로 챙겨둔 50 μl/웰의 세포 현탁액을 모든 웰(컬럼 2 내지 11, B 내지 G열)에 첨가하였다. 컬럼 1 및 12, 및 열 A 및 H에, 시험 웰의 증발을 방지하고, 모서리 효과(edge effect)를 최소화하기 위해 200 μl/웰의 배지를 첨가하였다. 플레이트를 4% CO2에서 37℃에서 72시간 동안 인큐베이션하였다. 72시간에서, 20 μl/웰의 셀타이터96(CellTiter96)(Promega) 시약을 제조업체의 프로토콜에 따라 모든 시험 웰에 첨가하고, 플레이트를 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 2시간에서, 플레이트를 오비탈 쉐이커(orbital shaker) 상에서 가볍게 혼합하여 세포를 분산시키고, 시험 웰에서 균질하게 하였다. 플레이트를 490 nm 파장에서 판독하였다. 광학 밀도(OD) 대 희석을 그래프 패드 프리즘 소프트웨어를 이용하여 작도하고, 기능적 역가를 결정하였다. 1 μg/ml(최종 농도)의 시작 농도, 및 이후에 플레이트 전역에서 1:3 희석으로 MAB2061(R&D Systems)을 이용하여 상기 기재된 바와 같이 양성 검정 대조군 플레이트를 수행하였다.
조직 수거
허용되는 역가가 확립된 후, 토끼(들)을 희생시켰다. 비장, 림프절 및 전혈을 수거하고, 다음과 같이 처리하였다:
조직을 분리시키고, 20cc 주사기의 플런저(plunger)를 이용하여 70 μm(Fisher)의 멸균 와이어 메시(wire mesh)를 통해 통과시킴으로써 비장 및 림프절을 단일 세포 현탁액으로 처리하였다. 세포를 huIL-6을 포함하지 않으나, 적은 글루코오스를 갖는 상기 기재된 변형된 RPMI 배지에서 수거하였다. 세포를 원심분리에 의해 2회 세척하였다. 마지막 세척 후, 세포 밀도를 트립판 블루에 의해 결정하였다. 세포를 10분 동안 1500 rpm에서 원심분리시키고; 상층액을 폐기하였다. 세포를 적절한 부피의 FBS(Hyclone) 중의 10% 디메틸 술폭시드(DMSO, Sigma)에 재현탁시키고, 1 ml/바이얼에 분배하였다. 이후, 바이얼을 24시간 동안 -70℃에서 보관한 후, 장기간의 보관을 위해 액체 질소(LN2) 탱크에 두었다.
전혈과 동등부의 FBS를 함유하지 않는 상기 기재된 적은 글루코오스 배지를 혼합시킴으로써 말초혈 단핵 세포(PBMC)를 분리시켰다. 35 ml의 전혈 혼합물을 45 ml 코니컬 튜브(conical tube)(Corning)로 8 ml의 림포라이트 래빗(Lympholyte Rabbit)(Cedarlane) 상에 조심스럽게 층을 이루게 하고, 제동 없이 실온에서 2500 rpm으로 30분 동안 원심분리시켰다. 원심분리 후, PBMC 층을 유리 파스퇴르 파이펫(Pasteur pipette)(VWR)을 이용하여 조심스럽게 분리시키고, 조합시키고, 깨끗한 50 ml 바이얼에 두었다. 세포를 실온에서 10분 동안 1500 rpm에서의 원심분리에 의해 상기 기재된 변형된 배지로 2회 세척하고, 트립판 블루 염색에 의해 세포 밀도를 결정하였다. 마지막 세척 후, 세포를 적절한 부피의 10% DMSO/FBS 배지에 재현탁시키고, 상기 기재된 바와 같이 동결시켰다.
B 세포 배양
B 세포 배양물 구성일에, PBMC, 비장세포 또는 림프절 바이얼을 사용을 위해 해동하였다. 바이얼을 LN2 탱크로부터 분리시키고, 해동될때까지 37℃ 수조에 두었다. 바이얼의 내용물을 15 ml 코니컬 원심분리 튜브(Corning)로 옮기고, 10 ml의 상기 기재된 변형된 RPMI를 튜브에 천천히 첨가하였다. 세포를 1.5K rpm에서 5분 동안 원심분리시키고, 상층액을 폐기하였다. 세포를 10 ml의 신선한 배지에 재현탁시켰다. 세포 밀도 및 생활력을 트립판 블루에 의해 결정하였다. 세포를 다시 세척하고, 1E07 세포/80 ul의 배지로 재현탁시켰다. 비오티닐화된 huIL-6(B huIL-6)를 3 ug/mL의 최종 농도로 세포 현탁액에 첨가하고, 4℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 결합되지 않은 B huIL-6을 10 ml의 인산염 완충된(PBF):Ca/Mg 프리(free) PBS(Hyclone), 2 mM 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA), 0.5% 우혈청 알부민(BSA)(Sigma-biotin free)의 2회 세척으로 제거하였다. 두번째 세척 후, 세포를 1E07 세포/80 μl PBF로 재현탁시켰다. 20 μl의 MACS® 스트렙타비딘 비드(Milteni)/10E7 세포를 세포 현탁액에 첨가하였다. 세포를 15분 동안 4℃에서 인큐베이션하였다. 세포를 2 ml의 PBF/10E7 세포로 1회 세척하였다. 세척 후, 세포를 1E08 세포/500 μl의 PBF로 재현탁시키고, 따로 챙겨두었다. MACS® MS 컬럼(Milteni)을 자기 스탠드(Milteni) 상에서 500 ml의 PBF로 예비적으로 헹구었다. 세포 현탁액을 전처리-필터(pre-filter)를 통해 컬럼으로 적용시키고, 결합되지 않은 부획을 수거하였다. 컬럼을 1.5 ml의 PBF 완충액으로 세척하였다. 컬럼을 자기 스탠드로부터 분리시키고, 깨끗한 멸균 5 ml 폴리프로필렌 팔콘(Falcon) 튜브에 두었다. 1 ml의 PBF 완충액을 컬럼의 상단에 첨가하고, 양성 선택 세포를 수거하 였다. 양성 및 음성 세포 분획의 수율 및 생활력을 트립판 블루 염색에 의해 결정하였다. 양성 선택은 1%의 시작 세포 농도 평균을 발생시켰다.
배양을 위한 시딩 수준에 대한 정보를 제공하기 위해 파일럿 세포 스크린(screen)을 확립시켰다. 3개의 10-플레이트 군(전체 30개의 플레이트)을 50, 100 및 200개의 부화된 B 세포/웰로 시딩하였다. 또한, 각각의 웰은 250 μl/웰의 최종 부피의 높은 글루코오스 변형 RPMI 배지 중에 50K 세포/웰의 방사선 조사된 EL-4.B5 세포(5,000 Rads) 및 적절한 수준의 T 세포 상층액(제법에 따라 1-5% 범위)을 함유하였다. 배양물을 4% CO2 중에서 37℃에서 5 내지 7일 동안 인큐베이션하였다.
선택적 항체 분비 B 세포의 확인
배양물을 5일 내지 7일 사이에 항원 인지 및 기능적 활성에 대해 시험하였다.
항원 인지 스크리닝
사용된 ELISA 포맷은 B 세포 배양물(BCC) 웰(모두 30개의 플레이트)로부터의 50 μl의 상층액을 항체원으로 사용한 것을 제외하고는 상기 기재된 바와 같다. 적응용 배지(conditioned medium)를 항원 코팅된 플레이트로 옮겼다. 양성 웰이 확인된 후, 상층액을 분리시키고, 96-웰 마스터 플레이트(들)로 옮겼다. 이후, 본래의 배양물 플레이트를 40 μl/웰을 제외하고 모든 상층액을 제거하고, 60 μl/웰의 FBS 중의 16% DMSO를 첨가함으로써 동결시켰다. 플레이트를 종이 타월에 포장 하여 천천히 동결시키고, -70℃에 두었다.
기능적 활성 스크리닝
이후, B열이 백그라운드 대조군을 위한 배지 단독이고, C열이 양성 증식 대조군을 위한 배지 + IL-6이고, D-G열 및 컬럼 2-11이 BCC로부터의 웰(50 μl/웰, 단일점)인 것을 제외하고는, 상기 기재된 바와 같은 T1165 증식 검정에서 기능적 활성에 대해 마스터 플레이트를 스크리닝하였다. 검정에 대해 결정된 EC50 농도의 2.5배인 배지 열을 제외하고는, 모든 웰에 40 μl의 IL-6을 첨가하였다. 1시간의 인큐베이션 후, Ab/Ag 복합체를 조직 배양물(TC) 처리된 96웰의 편평 바닥 플레이트로 옮겼다. huIL-6을 갖지 않는 변형된 RPMI 배지 중의 20 μl의 세포 현탁액(20,000 세포/웰의 T1165)을 모든 웰(웰당 100 μl의 최종 부피)에 첨가하였다. 백그라운드를 공제하고, 관찰된 OD 값을 억제%로 전환시켰다.
B 세포 회수
관심 웰을 함유하는 플레이트를 -70℃로부터 분리시키고, 각각의 웰로부터의 세포를 5-200 μl 배지 세척액/웰과 함께 회수하였다. 세척액을 1.5 ml 멸균 원심분리 튜브에서 풀링시키고, 세포를 1500 rpm에서 2분 동안 펠렛화시켰다.
튜브를 반전시키고, 회전을 반복하고, 상층액을 조심스럽게 제거하였다. 세포를 100 μl/튜브의 배지에 재현탁시켰다. 100 μl의 비오티닐화된 IL-6 코팅된 스트렙타비딘 M280 다이나비드(dynabead)(Invitrogen) 및 배지 중에 1:100 희석된 16 μl의 염소 항-토끼 H&L IgG-FITC를 세포 현탁액에 첨가하였다.
20 μl의 세포/비드/FITC 현탁액을 분리시키고, 5 μl의 비말을 35 내지 40 비말/슬라이드로 시그마코트(Sigmacote)(Sigma)로 미리 처리된 유리 슬라이드(Corning) 상에서 제조하였다. 파라핀 오일(JT Baker)의 불투과성 장벽을 첨가하여 비말을 덮고, 슬라이드를 어두운 곳에서 4% CO2 및 37℃에서 90분 동안 인큐베이션하였다.
항체 분비로 인한 주위의 형광 고리, 비드와 결합된 비오티닐화된 항원의 인지, 및 형광 IgG 검출 시약에 의한 이후의 검출에 의해 항체를 생성하는 특정 B 세포를 확인할 수 있었다. 관심 세포가 확인된 후, 형광 고리의 중심의 세포를 미세조작기(Eppendorf)를 통해 회수하였다. 항체를 합성하고 외수송하는 단일 세포를 250 μl 미세원심분리 튜브로 옮기고, 드라이 아이스에 두었다. 모든 관심 세포를 회수한 후, 이를 장기간의 보관을 위해 -70℃로 옮겼다.
실시예 8: 효모 세포 발현
항체 유전자: 유전자를 클로닝하고, 키메라 인간화 토끼 모노클로날 항체의 합성을 유도하도록 제작하였다.
발현 벡터: 벡터는 1) 박테리아 에스케리키아 콜리(Escherichia coli)의 세포에서 플라스미드 벡터의 복제를 촉진하는, 복제의 돌연변이 ColE1 기점; 2) 항생제 제오신에 대해 내성을 부여하고, E. 콜리 및 P. 파스토리스(P. pastoris) 둘 모두의 형질전환을 위한 선택 마커로 제공하는 박테리아 Sh ble 유전자; 3) 사카로마이세스 세레비지에(Saccharomyces cerevisiae) 알파 메이팅 인자 프레 프로(pre pro) 분비 선도 서열을 엔코딩하는 서열, 및 이에 후속하는 P. 파스토리스 알코올 옥시다아제 Ⅰ 유전자(AOX1)으로부터의 P. 파스토리스 전사 종결 신호를 엔코딩하는 서열에 융합된 글루세르알데히드 데히드로게나아제 유전자(GAP 유전자) 프로모터로 구성된 발현 카세트의 기능적 구성요소를 함유한다. 제오신 내성 마커 유전자는 보다 높은 수준의 제오신에 대해 내성인 형질전환체를 선택함으로써 균주 내에 발현 벡터의 다수의 통합된 카피를 함유하는 균주에 대한 부화 수단을 제공한다.
P. 파스토리스 균주: P. 파스토리스 균주 met1, lys3, ura3 및 ade1이 사용될 수 있다. 영양요구 균주의 임의의 2개의 상보성 세트가 이배수체 균주의 제작 및 유지에 사용될 수 있으며, 이러한 2개의 균주는 두 이유로 상기 방법에 특히 적합하다. 첫번째로, 이들은 메이팅 또는 융합의 결과인 이배수체 균주보다 천천히 성장한다. 따라서, 적은 수의 일배수체 ade1 또는 ura3 세포 잔존물이 배양물에 존재하거나, 감수분열 또는 다른 메커니즘을 통해 발생하는 경우, 이배수체 균주는 배양물에서 신속히 성장할 것이다.
두번째는 메이팅으로부터 발생하는 이배수체 Ade+ 콜로니가 보통 백색 또는 크림색인 반면, 일배수체 ade1 돌연변이인 임의의 균주의 세포는 명백한 분홍색을 갖는 콜로니를 형성하므로, 상기 균주의 성적 상태를 모니터하기 용이하다는 점이다. 또한, 일배수체 ura3 돌연변이인 임의의 균주는 약물 5-플루오로-오로트산(FOA)에 대해 내성이고, 최소 배지 + FOA를 갖는 우라실 플레이트 상에서 배양물 샘플을 플레이팅시킴으로써 민감하게 확인될 수 있다. 이러한 플레이트 상에서, 우라실을 필요로 하는 ura3 돌연변이(아마, 일배수체) 균주만이 성장할 수 있고, 콜로니를 형성할 수 있다. 따라서, ade1 및 ura3의 마커를 갖는 일배수체 모 균주를 이용하여, 생성된 항체 생성 이배수체 균주의 성적 상태(일배수체 대 이배수체)를 용이하게 모니터할 수 있다.
방법
경쇄 및 중쇄 항체 유전자의 전사를 위한 pGAPZ -알파 발현 벡터의 제작. 인간화 경쇄 및 중쇄 단편을 PCR 유도 방법을 통해 pGAPZ 발현 벡터로 클로닝시켰다. 회수된 인간화 제작물을 (1) 경쇄 정방향 프라이머
Figure 112009078884536-pct00150
(AfeⅠ 부위는 하나의 밑줄로 표시됨); 및 역방향 프라이머
Figure 112009078884536-pct00151
를 이용하여 표준 KOD 중합효소(Novagen) 키트 조건((1) 94℃, 2분; (2) 94℃, 30초; (3) 55℃, 30초; (4) 72℃, 30초 - 단계 2-4를 통한 35회의 주기; (5) 72℃, 2분) 하에서 증폭시켰다. HSA 신호 서열의 말단은 이중 밑줄로 표시되고, 성숙 가변 경쇄에 대한 서열이 후속된다(밑줄이 없음).
가변 경쇄 역방향 프라이머. BsiWⅠ 부위에는 밑줄이 있고, 가변 경쇄의 3' 말단에 대한 역 상보체가 후속된다. AfeⅠ 및 BsiWⅠ를 이용한 제한 효소 절단 후, 이는 외수송을 위한 인간 카파 경쇄 불변 영역과 인 프레임(in frame)인 인간 HAS 선도 서열을 이용하여 pGAPZ 벡터로의 인-프레임 삽입을 가능케 한다. (2) 중쇄에 대해 유사한 전략을 수행한다. 사용되는 정방향 프라이머는
Figure 112009078884536-pct00152
이다. AfeⅠ 부위는 하나의 밑줄 로 표시된다. HSA 신호 서열의 말단은 이중 밑줄로 표시되고, 성숙 가변 중쇄에 대한 서열이 후속된다(밑줄이 없음). 역방향 중쇄 프라이머는
Figure 112009078884536-pct00153
이다. XhoⅠ 부위는 밑줄로 표시되고, 가변 중쇄의 3' 말단에 대한 역방향 상보체가 후속된다. 이는 동등한 방향성 클로닝 전략을 이용하여 pGAPZ에 이전에 삽입된 IgG-γ1 CH1-CH2-CH3 영역과 인-프레임인 중쇄의 클로닝을 가능케 한다.
P. 파스토리스의 일배수체 ade1 , ura3 , met1 및 lys3 숙주 균주로의 발현 벡터의 형질전환. 일배수체 P. 파스토리스 균주의 형질전환 및 P. 파스토리스 성 주기의 유전적 조작에 사용된 모든 방법은 문헌[Higgins, D. R., and Cregg, J. M., Eds. 1998. Pichia Protocols . Methods in Molecular Biology. Humana Press, Totowa, NJ]에 기재되어 있다.
형질전환 전, 각각의 발현 벡터를 P. 파스토리스 유전체의 GAP 프로모터 유전자좌로의 벡터의 통합을 유도시키기 위해 AvrⅡ를 이용하여 GAP 프로모터 서열 내에서 선형화시킨다. 이후, 각각의 벡터의 샘플을 전기천공에 의해 ade1, ura3, met1 및 lys3 균주의 전기적격(electrocompetent) 배양물로 개별적으로 형질전환시키고, 성공적인 형질전환체를 제오신에 대한 내성에 의해 YPD 제오신 플레이트 상에서 선택한다. 생성된 콜로니를 선택하고, YPD 제오신 플레이트 상에서 단일 콜로니에 대해 스트리킹(streaking)시킨 후, 적절한 항체 유전자 삽입물에 대한 각각의 균주로부터 추출된 유전체 DNA에 대한 PCR 검정 및/또는 콜로니 리프트(colony lift)/면역블롯(immunoblot) 방법에 의한 항체 사슬을 합성하는 각각의 균주의 능 력에 의해 항체 유전자 삽입물의 존재를 시험한다(Wung et al. Biotechniques 21 808-812 (1996)). 3개의 중쇄 제작물 중 하나를 발현하는 일배수체 ade1, met1 및 lys3 균주를 경쇄 유전자를 발현하는 일배수체 ura3 균주와 함께 이배수체 제작물에 대해 수집한다. 중쇄 유전자를 발현하는 일배수체를 적절한 경쇄 일배수체 ura3와 메이팅시켜 단백질을 분비하는 이배수체를 생성시킨다.
단일 항체 사슬을 합성하는 일배수체 균주의 메이팅, 및 사합체 기능성 항체를 합성하는 이배수체 유도체의 선택. P. 파스토리스 일배수체 균주를 메이팅시키기 위해, 교잡되는 각각의 ade1(또는 met1 또는 lys3) 중쇄 생성 균주를 부(rich) YPD 플레이트 전역에 스트리킹시키고, ura3 경쇄 생성 균주를 제 2의 YPD 플레이트 전역에 스트리킹(플레이트당 ~10개의 스트리크(streak))시킨다. 30℃에서의 1 또는 2일의 인큐베이션 후, 중쇄 균주를 함유하는 1개의 플레이트 및 ura3 경쇄 균주를 함유하는 1개의 플레이트로부터의 세포를 크로스 해치 패턴(cross hatched pattern)으로 배양평판 복제(replica-plating) 블록 상의 멸균 벨벳 천으로 옮겨, 각각의 중쇄 균주가 각각의 경쇄 균주와 혼합된 세포의 패치(patch)를 함유하도록 한다. 이후, 교차-스트리킹된(cross-streaked) 복제 플레이팅 세포를 메이팅 플레이트로 옮기고, 균주 사이의 메이팅의 개시를 자극하기 위해 25℃에서 인큐베이션한다. 2일 후, 메이팅 플레이트 상의 세포를 배양평판 복제 블록 상의 멸균 벨벳으로 다시 옮긴 후, 최소 배지 플레이트로 옮긴다. 이러한 플레이트를 3일 동안 30℃에서 인큐베이션하여, 원시영양체(prototrophic) 이배수체 균주의 콜로니의 선택 성장을 가능케 한다. 발생된 콜로닐을 채집하고, 제 2의 최소 배지 플레이트에 스트리킹하여 단일 콜로니를 분리시키고, 각각의 이배수체 균주를 정제한다. 이후, 생성된 이배수체 세포주를 항체 생성에 대해 시험한다.
추정 이배수체 균주를 이들이 이배수체이고, 항체 생성을 위한 둘 모두의 발현 벡터를 함유하는 것을 입증하기 위해 시험한다. 이배수성을 위해, 균주 샘플을 메이팅 플레이트에 스프레딩시켜, 감수분열을 거쳐 포자를 형성하도록 자극시킨다. 일배수체 포자 생성물을 수집하고, 표현형에 대해 시험한다. 생성된 포자 생성물의 유의한 백분율이 단일 또는 이중 영양요구 균주인 경우, 본래의 균주가 이배수체임을 결론내릴 수 있다. 이배수체 균주를 각각의 균주로부터의 유전체 DNA를 추출하고, 이러한 DNA를 각각의 유전자에 대해 특이적인 PCR 반응에 이용함으로써 둘 모두의 항체 유전자의 존재에 대해 시험한다.
단일 항체 사슬을 합성하는 일배수체 균주의 융합, 및 사합체 기능성 항체를 합성하는 이배수체 유도체의 선택. 상기 기재된 메이팅 방법에 대한 대안으로서, 단일 사슬 항체를 생성하는 일배수체 ade1 및 ura3 균주의 개별적 배양물을 스페로플라스트화시키고, 생성된 스페로플라스트를 폴리에틸렌 글리콜/CaCl2를 이용하여 융합시킨다. 이후, 융합된 일배수체 균주를 1M 소르비톨 및 최소 배지를 함유하는 아가(agar)에 내재시켜, 이배수체 균주가 이의 세포벽을 재생하고, 가시적인 콜로니로 성장하도록 한다. 생성된 콜로니를 아가로부터 채집하고, 최소 배지 플레이트로 스트리킹시키고, 플레이트를 30℃에서 2일 동안 인큐베이션하여, 이배수체 세포주의 단일 세포로부터 콜로니를 생성시킨다. 이후, 생성된 추정 이배수체 세포 주를 상기 기재된 바와 같이 이배수성 및 항체 생성에 대해 시험한다.
항체의 정제 및 분석. 전장 항체의 생성을 위한 이배수체 균주를 상기 기재된 방법을 이용하여 met1 경쇄 및 lys3 중쇄의 메이팅을 통해 유도시킨다. 이배수체 P. 파스토리스 발현 균주의 진탕-플라스크 또는 발효기 배양물로부터의 배양 배지를 수거하고, 인간 IgG의 중쇄 및 경쇄, 또는 특별히 IgG의 중쇄에 대해 특이적인 항체를 이용한 SDS-PAGE 및 면역블로팅을 통해 항체 단백질의 존재를 시험한다.
효모에 의해 분비된 항체를 정제하기 위해, 항체 생성 배양물로부터의 정화된 배지를 단백질 A 컬럼을 통해 통과시키고, 20 mM 인산나트륨(pH 7.0), 결합 완충액으로 세척한 후, 0.1 M 글리신 HCl 완충액(pH 3.0)을 이용하여 단백질 A 결합된 단백질을 용리시킨다. 가장 많은 전체 단백질을 함유하는 분획을 항체 단백질에 대해 쿠마시 블루 염색된 SDS-PAGE 및 면역블로팅에 의해 시험한다. IL-6 인지에 대해 상기 기재된 ELISA를 이용하여 항체를 특성규명한다.
항체 활성에 대한 검정. 재조합 효모 유래 인간화 항체를 상기 기재된 IL-6 유도 T1165 세포 증식 검정 및 IL-6 자극 HepG2 합토글로빈(haptoglobin) 검정을 통해 기능적 활성에 대해 평가한다.
실시예 9: 항- IL -6 항체 Ab1 의 정맥내 투여에 의한 급성기 반응 중화.
인간 IL-6는 래트에서 급성기 반응을 일으킬 수 있고, 래트에서 자극되는 주요 급성기 단백질 중 하나가 α-2 마크로글로불린(A2M)이다. 정맥내 투여되는 다양한 용량(0.03, 0.1, 0.3, 1 및 3 mg/kg)의 항체 Ab1(n=10 래트/용량 수준) 또는 대조군(n=10 래트)으로서 폴리클로날 인간 IgG1의 투여 1시간 후에 제공된 100 μg 의 인간 IL-6의 1회 피하 주사에 대해 A2M 반응을 제거하는데 필요한 항체 Ab1의 용량을 평가하는 연구를 디자인하였다. 혈장을 회수하고, 시판되는 샌드위치 ELISA 키트(ICL Inc., Newberg OR; cat. no.-E-25A2M)를 통해 A2M을 정량하였다. 종점은 24시간의 시점(Ab1 후)에서 A2M의 혈장 농도에서 차이가 있었다. 결과는 도 4에 제시되어 있다.
항체 Ab1에 대한 ID50은 0.3 mg/kg에서의 A2M 반응의 완전 억제와 함께 0.1 mg/kg이었다. 이는 인간 IL-6의 생체내 중화가 항체 Ab1에 의해 달성될 수 있는 것을 확실히 확립시킨다.
실시예 10: RXF393 악액질 모델 연구 1.
서언
인간 신장 세포 암세포주 RXF393은 무흉선 누드 마우스로 이식되는 경우 심한 체중 손실을 발생시킨다. 체중 손실은 이식 약 15일 후에 시작하여, 이식 18-20일 후에는 모든 동물의 80%가 전체 체중의 30% 이상을 손실한다. RXF393은 인간 IL-6을 분비하고, 이러한 동물에서의 인간 IL-6의 혈장 농도는 약 10ng/ml로 매우 높다. 인간 IL-6은 뮤린 가용성 IL-6 수용체에 결합하여, 마우스에서 IL-6 반응을 활성화시킬 수 있다. 인간 IL-6은 마우스에서의 IL-6 반응의 활성에 있어서 뮤린 IL-6 보다 약 10배 덜 효능이 있다. 본 연구의 목적은 인간 신장 세포 암세포주 RXF393이 이식된 무흉선 누드 마우스에서의 생존, 체중, 혈청 아밀로이드 A 단백질 및 혈액학 파라미터에 대한 항체 Ab1의 효과를 결정하는 것이었다.
방법
80마리의 6주령의 수컷 무흉선 누드 마우스에 우측 옆구리에 RXF393 종양 단편(30-40mg)을 피하 이식하였다. 이후, 동물을 10마리의 마우스의 8개의 군으로 나누었다. 3개의 군에 이식 1일, 8일, 15일 및 22일 후에 매주 3mg/kg, 10mg/kg 또는 30mg/kg의 항체 Ab1을 정맥내 제공하였다(진행군). 또 다른 3개의 군에 이식 8일, 15일 및 22일 후에 매주 3mg/kg, 10mg/kg 또는 30mg/kg의 항체 Ab1을 정맥내 제공하였다(퇴행군). 최종적으로, 이식 1일, 8일, 15일 및 22일 후에 매주 하나의 대조군 군에 폴리클로날 인간 IgG 30mg/kg을 정맥내 제공하고, 두번째 대조군 군에 인산염 완충 염수를 정맥내 제공하였다.
종양이 4,000 mm3에 도달하거나 동물이 쇠약(30%를 초과하는 체중 손실)해진 28일째에 동물을 안락사시켰다. 동물을 이식 1 및 6일 후에 칭량한 후, 9일부터 28일까지 매일 칭량하였다. 평균 백분율 체중(MPBW)을 연구 동안의 체중 손실을 모니터하기 위한 일차 파라미터로 사용하였다. 이는 다음과 같이 계산하였다: (체중 - 종양 중량)/기준선 체중 x 100. 종양 중량을 이식 1, 6, 9, 12, 15, 18, 22, 25 및 28일 후에 측정하였다. 혈액을 5일 13일에 각각의 군의 5마리의 마우스로부터 마취하에서 수집하고, 안락사시키는 경우(대부분의 경우 28일) 각각의 군에서 모든 10마리의 마우스로부터 수집하였다. 혈액학 및 혈청 아밀로이드 A 단백질(SAA) 농도에 대해 혈액을 분석하였다. 10마리의 종양을 갖지 않는 6주령의 수컷 무흉선 누드 마우스의 추가 군에서 값의 기준선 세트로 작용하는 혈액학 및 SAA 농도 평가를 위해 혈액 샘플을 채취하였다.
결과 - 생존
동물은 28일의 연구 종료일 전에 항체 Ab1 군 중 임의의 군에서 안락사되거나 사망하지 않았다. 2개의 대조군에서, 15마리의 동물(폴리클로날 인간 IgG 군에서 7/9, 및 인산염 완충 염수군에서 8/10)이 매우 쇠약(30%를 초과하는 체중 손실)해져 사망하거나 안락사된 것으로 밝혀졌다. 둘 모두의 대조군에서 중간 생존 시간은 20일이었다.
2개의 대조군 및 항체 Ab1 진행(연구 1일째로부터 투여됨)군에 대한 생존 곡선은 도 5에 제시되어 있다.
2개의 대조군 및 항체 Ab1 퇴행(연구 8일째로부터 투여됨)군에 대한 생존 곡선은 도 6에 제시되어 있다.
폴리클로날 인간 IgG(p=0.O038) 및 인산염 완충 염수(p=0.0003) 대조군에 대한 생존 곡선과 6개의 항체 Ab1군에 대한 생존 곡선 사이에 통계적으로 유의한 차이가 있었다. 2개의 대조군 사이에 통계적으로 유의한 차이가 없었다(p=0.97).
결과 - 혈장 혈청 아밀로이드 A
평균(± SEM) 혈장 혈청 아밀로이드 A 농도 대 2개의 대조군 및 항체 Ab1 진행(연구 1일째로부터 투여됨) 및 퇴행(연구 8일째로부터 투여됨)군에 대한 시간이 표 1에 제시되어 있다.
표 1: 평균 혈장 SAA - 항체 Ab1 , 모든 군 대 대조군
Figure 112009078884536-pct00154
SAA는 hIL-6의 자극을 통해 상향 조절되고, 이러한 반응은 이식된 종양으로부터 유래된 hIL-6의 순환 수준과 직접적으로 관련된다. 대용(surrogate) 마커는 활성 hIL-6에 대한 간접 판독을 제공한다. 따라서, 상기 기재된 2개의 치료군에서, 종양 유래 hIL-6의 중화로 인해 SAA의 유의하게 감소된 수준이 존재한다. 이는 항체 Ab1이 생체내 효능을 나타낸다는 주장을 추가로 뒷받침한다.
실시예 11: RXF393 악액질 모델 연구 2.
서언
항체 Ab1을 이용한 치료가 보다 이후의 단계(이식후 10 및 13일)에 시작하고, 보다 연장된 치료 기간(이식후 49일까지)을 이용하여, RXF-393 악액질 모델에서 두번째 연구를 수행하였다. 항체 Ab1의 투여 간격을 7일로부터 3일로 단축시켰 고, 또한 매일 식이 소비를 측정하였다. 또한, 항체 Ab1을 이용한 투여 개시 시점에서 종양 크기를 표준화시키려고 시도하였다.
방법
80마리의 6주령의 수컷 무흉선 누드 마우스에 우측 옆구리에 RXF393 종양 단편(30-40mg)을 피하 이식하였다. 종양이 270 - 320mg의 크기에 도달한 20마리의 마우스를 선택하고, 2개의 군으로 나누었다. 이 시점(이식 10일 후)으로부터 3일마다 1개의 군에 10mg/kg의 항체 Ab1을 정맥내 투여하고, 3일마다 나머지 군에 10mg/kg의 폴리클로날 인간 IgG를 투여하였다. 종양 크기가 400 - 527mg의 크기에 도달한 또 다른 20마리의 마우스를 선택하고, 2개의 군으로 나누었다. 상기 시점(이식 13일 후)으로부터 3일마다 1개의 군에 10mg/kg의 항체 Ab1을 정맥내 투여하고, 3일마다 나머지 군에 10mg/kg의 폴리클로날 인간 IgG를 투여하였다. 나머지 40마리의 마우스를 연구에 추가로 참여시키지 않고, 종양이 4,000 mm3에 도달하거나 동물이 쇠약(30%를 초과하는 체중 손실)해진 49일째에 안락사시켰다.
동물을 이식후 1일로부터 49일까지 3-4일마다 칭량하였다. 평균 백분율 체중(MPBW)을 연구 동안의 체중 손실을 모니터하기 위한 일차 파라미터로 사용하였다. 이는 다음과 같이 계산하였다: ((체중 - 종양 중량)/기준선 체중) x 100. 종양 중량을 이식후 5일로부터 49일까지 3-4일마다 측정하였다. 270 - 320mg 종양 군에 대해 10일 및 400-527mg 종양 군에 대해 13일로부터 매일 식이 소비를 측정(각각의 치료군에 의해 체중(g)당 24시간에 소비된 양)하였다.
결과 - 생존
3일마다의 10mg/kg i.v.의 항체 Ab1(270-320mg 종양 크기) 및 3일마다의 10mg/kg i.v.의 폴리클로날 인간 IgG(270-320mg 종양 크기)에 대한 생존 곡선이 도 7에 제시되어 있다.
3일마다의 10mg/kg i.v.의 항체 Ab1(270-320mg 종양 크기)에 대한 중간 생존은 46일이었고, 3일마다의 10mg/kg i.v.의 폴리클로날 인간 IgG(270-320mg 종양 크기)에 대한 중간 생존은 32.5일이었다(p=0.0071).
3일마다의 10mg/kg i.v.의 항체 Ab1(400-527mg 종양 크기) 및 3일마다의 10mg/kg i.v.의 폴리클로날 인간 IgG(400-527mg 종양 크기)에 대한 생존 곡선이 도 8에 제시되어 있다. 3일마다의 10mg/kg i.v.의 항체 Ab1(400-527mg 종양 크기)에 대한 중간 생존은 46.5일이었고, 3일마다의 10mg/kg i.v.의 폴리클로날 인간 IgG(400-527mg 종양 크기)에 대한 중간 생존은 27일이었다(p=0.0481).
실시예 12: 비인간 영장류에서의 항체 Ab1 의 다중 용량 약동학 평가.
항체 Ab1을 인산염 완충 염수 중에서 1마리의 수컷 및 1마리의 암컷 시노몰구스 원숭이에 단일 볼루스(bolus) 주입으로 투여하였다. 혈장 샘플을 고정된 시간 간격으로 분리시키고, 항체 Ab1의 수준을 항원 포획 ELISA 검정의 사용을 통해 정량하였다. 비오티닐화된 IL-6(3 μg/mL의 50 μl)을 스트렙타비딘 코팅된 96웰 미세역가 플레이트 상에 포획시켰다. 플레이트를 세척하고, 0.5% 어류 피부 젤라틴(fish skin gelatin)으로 블로킹시켰다. 적절하게 희석된 혈장 샘플을 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상층액을 분리시키고, 항-hFc-HRP 컨 쥬게이션된 이차 항체를 적용시키고, 실온에 두었다.
이후, 플레이트를 흡출시키고, TMB를 첨가하여, 항체의 양을 시각화시켰다. 이후, 표준 곡선의 사용을 통해 특정 수준을 결정하였다. 항체 Ab1의 제 2의 양을 35일에 동일한 2마리의 시노몰구스 원숭이에 투여하고, 동일한 샘플링 계획을 이용하여 실험을 되풀이하였다. 이후, 생성된 농도를 도 9에 도시된 바와 같이 시간에 대해 작도한다.
이러한 피키아 파스토리스(Pichia pastoris) 발현 및 정제된 인간화 전장 비당화(aglycosylated) 항체는 포유동물 발현 단백질과 동등한 특성을 나타낸다. 또한, 다중 용량의 이러한 생성물은 상기 생성 플랫폼이 향상된 면역원성을 나타내는 생성물을 발생시키지 않는 것을 나타내는 재현가능한 반감기를 나타낸다.
실시예 13: 항체 단백질의 팔중항 기계작용( Octet Mechanistic ) 특성.
IL-6 신호전달은 IL-6과, 2개의 수용체 IL-6R1(CD126) 및 GP130(IL-6 신호전달인자) 사이의 상호작용에 의존적이다. 항체 기계작용을 결정하기 위해, 기계적 연구를 팔중항(Octet) QK 기계(ForteBio; Menlo Park, CA)를 이용하여 생물학적 보호막 간섭법(bio-layer interferometry)을 이용하여 수행하였다. 연구를 2개의 상이한 형태로 수행하였다. 첫번째 방침에서, 비오티닐화된 IL-6(R&D systems part number 206-IL-001MG/CF, 제조업체의 프로토콜에 따라 피어스 EZ-링크 설포-NHS-LC-LC-비오틴 생성물 번호 21338(Pierce EZ-link sulfo-NHS-LC-LC-biotin product number 21338)를 이용하여 비오티닐화됨)를 스트렙타비딘 코팅된 바이오센서(ForteBio part number 18-5006)에 먼저 결합시켰다. 결합을 신호의 증가로서 모니터한다.
이후, 센서에 결합된 IL-6을 당해 항체 또는 희석 용액 단독과 함께 인큐베이션시켰다. 이후, 센서를 가용성 IL-6R1(R&D systems product number 227-SR-025/CF) 분자와 함께 인큐베이션시켰다. IL-6R1 분자가 결합에 실패하는 경우, 항체는 IL-6/IL-6R1 상호작용을 차단하는 것으로 간주하였다. 이러한 복합체를 안정성 목적을 위해 IL-6R1의 존재하에서 GP130(R&D systems 228-GP-010/CF)과 인큐베이션하였다. GP130이 결합하지 않는 경우, 항체가 IL-6과의 GP130 상호작용을 차단한 것으로 결론내렸다.
두번째 방침에서, 항체를 항-인간 IgG1 Fc-특이적 시약(ForteBio part number 18-5001)으로 코팅된 바이오센서에 결합시켰다. IL-6을 고정된 항체에 결합시키고, 센서를 IL-6R1과 함께 인큐베이션시켰다. IL-6R1이 IL-6과 상호작용하지 않는 경우, IL-6 결합 항체가 IL-6/IL-6R1 상호작용을 차단하는 것으로 결론내렸다. 항체/IL-6/IL-6R1이 관찰된 상황에서, 복합체를 IL-6R1의 존재하에서 GP130과 인큐베이션시켰다. GP130이 상호작용하지 않는 경우, 항체가 IL-6/GP130 상호작용을 차단하는 것으로 결론내렸다. 모든 연구를 30C 및 1000 rpm에서 200 μL의 최종 부피로 수행하였다. 상기 연구를 위해, 모든 단백질을 포르테바이오(ForteBio)사의 샘플 희석 완충액(part number 18-5028)을 이용하여 희석시켰다.
결과는 도 10A-E 및 11에 제시되어 있다.
실시예 14: 펩티드 맵핑 .
인간 IL-6에 대해 Ab1에 의해 인지되는 에피토프를 결정하기 위해, 웨스턴- 블롯 기반 검정에서 항체를 사용하였다. 본 실시예에서 사용된 인간 IL-6의 형태는 183개의 아미노산 길이를 가졌다(하기 도시됨). 상기 서열을 포함하는 중첩하는 15개의 아미노산 펩티드의 57개 일원의 라이브러리를 상업적으로 합성시키고, 펩스폿츠(PepSpots) 니트로셀룰로오스 막(JPT Peptide technologies, Berlin, Germany)에 공유 결합시켰다. 중첩하는 15개의 아미노산 펩티드의 서열은 도 12에 도시되어 있다. 제조업체의 권고에 따라 블롯(blot)을 제조하고, 프로빙(probing)시켰다.
간단히, 블롯을 메탄올에 미리 침지시키고, PBS로 헹구고, PBS/0.05% Tween 중의 10% 비지방유(non-fat milk)(블로킹 용액)에서 2시간에 걸쳐 블로킹시켰다. Ab1 항체를 1 mg/ml의 최종 희석액으로 사용하고, HRP-컨쥬게이션된 마우스 항-인간-카파 이차 항체(Southern BioTech #9220-05)를 1:5000 희석액으로 사용하였다. 항체 희석/인큐베이션을 블로킹 용액에서 수행하였다. 블롯을 아머샴 ECL 어드밴스(Amersham ECL advance) 시약(GE# RPN2135)을 이용하여 발달시키고, 화학발광 신호를 CCD 카메라(AlphaInnotec)를 이용하여 기록하였다. 블롯의 결과는 도 13 및 14에 도시되어 있다.
펩티드 라이브러리를 생성시키는데 이용된 인간 IL-6의 형태의 서열은 하기 기재된 바와 같다:
Figure 112009078884536-pct00155
SEQUENCE LISTING <110> Garcia, Leon Latham, John Jensen, Anne Olson, Katie Dutzar, Ben Ojala, Ethan Kovacevich, Brian Smith, Jeffrey <120> ANTIBODIES TO IL-6 AND USE THEREOF <130> 67858.701801 <140> Unassinged <141> 2008-05-21 <150> 60/924,550 <151> 2007-05-21 <160> 646 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 183 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Val Pro Pro Gly Glu Asp Ser Lys Asp Val Ala Ala Pro His Arg Gln 1 5 10 15 Pro Leu Thr Ser Ser Glu Arg Ile Asp Lys Gln Ile Arg Tyr Ile Leu 20 25 30 Asp Gly Ile Ser Ala Leu Arg Lys Glu Thr Cys Asn Lys Ser Asn Met 35 40 45 Cys Glu Ser Ser Lys Glu Ala Leu Ala Glu Asn Asn Leu Asn Leu Pro 50 55 60 Lys Met Ala Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn Glu Glu 65 70 75 80 Thr Cys Leu Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu Val Tyr 85 90 95 Leu Glu Tyr Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg 100 105 110 Ala Val Gln Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln Lys Lys 115 120 125 Ala Lys Asn Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr Asn Ala 130 135 140 Ser Leu Leu Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln Asp Met 145 150 155 160 Thr Thr His Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Leu Arg Ala Leu Arg Gln Met 180 <210> 2 <211> 122 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 2 Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser 20 25 30 Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser 35 40 45 Gln Ser Ile Asn Asn Glu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Arg Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val 65 70 75 80 Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Gly Tyr Ser Leu Arg Asn Ile Asp Asn Ala 115 120 <210> 3 <211> 125 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 3 Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro 20 25 30 Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser 35 40 45 Asn Tyr Tyr Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu 50 55 60 Trp Ile Gly Ile Ile Tyr Gly Ser Asp Glu Thr Ala Tyr Ala Thr Trp 65 70 75 80 Ala Ile Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu 85 90 95 Lys Met Thr Ser Leu Thr Ala Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala 100 105 110 Arg Asp Asp Ser Ser Asp Trp Asp Ala Lys Phe Asn Leu 115 120 125 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 4 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Glu Leu Ser 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 5 Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 6 Gln Gln Gly Tyr Ser Leu Arg Asn Ile Asp Asn Ala 1 5 10 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 7 Asn Tyr Tyr Val Thr 1 5 <210> 8 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 8 Ile Ile Tyr Gly Ser Asp Glu Thr Ala Tyr Ala Thr Trp Ala Ile Gly 1 5 10 15 <210> 9 <211> 12 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 9 Asp Asp Ser Ser Asp Trp Asp Ala Lys Phe Asn Leu 1 5 10 <210> 10 <211> 366 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 10 atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60 agatgtgcct atgatatgac ccagactcca gcctcggtgt ctgcagctgt gggaggcaca 120 gtcaccatca agtgccaggc cagtcagagc attaacaatg aattatcctg gtatcagcag 180 aaaccagggc agcgtcccaa gctcctgatc tatagggcat ccactctggc atctggggtc 240 tcatcgcggt tcaaaggcag tggatctggg acagagttca ctctcaccat cagcgacctg 300 gagtgtgccg atgctgccac ttactactgt caacagggtt atagtctgag gaatattgat 360 aatgct 366 <210> 11 <211> 375 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 11 atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60 tcgctggagg agtccggggg tcgcctggtc acgcctggga cacccctgac actcacctgc 120 acagcctctg gattctccct cagtaactac tacgtgacct gggtccgcca ggctccaggg 180 aaggggctgg aatggatcgg aatcatttat ggtagtgatg aaacggccta cgcgacctgg 240 gcgataggcc gattcaccat ctccaaaacc tcgaccacgg tggatctgaa aatgaccagt 300 ctgacagccg cggacacggc cacctatttc tgtgccagag atgatagtag tgactgggat 360 gcaaaattta acttg 375 <210> 12 <211> 33 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 12 caggccagtc agagcattaa caatgaatta tcc 33 <210> 13 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 13 agggcatcca ctctggcatc t 21 <210> 14 <211> 36 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 14 caacagggtt atagtctgag gaatattgat aatgct 36 <210> 15 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 15 aactactacg tgacc 15 <210> 16 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 16 atcatttatg gtagtgatga aacggcctac gcgacctggg cgataggc 48 <210> 17 <211> 36 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 17 gatgatagta gtgactggga tgcaaaattt aacttg 36 <210> 18 <211> 109 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Gly Ser Asp Glu Thr Ala Tyr Ala Thr Trp Ala Ile 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asp Ser Ser Asp Trp Asp Ala Lys Phe Asn Leu 100 105 <210> 19 <211> 109 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 19 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr 20 25 30 Tyr Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Gly Ser Asp Glu Thr Ala Tyr Ala Thr Ser Ala Ile 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Asp Asp Ser Ser Asp Trp Asp Ala Lys Phe Asn Leu 100 105 <210> 20 <211> 99 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 20 Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Glu Leu 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Leu Arg Asn Ile 85 90 95 Asp Asn Ala <210> 21 <211> 122 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 21 Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser 20 25 30 Val Glu Val Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser 35 40 45 Glu Thr Ile Tyr Ser Trp Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gln Ala Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Glu Tyr Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Gly Val Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Gly Tyr Ser Gly Ser Asn Val Asp Asn Val 115 120 <210> 22 <211> 126 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 22 Met Glu Thr Gly Leu Arg Trp Leu Leu Leu Val Ala Val Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr 20 25 30 Pro Gly Thr Pro Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu 35 40 45 Asn Asp His Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Tyr Ile Gly Phe Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ala Arg Tyr Ala Ser 65 70 75 80 Trp Ala Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp 85 90 95 Leu Lys Met Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 100 105 110 Val Arg Gly Gly Ala Val Trp Ser Ile His Ser Phe Asp Pro 115 120 125 <210> 23 <211> 11 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 23 Gln Ala Ser Glu Thr Ile Tyr Ser Trp Leu Ser 1 5 10 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 24 Gln Ala Ser Asp Leu Ala Ser 1 5 <210> 25 <211> 12 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 25 Gln Gln Gly Tyr Ser Gly Ser Asn Val Asp Asn Val 1 5 10 <210> 26 <211> 5 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 26 Asp His Ala Met Gly 1 5 <210> 27 <211> 16 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 27 Phe Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ala Arg Tyr Ala Ser Trp Ala Glu Gly 1 5 10 15 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 28 Gly Gly Ala Val Trp Ser Ile His Ser Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 29 <211> 366 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 29 atggacacga gggcccccac tcagctgctg gggctcctgc tgctctggct cccaggtgcc 60 agatgtgcct atgatatgac ccagactcca gcctctgtgg aggtagctgt gggaggcaca 120 gtcaccatca attgccaggc cagtgagacc atttacagtt ggttatcctg gtatcagcag 180 aagccagggc agcctcccaa gctcctgatc taccaggcat ccgatctggc atctggggtc 240 ccatcgcgat tcagcggcag tggggctggg acagagtaca ctctcaccat cagcggcgtg 300 cagtgtgacg atgctgccac ttactactgt caacagggtt atagtggtag taatgttgat 360 aatgtt 366 <210> 30 <211> 378 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 30 atggagactg ggctgcgctg gcttctcctg gtcgctgtgc tcaaaggtgt ccagtgtcag 60 gagcagctga aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacacttacc 120 tgcacagcct ctggattctc cctcaatgac catgcaatgg gctgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc tggaatacat cggattcatt aatagtggtg gtagcgcacg ctacgcgagc 240 tgggcagaag gccgattcac catctccaga acctcgacca cggtggatct gaaaatgacc 300 agtctgacaa ccgaggacac ggccacctat ttctgtgtca gagggggtgc tgtttggagt 360 attcatagtt ttgatccc 378 <210> 31 <211> 33 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 31 caggccagtg agaccattta cagttggtta tcc 33 <210> 32 <211> 21 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 32 caggcatccg atctggcatc t 21 <210> 33 <211> 36 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 33 caacagggtt atagtggtag taatgttgat aatgtt 36 <210> 34 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 34 gaccatgcaa tgggc 15 <210> 35 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 35 ttcattaata gtggtggtag cgcacgctac gcgagctggg cagaaggc 48 <210> 36 <211> 36 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 36 gggggtgctg 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Oryctolagus cuniculus <400> 97 ctaggcggtt atgatgatga tgctgataat gct 33 <210> 98 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 98 gactatgcaa tgagc 15 <210> 99 <211> 51 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 99 atcatttatg ctggtagtgg tagcacatgg tacgcgagct gggcgaaagg c 51 <210> 100 <211> 42 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 100 gatggatacg atgactatgg tgatttcgat cgattggatc tc 42 <210> 101 <211> 122 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 101 Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Pro Gly Ala Arg Cys Ala Tyr Asp Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser 20 25 30 Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser 35 40 45 Gln Ser Ile Asn Asn Glu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln 50 55 60 Arg Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val 65 70 75 80 Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Asp Leu Glu Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Gly Tyr Ser Leu 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cuniculus <400> 229 agggcatcca ctctggaatc t 21 <210> 230 <211> 39 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 230 caatgtactt atggtactag tagtagttat ggtgctgct 39 <210> 231 <211> 15 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 231 agcaatgcaa taagc 15 <210> 232 <211> 48 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 232 atcattagtt atagtggtac cacatactac gcgagctggg cgaaaggc 48 <210> 233 <211> 57 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 233 gatgacccta cgacagttat ggttatgttg ataccttttg gagccggcat ggacctc 57 <210> 234 <211> 125 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 234 Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Pro Gly Ala Thr Phe Ala Gln Val Leu Thr Gln Thr Ala Ser Pro 20 25 30 Val Ser Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser 35 40 45 Gln Ser Val Tyr Lys Asn Asn Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Pro Pro Lys Gly Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Asp Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe 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Oryctolagus cuniculus <400> 405 ggtgcatcgg ctctggcatc t 21 <210> 406 <211> 36 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 406 gcaggcgcta ttactggtag tattgatacg gatggt 36 <210> 407 <211> 18 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 407 agcagctact tcatttgc 18 <210> 408 <211> 51 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 408 tgcatttatg gtggtgatgg cagcacatac tacgcgagct gggcgaaagg c 51 <210> 409 <211> 42 <212> DNA <213> Oryctolagus cuniculus <400> 409 gaatgggcat atagtcaagg ttattttggt gcttttgatc tc 42 <210> 410 <211> 124 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 410 Met Asp Thr Arg Ala Pro Thr Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Leu Pro Gly Ala Arg Cys Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser 20 25 30 Val Glu Ala Ala Val Gly Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser 35 40 45 Glu Asp Ile Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val 65 70 75 80 Ser Ser Arg Phe Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Tyr Thr Leu 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Ala Glu Lys Asp Gly Cys 1 5 10 15 <210> 610 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 610 Leu Asn Leu Pro Lys Met Ala Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser 1 5 10 15 <210> 611 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 611 Pro Lys Met Ala Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn 1 5 10 15 <210> 612 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 612 Ala Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn Glu Glu Thr 1 5 10 15 <210> 613 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 613 Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn Glu Glu Thr Cys Leu Val 1 5 10 15 <210> 614 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 614 Phe Gln Ser Gly Phe Asn Glu Glu Thr Cys Leu Val Lys Ile Ile 1 5 10 15 <210> 615 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 615 Gly Phe Asn Glu Glu Thr Cys Leu Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu 1 5 10 15 <210> 616 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 616 Glu Glu Thr Cys Leu Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe 1 5 10 15 <210> 617 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 617 Cys Leu Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu Val Tyr 1 5 10 15 <210> 618 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 618 Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu Val Tyr Leu Glu Tyr 1 5 10 15 <210> 619 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 619 Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu Val Tyr Leu Glu Tyr Leu Gln Asn 1 5 10 15 <210> 620 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 620 Leu Glu Phe Glu Val Tyr Leu Glu Tyr Leu Gln Asn Arg Phe Glu 1 5 10 15 <210> 621 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 621 Glu Val Tyr Leu Glu Tyr Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu 1 5 10 15 <210> 622 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 622 Leu Glu Tyr Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln Ala 1 5 10 15 <210> 623 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 623 Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg Ala Val 1 5 10 15 <210> 624 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 624 Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg Ala Val Gln Met Ser 1 5 10 15 <210> 625 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 625 Ser Ser Glu Glu Gln Ala Arg Ala Val Gln Met Ser Thr Lys Val 1 5 10 15 <210> 626 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 626 Glu Gln Ala Arg Ala Val Gln Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln 1 5 10 15 <210> 627 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 627 Arg Ala Val Gln Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln 1 5 10 15 <210> 628 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 628 Gln Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln Lys Lys Ala 1 5 10 15 <210> 629 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 629 Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln Lys Lys Ala Lys Asn Leu 1 5 10 15 <210> 630 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 630 Leu Ile Gln Phe Leu Gln Lys Lys Ala Lys Asn Leu Asp Ala Ile 1 5 10 15 <210> 631 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 631 Phe Leu Gln Lys Lys Ala Lys Asn Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro 1 5 10 15 <210> 632 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 632 Lys Lys Ala Lys Asn Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr 1 5 10 15 <210> 633 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 633 Lys Asn Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr Asn Ala 1 5 10 15 <210> 634 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 634 Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr Asn Ala Ser Leu Leu 1 5 10 15 <210> 635 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 635 Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr Asn Ala Ser Leu Leu Thr Lys Leu 1 5 10 15 <210> 636 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 636 Asp Pro Thr Thr Asn Ala Ser Leu Leu Thr Lys Leu Gln Ala Gln 1 5 10 15 <210> 637 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 637 Thr Asn Ala Ser Leu Leu Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp 1 5 10 15 <210> 638 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 638 Ser Leu Leu Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln Asp 1 5 10 15 <210> 639 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 639 Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln Asp Met Thr Thr 1 5 10 15 <210> 640 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 640 Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln Asp Met Thr Thr His Leu Ile 1 5 10 15 <210> 641 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 641 Asn Gln Trp Leu Gln Asp Met Thr Thr His Leu Ile Leu Arg Ser 1 5 10 15 <210> 642 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 642 Leu Gln Asp Met Thr Thr His Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu 1 5 10 15 <210> 643 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 643 Met Thr Thr His Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln 1 5 10 15 <210> 644 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 644 His Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln Ser Ser Leu 1 5 10 15 <210> 645 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 645 Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln Ser Ser Leu Arg Ala Leu 1 5 10 15 <210> 646 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 646 Phe Lys Glu Phe Leu Gln Ser Ser Leu Arg Ala Leu Arg Gln Met 1 5 10 15

Claims (133)

  1. 서열 목록 번호: 3의 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) 폴리펩티드 및 서열 목록 번호: 2의 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) 폴리펩티드를 포함하는 항-인간 IL-6 항체가 결합하는 인간 IL-6 폴리펩티드 상의 에피토프와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  2. 제 1항에 있어서, 서열 목록 번호: 3의 서열을 갖는 가변 중쇄(VH) 폴리펩티드 및 서열 목록 번호: 2의 서열을 갖는 가변 경쇄(VL) 폴리펩티드를 포함하는 항-인간 IL-6 항체가 결합하는 인간 IL-6 폴리펩티드 상의 에피토프와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하고, 상기 에피토프는 서열 목록 번호: 1 내의 인간 IL-6 폴리펩티드 전체에 해당하는 중첩 선형 펩티드 단편을 이용한 에피토프 맵핑(epitotic mapping)에 의해 확인되며, 중첩 펩티드는 서열 목록 번호: 590-645 내의 펩티드를 포함하고, 상기 에피토프는 서열 목록 번호: 1의 아미노산 잔기 37-51, 아미노산 잔기 70-84, 아미노산 잔기 169-183, 아미노산 잔기 31-45 및 아미노산 잔기 58-72로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 잔기를 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  3. 제 1항에 있어서, 서열 목록 번호: 7, 8 또는 9 내에 함유된 것들과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 상보성 결정 영역(CDR) 및 서열 목록 번호: 4, 5 또는 6 내에 함유된 것들과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL CDR을 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  4. 제 1항에 있어서, 서열 목록 번호: 7, 120 또는 9 내에 함유된 것들과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH CDR 및 서열 목록 번호: 4, 5 또는 6에 함유된 것들과 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL CDR을 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
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  11. 제 1항에 있어서, 서열 목록 번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VH 폴리펩티드 및 서열 목록 번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VL 폴리펩티드를 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  12. 제 1항에 있어서, 서열 목록 번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 VH 폴리펩티드 및 서열 목록 번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VL 폴리펩티드를 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  13. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 비당화된(aglycosylated) 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  14. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 효과기(effector) 기능, 반감기, 단백질분해 및 당화로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상을 변경시키기 위해 변형된 Fc 영역을 함유하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  15. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 항체, 인간화(humanized) 항체, 단일 사슬 항체 또는 키메라 항체인 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  16. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 토끼 항-인간 IL-6 항체로부터 유래된 인간화 항체인 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  17. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역을 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  18. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  19. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 목록 번호: 588을 포함하는 중쇄 불변 영역 및 서열 목록 번호: 586을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  20. 제 18항에 있어서, 상기 Fc 영역이 당화를 예방하기 위하여 변이된 항-인간 IL-6 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  21. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 검출가능한 라벨에 직접 또는 간접적으로 부착되는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  22. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 있어서, 치료제에 직접 또는 간접적으로 부착되는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  23. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 따른 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편을 엔코딩하는 핵산 서열 또는 핵산 서열들.
  24. 제 23항에 따른 핵산 서열 또는 핵산 서열들을 포함하는 벡터.
  25. 제 24항에 있어서, 플라스미드 또는 재조합 바이러스 벡터인 벡터.
  26. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 따른 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편을 발현하는 재조합 세포.
  27. 제 26항에 있어서, 포유동물, 효모, 박테리아 또는 곤충 세포로부터 선택된 세포.
  28. 제 27항에 있어서, 효모 세포인 세포.
  29. 제 28항에 있어서, 피키아(Pichia) 효모 세포인 세포.
  30. 제 29항에 있어서, 이배수체(diploidal) 피키아 효모 세포인 세포.
  31. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 따른 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편을 포함하는, 전신 피로, 운동 유발 피로, 암 관련 피로, 염증 질병 관련 피로, 만성 피로 증후군, 암 관련 악액질, 심장 관련 악액질, 호흡 관련 악액질, 신장 관련 악액질, 연령 관련 악액질, 류머티스 관절염, 전신홍반루푸스(SLE), 전신 소아 특발성 관절염, 건선, 건선성 관절병증, 강직성 척추염, 염증성 장질병(IBD), 류머티스성 다발성 근육통, 거세포 동맥염, 자가면역 혈관염, 이식편대숙주병(GVHD), 쇼그렌 증후군, 성인형 스틸병, 류머티스 관절염, 골관절염, 골다공증, 골의 파제트병, 다발성 골수종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 전립선암, 백혈병, 신장 세포암, 다중심 캐슬만씨 병, 난소암, 암 화학요법에서의 약물 내성, 암 화학요법 독성, 허혈성 심질환, 죽상경화증, 비만, 당뇨, 천식, 다발성 경화증, 알츠하이머병, 뇌혈관질환, 열, 급성기 반응, 알레르기, 빈혈, 염증의 빈혈, 고혈압, 우울증, 만성 질환과 관련된 우울증, 혈전증, 혈소판증가증, 급성 심부전, 대사 증후군, 유산, 비만, 만성 전립선염, 사구체신염, 골반 염증성 질환, 재관류 손상, 이식 거부, 이식편대숙주병(GVHD), 조류 인플루엔자, 천연두, 범유행성 인플루엔자, 성인성 호흡곤란증후군(ARDS), 중증급성호흡증후군(SARS), 패혈증 및 전신 염증 반응 증후군(SIRS)으로부터 선택된 질병 또는 질환을 치료하기 위한 약제 조성물.
  32. 제 31항에 있어서, 약학적으로 허용되는 양의 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 약제 조성물.
  33. 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 중 어느 한 항에 따른 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편을 포함하는, 전신 피로, 운동 유발 피로, 암 관련 피로, 염증 질병 관련 피로, 만성 피로 증후군, 암 관련 악액질, 심장 관련 악액질, 호흡 관련 악액질, 신장 관련 악액질, 연령 관련 악액질, 류머티스 관절염, 전신홍반루푸스(SLE), 전신 소아 특발성 관절염, 건선, 건선성 관절병증, 강직성 척추염, 염증성 장질병(IBD), 류머티스성 다발성 근육통, 거세포 동맥염, 자가면역 혈관염, 이식편대숙주병(GVHD), 쇼그렌 증후군, 성인형 스틸병, 류머티스 관절염, 골관절염, 골다공증, 골의 파제트병, 다발성 골수종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 전립선암, 백혈병, 신장 세포암, 다중심 캐슬만씨 병, 난소암, 암 화학요법에서의 약물 내성, 암 화학요법 독성, 허혈성 심질환, 죽상경화증, 비만, 당뇨, 천식, 다발성 경화증, 알츠하이머병, 뇌혈관질환, 열, 급성기 반응, 알레르기, 빈혈, 염증의 빈혈, 고혈압, 우울증, 만성 질환과 관련된 우울증, 혈전증, 혈소판증가증, 급성 심부전, 대사 증후군, 유산, 비만, 만성 전립선염, 사구체신염, 골반 염증성 질환, 재관류 손상, 이식 거부, 이식편대숙주병(GVHD), 조류 인플루엔자, 천연두, 범유행성 인플루엔자, 성인성 호흡곤란증후군(ARDS), 중증급성호흡증후군(SARS), 패혈증 및 전신 염증 반응 증후군(SIRS)으로부터 선택된 질병 또는 질환을 진단하기 위한 약제 조성물.
  34. 제 33항에 있어서, 진단적으로 허용되는 양의 진단적으로 허용되는 담체를 추가로 포함하는 약제 조성물.
  35. 제 31항에 있어서, 상기 질병 또는 질환이 암, 자가면역 질병 또는 염증 질환인 약제 조성물.
  36. 제 31항에 있어서, 상기 치료가 또 다른 치료제의 투여, 또는 화학요법, 방사선요법, 사이토카인 투여 또는 유전자요법으로부터 선택된 요법을 추가로 포함하는 약제 조성물.
  37. 제 31항에 있어서, 암 또는 바이러스 감염의 부작용을 치료하는데 사용되는 약제 조성물.
  38. 제 37항에 있어서, 상기 부작용이 피로 또는 체중 감소인 약제 조성물.
  39. 제 33항에 있어서, IL-6을 발현하는 세포의 존재를 검출하는 생체내 화상진찰(imaging)을 위한 약제 조성물.
  40. 제 39항에 있어서, IL-6 발현 질병 부위에서의 항체의 검출을 돕는 방사선핵종(radionuclide) 또는 형광단(fluorephore)의 투여를 추가로 포함하는 약제 조성물.
  41. 제 39항에 있어서, IL-6 발현 종양 또는 전이를 검출하는데 사용되는 약제 조성물.
  42. 제 39항에 있어서, IL-6 발현 세포와 관련된 염증 부위의 존재를 검출하는데 사용되는 약제 조성물.
  43. 제 39항에 있어서, 방사선요법, 화학요법 또는 이의 조합을 포함하는 치료 요법에서 사용되는 약제 조성물.
  44. 서열 목록 번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 폴리펩티드를 포함하고, 서열 목록 번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 폴리펩티드를 추가로 포함하는 분리된 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편으로서, 상기 VH 폴리펩티드 또는 VL 폴리펩티드 내의 하나 이상의 프레임워크(FR) 잔기가 인간 IL-6에 특이적으로 결합하는 항-IL-6 항체를 발생시키는 또 다른 아미노산 잔기로 치환된 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  45. 제 44항에 있어서, 상기 항체가 인간화 항체인 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  46. 제 45항에 있어서, 상기 항체가 키메라 항체인 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  47. 제 46항에 있어서, 상기 키메라 항체가 인간 Fc를 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  48. 제 47항에 있어서, 상기 인간 Fc가 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgG10, IgG11, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16, IgG17, IgG18 또는 IgG19로부터 유래된 것인 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  49. 제 1항 내지 제 4항, 제 11항 내지 제 12항, 및 제 44항 내지 제 48항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 (i) 가용성 IL-6, 세포 표면 발현 IL-6, IL-6/IL-6R, IL-6/IL-6R/gp130 복합체 및 이의 중합체로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상에 결합하는 특성, 및 (ii) 가용성 IL-6, 세포 표면 발현 IL-6, IL-6/IL-6R, IL-6/IL-6R/gp130 복합체 및 이의 중합체로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 생물학적 효능을 길항시키는 특성 중 하나 이상을 포함하는, 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  50. 제 1항 내지 제 4항, 제 11항 내지 제 12항, 및 제 44항 내지 제 48항 중 어느 한 항에 있어서, 5x10-7, 10-7, 5x10-8, 10-8, 5x10-9, 10-9, 5x10-10, 10-10, 5x10-11, 10-11, 5x10-12, 10-12, 5x10-13 또는 10-13 이하의 해리 상수(KD)로 IL-6에 결합하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  51. 제 50항에 있어서, 상기 항체가 5x10-10 이하의 해리 상수(KD)로 IL-6에 결합하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  52. 제 50항에 있어서, 상기 항체가 10-4 S-1, 5x10-5 S-1, 10-5 S-1, 5x10-6 S-1, 10-6 S-1, 5x10-7 S-1 또는 10-7 S-1 이하의 분리-속도(Koff)로 IL-6에 결합하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  53. 제 50항에 있어서, 하나 이상의 토끼 항체로부터 유래된 VH 또는 VL 폴리펩티드를 함유하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  54. 제 50항에 있어서, IL-6과 IL-6R의 결합, 또는 IL-6/IL-6R/gp130 복합체의 생성, 또는 IL-6/IL-6R/gp130 중합체의 생성을 억제하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  55. 제 54항에 있어서, 상기 IL-6R이 가용성 IL-6R(sIL-6R)인 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  56. 제 50항에 있어서, 상기 항체 단편이 Fab 단편, Fab' 단편, 또는 F(ab')2 단편으로부터 선택된 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  57. 제 50항에 있어서, 효과기 부분을 추가로 포함하는 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  58. 제 57항에 있어서, 상기 효과기 부분이 검출가능한 부분 또는 기능성 부분인 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  59. 제 58항에 있어서, 상기 검출가능한 부분이 형광 염료, 효소, 기질, 생물발광 물질, 방사성 물질, 또는 화학발광 물질인 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  60. 제 58항에 있어서, 상기 기능성 부분이 스트렙타비딘, 아비딘, 비오틴, 세포독소, 세포독성제 또는 방사성 물질인 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편.
  61. 제 50항의 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편을 포함하는, 전신 피로, 운동 유발 피로, 암 관련 피로, 염증 질병 관련 피로, 만성 피로 증후군, 암 관련 악액질, 심장 관련 악액질, 호흡 관련 악액질, 신장 관련 악액질, 연령 관련 악액질, 류머티스 관절염, 전신홍반루푸스(SLE), 전신 소아 특발성 관절염, 건선, 건선성 관절병증, 강직성 척추염, 염증성 장질병(IBD), 류머티스성 다발성 근육통, 거세포 동맥염, 자가면역 혈관염, 이식편대숙주병(GVHD), 쇼그렌 증후군, 성인형 스틸병, 류머티스 관절염, 전신 소아 특발성 관절염, 골관절염, 골다공증, 골의 파제트병, 골관절염, 다발성 골수종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 전립선암, 백혈병, 신장 세포암, 다중심 캐슬만씨 병, 난소암, 암 화학요법에서의 약물 내성, 암 화학요법 독성, 허혈성 심질환, 죽상경화증, 비만, 당뇨, 천식, 다발성 경화증, 알츠하이머병, 뇌혈관질환, 열, 급성기 반응, 알레르기, 빈혈, 염증의 빈혈, 고혈압, 우울증, 만성 질환과 관련된 우울증, 혈전증, 혈소판증가증, 급성 심부전, 대사 증후군, 유산, 비만, 만성 전립선염, 사구체신염, 골반 염증성 질환, 재관류 손상, 이식 거부, 이식편대숙주병(GVHD), 조류 인플루엔자, 천연두, 범유행성 인플루엔자, 성인성 호흡곤란증후군(ARDS), 중증급성호흡증후군(SARS), 패혈증 또는 전신 염증 반응 증후군(SIRS)으로부터 선택된 증가된 IL-6과 관련된 질병 또는 장애의 증상을 개선시키거나 감소시키기 위한 약제 조성물.
  62. 제 61항에 있어서, IL-6과 관련된 질병 또는 장애가 암 관련 피로, 악액질 또는 관절염인 약제 조성물.
  63. (ⅰ) 프로모터 및 신호 서열에 작동가능하게 연결된, 제 1항 내지 제 4항 및 제 11항 내지 제 12항 및 제 44항 내지 제 48항 중 어느 한 항의 항-인간 IL-6 항체 또는 항-인간 IL-6 항체 단편을 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리누클레오티드를 함유하는 하나 이상의 발현 벡터를 일배수체(haploid) 효모 세포에 도입시키는 단계;
    (ⅱ) 메이팅(mating) 또는 스페로플라스트(spheroplast) 융합에 의해 상기 일배수체 효모 세포로부터 다배수체 효모 세포를 생성시키는 단계;
    (ⅲ) 상기 항체 또는 항체 단편을 안정적으로 발현시키는 다배수체 효모 세포를 선택하는 단계; 및
    (ⅳ) 10-25 mg/리터 이상의 상기 항체 또는 항체 단편을 배양 배지로 안정적으로 발현시키는 상기 다배수체 효모 세포로부터 안정적인 다배수체 효모 배양물을 생성시키는 단계를 포함하는,
    10-25 mg/리터 이상의 상기 항체 또는 항체 단편을 배양 배지로 안정적으로 발현시키고 분비하는 다배수체 효모 배양물에서 상기 항체 또는 항체 단편을 제조하는 방법.
  64. 제 63항에 있어서, 상기 효모가 아륵시오지마(Arxiozyma); 아스코보트리오지마(Ascobotryozyma); 시테로마이세스(Citeromyces); 데바리오마이세스(Debaryomyces); 데케라(Dekkera); 에레모테슘(Eremothecium); 이사첸키아(Issatchenkia); 카자크스타니아(Kazachstania); 클루이베로마이세스(Kluyveromyces); 코다마에아(Kodamaea); 로데로마이세스(Lodderomyces); 파키솔렌(Pachysolen); 피키아(Pichia); 사카로마이세스(Saccharomyces); 사투르니스포라(Saturnispora); 테트라피시스포라(Tetrapisispora); 토룰라스포라(Torulaspora); 윌리옵시스(Williopsis); 또는 자이고사카로마이세스(Zygosaccharomyces)의 속(genus)으로부터 선택된 것인 방법.
  65. 제 64항에 있어서, 상기 효모 속이 피키아인 방법.
  66. 제 65항에 있어서, 상기 피키아 종이 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 피키아 메타놀리카(Pichia methanolica), 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha) 또는 피키아 앙구스타(Pichia angusta)로부터 선택된 것인 방법.
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