KR101494734B1

KR101494734B1 - 단백질 키나제 ｂ 억제제로서 피롤로[2,3-ｄ]피리미딘 유도체

Info

Publication number: KR101494734B1
Application number: KR1020107010107A
Authority: KR
Inventors: 폴 데이비드 존슨; 앤드류 리치; 리차드 윌리엄 아더 루크; 즈빙뉴 스탠리 마투지악; 제프리 제임스 모리스
Original assignee: 아스트라제네카 아베
Priority date: 2007-10-11
Filing date: 2008-10-09
Publication date: 2015-02-26
Also published as: US20170057969A1; EA201000552A1; JP2011500547A; US20220220116A1; GT201000082A; US20180312516A1; EP2201012B1; MY150059A; DOP2010000103A; HK1143154A1; JP4705695B2; BRPI0818533A2; US11236095B2; US11760760B2; SI2201012T1; CA2701057C; SA08290625B1; IL204721A; PL2201012T3; CN101861321A

Abstract

본 발명은 단백질 키나제 B(PKB)를 통하여 매개되는 질환 또는 의학적 병태, 예컨대 암의 치료 또는 예방에 유용할 수 있는, 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 염의 신규한 군에 관한 것이다:
화학식 I

상기 식에서 Y, Z¹, Z², R¹, R⁴, R⁵ 및 n은 본 명세서에 기재되어 있는 바와 같다. 또한, 본 발명은 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물, 상기 화합물을 사용하여 PKB에 의해 매개되는 질환을 치료하는 방법 및 화학식 I의 화합물의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

단백질 키나제 Ｂ 억제제로서 피롤로[2,3-Ｄ]피리미딘 유도체{PYRROLO[ 2,3-D] PYRIMIDIN DERIVATIVES AS PROTEIN KINASE B INHIBITORS}

본 발명은 단백질 키나제 B(PKB, 또한 AKT로도 알려짐)를 통해 매개되는 질환 또는 의학적 병태의 치료 또는 예방에 유용할 수 있는 이환 복소환의 신규한 군에 관한 것이다. 그러므로, 그러한 화합물은 다수의 상이한 암의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다. 또한, 본 발명은 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물, 상기 화합물의 제조 방법 및 상기 화합물을 사용하는 PKB에 의해 매개되는 질환의 치료 방법에 관한 것이다.

PKB는 성장 인자에 대한 세포 반응을 비롯하여 세포 증식 및 생존에서 중요한 부분을 담당하는 포스파티딜 3-키나제(PI3K) 신호전달 경로의 성분이다. 성장 인자, 예를 들면 표피 성장 인자(EGF)가 세포 표면 수용체 티로신 키나제, 예를 들면 EGF 수용체(EGFR)에 결합하면, 수용체는 이량체화되고, 자가인산화를 수행한다. 이 자가인산화 이벤트는 PI3K의 85 kDa 조절 서브유니트(p85)가 직접 수용체와 상호작용하거나 또는 어댑터 단백질, 예를 들면 성장 인자 수용체 결합 단백질 2(GRB2)를 통하여 수용체와 상호작용할 수 있게 함으로써 PI3K의 110 kDa 촉매적 서브유니트(p110)를 활성화시킨다. 활성화시, p110은 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트(PIP₂)의 인산화를 촉매화하여 포스파티딜이노시톨-3,4,5-트리포스페이트(PIP₃)를 생성하는데, 이는 포스파티딜이노시톨 의존성 키나제 1(PDK1)과 PKB 둘 다를 원형질 막에 리크루팅하는 제2 메신저 분자이고, 여기서 PDK1이 인산화되어 PKB를 활성화시킨다.

세 가지 구별되는 유전자로부터 유도된, 세 가지 이성체의 PKB(PKBα/AKT1, PKBβ/AKT2 및 PKBγ/AKT3)가 알려져 있다. PKBα의 활성화가 세포 증식 및 생존을 매개하는 세포 신호전달 이벤트와 연관있는 반면에, PKBβ의 활성화는 침습, 운동성 및 인슐린 매개 대사 과정과 연관있다. 활성화된 PKB는 프로아폽토시스 인자, 예를 들면 BAD, 프로카스파제-9 및 포크헤드(FKHR) 전사 인자를 비활성화시키고, 항아폽토시스 유전자를 상향조절하는 전사 인자, 예를 들면 고리 AMP 반응 요소 결합 단백질(CREB)을 활성화시킴으로써 세포가 아폽토시스되는 것을 방지한다. 또한, PKB는 MDM2의 인산화에 의해 p53을 비활성화시킴으로써 세포 생존에 기여할 수 있다. 유사하게, 활성화된 PKB는 세포 성장 및 대사에 수반되는 단백질을 활성화시킴으로써, 예를 들면 라파마이신의 포유류 표적(mTOR)의 활성화를 초래하는 경로 및 글리코겐 신타제 키나제-3(GSK3)에 의하여 세포 증식을 유도한다.

그러므로, 세포 증식의 PKB 매개 자극 및 아폽토시스 방지는 종양 형성에 유리하며, PI3K 경로 내 성분들의 유전자 교란은 암에서 흔히 발견된다. 예를 들면, PI3K의 p110 이성체를 코딩하는 유전자의 돌연변이 또는 증폭은 유방암, 장암, 난소암, 두경부암 및 자궁경부 편평 상피 암, 위암 및 폐암, 혈관형성 희돌기교종, 역형성 성상세포종, 다형성 신경교아종 및 수아세포종에서 발견된다. 유사하게, PKB 이성체를 코딩하는 유전자의 돌연변이 증폭 및/또는 과발현은 췌장, 유방 및 난소 종양에서 발견된다. 더욱이, PTEN(PI3K에 대해 역방향 역할을 가져서 PIP₃에서 PIP₂로의 전환을 촉매화하는 포스파타제)을 코딩하는 유전자는 난소암, 직장결장암, 유방암, 신경교종, 흑색종, 폐암, 백혈병 및 림프종을 비롯한 많은 종양 유형에서 비활성되어 있는데, 이는 PKB/AKT의 활성화를 가져온다.

종양 세포 및 생존에서의 PI3K 신호전달 경로의 중요성의 관점에서, PKB 억제제를 비롯하여, 그 경로를 방해하는 임의의 화합물이 암 치료에 유용할 수 있다. PI3K 신호전달 경로 및 종양 형성에서의 그 관여에 관한 상세한 리뷰는 문헌(Hennessy et al ., Nature Reviews / Drug Discovery (December 2005) Vol. 4, 988-1004. and Cully et al., Nature reviews / Cancer (March 2006) Vol. 6, 184-192)에 제공되어 있다.

사람 에테르-아-고-고-관련 유전자(human ether-a-go-go-related gene; hERG)에 의해 코딩되는 전압 의존성 칼륨 채널은 심실 심장 활동 전위의 재분극에서 핵심 역할을 갖는 것으로 믿어진다. 유전자 서열의 유전적인 돌연변이 또는 약리학적 변형에 의해 유발되는 그 활동 변화는 활동 전위 기간의 연장을 초래할 수 있다. 이는 사람에게서 심전도 상에 기록된 QT 간격의 연장과 톨사드 드 포앙(Torsades de Pointes)으로 알려진 전위적으로 치명적인 심장성 부정맥을 초래한다(Vandenberg et al . (2001). Trends Pharmacol. Sci. 22, 240-246). 최근의 조절 지침(CPMP/ICH/539/00)은 hERG 채널에서 테스트 화합물의 효과를 조사하는 시험관내 분석이, 새로운 화학 물질이 사람에게서 심전도 상에 기록된 QT 간격을 연장할 가능성을 예측하는 것을 목적으로 하는 사전 임상 전력의 한 요소일 수 있음을 권장하였다. 그 자체로, hERG 차단 활성의 제거는 임의의 새로운 약물의 개발에서 중요한 고려 사항으로 남아있다.

PI3K 경로를 표적화하는 다수의 화합물이 기술되었다. 예를 들면, WO 2006/046023 및 WO 2006/046024(Astex Therapeutics Limited)에는 단백질 키나제 B(PKB) 및 단백질 키나제 A(PKA)의 활성을 억제 또는 조절하는 푸린, 푸린온 및 데아자푸린온 화합물이 기재되어 있다. 그러나, 다른 공지된 PKB 억제제에 비하여 PKB에 대한 우수한 효능 및/또는 유리한 물성(예컨대, 고 수용성, 고 투과성 및/또는 저 혈장 단백질 결합) 및/또는 바람직한 독성 프로파일(예컨대, 감소된 hERG 차단 불안정성) 및/또는 바람직한 대사 프로파일을 가진 더 개선된 제제에 대한 필요성이 여전히 존재한다.

본출원인은 놀랍게도 특정한 이환 복소환 유도체가 PKB 활성을 억제하는 데 특히 효과적이고, 따라서 PKB 활성이 연루되어 있는 질환 상태, 예를 들면 암의 치료에 유용할 수 있음을 발견하였다.

그러므로, 본 발명의 제1 양태에 따르면, 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:

화학식 I

상기 식에서,

Y는 CH 또는 N을 나타내고;

Z¹-Z²는 C(R⁶)=CH, N=CH 및 C(R⁶)=N 중에서 선택되는 기이며; 여기서

R⁶은 수소, 플루오로, 클로로, 브로모, 시아노, 메틸, 에틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸 또는 시클로프로필을 나타내고;

n은 0, 1 또는 2이며;

R¹은 C_1-4알킬, C_2-4알켄일, C_2-4알킨일, C_1-4알콕시, C_1-4알콕시C_1-4알킬, 플루오로C_1-4알킬, 아미노C_1-4알킬, 히드록시C_1-4알킬, 시아노, 시아노C_1-4알킬, C_3-6시클로알킬, -(CH₂)_pNHCOCH₃, -(CH₂)_pNHSO₂CH₃, -(CH₂)_pNHCONH₂, -(CH₂)_pNHCONR²R³, -(CH₂)_pNR²R³, -(CH₂)_pSO₂NH₂, -(CH₂)_pSO₂NR²R³, -(CH₂)_pCONH₂, -(CH₂)_pCONR²R³ 또는 -(CH₂)_p-R⁷을 나타내며; 여기서

p는 0, 1, 2 또는 3이고;

R²는 수소 또는 C₁ _- ₃알킬을 나타내며;

R³은 C₁ _- ₃알킬을 나타내고;

R⁷은 페닐을 나타내며;

R⁷은 O, N 또는 S 중에서 선택되는 1, 2 또는 3 개의 이종 원자를 포함하는 5원 또는 6원 단환 헤테로아릴 고리를 나타내거나; 또는

R⁷은 O, N 또는 S 중에서 선택되는 1, 2 또는 3 개의 이종 원자를 포함하는 4원, 5원 또는 6원 단환 복소환 고리를 나타내며;

여기서 R⁷은 C₁ _- ₄알킬, 트리플루오로메틸, C₁ _- ₄알콕시, 플루오로, 클로로, 브로모 및 시아노 중에서 선택되는 1 또는 2 개의 치환기로 임의 치환되고;

R⁴는 수소, 플루오로, 클로로, 브로모, 시아노 또는 트리플루오로메틸을 나타내며;

R⁵는 수소, 플루오로, 클로로 또는 브로모를 나타낸다.

본 발명의 한 가지 구체예에서, 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:

화학식 I

상기 식에서,

Y는 CH 또는 N을 나타내고;

Z¹-Z²는 CH=CH, N=CH 및 CH=N 중에서 선택되는 기를 나타내며;

n은 0, 1 또는 2이고;

R¹은 C₁ _- ₄알킬, 아미노C₁ _- ₄알킬, 히드록시C₁ _- ₄알킬, -(CH₂)_pNHCOCH₃, -(CH₂)_qNR²R³ 또는 C₃ _- ₆시클로알킬을 나타내며;

R²는 수소 또는 C₁ _- ₃알킬을 나타내고;

R³은 C₁ _- ₃알킬을 나타내며;

p 및 q는 독립적으로 2 또는 3을 나타낸다.

그러므로, 본 발명의 또 다른 구체예에서, 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:

화학식 I

상기 식에서,

Y는 CH 또는 N을 나타내고;

Z¹-Z²는 CH=CH, N=CH 및 CH=N 중에서 선택되는 기를 나타내며;

R¹은 C₁ _- ₄알킬, 아미노C₁ _- ₄알킬 또는 C₃ _- ₆시클로알킬을 나타내고;

n은 0, 1 또는 2이다.

용어 "C₁ _- ₄알킬"은 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는, 1 내지 4 탄소 원자 길이의 포화 탄소쇄를 의미하는 것으로 한다. 그러나, "프로필"과 같은 개별 알킬기를 언급하는 경우, 직쇄형만을 특정하며, t-부틸과 같은 개별 분지쇄 알킬기를 언급하는 경우, 분지쇄형만을 특정한다. 예를 들면, "C₁ _- ₄알킬"은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필 및 t-부틸을 포함한다.

용어 "C₂ _- ₄알켄일"은 직쇄 또는 분지쇄일 수 있고, 하나 이상의 탄소 대 탄소 이중 결합을 함유하는, 2 내지 4 탄소 원자 길이의 불포화 탄소쇄를 의미하는 것으로 한다. 그러나, "프로펜일"과 같은 개별 알킬기를 언급하는 경우, 직쇄형만을 특정하며, tert-부텐일과 같은 개별 분지쇄 알킬기를 언급하는 경우, 분지쇄형만을 특정한다. 예를 들면, "C₂ _- ₄알켄일"은, 한정하는 것은 아니지만, 에텐일, 프로펜일, 이소프로펜일, 부텐일 및 tert-부텐일을 포함한다.

용어 "C₂ _- ₄알킨일"은 직쇄 또는 분지쇄일 수 있고, 하나 이상의 탄소 대 탄소 삼중 결합을 함유하는, 2 내지 4 탄소 원자 길이의 불포화 탄소쇄를 의미하는 것으로 한다. 그러나, "프로핀일"과 같은 개별 알킬기를 언급하는 경우, 직쇄형만을 특정하며, tert-부틴일과 같은 개별 분지쇄 알킬기를 언급하는 경우, 분지쇄형만을 특정한다. 예를 들면, "C₂ _- ₄알킨일"은, 한정하는 것은 아니지만, 에틴일, 프로핀일, 이소프로핀일, 부틴일 및 tert-부틴일을 포함한다.

용어 "C₁ _- ₄알콕시"는 직쇄 또는 분지쇄일 수 있고, 산소에 연결된, 1 내지 4 탄소 원자 길이의 포화 탄소쇄를 의미하는 것으로 한다. 예를 들면, "C₁ _- ₆알콕시"는, 한정하는 것은 아니지만, 메톡시, 에톡시, 프로폭시 및 부톡시를 포함한다.

용어 "C₁ _- ₄알콕시C₁ _- ₄알킬"은 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는, 1 내지 4 개의 탄소 원자 길이의 포화 탄소쇄가 산소를 경유하여 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는, 1 내지 4 개의 탄소 길이의 다른 포화 탄소쇄에 연결되어 있는 것을 의미하는 것으로 한다. 예를 들면, "C₁ _- ₄알콕시C₁ _- ₄알킬"은, 한정하는 것은 아니지만, 메톡시에틸, 메톡시프로필, 에톡시프로필, 프로폭시에틸 및 부톡시프로필을 포함한다.

용어 "플루오로C₁ _- ₄알킬"은 수소 원자 중 하나 이상이 플루오르로 대체된, 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는, 1 내지 4 탄소 원자 길이의 포화 탄소쇄를 의미하는 것으로 한다. 예를 들면, "플루오로C₁ _- ₄알킬"은, 한정하는 것은 아니지만, 플루오로메틸, 플루오로에틸, 플루오로프로필, 플루오로이소프로필, 플루오로부틸, 플루오로이소부틸, 플루오로-tert-부틸, 트리플루오로메틸, 펜타플루오로에틸, 헵타플루오로프로필 및 노나플루오로부틸을 포함한다.

용어 "아미노C₁ _- ₄알킬"은 한 개의 1차 아미노기를 포함하는, 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는, 1 내지 4 탄소 원자 길이의 포화 탄소쇄를 의미하는 것으로 한다. 예를 들면, "아미노C₁ _- ₄알킬"은 아미노메틸, 아미노에틸, 2-아미노프로필, 3-아미노프로필, 1-아미노이소프로필 및 4-아미노부틸을 포함한다.

용어 "히드록시C₁ _- ₄알킬"은 히드록시기를 포함하는, 직쇄 또는 분지쇄일 수 있는, 1 내지 4 탄소 원자 길이의 포화 탄소쇄를 의미하는 것으로 한다. 예를 들면, "히드록시C_1- ₄알킬"은 히드록시메틸, 히드록시에틸, 2-히드록시프로필, 3-히드록시프로필, 1-히드록시이소프로필 및 4-히드록시부틸을 포함한다.

용어 "C₃ _- ₆시클로알킬"은 포화 3 내지 6원 단환 탄소환을 의미하는 것으로 한다. 예를 들면, "C₃ _- ₆시클로알킬"은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실을 포함한다.

용어 "헤테로아릴 고리"는 고리 탄소 원자, 또는 질소로부터의 결합이 가능한 경우 고리 질소 원자에 의해 연결된(예를 들면, 피리딘 고리의 질소에 결합하는 것은 가능하지 않지만, 피라졸 고리의 1-질소를 통한 결합은 가능함), 독립적으로 질소, 산소 또는 황 중에서 선택되는 1, 2 또는 3 개의 이종 원자를 포함하는 5원 또는 6원의 완전 불포화 방향족 단환 고리를 의미하는 것으로 한다. 5원 또는 6원 헤테로아릴 고리의 예는, 한정하는 것은 아니지만, 피롤, 푸란, 이미다졸, 트리아졸, 테트라졸, 피라졸, 피리미딘, 피리다진, 피리딘, 피라졸, 이소옥사졸, 옥사졸, 1,2,4-옥사디아졸, 이소티아졸, 티아졸, 1,2,4-트리아졸 및 티오펜을 포함한다.

용어 "복소환 고리"는 고리 탄소 원자 또는 고리 질소 원자에 의해 연결된, 질소, 산소 또는 황 중에서 선택되는 1, 2 또는 3 개의 이종 원자를 포함하는 4원, 5원 또는 6원의 완전 포화 또는 부분 포화 단환 고리를 의미하는 것으로 한다. 4원, 5원 또는 6원 복소환 고리의 예는 아제티딘, 테트라히드로푸란, 테트라히드로피란, 피롤린, 피롤리딘, 티아졸리딘, 모르폴린, 피페리딘, 피페라진, 디히드로피리딘, 디히드로피리미딘 및 아제판을 포함한다.

본 발명의 추가 구체예에서, 하기 단락 (1) 내지 (26) 중의 Y, Z¹-Z², R¹, R⁴, R⁵, R⁶, n 및 p의 하기 정의 각각은 필요에 따라서 개별적으로 또는 화학식 I, IA 또는 IB의 가장 넓은 정의를 한정하기 위한 하기 정의 중 다른 하나와 조합하여 사용할 수 있다.

(1) Y는 N을 나타낸다;

(2) Z¹-Z²는 CH=CH를 나타낸다;

(3) Z¹-Z²는 C(Cl)=CH를 나타낸다;

(4) Z¹-Z²는 C(Br)=CH를 나타낸다;

(5) R¹은 C₁ _- ₄알킬을 나타낸다;

(6) R¹은 아미노C₁ _- ₄알킬을 나타낸다;

(7) R¹은 히드록시C₁ _- ₄알킬을 나타낸다;

(8) R¹은 C₃ _- ₆시클로알킬을 나타낸다;

(9) R¹은 C₁ _- ₄알콕시C₁ _- ₄알킬, 플루오로C₁ _- ₄알킬, 아미노C₁ _- ₄알킬, 히드록시C₁ _- ₄알킬, 시아노C₁ _- ₄알킬, C₃ _- ₆시클로알킬, -(CH₂)_pNHCOCH₃, -(CH₂)_pNHSO₂CH₃, -(CH₂)_pNHCONH₂, -(CH₂)_pNHCONR²R³, -(CH₂)_pNR²R³, -(CH₂)_pSO₂NH₂, (CH₂)_pCONH₂, -(CH₂)_pCONR²R³ 또는 -(CH₂)_p-R⁷를 나타낸다;

(10) R¹은 -(CH₂)p-R⁷을 나타내며, 여기서 R⁷은 페닐, 피페리딘일, 피페라진일, 피롤리딘일, 모르폴린일, 이미다졸일, 이소옥사졸일, 피라졸일 및 티아졸일 중에서 선택되고, R⁷은 단일 메틸기로 임의 치환된다;

(11) R¹은 히드록시에틸을 나타낸다;

(12) n은 0이다;

(13) n은 1이다;

(14) n은 1 또는 2이다;

(15) n은 0 또는 1이다;

(16) p는 1, 2 또는 3이다;

(17) R⁴는 클로로, 브로모 또는 시아노를 나타낸다;

(18) R⁴는 클로로, 브로모를 나타낸다;

(19) R⁴는 클로로를 나타낸다;

(20) R⁴는 브로모를 나타낸다;

(21) R⁵는 수소를 나타낸다;

(22) R⁵는 클로로를 나타낸다;

(23) R⁶은 수소를 나타낸다;

(24) R⁶은 메틸을 나타낸다;

(25) R⁶은 디플루오로메틸을 나타낸다;

(26) R⁶은 트리플루오로메틸을 나타낸다;

본 발명의 다른 구체예에 따르면, 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(R)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-((4-클로로페닐)(시클로프로필)메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(2-아미노-1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-(아미노에틸)-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(R)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

N-(3-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)프로필)-4-아미노-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(R)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-(아미노메틸)-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(3-아미노-1-(4-클로로페닐)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(R)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(R)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(R)-4-(아미노에틸)-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-시아노페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-1-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(3-히드록시-1-페닐프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(9H-푸린-6-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-(아미노메틸)-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-브로모페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-4-(디메틸아미노)부틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디에틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(4-클로로페닐)(페닐)메틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[2-아미노-1-(4-클로로페닐)-2-옥소에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-1-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-1-(5-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-1-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필]피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필]-1-(5-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-1-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필]-1-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-1-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-히드록시-3-메틸부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-시아노페닐)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(3-클로로페닐)-3-히드록시프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-N-{(1S)-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에틸}피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1R)-1-(4-브로모페닐)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-2-페닐에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[1-(4-플루오로페닐)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(4-클로로페닐)(시아노)메틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-페닐에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-4-피롤리딘-1-일부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-4-모르폴린-4-일부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-4-피페리딘-1-일부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-4-피페리딘-1-일부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1R)-1-(4-클로로페닐)-4-피페리딘-1-일부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-(4-메틸피페라진-1-일)프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-모르폴린-4-일프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-피페리딘-1-일프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-피페라진-1-일프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-(1H-이미다졸-1-일)프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-피롤리딘-1-일프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-술파모일에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

N-(2-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)에틸)-4-아미노-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-(1H-이미다졸-2-일)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-2-(3-메틸이소옥사졸-5-일)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-2-(티아졸-2-일)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)-3-옥소프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-메톡시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-술파모일프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(3-아미노-1-(4-클로로페닐)-3-옥소프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-우레이도프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드;

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-시아노에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드; 또는

4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(메틸술파모일아미도)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드.

상기 정의된 화학식 I의 화합물이 비대칭 탄소 원자에 의해 광학적 활성 형태 또는 라세미 형태로 존재한다면, 본 발명은 그 정의 내에 PKB 활성을 억제하는 능력을 가진 임의의 그러한 광학적 활성 형태 또는 라세미 형태를 포함하는 것으로 이해해야 한다. 광학적 활성 형태의 합성은 당업계에 널리 알려진 유기 화학의 표준 기술, 예를 들면 광학적 활성 출발 물질로부터 합성하거나, 또는 라세미 형태를 분해함으로써 수행할 수 있다. 라세미 화합물 및 이의 라세미 중간체는 본 명세서에서 편평한 구조로 도시된 반면에, 입체 특이적 화합물 및 이의 입체 특이적 중간체는 적절한 입체화학 표지로 도시되어 있다.

또한, 본 발명은 PKT 활성의 억제제인 화학식 I의 화합물의 임의의, 그리고 모든 호변이상체에 관한 것이다.

본 발명의 한 가지 구체예에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 IA에 도시된 구조를 가진다:

화학식 IA

상기 식에서, Y, Z¹, Z², R¹, R⁴, R⁵ 및 n은 상기 정의된 바와 같다.

본 발명의 다른 구체예에서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 IB에 도시된 구조를 가진다:

화학식 IB

화학식 I의 화합물에 대한 본 명세서에서의 언급은 동일하게 화학식 I, IA 또는 IB의 화합물과 관련있는 것으로 이해해야 한다.

본 발명의 한 가지 구체예에서, 하기 화학식 IA의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:

화학식 IA

상기 식에서,

Y는 CH 또는 N을 나타내고;

Z¹-Z²는 CH=CH, N=CH 및 CH=N 중에서 선택되는 기를 나타내며;

n은 0, 1 또는 2이고;

R²는 수소 또는 C₁ _- ₃알킬을 나타내고;

R³은 C₁ _- ₃알킬을 나타내며;

p 및 q는 독립적으로 2 또는 3을 나타낸다.

그러므로, 본 발명의 또 다른 구체예에서, 하기 화학식 IA의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:

화학식 IA

상기 식에서,

Y는 CH 또는 N을 나타내고;

Z¹-Z²는 CH=CH, N=CH 및 CH=N 중에서 선택되는 기를 나타내며;

n은 0, 1 또는 2이다.

본 발명의 한 가지 구체예에서, 화학식 I, IA 또는 IB의 화합물이 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드 이외의 것인, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I, IA 또는 IB의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.

본 발명의 화합물 I의 적절한 약학적으로 허용 가능한 염은, 예를 들면 충분히 염기성인 본 발명의 화합물의 산 부가 염, 예컨대 무기산 또는 유기산, 예를 들면 염산, 브롬산, 황산, 인산, 트리플루오로아세트산, 시트르산 또는 말레산과의 산 부가 염이다.

본 발명의 특정한 화합물이 용매화 형태, 예를 들면 수화 형태, 뿐만 아니라 비용매화 형태로 존재할 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명은 PKB 활성의 억제제인 모든 그러한 용매화 형태를 포함함을 이해해야 한다.

화학식 I의 화합물은 사람 또는 동물 체내에서 분해되어 화학식 I의 화합물을 제공하는 프로드러그 형태로 투여될 수 있다. 프로드러그의 예는 화학식 I의 화합물의 생체내 가수분해 가능한 에스테르를 포함한다. 다양한 형태의 프로드러그가 당업계에 알려져 있다. 그러한 프로드러그의 예에 대해서 하기 문헌들을 참조할 수 있다:

a) Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985) 및 Methods in Enzymology, Vol. 42, p. 309-396, edited by K. Widder, et al. (Academic Press, 1985);

b) A Textbook of Drug Design and Development, edited by Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5 "Design and Application of Prodrugs", by H. Bundgaard p. 113-191 (1991);

c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38 (1992);

d) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, 285 (1988); 및

N. Kakeya, et al., Chem Pharm Bull, 32, 692 (1984).

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 명세서에 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 약학적으로 허용 가능한 희석제 또는 담체와 함께 포함하는 약학 조성물이 제공된다.

본 발명의 조성물은 경구용(예컨대, 정제, 로젠지, 경질 또는 연질 캡슐, 수성 또는 유성 현탁액, 에멀션, 분산성 분말 또는 과립, 시럽 또는 엘릭서), 국소용(예컨대, 크림, 연고, 겔 또는 수성 또는 유성 용액 또는 현탁액), 흡입 투여용(예컨대, 미분말 또는 액상 에어로졸), 통기 투여용(예컨대, 미분말) 또는 비경구 투여용(예컨대, 정맥내, 피하, 근육내 투여를 위한 멸균 수성 또는 유성 용액 또는 장내 투여를 위한 좌제)에 적절한 형태일 수 있다.

본 발명의 조성물은 당업계에 널리 알려진 통상의 약학 부형제를 사용하여 용이한 절차에 의해 얻을 수 있다. 따라서, 경구용 조성물은, 예를 들면 1종 이상의 착색제, 감미제, 향미제 및/또는 보존제를 함유할 수 있다.

보통, 화학식 I의 화합물은 온혈 동물에게 동물 체면적 ㎡당 5 내지 5000 mg 범위, 즉 대략 0.1 내지 100 mg/kg 범위로 투여되며, 이는 일반적으로 치료학적 유효 투여량을 제공한다. 정제 또는 캡슐과 같은 단위 제형은 대체로 1 내지 250 mg의 활성 성분을 함유한다. 1 내지 50 mg/kg 범위의 1일 투여량, 예를 들면 1일 2회 4 내지 7 mg/kg을 사용하는 것이 바람직하다. 그러나, 1일 투여량은 치료하고자 하는 숙주, 특정한 투여 경로 및 치료하고자 하는 질환의 중증도에 따라 불가피하게 달라질 것이다. 따라서, 임의의 특정 환자를 치료하는 담당의가 최적의 투여량을 결정할 것이다.

예를 들면, 경구 투여에 적절한 본 발명의 약학 조성물은 0.5% 히드록시프로필메틸셀룰로스(HPMC) 중의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염(예컨대, (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드) 1 내지 200 mg/ml를 포함할 수 있다.

본 명세서의 문맥에서, 용어 "요법"은 달리 언급하지 않는 한, "예방"을 포함한다. 용어 "치료" 및 "치료학적으로"는 이에 부응해서 해석되어야 한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "치료"는 징후 중 하나, 일부 또는 전부를 완전히 또는 부분적으로 완화하거나, 잠재적인 병리를 보정하거나 보충하기 위하여 질환을 다루는 보통의 일상적인 의미를 갖는 것으로 한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "예방"은 보통의 일상적인 의미를 갖는 것으로 하며, 질환의 발병을 방지하는 1차 예방과, 질환이 이미 발병하였고, 환자를 그 질환의 악화 또는 격화, 또는 그 질환과 연관된 새로운 징후의 발병에 대해서 보호하는 2차 예방을 포함한다.

이의 PKB 억제 활성의 결과로서, 본 발명의 화학식 I의 화합물은 PKB 활성에 의해 단독으로 또는 부분적으로 매개되는 질환 또는 의학적 병태, 예를 들면 암의 치료에 유용할 것으로 기대된다. 본 발명의 화학식 I의 화합물을 사용하여 치료될 수 있는 암의 종류는, 한정하는 것은 아니지만, 난소암, 자궁경부암, 직장결장암, 유방암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 흑색종, 전립선암, 백혈병, 림프종, 비호지킨스 림프종, 위암, 폐암, 간세포암, 위암, 위장관 간질 종양(GIST), 신경교종, 갑상선암, 담관암, 자궁내막암, 신장암, 역형성 대형 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 다발성 골수종, 흑색종 및 중피종을 포함한다. 유방암, 보다 구체적으로는 내강형 유방암이 특히 본 발명의 화합물을 사용하여 치료될 수 있다.

본 명세서에 언급된 암의 치료 방법을 위하여, 화학식 I의 화합물을 포유류, 특히 사람에게 투여하는 것이 구상된다. 유사하게, 본 명세서에 언급된 암의 치료 방법을 위한 화학식 I의 화합물의 용도에 대하여, 화학식 I의 화합물을 포유류, 특히 사람에게 투여하는 것이 구상된다.

그러므로, 본 발명의 다른 양태에 따르면, 약제로서 사용하기 위한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, PKB를 통하여 매개되는 질환의 치료에서의 용도를 위한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이 제공된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, PKB를 통해 매개되는 상기 질환은 암이다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 암은 난소암, 자궁경부암, 직장결장암, 유방암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 흑색종, 전립선암, 백혈병, 림프종, 비호지킨스 림프종, 위암, 폐암, 간세포암, 위암, 위장관 간질 종양(GIST), 신경교종, 갑상선암, 담관암, 자궁내막암, 신장암, 역형성 대형 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 다발성 골수종, 흑색종 및 중피종 중에서 선택된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, 상기 암은 유방암, 비호지킨스 림프종, 췌장암, 간세포암, 위암, 전립선암 및 폐암 중에서 선택된다. 한 가지 특정 구체예에서, 상기 암은 유방암, 보다 구체적으로는 내강형 유방암이다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, PKB를 통하여 매개되는 질환의 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, PKB를 통해 매개되는 상기 질환은 암이다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 암은 난소암, 자궁경부암, 직장결장암, 유방암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 흑색종, 전립선암, 백혈병, 림프종, 비호지킨스 림프종, 위암, 폐암, 간세포암, 위암, 위장관 간질 종양(GIST), 신경교종, 갑상선암, 담관암, 자궁내막암, 신장암, 역형성 대형 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 다발성 골수종, 흑색종 및 중피종 중에서 선택된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, 상기 암은 유방암, 비호지킨스 림프종, 췌장암, 간세포암, 위암, 전립선암 및 폐암 중에서 선택된다. 한 가지 특정 구체예에서, 상기 암은 유방암, 보다 구체적으로는 내강형 유방암이다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 암 치료를 위한 약제의 제조를 위한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도가 제공된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, 상기 암은 난소암, 자궁경부암, 직장결장암, 유방암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 흑색종, 전립선암, 백혈병, 림프종, 비호지킨스 림프종, 위암, 폐암, 간세포암, 위암, 위장관 간질 종양(GIST), 신경교종, 갑상선암, 담관암, 자궁내막암, 신장암, 역형성 대형 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 다발성 골수종, 흑색종 및 중피종 중에서 선택된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, 상기 암은 유방암, 비호지킨스 림프종, 췌장암, 간세포암, 위암, 전립선암 및 폐암 중에서 선택된다. 한 가지 특정 구체예에서, 상기 암은 유방암, 보다 구체적으로는 내강형 유방암이다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 암 치료를 위한, 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 사용 방법이 제공된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, 상기 암은 난소암, 자궁경부암, 직장결장암, 유방암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 흑색종, 전립선암, 백혈병, 림프종, 비호지킨스 림프종, 위암, 폐암, 간세포암, 위암, 위장관 간질 종양(GIST), 신경교종, 갑상선암, 담관암, 자궁내막암, 신장암, 역형성 대형 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 다발성 골수종, 흑색종 및 중피종 중에서 선택된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, 상기 암은 유방암, 비호지킨스 림프종, 췌장암, 간세포암, 위암, 전립선암 및 폐암 중에서 선택된다. 한 가지 특정 구체예에서, 상기 암은 유방암, 보다 구체적으로는 내강형 유방암이다.

본 발명의 또 다른 양태에 따르면, PKB의 억제가 유리한 질병의 치료가 필요한 사람에게 상기 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 투여하는 단계를 포함하는, PKB의 억제가 유리한 질환을 가진 사람을 치료하는 방법이 제공된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, PKB의 억제가 유리한 질환은 암이다. 본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 암은 난소암, 자궁경부암, 직장결장암, 유방암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 흑색종, 전립선암, 백혈병, 림프종, 비호지킨스 림프종, 위암, 폐암, 간세포암, 위암, 위장관 간질 종양(GIST), 신경교종, 갑상선암, 담관암, 자궁내막암, 신장암, 역형성 대형 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병(AML), 다발성 골수종, 흑색종 및 중피종 중에서 선택된다. 본 발명의 한 가지 구체예에서, 상기 암은 유방암, 비호지킨스 림프종, 췌장암, 간세포암, 위암, 전립선암 및 폐암 중에서 선택된다. 한 가지 특정 구체예에서, 상기 암은 유방암, 보다 구체적으로는 내강형 유방암이다.

상기 정의된 항암 치료는 단독 요법으로 적용될 수 있거나, 또는 본 발명의 화합물 이외에 통상의 수술 또는 방사선 요법 또는 화학 요법을 수반할 수 있다. 그러한 화학 요법은 하기 항 종양제 카테고리 중 하나 이상을 포함할 수 있다:

(i) 의료 종양학에서 사용되는 바의 기타 항증식/항신생물 약물 및 이의 조합, 예컨대 알킬화제(예를 들면, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카르보플라틴, 시클로포스파미드, 질소 머스타드, 멜팔란, 클로람부실, 부술판, 테모졸아미드 및 니트로소우레아); 항대사제(예를 들면, 겜시타빈 및 항엽산, 예컨대 5-플루오로우라실 및 테가푸르와 같은 플루오로피리미딘류, 랄티트렉세드, 메토트렉세이트, 시토신 아라비노시드 및 히드록시우레아); 항종양 항생제(예를 들면, 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-c, 닥티노마이신 및 미트라마이신과 같은 안트라시클린류); 항유사분열제(예를 들면, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈과 같은 빈카 알칼로이드류 및 탁솔 및 탁소테레와 같은 탁소이드류 및 폴로키나제 억제제); 및 토포이소머라제 억제제(예를 들면, 에토포시드 및 테니포시드와 같은 에피포도필로톡신류, 암사크린, 토포테칸 및 캄프토테신);

(ii) 세포 성장 억제제, 예컨대 항에스트로겐(예를 들면, 타목시펜, 풀베스트란트, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜 및 요오독시펜), 항안드로겐(예를 들면, 비칼루타미드, 플루타미드, 닐루타미드 및 시프로테론 아세테이트), LHRH 길항제 또는 LHRH 작동제(예를 들면, 고세렐린, 루프로렐린 및 부세렐린), 프로게스토겐(예를 들면, 메게스트롤 아세테이트), 아로마타제 억제제(예를 들면, 아나스트로졸, 레트로졸, 보라졸 및 엑세메스탄) 및 5α-리덕타제, 예컨대 피나스테리드;

(iii) 항침범제(예를 들면, c-Src 키나제 부류 억제제, 예컨대 4-(6-클로로-2,3-메틸렌디옥시아닐리노)-7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에톡시]-5-테트라히드로피란-4-일옥시퀴나졸린(AZD0530; 국제 특허 출원 공개 WO 01/94341) 및 N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-{6-[4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일]-2-메틸피리미딘-4-일}아미노티아졸-5-카르복시아미드(다사티닙, BMS-354825; J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661), 및 메탈로프로테이나제 억제제, 예컨대 마리마스타트, 우로키나제 플라스미노겐 활성화제 수용체 기능의 억제제 또는 헤파라나제에 대한 항체);

(iv) 성장 인자 기능의 억제제: 예를 들면 상기 억제제는 성장 인자 항체 및 성장 인자 수용체 항체(예를 들면, 항-erbB2 항체 트라추주맙[Herceptin™], 항-EGFR 항체 파니투무맙, 항-erbB1 항체 세툭시맙[Erbitux, C225] 및 임의의 성장 인자 또는 성장 인자 수용체 항체(문헌[Stern et al. Critical reviews in oncology/haematology, 2005, Vol. 54, pp11-29]에 개시됨)를 포함함; 또한, 상기 억제제는 티로신 키나제 억제제, 예를 들면 표피 성장 인자 패밀리의 억제제(예를 들면, EGFR 패밀리 티로신 키나제 억제제, 예컨대 N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(게피티닙, ZD1839), N-(3-에틴일페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민(에를로티닙, OSI 774) 및 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(CI1033)), erbB2 티로신 키나제 억제제, 예컨대 라파티닙, 간세포 성장 인자 패밀리의 억제제, 혈소판 유도 성장 인자 패밀리의 억제제, 예컨대 이마티닙, 세린/트레오닌 키나제의 억제제(예를 들면, Ras/Raf 신호전달 억제제, 예컨대 파르네실 트랜스퍼라제 억제제, 예를 들면 소라페닙(BAY 43-9006)), MEK 및/또는 AKT 키나제를 통한 세포 신호전달의 억제제, 간세포 성장 인자 패밀리의 억제제, c-키트 억제제, ab1 키나제 억제제, IGF 수용체(인슐린 유사 성장 인자) 키나제 억제제; 오로라 키나제 억제제(예를 들면, AZD1152, PH739358, VX-680, MLN8054, R763, MP235, MP529, VX-528 및 AX39459) 및 시클린 의존 키나제 억제제, 예컨대 CDK2 및/또는 CDK4 억제제를 포함함;

(v) 항혈관형성제, 예컨대 혈관 내피 성장 인자의 효과를 억제하는 제제(예를 들면, 항 혈관 내피 세포 성장 인자 항체 베바시주맙(Avastin™) 및 VEGF 수용체 티로신 키나제 억제제, 예컨대 4-(4-브로모-2-플루오로아닐리노)-6-메톡시-7-(1-메틸피페리딘-4-일메톡시)퀴나졸린(ZD6474; WO01/32651 중의 실시예 2), 4-(4-플루오로-2-메틸인돌-5-일옥시)-6-메톡시-7-(3-피롤리딘-1-일프로폭시)퀴나졸린(AZD2171; WO00/47212 중의 실시예 240), 바탈라닙(PTK787; WO98/35985) 및 SU11248(수니티닙; WO01/60814), 국제 특허 출원 공개 WO97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 및 WO 98/13354에 개시된 것과 같은 화합물 및 다른 메커니즘에 의해 작동하는 화합물(예를 들면, 리노마이드, 인테그린 ανβ3 기능의 억제제 및 안지오스타틴);

(vi) 혈관 손상제, 예컨대 콤프레타스타틴 A4 및 국제 특허 출원 공개 WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 및 WO 02/08213에 개시된 화합물;

(vii) 안티센스 요법, 예를 들면 상기 열거된 표적을 지향하는 것들, 예컨대 항-ras 안티센스인 ISIS 2503;

(viii) 유전자 요법 접근법, 예를 들면 편위 p53 또는 편위 BRCA1 또는 BRCA2와 같은 편위 유전자를 대체하는 접근법, GDEPT(유전자 지향 효소 프로드러그 요법) 접근법, 예컨대 시토신 데아미나제, 티미딘 키나제 또는 박테리아 니트로리덕타제 효소를 사용하는 접근법, 그리고 화학 요법, 방사선 요법, 예컨대 다중 약물 내성 유전자 요법에 대해 환자의 허용(patient tolerance)을 증가시키는 접근법;

(ix) 면역 요법 접근법, 예를 들면 환자의 종양 세포의 면역원성을 증가시키는 생체외 및 생체내 접근법, 예컨대 인터루킨 2, 인터루킨 4 또는 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자와 같은 시토킨류를 이용한 트랜스펙션, T 세포 아네르기를 감소시키는 접근법, 트랜스펙션된 면역 세포, 예컨대 시토킨 트랜스펙션된 수지상 세포를 사용하는 접근법, 시토킨 트랜스펙션된 종양 세포주를 사용하는 접근법 및 항유전형 항체를 사용하는 접근법.

본 발명의 화합물 또는 이의 염은 그러한 화합물 또는 구조적으로 관련된 화합물의 제조에 적용할 수 있는 것으로 알려진 임의의 공정에 의해 제조할 수 있다. 작용기는 통상의 방법을 사용하여 보호 및 탈보호할 수 있다. 아미노 및 카르복실산 보호기와 같은 보호기(뿐만 아니라 형성 및 궁극적인 탈보호 수단)의 예에 대해서는 문헌(T.W. Greene and P.G.M. Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Second Edition, John Wiley & Sons, New York, 1991)을 참조할 수 있다.

화학식 I의 화합물의 합성을 위한 특정한 공정이 본 발명의 또 다른 양태로서 제공된다. 따라서, 본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 하기 공정 (a), (b), (c) 또는 (d)를 포함하는, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법이 제공된다(여기서, 변수는 달리 정의하지 않는 한, 화학식 I의 화합물에 대해 상기 정의한 바와 같다):

(a) 하기 화학식 II의 산을 하기 화학식 III의 아민과 반응시키는 공정:

(상기 식에서, P¹은 적절한 보호기, 예를 들면 tert-부톡시카르보닐이다);

(b) 하기 화학식 IV의 카르복시아미드를 하기 화학식 V의 이환 복소환과 반응시키는 공정:

(상기 식에서, L₁은 적절한 이탈기, 예를 들면 염소이다);

(c) n이 1인 경우, 하기 화학식 VI의 화합물의 수소화 공정: 또는

(d) R¹이 아미노메틸을 나타내는 경우, 화학식 VII의 화합물의 수소화 공정:

및 그 후, 필요에 따라서:

(i) 화학식 I의 화합물을 화학식 I의 다른 화합물로 전환시키는 단계;

(ii) 임의의 보호기를 제거하는 단계; 및/또는

(iii) 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 형성하는 단계.

화학식 I의 화합물을 화학식 I의 다른 화합물로 전환시키는 방법의 예는 당업자에게 널리 알려져 있으며, 가수분해, 수소화, 가수소분해, 산화 또는 환원과 같은 작용기 상호전환, 및/또는 아미드 또는 금속 촉매화 커플링 또는 친핵성 치환 반응과 같은 표준 반응에 의한 추가 작용기화를 포함한다.

상기 공정 (a), (b), (c) 및 (d)에 대한 특정한 반응 조건은 다음과 같다:

공정 (a) - 화학식 II의 산 및 화학식 III의 아미드는 적절한 커플링제, 예를 들면 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU) 및 적절한 염기, 예를 들면 N,N'-디이소프로필에틸아민(DIPEA)의 존재 하에, 적절한 염기, 예를 들면 디메틸아세트아미드(DMA) 중에서 적절한 온도, 예를 들면 50 내지 70℃, 보다 적절하게는 약 60℃에서 함께 반응시킬 수 있다.

공정 (b) - 화학식 IV의 카르복시아미드 및 화학식 V의 복소환은 적절한 염기, 예를 들면 N,N'-디이소프로필에틸아민(DIPEA)의 존재 하에 적절한 염기, 예를 들면 부탄-1-올 중에서 적절한 온도, 예를 들면 50 내지 70℃, 보다 적절하게는 약 60℃에서 함께 반응시킬 수 있다.

공정 (c) 및 (d) - 적절한 용매, 예를 들면 에탄올에 용해시킨 화학식 VI 또는 VII의 화합물은 적절한 촉매, 예를 들면 Raney^TM 니켈 및 적절한 염기, 예를 들면 수산화암모늄의 존재 하에 수소 분위기 하에서 수소화시킬 수 있다.

화학식 II의 화합물은 하기 반응식 1에 따라서 제조할 수 있다:

반응식 1

(상기 식들에서, P¹은 적절한 보호기, 예를 들면 tert-부톡시카르보닐이고, L¹은 적절한 이탈기, 예를 들면 염소이며, 다른 모든 변수는 상기 정의된 바와 같다)

화학식 IV의 화합물은 하기 반응식 2에 따라서 제조할 수 있다:

반응식 2

(상기 식들에서, P¹ 및 P²는 적절한 보호기, 예를 들면 tert-부톡시카르보닐이고, 다른 모든 변수는 상기 정의된 바와 같다)

화학식 VI의 화합물은 하기 반응식 3에 따라서 제조할 수 있다:

반응식 3

(상기 식들에서, P¹은 적절한 보호기, 예를 들면 tert-부톡시카르보닐이고, 다른 모든 변수는 상기 정의된 바와 같다)

화학식 VII의 화합물은 하기 반응식 4에 따라서 제조할 수 있다:

반응식 4

화학식 III, V, VIII 및 IX의 화합물은 시중에서 구입할 수 있거나, 문헌에 알려져 있거나, 당업계에 공지된 표준 기술에 의해 제조하거나, 또는 본 명세서에 기재된 공정에 따라서 제조할 수 있다.

하기 실시예는 예시 목적이며, 본 출원의 범주를 한정하려는 것은 아니다. 각각의 예시된 화합물은 본 발명의 특정하고 독립적인 양태를 나타낸다. 모든 출발 물질은 시중 구입 가능한 화합물이며, 또는 이들은 문헌 상에 공지되어 있거나, 이들은 당업계에 알려진 표준 공정에 의해 제조된다.

일반적으로, 하기 실시예에 관하여:

(i) 온도는 섭씨(℃)로 제공되며; 조작은 실온 또는 상온, 예컨대 18 내지 25℃ 범위의 온도에서 수행한다.

(ii) 유기 용액은 무수 황산마그네슘 또는 황산나트륨 상에서 건조시켰으며, 용매의 증발은 감압(예컨대 약 600 내지 4000 파스칼; 4.5 내지 30 mmHg) 하에, 60℃ 이하의 욕온으로 회전 증발기를 사용하여 수행하였다.

(iii) 크로마토그래피는 실리카 겔 상의 플래쉬 크로마토그래피를 의미하며, 박층 크로마토그래피(TLC)를 실리카겔 플레이트 상에서 수행하였다.

(iv) 일반적으로, 반응의 경과 후, TLC 및/또는 분석용 LC-MS를 수행하였으며, 반응 시간은 단지 예시를 위해 제공하였다.

(v) 최종 생성물은 적당한 양성자 핵 자기 공명(NMR) 스펙트럼 및/또는 질량 스펙트럼 데이터를 사용하여 분석하였다.

(vi) 수율은 단지 예시를 위해 제공하였으며, 반드시 공들인 프로세스 전개에 의해 얻을 수 있는 것은 아니고, 더 많은 물질이 요구되는 경우 제법을 반복하였다.

(vii) 핵 자기 공명(NMR) 데이터가 제공되는 경우, 이는 달리 설명하지 않는 한 용매로서 과중수소화 디메틸 술폭시드(d₆-DMSO)를 사용하여 500 MHz에서 측정한, 내부 표준으로서 테트라메틸실란(TMS)에 대하여 백만분율(ppm)으로 제공되는, 주요 진단 양성자에 대한 델타 값 형태이며; 다음 약어를 사용하였다: s, 일중항; d, 이중항; t, 삼중항; q, 사중항; m, 다중항; bs, 브로드 일중항.

(viii) 화학 기호는 통상의 의미를 가지며; SI 단위 및 기호를 사용한다.

(ix) 질량 스펙트럼(MS) 및 LC-MS 데이터는 LC-MS 시스템 상에서 생성한 것이며, 여기서 HPLC 구성요소는 일반적으로 Agilent 1100, Waters Alliance HT(2790 & 2795) 장치 또는 HP1100 펌프 및 CTC 오토샘플러를 갖춘 다이오드 어레이로 구성되었고, 산성 용리제(예를 들면, 0-95% 물/아세토니트릴과 50:50 물:아세토니트릴(v/v) 혼합물 중의 1% 포름산 5% 간의 구배를 사용함) 또는 염기성 용리제(예를 들면, 0-95% 물/아세토니트릴과 아세토니트릴 혼합물 중의 0.1% 880 암모니아 5% 간의 구배를 사용함)로 용출시키면서 Phenomenex Gemini C18 5 ㎛, 50 x 2 mm 컬럼(또는 유사한 것) 상에서 실행하였다. 전자 분무(ESI) 양성 및 음성 베이스 피크 강도에 대한 크로마토그램 및 220-300 nm로부터의 UV 총 흡광도 크로마토그램을 생성하였으며, m/z에 대한 값을 제공하는데, 일반적으로 모체 질량을 가리키는 이온만을 보고하며, 달리 언급하지 않는 한, 인용된 값은 양성 이온 모드에 대해서 (M+H)+이고, 음성 이온 모드에 대해서는 (M-H)-이다.

(x) 달리 설명하지 않는 한, 비대칭으로 치환된 탄소 및/또는 황 원자를 함유하는 화합물은 분해하지 않았다.

(xi) 임의의 마이크로파 반응은 Biotage Optimizer EXP 또는 CEM Explorer 마이크로웨이브에서 수행하였다.

(xii) 정제용 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 하기 조건을 사용하여 Gilson 기구 상에서 수행하였다.

컬럼: C18 역상 실리카, 예를 들면 Waters 'Xbridge', 5 ㎛ 실리카, 19 x 100 mm 또는 30 x 100 mm, 용리제로서 극성이 감소하는 용매 혼합물을 사용함(용매 A 대 용매 B의 감소하는 비율)

용매 A: 1% 수산화암모늄을 함유하는 물

용매 B: 아세토니트릴

유속: 28 ml/분 또는 61 ml/분

구배: 각각의 혼합물에 적당하도록 맞춤 - 일반적으로 7-10 분 길이

파장: 254 nm

약어

Boc Tert-부톡시카르보닐

CAS™ 화학 초록 서비스

DCM 디클로로메탄

DIPEA N,N'-디이소프로필에틸아민

DEA 디에틸아민

DMA 디메틸아세트아미드

DMF 디메틸포름아미드

HATU O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트

LCMS 액체 크로마토그래피 질량 스펙트럼

LDA 리튬 디이소프로필아미드

MPLC 중압 액체 크로마토그래피

NMP N-메틸피롤리딘온

OBD 최적 베드 밀도

PTFE 폴리테트라플루오로에틸렌

SCX 강 양이온 교환

SFC 초임계 유체 크로마토그래피

TBME t-부틸 메틸 에테르

TEA 트리에틸아민

TFA 트리플루오로아세트산

THF 테트라히드로푸란

실시예 1: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )에틸)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(362 mg), 1-(4-클로로페닐)에탄아민(172 mg), N-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드(231 mg) 및 1-히드록시벤조트리아졸(163 mg)을 DMF(2 mL) 중에서 질소 하에 16 시간 동안 함께 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(20 mL)와 염수(4 x 20 mL) 사이에 분배하였다. 유기물을 합하고, MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 진공 증발시켰다. 생성된 백색 고형분을 1,4-디옥산(5 mL)에 용해시키고, 1,4-디옥산(5 mL) 중의 HCl 4 M 용액을 가하였다. 생성된 혼합물을 16 시간 동안 교반한 다음, 디에틸 에테르(50 mL)로 희석하였다. 미정제 생성물을 HCl 염으로서 여과 단리하고, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 M 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 이 물질을 용리제로서 물(1% NH₃ 함유) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 LCMS에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드를 백색 고형분(168 mg, 42%)으로서 얻었다.

¹H NMR (d₆-dmso, 400MHz) 1.33-1.49 (m, 5H), 1.84-2.04 (m, 2H), 2.12-2.22 (br s, 2H), 3.54 (t, 2H), 4.39 (t, 2H), 4.81-4.92 (m, 1H), 6.55-6.59 (m, 1H), 7.13-7.18 (m, 1H), 7.31-7.39 (m, 4H), 8.12 (s, 1H), 8.30 (d, 1H), 11.62 (s, 1H).

MS m/e MH+ 399.

실시예 2: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )에틸)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(0.418 g)를 질소 하에 25℃의 DMA(10 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(0.361 g), (S)-1-(4-클로로페닐)에탄아민(0.140 mL) 및 DIPEA(0.524 mL)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 M NH₃/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 그 다음, 이 미정제 물질을 DCM(10 mL) 중의 TFA 20% 용액으로 처리하고, 실온에서 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 M 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 이 물질을 용리제로서 물(1% NH₃ 함유) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 LCMS에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드를 백색 고형분(0.281 g, 70.4%)으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.37 (3H, d), 1.42-1.45 (2H, m), 1.88-2.01 (2H, m), 2.27 (2H, s), 3.49-3.59 (2H, m), 4.34-4.44 (2H, m), 4.83-4.90 (1H, m), 6.57-6.58 (1H, m), 7.14-7.16 (1H, m), 7.32-7.38 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.30 (1H, d), 11.62 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 399.

실시예 3: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(0.209 g)를 질소 하에 25℃의 DMA(10 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(0.181 g), 1-(4-클로로페닐)프로판-1-아민(0.085 g) 및 DMA(10 mL)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 그 다음, 이 미정제 물질을 DCM(10 mL) 중의 TFA 20% 용액으로 처리하고, 실온에서 2 시간 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 이 물질을 용리제로서 물(1% 암모니아 함유) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 LCMS에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드를 백색 고형분(0.138 g, 66.8%)으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 0.87 (3H, t), 1.42-1.55 (2H, m), 1.72-1.79 (2H, m), 1.91-2.05 (2H, m), 2.21 (2H, s), 3.54-3.62 (2H, m), 4.38-4.45 (2H, m), 4.65-4.70 (1H, m), 6.61 (1H, dd), 7.18 (1H, dd), 7.32-7.37 (4H, m), 8.31 (1H, d), 8.12 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 413.

실시예 3A 및 3B: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드 및 (R)-4-아미노-N-(1-(4- 클로 로페닐)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드

라세미 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(실시예 3)를 정제용 키랄-HPLC에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 이성질체 1(첫 번째로 용출됨, 41 mg)을 백색 고형분으로서, 그리고 이성질체 2(두 번째로 용출됨, 41 mg)를 백색 고형분으로서 얻었다. 분석 데이터는 원래의 샘플과 동일하였다. 키랄 분석용 HPLC 분석(20 ㎛ Chiralpak AS(250 mm x 4.6 mm) 컬럼을 사용함, 이소헥산/(EtOH/MeOH 50/50)/TEA 90/10/0.1의 용리제 혼합물, 25℃에서 1 mL/분, EtOH 중의 1 mg/mL 용액 10 ㎕를 주입함)에 따르면, 각각의 거울상 입체 이성질체가 서로 구별되었으며, 거울상 입체 이성질적으로 순수한(e.e = 100%) 것으로 나타났다.

실시예 4: 4-아미노-N-((4- 클로로페닐 )( 시클로프로필 ) 메틸 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(0.228 g)를 25℃의 DMA(10 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(0.181 g), (4-클로로페닐)(시클로프로필)메탄아민(중간체 3)(0.091 g) 및 DIPEA(0.261 mL)에 가하였다. 생성된 용액을 50℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 이 미정제 물질을 디클로로메탄(25 mL)에 현탁시키고, TFA(5 mL)를 가하였다. 반응 혼합물을 1 시간 동안 교반한 다음, 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 미정제 물질을 백색 고형분으로서 얻었다. 이 물질을 저온 메탄올 하에 분쇄하여 4-아미노-N-((4-클로로페닐)(시클로프로필)메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드를 백색 고형분(0.167 g, 79%)으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 0.27-0.37 (2H, m), 0.48-0.52 (2H, m), 1.18-1.24 (1H, m), 1.40-1.48 (2H, m), 1.88-2.02 (2H, m), 2.20 (2H, s), 3.50-3.59 (2H, m), 4.15 (1H, t), 4.36-4.42 (2H, m), 6.57-6.58 (1H, m), 7.14-7.16 (1H, m), 7.35-7.40 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.47 (1H, d), 11.62 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 425.

실시예 5: 4-아미노-N-(2-아미노-1-(4- 클로로페닐 )에틸)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

트리플루오로아세트산(3 mL)을 25℃의 DCM(100 mL) 중의 tert-부틸 4-(2-아미노-1-(4-클로로페닐)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 6)(0.514 g)에 가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 M NH₃/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을, 용리제로서 물(1% NH₃를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 μ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켰다. 그 다음, 이 물질을 DCM 중의 0-10% 메탄올성 암모니아(7 N)의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 더 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(2-아미노-1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드를 무색 검(0.047 g, 11.4%)으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.41-1.51 (2H, m), 1.86-1.94 (2H, m), 1.97-2.05 (2H, m), 2.77-2.86 (2H, m), 3.18 (2H, s), 3.51-3.59 (2H, m), 4.35-4.44 (2H, m), 4.70 (1H, t), 6.58 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.30-7.32 (2H, m), 7.35-7.37 (2H, m), 8.12 (1H, s), 8.41 (1H, s), 11.62 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 414.

실시예 6: (S)-4-( 아미노메틸 )-N-(1-(4- 클로로페닐 )에틸)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

트리플루오로아세트산(2 mL, 25.96 mmol)을 25℃의 DCM(20 mL) 중의 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 13)(0.257 g, 0.5 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 M NH₃/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-10% 7 N 암모니아/MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-(아미노메틸)-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(0.095 g, 46.0%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.39 (3H, d), 1.43-1.50 (4H, m), 2.05-2.14 (2H, m), 2.69 (2H, s), 3.37-3.47 (2H, m), 4.20-4.25 (2H, m), 4.96-5.04 (1H, t), 6.55 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.37 (4H, s), 8.11 (1H, s), 8.49 (1H, d), 11.61 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 413.

실시예 7: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-4- 히드록시부틸 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

트리플루오로아세트산(2 mL, 25.96 mmol)을 20℃의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 17)(140 mg, 0.26 mmol)에 가하고, 생성된 용액을 1 시간 동안 교반하였다. 그 다음, 용액을 메탄올로 희석하고, 10 g SCX 컬럼에 적용하였으며, 메탄올, 이어서 2 N NH₃/MeOH로 용출시켰다. 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 증발 농축시켰으며, 용리제로서 물(1% NH₃를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 μ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(58.0 mg, 50.8%)를 무색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.28-1.51 (4H, m), 1.69-1.80 (2H, m), 1.90-2.03 (2H, m), 3.37-3.41 (2H, m), 3.50-3.58 (2H, m), 4.37-4.43 (3H, m), 4.71-4.76 (1H, m), 6.59 (1H, m), 7.16 (1H, m), 7.36 (4H, m), 8.13 (1H, s), 8.33 (1H, d), 11.64 (1H, s).

MS m/e MH⁺443.

실시예 7A 및 7B: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-4- 히드록시부틸 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드 및 (R)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-4- 히드록시부틸 )-1-(7H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

DIPEA(2.85 mL, 16.0 mmol)를 25℃의 에탄올(15.96 mL) 중의 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸)피페리딘-4-카르복시아미드(중간체 72)(1.04 g, 3.19 mmol) 및 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(0.490 g, 3.19 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 65℃에서 밤새도록 교반하였다. 미정제 생성물을 LCMS에 의해 분석하고, 증발 건조시켰다. 그 다음, 미정제 고형분을, SCX-2 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 메탄올/DCM 중의 20% 7 N 암모니아를 사용하여 컬럼으로부터 생성물을 용출시켰다. 그 다음, 미정제 혼합물을 플래쉬 실리카 크로마토그래피(용리제 DCM 중의 10% 7 N 암모니아/MeOH)에 의해 다시 정제하고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(63.9%)(라세미체)를 미분 백색 고형분으로서 얻었다. 라세미체를 초임계 유체 크로마토그래피(SFC)에 의해 키랄적으로 분해하여 순수한 거울상 입체 이성질체를 각각 272 mg(19%) 및 245 mg(17%)의 수득량으로 얻었다. 두 거울상 입체 이성질체에 대한 NMR 스펙트럼은 동일하였다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO) δ 1.38-1.42 (2H, m), 1.46-1.49 (2H, d), 1.74 (2H, s), 1.92-2.03 (2H, m), 2.19 (2H, s), 3.55-3.58 (2H, d), 4.38 (1H, s), 4.41 (2H, s), 4.75-4.76 (1H, d), 6.59 (1H, s), 7.17 (1H, s), 7.36 (4H, s), 8.15 (1H, s), 8.32-8.34 (1H, d), 11.65 (1H, s, exchange);

MS m/e MH⁺ 443; HPLC t_R = 1.66 min.

실시예 8: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-2- 히드록시에틸 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-히드록시에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 18)(137 mg, 0.27 mmol)를 트리플루오로아세트산(2 mL)으로 처리하였다. 용액을 1 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 감압 농축시켰다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 잔류물을 메탄올 중의 컬럼에 충전하고, 메탄올로 세척하였다. 소정의 생성물을, 메탄올 중의 2 M 암모니아를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-히드록시에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(111 mg, 정량)를 무색 결정 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40-1.49 (2H, m), 1.85-2.09 (2H, m), 3.48-3.69 (4H, m), 4.35-4.48 (2H, m), 4.72-4.81 (1H, m), 4.90-4.96 (1H, m), 6.58 (1H, br, s), 7.12-7.18 (1H, m), 7.30-7.40 (4H, m), 8.13 (1H, s), 8.45-8.53 (1H, m), 11.64 (1H, s) m/z (ESI+) (M+H)+ = 415; HPLC t_R = 1.57 min.

실시예 9: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드 ( E9 )

HCl(디옥산 중의 4 M)(3.00 mL, 12.00 mmol)을 디클로로메탄(20 mL) 중의 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 22)(1.27 g, 2.40 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 PTFE 필터컵을 통하여 여과하고, 미정제 고형분을, 용리제로서 물(1% TFA를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters XTerra C18 컬럼, 5 ㎛ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(0.200 g, 19.4%)를 백색 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.45 (2H, d), 1.86 (1H, d), 1.90-1.93 (1H, m), 2.19 (2H, s), 3.38 (2H, q), 3.51-3.58 (2H, m), 4.35-4.38 (2H, m), 4.53 (1H, t), 4.88 (1H, d), 6.58 (1H, t), 7.16 (1H, t), 7.32-7.38 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.43 (1H, d), 11.63 (1H, s), m/z (ESI+) (M+H)+ = 429; HPLC tR = 1.46 min.

실시예 9 대안의 경로 1: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

N-에틸디이소프로필아민(1.676 mL, 9.62 mmol)을 부탄-1-올(15 mL) 중의 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카르복시아미드(중간체 49)(1 g, 3.21 mmol) 및 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(0.493 g, 3.21 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 물(25 mL)과 포화 염수(25 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(842 mg)를 백색 폼으로서 얻었다. (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-카르복시아미드를 에틸 아세테이트(7 mL) 중에서 18 시간 동안 교반하였다. 고형분을 여과 수집하고, 소량의 에틸 아세테이트로 세척하였으며, 55℃에서 18 시간 동안 진공 오븐 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(0.585 g, 42.5%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

m/z (ES+) (M+H)+ = 429; HPLC tR= 1.60 min.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.39-1.47 (2H, m), 1.80-2.02 (4H, m), 2.17 (2H, s), 3.35-3.40 (2H, m), 3.50-3.59 (2H, m), 4.34-4.41 (2H, m), 4.53 (1H, t), 4.88 (1H, d), 6.57 (1H, m), 7.14-7.16 (1H, m), 7.31-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.42 (1H, d), 11.62 (1H, s)

실시예 9 대안의 경로 2: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

(S)-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올(중간체 47)(2.055 g, 11.07 mmol)을 DMA(40 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(4 g, 11.07 mmol) 및 DIPEA(5.80 mL, 33.20 mmol)에 한번에 가하였다. HATU(4.63 g, 12.18 mmol)를 가하고, 생성된 용액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시킨 다음, EtOAc(300 mL)로 희석하고, 물(50 mL)과 포화 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시키고, 디옥산(40mL)으로 분쇄하여 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 22)(4.82 g, 82%)를 백색 고형분으로서 얻었다. (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 22)(4.82 g, 82%)를 디옥산(40.0 mL) 중에 현탁시키고, 디옥산 중의 4 M염산(7.69 mL, 221.36 mmol)을 가하였다. 반응물을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 3.5 M NH₃/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을, 용리제로서 물(1% NH₃를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 ㎛ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(1.200 g, 25.3%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

m/z (ES+) (M+H)+ = 429; HPLC tR= 1.67 min.

¹H NMR는 앞서의 것과 일치한다.

실시예 10: N-(3- 아세트아미도 -1-(4- 클로로페닐 )프로필)-4-아미노-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

1,4-디옥산 중의 염산(4 M)(0.430 mL, 1.72 mmol)을 20℃의 DCM(4 mL) 중의 tert-부틸 4-(3-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 28)(98 mg, 0.17 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 70 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을, 용리제로서 물(1% NH₃를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters XTerra C18 컬럼, 5 μ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 N-(3-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)프로필)-4-아미노-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(15.00 mg, 18.5%)를 백색 건조 필름으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.42-1.47 (2H, m), 1.79 (3H, s), 1.85 (1H, t), 1.89-1.93 (1H, m), 2.10 (2H, s), 3.00 (2H, t), 3.55 (2H, d), 4.36-4.40 (2H, m), 4.80 (1H, d), 6.58-6.60 (1H, m), 7.16 (1H, t), 7.34-7.39 (4H, m), 7.80 (1H, t), 8.13 (1H, s), 8.39 (1H, s), 11.64 (1H, s) No visible NH2. m/z (ESI+) (M+H)+ = 470; HPLC tR = 1.56 min.

실시예 11: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

염산(1,4-디옥산 중의 4 M, 1.01 mL, 4.05 mmol)을 22℃의 DCM(5 mL) 및 메탄올(2 mL)의 혼합물 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 34)(0.045 g, 0.08 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증발시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 2 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(0.034 g, 92%)를 무색 검으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.57 (2H, m), 1.66 (2H, br.s), 1.81 (1H, m), 2.02 (1H, m), 2.18 (6H, s), 2.18-2.36 (4H, m), 3.67 (3H, m), 4.50 (2H, m), 5.00 (1H, dt), 6.52 (1H, d), 7.05 (1H, d), 7.18 (2H, d), 7.29 (2H, d), 8.33 (1H, s), 9.07 (1H, d), 9.61 (1H, s).

MS m/e MH⁺456

실시예 11A 및 11B: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드 및 (R)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드

라세미 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(실시예 11)(231 mg, 0.51 mmol)를, 초임계 유체 크로마토그래피, 용출 용매 7:3 CO₂/(EtOH + 0.1% DEA)를 사용하여 Chiralpak AD-H SFC(250 mm x 20 mm) 컬럼 상에서 키랄적으로 분리하였다. 첫 번째로 용출된 이성질체에 대한 적절한 분획을 증발시키고, 잔류물을 디에틸 에테르로 분쇄하여 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(59 mg, 25%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.43 (2H, ddd), 1.83 (2H, dt), 1.86-2.01 (2H, m), 2.11 (6H, s), 2.14 (2H, t), 3.56 (2H, ddd), 4.39 (2H, ddd), 4.83 (1H, dt), 6.58 (1H, dd), 7.16 (1H, dd), 7.33 (2H, d), 7.37 (2H, d), 8.13 (1H, s), 8.61 (1H, d), 11.63 (1H, s).

MS m/e MH⁺456.5.

두 번째로 용출된 이성질체에 대한 적절한 분획을 증발시키고, 잔류물을 디에틸 에테르로 분쇄하여 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(43 mg, 19%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.43 (2H, ddd), 1.83 (2H, dt), 1.86-2.01 (2H, m), 2.11 (6H, s), 2.14 (2H, t), 3.56 (2H, ddd), 4.39 (2H, ddd), 4.83 (1H, q), 6.58 (1H, dd), 7.16 (1H, dd), 7.33 (2H, d), 7.37 (2H, d), 8.13 (1H, s), 8.61 (1H, d), 11.63 (1H, s).

MS m/e MH⁺456.4, 458.4

실시예 12: 4-(아미노메틸)-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(106 mg, 0.28 mmol)를 22℃의 NMP(5 mL) 중의 4-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 12)(100 mg, 0.27 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.055 mL, 0.32 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 50℃에서 10 분 동안 교반한 다음, 상온으로 냉각시켰다. 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올(중간체 29)(49.5 mg, 0.27 mmol)을 NMP(2 mL) 중의 용액으로서 가하고, 혼합물을 22℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 디옥산(1 mL) 중의 4 M HCl을 가하고, 혼합물을 22℃에서 24 시간 더 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 DCM 중의 30%(MeOH 중의 2 M NH₃)를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을, 용리제로서 물(1% NH₃를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 μ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 4-(아미노메틸)-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(0.095 g, 81%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.47 (2H, m), 1.80-1.96 (2H, m), 2.09 (2H, m), 2.69 (1H, s), 3.27-3.45 (4H, m), 4.26 (2H, ddd), 5.02 (1H, dd), 6.56 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.33-7.39 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.44 (1H, d), 11.63 (1H, s).

MS m/e MH⁺556

실시예 13: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

TFA(0.7 mL)를 아르곤 하에 디클로로메탄(7 mL) 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 36)(175 mg, 0.33 mmol)의 현탁액에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 제거하고, 반응 혼합물을, 용리제로서 물(0.2% 탄산암모늄을 함유함) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물로 Waters X-bridge 역상 컬럼(C-18, 5 미크론 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(99 mg, 69.8%)를 백색 분말로서 얻었다.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38-1.46 (2H, m), 1.81-1.91 (4H, m), 2.25 (2H, br s), 3.48 (2H, m), 3.35-3.54 (2H, m), 4.35-4.41 (2H, m), 4.57 (1H, t), 4.87 (1H, m), 6.58 (1H, d), 7.16 (1H, d), 7.31-7.37 (4H, m), 8.11 (1H, s), 8.45 (1H, d), 11.65 (1H, s). m/z (ESI+) (M+H)+ = 429; HPLC tR = 1.58 min.

실시예 14: 4-아미노-N-(3-아미노-1-(4- 클로로페닐 )프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

트리플루오로아세트산(0.05 mL)을 아르곤 하에 25℃의 DCM(1 mL) 중의 tert-부틸 4-(3-아미노-1-(4-클로로페닐)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 38)(7.0 mg)에 가하였다. 생성된 현탁액을 25℃에서 2 일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(3-아미노-1-(4-클로로페닐)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드의 디-TFA 염을 부분적으로 고상인 유분(13.0 mg)으로서 얻었다.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.86 (1H, d), 2.01 (2H, m), 2.08 (1H, m) 2.41 (2H, m), 2.69 (2H, m), 2.85 (1H, m), 3.61 (2H, t), 4.63 (2H, t), 5.02 (1H, q), 6.82 (1H, s), 7.36 (1H, t), 7.41 (2H, d), 7.49 (2H, d), 7.93 (3H, s br), 8.32 (1H, s), 8.59 (3H, s br), 8.96 (1H, d).

MS m/e MH⁺ 428.

실시예 15: (R)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

HCl(디옥산 중의 4 M)(0.378 mL, 1.51 mmol)을 DCM(3 mL) 중의 (R)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 42)(0.160 g, 0.30 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시켰다. 미정제 생성물을, 용리제로서 물(1% 암모니아를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters XTerra C18 컬럼, 5 ㎛ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 (R)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(0.051 g, 39.3%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.46 (2H, d), 1.86 (1H, d), 1.90-1.93 (1H, m), 2.10 (2H, m), 3.37 (1H, t), 3.55 (2H, d), 4.40 (2H, d), 4.53 (2H, m), 4.88 (1H, d), 6.58 (1H, t), 7.16 (1H, t), 7.32-7.38 (4H, m), 8.14 (1H, d), 8.43 (1H, d), 11.63 (1H, s) no visible NH2.

MS m/e MH⁺ 429; HPLC tR = 1.46 min.

실시예 16: (R)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )에틸)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(0.418 g, 1.10 mmol)를 질소 하에 25℃의 DMA(10 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(0.361 g, 1 mmol), (R)-1-(4-클로로페닐)에탄아민(0.156 g, 1.00 mmol) 및 DIPEA(0.524 mL, 3.00 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 미정제 물질을 DCM(5 mL) 중의 TFA 10% 용액으로 처리하고, 실온에서 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 7 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을 용리제로서 물(1% 암모니아 함유) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 LCMS에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 (R)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(0.211 g, 52.9%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1.37 (3H, d), 1.39-1.48 (2H, m), 1.86-2.02 (2H, m), 2.19 (2H, s), 3.49-3.58 (2H, m), 4.34-4.43 (2H, m), 4.83-4.91 (1H, m), 6.56-6.59 (1H, m), 7.14-7.16 (1H, m), 7.32-7.38 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.30 (1H, d), 11.62 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 399.

실시예 17: (R)-4-( 아미노메틸 )-N-(1-(4- 클로로페닐 )에틸)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

Raney^® 니켈(293 mg, 1.71 mmol)을 에탄올(30 mL) 중의 (R)-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-4-시아노-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(중간체 45)(466 mg, 1.14 mmol)의 용액에 가하였다. 수산화암모늄(10 mL)을 가하였다. 이 혼합물을 먼저 질소로 퍼지한 다음, 수소 밸룬 하에 두고, 36 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트에 통과시켜 여과하고, 용매를 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-10% 7 N 암모니아/MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (R)-4-(아미노메틸)-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(276 mg, 58.6%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1.38 (3H, d), 1.41-1.51 (2H, m), 1.61 (2H, s), 2.09 (2H, d), 2.68 (2H, s), 3.37-3.50 (2H, m), 4.18-4.28 (2H, m), 4.95-5.04 (1H, m), 6.56 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.26-7.50 (4H, m), 8.11 (1H, s), 8.52 (1H, d), 11.66 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 413.

실시예 18: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 시아노페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

(S)-4-(1-아미노-3-히드록시프로필)벤조니트릴(중간체 46)(195 mg, 1.11 mmol)을 DMA(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(400 mg, 1.11 mmol) 및 DIPEA(0.580 mL, 3.32 mmol)에 한번에 가하였다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(463 mg, 1.22 mmol)를 가하고, 생성된 용액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시킨 다음, EtOAc(300 mL)로 희석하고, 물(50 mL)과 포화 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-시아노페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(267 mg, 46.4%)를 백색 고형분으로서 얻었다. (S)-tert-부틸 4-(1-(4-시아노페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(267 mg, 0.51 mmol)를 디옥산(5.00 mL) 중에 현탁시키고, 디옥산 중의 4 M염산(0.769 mL, 22.14 mmol)을 가하였다. 반응물을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 3.5 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 그 다음, 생성물을, 용리제로서 물(1% 암모니아를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 μ 실리카, 21 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-시아노페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(70.0 mg, 15.1%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36-1.47 (2H, m), 1.80-2.01 (4H, m), 2.17 (2H, s), 3.39 (2H, q), 3.52-3.59 (2H, m), 4.34-4.40 (2H, m), 4.58 (1H, t), 4.94 (1H, s), 6.57 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.50 (2H, d), 7.76-7.79 (2H, d), 8.12 (1H, s), 8.52 (1H, s), 11.61 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 420.

실시예 19: (S)-4-아미노-1-(5- 브로모 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)-N-(1-(4-클 로 로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4- 카르복시아미드

DIPEA(0.670 mL, 3.85 mmol)를 부탄-1-올(6 mL) 중의 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카르복시아미드(중간체 49)(400 mg, 1.28 mmol) 및 5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(중간체 50)(298 mg, 1.28 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 물(25 mL)과 포화 염수(25 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 그 다음, 생성물을, 용리제로서 물(1% 암모니아를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 μ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시키고, 에틸 에테르로 분쇄하여 (S)-4-아미노-1-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카르복시아미드(70.0 mg, 10.8%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.41-1.50 (2H, m), 1.81-1.92 (2H, m), 2.04-2.20 (4H, m), 3.37-3.44 (4H, m), 3.91 (2H, t), 4.54 (1H, t), 4.90 (1H, m), 7.33-7.38 (4H, m), 7.50 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.47 (1H, d), 12.18 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 510.

실시예 20: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(1H- 피라졸로[3,4-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

DIPEA(0.419 mL, 2.41 mmol)를 부탄-1-올(5 mL) 중의 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카르복시아미드(중간체 49)(250 mg, 0.80 mmol) 및 4-클로로-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘(124 mg, 0.80 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 물(25 mL)과 포화 염수(25 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(112 mg, 32.5%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.49 (2H, t), 1.79-2.01 (4H, m), 3.39 (2H, m), 3.62 (2H, s), 4.40 (2H, s), 4.57 (1H, t), 4.88 (1H, m), 7.32-7.38 (4H, m), 8.22 (1H, d), 8.29 (1H, s), 8.45 (1H, d), 13.52 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 430.

실시예 21: (S)-4-아미노-N-(3-히드록시-1-페닐프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드

(S)-3-아미노-3-페닐프로판-1-올 염산염(260 mg, 1.38 mmol)을 DMA(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 21)(500 mg, 1.38 mmol) 및 DIPEA(0.967 mL, 5.53 mmol)에 한번에 가하였다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(579 mg, 1.52 mmol)를 가하고, 생성된 용액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시킨 다음, EtOAc(300 mL)로 희석하고, 물(50 mL)과 포화 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 분획을 증발 건조시켜서 (S)-tert-부틸 4-(3-히드록시-1-페닐프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(334 mg, 48.8%)를 백색 고형분으로서 얻었다. 생성물(334 mg, 0.67 mmol)을 디옥산(5.00 mL)에 현탁시키고, 디옥산 중의 4 M 염산(0.961 mL, 27.67 mmol)을 가하였다. 반응물을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 3.5 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 생성된 검을 EtOAc로 분쇄하여 고형분을 얻었으며, 이것을 여과 수집하고, 진공 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(3-히드록시-1-페닐프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(93 mg, 17.0%)를 미백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.44 (2H, t), 1.82-2.03 (4H, m), 3.37 (2H, t), 3.50-3.58 (2H, m), 4.40 (2H, t), 4.49 (1H, t), 4.90 (1H, d), 6.58 (1H, s), 7.15 (1H, t), 7.21-7.23 (1H, m), 7.30-7.31 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.41 (1H, d), 11.62 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 395.

실시예 22: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(9H- 푸린 -6-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

DIPEA(0.335 mL, 1.92 mmol)를 부탄-1-올(4 mL) 중의 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카르복시아미드(중간체 49)(200 mg, 0.64 mmol) 및 6-클로로-9H-푸린(99 mg, 0.64 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 물(25 mL)과 포화 염수(25 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(9H-푸린-6-일)피페리딘-4-카르복시아미드(141 mg, 51.1%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.42 (2H, t), 1.78-2.00 (4H, m), 3.34-3.41 (2H, m), 3.61 (2H, s), 4.53 (1H, t), 4.88 (1H, d), 5.02 (2H, s), 7.30-7.39 (4H, m), 8.08 (1H, s), 8.17-8.22 (1H, s), 8.42 (1H, d), 13.02 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 430.

실시예 23: (S)-4-( 아미노메틸 )-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

(S)-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올(중간체 47)(247 mg, 1.33 mmol)을 DMA(6 mL) 중의 4-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 12)(500 mg, 1.33 mmol) 및 DIPEA(0.698 mL, 4.00 mmol)에 한번에 가하였다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(557 mg, 1.47 mmol)를 가하고, 생성된 용액을 20℃에서 2 시간 동안, 그 다음 20℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 물(20 mL)과 포화 염수(20 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일)메틸카르바메이트(428 mg, 59.2%)를 무색 검으로서 얻었다. 생성물(428 mg)을 디옥산(6.00 mL)에 용해시키고, 디옥산 중의 4 M 염산(0.925 mL, 26.64 mmol)을 가하였다. 반응물을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 3.5 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을, 용리제로서 물(1% 암모니아를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 ㎛ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-(아미노에틸)-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(192 mg, 32.5%)를 백색 건조 필름으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.45-1.47 (2H, m), 1.79-1.84 (1H, m), 1.89-1.99 (1H, m), 2.09 (2H, s), 2.67 (2H, s), 3.36-3.42 (4H, m), 4.25 (2H, d), 4.57 (1H, s), 5.01 (1H, d), 6.55 (1H, s), 7.14 (1H, s), 7.33-7.36 (4H, m), 8.11 (1H, s), 8.44 (1H, d), 11.61 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 443.

실시예 24: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 브로모페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

(S)-3-아미노-3-(4-브로모페닐)프로판-1-올(중간체 51)(191 mg, 0.83 mmol)을 DMA(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(300 mg, 0.83 mmol) 및 DIPEA(0.435 mL, 2.49 mmol)에 한번에 가하였다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(347 mg, 0.91 mmol)를 가하고, 생성된 용액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시킨 다음, EtOAc(300 mL)로 희석하고, 물(50 mL)과 포화 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 분획을 증발 건조시켜서 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-브로모페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(212 mg, 44.5%)를 백색 고형분으로서 얻었다. 생성물(212 mg, 0.36 mmol)을 디옥산(5.00 mL)에 현탁시키고, 디옥산 중의 4 M 염산(0.577 mL, 16.6 mmol)을 가하였다. 반응물을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 3.5 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 그 다음, 생성물을, 용리제로서 물(1% 암모니아를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 ㎛ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-브로모페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(51.0 mg, 13.0%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38-1.46 (2H, m), 1.79-2.01 (4H, m), 2.15 (2H, s), 3.37 (2H, q), 3.51-3.58 (2H, m), 4.37 (2H, t), 4.52 (1H, t), 4.86 (1H, d), 6.57 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.27 (2H, d), 7.48-7.51 (2H, m), 8.12 (1H, s), 8.42 (1H, d), 11.62 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 473.

실시예 25: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-4-(디메틸아미노)부틸)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

1-(4-클로로페닐)-N4,N4-디메틸부탄-1,4-디아민(중간체 57)(330 mg, 1.46 mmol)을 DMA(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(526 mg, 1.46 mmol) 및 DIPEA(0.763 mL, 4.37 mmol)에 한번에 가하였다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(609 mg, 1.60 mmol)를 가하고, 생성된 용액을 50℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(25 mL)로 희석하고, 물(20 mL)과 포화 염수(20 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 이소헥산 중의 5-10% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-4-(디메틸아미노)부틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(423 mg, 51.0%)를 무색 검으로서 얻었다. tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-4-(디메틸아미노)부틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(423 mg, 0.74 mmol)를 DCM(5.00 mL)에 용해시키고, TFA(1 mL)를 가하였다. 반응물을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 3.5 N 암모니아/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 미정제 생성물을 얻었으며, 이를 디에틸 에테르로 분쇄하여 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-4-(디메틸아미노)부틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(245 mg, 35.8%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d6) δ 1.26-1.33 (2H, m), 1.38-1.47 (2H, m), 1.65-1.75 (2H, m), 1.87-2.01 (2H, m), 2.08 (6H, s), 2.18 (2H, t), 3.50-3.58 (2H, m), 4.35-4.41 (2H, m), 4.73 (1H, m), 6.57 (1H, d), 7.14-7.16 (1H, m), 7.32-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.31 (1H, d), 11.62 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 470.

실시예 26: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-( 디에틸아미노 )프로필)-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

(S)-1-(4-클로로페닐)-N3,N3-디에틸프로판-1,3-디아민(중간체 60)(119 mg, 0.49 mmol)을 DMA(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(179 mg, 0.49 mmol) 및 DIPEA(0.259 mL, 1.48 mmol)에 한번에 가하였다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(207 mg, 0.54 mmol)를 가하고, 생성된 용액을 50℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(25 mL)로 희석하고, 물(20 mL)과 포화 염수(20 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 5-10% MeOH와 암모니아의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(디에틸아미노)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(189 mg, 65.5%)를 무색 검으로서 얻었다. (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(디에틸아미노)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(189 mg, 0.33 mmol)를 DCM(5.00 mL)에 용해시키고, TFA(1 mL)를 가하였다. 반응물을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 N 암모니아/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 미정제 생성물을 얻었으며, 이를 디에틸 에테르로 분쇄하여 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디에틸아미노)부틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(70.0 mg, 29.3%)를 백색 폼으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 0.94 (6H, d), 1.42-1.49 (2H, m), 1.86-2.01 (4H, m), 2.43 (2H, m), 3.51-3.59 (2H, m), 4.37-4.43 (2H, m), 4.84 (1H, t), 6.58 (1H, d), 7.15-7.16 (1H, d), 7.32-7.38 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.59 (1H, s), 11.63 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 484.

실시예 27: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(5- 시클로프로필 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

디옥산 중의 염산 4 M(0.923 mL, 3.69 mmol)을 디옥산(25 mL) 중의 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 65)(420 mg, 0.74 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올에 용해시키고, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 3.5 N 암모니아/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 그 다음, 생성물을, 용리제로서 물(1% 암모니아를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 LCMS(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 μ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(25.0 mg, 7.2%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 0.66-0.70 (2H, m), 0.86-0.91 (2H, m), 1.41-1.50 (2H, m), 1.81-2.13 (5H, m), 3.35-3.43 (4H, m), 3.99-4.07 (2H, m), 4.54 (1H, t), 4.90 (1H, d), 6.90 (1H, s), 7.32-7.38 (4H, m), 8.18 (1H, s), 8.47 (1H, d), 11.46 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 470.

실시예 28: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-( 메틸아미노 )프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

염산(디옥산 중의 4 M, 0.461 mL, 1.84 mmol)을 22℃의 DCM(3 mL) 및 메탄올(1 mL)의 혼합물 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(메틸아미노)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 68)(10 mg, 0.02 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증발시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, DCM 중의 30% (MeOH 중의 2 M NH₃)를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(메틸아미노)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(7 mg, 86%)를 무색 검으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.44 (2H, m), 1.83 (2H, dt), 1.87-2.01 (2H, m), 2.15 (2H, m), 2.25 (2H, br.s), 2.42 (2H, m), 3.56 (2H, m), 4.38 (2H, m), 4.84 (1H, br.s), 6.58 (1H, d), 7.16 (1H, d), 7.32-7.38 (4H, m), 8.13 (1H, s), 8.57 (1H, s), 11.63 (1H, s).

MS m/e MH⁺442.4.

하기 표 1에 열거된 본 발명의 화합물은 실시예 2에 기재된 공정과 유사한 공정을 사용하여 적절한 출발 물질로부터 제조하였다.

번호	화합물명	구조	NMR / MS
29	4-아미노-N-[(4-클로로페닐)(페닐)메틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 11.65 (1H, s), 8.76 (1H, s), 8.13 (1H, s), 7.42-7.25 (9H, m), 7.17-7.15 (1H, m), 6.60-6.58 (1H, m), 6.07 (1H, s), 4.45-4.39 (2H, m), 3.59-3.51 (2H, m), 2.34-2.27 (2H, m), 2.02-1.93 (2H, m), 1.52-1.46 (2H, m) m/z (ESI+) (M+H)+ = 461; HPLC t_R = 2.21 min.
30	4-아미노-N-[2-아미노-1-(4-클로로페닐)-2-옥소에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 11.65 (1H, s), 8.92 (1H, s), 8.13 (1H, s), 7.80 (1H, s), 7.45-7.39 (4H, m), 7.29 (1H, s), 7.17-7.15 (1H, m), 6.58-6.57 (1H, m), 5.30 (1H, s), 4.48-4.38 (2H, m), 3.55-3.46 (2H, m), 2.43 (2H, s), 2.03-1.94 (1H, m), 1.90-1.82 (1H, m), 1.49-1.39 (2H, m) m/z (ESI+) (M+H)+ = 428; HPLC t_R = 1.45 min.

하기 표 2에 열거된 본 발명의 화합물은 실시예 9 대안의 경로 1에 기재된 공정과 유사한 공정을 사용하여 적절한 출발 물질로부터 제조하였다.

번호	화합물명	구조	NMR / MS
31	4-아미노-1-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]피페리딘-4-카르복시아미드		MS: m/z (ESI+) (M+H)+ = 480; HPLC tR = 1.34 min.
32	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-1-(5-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1.39 (3H, d), 1.42-1.51 (2H, m), 1.98-2.18 (4H, m), 3.36-3.48 (2H, m), 3.90-4.03 (2H, m), 4.82-4.96 (1H, m), 7.31-7.41 (4H, m), 7.45 (1H, s), 8.23 (1H, s), 8.34 (1H, d), 11.98-12.18 (1H, m). MS: m/z (ESI+) (M+H)+ = 433; HPLC tR = 1.96 min.
33	4-아미노-1-(3-브로모-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일)-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필]피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.45-1.53 (2H, m), 1.81-1.94 (2H, m), 1.98-2.14 (2H, m), 3.38 (2H, m), 3.55-3.62 (2H, m), 4.17-4.23 (2H, m), 4.54 (1H, t), 4.90 (1H, d), 7.32-7.38 (4H, m), 8.29 (1H, s), 8.46 (1H, d) MS m/e MH+ 510
34	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필]-1-(5-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.42-1.50 (2H, m), 1.82-1.92 (2H, m), 2.01-2.15 (2H, m), 3.39-3.46 (4H, m), 3.93-3.99 (2H, m), 4.59 (1H, t), 4.90 (1H, m), 7.33-7.39 (4H, m), 7.47 (1H, s), 8.25 (1H, s), 8.52 (1H, d), 12.14 (1H, s) MS m/e MH+ 463
35	4-아미노-1-(5-브로모-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-N-[(1S)-1-(4-크로로페닐)에틸]피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1.38 (3H, d), 1.42-1.52 (2H, m), 2.02-2.23 (4H, m), 3.40-3.45 (2H, m), 3.85-3.99 (2H, m), 4.80-4.97 (1H, m), 7.33-7.40 (4H, m), 7.51 (1H, s), 8.26 (1H, s), 8.33 (1H, d), 12.11-12.28 (1H, m). MS: m/z (ESI+) (M+H)+ = 479; HPLC tR = 2.08 min.
36	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필]-1-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.41-1.49 (2H, m), 1.79-2.13 (6H, m), 2.34 (3H, s), 3.38-3.42 (2H, m), 3.73 (2H, t), 4.59 (1H, t), 4.90-4.93 (1H, m), 7.05 (1H, s), 7.31-7.41 (4H, m), 8.19 (1H, s), 8.50 (1H, d), 11.50 (1H, s) MS m/e MH+ 443
37	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-1-(5-메틸-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1.39 (3H, d), 1.41-1.54 (2H, m), 1.96-2.17 (4H, m), 2.34 (3H, s), 3.31-3.43 (2H, m), 3.65-3.84 (2H, m), 4.81-4.97 (1H, m), 7.03 (1H, s), 7.30-7.44 (4H, m), 8.18 (1H, s), 8.34 (1H, d), 11.45 (1H, s). MS: m/z (ESI+) (M+H)+ = 413; HPLC tR = 1.41 min.

하기 표 3에 열거된 본 발명의 화합물은 실시예 9 대안의 경로 2에 기재된 공정과 유사한 공정을 사용하여 적절한 출발 물질로부터 제조하였다.

번호	화합물명	구조	NMR / MS
38*	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-히드록시-3-메틸부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (399.902 MHz, DMSO-d₆) δ 1.10 (s, 3H), 1.12 (s, 3H), 1.54-1.63 (m, 2H), 1.66-1.71 (m, 1H), 1.92-1.99 (m, 1H), 2.05-2.16 (m, 2H), 3.49-3.60 (m, 2H), 4.41-4.49 (m, 2H), 4.96 (dd, 1H), 6.61 (d, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.29-7.35 (m, 4H), 8.15 (s, 1H), 8.62 (d, 1H), 11.64 (s, 1H) m/z (ES+) (M+H)+ = 457.22
39	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40 (3H, d), 1.51 (2H, d), 1.93-2.08 (2H, m), 3.52-3.58 (2H, m), 4.39-4.45 (2H, m), 4.94 (1H, t), 6.59 (1H, d), 7.16-7.17 (1H, d), 7.51 (2H, d), 7.78 (2H, d), 8.13 (1H, s), 8.47 (1H, d), 11.64 (1H, s) MS m/e MH+ 390
40	4-아미노-N-[(1S)-1-(3-클로로페닐)-3-히드록시프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.44 (2H, t), 1.81-2.03 (4H, m), 3.35-3.40 (2H, m), 3.50-3.58 (2H, m), 4.35-4.42 (2H, m), 4.54 (1H, t), 4.89 (1H, d), 6.58 (1H, m), 7.14-7.16 (1H, m), 7.26-7.28 (2H, m), 7.32-7.36 (2H, m), 8.12 (1H, s), 8.46 (1H, d), 11.62 (1H, s) MS m/e MH+ 429
41	4-아미노-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-N-{(1S)-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에틸}피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.41 (3H, d), 1.50 (2H, d), 1.93-2.06 (2H, m), 3.52-3.58 (2H, m), 4.39-4.44 (2H, m), 4.95 (1H, t), 6.59 (1H, d), 7.15-7.17 (1H, d), 7.54 (2H, d), 7.67 (2H, d), 8.13 (1H, s), 8.46 (1H, d), 11.64 (1H, s) MS m/e MH+ 433

* 실시예 9 대안의 경로 2에 기재된 방법과 동일한 HATU 커플링 방법에 의해 제조하였으며, 실시예 8에 기재된 방법과 동일한 방법을 사용하여 TFA로 탈보호하였다.

하기 표 4에 열거된 본 발명의 화합물은 실시예 16에 기재된 공정과 유사한 공정을 사용하여 적절한 출발 물질로부터 제조하였다.

번호	화합물명	구조	NMR / MS
42	4-아미노-N-[(1R)-1-(4-브로모페닐)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.37 (3H, d), 1.39-1.47 (2H, m), 1.85-2.02 (2H, m), 2.18 (2H, s), 3.50-3.58 (2H, m), 4.33-4.43 (2H, m), 4.80-4.88 (1H, s), 6.57-6.59 (1H, m), 7.14-7.16 (1H, m), 7.27-7.29 (2H, m), 7.48-7.51 (2H, m), 8.12 (1H, s), 8.30 (1H, d), 11.62 (1H, s) MH+ = 443 RT = 1.69 min
43	4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-2-페닐에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1.21-1.42 (2H, m), 1.72-1.94 (2H, m), 2.98-3.10 (2H, m), 3.44-3.62 (2H, m), 4.13-4.23 (1H, m), 4.24-4.35 (1H, m), 4.98-5.12 (1H, m), 6.54 (1H, d), 7.12-7.29 (6H, m), 7.32-7.44 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.44 (1H, d), 11.63 (1H, s) MH+ = 475 RT = 2.31 min
44	4-아미노-N-[1-(4-플루오로페닐)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38 (3H, d), 1.40-1.46 (2H, m), 1.87-1.91 (1H, m), 1.96-2.01 (1H, m), 2.16 (2H, s), 3.50-3.58 (2H, m), 4.35-4.43 (2H, m), 4.84-4.92 (1H, m), 6.57-6.58 (1H, m), 7.10-7.15 (3H, m), 7.34-7.37 (2H, m), 8.12 (1H, s), 8.28 (1H, d), 11.62 (1H, s) MH+ = 383 RT = 1.47 min,
45	4-아미노-N-[(4-클로로페닐)(시아노)메틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1.42-1.58 (3H, m), 1.84-2.04 (2H, m), 3.49-3.64 (2H, m), 4.30-4.44 (2H, m), 6.16 (1H, s), 6.57-6.63 (1H, m), 7.13-7.19 (1H, m), 7.46-7.55 (4H, m), 8.13 (1H, s), 11.64 (1H, s) MH+ = 410 RT = 1.79 min
46	4-아미노-N-(1-페닐에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38 (3H, d), 1.89-2.03 (2H, m), 2.17 (2H, s), 3.50-3.57 (2H, m), 4.37-4.43 (2H, m), 4.84-4.92 (1H, m), 6.57-6.58 (1H, m), 7.15 (1H, dd), 7.19-7.26 (1H, m), 7.31-7.32 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.28 (1H, d), 11.62 (1H, s) MH+ = 365 RT = 1.40 min,

하기 표 5에 열거된 본 발명의 화합물은 실시예 25에 기재된 공정과 유사한 공정을 사용하여 적절한 출발 물질로부터 제조하였다.

번호	화합물명	구조	NMR / MS
47	4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-4-피롤리딘-1-일부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.49 (4H, m), 1.65 (4H, s), 1.69-1.77 (2H, m), 1.88-1.98 (2H, m), 2.15 (2H, s), 2.34 (4H, s), 2.36 (2H, s), 3.53-3.58 (2H, m), 4.34-4.41 (2H, m), 4.73 (1H, m), 6.57 (1H, d), 7.14-7.15 (1H, d), 7.32-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.30 (1H, d), 11.62 (1H, s) MS m/e MH+ 496
48	4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-4-모르폴린-4-일부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.32-1.37 (1H, m), 1.44-1.51 (1H, m), 1.57-1.76 (4H, m), 2.10-2.17 (2H, m), 2.26-2.35 (6H, m), 3.47-3.56 (6H, m), 4.51 (2H, d), 4.79 (1H, m), 6.62-6.64 (1H, m), 7.19 (1H, t), 7.32-7.34 (2H, d), 7.37-7.39 (2H, d), 8.16 (1H, s), 8.49 (1H, s), 11.68 (1H, s) MS m/e MH+ 512
49	4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-4-피페리딘-1-일부틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.37 (3H, m), 1.41-1.47 (6H, m), 1.66-1.73 (2H, m), 1.86-2.00 (2H, m), 2.16-2.24 (7H, m), 3.50-3.58 (2H, m), 4.34-4.40 (2H, m), 4.73 (1H, m), 6.57 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.31-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.29 (1H, d), 11.62 (1H, s) MS m/e MH+ 510

실시예 49A 및 49B: 4-아미노-N-[(1S)-1-(4- 클로로페닐 )-4-피페리딘-1- 일부틸 ]-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드 및 4-아미노-N-[(1R)-1-(4- 클로로페닐 )-4-피페리딘-1-일부틸]-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

실시예 49의 라세미체의 개별 입체 이성질체를 실시예 11A 및 11B에 기재된 방법과 동일한 방법을 사용하여 분리하였다.

¹H NMR (500.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.41 (4H, m), 1.44-1.48 (6H, m), 1.68-1.71 (2H, m), 1.90-1.98 (4H, m), 2.21 (6H, m), 3.54-3.56 (2H, m), 4.38 (2H, t), 4.73 (1H, d), 6.58 (1H, q), 7.15 (1H, q), 7.32-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.29 (1H, s), 11.63 (1H, s)

MS m/e MH+ 510

¹H NMR (500.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.31-1.41 (4H, m), 1.44-1.48 (7H, m), 1.68-1.71 (2H, m), 1.90-1.98 (2H, m), 2.21 (6H, m), 3.54-3.56 (2H, m), 4.38 (2H, t), 4.73 (1H, d), 6.58 (1H, q), 7.15 (1H, q), 7.32-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.29 (1H, s), 11.63 (1H, s)

MS m/e MH+ 510

하기 표 6에 열거된 본 발명의 화합물은 실시예 26에 기재된 공정과 유사한 공정을 사용하여 적절한 출발 물질로부터 제조하였다.

번호	화합물명	구조	NMR / MS
50	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-(4-메틸피페라진-1-일)프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.39-1.47 (2H, m), 1.84-1.97 (4H, m), 2.13 (4H, s), 2.19 (2H, t), 2.31-2.34 (7H, m), 3.54-3.57 (2H, m), 4.38 (2H, m), 4.82 (1H, m), 6.57 (1H, d), 7.14-7.16 (1H, d), 7.31-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.55 (1H, d), 11.62 (1H, s) MS m/e MH+ 511
51	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-모르폴린-4-일프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.43 (2H, m), 1.83-2.00 (4H, m), 2.20 (2H, t), 2.27-2.37 (4H, m), 3.51-3.63 (6H, m), 4.35-4.41 (2H, m), 4.85 (1H, m), 6.57 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.32-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.65 (1H, d), 11.62 (1H, s) MS m/e MH+ 498
52	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-피페리딘-1-일프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33-1.50 (8H, m), 1.82-1.90 (4H, m), 2.15 (2H, t), 2.25-2.34 (4H, m), 3.53-3.57 (2H, m), 4.39 (2H, m), 4.82 (1H, m), 6.57 (1H, d), 7.14-7.16 (1H, d), 7.30-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.64-8.66 (1H, d), 11.62 (1H, s) MS m/e MH+ 496
53*	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-피페라진-1-일프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40-1.47 (2H, m), 1.82-1.99 (4H, m), 2.11-2.25 (6H, m), 2.67-2.69 (4H, m), 3.54-3.57 (2H, m), 4.35-4.41 (2H, m), 4.83 (1H, m), 6.57 (1H, d), 7.15 (1H, d), 7.31-7.37 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.61 (1H, d), 11.62 (1H, s) MS m/e MH+ 497
54	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-(1H-이미다졸-1-일)프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.41-1.53 (2H, m), 1.86-2.04 (2H, m), 2.13-2.25 (4H, m), 3.52-3.61 (2H, m), 3.96-4.00 (2H, m), 4.34-4.42 (2H, m), 4.69 (1H, m), 6.58 (1H, d), 6.89 (1H, s), 7.15 (2H, t), 7.31 (2H, d), 7.36-7.38 (2H, d), 7.56 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.44 (1H, d), 11.62 (1H, s) MS m/e MH+ 479
55	4-아미노-N-[(1S)-1-(4-클로로페닐)-3-피롤리딘-1-일프로필]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드		¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.42-1.58 (2H, m), 1.71 (5H, s), 1.84-2.02 (5H, m), 2.33 (2H, m), 2.55 (2H, m), 3.51-3.59 (2H, m), 4.36-4.43 (2H, m), 4.86 (1H, t), 6.58 (1H, d), 7.16 (1H, d), 7.30-7.38 (5H, m), 8.12 (1H, s), 11.63 (1H, s) MS m/e MH+ 482

* 1-(2,4-디메톡시벤질)피페라진으로부터 출발하여 실시예 26에 기재된 방법과 동일한 방법에 의해 제조함. 최종 단계에서의 TFA 탈보호는 80℃로 가열하여 Boc 및 디메톡시벤질기를 제거하였다.

실시예 56: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-2- 술파모일에틸 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-(메틸술폰아미도)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 76)(100 mg, 0.17 mmol)를 트리플루오로아세트산(2 mL)으로 처리하였다. 용액을 1 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 감압 농축시켰다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 잔류물을 메탄올 중의 컬럼에 충전하고, 메탄올로 세척하였다. 소정의 생성물을, 메탄올 중의 2 M 암모니아를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-(메틸술폰아미도)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(79 mg, 95%)를 무색 결정 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38-1.53 (2H, m), 1.85-2.07 (2H, m), 2.20 (2H, br, s), 2.85 (3H, s), 3.57 (2H, m), 4.34-4.46 (2H, m), 4.87-4.94 (1H, m), 6.57-6.60 (1H, m), 7.12-7.19 (2H, m), 7.35-7.43 (4H, m), 8.13 (1H, s), 8.46 (1H, br, s), 11.64 (1H, s)

MS m/e MH⁺ = 492

실시예 57: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-2- 술파모일에틸 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-술파모일에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 81)(153 mg, 0.26 mmol)를 트리플루오로아세트산(4 mL)으로 처리하였다. 용액을 30 분 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 감압 농축시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 메탄올 중의 암모니아(2 M)를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-술파모일에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(125 mg, 99%)를 무색 결정 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.35-1.53 (2H, m), 1.86-2.04 (2H, m), 3.35-3.40 (1H, m), 3.52-3.62 (2H, m), 3.68 (1H, dd), 4.33-4.41 (2H, m), 5.24-5.29 (1H, m), 6.56-6.60 (1H, m), 6.88 (2H, s), 7.13-7.17 (1H, m), 7.39 (4H, s), 8.13 (1H, s), 8.68 (1H, br, s), 11.63 (1H, s)

MS m/e MH⁺ = 478

실시예 58: N-(2- 아세트아미도 -1-(4- 클로로페닐 )에틸)-4-아미노-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

tert-부틸 4-(2-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 84)(97 mg, 0.17 mmol)를 트리플루오로아세트산(2 mL)으로 처리하였다. 용액을 1 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 감압 농축시켰다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 잔류물을 메탄올 중의 컬럼에 충전하고, 메탄올로 세척하였다. 소정의 생성물을, 메탄올 중의 2 M 암모니아를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 N-(2-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)에틸)-4-아미노-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(80 mg, 정량)를 무색 결정 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.43 (2H, t), 1.79 (3H, s), 1.83-2.04 (2H, m), 2.20 (2H, br, s), 3.32-3.38 (2H, m), 3.58 (2H, q), 4.32-4.42 (2H, m), 4.82-4.88 (1H, m), 6.56-6.60 (1H, m), 7.14-7.18 (1H, m), 7.33 (2H, d), 7.38 (2H, d), 7.94 (1H, t), 8.13 (1H, s), 8.42-8.50 (1H, m), 11.63 (1H, s)

MS m/e MH⁺ = 456

실시예 59: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-2-(1H- 이미다졸 -2-일)에틸)-1-(7H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

트리플루오로아세트산(5 mL, 64.90 mmol)을 실온에서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-(1-트리틸-1H-이미다졸-2-일)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 89)(310 mg, 0.38 mmol)에 가하고, 생성된 용액을 30 분 동안 교반하였다. 그 다음, 물(5 내지 6 방울)을 가하고, 30 분 더 계속 교반하였다. 생성된 용액을 메탄올로 희석하고, 10 g SCX 컬럼에 적용하였으며, 그 후, 메탄올, 이어서 2 N NH₃(MeOH중)로 용출시켰다. 생성물 함유 분획을 합하고, 증발 농축시킨 다음, MeCN/DMF(1:1)로 분쇄하여 담황색 침전물을 얻었다. 침전물을 여과 수집하고, MeCN으로 세척하였으며, 진공 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-(1H-이미다졸-2-일)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(130 mg, 72.8%)를 크림색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.36-1.40 (2H, m), 1.85-1.93 (2H, m), 3.08 (2H, d), 3.55 (2H, m), 4.29-4.35 (2H, m), 5.18 (1H, q), 6.57 (1H, d), 6.85 (2H, s), 7.16 (1H, d), 7.25 (2H, d), 7.31 (2H, d), 8.12 (1H, s), 8.89 (1H, d), 11.63 (1H, br s)

m/z (ESI+) (M+H)+ = 465; HPLC tR = 1.62 min.

실시예 60: 4-아미노-N-[1-(4- 클로로페닐 )-2-(1H- 피라졸 -1-일)에틸]-1-(7H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

TFA(0.7 mL)를 아르곤 하에 디클로로메탄(7 mL) 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 93)(180 mg, 0.32 mmol)dml 현탁액에 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 용매를 진공 제거하고, 반응 혼합물을, 용리제로서 물(0.2% 탄산암모늄을 함유함) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물과 Waters X-bridge 역상 컬럼(C-18, 5 미크론 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드를 백색 분말로서 얻었다.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.33 (2H, m), 1.83 (2H, m), 2.14 (2H, s), 3.53 (2H, m), 4.28 (2H, m), 4.43 (2H, m), 5.22 (1H, d), 6.15 (1H, t), 6.56 (1H, q), 7.15 (1H, t), 7.30 (2H, d), 7.36 (2H d), 7.44 (1H, d), 7.55 (1H, d), 8.11 (1H, s), 8.81 (1H, br d), 11.64 (1H, s);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 465.

실시예 61: 4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-2-(3-메틸이소옥사졸-5-일)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드

4-아미노-N-[1-(4-클로로페닐)-2-(3-메틸이소옥사졸-5-일)에틸]-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드는 실시예 60에 기재된 공정과 유사한 공정을 사용하여 적절한 출발 물질로부터 제조하였다.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.35 (2H, d), 1.87 (2H, m), 2.14 (2H, s), 2.15 (3H, s), 3.17-3.33 (2H, m), 3.53 (2H, m), 4.31 (2H, m), 5.15 (1H, d), 6.06 (1H, s), 6.56 (1H, d), 7.16 (1H, t), 7.39 (4H, m), 8.12 (1H, s), 8.60 (1H, br d), 11.65 (1H, s).

m/z (ESI+) (M+H)+ = 480

실시예 62: 4-아미노-N-[1-(4- 클로로페닐 )-2-(티아졸-2-일)에틸]-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

TFA(2.0 mL)를 아르곤 하에 디클로로메탄(20 mL) 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-(티아졸-2-일)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 96)(918 mg, 0.95 mmol)의 현탁액에 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 용매를 진공 제거하고, 반응 혼합물을, 용리제로서 물(0.2% 탄산암모늄을 함유함) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물과 Waters X-bridge 역상 컬럼(C-18, 5 미크론 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-(티아졸-2-일)에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(259 mg, 56.8%)를 백색 분말로서 얻었다.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.35 (2H, d), 1.85 (2H, m), 2.07 (2H, br s), 3.41-3.56 (4H, m), 4.30 (2H, m), 5.20 (1H, d), 6.56 (1H, d), 7.15 (1H, t), 7.36 (4H, m), 7.54 (1H, d), 7.70 (1H, d), 8.11 (1H, s), 8.75 (1H, br d), 11.70 (1H, br s);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 482

실시예 63: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-(디메틸아미노)-3- 옥소프로필 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피 리미딘-4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

TFA(1.0 mL)를 아르곤 하에 디클로로메탄(10 mL) 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)-3-옥소프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 98)(770mg, 0.24 mmol)의 현탁액에 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 하룻밤 교반하였다. 용매를 진공 제거하고, 반응 혼합물을, 용리제로서 물(0.2% 탄산암모늄을 함유함) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물과 Waters X-bridge 역상 컬럼(C-18, 5 미크론 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)-3-옥소프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(74.0 mg, 64.8%)를 백색 분말로서 얻었다.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.43 (2H, m), 1.94 (2H, m), 2.75 (3H, s), 2.8 (2H, m), 2.89 (3H, s), 3.52 (2H, m), 4.40 (2H, m), 5.15 (1H, d), 6.58 (1H, d), 7.16 (1H, t), 7.35 (4H, s), 8.12 (1H, s), 8.76 (1H, br d), 11.66 (1H, br s);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 470

실시예 64: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 메톡시프로필 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

염산(1,4-디옥산 중의 4 M, 1.151 mL, 4.60 mmol)을 22℃의 DCM(5 mL) 및 메탄올(2 mL)의 혼합물 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-메톡시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 101)(50 mg, 0.09 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 2 일 동안 교반하였다. 혼합물을 증발시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 2 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-메톡시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(39.0 mg, 96%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.44 (2H, m), 1.88-2.02 (5H, m), 2.46 (2H, s), 3.21 (3H, s), 3.28 (2H, t), 3.55 (2H, m), 4.39 (2H, m), 4.87 (1H, dt), 6.59 (1H, dd), 7.16 (1H, dd), 7.33 (2H, d), 7.37 (2H, d), 8.13 (1H, s), 8.45 (1H, d), 11.63 (1H, s);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 443.4; HPLC tR = 1.87 min.

실시예 65: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 술파모일프로필 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

염산(디옥산 중의 4 M, 0.676 mL, 2.70 mmol)을 22℃의 DCM(5 mL) 및 메탄올(5 mL)의 혼합물 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-술파모일프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 105)(16 mg, 0.03 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 20 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증발시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, DCM 중의 30% (MeOH 중의 2 M NH₃)를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-술파모일프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(12.00 mg, 90%)를 무색 검으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.48 (2H, m), 1.90-2.06 (2H, m), 2.09-2.24 (2H, m), 2.87 (1H, ddd), 3.02 (1H, ddd), 3.56 (2H, m), 3.56 (2H, d), 4.41 (2H, m), 4.91 (1H, br.s), 6.59 (1H, dd), 6.80 (2H, s), 7.16 (1H, dd), 7.38-7.43 (4H, m), 8.13 (1H, s), 8.46 (1H, s), 11.64 (1H, s);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 492.4, 494.3 ; HPLC tR = 1.60 min.

실시예 66: 4-아미노-N-(3-아미노-1-(4- 클로로페닐 )-3- 옥소프로필 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

1,4-디옥산 중의 HCl(4 M)(0.228 mL, 0.91 mmol)을 20℃의 DCM(4 mL) 중의 tert-부틸 4-(3-아미도-1-(4-클로로페닐)-3-옥소프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 108)(99 mg, 0.18 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 PTFE 컵을 통하여 여과하고, 수집된 고형분을, 용리제로서 물(1% NH₃를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters XTerra C18 컬럼, 5 μ 실리카, 30 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(3-아미노-1-(4-클로로페닐)-3-옥소프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(9.00 mg, 11.1%)를 크림색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40-1.43 (2H, m), 1.93-1.96 (2H, m), 2.18 (2H, s), 3.54-3.56 (2H, m), 4.36-4.40 (2H, m), 5.12 (1H, d), 6.58 (1H, d), 6.81 (1H, s), 7.15-7.16 (1H, m), 7.32-7.37 (5H, m), 8.13 (1H, s), 8.76 (1H, d), 11.63 (1H, s), (no NH2 visible).

m/z (ESI+) (M+H)+ = 442; HPLC tR = 1.47 min.

실시예 67: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 우레이도프로필 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

TFA(3 mL)를 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-우레이도프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 112)(379 mg, 0.66 mmol)에 가하였다. 반응물을 20℃에서 4 시간 동안 교반한 채로 둔 후, 진공 건조시켰다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 0.35 M NH₃/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을, 용리제로서 물(1% NH₃를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 μ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-우레이도프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(14.00 mg, 5.60%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.41-1.49 (2H, m), 1.78-1.88 (2H, m), 2.01 (1H, d), 2.91 (1H, t), 2.97 (2H, t), 3.55 (2H, d), 4.37 (2H, d), 4.78 (1H, d), 5.40 (2H, s), 5.95 (1H, t), 6.58-6.59 (1H, m), 7.15-7.16 (1H, m), 7.33-7.39 (4H, m), 8.13 (1H, s), 8.36 (1H, d), 11.63 (1H, s);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 471; HPLC tR = 1.50 min.

실시예 68: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-2- 시아노에틸 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

1,4-디옥산 중의 HCl(4 M)(2.011 mL, 8.04 mmol)을 20℃의 DCM(8 mL) 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-시아노에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 114)(0.281 g, 0.54 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 건조시키고, 용리제로서 물(1% NH₃를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters XTerra C18 컬럼, 5 μ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-2-시아노에틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(0.096 g, 42.2%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.42-1.46 (2H, m), 1.52 (2H, d), 1.95 (1H, d), 1.98-2.01 (1H, m), 3.08 (1H, t), 3.56-3.59 (2H, m), 4.38-4.42 (2H, m), 5.18 (1H, s), 6.59-6.60 (1H, m), 7.16 (1H, t), 7.44 (4H, m), 8.13 (1H, s), 11.65 (1H, s), (no Visible NH2),

m/z (ESI+) (M+H)+ = 424; HPLC tR = 1.82 min.

실시예 69: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-( 메틸술폰아미도 )프로필)-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

1,4-디옥산 중의 HCl(4 M)(1.615 mL, 6.46 mmol)을 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(메틸술폰아미도)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 117)(261 mg, 0.43 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응이 없었다. 그 다음, TFA(1 mL)를 반응물에 가하고, 16 시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 건조시키고, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을 0.35 M NH₃/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을, 용리제로서 물([AP-HPLC 완충제]를 함유함) 및 MeCN의 극성이 감소하는 혼합물을 사용하여 정제용 HPLC(Waters Xbridge Prep C18 OBD 컬럼, 5 μ 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-(메틸술폰아미도)프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(142 mg, 65.2%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40-1.48 (2H, m), 1.86-1.90 (2H, m), 1.93-1.97 (2H, m), 2.17 (2H, s), 2.88 (3H, s), 2.93-2.97 (2H, m), 3.53-3.60 (2H, m), 4.37 (2H, t), 4.87 (1H, d), 6.57-6.59 (1H, m), 7.00 (1H, t), 7.15-7.16 (1H, m), 7.35-7.40 (4H, m), 8.13 (1H, s), 8.38 (1H, d), 11.63 (1H, s),

m/z (ESI+) (M+H)+ = 506; HPLC tR = 1.62 min.

중간체 1: 4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복실산

CH₃CN-H₂O(6 L) 중의 4-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카르보닐아미노]피페리딘-4-카르복실산(115.6 g)의 혼합물에 NaHCO₃(181 g)을 가한 후, 4-클로로 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(72.7 g)을 가하였다. 혼합물을 질소 하에 24 시간 동안 밤새도록 환류 가열한 다음, EtOAc(1 L x 4)로 추출하였다. 수층을 농축시키고, MeOH(1.5 L)를 가하였다. 혼합물을 30 분 동안 45℃에서 교반하고, 여과하였다. 여액을 다시 농축시키고, H₂O(300 mL)에 용해시켰다. pH가 4.5에 도달할 때까지 6 N HCl을 가하였다(대략 80 mL). 혼합물을 여과하고, 케이크를 진공 건조시켜서 미정제 생성물을 얻었으며, 이를 실리카겔 크로마토그래피(MeOH:DCM=1:3으로 용출시킴)에 의해 더 정제하여 4-[(2-메틸프로판-2-일)옥시카르보닐아미노]-(3,5,7-트리아자비시클로[4.3.0]노나-2,4,8,10-테트라엔-2-일)피페리딘-4-카르복실산을 담회색 고형분(105 g, 63%)으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40 (9H, s), 1.88-1.95 (2H, m), 2.02-2.06 (2H, m), 3.44-3.51 (2H, m), 4.30 (2H, d), 6.60-6.61 (1H, m), 7.16-7.18 (1H, m), 7.29 (1H, s), 8.14 (1H, s), 11.68 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 362.

중간체 2: (4- 클로로페닐 )( 시클로프로필 ) 메탄온 O- 메틸 옥심

메톡시아민 염산염(2.004 g)을 25℃의 피리딘(60 mL) 중의 (4-클로로페닐)(시클로프로필)메탄온(2.71 g)에 가하였다. 생성된 용액을 25℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 피리딘을 진공 제거하고, 잔류 고형분을 에테르로 추출하였다. 용매를 여과하고, 증발시켜서 미정제 (4-클로로페닐)(시클로프로필)메탄온 O-메틸 옥심(2.75 g, 87%)을 황색 오일로서 얻었다. 이 물질을 더 이상 정제하지 않고 다음 단계에서 직접 사용하였다.

MS m/e MH⁺ 210.

중간체 3: (4- 클로로페닐 )( 시클로프로필 ) 메탄아민

보란 테트라히드로푸란 착체(THF 중의 1 N, 65.6 mL)를 질소 하에 25℃의 (4-클로로페닐)(시클로프로필)메탄온 O-메틸 옥심(중간체 2)(2.75 g)에 가하였다. 생성된 용액을 3 시간 동안 교반한 다음, 0℃로 냉각시켰다. 물을 신중하게 가한 후, NaOH 수용액(20%, 100 mL)을 가하였다. 생성된 혼합물을 밤새도록 환류 하에 교반한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 생성물을 헥산으로 추출한 다음, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 (4-클로로페닐)(시클로프로필)메탄아민을 맑은 유분(2.205 g, 93%)으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 0.24-0.29 (1H, m), 0.30-0.13 (1H, m), 0.45-0.50 (1H, m), 0.58-0.64 (1H, m), 1.01-1.09 (1H, m), 1.77 (2H, s), 3.20 (1H, d), 7.28-7.32 (2H, m), 7.33-7.36 (2H, m).

중간체 4: 2-아미노-2-(4- 클로로페닐 ) 아세토니트릴

리튬 비스(트리메틸실릴)아미드(42.7 mL)를 질소 하에 -40℃의 THF(100 mL) 중의 4-클로로벤즈알데히드(5 g)에 가하였다. 생성된 용액을 실온으로 가온하고, 4 시간 동안 교반하였다. 그 다음, α-히드록시이소부티로니트릴(아세톤 시아노히드린, 6.50 mL)을 가하고, 반응 혼합물을 25℃에서 12 시간 더 교반한 다음, 포화 NaHCO₃(50 mL)로 켄칭하였으며, EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하고, 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 여과하고, 증발시켰다. 그 다음, 미정제 물질을 이소헥산 중의 0-100% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 2-아미노-2-(4-클로로페닐)아세토니트릴을 무색 유분으로서 얻었으며, 정치시켜서 고화하여 백색 고형분(3.40 g, 57.4%)을 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.85 (2H, s), 4.82 (1H, s), 7.30-7.34 (2H, m), 7.39-7.43 (2H, m).

중간체 5: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )( 시아노 ) 메틸카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(HATU, 0.456 g)를 25℃의 DMA(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(0.361 g), 2-아미노-2-(4-클로로페닐)아세토니트릴(중간체 4)(0.167 g) 및 N-에틸디이소프로필아민(0.523 mL, 3.00 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 50℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-((4-클로로페닐)(시아노)메틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트를 백색 고형분(0.343 g, 67.3%)으로서 얻었다.

MS m/e MH⁺ 510.

중간체 6: tert -부틸 4-(2-아미노-1-(4- 클로로페닐 ) 에틸카르바모일 )-1-(7H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

Raney^TM(0.257 g)를 에탄올(30 mL) 중의 tert-부틸 4-((4-클로로페닐)(시아노)메틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 5)(0.510 g, 0.66 mmol)에 가하였다. 수산화암모늄(0.039 mL)을 가하였다. 이 혼합물을 수소 밸룬 하에 두고, 48 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트에 통과시켜 여과하고, 용매를 증발 건조시켰다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, DCM(200 mL)에 재용해시켰으며, 물(125 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물, tert-부틸 4-(2-아미노-1-(4-클로로페닐)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트를 무색 검(0.514 g, 100%)으로서 얻었다. 이 물질을 더 이상 정제하지 않고 다음 단계에서 미정제 상태로사용하였다.

MS m/e MH⁺ 514.

중간체 7: 1- tert -부틸 4-에틸 4- 시아노피페리딘 -1,4- 디카르복실레이트

LDA(107 ml, 214.01 mmol)의 용액을 질소 하에 -78℃의 THF(250 mL) 중의 tert-부틸 4-시아노피페리딘-1-카르복실레이트(30 g, 143 mmol)의 교반 용액에 가하였다. 생성된 용액을 -78℃에서 30 분 동안 교반하였다. 에틸 클로로포르메이트(16.37 mL, 171.2 ml)를 가하였다. 생성된 용액을 교반하고, 실온으로 가온하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃(250 mL)로 켄칭하고, DCM으로 추출하였으며, 유기층을 포화 염수(100 mL)로 세척한 다음, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 물질을 오렌지색 유분으로서 얻었다. 이 물질을 이소헥산 중의 10% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 1-tert-부틸 4-에틸 4-시아노피페리딘-1,4-디카르복실레이트(20.8 g, 51.6%)를 황색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.33 (3H, t), 1.46 (9H, s), 1.96-2.00 (2H, m), 2.04-2.08 (2H, m), 3.12 (2H, s), 4.09-4.14 (2H, m), 4.29 (2H, q).

중간체 8: 1- tert -부틸 4-에틸 4-( 아미노메틸 )피페리딘-1,4- 디카르복실레이트

아세트산(100 mL) 중의 산화백금(IV)(0.724 g, 3.19 mmol) 및 1-tert-부틸 4-에틸 4-시아노피페리딘-1,4-디카르복실레이트(중간체 7)(9 g, 31.9 mmol)를 5 바 및 25℃의 수소 분위기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을 셀라이트에 통과시켜 여과하고, 여액을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 1-tert-부틸 4-에틸 4-(아미노메틸)피페리딘-1.4-디카르복실레이트(7.59 g, 83%)를 무색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.27-1.28 (3H, m), 1.30-1.37 (2H, m), 1.41 (2H, s), 1.45 (9H, s), 2.10 (2H, d), 2.78 (2H, s), 2.91-2.97 (2H, m), 3.89 (2H, s), 4.21 (2H, q).

중간체 9: 에틸 4-( 아미노메틸 )피페리딘-4- 카르복실레이트

디옥산 중의 4 M 염산(33.2 mL, 132.7 mmol)을 디옥산(35 mL) 중의 1-tert-부틸 4-에틸 4-(아미노메틸)피페리딘-1,4-디카르복실레이트(중간체 8)(7.6 g, 26.5 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 에틸 4-(아미노메틸)피페리딘-4-카르복실레이트(3.34 g, 67.6%)를 황색 액체로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.23-1.30 (3H, m), 1.26-1.37 (2H, m), 2.12 (2H, d), 2.65-2.72 (2H, m), 2.77 (2H, s), 2.94-2.99 (2H, m), 4.21 (2H, q).

중간체 10: 에틸 4-( 아미노메틸 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복실레이트

N-에틸디이소프로필아민(3.70 mL, 21.26 mmol)을 DMA(35 mL) 중의 에틸 4-(아미노메틸)피페리딘-4-카르복실레이트(중간체 9)(3.3g, 17.7 mmol) 및 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(2.72 g, 17.72 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 에틸 4-(아미노메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실레이트(5.08 g, 95%)를 베이지색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.22 (3H, t), 1.44-1.51 (2H, m), 2.04-2.07 (2H, m), 2.67 (2H, d), 3.23-3.30 (2H, m), 4.15 (2H, q), 4.39-4.44 (2H, m), 6.59 (1H, t), 7.16-7.17 (1H, m), 8.12 (1H, s), 11.67 (1H, s)

MS m/e MH⁺304.

중간체 11: 에틸 4-(( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복실레이트

디-tert-부틸 디카르보네이트(470 mg, 2.15 mmol)를 DCM(10 mL) 중의 에틸 4-(아미노메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-카르복실레이트(중간체 10)(653mg, 2.15 mmol) 및 트리에틸아민(0.300 mL, 2.15 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(50 mL)으로 희석하고, 물(50 mL)과 포화 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켰다. 미정제 생성물을 이소헥산 중의 20-100% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 에틸 4-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실레이트(468 mg, 53.9%)를 무색 유분으로서 얻었으며, 정치시켜 고화하였다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.22 (3H, t), 1.36-1.38 (9H, m), 1.42-1.49 (2H, m), 2.05 (2H, d), 3.13 (2H, d), 3.20 (2H, t), 4.09-4.14 (2H, m), 4.45 (2H, d), 6.58 (1H, d), 6.94 (1H, t), 7.16 (1H, d), 8.13 (1H, d), 11.65 (1H, s).

MS m/e MH⁺404.

중간체 12: 4-(( tert - 부톡시카르보닐아미노 ) 메틸 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복실산

수산화리튬 일수화물(0.556 g, 13.26 mmol)을 물(6.25 mL), THF(25 mL) 및 에탄올(25.00 mL) 중의 에틸 4-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4일)카르복실레이트(중간체 11)(1.07g, 2.65 mmol) 및 트리에틸아민(0.300 mL, 25 ml)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 1 일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 물(20 mL)로 세척하였다. 수층을 1 M 시트르산 용액으로 pH 5로 조절한 다음, EtOAc(3 x 50 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 포화 염수(25 mL)로 세척한 다음, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 소정의 생성물, 4-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실레이트(0.628 g, 63.1%)를 백색 폼으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36 (9H, s), 1.44-1.51 (2H, m), 1.99-2.04 (2H, m), 3.14 (2H, d), 3.25 (2H, s), 4.43-4.46 (2H, m), 6.64 (1H, s), 6.84 (1H, t), 7.21 (1H, s), 8.16 (1H, s), 11.82 (1H, s)

MS m/e MH⁺376.

중간체 13: (S)- tert -부틸 (4-(1-(4- 클로로페닐 ) 에틸카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4-일) 메틸카르바메이트

HATU(0.251 g, 0.66 mmol)를 질소 하에 25℃의 DMA(10 mL) 중의 4-((tert-부톡시카르보닐아미노)메틸)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 12)(0.225 g, 0.6 mmol), (S)-1-(4-클로로페닐)에탄아민(0.093 g, 0.60 mmol) 및 DIPEA(0.314 mL, 1.80 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 메탄올을 사용하여 컬럼으로부터 용출시켰다. 잔류 HATU는 메탄올 용액을 실리카 지지 카르보네이트 컬럼에 통과시켜 제거하였다. 이와 같이 얻은 미정제 생성물을 증발 건조시켜서 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일)메틸카르바메이트(0.257 g, 83%)를 무색 검으로서 얻었다. 이 물질을 더 이상 정제하지 않고 다음 단계에서 직접 사용하였다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.37 (9H, s), 1.38 (3H, d), 1.48-1.55 (2H, m), 2.17 (2H, d), 3.12-3.36 (4H, m), 4.28-4.34 (2H, m), 4.95-5.03 (1H, m), 6.65 (2H, s), 7.23-7.24 (1H, m), 7.35 (4H, s), 8.10 (1H, d), 8.18 (1H, s), 11.94 (1H, s).

MS m/e MH⁺513.

중간체 14: 에틸 4-(4- 클로로페닐 )-4-( 메톡시이미노 ) 부탄오에이트

에탄올(30 mL) 중의 4-(4-클로로페닐)-4-옥소부탄산(2.0 g, 9.41 mmol), 메톡실아민 염산염(0.982 g, 11.76 mmol) 및 탄산나트륨(0.472 mL, 11.29 mmol)을 교반하고, 80℃로 4 시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하였다. 여액을 증발 농축시킨 다음, 이소헥산 중의 15% TBME로 용출시켜 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 에틸 4-(4-클로로페닐)-4-(메톡시이미노)부탄오에이트(1.790 g, 70.6%)를 무색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.23 (3H, t), 2.53 (2H, t), 3.01 (2H, t), 3.98 (3H, s), 4.11 (2H, q), 7.33 (2H, d), 7.58 (2H, d).

MS m/e MH⁺270.

중간체 15: 4-(4- 클로로페닐 )-4-( 메톡시이미노 )부탄산

수산화리튬(0.632 g, 26.40 mmol)을 20℃에서 THF(30 mL) 및 물(20 mL) 중의 에틸 4-(4-클로로페닐)-4-(메톡시이미노)부탄오에이트(중간체 14)(1.78 g, 6.60 mmol)의 용액에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 6 시간 동안 교반한 다음, 묽은 HCl로 산성화하고, TBME(2 x)로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 증발시켜서 4-(4-클로로페닐)-4-(메톡시이미노)부탄산(1.520 g, 95%)을 무색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 2.61 (2H, t), 3.01 (2H, t), 3.99 (3H, s), 7.34 (2H, d), 7.58 (2H, d).

중간체 16: 4-아미노-4-(4- 클로로페닐 )부탄-1-올

테트라히드로푸란(8 mL) 중의 4-(4-클로로페닐)-4-(메톡시이미노)부탄산(중간체 15)(6.28 g, 26.00 mmol)을 N₂ 분위기 하에 얼음-메탄올 욕 중에서 냉각시킨 다음, 20 분에 걸쳐서 보란-테트라히드로푸란 착체(THF 중의 1.0 M)(26 mL, 26.00 mmol)로 적가하여 처리하였다. 생성된 용액을 실온으로 가온하고, 1 시간 동안 교반한 다음, 6 시간 더 환류 가열하였다. 빙수 중에서 냉각시킨 후, 교반하면서 10 분에 걸쳐서 혼합물에 물(6 mL)을 적가하여 처리하였다. 혼합물을 다시 실온으로 가온하고, 2 시간 동안 교반한 후, 대부분의 용매를 증발시켰다. 그 다음, 잔류물을 빙수 중에서 냉각시키고, 50% NaOH(aq.)(6 mL)를 교반하면서 적가하였다. 생성된 혼합물을 교반하고, 90℃로 4 시간 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, Et₂O(3 x)로 추출하였다. 합한 추출물을 물, 이어서 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 증발시켜서 4-아미노-4-(4-클로로페닐)부탄1-1올(1.100 g, 21.2%)을 무색의 점성 유분으로서 얻었으며, 더 이상 정제하지 않고 사용하였다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.58-1.84 (4H, m), 2.39 (3H, br. s), 3.57-3.67 (2H, m), 3.88-3.91 (1H, m), 7.23 (2H, d), 7.30 (2H, d).

MS m/e MH⁺200.

중간체 17: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-4- 히드록시부틸카르바모일 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(166 mg, 0.44 mmol)를 20℃의 DMF(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(150 mg, 0.42 mmol), 4-아미노-4-(4-클로로페닐)부탄-1-올(중간체 16)(83 mg, 0.42 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민(0.087 mL, 0.50 ml)에 조금씩 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 3 시간 동안 교반한 다음, 물(10 mL)로 켄칭하여 담황색 침전물을 얻었다. 침전물을 여과 수집하고, 물로 세척하였으며, 진공 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸카르바모일-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(152 mg, 67.4%)를 크림색 고형분으로서 얻었으며, 더 이상 정제하지 않고 사용하였다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.40 (11H, s), 1.69-1.74 (2H, m), 1.93-2.09 (4H, m), 3.38-3.43 (2H, m), 3.51-3.61 (2H, m), 4.19-4.27 (2H, m), 4.38 (1H, br s), 4.76 (1H, q), 6.65 (1H, m), 6.95 (1H, s), 7.20 (1H, m), 7.33 (4H, s), 7.89 (1H, d), 11.78 (1H, s).

MS m/e MH⁺543.

중간체 18: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-2- 히드록시에틸카르바모일 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(148 mg, 0.39 mmol)를 NMP(3 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(134 mg, 0.37 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민(0.077 mL, 0.44 mmol)의 교반 용액에 한번에 가하였다. 혼합물을 2-아미노-2-(4-클로로페닐)에탄올(70 mg, 0.41 mmol)(CAS^TM no. 179811-64-4, 제법에 대해서는 US2006/0004045 참조)로 처리하였다. 암색 용액을 16 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 수용액 사이에 분배하였다. 유기층을 물, 그 다음 염수로 2회 세척하였다. 유기 용액을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켰다. 잔류물을, 구배 용출(1% 메탄올/DCM에서 15% 메탄올/DCM)을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하여 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-히드록시에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(152 mg, 80%)를 무색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.42 (9H, s), 1.93-2.12 (4H, m), 3.45-3.63 (4H, m), 4.22-4.33 (2H, m), 4.75-4.88 (2H, m), 6.59-6.61 (1H, m), 7.14-7.24 (2H, m), 7.33 (4H, s), 7.76 (1H, d), 8.14 (1H, s), 11.65 (1H, br, s). m/z (ESI+) (M+H)+ = 515; HPLC t_R = 1.99 min.

중간체 19: (S)- 메틸 3-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판오에이트

요오도메탄(1.038 mL, 16.68 mmol)을 DMF(15 mL) 중의 (S)-3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로판산(1 g, 3.34 mmol) 및 탄산칼륨(0.922 g, 6.67 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(50 mL)와 물(50 mL)로 희석하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 (S)-메틸 3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(1.340 g, 128%)를 오렌지색 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36 (9H, s), 2.71-2.74 (1H, m), 2.74-2.80 (1H, m), 3.57 (3H, s), 4.91 (1H, d), 7.33 (2H, d), 7.39 (2H, d), 7.49 (1H, d). m/z (ESI-) (M-H)- = 312; HPLC tR = 2.57 min.

중간체 20: (S)- 메틸 3-아미노-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판오에이트 (염산염)

염산(1,4-디옥산 중의 4.0 M)(4.18 mL, 16.73 mmol)을 20℃의 DCM(20 mL) 중의 (S)-메틸 3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(중간체 19)(1.05 g, 3.35 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시켜서 (S)-메틸 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(염산염)(0.850 g, 102%)를 백색 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 2.98-3.04 (1H, m), 3.16-3.21 (1H, m), 3.58 (3H, s), 4.62-4.66 (1H, m), 7.50-7.52 (2H, m), 7.57-7.59 (2H, m), 8.66 (3H, s). m/z (ESI+) (M+H)+ = 214; HPLC tR = 1.71 min.

중간체 21: (S)- 메틸 3-(4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미도 )-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판오에이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(1.157 g, 3.04 mmol)를 20℃의 NMP(10 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(1 g, 2.77 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(1.006 mL, 6.09 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 5 분 동안 교반하였다. 그 다음, (S)-메틸 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(염산염)(중간체 20)(0.692 g, 2.77 mmol)를 그 용액에 가하고, 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(100 mL)로 희석하고, 물(2 x 50 mL)과 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-5% MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-메틸 3-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(1.27 g, 82%)를 백색 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40 (9H, s), 1.99 (2H, s), 2.04-2.07 (2H, m), 2.79-2.84 (2H, m), 3.56 (3H, s), 3.60-3.66 (1H, m), 3.67-3.70 (1H, m), 4.20 (2H, t), 5.20-5.26 (1H, m), 6.73 (1H, d), 7.13 (1H, s), 7.27 (1H, t), 7.35 (4H, q), 8.14 (1H, d), 8.21 (1H, s), 11.98 (1H, s). m/z (ESI+) (M+H)+ = 557; HPLC tR = 2.12 min.

중간체 22: (S)- tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 히드록시프로필카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

LiAlH₄(2.280 mL, 2.28 mmol)를 질소 하에 0℃로 냉각시킨 THF(70 mL) 중의 (S)-메틸 3-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(중간체 21)(1.27g, 2.28 mmol)에 적가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수산화나트륨(2 M)(2 mL)과 물(1 mL)로 켄칭하였다. 용액을 여과하고, EtOAc(200 mL)로 희석하였으며, 물(100 mL), 물(100 mL)과 포화 염수(100 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(1.04g, 86%)를 백색 고형분으로서 얻었다. M/z (ESI+) (M+H)+ = 529; HPLC tR = 2.00 min.

중간체 23: 2-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-2-(4- 클로로페닐 )에틸 메탄술포네이트

메탄술포닐 클로라이드(1.451 mL, 18.74 mmol)를 질소 하에 5 분에 걸쳐서 0℃로 냉각시킨 DCM(40 mL) 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-히드록시에틸카르바메이트(4.63 g, 17.04 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(6.23 mL, 35.78 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM(100 mL)으로 희석하고, 물(100 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-10% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-2-(4-클로로페닐)에틸 메탄술포네이트(3.12 g, 52.3%)를 백색 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.39 (9H, s), 3.17 (3H, s), 4.22-4.28 (2H, m), 4.90 (1H, d), 7.40-7.46 (4H, m), 7.68 (1H, d). m/z (ESI+) (M-H)- = 348; HPLC tR = 2.32 min.

상기 반응에서 사용된 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-히드록시에틸카르바메이트를 다음과 같이 제조하였다. 2-아미노-2-(4-클로로페닐)아세트산(12 g, 64.65 mmol)을 THF(200 mL) 중에서 교반하고, 붕수소화나트륨(5.82 g, 153.87 mmol)을 잘소 하에 교반 혼합물에 조금씩 가하였다. 빙욕을 사용하여 온도를 15℃ 아래로 유지시키면서 THF(20 mL) 중의 요오드(16.41 g, 64.65 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 용액을 실온으로 가온하고, 밤새도록 환류 하에 교반하였다. 메탄올(40 mL)을 가하여 반응을 켄칭하였다. 이 용액의 일부를 제거하고(50 mL), 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기층을 감압 농축시켰다. 잔류물을, 구배 용출(0-10% 메탄올/DCM)을 사용하여 실리카 상에서 MPLC에 의해 정제하였다. 소정의 생성물, 2-아미노-2-(4-클로로페닐)에탄올(1.318 g, 11.88%)을 무색 고형분으로서 이와 같이 단리하였다.

¹H NMR (399.9 MHz, CDCl₃) δ 2.00 (3H, br, s), 3.48-3.58 (1H, m), 3.68-3.76 (1H, m), 4.02-4.08 (1H, m), 7.23-7.39 (4H, m). m/z (ESI-) (M-H)- = 284,286; HPLC tR = 2.20 min.

용액의 나머지는 트리에틸아민(18.02 mL, 129.31 mmol) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트(14.11 g, 64.65 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반한 후, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 농축시켰다. 잔류물을, 구배 용출(10% 에틸 아세테이트/DCM에서 50% 에틸 아세테이트/DCM)을 사용하여 실리카 상에서 MPLC에 의해 정제하였다. 소정의 생성물, tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-히드록시에틸카르바메이트(7.91 g, 45.0%)를 무색 고형분으로서 이와 같이 단리하였다. 불순한 분획을 MPLC에 의해 재정제하여 두 번째 결과물(2.41 g, 14%)을 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d6) δ 1.37 (9H, s), 3.41-3.52 (2H, m), 4.42-4.58 (1H, m), 4.79 (1H, t), 7.23 (1H, d), 7.31 (2H, d), 7.37 (2H, d).

중간체 24: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-2- 시아노에틸카르바메이트

시안화나트륨(105 mg, 2.14 mmol)을 20℃의 DCM(5 mL) 중의 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-2-(4-클로로페닐)에틸 메탄술포네이트(중간체 23)(300 mg, 0.86 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 물(10 mL)에 재용해시켰으며, DCM(3 x 10 mL)으로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 이소헥산 중의 0-25% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-시아노에틸카르바메이트(209 mg, 87%)를 백색 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38-1.42 (9H, s), 2.82-2.89 (2H, m), 4.89 (1H, d), 7.38-7.45 (4H, m), 7.76 (1H, d). m/z (ESI+) (M-H)- = 279; HPLC tR = 2.42 min.

중간체 25: tert -부틸 3-아미노-1-(4- 클로로페닐 ) 프로필카르바메이트

수소화알루미늄리튬(0.712 mL, 0.71 mmol)을 질소 하에 20℃의 THF(4 mL) 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-시아노에틸카르바메이트(중간체 24)(200 mg, 0.71 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaOH(1 M)(1 mL)로 켄칭하였으며, 용액을 여과하였다. 용액을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 물(2 x 10 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 tert-부틸 3-아미노-1-(4-클로로페닐)프로필카르바메이트(203 mg, 100%)를 검으로서 얻었다. m/z (ESI+) (M+H)+ = 285; HPLC tR = 2.33 min.

중간체 26: tert -부틸 3- 아세트아미도 -1-(4- 클로로페닐 ) 프로필카르바메이트

아세트산 무수물(0.084 mmol, 0.89 mmol)을 20℃의 DCM(5 mL) 중의 tert-부틸 3-아미노-1-(4-클로로페닐)프로필카르바메이트(중간체 25)(203 mg, 0.71 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.248 mL, 1.43 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO₃(2 M)(10 mL) 및 물(10 mL)로 켄칭하고, DCM(20 mL)으로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-2.5% MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 3-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)프로필카르바메이트(142 mg, 61.0%)를 백색 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ1.36 (9H, s), 1.67-1.82 (2H, m), 1.79 (3H, s), 2.97 (2H, q), 4.50 (1H, d), 7.32 (2H, d), 7.38 (2H, d), 7.43-7.45 (1H, m), 7.79 (1H, s). m/z (ESI+) (M+H)+ = 327; HPLC tR = 2.03 min.

중간체 27: N-(3-아미노-3-(4- 클로로페닐 )프로필) 아세트아미드

tert-부틸 3-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)프로필카르바메이트(중간체 26)(142 mg, 0.43 mmol)를 20℃의 TFA(2 mL)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 40 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 N-(3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로필)아세트아미드(39.0 mg, 39.6%)를 무색 검으로서 얻었다. m/z (ESI+) (M+H)+ = 227; HPLC tR = 1.32 min.

중간체 28: tert -부틸 4-(3- 아세트아미도 -1-(4- 클로로페닐 ) 프로필카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(98 mg, 0.26 mmol)를 질소 하에 20℃의 NMP(2 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(62.2 mg, 0.17 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.085 mL, 0.52 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 5 분 동안 교반하였다. 그 다음, NMP(2 mL) 중의 N-(3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로필)아세트아미드(중간체 27)(39 mg, 0.17 mmol)를 반응물에 가하고, 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(20 mL)로 희석하였으며, 물(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 tert-부틸 4-(3-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(1.04 g, 86%)를 백색 고형분으로서 얻었다. m/z (ESI+) (M+H)+ = 570; HPLC tR = 1.95 min.

중간체 29: 3-아미노-3-(4- 클로로페닐 )프로판-1-올

보란-테트라히드로푸란 착체(94.0 mL, 93.92 mmol)를 0℃의 THF(75 mL) 중의 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로피온산(2.50 g, 12.52 mmol)의 교반 현탁액에 20 분에 걸쳐서 질소 하에 적가하였다.생성된 현탁액을 0℃에서 30 분 동안, 그 다음 22℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올(500 mL)에 조금씩 가하였다. 혼합물을 농축시키고, 메탄올(250 mL)에 재용해시켰으며, 재농축시켰다(이 과정을 3회 반복하였다). 잔류물을 DCM(200 mL)에 용해시키고, 1 N NaOH(150 mL)로 세척하였다. 수층을 DCM(5 x 100 mL)으로 추출하고, 추출물을 유기층과 합하였다. 합한 유기물을 포화 염수(2 x 150 mL)로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 농축시켜서 백색 반고형분을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 5-7% (10:1 MeOH/진한 NH₃(aq))의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올(1.320 g, 56.8%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.87 (2H, m), 2.34 (2H, br.s), 3.79 (2H, m), 4.13 (1H, t), 7.24 (2H, d), 7.32 (2H, d).

MS m/e MH⁺169

중간체 30: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-3- 히드록시프로필카르바메이트

디-tert-부틸 디카르보네이트(0.705 g, 3.23 mmol)를 22℃의 DCM(30 mL) 중의 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올(중간체 29)(0.500 g, 2.69 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DCM 중의 0-4% (10:1 MeOH/진한 NH₃(aq))의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바메이트(0.759 g, 87%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.43 (9H, s), 1.81 (1H, m), 2.04 (1H, m), 2.74 (1H, br.s), 3.69 (2H, m), 4.88 (1H, br.s), 5.04 (1H, d), 7.23 (2H, d), 7.32 (2H, d).

MS m/e MH- 284, 286

중간체 31: 3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로필 메탄술포네이트

메탄술포닐 클로라이드(0.097 mmol, 1.25 mmol)를 22℃의 DCM(15 mL) 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바메이트(중간체 30)(0.326 g, 1.14 mmol) 및 트리에틸아민(0.191 mL, 1.37 mmol)에 적가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 이소헥산 중의 20-40% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로필 메탄술포네이트(0.366 g, 88%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.42 (9H, s), 2.19 (2H, m), 3.01 (3H, s), 4.24 (2H, m), 4.82 (2H, m), 7.22 (2H, d), 7.33 (2H, d).

MS m/e MH- 362, 364

중간체 32: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-3-(디메틸아미노) 프로필카르바메이트

3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로필 메탄술포네이트(중간체 31)(0.075 g, 0.21 mmol) 및 테트라부틸암모늄 요오다이드(0.015 g, 0.04 mmol)를 THF 중의 디메틸아민(2 M, 5.153 mL, 10.31 mmol)의 용액에 용해시키고, 마이크로웨이브 튜브에 밀봉하였다. 반응물을 마이크로웨이브 반응기에서 150℃로 30 분 동안 가열하고, 상온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 농축시키고, DCM(25 mL)으로 희석하였으며, 물(25 mL)로 세척하였다. 유기층을 상 분리 필터지에 통과시켜 여과하고, 증발시켰다. 미정제 생성물을 DCM 중의 4-8% (10:1 MeOH/진한 NH₃(aq))의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필카르바메이트(0.054 mg, 84%)를 무색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.40 (9H, s), 1.80 (1H, br.s), 1.94 (1H, m), 2.23 (6H, s), 2.26 (2H, m), 4.71 (1H, br.s), 6.16 (1H, br.s), 7.21 (2H, d), 7.29 (2H, d).

MS m/e MH⁺313

중간체 33: 1-(4- 클로로페닐 )- N3 , N3 -디메틸프로판-1,3- 디아민

염산(디옥산 중의 4 M, 1.132 mL, 32.61 mmol)을 22℃의 DCM(5 mL) 및 메탄올(2 mL)의 혼합물 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필카르바메이트(중간체 32)(0.051 g, 0.16 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 2 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 1-(4-클로로페닐)-N3,N3-디메틸프로판-1,3-디아민(0.032 g, 92%)를 무색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.72-1.85 (2H, m), 2.19-2.32 (2H, m), 2.21 (6H, s), 3.99 (1H, t), 7.25-7.31 (4H, m).

MS m/e MH⁺213

중간체 34: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3-(디메틸아미노) 프로필카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(0.044 g, 0.12 mmol)를 22℃의 NMP(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(0.040 g, 0.11 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.023 mL, 0.13 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 50℃에서 10 분 동안 교반하였다. 혼합물을 상온으로 냉각시키고, 1-(4-클로로페닐)-N3,N3-디메틸프로판-1,3-디아민(중간체 33)(0.023 g, 0.11 mmol)를 NMP(2 mL) 중의 용액으로서 가하였다. 혼합물을 22℃에서 3 일 동안 교반하였다. 혼합물을 메탄올로 희석하고, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였는데, 소정의 생성물을, DCM 중의 30% (MeOH 중의 2 M NH₃)를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 생성물 함유 분획을 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% (10:1 MeOH/진한 NH₃(aq))의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(0.047 g, 76%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.43 (9H, s), 1.82 (2H, m), 1.90-2.04 (5H, m), 2.14 (6H, s), 2.16 (2H, m), 3.54 (2H, m), 4.25 (2H, m), 4.86 (1H, dt), 6.61 (1H, dd), 7.09 (1H, br.s), 7.17 (1H, dd), 7.33 (4H, s (roof effect)), 8.14 (1H, s), 8.45 (1H, d), 11.65 (1H, s).

MS m/e MH⁺556

중간체 35: 메틸 3-(4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미도 )-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판오에이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(84 mg, 0.22 mmol)를 아르곤 하에 20℃의 N-메틸-2-피롤리돈(1.5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(72.3 mg, 0.20 mmol), 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로피온산 메틸 에스테르 염산염(50 mg, 0.20 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.104 mL, 0.60 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을, 용리제로서 물(0.2% 탄산암모늄을 함유함) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물로 Waters X-bridge 역상 컬럼(C-18, 5 미크론 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이, 40 ml/분의 유속)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 소정의 화합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 메틸 3-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(71.0 mg, 63.8%)를 백색 결정 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36 (9H, s), 1.94-2.00 (4H, m), 2.79-2.86 (2H, dq), 3.54 (3H, s), 3.52-3.61 (2H, m), 4.19 (2H, t), 5.22 (1H, q), 6.56 (1H, d), 6.9 (1H br s), 7.13 (1H, d), 7.33 (4H, q), 7.98 (1H, d), 8.12 (1H, s), 11.53 (1H, s). m/z (ESI+) (M+H)+ = 557; HPLC tR = 3.18 min.

중간체 36: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 히드록시프로필카르바모일 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

붕수소화나트륨(1.019 g, 26.93 mmol)을 아르곤 하에 EtOH(400 mL)에 용해시킨 메틸 3-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(중간체 35)(1.0 g, 1.80 mmol)의 교반 현탁액에 한번에 가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 70 시간 동안 교반하였다. 몇 방울의 물을 가하여 과잉의 수소화물을 켄칭하고, 혼합물을 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 CH₂CH₂와 NaCl로 포화된 물 사이에 분배하였다. 유기상을 건조시키고, 농축시켜서 미정제 생성물을 백색 결정으로서 얻었다. 미정제 생성물을 디클로로메탄 중의 0-10% 메탄올로 용출시키면서 실리카겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(286 mg, 30.1%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.41 (9H, s), 1.79-1.99 (6H, m), 3.31-3.37 (2H, m), 3.51 (2H, m), 4.21-4.28 (2H, m), 4.55 (1H, s), 4.90 (1H, q), 6.59 (1H, d), 7.06 (1H, s), 7.16 (1H, d), 7.31 (4H, s), 8.01 (1H, d), 8.12 (1H, s), 11.67 (1H, s). m/z (ESI+) (M-H)- = 529; HPLC tR = 2.93 min.

중간체 37: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3-(1,3- 디옥소이소인돌린 -2-일)프로필카르바모일)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

트리페닐포스핀(158 mg) 및 프탈이미드(22.11 mg)를, THF(10 mL)에 용해시키고, 아르곤 하에 0℃로 냉각시킨 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 36)(53 mg)의 교반 용액에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 0℃에서 30 분 동안 교반하였다. 디에틸 아조디카르복실레이트(0.093 mL)를 0℃에서 아르곤 하에 적가하였다. 생성된 현탁액을 0℃에서 60 분 동안, 그리고 실온에서 밤새도록 교반하였다. 현탁액을 물로 켄칭하였다. 피리딘을 진공 제거하고, 수상을 DCM으로 추출하였다. 유기상을 건조시키고, 농축시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-10% 메탄올로 용출시키면서 실리카겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트를 백색 고형분(14.00 mg, 21.23%)으로서 얻었다.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.37 (9H, s), 2.01 (4H, m), 2.09 (2H, m), 3.58 (4H, m), 4.23 (2H, m), 4.84 (1H, q), 6.60 (1H, d), 7.00 (1H, m), 7.16 (1H, t), 7.27 (2H, d), 7.33 (2H, d), 7.82 (4H, m), 8.12 (1H, d), 8.13 (1H, s), 11.67 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 658.

중간체 38: tert -부틸 4-(3-아미노-1-(4- 클로로페닐 ) 프로필카르바모일 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

히드라진 일수화물(10.32 ㎕)을 아르곤 하에 에탄올(1.0 mL) 중의 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(중간체 37)(14 mg)의 교반 현탁액에 가하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 3 일 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 용리제로서 물(0.2% 탄산암모늄을 함유함) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물과 Waters X-bridge 역상 컬럼(C-18, 5 미크론 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-(3-아미노-1-(4-클로로페닐)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(5.00 mg, 44.5%)를 백색 분말로서 얻었다.

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃ + CD₃OD) δ 1.43 (9H, s), 1.93 (2H, s), 2.19 (4H, m), 2.74 (2H, s) 3.57 (4H, m), 4.39 (2H, t), 5.01 (1H, t), 6.53 (1H, d), 7.07 (1H, d), 7.28 (4H, q), 8.19 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 528.

중간체 39: (R)- 메틸 3-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판오에이트

요오도메탄(0.987 mL, 15.85 mmol)을 DMF(15 mL) 중의 boc-(R)-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로피온산(950 mg, 3.17 mmol) 및 탄산칼륨(876 mg, 6.34 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(25 mL)와 물(25 mL)로 희석하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 (R)-메틸 3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(990 mg, 100%)를 오렌지색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36 (9H, s), 2.67-2.70 (1H, m), 2.71-2.80 (1H, m), 3.57 (3H, s), 4.91 (1H, d), 7.32-7.34 (2H, m), 7.38-7.40 (2H, m), 7.49 (1H, d).

MS m/e MH⁺ 312; HPLC tR = 2.57 min.

중간체 40: (R)- 메틸 3-아미노-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판오에이트 (염산염)

염산(디옥산 중의 4.0 M)(7.89 mL, 31.55 mmol)을 20℃의 DCM(20 mL) 중의 (R)-메틸 3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(중간체 39)(990 mg, 3.16 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시켜서 (R)-메틸 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(염산염)(777 mg, 98%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 2.99-3.05 (1H, m), 3.18-3.23 (1H, m), 3.58 (3H, d), 4.62-4.65 (1H, m), 7.49-7.53 (2H, m), 7.57-7.61 (2H, m), 8.72 (3H, s).

MS m/e MH⁺ 214; HPLC tR = 1.71 min.

중간체 41: (R)- 메틸 3-(4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판오에이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(0.579 g, 1.52 mmol)를 20℃의 NMP(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(0.5 g, 1.38 mmol) 및 DIPEA(0.503 mL, 3.04 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 5 분 동안 교반하였다. 그 다음, (R)-메틸 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(염산염)(중간체 40)(0.346 g, 1.38 mmol)를 그 용액에 가하고, 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(100 mL)로 희석하고, 물(50 mL), 물(50 mL) 및 물(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-5% MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (R)-메틸 3-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(0.800 g, 100%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40 (9H, s), 1.94-1.98 (2H, m), 2.00-2.01 (2H, m), 2.83 (1H, d), 2.85-2.87 (2H, m), 3.55 (3H, s), 3.60 (2H, s), 4.21 (2H, s), 5.23 (1H, d), 6.60-6.61 (1H, m), 7.16-7.18 (1H, m), 7.35 (4H, q), 8.09-8.14 (2H, m), 11.65 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 557; HPLC tR = 2.29 min.

중간체 42: (R)- tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 히드록시프로필카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

LiAlH₄(1.398 mL, 1.40 mmol)를 질소 하에 0℃로 냉각시킨 THF(40 mL) 중의 (R)-메틸 3-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(중간체 41)(779 mg, 1.40 mmol)에 적가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(1 mL)로 켄칭하고, 2 M HCl로 중화하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, DCM(100 mL)에 재용해시켰으며, 물(100 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-10% MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 합하고, 증발시켜서 (R)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(160 mg, 21.63%)를 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.37-1.41 (9H, s), 1.86-1.92 (2H, m), 1.94 (2H, d), 2.00 (2H, d), 3.38 (2H, s), 3.53-3.55 (2H, m), 4.25 (2H, t), 4.52 (1H, s), 4.91 (1H, d), 6.60-6.62 (1H, m), 7.01 (1H, s), 7.16-7.18 (1H, m), 7.33 (4H, m), 7.98-8.00 (1H, m), 8.14 (1H, s), 11.67 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 529; HPLC tR = 2.01 min.

중간체 43: 1-( tert - 부톡시카르보닐 )-4- 시아노피페리딘 -4- 카르복실산

수산화리튬(2 M, 39.0 mL, 77.92 mmol)의 수용액을 25℃의 THF(78 mL) 중의 1-tert-부틸 4-에틸 4-시아노피페리딘-1,4-디카르복실레이트(중간체 7)(5.5 g, 19.48 mmol)의 교반 용액에 가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 3 시간 동안 교반하고, TLC에 의해 모니터하였다. 반응 혼합물을 디에틸 에테르(150 mL)로 희석하고, 물(100 mL)로 세척하였다. 수층을 합한 다음, 시트르산(1 N, 200 mL)으로 산성화하였다. 생성물을 DCM으로 추출하였다. 유기층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 1-(tert-부톡시카르보닐)-4-시아노피페리딘-4-카르복실산(4.50 g, 91%)을 얻었다. 이 물질을 더 이상 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 1.40 (9H, s), 1.87-1.97 (2H, m), 2.04 (2H, d), 3.08 (2H, t), 4.05 (2H, s), 8.23 (1H, s).

중간체 44: (R)-N-(1-(4- 클로로페닐 )에틸)-4- 시아노피페리딘 -4- 카르복시아미드

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(1.255 g, 3.30 mmol)를 질소 하에 25℃의 DMA(20 mL) 중의 1-(tert-부톡시카르보닐)-4-시아노피페리딘-4-카르복실산(중간체 43)(0.763 g, 3 mmol), (R)-1-(4-클로로페닐)에탄아민(0.462 g, 3.00 mmol) 및 DIPEA(1.572 mL, 9.00 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시키고, DCM(150 mL)에 재용해시켰으며, 1 M 시트르산 수용액(50 mL), 물(50 mL)과 포화 탄산수소나트륨(100 mL)으로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 이와 같이 얻은 미정제 생성물을 농축시킨 다음, 이소헥산 중의 0-100% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜서 (R)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)에틸카르바모일)-4-시아노피페리딘-1-카르복실레이트(1.100 g, 94%)를 무색 검으로서 얻었으며, 고 진공 하에 건조시 고화되었다. 그 다음, 이 물질을 DCM(20.00 mL)에 현탁시키고, 트리플루오로아세트산(2.311 mL, 30.00 mmol)을 가하였다. 용액을 실온에서 3 시간 동안 교반한 후, 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 N 암모니아/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (R)-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-4-시아노피페리딘-4-카르복시아미드(0.720 g, 82%)를 무색 검으로서 얻었다. 이 물질을 더 이상 정제하지 않고 다음 단계에서 직접 사용하였다.

MS m/e MH⁺ 292.

실시예 45: (R)-N-(1-(4- 클로로페닐 )에틸)-1-4- 시아노 -1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드

DIPEA(1.101 mL, 6.17 mmol)를 25℃의 DMA(50 mL) 중의 (R)-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-4-시아노피페리딘-4-카르복시아미드(중간체 44)(720 mg, 2.47 mmol) 및 6-클로로-7-데아자푸린(379 mg, 2.47 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 90℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 N 암모니아/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (R)-N-(1-(4-클로로페닐)에틸)-4-시아노-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(46.2%)를 오렌색 고형분으로서 얻었다. 이것을 더 이상 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.

¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 1.38 (3H, d), 1.94-2.09 (3H, m), 2.19 (3H, t), 4.72 (2H, d), 4.92 (1H, dd), 6.61-6.72 (1H, m), 7.23 (1H, dd), 7.30-7.41 (4H, m), 8.18 (1H, s), 8.77 (1H, d), 11.77 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 409.

중간체 46: (S) -4-(1-아미노-3-히드록시프로필) 벤조니트릴

붕수소화나트륨(1.039 mL, 29.48 mmol)을 0℃의 메탄올(20 mL) 중의 (S)-메틸 3-아미노-3-(4-시아노페닐)프로판오에이트(2.23 g, 10.92 mmol)에 5 분에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃(50 mL)로 켄칭하고, EtOAc(3 x 100 mL)로 추출하였으며, 유기층을 포화 염수(75 mL)로 세척한 다음, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-8% MeOH와 암모니아의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4(1-아미노-3-히드록시프로필)벤조니트릴(0.368 g, 19.13%)을 무색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.84-1.93 (2H, m), 3.77-3.80 (2H, m), 4.22-4.25 (1H, m), 7.43 (2H, m), 7.63-7.66 (2H, m).

MS m/e MH⁺ 177.

중간체 47: (S)-3-아미노-3-(4- 클로로페닐 )프로판-1-올

보란-테트라히드로푸란 착체(376 mL, 375.69 mmol)를 0℃의 THF(500 mL) 중의 (S)-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로피온산(10 g, 50.09 mmol)의 교반 현탁액에 45 분에 걸쳐서 질소 하에 적가하였다. 생성된 현탁액을 0℃에서 30 분 동안, 그 다음 22℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올(500 mL)에 조금씩 가하였다. 용액을 실온에서 3 일 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 메탄올(250 mL)에 재용해시켰으며, 재농축시켰다(이 과정을 3회 반복하였다). 잔류물을 DCM(75 mL)에 용해시키고, 1 N NaOH(50 mL)로 세척하였다. 수층을 DCM(3 x 100 mL)으로 추출하고, 추출물을 유기층과 합하였다. 합한 유기물을 포화 염수(50 mL)로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 농축시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% MeOH/암모니아의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올(5.76 g, 61.9%)을 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.84-1.93 (2H, m), 3.76-3.81 (2H, m), 4.13 (1H, t), 7.23-7.25 (2H, m), 7.30-7.34 (2H, m).

MS m/e MH⁺ 186.

중간체 48: (S)- tert -부틸 4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-4-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 히드록시프로필카르바모일 )피페리딘-1- 카르복실레이트

(S)-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올(중간체 47)(1.09 g, 5.87 mmol)을 DMA(20 mL) 중의 1-(tert-부톡시카르보닐아미노)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피페리딘-4-카르복실산(중간체 70)(2.022 g, 5.87 mmol) 및 DIPEA(3.08 mL, 17.61 mmol)에 한번에 가하였다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(2.456 g, 6.46 mmol)를 가하고, 생성된 용액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시킨 다음, EtOAc(300 mL)로 희석하고, 물(50 mL)과 포화 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시킨 다음, 디에틸 에테르로 분쇄하여 (S)-tert-부틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)피페리딘-1-카르복실레이트(4.66 g, 155%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.39 (18H, s), 1.71-1.92 (6H, m), 3.06 (2H, s), 3.36 (2H, t), 3.54-3.65 (2H, m), 4.52 (1H, t), 4.89 (1H, q), 6.89 (1H, s), 7.29-7.34 (4H, m).

MS m/e M+Na⁺ 534.

중간체 49: (S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카 르복시아미 드

디옥산 중의 염산 4 M(11.72 mL, 46.87 mmol)을 디옥산(30 mL) 중의 (S)-tert-부틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)피페리딘-1-카르복실레이트(중간체 48)(3 g, 5.86 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올에 용해시키고, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 3.5 N 암모니아/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카르복시아미드(1.970 g, 108%)를 무색 검으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.20-1.28 (2H, m), 1.75-1.91 (4H, m), 2.67-2.83 (2H, m), 3.30 (2H, m), 4.87 (1H, s), 7.30-7.37 (4H, m).

MS m/e MH⁺ 312.

중간체 50: 5- 브로모 -4- 클로로 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘

N-브로모숙신이미드(6.84 g, 38.42 mmol)를 질소 하에 20℃의 무수 DCM(125 mL) 중의 4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(5 g, 32.56 mmol)에 조금씩 가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, 생성된 갈색 고형분을 물로 분쇄하여 자주색 고형분을 얻었으며, 여과 수집하였다. 미정제 고형분을 고온 MeOH로 분쇄하여 고형분을 얻었으며, 여과 수집하였다. 고온 분쇄를 반복하여 5-브로모-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(5.23 g, 69.1%)을 크림색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 7.94 (1H, s), 8.63 (1H, s), 12.95 (1H, s)

MS m/e MH⁺ 234.

중간체 51: (S)-3-아미노-3-(4-브로모페닐)프로판-1-올

보란-테트라히드로푸란 착체(71.7 mL, 71.70 mmol)를 0℃의 THF(80 mL) 중의 (S)-3-아미노-3-(4-브로모페닐)프로피온산(3.5 g, 14.34 mmol)의 교반 현탁액에 30 분에 걸쳐서 질소 하에 적가하였다. 생성된 현탁액을 0℃에서 30 분 동안, 그 다음 22℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 메탄올(250 mL)에 조금씩 가하였다. 용액을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 메탄올(250 mL)에 재용해시켰으며, 재농축시켰다(이 과정을 3회 반복하였다). 잔류물을 DCM(75 mL)에 용해시키고, 1 N NaOH(50 mL)로 세척하였다. 수층을 DCM(3 x 100 mL)으로 추출하고, 추출물을 유기층과 합하였다. 합한 유기물을 포화 염수(50 mL)로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 농축시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% MeOH/암모니아의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-3-아미노-3-(4-브로모페닐)프로판-1-올(2.160 g, 65.5%)을 무색 검으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.82-1.90 (2H, m), 3.76-3.82 (2H, m), 4.12 (1H, t), 7.17-7.20 (2H, m), 7.45-7.49 (2H, m).

MS m/e MH⁺ 230.

중간체 52: 에틸 4-(4- 클로로페닐 )-4-( 메톡시이미노 ) 부탄오에이트

에탄올(150 mL) 중의 4-(4-클로로페닐)-4-옥소부탄산(10 g, 47.03 mmol), 메톡실아민 염산염(4.91 g, 58.79 mmol) 및 탄산나트륨(5.98 g, 56.44 mmol)을 교반하고, 80℃로 4 시간 동안 교반하였다. 그 다음, 혼합물을 실온으로 냉각시킨 후, 여과하였다. 여액을 증발 농축시키고, 플래쉬 실리카 크로마토그래피(용출제 20-50% EtOAc/이소헥산)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 에틸 4-(4-클로로페닐)-4-(메톡시이미노)부탄오에이트(12.33 g, 97%)를 오렌지색 투명 액체로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO) 1.13-1.17 (3H, t), 2.26-2.50 (2H, t), 2.50-2.52 (1H, qu), 2.94-2.98 (2H, t), 3.94 (3H, s), 4.00-4.05 (2H, q), 7.47-7.49 (2H, d), 7.66-7.69 (2H, d).

중간체 53: 4-(4- 클로로페닐 )-4-( 메톡시이미노 )부탄산

수산화리튬 일수화물(9.59 g, 228.57 mmol)을 물(25.4 mL), THF(102 mL) 및 에탄올(102 mL) 중의 에틸 4-(4-클로로페닐)-4-(메톡시이미노)부탄오에이트(중간체 52)(12.33 g, 45.71 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 1 일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(200 mL)로 희석하고, 물(200 mL)로 세척하였다. 수층을 1 M 시트르산 용액으로 pH 5로 조절한 다음, EtOAc(3 x 150 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 포화 염수(25 mL)로 세척한 다음, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 소정의 생성물 4-(4-클로로페닐)-4-(메톡시이미노)부탄산(7.63 g, 69.1%)을 담황색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz) 2.39-2.43 (2H, t), 2.91-2.95 (2H, t), 3.94 (3H, s), 7.47-7.49 (2H, d), 7.67-7.69 (2H, d), 12.21 (1H, broad).

MS m/e MH⁺ 242.

중간체 54: 4-아미노-4-(4- 클로로페닐 )부탄-1-올

테트라히드로푸란(30 mL) 중의 4-(4-클로로페닐)-4-(메톡시이미노)부탄산(중간체 53)(6.43 g, 26.61 mmol)을 질소 분위기 하에 얼음-메탄올 욕에서 냉각시켰다. 보란-테트라히드로푸란 착체(THF 중의 1.0 M)(93 mL, 93.12 mmol)를 20 분에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 용액을 실온으로 가온하고, 1 시간 동안 교반한 다음, 6 시간 더 환류 가열하였다. 빙수 중에서 냉각시킨 후, 교반하면서 10 분에 걸쳐서 혼합물에 물(20 mL)을 적가하여 처리하였다. 혼합물을 다시 실온으로 가온하고, 2 시간 동안 교반한 후, 대부분의 용매를 증발시켰다. 그 다음, 잔류물을 빙수 중에서 냉각시키고, 50% NaOH(aq.)(20 mL)를 교반하면서 적가하였다. 생성된 혼합물을 교반하고, 90℃로 4 시간 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, Et₂O로 3회 추출하였다. 합한 추출물을 물, 이어서 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 증발 건조시켰다. 그 다음, 미정제 생성물을 플래쉬 실리카 크로마토그래피(용리제 0-10% MeOH 중의 암모니아/DCM)에 의해 정제하고, 순수한 분획을 증발시켜서 4-아미노-4-(4-클로로페닐)부탄-1-올(3.88 g, 73.0%)을 무색 투명 검으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz) 1.25-1.47 (2H, dm), 1.51-1.61 (2H, m), 3.34-3.38 (2H, t), 3.76-3.79 (1H, t), 7.33-7.38 (4H, m).

중간체 55: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-4- 히드록시부틸카르바메이트

디-tert-부틸 디카르보네이트(1.588 mmol, 6.91 mmol)를 질소 하에 25℃의 DCM(20 mL) 중의 4-아미노-4-(4-클로로페닐)부탄-1-올(중간체 54)(1.38 g, 6.91 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 증발 건조시키고, 미정제 유분을 이소헥산으로 분쇄하여 고형분을 얻었으며, 여과 수집하고, 진공 건조시켜서 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸카르바메이트(1.800 g, 87%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.40 (9H, s), 1.48-1.66 (2H, m), 1.78-1.83 (2H, m), 3.63-3.68 (2H, m), 4.61 (1H, s), 4.84 (1H, s), 7.21 (2H, m), 7.29-7.31 (2H, m).

중간체 56: 4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-4-(4- 클로로페닐 )부틸 메탄술포네이트

메탄술포닐 클로라이드(0.511 mmol, 6.60 mmol)를 25℃의 DCM(30.0 mL) 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸카르바메이트(중간체 55)(1.80 g, 6.00 mmol) 및 트리에틸아민(1.004 mL, 7.20 mmol)에 질소 하에 15 분에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 DCM에 현탁시켰으며, 여과하고, 여액을 이소헥산 중의 20-100% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-4-(4-클로로페닐)부틸 메탄술포네이트(2.270 g, 100%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.41 (9H, s), 1.67-1.87 (4H, m), 2.99 (3H, s), 4.23 (2H, t), 4.62 (1H, s), 4.75 (1H, s), 7.20 (2H, d), 7.30-7.33 (2H, d).

MS m/e M+Na⁺ 400.

중간체 57: 1-(4- 클로로페닐 )- N4 , N4 -디메틸프로판-1,4- 디아민

디메틸아민(84 mg, 1.85 mmol) 및 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-4-(4-클로로페닐)부틸 메탄술포네이트(중간체 56)(700 mg, 1.85 mmol)를 THF(10 mL)에 용해시키고, 마이크로웨이브 튜브에 밀봉하였다. 반응물을 마이크로웨이브 반응기에서 120℃로 40 분 동안 가열하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 농축시킨 다음, DCM(10.00 mL) 및 TFA(2 mL)에 용해시켰다. 반응물을 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 3.5 N 암모니아/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 1-(4-클로로페닐)-N4,N4-디메틸부탄-1,4-디아민(366 mg, 87%)을 황색 검으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 0.70-0.79 (1H, m), 0.82-0.91 (1H, m), 0.93-1.09 (2H, m), 1.21 (6H, s), 1.64 (2H, t), 3.23 (1H, t), 6.58-6.66 (4H, m).

MS m/e MH⁺ 227.

중간체 58: (S)- tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-3- 히드록시프로필카르바메이트

디-tert-부틸 디카르보네이트(8.04 mL, 35.01 mmol)를 질소 하에 25℃의 DCM(20 mL) 중의 (S)-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올(중간체 47)(6.5 g, 35.01 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 증발 건조시키고, 미정제 유분을 이소헥산으로 분쇄하여 고형분을 얻었으며, 여과 수집하고, 진공 건조시켜서 (S)-tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바메이트(9.20 g, 92%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, CDCl₃) δ 1.43 (9H, s), 1.78-1.84 (1H, m), 2.05 (1H, d), 2.74 (1H, s), 3.67-3.71 (2H, m), 4.88 (1H, s), 5.04 (1H, d), 7.21-7.24 (2H, m), 7.30-7.33 (2H, m).

MS m/e M+Na⁺ 308.

중간체 59: (S)-3-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-3-(4- 클로로페닐 )프로필 메탄술포네이트

메탄술포닐 클로라이드(2.74 mL, 35.41 mmol)를 25℃의 DCM(161 mL) 중의 (S)-tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바메이트(중간체 58)(9.2 g, 32.19 mmol) 및 트리에틸아민(5.38 mL, 38.63 mmol)에 질소 하에 15 분에 걸쳐서 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 30 분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 이소헥산 중의 40-100% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로필 메탄술포네이트(10.03 g, 86%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, CDCl₃) δ 1.36-1.48 (9H, m), 2.20 (2H, s), 3.01 (3H, s), 4.19-4.29 (2H, m), 4.81 (2H, s), 7.21-7.23 (2H, d), 7.32-7.35 (2H, d).

MS m/e M+Na⁺ 386.

중간체 60: (S)-1-(4- 클로로페닐 )- N3 , N3 - 디에틸프로판 -1,3- 디아민

디에틸아민(0.426 mL, 4.12 mmol) 및 (S)-3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로필 메탄술포네이트(중간체 59)(500 mg, 1.37 mmol)를 THF(10 mL)에 용해시키고, 마이크로웨이브 튜브에 밀봉하였다. 반응물을 마이크로웨이브 반응기에서 120℃로 50 분 동안 가열하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 농축시키고, DCM(5 mL)으로 희석하였다. TFA(1 mL)를 가하고, 반응물을 20℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 3.5 N 암모니아/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 (S)-1-(4-클로로페닐)-N3,N3-디메틸프로판-1,3-디아민(119 mg, 36.0%)을 황색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 1.00 (6H, t), 1.75-1.82 (2H, m), 2.40-2.54 (6H, m), 3.97 (1H, t), 7.27-7.31 (4H, m).

MS m/e MH⁺ 241.

중간체 61: 5- 브로모 -4- 클로로 -7-토실-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘

5-브로모-4-클로로-7H-피롤[2,3-d]피리미딘(중간체 50)(2 g, 8.60 mmol) 및 p-톨루엔술포닐 클로라이드(1.640 g, 8.60 mmol)를 아세톤(12 mL)에 용해시키고, 질소 하에 교반하하였으며, -5℃ 내지 5℃로 냉각시켰다. 이 용액에 2.0 M NaOH 용액(5.50 mL, 10.99 mmol)을 가하는 동안, 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지시켰다. 반응물을 실온으로 가온하고, 1 시간 동안 교반하였다. 백색 고형물을 여과해내고, 아세톤으로 잘 세척하여 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(3.28 g, 99%)을 옅은 크림색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 2.38 (3H, s), 7.48-7.50 (2H, m), 8.06-8.08 (2H, m), 8.41 (1H, s), 8.84 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 387.

중간체 62: 메틸 1-(5- 브로모 -7-토실-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)-4-(tert-부 톡시카르보닐 아미노)피페리딘-4- 카르복실레이트

트리에틸아민(3.55 mL, 25.45 mmol)을 20℃의 DMA(50 mL) 중의 5-브로모-4-클로로-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘(중간체 61)(3.28 g, 8.48 mmol) 및 메틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피페리딘-4-카르복실레이트(WO200875109)(3.07 g, 11.88 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 70℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(200 mL)로 희석하였으며, 물(75 mL)과 포화 염수(75 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 이소헥산 중의 30-70% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 메틸 1-(5-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피페리딘-4-카르복실레이트(3.60 g, 69.7%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 1.38 (9H, s), 2.03 (2H, s), 2.38 (3H, s), 3.33-3.37 (2H, m), 3.59 (3H, s), 3.84 (2H, d), 7.41 (1H, s), 7.46 (2H, d), 8.00 (1H, s), 8.03 (2H, d), 8.40 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 610.

중간체 63: 메틸 4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-1-(5- 시클로프로필 -7-토실-7H-피 롤로[2,3-d]피리미 딘-4-일)피페리딘-4- 카르복실레이트

메틸 1-(5-브로모-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피페리딘-4-카르복실레이트(중간체 62)(1.1 g, 1.81 mmol), 인산칼륨 삼염기(1.343 g, 6.33 mmol), 트리시클로헥실 포스핀(0.101 g, 0.36 mmol) 및 시클로프로필보론산(0.438 g, 4.34 mmol)을 톨루엔(10 mL)과 물(0.400 mL)에 용해시켰다. 혼합물을 질소로 30 분 동안 퍼지한 다음, 아세트산팔라듐(II)(0.041 g, 0.18 mmol)을 가하였다. 혼합물을 75℃로 6 시간 동안 가열한 다음, 냉각시키고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(75 mL)로 희석하고, 물(50 mL)과 포화 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 이소헥산 중의 10-30% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 메틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실레이트(0.447 g, 43.4%)를 크림색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, CDCl₃) δ 0.72-0.76 (2H, m), 0.99-1.04 (2H, m), 1.43 (9H, s), 1.90-1.94 (1H, m), 2.04-2.10 (2H, m), 2.17-2.25 (2H, m), 2.38 (3H, s), 3.34-3.41 (2H, m), 3.74 (3H, s), 3.98-4.03 (2H, m), 4.76 (1H, s), 7.12 (1H, s), 7.28 (2H, m), 8.03-8.05 (2H, m), 8.46 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 570.

중간체 64: 4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-1-(5- 시클로프로필 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복실산

2 M 수산화나트륨 용액(5.00 mL)을 20℃의 THF(10 mL) 중의 메틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(5-시클로프로필-7-토실-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실레이트(중간체 63)(780 mg, 1.37 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 40℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 수층을 수집하였으며, 2 M HCl 용액으로 pH 4로 산성화하였다. 수층을 DCM(2 x 50 mL)으로 추출하고, 유기층을 합하였으며, 포화 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(375 mg, 68.2%)을 크림색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 0.66-0.73 (2H, m), 0.88-1.00 (2H, m), 1.40 (9H, s), 1.94-2.09 (5H, m), 3.41-3.53 (2H, m), 3.92-4.01 (2H, m), 6.92 (1H, d), 7.18-7.22 (1H, m), 8.21 (1H, s), 11.51 (1H, s), 12.29 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 402.

중간체 65: (S)- tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 히드록시프로필카르바모일 )-1-(5- 시클로프로필 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

(S)-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올(173 mg, 0.93 mmol)을 DMA(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 64)(375 mg, 0.93 mmol) 및 DIPEA(0.489 mL, 2.80 mmol)에 한번에 가하였다. O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(391 mg, 1.03 mmol)를 가하고, 생성된 용액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시킨 다음, EtOAc(75 mL)로 희석하고, 물(50 mL)과 포화 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% 암모니아와 MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 분획을 증발시켜서 (S)-tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(5-시클로프로필-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(420 mg, 79%)를 황색 검으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO-d₆) δ 0.66-0.70 (2H, m), 0.86-0.91 (2H, m), 1.40 (9H, s), 1.81-2.06 (7H, m), 3.33-3.40 (4H, m), 3.90-3.94 (2H, m), 4.53 (1H, t), 4.91-4.93 (1H, m), 6.92 (1H, s), 7.30-7.38 (4H, m), 7.96 (1H, d), 8.20 (1H, s), 11.49 (1H, s).

MS m/e MH⁺ 569.

중간체 66: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-3-( 메틸아미노 ) 프로필카르바메이트

메틸아민 가스를 22℃의 THF(5 mL) 중의 3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로필 메탄술포네이트(중간체 31)(70 mg, 0.19 mmol)의 용액으로 5 분에 걸쳐서 버블링하였다. 혼합물을 마이크로웨이브에 밀봉하였다. 반응물을 마이크로웨이브 반응기에서 125℃로 30 분 동안 가열하고, 상온으로 냉각시켰다. 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 DCM 중의 4-8% (10:1 MeOH/진한 NH₃(aq))의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-(메틸아미노)프로필카르바메이트(52 mg, 90%)를 무색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.41 (9H, s), 1.80 (1H, br.m), 1.93 (1H, br.m), 2.40 (3H, s), 2.59 (2H, m), 4.73 (1H, br.s), 5.94 (1H, br.s), 7.21 (2H, d), 7.29 (2H, d).

MS m/e MH⁺299.5.

중간체 67: 1-(4- 클로로페닐 )- N3 - 메틸프로판 -1,3- 디아민

염산(1,4-디옥산 중의 4 M, 0.50 mL, 2.00 mmol)을 22℃의 DCM(5 mL) 및 메탄올(2 mL)의 혼합물 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-(메틸아미노)프로필카르바메이트(중간체 66)(50 mg, 0.17 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 2 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 1-(4-클로로페닐)-N3-메틸프로판-1,3-디아민(30 mg, 90%)를 무색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.81 (2H, dt), 2.40 (3H, s), 2.58 (2H, m), 4.01 (1H, t), 7.25-7.31 (4H, m).

MS m/e MH⁺199.3.

중간체 68: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3-( 메틸아미노 ) 프로필카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(44 mg, 0.12 mmol)를 22℃의 NMP(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(40 mg, 0.11 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.023 mL, 0.13 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 50℃에서 10 분 동안 교반하였다. 혼합물을 상온으로 냉각시키고, 1-(4-클로로페닐)-N3-메틸프로판-1,3-디아민(중간체 67)(22 mg, 0.11 mmol)를 NMP(2 mL) 중의 용액으로서 가하고, 혼합물을 22℃에서 3 일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 물(50 mL)로 세척하였다. 수층을 SCX 컬럼에 통과시켰다. 컬럼을 물과 메탄올로 용출시켜서 불순물을 제거한 후, DCM 중의 30% (메탄올 중의 2 M NH₃)로 생성물을 용출시켰다. 적절한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(디메틸아미노)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(10.00 mg, 17%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

MS m/e MH⁺542.5.

중간체 69: 1- tert -부틸 4- 메틸 4-( tert - 부틸카르보닐아미노 )피페리딘-1,4-디카르복실레이트

메틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피페리딘-4-카르복실레이트(WO2008075109)(10 g, 38.71 mmol)를 DCM(194 mL)에 용해시켰다. 여기에 디-tert-부틸 디카르보네이트(10.67 mL, 46.46 mmol)를 조금씩 가하였다. 첨가 후, 반응물을 25℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 미정제 생성물을 포화 중탄산나트륨(3 x 50 mL)으로 세척하고, 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시킨 후, 증발 건조시켜서 1-tert-부틸 4-메틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피페리딘-1,4-디카르복실레이트(13.6 g, 98%)을 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO) δ 1.39 (9H, s), 1.40 (9H, s), 1.70-1.77 (2H, td), 1.88-1.92 (2H, d), 3.05 (2H, broad), 3.61 (3H, s), 3.62-3.65 (2H, m), 7.33 (broad, exchange).

중간체 70: 1-( tert - 부톡시카르보닐 )-4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )피페리딘-4- 카르복실산

수산화리튬 일수화물(8.13 g, 193.62 mmol)을 물(21.51 mL), THF(86 mL) 및 메탄올(86 mL) 중의 1-tert-부틸 4-메틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피페리딘-1,4-디카르복실레이트(중간체 69)(13.88 g, 38.72 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 1 일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(75 mL)로 희석하고, 물(75 mL)로 세척하였다. 수층을 1 M 시트르산 용액으로 pH 5로 조절한 다음, EtOAc(3 x 200 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 포화 염수(50 mL)로 세척한 다음, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 소정의 생성물 1-(tert-부톡시카르보닐)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피페리딘-4-카르복실산(10.36 g, 78%)을 고운 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO) δ 1.39 (9H, s), 1.40 (9H, s), 1.68-1.76 (2H, td), 1.89-1.92 (2H, d), 3.03 (2H, broad), 3.62-3.65 (2H, d), 7.16 (exchange), 12.36 (exchange).

중간체 71: tert -부틸 4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-4-(1-(4- 클로로페닐 )-4-히 드록시프로필카르바모 일)피페리딘-1- 카르복실레이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(5.24 g, 13.77 mmol)를 질소 하에 DMA(62.6 mL) 중의 1-(tert-부톡시카르보닐)-4-(tert-부톡시카르보닐아미노)피페리딘-4-카르복실산(중간체 70)(4.31 g, 12.5 mmol), 4-아미노-4-(4-클로로페닐)부탄-1-올(중간체 16)(2.5 g, 12.5 mmol) 및 DIPEA(6.56 mL, 37.6 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 60℃에서 3 시간 동안 교반하고, 증발 건조시켰다. 미정제 반응 혼합물을 100 mL EtOAc에 용해시킨 다음, 포화 NaHCO₃(150 mL)로 염기화하고, 유기 분획을 MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 여과하고, 증발 건조시켰다. 유기 분획을 플래쉬 실리카 크로마토그래피(용리제 MeOH/DCM 중의 0-10% 7 N 암모니아)에 의해 정제하였다. 그 다음, 순수한 분획을 증발시켜서 tert-부틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-4-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시프로필카르바모일)피페리딘-1-카르복실레이트(5.06 g, 77%)를 미백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz, DMSO) δ 1.39 (18H, s), 1.42-1.50 (2H, sex), 1.67-1.73 (2H, q), 1.74-1.82 (2H, m), 1.87 (2H, broad), 3.07 (2H, broad), 3.34-3.41 (2H, m), 3.53-3.61 (2H, t), 4.71-4.76 (1H, q), 6.79 (3xchange, broad), 7.29-7.34 (4H, m), 7.80-7.82 (exchange, d).

MS m/e MH⁺ = 527; HPLC t_R = 2.48 min.

중간체 72: 4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-4- 히드록시부틸 )피페리딘-4- 카르복시아미드

tert-부틸 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-4-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸카르바모일)피페리딘-1-카르복실레이트(중간체 71)(1.98 g, 3.76 mmol)를 THF(18.82 mL) 중에서 교반하고, 디옥산 중의 4 M 염산(14.11 mL, 56.46 mmol)을 교반하면서 가하였다. 생성된 용액을 상온에서 밤새도록 교반하였다. 미정제 혼합물을 SCX 크로마토그래피(용리제 20% 7 N 암모니아/DCM 중의 MeOH)에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-4-히드록시부틸)피페리딘-4-카르복시아미드(1.04 g, 85%)를 무색 투명 검으로서 얻었다.

¹H NMR (400.13 MHz) δ 1.16-1.27 (2H, dd), 1.29-1.51 (2H, sepd), 1.70-1.76 (2H, q), 1.75-1.89 (2H, m), 2.65-2.72 (2H, m), 2.74-2.83 (2H, dq), 3.37-3.39 (2H, m), 4.39 (exchange, broad) 4.70-4.76 (1H, q), 7.32-7.35 (2H, d), 7.36-7.39 (2H, d), 8.25-8.27 (exchange, d)

MS m/e MH⁺ = 326; HPLC t_R = 1.70 min.

중간체 73: tert -부틸 2-아미노-1-(4- 클로로페닐 ) 에틸카르바메이트

DMF(8 mL) 중의 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-2-(4-클로로페닐)에틸 메탄술포네이트(중간체 23)(535 mg, 1.53 mmol)의 용액을 아지드화나트륨(199 mg, 3.06 mmol)으로 처리하고, 혼합물을 80℃로 1 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 실온에서 밤새도록 교반하였다. 용액을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기층을 물로 2회 세척한 다음, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하였으며, 최종 부피가 대략 5 mL가 될 때까지 농축시켰다. 에탄올(20 mL)과 탄소상 10% 팔라듐(75 mg, 0.07 mmol)을 가하였다. 생성된 현탁액을 수소 분위기 하에 상압 및 상온에서 1 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 감압 농축시켜서 tert-부틸 2-아미노-1-(4-클로로페닐)에틸카르바메이트를 검(410 mg, 99%)으로서 얻었다.

MS m/e MH⁺ = 271

중간체 74: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-2-( 메틸술폰아미도 ) 에틸카르바메이트

THF(5 mL) 중의 tert-부틸 2-아미노-1-(4-클로로페닐)에틸카르바메이트(중간체 73)(220 mg, 0.81 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민(0.281 mL, 1.63 mmol)의 용액을 메탄술포닐 클로라이드(0.075 mL, 0.98 mmol)로 처리하였다. 생성된 용액을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM과 중탄산나트륨 용액 사이에 분배하였다. 유기층을 농축시키고, 잔류물을, 구배 용출(10% 에틸 아세테이트/DCM에서 30% 에틸 아세테이트/DCM)을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물, tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-(메틸술폰아미도)에틸카르바메이트를 무색 고형분(154 mg, 54.3%)으로서 이와 같이 단리하였다.

¹H NMR (399.9 MHz, CDCl₃) δ 1.43 (9H, s), 2.92 (3H, s), 3.38-3.52 (2H, m), 4.68-4.84 (2H, m), 5.20-5.28 (1H, m), 7.23 (2H, d), 7.35 (2H, d).

MS m/e (M-H)- = 347

중간체 75: N-(2-아미노-2-(4- 클로로페닐 )에틸) 메탄술폰아미드

tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-(메틸술폰아미도)에틸카르바메이트(중간체 74)(151 mg, 0.43 mmol)를 트리플루오로아세트산(2 mL)으로 처리하였다. 용액을 1 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 감압 농축시켰다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 잔류물을 메탄올 중의 컬럼에 충전하고, 메탄올로 세척하였다. 소정의 생성물을, 메탄올 중의 2 M 암모니아를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 N-(2-아미노-2-(4-클로로페닐)에틸)메탄술폰아미드(93 mg, 86%)를 무색 결정 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, CDCl₃) δ 2.89 (3H, s), 3.17 (1H, dd), 3.33 (1H, dd), 4.12 (1H, dd), 4.74 (1H, br, s), 7.29 (2H, d), 7.34 (2H, d)

MS m/e (M-H)- = 247

중간체 76: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-2-( 메틸술폰아미도 ) 에틸카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(88 mg, 0.23 mmol)를 NMP(3 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(79 mg, 0.22 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민(0.046 mL, 0.26 mmol)의 교반 용액에 한번에 가하였다. 혼합물을 N-(2-아미노-2-(4-클로로페닐)에틸)메탄술폰아미드(중간체 75)(60 mg, 0.24 mmol)로 처리하였다. 용액을 65 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기층을 물로 2회 세척하였다. 유기 용액을 감압 농축시켰다. 잔류물을, 구배 용출(1% 메탄올/DCM에서 15% 메탄올/DCM)을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하여 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-(메틸술폰아미도)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(103 mg, 79%)를 무색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.41 (9H, s), 2.00 (4H, br, s), 2.81 (3H, s), 3.52-3.69 (2H, m), 4.18-4.27 (2H, m), 4.96 (1H, q), 6.60 (1H, s), 6.97 (1H, br, s), 7.10-7.22 (2H, m), 7.37 (4H, s), 8.01 (1H, d), 8.14 (1H, s), 11.65 (1H, s)

MS m/e MH⁺ = 592

중간체 77: 2-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-2-(4- 클로로페닐 )에틸 에탄술포네이트

DMF(10 mL) 중의 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-2-(4-클로로페닐)에틸 메탄술포네이트(중간체 23)(600 mg, 1.72 mmol)의 용액을 티오아세트산칼륨(392 mg, 3.43 mmol)으로 처리하고, 혼합물을 50℃로 1 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 냉각시키고, 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기층을 물로 2회 세척한 다음, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하였으며, 농축 건조시켰다. 잔류물을, 구배 용출(10% 에틸 아세테이트/이소헥산에서 20% 에틸 아세테이트/이소헥산)을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물, 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-2-(4-클로로페닐)에틸 에탄티오에이트(509 mg, 90%)를 크림색 결정 고형분으로서 이와 같이 단리하였다. ¹H NMR (399.9 MHz, CDCl₃) δ 1.40 (9H, s), 2.35 (3H, s), 3.15-3.28 (2H, m), 4.78 (1H, br, s), 5.07 (1H, br, s), 7.24 (2H, d), 7.31 (2H, d). MS m/e (M-H-CH₃CO)- = 286

중간체 78: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-2-( 클로로술폰아미도 ) 에틸카르바메이트

N-클로로숙신이미드(819 mg, 6.14 mmol)를 아세토니트릴(10 mL) 중의 2 M 염산(0.8 mL)의 용액에 가하였다. 반응 플라스크를 빙욕으로 10℃로 냉각시키고, 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-2-(4-클로로페닐)에틸 에탄티오에이트(중간체 77)(506 mg, 1.53 mmol)를 조금씩 가하였다. 첨가하는 동안 혼합물을 가온하고, 10 분 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 황산마그네슘으로 건조시켰으며, 여과하고, 농축 건조시켰다. tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-(클로로술포닐)에틸카르바메이트(602 mg, 정량)를 무색 고형분으로서 이와 같이 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, CDCl₃) δ 1.44 (9H, s), 2.77 (1H, s), 4.06 (1H, dd), 4.36 (1H, br, s), 5.15-5.23 (1H, m), 5.29-5.37 (1H, m), 7.29 (2H, d), 7.38 (2H, d)

중간체 79: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-2- 술파모일에틸카르바메이트

암모니아(1.5 mL, 31.50 mmol)를 아세토니트릴(10 mL) 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-(클로로술포닐)에틸카르바메이트(중간체 78)(0.542 g, 1.53 mmol)의 현탁액에 가하였다. 혼합물을 16 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하고, 유기층을 염수로 세척하였다. 유기 용액을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하였으며, 감압 농축시켰다. 잔류물을, 구배 용출(10% 에틸 아세테이트/DCM에서 30% 에틸 아세테이트/DCM)을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물, tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-술파모일에틸카르바메이트(0.351 g, 68.5%)를 무색 고형분으로서 이와 같이 단리하였다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.36 (9H, s), 3.21-3.28 (1H, m), 3.47-3.56 (1H, m), 5.02 (1H, br, s), 6.88 (2H, s), 7.35 (2H, d), 7.41 (2H, d), 7.49-7.60 (1H, m) MS m/e (M-H-)- = 333

중간체 80: 2-아미노-2-(4- 클로로페닐 ) 에탄술폰아미드

tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-술파모일에틸카르바메이트(중간체 79)(325 mg, 0.97 mmol)를 트리플루오로아세트산(8 mL)으로 처리하였다. 생성된 용액을 15 분 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 감압 농축시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 컬럼을 메탄올로 세척하고, 소정의 생성물을, 메탄올 중의 암모니아(2 M)를 사용하여 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 2-아미노-2-(4-클로로페닐)에탄술폰아미드(221 mg, 97%)를 거의 무색의 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d6) δ 3.13-3.25 (2H, m), 4.39 (1H, dd), 7.35-7.48 (4H, m) MS m/e (M-H-)- = 233.

중간체 81: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-2- 술파모일에틸카르바모일 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(128 mg, 0.34 mmol)를 NMP(2.5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(115 mg, 0.32 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민(0.066 mL, 0.38 mmol)의 교반 용액에 한번에 가하였다. 혼합물을 2-아미노-2-(4-클로로페닐)에탄술폰아미드(중간체 80)(75 mg, 0.32 mmol)로 처리하였다. 용액을 1 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 물(5 mL)로 처리하고, 생성된 무색 침전물을 여과에 의해 단리하였으며, 물, 그 다음 아세토니트릴로 세척하여 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-술파모일에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(157 mg, 85%)를 무색 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d6) δ 1.40 (9H, s), 1.90-2.10 (4H, m), 3.35-3.39 (1H, m), 3.51-3.59 (1H, m), 3.62-3.71 (2H, m), 4.12-4.26 (2H, m), 5.30-5.39 (1H, m), 6.59 (1H, s), 6.82 (2H, s), 7.09-7.18 (2H, m), 7.30-7.43 (4H, m), 8.13 (1H, s), 8.19 (1H, d), 11.65 (1H, s). MS m/e MH⁺ = 578

중간체 82: tert -부틸 2- 아세트아미도 -1-(4- 클로로페닐 ) 에틸카르바메이트

THF(5 mL) 중의 tert-부틸 2-아미노-1-(4-클로로페닐)에틸카르바메이트(중간체 73)(0.208 g, 0.77 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민(0.266 mL, 1.54 mmol)의 용액을 아세트산 무수물(0.102 mL, 1.08 mmol)로 처리하였다. 생성된 용액을 상온에서 2 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM과 중탄산나트륨 용액 사이에 분배하였다. 유기층을 농축시키고, 잔류물을, 구배 용출(10% 에틸 아세테이트/DCM에서 40% 에틸 아세테이트/DCM)을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물, tert-부틸 2-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)에틸카르바메이트(0.151 g, 62.7%)를 무색 고형분으로서 이와 같이 단리하였다.

¹H NMR (399.9 MHz, CDCl₃) δ 1.41 (9H, s), 1.98 (3H, s), 3.46-3.67 (2H, m), 4.74 (1H, br, s), 4.97-5.56 (1H, m), 5.89 (1H, br, s), 7.22 (2H, d), 7.32 (2H, d)

MS m/e MH⁺ = 313

중간체 83: N-(2-아미노-2-(4- 클로로페닐 )에틸) 아세트아미드

tert-부틸 2-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)에틸카르바메이트(중간체 82)(148 mg, 0.47 mmol)를 트리플루오로아세트산(2 mL)으로 처리하였다. 용액을 1 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 감압 농축시켰다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 잔류물을 메탄올 중의 컬럼에 충전하고, 메탄올로 세척하였다. 소정의 생성물을, 메탄올 중의 2 M 암모니아를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 N-(2-아미노-2-(4-클로로페닐)에틸)아세트아미드(98 mg, 97%)를 황색 결정 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, CDCl₃) δ 1.61 (2H, br, s), 1.97 (3H, s), 3.28-3.37 (1H, m), 3.44-3.52 (1H, m), 4.05-4.11 (1H, m), 5.78 (1H, br, s), 7.28-7.36 (4H, m)

MS m/e MH⁺ = 213

중간체 84: tert -부틸 4-(2- 아세트아미도 -1-(4- 클로로페닐 ) 에틸카르바모일 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피 리미딘-4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(89 mg, 0.23 mmol)를 NMP(3 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(80 mg, 0.22 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민(0.046 mL, 0.27 mmol)의 교반 용액에 한번에 가하였다. 혼합물을 N-(2-아미노-2-(4-클로로페닐)에틸)아세트아미드(중간체 83)(52 mg, 0.24 mmol)로 처리하였다. 용액을 65 시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배하였다. 유기층을 물로 2회 세척하였다. 유기 용액을 감압 농축시켰다. 잔류물을, 구배 용출(1% 메탄올/DCM에서 15% 메탄올/DCM)을 사용하여 실리카 상에서 플래쉬 컬럼 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 합하여 tert-부틸 4-(2-아세트아미도-1-(4-클로로페닐)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(100 mg, 81%)를 무색 고형분으로서 얻었다. ¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.42 (9H, s), 1.78 (3H, s), 1.98 (4H, br, s), 3.36-3.43 (1H, m), 3.50-3.68 (2H, m), 4.18-4.28 (2H, m), 4.85-4.93 (1H, m), 6.58-6.61 (1H, m), 7.14-7.23 (2H, m), 7.30-7.37 (4H, m), 7.84 (1H, br, s), 8.12-8.17 (2H, m), 11.65 (1H, br, s)

MS m/e MH⁺ = 556

중간체 85: 2- 메틸 -1- 트리틸 -1H- 이미다졸

트리에틸아민(11.54 mL, 82.82 mmol)을 실온에서 20 분에 걸쳐서 질소 하에 아세토니트릴(120 mL) 중의 2-메틸 1H-이미다졸(4.0 g, 48.72 mmol) 및 클로로트리페닐메탄(14.94 g, 53.59 mmol)에 적가하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 물(120 mL) 및 i-헥산(12 mL)을 가하고, 슬러리를 30 분 동안 교반한 후, 여과하였다. 여과된 고형분을 물(3 x 15 mL)로 세척하고, 진공 건조시켜서 2-메틸-1-트리틸-1H-이미다졸(15.41 g, 97%)을 크림색 고형분으로서 얻었으며, 더 이상 정제하지 않고 사용하였다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.65 (3H, s), 6.70 (1H, d), 6.90 (1H, d), 7.11-7.16 (6H, m), 7.29-7.35 (9H, m);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 325; HPLC tR = 2.88 min.

중간체 86: 1-(4- 클로로페닐 )-2-(1- 트리틸 -1H- 이미다졸 -2-일)에탄올

부틸리튬(헥산 중의 1.6 M)(4.24 mL, 6.78 mmol)을 20 분에 걸쳐서 질소 하에 -78℃로 냉각시킨 THF(30 mL) 중의 2-메틸-1-트리틸-1H-이미다졸(중간체 85)(2.0 g, 6.16 mmol)에 적가하였다. 생성된 암적색 용액을 -78℃에서 30 분 동안 교반한 다음, THF(10 mL) 중의 4-클로로벤즈알데히드(0.867 g, 6.16 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응물을 0℃로 서서히 가온한 다음, 포화 NH₄Cl(50 mL)로 켄칭하고, TBME(2 x)로 추출하였다. 합한 추출물을 염수로 세척하고, MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 증발 농축시킨 다음, 이소헥산 중의 20-300% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 1-(4-클로로페닐)-2-(1-트리틸-1H-이미다졸-2-일)에탄올(1.810 g, 63.1%)을 무색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 2.05 (2H, d), 4.59-4.63 (1H, m), 5.99 (1H, d), 6.66 (1H, d), 6.96-7.02 (9H, m), 7.26 (2H, d), 7.37-7.40 (9H, m);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 465; HPLC tR = 3.54 min.

중간체 87: 2-(1-(4- 클로로페닐 )-2-(1- 트리틸 -1H- 이미다졸 -2-일)에틸) 이소인돌린 -1,3- 디온

디-tert-부틸 아조디카르복실레이트(0.808 g, 3.51 mmol)를 실온에서 15 분에 걸쳐서 THF(25 mL) 중의 1-(4-클로로페닐)-2-(1-트리틸-1H-이미다졸-2-일)에탄올(중간체 86)(1.36 g, 2.92 mmol), 프탈이미드(0.473 g, 3.22 mmol) 및 트리페닐포스핀(0.921 g, 3.51 mmol)에 조금씩 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 60 분 동안 교반한 다음, 증발 농축시키고, 이소헥산 중의 20-40% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 2-(1-(4-클로로페닐)-2-(1-트리틸-1H-이미다졸-2-일)에틸)이소인돌린-1,3-디온(1.78 g, 102%)을 무색 폼으로서 얻었다.

m/z (ESI+) (M+H)+ = 594; HPLC tR = 2.80 min.

중간체 88: 1-(4- 클로로페닐 )-2-(1- 트리틸 -1H- 이미다졸 -2-일) 에탄아민

메탄올(30 mL) 중의 2-(1-(4-클로로페닐)-2-(1-트리틸-1H-이미다졸-2-일)에틸)이소인돌린-1,3-디온(중간체 87)(1.78 g, 3.00 mmol) 및 히드라진 수화물(0.204 mL, 4.19 mmol)을 3 시간 동안 환류시켰다. 생성된 맑은 용액을 실온으로 밤새도록 냉각시킨 다음, 여과하였다. 여액을 20 g SCX 카트리지에 적용하고, 메탄올, 이어서 2 N NH₃(MeOH)로 용출시켰다. 생성물 함유 분획을 합하고, 증발 농축시킨 다음, DCM 중의 2-5% MeOH의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 1-(4-클로로페닐)-2-(1-트리틸-1H-이미다졸-2-일)에탄아민(0.942 g, 67.8%)을 무색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 2.16 (2H, d), 4.01 (1H, t), 6.74 (1H, d), 6.90 (2H, d), 6.99 (1H, d), 7.08-7.13 (7H, m), 7.29-7.32 (10H, m);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 464; HPLC tR = 3.13 min.

중간체 89: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-2-(1- 트리틸 -1H- 이미다졸 -2-일)에틸카르바모일)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(166 mg, 0.44 mmol)를 실온에서 DMF(2.0 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(150 mg, 0.42 mmol), 1-(4-클로로페닐)-2-(1-트리틸-1H-이미다졸-2-일)에탄아민(중간체 88)(193 mg, 0.42 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민(0.087 mL, 0.50 ml)에 조금씩 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 3 시간 동안 교반한 다음, 물(10 mL)로 켄칭하여 담황색 침전물을 얻었다. 침전물을 여과 수집하고, 물로 세척하였으며, 진공 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-(1-트리틸-1H-이미다졸-2-일)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(320 mg, 95%)를 크림색 고형분으로서 얻었으며, 더 이상 정제하지 않고 사용하였다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.40 (9H, s), 2.05-2.29 (6H, m), 3.56-3.61 (2H, m), 4.35-4.42 (2H, m), 5.33 (1H, s), 6.50 (1H, d), 6.78 (1H, m), 6.93 (2H, d), 6.97-7.01 (7H, m), 7.13 (2H, d), 7.26-7.35 (10H, m), 8.27 (1H, s), 9.25 (1H, br s), 10.22 (1H, br s).

m/z (ESI+) (M+H)+ = 807; HPLC tR = 2.28 min.

중간체 90: 1-(4- 클로로페닐 )-2-(1H- 피라졸 -1-일) 에탄온

DME(70 mL)에 용해시킨 피라졸(3.40 g, 49.98 mmol) 및 2-브로모-4'-클로로아세토페논(11.44 g, 49 mmol)을 실온에서 아르곤 하에 5 일 동안 교반하였다. 디에틸 에테르를 가하고, 침전물을 여과하였으며, 디에틸 에테르로 세척하고, 밤새도록 진공 건조시켜서 미정제 생성물로서 순백색 결정 8.842 g을 얻었다. 진한 암모니아 수용액(30%; 36 mL)을 물 7 mL 중의 미정제 생성물 8.76 g의 현탁액에 가하였다. 반응물을 40 분 동안 교반한 후, 황색 결정을 여과하고, 약간의 물로 세척하였으며, 진공 건조시켜서 1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에탄온(5.04 g, 22.84 mmol, 46.6%)을 담황색 고형분으로서 얻었다. 세척물을 재추출하여 추가 생성물을 얻었다. 이것을 디클로로메탄 중의 0-10% 에틸 아세테이트로 용출시키면서 실리카겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 증발 건조시켜서 1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에탄온(2.78 g, 12.60 mmol, 25.7%)을 무색 결정 고형분으로서 얻었다.

NMR & MS = EN00228-12-01

m/z (ESI+) (M+H)+ = 221.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 5.83 (2H, s), 6.61 (1H, dd), 7.48 (1H, d), 7.66 (2H, d), 7.73 (1H, d), 8.04 (2H, d)

중간체 91: (Z) 및 (E)-1-(4- 클로로페닐 )-2-(1H- 피라졸 -1-일) 에탄온 O- 메틸 옥심

메톡실아민 염산염(0.668 g, 8.00 mmol)을 실온에서 아르곤 하에 1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에탄온(중간체 90)(1.103 g, 5 mmol)의 교반 용액에 가하였다. 생성된 용액을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 피리딘을 진공 증발시키고, 잔류 고형분을 탄산수소나트륨의 포화 수용액(50-100 mL)으로 분쇄하였다. 고형분을 여과하고, 물로 세척하였으며, 건조시켜서 (Z) 및 (E)-1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에탄온 O-메틸 옥심(1.080 g, 87%)을 암황색 고형분으로서 얻었다.

NMR & MS = EN00228-18-01

m/z (ESI+) (M+H)+ = 250.

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 3.99 (3H, s), 5.44 (2H, s), 6.19 (1H, dd), 7.36 (1H, d), 7.42 (2H, d), 7.65 (2H, d), 7.71 (1H, d)

중간체 92: 1-(4- 클로로페닐 )-2-(1H- 피라졸 -1-일) 에탄아민

보란 테트라히드로푸란 착체(15.00 mmol, 15.00 mmol)를 실온에서 아르곤 하에 THF(30 mL)에 용해시킨 (Z) 및 (E)-1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에탄온 O-메틸 옥심(중간체 91)(0.749 g, 3 mmol)의 교반 용액에 가하였다. 생성된 용액을 환류 하에 3 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 얼음/물 욕에서 냉각시키고, 물(25 mL)을 신중하게 가한 후, 20% NaOH(25 mL)를 가하였다. 생성된 2상 혼합물을 격렬하게 자기 교반하면서 밤새도록 환류시키고, 냉각시켰다. 디에틸 에테르를 가하고, 층을 분리하였다. 유기층을 디에틸 에테르로 더 추출하고, MgSO₄ 상에서 건조시켰으며, 여과하고, 증발시켜서 미정제 생성물(741 mg, 55%)을 얻었다. 이것을 다음 반응에서 직접 사용하였다.

NMR = EN00228-27-01

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 4.23 (1H, dd), 4.42 (1H, dd), 4.61 (1H, dd), 6.54 (1H, dd), 7.14 (2H, d), 7.34 (2H, d), 7.60 (1H, d), 7.88 (1H, d)

중간체 93: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-2-(1H- 피라졸 -1-일) 에틸카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

HATU(0.209 g, 0.55 mmol)를 아르곤 하에 실온에서 N-메틸-2-피롤리돈(3.0 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(0.181 g, 0.50 mmol), 1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에탄아민(중간체 92)(0.174 g, 1.00 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.174 mL, 1.00 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을, 용리제로서 물(0.2% 탄산암모늄을 함유함) 및 아세토니트릴의 극성이 감소하는 혼합물과 Waters X-bridge 역상 컬럼(C-18, 5 미크론 실리카, 19 mm 직경, 100 mm 길이, 40 ml/분의 유속)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 소정의 혼합물을 함유하는 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-(1H-피라졸-1-일)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(0.216 g, 76%)를 백색 결정 고형분으로서 얻었다.

m/z (ESI+) (M+H)+ = 565.

NMR = EN00228-28-01

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.40 (9H, s), 1.72 (1H, m), 1.87 (2H, m), 2.00 (1H, m), 3.53 (1H, m), 3.52 (1H, m), 3.94 (1H, m), 4.13 (1H, m), 4.38 (1H, dd), 4.74 (1H, dd), 5.30 (1H, dt), 6.14 (1H, dd), 6.57 (1H, d), 7.16 (1H, d), 7.25 (1H, s), 7.29 (4H, s), 7.43 (1H, d), 7.53 (1H, s), 8.12 (1H, s), 8.35 (1H, d), 11.67 (1H, s)

중간체 94: (Z)-1-(4- 클로로페닐 )-2-(티아졸-2-일) 에텐아민

헥산 중의 N-부틸리튬(8.00 mL, 20.00 mmol)의 2.5 M 용액을 5 분에 걸쳐서 질소 하에 -70℃의 THF(35.00 mL)에 용해시킨 2-메틸티아졸(1.983 g, 20 mmol)에 적가하였다. 생성된 담황색 슬러리를 -70℃에서 2.5 시간 동안 교반하였다. THF(35.00 mL) 중의 4-클로로벤조니트릴(2.75 g, 20.00 mmol)을 현탁액에 적가하고, 첨가가 끝난 후 -70℃에서 90 분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 교반하면서 실온으로 가온하고, 암소에 두었다. 미정제물을 농축 건조시키고, 에틸 아세테이트로 희석한 다음, 물로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시켰으며, 농축시켰다. 미정제 생성물을 디클로로메탄 중의 10-100% 에틸 아세테이트로 용출시키면서 실리카겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 용매를 증발 건조시켜서 (Z)-1-(4-클로로페닐)-2-(티아졸-2-일)에텐아민(1.466 g, 31.0%)을 담황색 고형분으로서 얻었다.

NMR & MS = EN00228-45-01

m/z (ESI+) (M+H)+ = 237

¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 5.72 (1H, s), 6.54 (2H, m), 6.99 (1H, d), 7.38 (d, 2H), 7.55 (2H, d), 7.68 (1H, d)

중간체 95: 1-(4- 클로로페닐 )-2-(티아졸-2-일) 에탄아민

실온의 MeOH 중의 염산 2 N 용액을, 그 용액이 암청색에서 오렌지색으로 바뀔 때까지 MeOH(45 mL)에 용해시킨 (Z)-1-(4-클로로페닐)-2-(티아졸-2-일)에텐아민(중간체 94)(1.45 g, 6.13 mmol) 및 미량의 브로모크레솔 그린에 적가하였다. 시아노붕수소화나트륨(0.481 g, 7.66 mmol)을 교반 용액에 한번에 가하고, 실온에서 메탄올 중의 염산 2 N 용액을 적가함으로써 오렌지색을 유지시켰다. 1 시간 교반한 후, 용매를 진공 제거하였다. 미정제물을 물에 용해시키고, 메탄올 중의 염산 2 N 용액 수 방울을 가하여 pH를 대략 2로 조절하였다. 수상을 디에틸 에테르로 2회 세척한 다음, 수산화나트륨 6 N 수용액을 가하여 pH를 14로 조절하고, 염기성 수상을 디에틸 에테르로 2회 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시켰으며, 농축시켜서 1-(4-클로로페닐)-2-(티아졸-2-일)에탄아민(1.310 g, 90%)을 무색 유분으로서 얻었다.

NMR = EN00228-47-01

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 2.10 (2H, m), 3.22 (1H, dd), 3.26 (1H, dd), 4.22 (1H, t), 7.32 (2H, d), 7.37 (2H, d), 7.51 (1H, d), 7.66 (1H, d)

중간체 96: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-2-(티아졸-2-일) 에틸카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

HATU(0.418 g, 1.10 mmol)를 아르곤 하에 실온에서 N-메틸-2-피롤리돈(5.0 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(0.361 g, 1.0 mmol), 1-(4-클로로페닐)-2-(티아졸-2-일)에탄아민(중간체 95)(0.318 g, 1.00 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.348 mL, 2.00 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 밤새도록 교반하였다. Et₂O를 가하여 미정제 생성물이 침전되었으며, 이를 여과하고, Et₂O로 충분히 세척하였으며, 진공 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-2-(티아졸-2-일)에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(0.550 g, 94%)를 얻었다.

NMR & MS = EN00228-48-01

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ 1.23 (9H, s), 1.74 (1H, m), 1.89 (2H, m), 2.00 (1H, m), 3.10 (2H, dd), 3.52 (1H, m), 3.58 (1H, m), 4.00 (1H, m), 4.19 (1H, m), 5.29 (1H, dt), 6.57 (1H, d), 7.17 (1H, d), 7.30 (2H, d), 7.37 (2H, d), 7.54 (1H), d), 7.69 (1H, d), 8.13 (1H, s), 8.33 (1H, d), 8.47 (1H, d), 11.68 (1H, s)

m/z (ESI+) (M+H)+ = 582

중간체 97: 리튬 3-(4-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미도 )-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판오에이트

물 중의 수산화리튬(1.436 mL, 2.87 mmol) 2 N을 실온에서 THF(40 mL) 중의 메틸 3-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(중간체 35)(400 mg, 0.72 mmol)의 교반 현탁액에 가하였다. 생성된 현탁액은 신속하게 용액이 되었으며, 그 후 실온에서 밤새도록 교반하였다. 다음 아침에, 백색 침전물이 형성되었다. 이것을 여과하고, 증발 건조시켜서 리튬 3-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(396 mg, 100%)를 얻었다.

NMR & MS = EN00228-39-01

¹H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 1.41 (9H, s), 1.89 (2H, m), 2.06 (2H, m), 2.27 (2H, m), 3.30 (2H, m partially hidden by H2O), 4.33 (2H, m), 4.83 (1H, m), 6.57 (1H, s), 7.14 (1H, s), 7.22 (2H, d), 7.32 (2H, d), 7.58 (1H, m), 8.10 (1H, s), 10.02 (1H, s);

m/z (ESI-) (M-Li)- = 541

중간체 98: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3-(디메틸아미노)-3- 옥소프로필카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

HATU(152 mg, 0.40 mmol)를 아르곤 하에 실온에서 N-메틸-2-피롤리돈(3.0 mL) 중의 리튬 3-(4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미도)-3-(4-클로로페닐)프로판오에이트(중간체 97)(200 mg, 0.36 mmol), 디메틸아민 염산염(48.0 mg, 0.59 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.190 mL, 1.09 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 밤새도록 교반하였다. 디에틸 에테르를 가하여 미정제 생성물이 침전되었으며, 검으로서 형성되었다. 이것을 Et₂O로 세정하고, 건조시켜서 미정제 검(770 mg)을 얻었으며, 더 이상 정제하지 않고 후속 반응에 사용하였다.

중간체 99: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-3- 메톡시프로필카르바메이트

수소화나트륨(35.0 mg, 0.87 mmol)을 질소 하에 0℃의 THF(10 mL) 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바메이트(중간체 30)(200 mg, 0.70 mmol)에 가하였다. 혼합물을 0℃에서 15 분 동안 교반하였다. 요오드화메틸(0.044 mL, 0.70 mmol)을 적가하고, 생성된 현탁액을 22℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응물을 KHSO₄ 용액(1 M, 0.5 mL) 및 물(15 mL)로 켄칭하였다. 혼합물을 디에틸 에테르(3 x 20 mL)로 추출하고, 합한 추출물을 포화 염수(20 mL)로 세척하였으며, MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 이소헥산 중의 20-60% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-메톡시프로필카르바메이트(80 mg, 38.1%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.40 (9H, s), 1.91 (1H, s), 2.01 (1H, s), 3.30 (3H, s), 3.32 (2H, m), 4.79 (1H, br.s), 5.45 (1H, br.s), 7.20 (2H, d), 7.29 (2H, d);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 300, 302 (M+H+), 244.3, 246.3 (M+H+ -C4H8) ; HPLC tR = 2.58 min.

중간체 100: 1-(4- 클로로페닐 )-3- 메톡시프로판 -1-아민

염산(1,4-디옥산 중의 4 M, 0.667 mL, 2.67 mmol)을 22℃의 DCM(5 mL) 및 메탄올(2 mL)의 혼합물 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-메톡시프로필카르바메이트(중간체 99)(80 mg, 0.27 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 2 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 1-(4-클로로페닐)-3-메톡시프로판-1-아민(47.0 mg, 88%)를 무색 유분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.80-1.96 (2H, m), 3.31 (3H, s), 3.32 (1H, m), 3.43 (1H, m), 4.09 (1H, t), 7.27-7.31 (4H, m);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 200.2, 202.3 (M+H+) ; HPLC tR = 1.70 min.

중간체 101: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 메톡시프로필카르바모일 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피리 미딘-4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(55.2 mg, 0.15 mmol)를 NMP(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(50 mg, 0.14 mmol) 및 N-에틸디이소프로필에틸아민(0.029 mL, 0.17 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 50℃에서 10 분 동안 교반한 다음, 상온으로 냉각시켰다. 1-(4-클로로페닐)-3-메톡시프로판-1아민(중간체 100)(27.6 mg, 0.14 mmol)을 NMP(2 mL) 중의 용액으로서 가하였다. 생성된 혼합물을 22℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(75 mL)로 희석하고, 물(6 x 75 mL)과 포화 염수(50 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 1-4% (10:1 MeOH/진한 NH₃(aq))의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-메톡시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(52.0 mg, 69.2%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, DMSO) δ 1.42 (9H, s), 1.90 (2H, t), 1.92-2.05 (4H, m), 3.22 (3H, s), 3.29 (2H, t), 3.55 (2H, m), 4.24 (2H, m), 4.89 (1H, dt), 6.60 (1H, dd), 7.05 (1H, br.), 7.16 (1H, dd), 7.33 (4H, m), 7.99 (1H, d), 8.13 (1H, s), 11.65 (1H, s);

m/z (ESI+) (M+H)+ = 543.4, 545.3 ; HPLC tR = 2.31 min.

중간체 102: S-3-( tert - 부톡시카르보닐아미노 )-3-(4- 클로로페닐 )프로필 에탄티오에이트

티오아세트산칼륨(43.9 mg, 0.38 mmol)을 22℃의 DMF(5 mL) 중의 3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로필 메탄술포네이트(중간체 31)(70 mg, 0.19 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 50℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(50 mL)로 희석하고, 20% 포화 염수(4 x 50 mL)와 포화 염수(25 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 이소헥산 중의 15% EtOAc의 용출 용매로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 S-3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로필 에탄티오에이트(61.0 mg, 92%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.41 (9H, s), 1.98 (2H, dt), 2.32 (3H, s), 2.83 (2H, m), 4.67 (1H, br.s), 4.88 (1H, br.s), 7.20 (2H, d), 7.30 (2H, d);

m/z (ESI+) (M+H+ -C4H8) = 288.3, 290.3 ; HPLC tR = 2.80 min.

중간체 103: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-3- 술파모일프로필카르바메이트

N-클로로숙신이미드(90 mg, 0.67 mmol)를 10℃로 냉각시킨 아세토니트릴(10 mL) 및 2 M 염산(0.1 mL)의 혼합물에 가하였다. S-3-(tert-부톡시카르보닐아미노)-3-(4-클로로페닐)프로필 에탄티오에이트(중간체 102)(58 mg, 0.17 mmol)를 아세토니트릴(2 mL) 중의 용액으로서 적가하고, 혼합물을 22℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 진한 암모니아 수용액(3 mL, 63.00 mmol)을 적가하고, 혼합물을 3 일 동안 교반하였다. 혼합물을 증발시키고, 잔류물을 DCM(30 mL) 및 물 사이에 분배하였다. 수층을 DCM(30 mL)으로 추출하고, 추출물을 유기층과 합하였다. 합한 유기물을 상 분리 필터지에 통과시켜 여과하고, 증발시켰다. 잔류물을 이소헥산 중의 30-80% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-술파모일프로필카르바메이트(40.0 mg, 68.0%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.902 MHz, CDCl₃) δ 1.42 (9H, s), 2.75-2.91 (2H, m), 3.11-3.17 (2H, m), 4.74 (1H, br.s), 4.93 (1H, t), 7.23 (2H, d), 7.34 (2H, d);

m/z (ESI+) (M+H+ -C4H8) = 293.2, 295.2 ; HPLC tR = 2.11 min.

중간체 104: 3-아미노-3-(4- 클로로페닐 )프로판-1-술폰아미드

염산(디옥산 중의 4 M, 1.0 mL, 4.00 mmol)을 22℃의 DCM(5 mL) 및 메탄올(2 mL)의 혼합물 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-술파모일프로필카르바메이트(중간체 103)(38 mg, 0.11 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 22℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, DCM 중의 30% (MeOH 중의 2 M NH₃)를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-술폰아미드(20.00 mg, 73.8%)를 무색 검으로서 얻었다.

m/z (ESI+) (M+H)+ = 249.2, 251.2 ; HPLC tR = 1.32 min.

중간체 105: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 히드록시프로필카르바모일 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피 리미딘-4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(30.9 mg, 0.08 mmol)를 22℃의 NMP(5 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(28 mg, 0.08 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.016 mL, 0.09 mmol)에 가하였다. 생성된 현탁액을 50℃에서 10 분 동안 교반하였다. 혼합물을 상온으로 냉각시키고, 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-술폰아미드(중간체 104)(19.27 mg, 0.08 mmol)를 NMP(2 mL) 중의 용액으로서 가하였다. 혼합물을 22℃에서 3 일 동안 교반하였다. 혼합물을 메탄올로 희석하고, SCX 컬럼에 충전하였다. 미정제 생성물을 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였으며, 소정의 생성물을 2 M NH₃/MeOH를 사용한 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켰다. 미정제 생성물을 DCM 중의 2-6% (10:1 MeOH/진한 NH₃(aq))의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-술파모일프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(16.00 mg, 34.9%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

m/z (ESI+) (M+H)+ = 592.4, 594.3 ; HPLC tR = 1.99 min.

중간체 106: tert -부틸 3-아미노-1-(4- 클로로페닐 )-3- 옥소프로필카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(466 mg, 1.23 mmol)를 질소 하에 20℃의 DMF(4 mL) 중의 tert-부틸-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판산(245 mg, 0.82 mmol), 염화암모늄(131 mg, 2.45 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.811 mL, 4.90 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발 건조시킨 다음, EtOAc(25 mL)에 재용해시키고, 물(25 mL)과 포화 염수(25 mL)로 연속적으로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 tert-부틸 3-아미노-1-(4-클로로페닐)-3-옥소프로필카르바메이트(200 mg, 82%)를 백색 검으로서 얻었다. m/z (ESI-) (M-H)- = 297; HPLC tR = 1.91 min.

중간체 107: 3-아미노-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판아미드

1,4-디옥산 중의 HCl(4 M)(1.674 mL, 6.69 mmol)을 20℃의 DCM(20 mL) 중의 tert-부틸 3-아미노-1-(4-클로로페닐)-3-옥소프로필카르바메이트(중간체 106)(200 mg, 0.67 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시키고, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판아미드(46.0 mg, 34.6%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 0.99 (2H, t), 2.33-2.37 (2H, m), 3.38 (2H, s), 4.24 (1H, t), 7.35-7.42 (4H, m),

m/z (ESI+) (M+H)+ = 199; HPLC tR = 1.14 min.

중간체 108: tert -부틸 4-(3-아미노-1-(4- 클로로페닐 )-3- 옥소프로필카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(129 mg, 0.34 mmol)를 질소 하에 20℃의 DMF(4 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(82 mg, 0.23 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.112 mL, 0.68 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 5 분 동안 교반하였다. 그 다음, 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판아미드(중간체 107)(45 mg, 0.23 mmol)를 반응물에 가하고, 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(20 mL)로 희석하였으며, 물(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 tert-부틸 4-(3-아미노-1-(4-클로로페닐)-3-옥소프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(99 mg, 100%)를 얻었다.

m/z (ESI+) (M+H)+ = 542; HPLC tR = 1.88 min.

중간체 109: tert -부틸 N-[1-(4- 클로로페닐 )-3-( 페녹시카르보닐아미노 )프로필] 카르바메이트

페닐 클로로포르메이트(0.132 mL, 1.05 mmol)를 질소 하에 20℃의 디옥산(10 mL) 중의 tert-부틸 3-아미노-1-(4-클로로페닐)프로필카르바메이트(중간체 25)(300 mg, 1.05 mmol) 및 중탄산나트륨(133 mg, 1.58 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(20 mL)로 희석하였으며, 물(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 tert-부틸 N-[1-(4-클로로페닐)-3-(페녹시카르보닐아미노)프로필]카르바메이트(427 mg, 100%)를 검으로서 얻었다.

m/z (ESI+) (M+H)+ = 405; HPLC tR = 2.85 min.

중간체 110: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-3- 우레이도프로필카르바메이트

염화암모늄(113 mg, 2.11 mmol)을 DMF(3 mL) 중의 tert-부틸 N-[1-(4-클로로페닐)-3-(페녹시카르보닐아미노)프로필]카르바메이트(중간체 109)(427 mg, 1.05 mmol) 및 트리에틸아민(0.882 mL, 6.33 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 0.352 몰에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(20 mL)로 희석하였으며, 물(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-우레이도프로필카르바메이트(346 mg, 100%)를 얻었다.

m/z (ESI+) (M+H)+ = 328; HPLC tR = 1.91 min.

중간체 111: 1-(3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로필)우레아

tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-우레이도프로필카르바메이트(중간체 110)(346 mg, 1.06 mmol)를 TFA(3 mL)에 용해시키고, 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 건조시키고, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 0.35 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 1-(3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로필)우레아(151 mg, 62.8%)를 황색 검으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.61 (2H, q), 2.98 (2H, m), 3.82 (1H, t), 4.05 (2H, s), 5.38 (2H, s), 5.94 (1H, s), 7.37 (4H, m),

m/z (ESI+) (M+H)+ = 228; HPLC tR = 1.25 min.

중간체 112: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3- 우레이도프로필카르바모일 )-1-(7H-피 롤로[2,3-d]피 리미딘-4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(378 mg, 0.99 mmol)를 질소 하에 20℃의 NMP(2 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(240 mg, 0.66 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.329 mL, 1.99 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 5 분 동안 교반하였다. 그 다음, NMP(2 mL) 중의 1-(3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로필)우레아(중간체 111)(151 mg, 0.66 mmol)를 반응물에 가하고, 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc(20 mL)로 희석하고, 물(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-우레이도프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(379 mg, 100%)를 백색 고형분으로서 얻었다. m/z (ESI+) (M+H)+ = 571; HPLC tR = 1.88 min.

중간체 113: 3-아미노-3-(4- 클로로페닐 ) 프로판아미드

1,4-디옥산 중의 HCl(4 M)(0.668 mL, 2.67 mmol)을 20℃의 DCM(4 mL) 중의 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-2-시아노에틸카르바메이트(중간체 24)(150 mg, 0.53 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시켜서 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판니트릴(염산염)(115 mg, 99%)을 백색 고형분으로서 얻었다.

중간체 114: (4- 클로로페닐 )-2- 시아노에틸카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(306 mg, 0.81 mmol)를 질소 하에 20℃의 NMP(3 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(194 mg, 0.54 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.533 mL, 3.22 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 5 분 동안 교반하였다. 그 다음, NMP(3 mL) 중의 3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판니트릴(중간체 113)(97 mg, 0.54 mmol)을 반응물에 가하고, 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(50 mL)로 희석하였으며, 물(50 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 (4-클로로페닐)-2-시아노에틸카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(0.281 g, 100%)를 얻었다.

m/z (ESI+) (M+H)+ = 524; HPLC tR = 2.19 min.

중간체 115: tert -부틸 1-(4- 클로로페닐 )-3-( 메틸술폰아미도 ) 프로필카르바메이트

메탄술포닐 클로라이드(0.082 mmol, 1.05 mmol)를 20℃의 DCM(4 mL) 중의 tert-부틸 3-아미노-1-(4-클로로페닐)프로필카르바메이트(중간체 25)(300 mg, 1.05 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.367 mL, 2.11 mmol)에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(25 mL)로 희석하였으며, 물(25 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 미정제 생성물을 얻었다. 미정제 생성물을 DCM 중의 0-20% EtOAc의 용출 구배로 플래쉬 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜서 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-(메틸술포닐아미도)프로필카르바메이트(275 mg, 71.9%)를 백색 고형분으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.37 (9H, s), 1.76 (1H, m), 1.82-1.88 (1H, m), 2.87 (3H, s), 2.89-2.91 (2H, m), 4.58 (1H, d), 7.00 (1H, t), 7.32 (2H, d), 7.39 (2H, d), 7.48 (1H, d),

m/z (ESI+) (M+H)+ = 361; HPLC tR = 2.25 min.

중간체 116: N-(3-아미노-3-(4- 클로로페닐 )프로필) 메탄술폰아미드

TFA(4 mL)를 tert-부틸 1-(4-클로로페닐)-3-(메틸술폰아미도)프로필카르바메이트(중간체 115)(275 mg, 0.76 mmol)에 가하고, 20℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 건조시켰다. 미정제 생성물을, SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 소정의 생성물을, 7 M NH₃/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용출시키고, 순수한 분획을 증발 건조시켜서 N-(3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로필)메탄술폰아미드(113 mg, 56.7%)를 무색 검으로서 얻었다.

¹H NMR (399.9 MHz, DMSO-d₆) δ 1.69-1.72 (2H, m), 2.87 (3H, s), 2.94-2.98 (2H, m), 3.18-3.19 (1H, m), 3.87 (1H, t), 7.35-7.40 (4H, m),

m/z (ESI+) (M+H)+ = 262; HPLC tR = 1.43 min.

중간체 117: tert -부틸 4-(1-(4- 클로로페닐 )-3-( 메틸술폰아미도 ) 프로필카르바모일 )-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 일카르바메이트

O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트(245 mg, 0.65 mmol)를 질소 하에 20℃의 NMP(2 mL) 중의 4-(tert-부톡시카르보닐아미노)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복실산(중간체 1)(155 mg, 0.43 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(0.213 mL, 1.29 mmol)에 한번에 가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 5 분 동안 교반하였다. 그 다음, NMP(2 mL) 중의 N-(3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로필)메탄술폰아미드(중간체 116)(113 mg, 0.43 mmol)를 반응물에 가하고, 18 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(20 mL)로 희석하였으며, 물(20 mL)로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄ 상에서 건조시키고, 여과하였으며, 증발시켜서 tert-부틸 4-(1-(4-클로로페닐)-3-(메틸술폰아미도)프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-일카르바메이트(261 mg, 100%)를 얻었다.

m/z (ESI+) (M+H)+ = 606; HPLC tR = 2.09 min.

화학식 I의 화합물의 생물학적 효과는 후술되는 바와 같이 테스트할 수 있다.

시험관내 MDA - MB -468 사람 유방선암종 GSK -3 인산화 분석

이 분석은, 아큐멘 익스플로러(Acumen Explorer) 형광 플레이트 판독기 기술을 사용하여 평가한 바와 같은, 세포질 PKB(Akt) 활성의 대용 마커로서 글리코겐 신타제 키나제-3베타(GSK-3β) 내 세린-9 잔기의 인산화를 억제하는 테스트 화합물의 능력을 결정한다. MDA-MB-468 사람 유방선암종 세포주(LGC Promochem, 영국 미들섹스 테딩턴 소재, 카탈로그 No. HTB-132)를 정례적으로, 10% 열 비활성화 우태 혈청(FCS; Sigma, 영국 도어셋 풀 소재, 카탈로그 No. F0392) 및 1% L-글루타민(Gibco, 카탈로그 No. 25030-024)을 함유하는 둘베코 변성 이글 성장 배지(DMEM; Invitrogen Limited, 영국 페이슬리 소재, 카탈로그 No. 11966-025)에, 37℃ 및 5% CO₂에서 70 내지 90% 컨플루언스로 유지시켰다.

인산화 분석을 위하여, 트립신-EDTA(Invitrogen Limited, 카탈로그 No. 25300-062)를 사용하여 배양 플라스크로부터 세포를 탈착시키고, 흑색 투명 바닥 Corning Costar 폴리스티렌 96 웰 플레이트(Fisher Scientific UK, 영국 레스터셔 러프버러 소재; 카탈로그 No. 3904 및 DPS-130-020K)의 웰에 완전 성장 배지 100 ㎕로 웰당 5000 세포의 밀도로 시딩하였다. 세포를 37℃, 5% CO₂에서 밤새도록 항온 처리하여 이들이 부착되게 하였다.

제2일에, 세포를 테스트 화합물로 처리하고, 2 시간 동안 37℃, 5% CO₂에서 항온 처리하였다. 테스트 화합물을 DMSO 중의 10 mM 스톡 용액으로서 제조하고, 비접촉(분석 웰로 직접 다중 2.5 nl 액적을 음향 분배함) ECHO 투약 기술(Labcyte Inc. 미국 캘리포니아주 서니베일 소재)을 사용하여 요구되는 농도로 테스트 웰에 직접 투여하였다. 각각의 플레이트는 테스트 화합물이 없는 대조 웰을 함유하였다.

그 다음, 20 ㎕의 고정 완충액(10% 포름알데히드를 함유하는 인산 완충 염수(PBS); Sigma; 카탈로그 No. F1635)을 각각의 웰에 가하여 최종 웰 농도 1.6%를 얻었다. 그 다음, 플레이트를 30 분 동안 실온에서 항온 처리한 후, 정착액을 제거하였다. 각각의 웰을 PBS 250 ㎕로 1회 세척한 다음, 50 ㎕ PBS를 각각의 웰에 가하였다. 그 다음, PBS를 흡입하고, 각각의 웰을 50 ㎕의 침투화/차단 완충액(0.5% Tween 20(Sigma; 카탈로그 No. P5927) 및 5% Marvel 밀크 파우더(Andrews Pharmacy Ltd, 영국 체셔 매클레스필드 소재; 카탈로그 No. APC100199)를 함유하는 PBS)으로 1 시간 동안 실온에서 항온 처리한 후, 염색함으로써 세포를 침투화하고, 차단하였다.

침투/차단 완충액을 제거한 후, 50 ㎕의 1차 항-포스포-GSK-3β 항체(세포 신호 전달 기술(New England Biolabs (Uk) Ltd.), 영국 허트포드셔 히친 소재; 카탈로그 번호 No. 9336; 차단 완충액(5% Marvel 및 0.05% Tween/Polysorbate 20을 함유하는PBS)로 1:400으로 희석시킴)를 각각의 웰에 가하고, 4℃에서 밤새도록 항온 처리하였다.

각각의 웰을 250 ㎕의 세척 완충액(0.05% 폴리소르베이트 20을 함유하는 PBS)로 3회 세척하고, 세포를 1 시간 동안 실온에서, 차단 완충액 중에 1:750으로 희석시킨 2차 형광 표지된 항-토끼 Alexa Fluor 488 항체(Molecular Probes, Invitrogen Limited, 카탈로그 No. A11008)로 항온 처리하였다. 플레이트를 250 ㎕의 세척 완충액으로 3회 세척하고, 사용할 때까지 4℃에서 50 ㎕의 PBS를 함유시켜 저장하였다.

인산화된 GSK-3β를 나타내는 형광 신호의 레벨을 정량화하기 위하여 Acumen Explorer 플레이트 판독기를 사용하여 플레이트를 분석하였다. 활성 화합물은 각각의 분석에서 최대(미투여) 대조군과 비교하였을 때 포스포-GSK-3β 인산화 감소를 유발하였으며, 이는 웰당 인산화된 대상물의 수로 측정한 것이며, PKB(Akt) 억제제의 효능을 결정할 수 있다.

IC₅₀ 계산 - IC₅₀은 최대(화합물 없음)와 최소(과량의 화합물) 반응 대조 데이터 사이의, 화합물에 의해 영향을 받는 활성 범위에 대하여 50% 효과를 제공하는 데 요구되는 화합물의 농도이다. IC₅₀ 값은 백그라운드를 적합화하고, 최소 반응을 0으로 설정하여 4 매개변수 로지스틱 곡선 적합화 등식 모델에 대한 투여량 반응 분석 데이터를 측정하였다. 이는 Origin 그래핑 소프트웨어 패키지(OriginLab Corporation, 미국 매사추세츠주 노댐턴 소재) 내의 내부에서 개발된 알고리즘을 사용하여 행하였다.

본 발명의 실시예들은 상기 분석에서 테스트하였으며, 그 평균 IC₅₀ 값을 산출하였다. 이들 값은 표 7에 나타낸다.

시험관내 AKT1 키나제 분석

이 분석은 Caliper LabChip LC3000을 사용하여 AKT1(PKBα) 키나제 활성의 억제제를 검출한다. 캘리퍼 오프칩 항온 처리 이동성 이동 분석은 마이크로유동성 칩을 사용하여 각각의 키나제에 의한 형광 표지된 펩티드의 인산화 산물로의 전환을 측정한다. 완전 효소 반응을 마이크로타이터 플레이트에서 수행한 다음 켄칭한다. 생성된 정지 용액을 모세관을 통하여 칩으로 연속적으로 '조금씩 흘리는데(sipped)' 여기서 펩티드 기질과 인산화 산물이 전기영동에 의해 분리된다. 그 다음, 레이저 유도 형광에 의해 이들을 검출한다. 기질과 산물은 고 전기장의 인가에 의해 두 피크로 분리되며, 형광을 사용하여 직접 검출한다. 형광 신호의 특징은 반응의 정도를 나타낸다.

에코(Echo)의 경우, 용매는 100% DMSO였다. 마스터 플레이트는 Labcyte 384 웰 플레이트의 사분면 1 내 본원인의 1차 액체 저장액으로부터의 10 mM 스톡 40 ㎕로 제조하였다. 100 분의 1 희석액은, 0.4 ㎕을 제거하여 이것을 DMSO 39.6 ㎕에 가함으로써 사분면 1에서 사분면 2로 제조하였다. 후속 100 분의 1 희석액은 사분면 2로부터 사분면 3으로, 그리고 사분면 3으로부터 사분면 4로 제조하였다.

다중 2.5 nl 액적을, ECHO 투여 기술(Labcyte Inc. 미국 캘리포니아주 서니베일 소재)을 사용하여 마스터 플레이트의 각각의 사분면으로부터 분배하여 테스트에 요구되는 투여량 범위를 생성하였다. 가장 흔히 사용되는 투여량 범위는 다음과 같다: 100 μM, 30 μM, 10 μM, 3 μM, 1 μM, 0.3 μM, 0.1 μM, 0.03 μM, 0.01 μM, 0.003 μM, 0.001 μM, 0.0001 μM. 각각의 웰에 디메틸 술폭시드(DMSO)를 120 nl의 총 부피로 다시 충전하였는데, 이는 효소와 기질 믹스를 첨가하였을 때 최종 DMSO 농도가 1%가 되도록 한 것이다. DMSO를 최대 대조 웰에 120 nl로서 가하고, 최소 대조 웰은 효소 활성을 100% 억제한 농도에서 화합물 120 nl로 처리하였다.

화합물 또는 대조물을 분석 플레이트에 가한 후, 키나제 베이스 완충액(100 mM Hepes pH 7.5, 0.015% Brij-35) 중의 3 μM 기질(5-FAM-GRPRTSSFAEG-CONH2; CRB) 및 40 μM ATP를 함유하는 6 ㎕ 펩티드 믹스와, 키나제 베이스 완충액 중의 8 nM AKT1/PKBα 활성 효소(Upstate Biotechnology, Cat No. 14-276), 8 mM DTT 및 20 mM MgCl₂를 함유하는 6 ㎕ 효소 믹스를 가하였다. 모든 완충액은 18MΩ 물로 만들었다. 플레이트를 밀봉하고, 실온에서 50 분 동안 항온 처리하였다. 10 ㎕ 정지 완충액(100 mM Hepes pH 7.5, 0.015% Brij-35 용액, 0.1% 코팅 시약 #3, 40 mM EDTA, 5% DMSO)을 각각의 웰에 가하여 반응을 정지시켰다(N.B. 플레이트를 정지 후 냉동하고 후에 판독할 수 있다). 그 다음, 플레이트를 Caliper LabChip LC3000 신약 개발 시스템(Caliper Life Sciences, 영국 WA7 3AZ 렁콘 프레스톤 브룩 웰필드 1 소재)과 하기 분리 조건을 사용하여 분석하였다; -1.8 PSI, -500 상향 전압, -1700 하향 전압, 0.2 초의 샘플 흘림(sip) 시간, 30 초의 후 샘플 흘림 시간 및 120 분의 최종 지체. 기질과 산물 피크의 적분은 Caliper LabChip 소프트웨어를 사용하여 수행하였고, IC₅₀ 곡선은 OriginTM 소프트웨어(OriginLab Corporation, 미국 매사추세츠주 노댐턴 소재)를 사용하여 산출하였다. 본 발명의 실시예들은 시험관내 AKT1 효소 분석에서 테스트하였으며, 얻은 평균 IC₅₀ 값을 표 7에 나타낸다.

실시예 번호	세포질 PKB 평균 IC ₅₀ (μM)	시험관내 PKB α 평균 IC ₅₀ (μM)
1	0.2	0.0076
2	0.13	0.0038
3	0.14	0.0067
3A, 3B	0.11, >3.10	0.0026, 0.27
4	0.23	0.005
5	0.27	0.0097
6	0.02	0.0012
7	0.14	0.0061
7A, 7B	0.10, >3.10	0.0045, 0.24
8	0.3	0.0071
9	0.09	0.0032
10	0.25	0.0042
11	0.1	0.002
11A, 11B	0.11, 0.48	0.0028, 0.021
12	0.1	0.0027
13	0.09	0.0042
14	0.94	0.003
15	>3.10	0.093
16	4.6	0.28
17	0.24	0.012
18	1.4	0.016
19	0.26	0.011
20	0.98	0.02*
21	>3.10	0.059*
22	0.17	0.0075
23	0.08	0.0013
24	0.06	0.0022
25	0.13	0.0029
26	0.09	0.0056
27	0.37	0.016*
28	0.47	0.0045
29	1.6	0.041
30	1.1	0.03
31	1.1	0.024
32	0.42	0.012
33	0.24	0.014
34	0.35	0.0092
35	0.28	0.004
36	0.38	0.014
37	0.55	0.019
38	0.36	0.0054
39	1.9	0.05
40	1.9	0.032
41	0.54	0.016
42	4.3	0.032
43	0.87	0.031
44	1.8	0.0089
45	0.77	0.23
46	6.7	0.15
47	0.21	0.0036
48	0.16	0.0056
49	0.081	0.005
49A, 49B	0.077, 1.2	0.0033, 0.048
50	0.19	0.0043
51	0.31	0.01
52	0.078	0.0037
53	>2.4	0.0063
54	0.18	0.0034
55	0.043	0.0039
56	1	0.016
57	0.49	0.012
58	2.9	0.031
59	0.84	0.0063
60	0.47	0.023
61	0.85	0.023
62	0.56	0.028
63	0.68	0.042
64	0.3	0.0095
65	0.87	0.0064
66	0.99	0.0066*
67	0.89	0.0077*
68	0.34	0.012
69	0.41	0.0069

* = 1회만 테스트함

hERG 분석

세포 배양

문헌(Persson, Carlsson, Duker, & Jacobson, 2005)에 기재된 hERG 발현 차이니즈 햄스터 난소 K1(CHO) 세포를, L-글루타민, 10% 우태 혈청(FCS) 및 0.6 mg/ml 하이그로마이신(모두 Sigma-Aldrich)을 함유하는 F-12 햄 배지 중에 37℃에서 가습 환경(5% CO₂) 하에 반 컨플루언스로 성장시켰다. 사용 전에, 미리 가온한(37℃) Versene 1:5,000(Invitrogen) 3 mL 분액을 사용하여 단층을 세척하였다. 이 용액의 흡입 후, 플라스크를 Versene 1:5,0000 추가 2 mL로 항온 처리기 내에서 37℃에서 6 분 동안 항온 처리하였다. 그 다음, 플라스크의 바닥에서 가볍게 두드림으로써 세포를 탈착시킨 후, 칼슘(0.9 mM) 및 마그네슘(0.5 mM)(PBS; Invitrogen)을 함유하는 둘베코 인산 완충 염 10 mL를 플라스크에 가하고, 15 mL 원심 분리 튜브로 흡입한 후, 원심 분리하였다(50 g, 4 분). 생성된 상청액을 버리고, 펠렛을 PBS 3 mL에 완만하게 재현탁시켰다. 세포 현탁액 0.5 mL 분액을 제거하고, 세포 재현탁액 부피를 PBS로 조절할 수 있도록 생세포의 수(트리판 블루 배제에 기초)를 자동화 판독기(Cedex; Innovatis)로 측정하여 소정 최종 세포 농도를 얻었다. 이것은 이 매개변수를 언급할 때 인용되는 분석 시점에서의 세포 농도이다. IonWorks^TM HT 상에서 전압 오프셋을 조절하는 데 사용되는 CHO-Kv1.5 세포를 유지시키고, 동일 방식으로 사용을 위해 제조하였다.

전기 생리학

이 장치의 원리 및 조작은 문헌(Schroeder, Neagle, Trezise, & Worley, 2003)에 기재되어 있다. 간단히 말해서, 상기 기술은 두 개의 단리된 유체 챔버를 분리하는 소공 상에 세포를 위치시키고 유지시키기 위하여 흡입을 사용하여 각각의 웰에서 기록을 시도하는 384 웰 플레이트(PatchPlate^TM)에 기초한다. 밀봉이 일어나면, PatchPlate^TM의 아랫면 상의 용액은 암포테리신 B를 함유하는 것으로 바뀐다. 이는 각각의 웰 내 소공을 덮고 있는 세포막의 패치를 침투화시키고, 관통된 전세포 패치 클램프 기록이 이루어지게 된다.

Essen Instrument 사제의 β-테스트 IonWorks^TM HT를 사용하였다. 이 장치에는 용액을 가온하는 능력은 없으며, 따라서 다음과 같이 실온(~21℃)에서 작동하였다. "완충액" 위치 내 저장소에 PBS 4 mL를 로딩하고, "세포" 위치의 저장소에 전술한 CHO-hERG 세포 현탁액을 로딩하였다. 테스트하고자 하는 화합물(최종 테스트 농도의 3 배로)을 함유하는 96 웰 플레이트(V 바닥, Greiner Bio-one)를 "플레이트 1" 위치에 놓고, PatchPlate^TM을 PatchPlate^TM 스테이션에 클램프 고정하였다. 각각의 화합물 플레이트를 12 컬럼에 배치하여 10 개의 8 포인트 농도 효과 곡선을 구축할 수 있게 되었는데, 플레이트 상의 나머지 두 컬럼에는 분석 베이스라인을 정의하기 위한 비히클(최종 농도 0.33% DMSO)과, 100% 억제 레벨을 정의하기 위한 시사프리드의 초최대 차단 농도(최종 농도 10 μM)를 넣었다. 그 다음, IonWorks^TM HT의 유체 헤드(F-헤드)는 PBS 3.5 ㎕을 PatchPlateTM의 각각의 웰에 가하고, 그 아랫면을 다음 조성(단위 mM)을 가진 "내부" 용액으로 관류하였다: K-글루코네이트 β100, KCl 40, MgCl₂ 3.2, EGTA 3 및 HEPES 5(모두 Sigma-Aldrich 사제; 10 M KOH를 사용하여 pH 7.25-7.30으로 조절). 프라이밍 및 탈버블링 후, 전자 헤드(E-헤드)를, 소공 테스트를 수행하는 PatchPlate^TM 주변을 돌렸다(즉, 전압 펄스를 인가하여 각각의 웰 내 소공이 개방되었는 지를 측정함). 그 다음, F-헤드는 전술한 세포 현탁액 3.5 ㎕를 PatchPlate^TM의 각각의 웰에 분배하고, 세포에 200 초를 제공하여 각 웰 내 소공에 도달하여 밀봉하게 하였다. 이 후, E-헤드는 PatchPlate^TM 주위를 돌아 각 웰에서 얻은 밀봉 저항을 측정하였다. 그 다음, PatchPlate^TM의 아랫면 상의 용액을 다음 조성(단위 mM)을 가진 "접근" 용액으로 바꾸었다: KCl 140, EGTA 1, MgCl2 1 및 HEPES 20(10 M KOH를 사용하여 pH 7.25-7.30으로 조절함) 및 암포테리신 B(Sigma-Aldrich) 100 ug/mL. 9 분 동안 패치 관류시킨 후, E-헤드는 예비 화합물 hERG 전류 측정을 얻는 시점에서 PatchPlate^TM 48 웰 주위를 돌았다. 그 다음, E-헤드는 화합물 플레이트의 각 웰로부터의 용액 3.5 ㎕을 PatchPlate^TM 상의 4 개의 웰에 가하였다(최종 DMSO 농도는 모든 웰에서 0.33%였다). 이는 임의의 화합물 잔사의 영향을 최소화하기 위하여 화합물 플레이트의 가장 묽은 웰에서 가장 진한 웰로 이동시킴으로써 달성하였다. 대략 3.5 분 항온 처리 후, E-헤드는 PatchPlate^TM의 모든 384 웰 주위를 돌아 예비 화합물 hERG 측정을 얻었다. 이 방식으로, 비누적 농도 효과 곡선을 산출할 수 있었는데, 여기서 허용 기준이 충분한 백분율의 웰에서 달성되었다면(하기 참조), 테스트 화합물의 각각의 농도 효과는 1 내지 4 세포의 기록에 기초하였다.

전 및 후 화합물 hERG 전류는 -70 mV에서 유지되는 20 s 주기, -60 mV로의 160 ms 스텝(누설 추정치를 얻기 위함), -70 mV로 되돌아가는 100 ms 스텝, +40 mV로의 1 s 스텝, -30 mV로의 2 s 스텝 및 최종적으로 -70 mV로의 500 ms 스텝으로 구성되는 단일 전압 펄스에 의해 생성된다. 전 및 후 화합물 전압 펄스 사이에서, 막 전위의 클램핑은 없었다. 전류는 전압 펄스 프로토콜의 개시에서 +10 mV 단계 중에 생긴 전류의 추정치에 기초하여 누설 공제하였다. IonWorks^TM HT에서의 임의의 전압 오프셋을 두 방식 중 하나로 조절하였다. 화합물을 효능을 결정할 때, 감극 전류 램프를 CHO-Kv1.5 세포에 적용하고, 전류 트레이스에서 변곡점(즉, 램프 프로토콜로 채널 활성화가 보이는 점)에서의 전압을 기록하였다. 이것이 일어나는 전압은 통상의 전기 생리학에서의 동일한 전압 커맨드를 사용하여 미리 결정하였으며, -15 mV(데이터 표시하지 않음)인 것으로 나타났는데, 따라서 오프셋 전위는 이 값을 기준점으로 사용하여 IonWorks^TM HT에 입력하였다. hERG의 기본 전기생리학적 성질을 결정할 때, 임의의 오프셋은 IonWorks^TM HT에서 hERG 꼬리 전류 반전 전위를 결정하고, 이것을 종래의 전기생리학(-82 mV)에서 발견되는 것과 비교한 다음, IonWorks^TM HT 소프트웨어에서 필요한 오프셋 조절을 행함으로써 조절하였다. 전류 신호는 2.5 kHz에서 샘플링하였다.

전 및 후 스캔 hERG 전류 폭은, -70 mV(베이스라인 전류)에서 초기 유지 기간 중의 전류의 40 ms 평균을 취하고, 이것을 꼬리 전류 반응의 피크에서 공제함으로써 IonWorks^TM HT 소프트웨어에 의한 누설 공제 트레이스로부터 자동적으로 측정하였다. 각각의 웰에서 생긴 전류에 대한 허용 기준은 전 스캔 밀봉 저항 >60 M?, 전 스캔 hERG 꼬리 전류 폭 >150 pA; 후 스캔 밀봉 저항 >60 MΩ이다. hERG 전류의 억제 정도는 후 스캔 hERG 전류를 각 웰에 대한 각각의 전 스캔 hERG 전류로 나눔으로써 평가하였다.

참고 문헌

Persson, F., Carlsson, L., Duker, G. & Jacobson, I. (2005). Blocking characteristics of hERG, hNav1.5, and hKvLQT1/hminK after administration of the novel anti-arrhythmic compound AZD7009, J Cardiovasc. Electrophysiol., 16, 329-341.

Schroeder, K., Neagle, B., Trezise, D. J., & Worley, J. (2003). Ionworks HT: a new high-throuput electrophysiology measurement platform. J. Biomol Screen., 8, 50-64.

hERG 분석 결과

실시예 9, (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드를 전술한 절차에 따라서 100 μM까지 테스트하였으며, 177 μM의 평균 hERG IC₅₀ 값을 곡선의 외삽에 의해 유도하였다.

생체내 실험

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드에 반응하는 PKB 기질 단백질 GSK3β 및 PRAS40의 약력학적 분석

2.5 x 10⁶ U87-MG 세포(ATCC 번호 HTB-14TM) + 50% 마트리겔을 누드 마우스 옆구리에 피하 주사하였다. 종양이 약 0.5 ㎤의 부피에 이르렀을 때, (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(E9)를 경구(경구 위관)로 제공하였다. 동물을 특정 시점에서 안락사시키고, 종양을 절개하였으며, 액체 질소로 급속 냉동(snap frozen)시켰다.

체외 종양 용해물을, 'FastPrep 24' 방법(MP Biomedicals matrix #6910-500)을 사용하여 프로테아제 및 포스파타제 억제제를 함유하는 10% 트리톤※100 용해 완충액에서 제조하였다. 단백질 농도는 Pierce BCA 키트(#23225)를 사용하여 BSA 표준 곡선에 대하여 평가하였다. pGSK3β를 웨스턴 블로팅에 의해 측정하고, pPRAS40을 고상 샌드위치 ELISA(Biosource KHO0421)에 의해 측정하였다.

웨스턴 블로팅의 경우, 등량의 단백질을 4-12% 구배 Bis-Tris 폴리아크릴아미드 예비 캐스트 겔(Invitrogen NP0323)에 의해 분해하고, Hybond C Extra 니트로셀룰로스 멤브레인(Invitrogen LC2001)로 옮겼으며, 1차 항혈청(pGSK3β ser9, Cell Signaling Technology #9336; 총 GSK3β, BD Transduction Labs #610202)으로 항온 처리하고, 이어서 양고추냉이 퍼옥시다제 콘쥬게이트 항-토끼 IgG(Cell Signaling Technology #7074) 또는 항-마우스 IgG(Cell Signalling Technology #7076)로 항온 처리하였다. 면역반응성 단백질을 증강된 화학발광(#34076 Pierce Supersignal Dura)에 의해 검출하고, 밴드를 ChemiGenius II(Syngene)로 정량화하였다. 도시된 값은 총 pGSK3β의 정규화 후 비히클 대조군과 비교한 pGSK3β의 억제율을 나타낸다.

ELISA(효소 결합 면역 흡착제 분석)의 경우, 등량의 단백질을 '포획' pPRAS40' 특이 모노클론 항체로 예비 코팅된 96 웰 플레이트에 가하였다. 그 다음, pPRAS40(Thr 246)에 특이적인 '검출' 항체를 가하고, 이어서 HRP 표지된 항-토끼 IgG 항체를 가하였다. 그 다음, 플레이트 판독기 상에서 450 nm에서 안정화된 TMB(테트라메틸벤지딘)를 사용하여 분석을 정량화하였다. 색 강도는 pPRAS40(Thr 246)의 농도에 비례한다. 결과는 도 1에 도시한다.

(S)-4-아미노-N-(1-(4- 클로로페닐 )-3-히드록시프로필)-1-(7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-일)피페리딘-4- 카르복시아미드 ( E9 )를 사용하는 MCF -7 항종양 연구

중증 복합 면역 결핍증(SCID) 마우스를 Charles River Laboratories에서 입수하였다. 마우스를 특정 병원체 부재 조건 하에 수용하고 유지시켰다. 생체내 이식의 경우, EDTA 용액 중의 3 x 트립신(Invitrogen)으로 2 내지 5 분 처리한 후, 기본 배지에 현탁시키고, 인산 완충 염수(Invitrogen) 중에서 3 회 세척함으로써 T225 조직 배양 플라스크에서 수확하였다. 트리판 블루 배제에 의해 결정한 바, 생육 가능성이 90%보다 큰 단일 세포 현탁액만을 주사용으로 사용하였다. MCF-7 유방 종양 세포(ATCC 번호 HTB-22^TM)(5 x 10⁶ 세포 + 50% Matrigel^TM)를 0.1 mL의 부피로 동물의 좌측 옆구리에 피하 주사하였다. MCF-7 세포의 이식 전에, SCID 마우스를 마취시키고, 0.5 mg/21 일 지속 에스트로겐 펠렛으로 이식하였다. 평균 종양 크기가 ~0.3 ㎤에 도달하면, 마우스를 대조군과 처치군으로 무작위화하였다. 처치군은 물 중의 10%(v/v) DMSO, 25%(v/v) Kleptose^TM으로 구성된 비히클 중에서 안정화시킨 300 mg/kg E9를 경구 위관에 의해 수용하였다. 대조군은 비히클만을 1일 1회 경구 위관에 의해 수용하였다. 종양 부피(캘리퍼에 의해 측정함)를 연구 기간 동안 간격을 두고 기록하였다. 마우스를 CO₂ 안락사에 의해 희생시켰다. 종양 부피를 식: (길이 x 너비) x √(길이 x 너비) x (π/6)을 사용하여 계산하였다(종양을 가로질러 가장 긴 직경에 대한 길이와 상응하는 직각 직경인 너비를 취함). 처치 개시로부터의 성장 억제를 대조군과 처치군 간의 종양 부피 차를 비교하여 평가하였다. 평균 종양 부피 데이터의 변동이 부피에 따라 비례적으로 증가하기 때문에(그러므로, 군 간의 불균형이기 때문에), 데이터를 로그 변환하여 통계학적 평가 전에 임의의 크기 의존성을 제거하였다. 통계학적 유의도는 편측 2 샘플 t 테스트를 사용하여 평가하였다. 결과는 도 2에 도시한다.

사람 투여량 예측

임상 연구를 위한 사람 투여량 예측은 특정 투여량에서 제거 T1/2과 혈장 농도 대 시간 프로파일의 형태 및 크기를 정의하는 데 중요한 사람 약력학적(PK) 매개 변수의 추산에 필요하다. 이러한 추정 매개변수는 제거율, 정상 상태에서의 분포 부피(Vss), 흡수율 상수(Ka), 생체 이용률(F) 및 투약 빈도를 포함한다. 또한, 사람 투여량 예측은 노출이 효능에 어떻게 관련되는 지에 관한 약리학적 증거를 요한다(McGinnity, Collington, Austin & Riley, Current Drug Metabolism 2007 8 463-479).

(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(E9)의 경우, 사람 제거율은 잘 교반된 모델의 혼입에 의한 생체내 제거율로 보정된 사람 간세포에서 측정된 고유 제거율(Clint) 데이터로부터 추정하였다(Riley, McGinnity & Austin, Drug Metabolism & Disposition 2005 33(9) 1304-1311) 래트, 개 및 사람에 대한 화합물의 혈장 단백질 결합에서 작은 차이가 관찰되었는데; 결론적으로, 관찰된 래트 및 개 Vss 값은 인자, Fu, 사람/Fu(래트 또는 개)(여기서 Fu = 혈장 내 미결합된 분율)에 의해 보정하였다. 사람 Vss는 이 접근법을 사용하여 3.3 L/kg인 것으로 추정되었다. 사람에게 흡수된 분율(Fabs)은 래트 및 개에 대한 평균으로서 취하였다. 그 다음, 이 Fabs 매개변수를 간 추출에 대한 보정에 의하여 생체 이용률(F)에 대해 조절하였다. 흡수 속도(Ka)는, 사전 임상적으로 관찰된 보수적 값인, Tmax가 E9에 대해 1 시간이 되도록 설정하였으며, 안전 연구에 관한 이득의 계산에 사용하기 위한 보수적 Cmax 값을 동일하게 얻어야 한다. 바람직한 임상 투약 빈도는 1일 2회(BID)인 것으로 추산되었다.

사람 혈장 농도 대 시간 곡선의 형태 및 크기가 정의되면, 최종 단계는 혈장 농도가 효능을 달성할 수 있는 투여량을 조절하는 것이다. 마우스 PD 연구에서, pGSK의 억제(항종양 활성에 대한 대용 종점)는, 유리 혈장 농도가, 본 분석에 존재하는 우태 혈청으로 인한 결합에 대해 보정한, AKT 억제 활성의 세포 분석에서 측정하였을 때 각각의 화합물에 대한 IC₅₀을 1 배 초과할 때 관찰되었다. 그 결과, 사람 PK 모델은 E9에 대한 유리 노출은 임상적 효능을 보증하기 위하여 유리 PKB IC₅₀을 초과해야 하는 것으로 추정된다.

이 데이터 모두를 함께 넣으면, (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(E9)는 효능을 달성하기위하여 약 7 mg/kg BID의 사람 투여량을 요하는 것으로 예측되며, 반감기는 약 6 시간인 것으로 추정된다.

도면의 간단한 설명

도 1: 150 또는 300 mg/kg (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(E9)의 단기간 투여량 후, 누드 마우스에서 성장한 U87-MG 종양으로부터 취한 샘플 내 GSK3β 및 PRAS40 인산화 레벨(n = 시점당 5).

도 2: 300 mg/kg (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복시아미드(E9)의 1일 1회(QD) 투여량을 사용한 SCID 마우스의 MCF-7 항종양 연구 결과.

Claims

하기 화학식의 화합물: (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복스아미드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
제1항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 함께 포함하는, 암을 치료하기 위한 약학 조성물.
제1항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 함께 포함하는, 유방암을 치료하기 위한 약학 조성물.
제1항에 따른 화합물: (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)피페리딘-4-카르복스아미드인 화합물.
제1항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법으로서,
하기 화학식 II의 산을 (S)-3-아미노-3-(4-클로로페닐)프로판-1-올과 반응시키는 단계, 및 이후에
(i) tert-부톡시카르보닐 보호기를 제거하는 단계; 또는
(ⅱ) tert-부톡시카르보닐 보호기를 제거하는 단계 및
(ⅲ) 약학적으로 허용가능한 염을 형성시키는 단계
를 포함하는 제조 방법:

상기 식에서, P¹은 tert-부톡시카르보닐 보호기를 나타낸다.
하기 화학식의 화합물: (S)-tert-부틸-4-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필카르바모일)-1-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)]피페리딘-4-일카르바메이트:
제1항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제조하는 방법으로서,
(S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카르복스아미드를 하기 화학식(V)의 이환식 헤테로사이클과 반응시키는 단계를 포함하거나, 또는
약학적으로 허용가능한 염을 형성시키는 단계를 더 포함하는 제조 방법:

상기 식 중에서, L₁은 염소 이탈기를 나타낸다.
하기 화학식의 화합물: (S)-4-아미노-N-(1-(4-클로로페닐)-3-히드록시프로필)피페리딘-4-카르복스아미드:
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