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KR101412897B1 - 개 인플루엔자 바이러스 및 관련 조성물 및 사용 방법 - Google Patents

개 인플루엔자 바이러스 및 관련 조성물 및 사용 방법 Download PDF

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KR101412897B1
KR101412897B1 KR1020087008658A KR20087008658A KR101412897B1 KR 101412897 B1 KR101412897 B1 KR 101412897B1 KR 1020087008658 A KR1020087008658 A KR 1020087008658A KR 20087008658 A KR20087008658 A KR 20087008658A KR 101412897 B1 KR101412897 B1 KR 101412897B1
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경진 윤
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아이오와 스테이트 유니버시티 리서치 파운데이션, 인코퍼레이티드
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Abstract

본 발명은 서열 4, 또는 서열 4와 99％ 초과로 동일하고, 단 위치 94 및 233에서의 아미노산이 서열 4와 동일한 아미노산 서열을 갖는 HA를 포함하는 서브타입 H3N8의 단리된 개 인플루엔자 바이러스; 약화 또는 불활성화된 바이러스를 포함하는 조성물; 단리 또는 정제된 HA, NM, MP, M1, NS1, PA, PB1, 및 PB2 단백질 및 이의 단편 및 이를 포함하는 조성물, 또는 임의로 벡터의 일부분으로서의, 이를 코딩하는 핵산; 및 동물에게 상기 언급된 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 동물에서 개 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 응답을 유도하는 방법을 제공한다.
개 인플루엔자 바이러스, 서브타입 H3N8

Description

개 인플루엔자 바이러스 및 관련 조성물 및 사용 방법{CANINE INFLUENZA VIRUS AND RELATED COMPOSITIONS AND METHODS OF USE}
관련 특허 출원에 대한 상호 참조
본 특허 출원은 미국 가특허 출원 60/727,808, (2005년 10월 18일 출원), 및 미국 실용 특허 출원 11/539,123 (2006년 10월 5일 출원)을 우선권으로 청구하고, 이들의 내용은 거명에 의해 전체적으로 본원에 포함된다.
본 발명은 바이러스학, 분자생물학, 및 면역학 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 개 인플루엔자 바이러스, 뿐만 아니라 관련 조성물 및 동물에서의 면역 응답을 유도하는 것에서의 사용 방법에 관한 것이다.
인플루엔자 바이러스는 오르토믹소바이러스과 (Orthomyxoviridae)에 속하는 RNA 바이러스이다. 바이러스의 RNA는 8개의 독립적인 절편으로 구성되고, 이들은인플루엔자 바이러스들 간에 용이하게 재조합되어 새로운 서브타입이 생산된다.
뉴클레오캡시드(nucleocapsid)의 주성분인 핵단백질 (nucleoprotein: NP)은 5번째 절편에 의해 코딩된다. NP 및 매트릭스 단백질은 인플루엔자 바이러스를 A, B 또는 C 군으로 분류하는데 사용된다. NP는 내부 단백질이기 때문에, 숙주의 면 역계에 의한 선택의 압력에 적용되지 않는다. 이는 RNA에 결합하고, 전사효소 복합체의 일부이며, 바이러스 RNA (vRNA)의 핵-세포질 전달에 수반된다.
말단 시알산과 그 다음의 당 잔기를 연결하는 α-케토 결합을 분할시킴으로써 바이러스 자손이 감염된 세포로부터 방출되도록 하는 뉴라미다제 (neuraminidase: NM)는 6번째 절편에 의해 코딩된다. 이러한 효소의 9개의 서브타입 (N1-N9)이 확인되었다. 모든 서브타입은 2개의 구조적 영역 - 줄기 및 머리 -를 갖는다. 모든 N8 단백질은 470개의 아미노산을 갖고, 이중 첫번째 8개는 고도로 보존된다. 이어지는 영역은 소수성 아미노산이 풍부하고, 막횡단 도메인인 것으로 간주된다. 그 다음의 51개의 아미노산이 줄기 영역을 구성하고, 머리 영역은 Cys91에서 시작된다. 마지막 영역은 효소의 촉매 부위를 함유한다. 머리 및 줄기 영역 내의 시스테인 잔기는 고도로 보존되는 경향이 있다. 6-8개의 추정 N-글리코실화 부위가 있다.
숙주 세포 내로의 바이러스의 흡착을 담당하는 막 당단백질인 적혈구응집소 (hemagglutinin: HA)는 중화 항체가 이에 대해 지시되는 주요 항원이다. 이의 항원성 변동이 인플루엔자 전염병의 주요 원인이다. 이는 4번째 절편에 의해 코딩된다. 16개의 상이한 서브타입 (H1-H16)이 확인되었다. HA는 아미노산 16개의 신호 펩티드, 및 디술피드 다리에 의해 연결된 2개의 폴리펩티드 (HA1 및 HA2)를 갖는다. HA1은 아미노 말단 종결부를 갖는 반면, HA2는 카르복실 말단 종결부를 갖는다. HA2 내의 소수성 영역이 HA를 바이러스 막에 고정시킨다. 시스테인 잔기는 고도로 보존되는 경향이 있다. 6개의 추정 글리코실화 부위가 있고, 이들은 바이 러스가 이의 항원성 부위를 차폐하도록 할 수 있다 ([Skehel et al., PNAS USA 81: 1779 (1984)]).
기타 단백질에는 매트릭스 (M 또는 M1 및 M2), 비-구조성 (NS 또는 NS1 및 NS2), PA, PB1, 및 PB2가 포함된다. M1 단백질은 단백질의 N-말단에서의 2개의 소수성 영역에 의해 감염된 세포의 형질막에 결합하는 비리온의 주요 성분인 반면, M2는 이온 채널이며, 따라서 내재성 막단백질이다. NS1 단백질은 핵에서 발견되고, 세포성 RNA 전달, 스플라이싱(splicing), 및 번역에 영향을 미친다. NS2 단백질은 핵 및 세포질에서 발견되고, 기능은 알려져 있지 않다. PA 단백질은 전사효소이고, 프로테아제 활성을 가질 수 있는 반면, PB1 단백질은 전사 연장에서 기능하고, PB2 단백질은 전사 캡(cap) 결합에서 기능한다.
세계적으로, 인플루엔자는 인간, 돼지, 말 및 가금류에서 가장 경제적으로 의미있는 호흡기 질환이다 ([Wright et al., Orthomyxoviruses. In: Fields Virology. Knipe et al., eds. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 2001. pp. 1533-1579]). 인플루엔자 바이러스는 이의 지속적인 유전자 및 항원성 변화에 대해 공지되어 있고, 이는 바이러스의 효과적인 제어를 방해한다 ([Wright et al. (2001), 상기 문헌]; [Webster et al., Microbiol. Rev. 56: 152-179 (1992)]). 유전자 재편성 또는 종간(種間) 전파에 의한 바이러스의 새로운 서브타입의 급변은 전염병 및 범유행병의 예방을 위해 특히 중요 관심사이다 ([Wright et al. (2001), 상기 문헌]).
최근, 역사적으로 인플루엔자 바이러스를 보유하지 않는 종, 예를 들어, 고 양이 및 개에서 인플루엔자 발병이 발생하였다 ([Keawcharoen et al., Emerg. Infect. Dis. 10: 2189-2191 (2004)]; [Crawford et al., Science 310: 398-485 (2005년 10월 21일; 2005년 9월 29일에 온라인에서 공개됨)]; [Dubovi et al., Isolation of equine influenza virus from racing greyhounds with fatal hemorrhagic pneumonia. In: Proceedings of the 47th Annual Meeting of American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians, Greensboro, NC, October 2005. p. 158]; 및 [Yoon et al., Emerg. Infect. Dis. 11(12): 1974-1976 (December 2005)]). 따라서, 인플루엔자 바이러스의 숙주 범위가 확장되고 있다.
인플루엔자 바이러스 감염에 의해 야기된 경주용 그레이하운드에서의 호흡기 질환의 발병이 2004년 플로리다에서, 2005년 4월 동부 및 서부 아이오와에서, 그리고 2005년 텍사스에서 발생하였다. 질환은 발열 및 기침의 급속한 발병, 빈 호흡(rapid respiration), 및 출혈성 콧물을 특징으로 하였다. 이환률은 아이오와의 양쪽 경주장 수용소에서 거의 100％였지만, 사망률은 5％ 미만이었다. 감염된 개들 중 많은 백분율이 회복된 반면, 다수는 폐렴으로 쓰러졌다. 광범위한 스펙트럼의 항생제의 치료용 투여는 질환의 중증도를 감소시켰지만, 이를 제어할 수 없었다.
상기를 고려하여, 본 발명의 목표는 개를 감염시키는 인플루엔자 바이러스를 제공하는 것이다. 본 발명의 또다른 목표는 개에서 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 응답을 유도하는 물질 및 방법을 제공하는 것이다. 이러한 및 기타 목표 및 장점, 뿐만 아니라 추가적인 본 발명의 양상이 본원에서 제공된 상세한 설명으로부 터 명백해질 것이다.
발명의 개요
본 발명은 서열 4, 또는 서열 4와 99％ 초과로 동일하고, 단 위치 94 및 233에서의 아미노산이 서열 4와 동일한 아미노산 서열을 갖는 HA를 포함하는 서브타입 H3N8의 단리된 개 인플루엔자 바이러스를 제공한다. 특히, 본 발명은 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection) (Manassas, VA)에 2006년 6월 29일에 특허 기탁 번호 PTA-7694로 기탁된 서브타입 H3N8의 단리된 개 인플루엔자 바이러스를 제공한다. 따라서, 본 발명은 약화된 바이러스를 포함하는 조성물, 뿐만 아니라 불활성화된 바이러스를 포함하는 조성물을 또한 제공한다.
본 발명은 단리 또는 정제된 단백질을 또한 제공한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 (i) 서열 4의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 (ii) 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 4와 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 94 및 233에서 아미노산 서열이 서열 4의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는, 단리 또는 정제된 HA, 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 4의 위치 94 또는 233에서의 아미노산과 동일한 (i) 또는 (ii)의 단편을 또한 제공한다.
또다른 실시양태에서, 본 발명은 (i) 서열 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 (ii) 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 2와 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 68 및 134에서 아미노산 서열이 서열 2의 것과 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단리 또는 정제된 NM, 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 2의 위치 68 또는 134에서의 아미노산과 동일한 (i) 또는 (ii)의 단편을 제공한다.
또다른 실시양태에서, 본 발명은 (i) 서열 6의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 (ii) 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 6과 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 402에서 아미노산 서열이 서열 6의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는, 단리 또는 정제된 NP, 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 6의 위치 402에서의 아미노산과 동일한 (i) 또는 (ii)의 단편을 제공한다.
또다른 실시양태에서, 본 발명은 (i) 서열 8의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 (ii) 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 8과 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 111에서 아미노산 서열이 서열 8의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는, 단리 또는 정제된 M1, 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 8의 위치 111에서의 아미노산과 동일한 (i) 또는 (ii)의 단편을 제공한다.
서열 10의 아미노산 서열을 갖는 단리 또는 정제된 NS1이 또한 제공된다.
(i) 서열 12의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 (ii) 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 12와 98％ (또는 99％) 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 233, 256, 327, 및 561에서 아미노산 서열이 서열 12의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는, 단리 또는 정제된 PA 단백질, 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 12의 위치 233, 256, 327, 및 561에서의 아미노산과 동일한 (i) 또는 (ii)의 단편이 추가로 제공된다.
(i) 서열 14의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 (ii) 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 14와 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 200 및 213에서 아미노산 서열이 서열 14의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는, 단리 또는 정제된 PB1, 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 14의 위치 200 또는 213에서의 아미노산과 동일한 (i) 또는 (ii)의 단편이 추가로 제공된다.
(i) 서열 16의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 (ii) 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 16과 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 107, 221, 292, 및 661에서 아미노산 서열이 서열 16의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는, 단리 또는 정제된 PB2, 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 16의 위치 107, 221, 292, 또는 661에서의 아미노산과 동일한 (i) 또는 (ii)의 단편이 추가로 제공된다.
상기를 고려하여, 본 발명은 동물에서 면역 응답을 유도하는데 충분한 양의 상기 기술된 단백질, 예컨대 HA 또는 NM, 또는 이의 단편, 및 생물학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물을 추가로 제공한다.
또한 상기를 고려하여, 본 발명은 동물에서 개 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 응답을 유도하는 방법을 제공한다. 이 방법은 단백질 또는 이의 단편을 포함하는 조성물을 동물에게 투여하는 것을 포함한다.
임의로 벡터의 일부분으로서의, 상기 기술된 단백질 또는 이의 단편을 코딩하는 단리 또는 정제된 핵산이 또한 제공되고, 동물에서 면역 응답을 유도하는데 충분한 양의 단백질, 예컨대 HA 또는 NM, 또는 이의 단편을 발현하는 단리 또는 정제된 핵산 및 생물학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물이 또한 제공된다.
따라서, 본 발명은 동물에서 개 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 응답을 유도하는 또다른 방법을 또한 제공한다. 이 방법은 핵산을 포함하는 조성물을 동물에게 투여하는 것을 포함한다.
도 1은 개 인플루엔자 바이러스의 서브타입 H3N8로부터의 NM 유전자의 코딩 도메인 서열 (CDS)의 부분적인 뉴클레오티드 서열 (서열 1; GenBank 접속 번호 DQ146420을 또한 참조)이다. 협약에 따라, 서열은 좌측에서 우측으로, 위에서 아래로 제시된다.
도 2는 서열 1에 의해 코딩되는 아미노산 서열 (서열 2; GenBank 접속 번호 DQ146420을 또한 참조)이다. 협약에 따라, 서열은 단일 문자 형식으로 좌측에서 우측으로, 위에서 아래로 제시된다.
도 3은 개 인플루엔자 바이러스의 서브타입 H3N8으로부터의 HA 유전자의 CDS의 완전한 뉴클레오티드 서열 (서열 3; GenBank 접속 번호 DQ146419를 또한 참조)이다.
도 4는 서열 3에 의해 코딩되는 아미노산 서열 (서열 4; GenBank 접속 번호 DQ146419를 또한 참조)이다.
도 5는 개 인플루엔자 바이러스의 서브타입 H3N8으로부터의 NP 유전자의 CDS의 완전한 뉴클레오티드 서열 (서열 5)이다.
도 6은 서열 5에 의해 코딩되는 추정 아미노산 서열 (서열 6)이다.
도 7은 개 인플루엔자 바이러스의 서브타입 H3N8으로부터의 M1 단백질 유전자의 CDS의 완전한 뉴클레오티드 서열 (서열 7)이다.
도 8은 서열 7에 의해 코딩되는 추정 아미노산 서열 (서열 8)이다.
도 9는 개 인플루엔자 바이러스의 서브타입 H3N8으로부터의 NS1 단백질 유전자의 CDS의 완전한 뉴클레오티드 서열 (서열 9)이다.
도 10은 서열 9에 의해 코딩되는 추정 아미노산 서열 (서열 10)이다.
도 11은 개 인플루엔자 바이러스의 서브타입 H3N8으로부터의 PA 단백질 유전자의 CDS의 완전한 뉴클레오티드 서열 (서열 11)이다.
도 12는 서열 11에 의해 코딩되는 추정 아미노산 서열 (서열 12)이다.
도 13은 개 인플루엔자 바이러스의 서브타입 H3N8으로부터의 PB1 단백질 유전자의 CDS의 완전한 뉴클레오티드 서열 (서열 13)이다.
도 14는 서열 13에 의해 코딩되는 추정 아미노산 서열 (서열 14)이다.
도 15는 개 인플루엔자 바이러스의 서브타입 H3N8으로부터의 PB2 단백질 유전자의 CDS의 완전한 뉴클레오티드 서열 (서열 15)이다.
도 16은 서열 15에 의해 코딩되는 추정 아미노산 서열 (서열 16)이다.
본 발명은 개에서의 인플루엔자 바이러스의 균주의 발견을 기초로 한다. 균주는 동부 및 서부 아이오와에서 경주용 그레이하운드로부터 단리되었다. 균주는 H3N8 서브타입으로 분류되었고, A/canine/Iowa/13628/2005로 명명되었다. 따라서, 본 발명은 서열 4, 또는 서열 4와 99％ 초과로 동일하고, 단 위치 94 및 233에서의 아미노산이 서열 4와 동일한 아미노산 서열을 갖는 HA를 포함하는 바이러스를 제공한다. 바이러스는 서열 2의 아미노산 서열, 또는 서열 2와 99％ 초과로 동일하고, 단 위치 68 및 134에서의 아미노산이 서열 2와 동일한 아미노산 서열을 포함하는 NM을 추가로 포함할 수 있다. 상기 언급된 HA를 단독으로 또는 상기 언급된 NM과 추가로 조합하여 포함하는 바이러스는 하기의 것들 중 1개 이상을 추가로 포함할 수 있다: 서열 6의 아미노산 서열, 또는 서열 6과 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 402가 서열 6의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 NP; 서열 8의 아미노산 서열, 또는 서열 8과 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 111이 서열 8의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는 M1; 서열 10의 아미노산 서열을 갖는 NS1; 서열 12의 아미노산 서열, 또는 서열 12와 98％ (또는 99％) 초과로 동일하고, 단 아미노산 233, 256, 327 및 561이 서열 12와 동일한 아미노산 서열을 갖는 PA 단백질; 서열 14의 아미노산 서열, 또는 서열 14와 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 200 및 213이 서열 14와 동일한 아미노산 서열을 갖는 PB1; 및/또는 서열 16의 아미노산 서열, 또는 서열 16과 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 107, 221, 292 및 661이 서열 16과 동일한 아미노산 서열을 갖는 PB2. 특히, 본 발명은 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션 (10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209, U.S.A.)에 2006년 6월 29일에 특허 기탁 번호 PTA-7694로 기탁된 서브타입 H3N8의 단리된 개 인플루엔자 바이러스를 제공한다.
인플루엔자 바이러스는 수성 매질 내의 바이러스를 5 중량％ 이하의 분자량이 3,000 내지 20,000 사이인 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 또는 PEG의 용해력과 등가인 양의 또다른 전하를 띠지 않는 선형 필라멘트 중합체의 존재에 의해 초래된 1회 이상의 불용화 단계에 적용시키고, 불용화된 분획을 불용화되지 않은 분획으로부터 분리하고, 분획들 중 하나로부터 바이러스를 회수함으로써 침전될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 3,989,818 참조). 바람직하게는, 온도는 35 ℃를 초과하지 않고, pH는 6 내지 9 사이이며, 수성 매질의 이온 강도는 바이러스에 대한 염석점(salting out point) 미만이다. 불용화 전의 수성 매질 내의 바이러스의 농도는 1/32 이상의 적혈구응집 역가에 상응한다. 응집된 바이러스 입자가 수득되고, 이는 백신화 후 바이러스 입자의 느린 방출로 인해 더욱 양호한 항원 효과를 제공할 것으로 여겨진다. 그러나, 응집되지 않은 또는 덜 응집된 입자를 원하는 경우, 임의의 적절한 방법, 예컨대 초음파처리를 사용하여 이를 해리시킬 수 있다.
바이러스가 면역원성 특징은 완전히 유지하면서 질환을 일으키는 능력을 잃을 때까지 세포 시스템을 계대시킴으로써 바이러스가 약화될 수 있다. 예를 들어, 개 종 또는 기타 적절한 종으로부터 유래된 세포의 배양물에서 약 37℃의 온도에서 바이러스를 연속적으로 계대시킬 수 있다. 각각의 계대에서, 당업계에 공지된 방법에 따라 한 배양물로부터 바이러스를 수확하여, 새로운 세포 배양물을 함유하는 배지 내에 접종한다. 예를 들어, 바이러스를 조직 세포 배양액 및/또는 세포로부터 수집할 수 있다. 임의로, 수확 동안, 세포 배양물을 초음파처리하여 바이러스의 방출을 촉진할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 5,698,433 및 6,455,298 참조.
원한다면, 인플루엔자 균주를 혈청의 존재 하에 발육란, 예컨대 계란의 요막 공간 내에서 1회 이상 계대시켜, 혈청-저항성 바이러스를 수득할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 3,953,592; [Kilbourne et al., J. Exp. Med. 111:387 (1960)]; [Kilbourne, Science 160: 74-75 (April 1968)]; 및 [Laver et al., Virology 30: 493-501 (1966)] 참조). 약화된 바이러스를 함유하는 농축된 요막액을 연속하여 부틸 아세테이트 및 에틸 아세테이트로 처리한 후, 순간 증발시킴으로써, 발열원성이 낮고 내독성이 낮은 고효능 인플루엔자 백신이 달성될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 4,000,257 참조). 이같은 바이러스는 백신으로서 비강내로 투여될 수 있다.
일단 숙주 내로 접종되면, 바이러스가 어느 정도 증식되어, 소량의 초기 접종물만이 요구된다. 바이러스는 독성이 없어야 하고, 감수성 접촉자의 감염은 최소한도로 유지되어야 한다.
별법적으로, 복제 및 발병력을 파괴함으로써 바이러스를 불활성화시킬 수 있다. 이는 화학적 또는 물리적 수단에 의해 이루어질 수 있다. 화학적 불활성화는 바이러스를 효소, 포름알데히드, β-프로피오락톤 또는 이의 유도체, 에틸렌이민 또는 이의 유도체, 유기 용매 (예를 들어, 할로겐화 탄화수소), 및/또는 세제 (예를 들어, Tween®, Triton X®, 소듐 데스옥시콜레이트, 술포베타인, 또는 세틸트리메틸암모늄 염)으로 처리함으로써 수행될 수 있다. 필요하다면, 화학적으로 활성화된 조성물을 중화시킬 수 있다. 예를 들어, 포름알데히드가 조성물을 비활성화시키는데 사용된 경우, 조성물을 티오-술페이트로 중화시킬 수 있다. 필요하다면, 그후에 pH를 약 7의 값으로 회복시킬 수 있다. 별법적으로, 바이러스를 에테르와 에탄올의 혼합물로 추출할 수 있고, 수성 상 및 유기 상을 분리할 수 있고, 잔류 에테르를 감압 하에 바이러스 현탁액으로부터 제거할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 4,431,633 참조). 물리적 불활성화는 바이러스를 에너지-풍부 방사선, 예컨대 자외선, γ-방사선, 또는 X-선에 적용시킴으로써 유리하게 수행될 수 있다. 불활성화된 형태는 상대적으로 높은 양의 접종물을 필요로 하고, 따라서 상응하는 다량의 항원성 물질을 필요로 하며, 이것이 제작, 테스트 및 분포되어야 한다.
상기를 고려하여, 본 발명은 약화 또는 불활성화된 바이러스를 포함하는 조성물을 또한 제공한다. 바이러스는 면역 응답을 유도하는데 충분한 양으로 존재하여야 하고, 바람직하게는 접종(challenge)시 보호를 제공하여야 한다. 일반적으로, 보강제, 예컨대 Tween®, Span®, 프로인트 완전 보강제, 사포닌, 코리네박테리움 파르붐(Corynebacterium parvum) (Coparvax®), 인산알루미늄, 수산화알루미늄, 또는 이의 혼합물이, 특히 조성물이 불활성화된 바이러스를 포함하는 경우에, 조성물에 첨가된다. 단백질 가수분해물 및/또는 아미노산이 첨가되어 조성물을 안정화시킬 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 4,537,769 참조). 별법적으로, Marcol 및/또는 Arlacel과 같은 오일을 사용하여 수중유 에멀션으로 조성물을 제형할 수 있다.
예컨대 "과잉-약화된" (약화를 위한 계대 횟수가 병원성을 제거하는데 일반적으로 필요한 것보다 실질적으로 많음) 인플루엔자 A 어버이 균주, 예를 들어, A2와 본원에서 제공된 바와 같은 독성 인플루엔자 균주의 조합으로부터, 재조합 인플루엔자 균주가 또한 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 3,991,179 참조; 또한, 미국 특허 4,009,258; 4,278,662; 4,318,903; 4,338,296; 및 4,693,893 참조). 바람직하게는 재조합 균주는 독성 균주의 항원성 성질, 예를 들어, HA 및 NM 단백질과 커플링된 과잉-약화된 균주의 성장 특징을 갖는다. 백신 제형을 위한 인플루엔자 바이러스의 선별이 미국 특허 5,162,112에 기술되어 있다. 재조합 균주는 면역 응답을 유도하기 위한 조성물로서 제형될 수 있다.
수크로스, 아르기닌 모노히드로클로라이드, 글루탐산의 모노소듐 1수화물, 및 젤라틴 가수분해물을 사용하여 냉장고에서의 보관을 위해 인플루엔자 바이러스 조성물을 안정화시킬 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 2006/0110406 참조.
상기를 고려하여, 본 발명은 단리 또는 정제된 HA를 또한 제공한다. HA는 서열 4의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 4와 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 94 및 233에서 아미노산 서열이 서열 4의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 9개 이상 (예컨대 9개, 12개, 15개, 18개, 21개 또는 24개)의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 4의 위치 94 또는 233에서의 아미노산과 동일한 HA의 단편이 또한 제공된다.
단리 또는 정제된 NM이 또한 제공된다. NM은 서열 2의 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 2와 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 68 및 134에서 아미노산 서열이 서열 2의 것과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 2의 위치 68 또는 134에서의 아미노산과 동일한 NM의 단편이 또한 제공된다.
단리 또는 정제된 NP가 추가로 제공된다. NP는 서열 6의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 6과 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 402에서 아미노산 서열이 서열 6의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 6의 위치 402에서의 아미노산과 동일한 NP의 단편이 또한 제공된다.
단리 또는 정제된 M1이 추가로 제공된다. M1은 서열 8의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 8과 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 111에서 아미노산 서열이 서열 8의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 8의 위치 111에서의 아미노산과 동일한 M1의 단편이 또한 제공된다.
단리 또는 정제된 NS1이 추가로 제공되고, 이는 서열 10의 아미노산 서열을 갖는다.
단리 또는 정제된 PA 단백질이 또한 제공된다. PA는 서열 12의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 12와 98％ (또는 99％) 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 233, 256, 327, 및 561에서 아미노산 서열이 서열 12의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 12의 위치 233, 256, 327, 또는 561에서의 아미노산과 동일한 PA의 단편이 또한 제공된다.
단리 또는 정제된 PB1이 제공된다. PB1은 서열 14의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 14와 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 200 및 213에서 아미노산 서열이 서열 14의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 14의 위치 200 또는 213에서의 아미노산과 동일한 PB1의 단편이 또한 제공된다.
단리 또는 정제된 PB2가 또한 제공된다. PB2는 서열 16의 아미노산 서열을 갖거나, 또는 인플루엔자 바이러스로부터 유래되고, 서열 16과 99％ 초과로 동일하고, 단 아미노산 위치 107, 221, 292, 및 661에서 아미노산 서열이 서열 16의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 9개 이상의 인접 아미노산을 포함하고, 이들 중 1개 이상이 서열 16의 위치 107, 221, 292, 또는 661에서의 아미노산과 동일한 PB2의 단편이 또한 제공된다.
상기 단백질 및 이의 단편은 당업계에 공지된 방법에 따라 정제 (단편을 생성시키기 위한 화학적 또는 물리적 단편화와 커플링됨) 또는 합성될 수 있다. 예를 들어, 고체 상 단백질 합성에 대해서 [Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides 2: 46, Academic Press, NY (1973)], 및 용액 상 단백질 합성에 대해 [Schroder et al., The Peptides, vol. 1, Academic Press, NY (1965)] 참조. 자동화 시스템을 사용하여 제조업자의 설명에 따라 이같은 기술을 수행할 수 있다. 치료 분량이 재조합적으로 생산 및 정제될 수 있다.
별법적으로, 단백질, 특히 HA 및 NM는 모든 다른 비-필수 바이러스 성분을 둘러싸는 무손상 지질/단백질 막으로 구성된 나머지 서브바이러스 입자를 남기면서 선택적 가용화에 의해 단리될 수 있다. 가용화된 단백질 및 나머지 서브바이러스 입자의 크기/밀도에서의 차이는 구배 원심분리 및 분획화, 침강, 분자 체 크로마토그래피, 또는 초원심분리에서의 펠렛화에 의한 물리적 성질에서의 차이를 기초로 하는 분리를 허용한다. HA 및 NM의 선택적 가용화는 바이러스를 양이온성 세제로 처리함으로써 달성될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 4,140,762 ('762 특허) 참조). 세포 배양물로부터 수득된 전체 바이러스-함유액을 DNA-소화 효소로 처리한 후, 양이온성 세제를 첨가하고 표면-항원 단백질을 단리한다 (예를 들어, 미국 특허 5,948,410 참조). 함유액을 여러 초원심분리 단계에 적용할 수 있거나, 또는 바이러스를 양쪽성 비이온성 세제의 존재 하에 분획화시킨 후 여과하여 원하지 않는 물질을 제거할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 6,048,537 참조). 별법적으로, 막 여과 및 화학적 분할을 사용하여 바이러스 단백질을 수득할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 4,327,182 참조). 기타 절차가 미국 특허 4,064,232 및 4,057,626에 기술되어 있다. 바람직하게는, '762 특허 (col. 2, 11. 10 이하 참조)에 예시된 바와 같은 처리 전에 바이러스가 증폭된다.
바이러스 단백질의 면역 응답-유도 에피토프를 확인하도록 지도제작, 즉 "에피토프 지도제작"을 수행할 수 있다. 이같은 지도제작은 단백질을 중첩되는 펩티드들 (예컨대 9개, 12개, 15개, 18개, 21개 또는 24개의 아미노산을 포함하는 펩티드)로 분획화시키는 것을 수반한다. 단백질분해성 효소로 단백질을 분획화시킬 수 있다. 이어서 개별적인 펩티드들을 천연 단백질에 의해 도출된 항체에 결합하거나 또는 T-세포 또는 B-세포 활성화를 유도하는 능력에 대해 테스트한다. 별법적으로, 친수성 잔기가 종종 단백질의 표면 상에 존재하고, 따라서 항체에 접근하기 쉽기 때문에, 단백질의 친수성 영역을 선택할 수 있다. 항원-항체 복합체의 X-선 결정학 분석을 또한 수행할 수 있다. MHC 분자에 결합할 것으로 공지된 펩티드 서열인 잠재적인 HLA 앵커(anchor) 결합 모티프를 단백질의 아미노산 서열로부터 확인할 수 있다. 바람직하게는, 선택된 에피토프는 단백질 단편을 포함하거나 발현하는 조성물이 투여될 동물에서 광범위하게 발견되는 서열과 서열 동일성을 거의 공유하지 않거나 공유하지 않는 것이다.
임의로 벡터의 일부분으로서의, 상기 기술된 단백질 또는 이의 단편을 코딩하는 단리 또는 정제된 핵산이 또한 제공된다. HA를 코딩하는 핵산은 서열 3 또는 9개 이상 (9개, 12개, 15개, 18개, 21개 또는 24개)의 인접 아미노산을 코딩하는 이의 단편의 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 원한다면, HA 중 하나가 서열 4의 아미노산 서열을 포함하는, HA를 기초로 하는 3가 백신이 제조될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 5,762,939 및 6,245,532 참조; 예를 들어, 3가 백신에 대해 미국 특허 6,740,325 참조). NM을 코딩하는 핵산은 서열 1 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 코딩하는 이의 단편의 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있는 한편 (예를 들어, 미국 특허 6,605,457 및 미국 특허 출원 공개 2003/0129197 참조), NP를 코딩하는 핵산은 서열 5 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 코딩하는 이의 단편의 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있고, M1 단백질을 코딩하는 핵산은 서열 7 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 코딩하는 이의 단편의 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있으며, NS1 단백질을 코딩하는 핵산은 서열 9의 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있고, PA를 코딩하는 핵산은 서열 11 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 코딩하는 이의 단편의 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있고, PB1을 코딩하는 핵산은 서열 13 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 코딩하는 이의 단편의 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있으며, PB2를 코딩하는 핵산은 서열 15 또는 9개 이상의 인접 아미노산을 코딩하는 이의 단편의 뉴클레오티드 서열을 가질 수 있다. 그러나, 당업자는 유전자 코드의 축퇴성으로 인해, 이같은 아미노산 서열을 코딩할 수 있는 수많은 다른 뉴클레오티드 서열이 있다는 것을 이해할 것이다.
DNA 또는 RNA일 수 있는 상기 핵산, 및 이의 단편은 합성될 수 있다 (예를 들어, [Oligonucleotide Synthesis, Gait, ed., 1984] 참조). 이같은 분자는 원하는 아미노산 서열을 코딩하는 비-천연 발생 뉴클레오티드/염기를 포함할 수 있다. 예를 들어, 염기 또는 당이 메틸화될 수 있다. 또한, 핵산 분자의 골격, 예를 들어, 포스포로티오에이트 골격, 메틸포스포네이트, 메틸포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 및 이의 조합이 변형될 수 있다.
별법적으로, 단리된 vRNA에 역전사효소를 적용하여 RNA/DNA 하이브리드(hybrid)가 생산될 수 있고, 이로부터 RNA를 소화에 의해 제거하고, 나머지 DNA를 헤어핀 종결부를 갖는 dsDNA가 생산되도록 처리하고, 이를 단일 가닥-특이적 핵산분해효소로 처리하여, vRNA의 2분자성 이중 가닥 카피가 생산된다 (예를 들어, 미국 특허 4,357,421 참조). 헬퍼(helper) 바이러스의 부재 하에 인플루엔자의 제조를 위한 일렬 전사 카셋트의 사용에 대해서, 예를 들어, 미국 특허 출원 공개 2006/0166321 참조.
임의로 핵산은 1개 이상의 프로모터를 포함하는 DNA 벡터의 일부분이고, 이러한 경우 각각의 뉴클레오티드 서열은 동일 또는 상이할 수 있는 프로모터에 작동가능하게 연결된다. 프로모터에 더하여, 기타 제어 서열, 예컨대 종결 신호 등이 DNA 벡터의 일부분일 수 있다.
예를 들어, 핵산은 적절한 재조합 발현 벡터, 예컨대 박테리아, 예컨대 대장균 및 장티푸스균, 효모, 예컨대 사카로마이세스 세레비지아에(Saccharomyces cervisiae) 또는 피치아 파스토리스(Pichia pastoris), 또는 사상 진균, 예컨대 아스페르길루스 니둘란스(Aspergillus nidulans)에 대해 개조된 것들 내로 도입될 수 있다. 박테리아, 효모, 또는 진균이 연속 배양으로 성장될 수 있다. 그후, 배양 동안 생산된 폴리펩티드를 단리 및 정제할 수 있다. 별법적으로, 핵산 분자는 폭스바이러스과 (예를 들어, 계두계 벡터), 헤르페스바이러스과 (예를 들어, 가성광견병 바이러스계 벡터, 칠면조 헤르페스 바이러스계 벡터, 고양이 헤르페스 바이러스계 벡터, 감염성 후두기관염 바이러스계 벡터, 및 소 헤르페스 바이러스계 벡터), 아데노바이러스과 (예를 들어, 소 아데노바이러스 (예를 들어, 혈청형 3), 인간 아데노바이러스 (예를 들어, 혈청형 4 또는 7), 및 개 아데노바이러스 (예를 들어, 혈청형 2; CAV2; 예를 들어, 미국 특허 6,090,393 참조), 또는 곤충 스포돕테라 프루기페르다(Spodotera frugiperda)로부터 유래된 감수성의 배양된 SF9 세포를 감염시키는데 사용될 수 있는 곤충 바이러스 발현 벡터, 예컨대 재조합 배큘로바이러스 (예를 들어, 오토그라파 캘리포니카(Autographa californica) 핵 다면체 바이러스 (AcNPV)) 내로 도입될 수 있다. 기타 바이러스 벡터에는 우두 (예를 들어, 미국 특허 4,722,848 참조), 아데노바이러스, 아데노-유사 바이러스, 아데노-관련 바이러스, 레트로바이러스, 및 천연두 (예를 들어, [Hruby, Vet. Parasitol. 29: 281-282 (1988)]; [Uiu, "AIDS Research Reviews," Dekker, Inc., 1991, 1: 403-416] 참조)가 포함되고, 이는 피부 스크래치에 의해 또는 주사에 의해, 임의로 리포좀성 제형으로서, 투여될 수 있다. 기타 벡터에는 칼메트 게랑 간균 (Bacille-Calmette-Guerin: BCG; [Stover et al., Nature 351: 456-460 (1991)]), 해독된 탄저병 독소 벡터 등이 포함된다. 포유류 세포, 예컨대 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 및 심지어 식물 세포를 적절한 구축물로부터 폴리펩티드를 발현하는데 사용할 수 있다. 당업자는 숙주 세포의 선택이 번역후 프로세싱 (예를 들어, 글리코실화, 폴딩(folding) 등)에 영향을 미칠 것이고, 차례로 이는 폴리펩티드의 면역원성, 및 후속 정제 기술에 영향을 미칠 수 있다는 것을 이해할 것이다.
발현은 발현 벡터로 형질전환/형질감염된 임의의 적절한 숙주 세포에서 달성될 수 있다. 적절한 숙주 세포의 예로는 상기 기술된 것들이 포함되지만, 이에 한정되지 않는다. 따라서, 본 발명은 발현 벡터로 형질전환/형질감염된 숙주 세포를 또한 제공한다.
단백질 또는 이의 단편을 배양 배지 내로 분비하는 숙주/벡터 시스템으로부터의 상청액을 정제 매트릭스, 예컨대 친화력 컬럼 또는 이온 교환 컬럼에 적용할 수 있다. 1회 이상의 역상 HPLC 단계를 사용하여 재조합 단백질 또는 이의 단편을 추가로 정제할 수 있다.
융합 단백질로서의 단백질 또는 이의 단편의 생산이 생산을 안정화시킬 수 있다. 이는 2개 이상의 단백질 (또는 이의 단편)을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 펩티드성 링커와 함께 또는 링커 없이 적절한 발현 벡터 내로 결찰시킴으로써 달성될 수 있다. 바람직하게는, 폴리뉴클레오티드 서열의 리딩 프레임들이 위상이 같아서, 각각의 단백질 (또는 이의 단편)의 생물학적 활성이 유지된 단일 융합 단백질이 생산된다. 아미노산 1개 내지 약 50개의 펩티드성 링커를 사용하여, 생성된 단백질 (또는 이의 단편)을 각각의 단백질 (또는 이의 단편)이 이의 천연 2차, 3차 및 4차 구조로 정확하게 폴딩되는 것을 확실히 하도록 분리시킬 수 있다 (예를 들어, [Maratea et al, Gene 49: 39-46 (1985)]; [Murphy et al., PNAS USA 83: 8258-8262 (1986)]; 미국 특허 4,935,233; 및 미국 특허 4,751,180 참조). 가요성의 신장된 입체구조를 채택하는 능력, 단백질들 중 하나 또는 양쪽 모두 상의 기능성 아미노산과 상호작용할 수 있는 2차 구조를 채택할 수 없음, 및 단백질들 중 하나 또는 양쪽 모두와 반응할 수 있는 소수성 또는 전하를 띤 아미노산의 결여가 펩티드 링커를 선택하는데 있어서 고려되는 인자들이다. 연결될 단백질들의 종결부가 필수 영역을 포함하지 않는 경우에는 링커가 필요하지 않아서, 종결부가 기능성 도메인들을 분리시키고 입체적인 방해를 방지하는데 사용될 수 있다. 바람직한 펩티드 링커 서열은 Gly, Asn, 및 Ser 잔기를 함유한다. 거의 중성인 기타 잔기, 예컨대 Thr 및 Ala가 또한 사용될 수 있다.
단백질 또는 이의 단편의 발현 및/또는 면역원성을 증강시키도록 기타 추가적인 아미노산 서열(들)을 선택할 수 있다. 예를 들어, 단백질 또는 이의 단편이 면역글로불린 G (IgG)의 중쇄 또는 항원-제시 세포 (APC) 결합 단백질 또는 수지상 세포 결합 단백질, 예컨대 IL-D, GM-CSF, IL-1, TNF, IL-4, CD40L, CTLA4, CD28, 또는 FLT-3 리간드에 융합될 수 있다. 탈수제, 예를 들어, 디시클로헥실카르보디이미드 (DCCI)의 사용, 또는 술프히드릴 기, 엡실론 아미노 기, 카르복실 기 등 간의 결합의 생성과 같은 기술을 사용할 수 있다. 원한다면, 절단 부위를 융합 단백질 내로 도입하여, 비-천연 발생 서열(들)로부터의 단백질 (또는 이의 단편)의 분리를 가능하게 할 수 있다. 절단 부위의 예로는 단백질분해성 효소에 대한 표적 서열, 또는 메티오닌이 단백질 (또는 이의 단편) 내에 존재하지 않는 경우 메티오닌이 포함되고, 메티오닌은 브롬화 시아노겐에 의해 절단된다. 이같은 방법은 당업계에 공지되어 있다. 단백질 또는 이의 단편은 또한 당업계에 공지된 방법에 따라 글리코실화 또는 기타 유도체화 (예를 들어, 아세틸화 또는 카르복실화)에 의해 변형될 수 있다.
단백질 (또는 이의 단편)은 적절한 발현 시스템으로부터 원위치에서(in situ) 발현될 수 있다. 원하는 환경에서 코딩된 단백질 또는 이의 단편을 생산하는데 효과적인 임의의 DNA 구축물을 사용하여 상기 기술된 바와 같은 단백질 또는 이의 단편을 발현시킬 수 있다.
별법적으로, 핵산 분자는 "네이키드(naked) DNA"로서 동물 내로 주사되었을 때 원위치에서 효과적인 발현 시스템으로 행동할 수 있다 (예를 들어, [Ulmer et al., Science 259: 1745-1749 (1993)]; 및 [Cohen, Science 259: 1691-1692 (1993)] 참조). 부피비카인, 중합체, 및 펩티드의 사용을 통해 DNA 전달이 또한 촉진될 수 있다; 별법적으로, 양이온성 지질 복합체, 입자, 또는 압력 (예를 들어, 미국 특허 5,922,687 참조)이 사용될 수 있다.
서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 또는 16과 적어도 약 95％로 또는 이를 초과하여 동일한, 예컨대 적어도 약 96％, 97％, 98％, 또는 99％로 또는 이를 초과하여 동일한 아미노산 서열의 예로는 1개 이상의 치환, 삽입, 부가 및/또는 결실을 함유하는 아미노산 서열이 포함된다. 서열 동일성은 폴리펩티드 서열들을 정렬하고, 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 알고리즘, 예컨대 BLASTP ([Pearson et al., PNAS USA 85: 2444-2448 (1988)]; [Pearson, Methods Enzymol. 183: 63-98 (1990)]; 및 [Altschul et al., Nucl. Acids Res. 25: 3389-3402 (1997)])을 적용함으로써 결정될 수 있다. BLASTP용 소프트웨어는 <National Center for Biotechnology Information (NCBI)>의 FTP 서버 또는 NCBI (National Library of Medicine, Building 38A, Room 8N8O5, Bethesda, MD 20894)로부터 입수가능하다. 일단 폴리펩티드 서열들이 정렬되면, 정렬된 부분들 상의 동일한 아미노산의 개수를 확인하고, 동일한 아미노산의 개수를 당해 폴리펩티드의 아미노산의 전체 개수로 나누고, 결과에 100을 곱하여, 백분율 서열 동일성을 결정한다.
이와 관련하여, 당업자는 주어진 아미노산 서열의 단편이 적어도 약 95％로 또는 이를 초과하여, 예컨대 적어도 약 96％, 97％, 98％, 또는 99％로 또는 이를 초과하여 아미노산 서열과 동일할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 단편은 "서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 또는 16과 적어도 약 95％ (또는 96％, 97％, 98％ 또는 99％)로 또는 이를 초과하여 동일한 아미노산 서열"에 포함되도록 의도된다. 바람직하게는 이같은 단편은 전장 단백질의 면역원성을 유지한다. 기능성 단편은 단백질을 코딩하는 핵산의 돌연변이 분석 및 생성된 돌연변이 단백질의 후속 발현에 의해 또는 단백질 자체의 화학적/효소적 소화에 의해 생성될 수 있다.
변형, 예컨대 치환, 삽입, 부가 및/또는 결실이 당업계에 공지된 방법에 따라 핵산 또는 단백질 (또는 이의 단편) 내로 도입될 수 있다 (예를 들어, 올리고뉴클레오티드-지정 부위-특이적 돌연변이유발에 대해, [Adelman et al., DNA 2: 183 (1983)] 참조). 바람직하게는, 변형은 단백질 단편의 면역원성을 실질적으로 감소시키지 않는다; 그보다는, 변형되지 않은 단백질과 비교하여 면역원성이 실질적으로 동일하게 유지되거나 증가하는 것이 바람직하다.
"보존성 치환"은 아미노산이 유사한 성질, 즉 유사한 2차 구조 및 수치법 성질을 갖는 또다른 아미노산으로 치환되는 것이다. 아미노산 치환은 잔기의 극성, 전하, 용해도, 소수성, 친수성 및/또는 양친매성 성질을 기초로 이루어질 수 있다. 예를 들어, 음성 전하를 띠는 아미노산들, 예컨대 아스파르트산 및 글루탐산이 상호교환될 수 있는 반면, 양성 전하를 띠는 아미노산들, 예컨대 라이신 및 아르기닌이 상호교환될 수 있고, 유사한 친수성 값을 갖는, 전하를 띠지 않는 극성 머리 기를 갖는 아미노산들이 상호교환될 수 있다. 이와 관련하여, 류신, 이소류신, 및 발린이 상호교환될 수 있고, 글리신 및 알라닌이 상호교환될 수 있으며, 아스파라긴 및 글루타민이 상호교환될 수 있고, 세린, 트레오닌, 페닐알라닌 및 타이로신이 상호교환될 수 있다. 상호교환될 수 있는 아미노산의 또다른 기에는 하기의 것들이 포함된다: (1) ala, pro, gly, glu, asp, gln, asn, ser 및 thr; (2) cys, ser, tyr 및 thr; (3) val, ile, leu, met, ala 및 phe; (4) lys, arg 및 his; 및 (5) phe, tyr, trp, 및 his.
상기를 고려하여, 단리 또는 정제된 단백질/핵산 또는 상기의 것들 중 어느 하나의 단편, 및 생물학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 핵산 또는 이의 단편은 벡터의 일부분일 수 있다. 예를 들어, 활성 성분으로서 NM을 포함하는 인플루엔자 백신에 대한 미국 특허 4,029,763, 및 활성 성분으로서 HA 및 NM을 포함하는 인플루엔자 백신에 대한 미국 특허 4,140,762 참조. 미국 특허 4,826,687에는 HA 및 NM을 포함하는 백신에 대한 무라밀 디펩티드의 첨가가 기술되어 있다. 원한다면, M1의 아미노산 148-162, 163-166, 및/또는 215-239에 실질적으로 상응하는 폴리펩티드를 단백질/핵산 또는 이의 단편의 조성물에 첨가할 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 5,136,019; 5,616,327; 및 5,741,493 참조). 임의의 적절한 생물학적으로 허용가능한 담체를 조성물에서 사용할 수 있다. 예를 들어, 단백질(들)/핵산(들)/이의 단편을 희석제, 예를 들어, 0.9％ 염화나트륨 용액에 재현탁시킬 수 있고, 이는 임의로 포스페이트 완충제로 예를 들어 완충될 수 있다. 바이러스의 정제로부터 잔존하는 임의의 수크로스를 투석에 의해 감소시킬 수 있다. 투석 또는 젤 크로마토그래피를 사용하여 임의의 잔존하는 양이온성 세제를 제거할 수 있다. 바람직하게는, 단백질 또는 이의 단편은 동물에서 면역 응답 (즉, 세포성 또는 체액성)을 유도하는데 충분한 양으로 존재한다. 제약 및 항원에 대해 빈번하게 선택되는 담체는 폴리(d,l-락티드-코=글리콜리드) (PLGA)이다. PLGA는 생분해성 폴리에스테르이고, 항원의 제어 방출에 사용될 수 있다 ([Eldridge et al., Curr. Topics Micro. Immuno. 146: 59-66 (1989)]; 미국 특허 6,090,393을 또한 참조). 직경 1-10 μ의 PLGA 미세구체 내의 항원의 포획은 경구 투여될 때 현저한 보조 효과를 갖는 것으로 나타났다.
원한다면, 방부제 또는 불활성화제, 예컨대 포름알데히드를 첨가할 수 있다. 방부제/불활성화제의 통상적인 양은 10,000부 당 1부이다.
원한다면, 1가지 이상의 단백질 (또는 이의 면역원성 단편), 예컨대 상기 기술된 HA가 프로테오솜과 조합될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 6,743,900 및 미국 특허 출원 공개 2004/0156867 참조.
통상적인 면역학적 보강제, 예컨대 수산화알루미늄 (예를 들어, 약 0.2％) 또는 인산알루미늄, 알루미늄 (예를 들어, 미국 특허 6,372,223, 6,635,246, 6,861,244 및 7,052,701 및 미국 특허 출원 공개 2004/0096464 및 2006/0147468 참조), 키토산 (예를 들어, 미국 특허 6,136,606 및 6,534,065 참조), 백반, 예컨대 수산화알루미늄, 인산알루미늄 또는 산화알루미늄 형태의 백반, 미네랄 오일 (예를 들어, Bayol F® 및 Marcol 52®), 프로인트 완전 보강제, 프로인트 불완전 보강제, 무라밀 디펩티드, 모노포스포릴 지질 A, 및 사포닌 (Quil A 성분 포함)을 포함함으로써 면역원성이 개선될 수 있다. 또한, 사이토카인, 예컨대 인터류킨을 첨가함으로써, 또는 단백질 또는 이의 단편을 접합시킴으로써 면역원성이 개선될 수 있다. 바람직하게는, 단백질 또는 이의 단편은 거대분자성 담체, 예컨대 단백질 (예를 들어, 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린, 갑상선글로불린, 및오브알부민), 다당류 (예를 들어, 라텍스-기능화 세파로스, 아가로스, 셀룰로스 비드 등), 인지질, 중합체성 아미노산 (예를 들어, 폴리글루탐산, 폴리라이신 등), 또는 아미노산 공중합체 (예를 들어, 미국 특허 5,136,019 및 5,612,037 참조)와 접합된다. 별법적으로, 단백질 또는 이의 단편은 프로테오리포솜 또는 지질 소포로 캡슐화될 수 있다.
면역 응답을 유도할 수 있는 조성물은 현탁액의 형태로 제조될 수 있거나, 또는 동결건조될 수 있다. 동결건조되는 경우, 1가지 이상의 안정화제를 첨가하는 것이 바람직하다. 적절한 안정화제는, 예를 들어, 수크로스, 포스페이트, 글루타메이트, 및 알부민 (SPGA; [Bovarnick, J. Bacterid. 59: 509 (1950)]), 탄수화물 (예를 들어, 소르비톨, 만니톨, 전분, 덱스트란, 및 글루코스), 단백질 (예를 들어, 알부민 및 카세인) 또는 이의 분해 생성물, 단백질-함유 작용제 (예를 들어, 소 혈청 또는 탈지유), 및 완충제 (예를 들어, 알칼리 금속 포스페이트)이다.
별법적으로, 조성물은 제어-방출 조성물로 제형될 수 있다. 약화/불활성화된 바이러스 또는 재조합 벡터가 중합체, 예컨대 폴리카르보네이트, 폴리에스테르, 폴리우레탄, 폴리오르토에스테르, 및 폴리아미드로 마이크로캡슐화될 수 있다. 선택된 특정 중합체는 중합체 합성 및 마이크로캡슐화의 재현성, 재료 및 공정 비용, 독물학적 프로파일, 다양한 방출 키네틱에 대한 필요성, 및 중합체 및 바이러스/벡터의 물리화학적 혼화성이 포함되는 다수의 인자에 의존적이다.
본원에 기술된 조성물은 단독으로 또는 다른 활성 성분/조성물과 조합되어 사용될 수 있다. 예로는 개 디스템퍼, 감염성 개 간염 (CAV-1 및 CAV-2), 광견병, 파라인플루엔자, 개 코로나 바이러스, 홍역, 렙토스피라병, 및 보르데텔라에 대한 면역 응답을 유도할 수 있는 조성물이 포함된다. 폴리페놀이 인간에서 인플루엔자 감염을 억제하는 것으로 기술되었다 (예를 들어, 미국 특허 5,173,922; '922 특허 참조). 따라서, 폴리페놀, 예컨대 에피갈로카테친 갈레이트, 에피카테친 갈레이트, 에피갈로카테친, 에피카테친, 유리 테아플라빈, 테아플라빈 모노갈레이트 A, 테아플라빈 모노갈레이트 B, 및/또는 테아플라빈 디갈레이트의 첨가가 이로울 수 있다 ('922 특허 참조). NM의 억제제가 미국 특허 5,453,533에 개시되어 있다. 면역강화제로서의 사이토카인의 용도 및 리포솜 캡슐화가 미국 특허 5,919,480에 기술되어 있다.
조성물 내의 핵산의 양은 광범위하게 변할 수 있다. 예를 들어, 농도는 약 0.1 중량％ 미만 내지 약 20-50 중량％ 이상 범위일 수 있고, 일반적으로 적어도 약 2％이다. 조성물 내의 단백질의 농도 또한 광범위하게 변할 수 있다. 예를 들어, 농도는 약 0.1 중량％ 미만 내지 약 20-50 중량％ 이상 범위일 수 있고, 일반적으로 적어도 약 2％이다. 최종 농도를 결정할 때 유체 부피 및 점도가 고려된다.
따라서, 동물에서 개 인플루엔자 바이러스에 대한 면역 응답을 유도하는 방법이 또한 제공된다. 감염에 대한 동물의 감수성은 플라크 감소 중화 테스트 (미국 특허 4,315,073) 또는 적혈구응집 테스트를 사용하여 평가할 수 있다. 방법은 동물에게 단리 또는 정제된 단백질/핵산 또는 이의 단편을 포함하는 상기 기술된 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 조성물이 벡터의 일부분으로서의 핵산 (또는 이의 단편)을 포함하는 경우, 바람직하게는 단백질 (또는 이의 단편)은 동물에서 면역 응답을 유도하는데 충분한 양으로 발현된다. 예를 들어, 동물 체중 1 ㎏ 당 약 9 내지 약 43 인터내셔널 유닛의 단일 용량이 투여될 수 있다. 더 큰 포유동물에 대해서, 단일 용량은 체중 1 ㎏ 당 약 600 내지 약 3,000 인터내셔널 유닛을 포함할 수 있다. 바이러스를 수정란의 요막 공간에서 배양하고, 바이러스를 수확하고, 원한다면, 수확된 바이러스를 안정화제, 예컨대 펩톤 또는 수크로스로 안정화시킨 후, 후속 동결-건조를 위해 유리 바이알 내로 분배시킴으로써 제조된 백신 조성물에 대해, 효과적인 백신 투여량 단위는 적어도 107 EID50 (50％ 알-감염성 용량)의 바이러스를 함유할 수 있다. 후자의 경우, 동결 건조된 백신은 예컨대 비강 스프레이 또는 점비제 형태로의 투여 전에 물 또는 또다른 제약상 허용가능한 희석제의 첨가에 의해 재구성된다. 원한다면, 백신을 1주일 간격으로 2회의 연속적인 투여량으로 투여할 수 있다.
조성물은 12주령의 강아지에게 단일 용량으로, 또는 6주령에 시작하여 반복적으로 (예를 들어, 6주, 9주 및 12주에), 또는 4주부터 매주 투여될 수 있다. 효과적인 투여량 및 투여 경로는 조성물의 성질, 발현 생성물의 성질, LD50, 및 재조합 벡터가 사용되는 경우 벡터의 발현 수준, 뿐만 아니라 개의 품종 및 이의 연령, 성별, 체중 및 상태에 의해 결정된다. 발현된 생성물의 투여량은 수 마이크로그램 내지 수백 마이크로그램, 예를 들어, 5-500 ㎍ 범위일 수 있다. 바이러스 또는 재조합 벡터의 바람직한 투여량은 약 103 내지 약 106 pfu 범위일 수 있다. 약화된 생균주에 대한 용량은 적어도 약 103 TCID50일 수 있다.
조성물은 비경구적으로 (주사 (예를 들어, 피내, 피하 또는 근육내)에 의해 또는 감염 경로에 의해, 예컨대 비강내로), 또는 장으로 (경구 투여에 의해) 투여될 수 있다. 피내 투여된 면역원성 조성물에 대한 면역 응답을 증강시키기 위한 젤화제 및 점액- 또는 바이오-접착제의 사용이 미국 특허 출원 공개 2005/0255121에 기술되어 있다. 원한다면, 면역 응답을 유도하기 위한 조성물은 미국 특허 출원 공개 2006/0171960 (Chu et al., 2006년 8월 3일 공개됨)에 따라 식수 또는 시럽을 통해 투여될 수 있다. 경구 투여가 유리한데, 시간 소비적이고 노동 집약적이며, 차례로 동물에게 스트레스 및 불쾌감을 일으킬 수 있는 근육내 주사가 방지되기 때문이다. 불쾌감은 차례로 경주견의 성적에 영향을 미칠 수 있다. 별법적으로, 1가지 이상의 면역 응답-유도 에피토프를 발현하는 재조합 벡터를 포함하는 조성물은 국소화된 발현 및 면역 응답의 유도를 위해 피부에 직접 적용될 수 있다.
면역 응답을 유도할 수 있는 조성물의 효능은 강아지를 개 인플루엔자 바이러스의 독성이 있는 균주에 노출시킴으로써 증명될 수 있다. 처리되지 않은 개에서는 개 인플루엔자 바이러스 감염의 임상 징후 특징이 전개되어야 하는 반면, 처리된 개에서는 전개되지 않아야 한다.
재조합 벡터 및 이로부터 발현된 생성물을 사용하여 당업계에 공지된 방법에 따라 항체, 예컨대 폴리클로날(polyclonal) 항체 (pAb) 및 모노클로날(monoclonal) 항체 (mAb)를 생산할 수 있다 ([Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1988)]; [Harlow and Lane, Using Antibodies: A Laboratory Manual (1998), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998)]; [Shepherd and Dean, Monoclonal Antibodies: A Practical Approach, Oxford University Press, U.S.A. (2000)]; 및 [Harris and Adair, Antibody Therapeutics, CRC Press, Inc., Boca Raton, FL (1997)]). 항체, 특히 mAb는 개 인플루엔자 바이러스의 항원의 존재/부재 또는 바이러스에 대한 면역 응답이 자극되었는지 여부를 결정하기 위한 결합 분석법 및 진단 키트/테스트에서 사용될 수 있다. 또한 항체는 면역-흡착 크로마토그래피에 의해 물질을 회수하는데 사용될 수 있다.
항체는 수동 면역화를 또한 제공할 수 있다. 예를 들어, 숙주 동물 또는 하이브리도마 세포주로부터의 부분적으로 정제된 면역 혈청을 동물 내로 주사할 수 있다. 항체는 감염성 인플루엔자 바이러스에 결합하여 이를 중화시킴으로써 치료 효과를 제공한다.
상기 기술된 단백질, 예컨대 서열 1 또는 서열 3의 아미노산 서열로 구성된 단백질의 에피토프의 내부 이미지를 갖는 항-이디오타입(idiotype) 항체를 포함하는 조성물이 또한 제공된다.
당업자는 에피토프, 예컨대 본원에 기술된 것들의 내부 이미지를 지니는 항-이디오타입 항체가 제조될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 예를 들어, [Herlyn et al., Science 232: 100-102 (1986)] 참조. 폴리펩티드의 내부 이미지를 지니는 모노클로날 및 폴리클로날 항-이디오타입 항체의 제조 방법은, 예를 들어, 미국 특허 5,053,224에 기술되어 있다. 간략하게, 동물을 폴리펩티드에 대해 생성되어 폴리펩티드와의 반응성에 대해 스크리닝된 모노클로날 이디오타입 항체로 면역화시키고, 폴리펩티드에 대한 이디오타입 항체와 반응하는 항혈청을 스크리닝함으로써 폴리클로날 항-이디오타입 항체를 제조할 있다. 동물의 항체-분비 세포를 불멸화시키고 폴리펩티드와의 경쟁에서 이디오타입 항체로 배양물을 스크리닝하는 표준 기술을 사용하여 이같은 동물로부터 모노클로날 항체 (mAb)를 또한 제조할 수 있다. mAb가 바람직하지만, 다양한 포유류 시스템에서 제조되는 폴리클로날 항체 (pAb)를 또한 사용할 수 있다.
개에서 CIV에 대한 면역 응답을 유도하는 또다른 방법이 또한 제공된다. 이러한 방법은 상기 기술된 바와 같은 항-이디오타입 항체를 포함하는 조성물을 유효량으로 개에게 투여하는 것을 포함한다.
단리 또는 정제된 핵산 분자 또는 이를 포함하는 벡터를 사용하여 프로브/프라이머에 대한 DNA를 생성시킬 수 있고, 이를 사용하여 혼성화가능한 DNA의 존재 또는 부재를 검출할 수 있거나, 또는 DNA, 예컨대 cDNA를 증폭시킬 수 있다.
표지된 단백질 또는 이의 단편, 뿐만 아니라 표지된 핵산 또는 이의 단편을 분석법에서 사용할 수 있다. 분석 방법에는 형광면역분석법 ([Smith et al., Ann. Clin. Biochem. 18: 253-275 (1981)]), 방사선면역분석법 (RIA), 효소-결합 면역흡착 분석법 (ELISA), 및 효소-증식 면역분석법 기술 (EMIT; [Enzyme Immunoassay, Maggio, ed., CRC Press, Inc., Boca Raton, FL, 1980. pp. 141-150; 234-235, and 242-243] 참조)이 포함된다. 바이러스의 존재를 검출하고 감염 상태를 진단하는데 이같은 방법을 사용할 수 있다.
바이러스 자체가 벡터로 사용될 수 있다. 벡터로서의 바이러스의 사용은 당업계의 기술 내에 속한다.
하기의 실시예는 본 발명을 설명하는데 도움이 된다. 실시예는 어떠한 방식으로도 본 발명의 범주를 한정하도록 의도되지 않는다. 실시예는 개 인플루엔자 바이러스의 확인 및 부분적인 특징화를 기술한다.
기침, 발열, 빈 호흡, 및 출혈성 콧물을 특징으로 하는 급성 호흡기 질환의 발병이 2005년 4월에 동부 및 서부 아이오와에 위치한 2곳의 경주장 수용소 내의 그레이하운드들 사이에서 발생하였다. 감염된 개들 중 많은 백분율이 회복된 반면, 다수는 출혈성 폐렴으로 쓰러졌다.
감염된 개들의 폐는 중간 정도로 내지 두드러지게 촉진가능하게 단단하고 가벼운 섬유소성 흉막염이 있으면서 광범위한 적색 내지 적색-흑색 착색을 나타냈다. 폐 절편은 중증 출혈성의 간질성 내지 기관지간질성 폐렴을 특징으로 하였다. 폐포 중격 비대, 폐포 내의 잔해물의 응괴, 및 관련된 무기폐(無氣肺)와 함께 반점형 간질성 변화가 명백하였다. 퇴화된 세포 및 잔해물에 의한 기도의 확장과 함께 국소적으로 광범위한 화농육아종성 기관지간질성 폐렴이 관찰되었다. 산발적인 혈관염 및 혈관 혈전이 명백하였다.
통상적인 바이러스 및 박테리아 작용제에 대한 미생물학적인 테스트에서 스트렙토코쿠스 에쿠이(Streptococcus equi) 아종 주에피데미쿠스(zooepidemicus)를 제외한 어떠한 유의한 병원체도 나타나지 않았고, 이는 시험된 모든 동물로부터의 폐 조직에 존재하였다. 4개의 폐 샘플 중 2개가 실시간 역전사효소-중합효소 연쇄 반응 (RT-PCR)을 사용하여 인플루엔자 바이러스에 대해 양성으로 테스트되었다 ([Harmon et al., Development of a PCR-based differential test for H1N1 and H3N2 swine influenza viruses. In: Proceedings of the 42nd Annual Meeting of American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians. San Diego, CA. October 1999. p. 44]). 인플루엔자 바이러스의 NP에 특이적인 모노클로날 항체 (mAb)를 사용하는 면역조직화학 ([Vincent et al., J. Vet. Diagn. Invest. 9: 191-195 (1997)])이 양쪽 폐의 바이러스성 폐렴 병변 내에서 또한 양성이었고, 샘플에 대한 항원-포획 ELISA (Directgen™ Flu A, Becton/Dickinson, Sparks, MD) 테스트에서도 양성이었다. 2개의 양성 폐로부터의 기관지폐포 세척 샘플이 PCR에 의해 인플루엔자 바이러스에 대해 양성으로 테스트되었다.
개에서의 인플루엔자 바이러스 감염이 오직 1회만 보고되었기 때문에 ([Dubovi et al., Isolation of equine influenza virus from racing greyhounds with fatal hemorrhagic pneumonia. In: Proceedings of the 47th Annual Meeting of American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians. Greensboro, NC. October 2004. p. 158]), 개 폐에서의 인플루엔자 바이러스의 검출이 예기치 않은 관찰이었으므로 바이러스 단리를 시도하였다. 수탉 적혈구를 응집시킬 수 있는 바이러스가 면역조직화학적 (IHC) 분석법 및 PCR에 의해 인플루엔자 바이러스가 검출된 2마리의 동물 중 한마리의 폐 및 기관지폐포 세척액으로부터의 매딘-다비(Madin-Darby) 개 신장 (MDCK) 세포에서 단리되었다. 단리물은 PCR에 의해 H3 서브타입의 인플루엔자 바이러스인 것으로 결정되었다. HA-억제 및 NM-억제 분석법을 사용하여 바이러스 단리물의 서브타입이 H3N8로 정해졌다. 바이러스 단리물 은 마이애미(Miami) ((A/Eq/MI/1/63-H3N8) 640-1280), AK ((A/Eq/AK/29759/91-H3N8) 320-640), 및 켄터키(Kentucky) ((A/Eq/Kentucky/81-H3N8) 160-320)이 포함되는 다양한 H3 말 인플루엔자 바이러스에 대해 생성된 항혈청에 의해 인식되었다.
양쪽 단리물의 HA 및 NA 유전자의 서열분석은 2개의 단리물 간에 각각 100％ 및 99.8％ 동일성을 나타냈다. 계통발생적으로, 단리물의 HA 유전자는 최근의 H3N8 말 인플루엔자 바이러스의 HA 유전자에 유전학적으로 가까웠다 (96-98％ 뉴클레오티드 상동성) ([Macken et al., The value of a database in surveillance and vaccine selection. In: Options for the Control of Influenza IV. Osterhaus et al., eds. Elsevier Science, Amsterdam. 2001. pp. 103-106]). 단리물의 NA 유전자 또한 최근의 H3N8 말 인플루엔자 바이러스의 NA 유전자와 96-98％ 상동성을 나타냈다. 아이오와 내에서 지리적으로 멀리 떨어진 2곳의 상이한 경주장의 그레이하운드가 병든 말이 수반되지 않으면서 동시에 질환으로 쓰러졌기 때문에, 인플루엔자 바이러스 단리물이 개에서 영속될 수 있고 퍼질 수 있는, 개에 대해 개조된 균주라는 것을 가리킨다. 다수의 상이한 동물 종에서의 호흡기 질환 및 패혈증-관련 문제점에 연루된 스트렙토코쿠스 주에피데미쿠스 ([Wood et al., J. Clin. Microbiol. 43: 120-126 (2005)]; 및 [Gillespie et al., The General Staphylococcus and Streptococcus. In: Hagan and Bruner's Infectious Diseases of Domestic Animals. 7th ed. Comstock/Cornell University Press. Ithaca, NY. 1981. pp. 164-180])가 아마도 질환의 중증도에 기여했을 것이다.
본원에서 인용된, 간행물, 특허 출원 및 특허를 포함하는 모든 참조문헌은 각각의 참조문헌이 거명에 의해 포함되는 것으로 개별적으로 및 명확하게 지시되고 전체적으로 본원에 기재된 것과 동일한 정도로 거명에 의해 본원에 포함된다.
본 발명을 기술하는 상황 (특히 하기의 청구항의 상황)에서 정관사, 부정관사 및 유사한 지시대상의 사용은 본원에서 달리 지시되거나 문맥적으로 명백하게 모순되지 않는 한 단수 및 복수 모두를 포함하는 것으로 해석된다. 본원에서의 값의 범위의 상술은, 본원에서 달리 지시되지 않는 한, 단지 범위 내에 속하는 각각의 따로따로의 값을 개별적으로 지칭하는 것의 속기(速記) 방법으로 알맞도록 의도되고, 각각의 따로따로의 값은 본원에서 개별적으로 상술된 것처럼 명세서 내로 포함된다. 본원에서 기술된 모든 방법은 본원에서 달리 지시되거나 문맥적으로 명백하게 모순되지 않는 한 임의의 적절한 순서로 수행될 수 있다. 본원에서 제공된 임의의, 그리고 모든 예, 또는 대표적인 언어 (예를 들어, "예컨대")의 사용은 단지 본 발명을 더욱 잘 명확하게 하도록 의도되고, 달리 청구되지 않는 한 본 발명의 범주에 제한을 두지 않는다. 명세서 내의 언어는 임의의 청구되지 않은 요소를 본 발명의 실행에 필수적인 것으로 가리키는 것으로 해석되지 않아야 한다.
본 발명을 수행하기 위해 발명가들에게 공지된 최상의 방식을 포함하여 본 발명의 바람직한 실시양태가 본원에 기술된다. 설명된 실시양태들은 단지 대표적인 것이고, 본 발명의 범주를 제한하는 것으로 간주되지 않아야 한다는 것을 이해하여야 한다.
SEQUENCE LISTING <110> Yoon, Kyoung-Jin Cooper, Vickie <120> CANINE INFLUENZA VIRUS AND RELATED COMPOSITIONS AND METHODS OF USE <130> 42885-104200 <150> 60/727,808 <151> 2005-10-18 <150> 11/539,123 <151> 2006-10-05 <160> 16 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 1450 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (9)..(1418) <400> 1 agtttaaa atg aat cca aat caa aag ata ata gca att gga ttt gca tca 50 Met Asn Pro Asn Gln Lys Ile Ile Ala Ile Gly Phe Ala Ser 1 5 10 ttg ggg ata tta atc att aat gtc att ctc cat gta gtc agc att ata 98 Leu Gly Ile Leu Ile Ile Asn Val Ile Leu His Val Val Ser Ile Ile 15 20 25 30 gta aca gta ctg gtc ctc aat aac aat aga aca gat ctg aac tgc aaa 146 Val Thr Val Leu Val Leu Asn Asn Asn Arg Thr Asp Leu Asn Cys Lys 35 40 45 ggg acg atc ata aga gaa tac aat gaa aca gta aga gta gaa aaa ctt 194 Gly Thr Ile Ile Arg Glu Tyr Asn Glu Thr Val Arg Val Glu Lys Leu 50 55 60 act caa tgg tat aat acc agt aca att aag tac ata gag aga cct tca 242 Thr Gln Trp Tyr Asn Thr Ser 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Glu Cys Ser Cys Tyr Pro Asn Glu Gly Lys Val Glu Cys 275 280 285 Ile Cys Arg Asp Asn Trp Thr Gly Thr Asn Arg Pro Ile Leu Val Ile 290 295 300 Ser Ser Asp Leu Ser Tyr Thr Val Gly Tyr Leu Cys Ala Gly Ile Pro 305 310 315 320 Thr Asp Thr Pro Arg Gly Glu Asp Ser Gln Phe Thr Gly Ser Cys Thr 325 330 335 Ser Pro Leu Gly Asn Lys Gly Tyr Gly Val Lys Gly Phe Gly Phe Arg 340 345 350 Gln Gly Thr Asp Val Trp Ala Gly Arg Thr Ile Ser Arg Thr Ser Arg 355 360 365 Ser Gly Phe Glu Ile Ile Lys Ile Arg Asn Gly Trp Thr Gln Asn Ser 370 375 380 Lys Asp Gln Ile Arg Arg Gln Val Ile Ile Asp Asp Pro Asn Trp Ser 385 390 395 400 Gly Tyr Ser Gly Ser Phe Thr Leu Pro Val Glu Leu Thr Lys Lys Gly 405 410 415 Cys Leu Val Pro Cys Phe Trp Val Glu Met Ile Arg Gly Lys Pro Glu 420 425 430 Glu Thr Thr Ile Trp Thr Ser Ser Ser Ser Ile Val Met Cys Gly Val 435 440 445 Asp His Lys Ile Ala Ser Trp Ser Trp His Asp Gly Ala Ile Leu Pro 450 455 460 Phe Asp Ile Asp Lys Met 465 470 <210> 3 <211> 1762 <212> DNA <213> Influenza A Virus <220> <221> CDS <222> (30)..(1724) <400> 3 agcaaaagca ggggatattt ctgtcaatc atg aag aca acc att att tta ata 53 Met Lys Thr Thr Ile Ile Leu Ile 1 5 cta ctg acc cat tgg gcc tac agt caa aac cca atc agt ggc aat aac 101 Leu Leu Thr His Trp Ala Tyr Ser Gln Asn Pro Ile Ser Gly Asn Asn 10 15 20 aca gcc aca ctg tgt ctg gga cac cat gca gta gca aat gga aca ttg 149 Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly His His Ala Val Ala Asn Gly Thr Leu 25 30 35 40 gta aaa aca atg agt gat gat caa att gag gtg aca aat gct aca gaa 197 Val Lys Thr Met Ser Asp Asp Gln Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu 45 50 55 tta gtt cag agc att tca atg ggg aaa ata tgc aac aaa tca tat aga 245 Leu Val Gln Ser Ile Ser Met Gly Lys Ile Cys Asn Lys Ser Tyr Arg 60 65 70 att cta gat gga aga aat tgc aca tta ata gat gca atg cta gga gac 293 Ile Leu Asp Gly Arg Asn Cys Thr Leu Ile Asp Ala Met Leu Gly Asp 75 80 85 ccc cac tgt gac gcc ctt cag tat gag agt tgg gac ctc ttt ata gaa 341 Pro His Cys Asp Ala Leu Gln Tyr Glu Ser Trp Asp Leu Phe Ile Glu 90 95 100 aga agc agc gct ttc agc aat tgc tac cca tat gac atc cct gac tat 389 Arg Ser Ser Ala Phe Ser Asn Cys Tyr Pro Tyr Asp Ile Pro Asp Tyr 105 110 115 120 gca tcg ctc cga tcc att gta gca tcc tca gga aca gtt gaa ttc aca 437 Ala Ser Leu Arg Ser Ile Val Ala Ser Ser Gly Thr Val Glu Phe Thr 125 130 135 gca gag gga ttc aca tgg aca ggt gta act caa aac gga aga agt gga 485 Ala Glu Gly Phe Thr Trp Thr Gly Val Thr Gln Asn Gly Arg Ser Gly 140 145 150 gcc tgc aaa agg gga tca gcc gat agt ttc ttt agc cga ctg aat tgg 533 Ala Cys Lys Arg Gly Ser Ala Asp Ser Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp 155 160 165 cta aca aaa tct gga agc tct tac ccc aca ttg aat gtg aca atg cct 581 Leu Thr Lys Ser Gly Ser Ser Tyr Pro Thr Leu Asn Val Thr Met Pro 170 175 180 aac aat aaa aat ttc gac aag cta tac atc tgg ggg att cat cac ccg 629 Asn Asn Lys Asn Phe Asp Lys Leu Tyr Ile Trp Gly Ile His His Pro 185 190 195 200 agc tca aat caa gag cag aca aaa ttg tac atc caa gaa tca gga cga 677 Ser Ser Asn Gln Glu Gln Thr Lys Leu Tyr Ile Gln Glu Ser Gly Arg 205 210 215 gta aca gtc tca aca aaa aga agt caa caa aca ata atc cct aac atc 725 Val Thr Val Ser Thr Lys Arg Ser Gln Gln Thr Ile Ile Pro Asn Ile 220 225 230 gaa tct aga ccg ttg gtc aga ggt caa tca ggc agg ata agc ata tac 773 Glu Ser Arg Pro Leu Val Arg Gly Gln Ser Gly Arg Ile Ser Ile Tyr 235 240 245 tgg acc att gta aaa cct gga gat atc cta atg ata aac agt aat ggc 821 Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly Asp Ile Leu Met Ile Asn Ser Asn Gly 250 255 260 aac tta gtt gca ccg cgg gga tat ttt aaa ttg aac aca ggg aaa agc 869 Asn Leu Val Ala Pro Arg Gly Tyr Phe Lys Leu Asn Thr Gly Lys Ser 265 270 275 280 tct gta atg aga tcc gat gta ccc ata gac att tgt gtg tct gaa tgt 917 Ser Val Met Arg Ser Asp Val Pro Ile Asp Ile Cys Val Ser Glu Cys 285 290 295 att aca cca aat gga agc atc tcc aac gac aag cca ttc caa aat gtg 965 Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile Ser Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val 300 305 310 aac aaa gtt aca tat gga aaa tgc ccc aag tat atc agg caa aac act 1013 Asn Lys Val Thr Tyr Gly Lys Cys Pro Lys Tyr Ile Arg Gln Asn Thr 315 320 325 tta aag ctg gcc act ggg atg agg aat gta cca gaa aag caa acc aga 1061 Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr Arg 330 335 340 gga atc ttt gga gca ata gcg gga ttc atc gaa aac ggc tgg gaa gga 1109 Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala Gly Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly 345 350 355 360 atg gtt gat ggg tgg tat ggg ttc cga tat caa aac tct gaa gga aca 1157 Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Phe Arg Tyr Gln Asn Ser Glu Gly Thr 365 370 375 ggg caa gct gca gat cta aag agc act caa gca gcc att gac cag att 1205 Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys Ser Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile 380 385 390 aat gga aag tta aac aga gtg att gaa aga acc aat gag aaa ttc cat 1253 Asn Gly Lys Leu Asn Arg Val Ile Glu Arg Thr Asn Glu Lys Phe His 395 400 405 caa ata gag aag gaa ttc tca gaa gta gaa gga aga att cag gac ttg 1301 Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser Glu Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu 410 415 420 gag aaa tat gta gaa gac acc aaa ata gac cta tgg tcc tac aat gca 1349 Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala 425 430 435 440 gaa ttg ctg gtg gct cta gaa aat caa cat aca att gac tta aca gat 1397 Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn Gln His Thr Ile Asp Leu Thr Asp 445 450 455 gca gaa atg aat aaa tta ttt gag aag act aga cgc cag tta aga gaa 1445 Ala Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu Lys Thr Arg Arg Gln Leu Arg Glu 460 465 470 aac gca gaa gac atg gga ggt gga tgt ttc aag att tac cac aaa tgt 1493 Asn Ala Glu Asp Met Gly Gly Gly Cys Phe Lys Ile Tyr His Lys Cys 475 480 485 gat aat gca tgc att gaa tca ata aga act ggg aca tat gac cat tac 1541 Asp Asn Ala Cys Ile Glu Ser Ile Arg Thr Gly Thr Tyr Asp His Tyr 490 495 500 ata tac aga gat gaa gca tta aac aac cga ttt cag atc aaa ggt gta 1589 Ile Tyr Arg Asp Glu Ala Leu Asn Asn Arg Phe Gln Ile Lys Gly Val 505 510 515 520 gag ttg aaa tca ggc tac aaa gat tgg ata ctg tgg att tca ttc gcc 1637 Glu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys Asp Trp Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ala 525 530 535 ata tca tgc ttc tta att tgc gtt gtt cta ttg ggt ttc att atg tgg 1685 Ile Ser Cys Phe Leu Ile Cys Val Val Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp 540 545 550 gct tgc caa aaa ggc aac atc aga tgc aac att tgc att tgagtaaact 1734 Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile Arg Cys Asn Ile Cys Ile 555 560 565 gatagttaaa aacacccttg tttctact 1762 <210> 4 <211> 565 <212> PRT <213> Influenza A Virus <400> 4 Met Lys Thr Thr Ile Ile Leu Ile Leu Leu Thr His Trp Ala Tyr Ser 1 5 10 15 Gln Asn Pro Ile Ser Gly Asn Asn Thr Ala Thr Leu Cys Leu Gly His 20 25 30 His Ala Val Ala Asn Gly Thr Leu Val Lys Thr Met Ser Asp Asp Gln 35 40 45 Ile Glu Val Thr Asn Ala Thr Glu Leu Val Gln Ser Ile Ser Met Gly 50 55 60 Lys Ile Cys Asn Lys Ser Tyr Arg Ile Leu Asp Gly Arg Asn Cys Thr 65 70 75 80 Leu Ile Asp Ala Met Leu Gly Asp Pro His Cys Asp Ala Leu Gln Tyr 85 90 95 Glu Ser Trp Asp Leu Phe Ile Glu Arg Ser Ser Ala Phe Ser Asn Cys 100 105 110 Tyr Pro Tyr Asp Ile Pro Asp Tyr Ala Ser Leu Arg Ser Ile Val Ala 115 120 125 Ser Ser Gly Thr Val Glu Phe Thr Ala Glu Gly Phe Thr Trp Thr Gly 130 135 140 Val Thr Gln Asn Gly Arg Ser Gly Ala Cys Lys Arg Gly Ser Ala Asp 145 150 155 160 Ser Phe Phe Ser Arg Leu Asn Trp Leu Thr Lys Ser Gly Ser Ser Tyr 165 170 175 Pro Thr Leu Asn Val Thr Met Pro Asn Asn Lys Asn Phe Asp Lys Leu 180 185 190 Tyr Ile Trp Gly Ile His His Pro Ser Ser Asn Gln Glu Gln Thr Lys 195 200 205 Leu Tyr Ile Gln Glu Ser Gly Arg Val Thr Val Ser Thr Lys Arg Ser 210 215 220 Gln Gln Thr Ile Ile Pro Asn Ile Glu Ser Arg Pro Leu Val Arg Gly 225 230 235 240 Gln Ser Gly Arg Ile Ser Ile Tyr Trp Thr Ile Val Lys Pro Gly Asp 245 250 255 Ile Leu Met Ile Asn Ser Asn Gly Asn Leu Val Ala Pro Arg Gly Tyr 260 265 270 Phe Lys Leu Asn Thr Gly Lys Ser Ser Val Met Arg Ser Asp Val Pro 275 280 285 Ile Asp Ile Cys Val Ser Glu Cys Ile Thr Pro Asn Gly Ser Ile Ser 290 295 300 Asn Asp Lys Pro Phe Gln Asn Val Asn Lys Val Thr Tyr Gly Lys Cys 305 310 315 320 Pro Lys Tyr Ile Arg Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr Gly Met Arg 325 330 335 Asn Val Pro Glu Lys Gln Thr Arg Gly Ile Phe Gly Ala Ile Ala Gly 340 345 350 Phe Ile Glu Asn Gly Trp Glu Gly Met Val Asp Gly Trp Tyr Gly Phe 355 360 365 Arg Tyr Gln Asn Ser Glu Gly Thr Gly Gln Ala Ala Asp Leu Lys Ser 370 375 380 Thr Gln Ala Ala Ile Asp Gln Ile Asn Gly Lys Leu Asn Arg Val Ile 385 390 395 400 Glu Arg Thr Asn Glu Lys Phe His Gln Ile Glu Lys Glu Phe Ser Glu 405 410 415 Val Glu Gly Arg Ile Gln Asp Leu Glu Lys Tyr Val Glu Asp Thr Lys 420 425 430 Ile Asp Leu Trp Ser Tyr Asn Ala Glu Leu Leu Val Ala Leu Glu Asn 435 440 445 Gln His Thr Ile Asp Leu Thr Asp Ala Glu Met Asn Lys Leu Phe Glu 450 455 460 Lys Thr Arg Arg Gln Leu Arg Glu Asn Ala Glu Asp Met Gly Gly Gly 465 470 475 480 Cys Phe Lys Ile Tyr His Lys Cys Asp Asn Ala Cys Ile Glu Ser Ile 485 490 495 Arg Thr Gly Thr Tyr Asp His Tyr Ile Tyr Arg Asp Glu Ala Leu Asn 500 505 510 Asn Arg Phe Gln Ile Lys Gly Val Glu Leu Lys Ser Gly Tyr Lys Asp 515 520 525 Trp Ile Leu Trp Ile Ser Phe Ala Ile Ser Cys Phe Leu Ile Cys Val 530 535 540 Val Leu Leu Gly Phe Ile Met Trp Ala Cys Gln Lys Gly Asn Ile Arg 545 550 555 560 Cys Asn Ile Cys Ile 565 <210> 5 <211> 1585 <212> DNA <213> Influenza A Virus <220> <221> CDS <222> (51)..(1544) <400> 5 cagggagcaa aagcagggta gataatcact cactgagtga catcaaagtc atg gcg 56 Met Ala 1 tct caa ggc acc aaa cga tcc tat gaa cag atg gaa act gat ggg gaa 104 Ser Gln Gly Thr Lys Arg Ser Tyr Glu Gln Met Glu Thr Asp Gly Glu 5 10 15 cgc cag aat gca act gaa atc aga gca tct gtc gga agg atg gtg gga 152 Arg Gln Asn Ala Thr Glu Ile Arg Ala Ser Val Gly Arg Met Val Gly 20 25 30 gga atc gga cgg ttt tat gtc cag atg tgt act gag ctt aaa cta aac 200 Gly Ile Gly Arg Phe Tyr Val Gln Met Cys Thr Glu Leu Lys Leu Asn 35 40 45 50 gac cat gaa ggg cgg ctg att cag aac agc ata aca ata gaa agg atg 248 Asp His Glu Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu Arg Met 55 60 65 gta ctt tca gca ttc gac gaa aga aga aac aag tat ctc gag gag cat 296 Val Leu Ser Ala Phe Asp Glu Arg Arg Asn Lys Tyr Leu Glu Glu His 70 75 80 ccc agt gct ggg aaa gac cct aag aaa acg gga ggc ccg ata tac aga 344 Pro Ser Ala Gly Lys Asp Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Ile Tyr Arg 85 90 95 aga aaa gat ggg aaa tgg atg agg gaa ctc atc ctc cat gat aaa gaa 392 Arg Lys Asp Gly Lys Trp Met Arg Glu Leu Ile Leu His Asp Lys Glu 100 105 110 gaa atc atg aga atc tgg cgt cag gcc aac aat ggt gaa gac gct act 440 Glu Ile Met Arg Ile Trp Arg Gln Ala Asn Asn Gly Glu Asp Ala Thr 115 120 125 130 gct ggt ctt act cat atg atg atc tgg cac tcc aat ctc aat gac acc 488 Ala Gly Leu Thr His Met Met Ile Trp His Ser Asn Leu Asn Asp Thr 135 140 145 aca tac caa aga aca agg gct ctt gtt cgg act ggg atg gat ccc aga 536 Thr Tyr Gln Arg Thr Arg Ala Leu Val Arg Thr Gly Met Asp Pro Arg 150 155 160 atg tgc tct ctg atg caa ggc tca acc ctc cca cgg aga tct gga gcc 584 Met Cys Ser Leu Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg Ser Gly Ala 165 170 175 gct ggt gct gca gta aaa ggt gtt gga aca atg gta atg gaa ctc atc 632 Ala Gly Ala Ala Val Lys Gly Val Gly Thr Met Val Met Glu Leu Ile 180 185 190 agg atg atc aaa cgc gga ata aat gat cgg aat ttc tgg aga ggt gaa 680 Arg Met Ile Lys Arg Gly Ile Asn Asp Arg Asn Phe Trp Arg Gly Glu 195 200 205 210 aat ggt cga aga acc aga att gct tat gaa aga atg tgc aat atc ctc 728 Asn Gly Arg Arg Thr Arg Ile Ala Tyr Glu Arg Met Cys Asn Ile Leu 215 220 225 aaa ggg aaa ttt cag aca gca gca caa cgg gct atg atg gac cag gtg 776 Lys Gly Lys Phe Gln Thr Ala Ala Gln Arg Ala Met Met Asp Gln Val 230 235 240 agg gaa ggc cgc aat cct gga aac gct gag att gag gat ctc att ttc 824 Arg Glu Gly Arg Asn Pro Gly Asn Ala Glu Ile Glu Asp Leu Ile Phe 245 250 255 ttg gca cga tca gca ctt att ttg aga gga tca gta gcc cat aaa tca 872 Leu Ala Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser Val Ala His Lys Ser 260 265 270 tgc cta cct gcc tgt gtt tat ggc ctt gca gta acc agt ggg tat gac 920 Cys Leu Pro Ala Cys Val Tyr Gly Leu Ala Val Thr Ser Gly Tyr Asp 275 280 285 290 ttt gag aag gaa gga tac tct ctg gtt gga att gat cct ttc aaa cta 968 Phe Glu Lys Glu Gly Tyr Ser Leu Val Gly Ile Asp Pro Phe Lys Leu 295 300 305 ctc cag aac agt caa att ttc agt cta atc aga cca aaa gaa aac cca 1016 Leu Gln Asn Ser Gln Ile Phe Ser Leu Ile Arg Pro Lys Glu Asn Pro 310 315 320 gca cac aaa agc cag ttg gtg tgg atg gca tgc cat tct gca gca ttt 1064 Ala His Lys Ser Gln Leu Val Trp Met Ala Cys His Ser Ala Ala Phe 325 330 335 gag gat ctg aga gtt tta aat ttc att aga gga acc aaa gta atc cca 1112 Glu Asp Leu Arg Val Leu Asn Phe Ile Arg Gly Thr Lys Val Ile Pro 340 345 350 aga gga cag tta aca acc aga gga gtt caa att gct tca aat gaa aac 1160 Arg Gly Gln Leu Thr Thr Arg Gly Val Gln Ile Ala Ser Asn Glu Asn 355 360 365 370 atg gag aca ata aat tct agc aca ctt gaa ctg aga agc aaa tat tgg 1208 Met Glu Thr Ile Asn Ser Ser Thr Leu Glu Leu Arg Ser Lys Tyr Trp 375 380 385 gca ata agg acc aga agc gga gga aac acc agt caa cag aga gca ttt 1256 Ala Ile Arg Thr Arg Ser Gly Gly Asn Thr Ser Gln Gln Arg Ala Phe 390 395 400 gca gga cag ata agt gtg caa cct act ttc tca gta cag aga aat ctt 1304 Ala Gly Gln Ile Ser Val Gln Pro Thr Phe Ser Val Gln Arg Asn Leu 405 410 415 ccc ttt gag aga gca acc att atg gct gca ttc act ggt aac act gaa 1352 Pro Phe Glu Arg Ala Thr Ile Met Ala Ala Phe Thr Gly Asn Thr Glu 420 425 430 ggg agg act tcc gac atg aga acg gaa atc ata agg atg atg gaa aat 1400 Gly Arg Thr Ser Asp Met Arg Thr Glu Ile Ile Arg Met Met Glu Asn 435 440 445 450 gcc aaa tca gaa gat gtg tct ttc cag ggg cgg gga gtc ttc gag ctc 1448 Ala Lys Ser Glu Asp Val Ser Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe Glu Leu 455 460 465 tcg gac gaa aag gca acg aac ccg atc gtg cct tcc ttt gac atg agc 1496 Ser Asp Glu Lys Ala Thr Asn Pro Ile Val Pro Ser Phe Asp Met Ser 470 475 480 aat gaa ggg tct tat ttc ttc gga gac aat gct gag gag ttt gac agt 1544 Asn Glu Gly Ser Tyr Phe Phe Gly Asp Asn Ala Glu Glu Phe Asp Ser 485 490 495 taaagaaaaa tacccttgtt tctactaata cgagacgata t 1585 <210> 6 <211> 498 <212> PRT <213> Influenza A Virus <400> 6 Met Ala Ser Gln Gly Thr Lys Arg Ser Tyr Glu Gln Met Glu Thr Asp 1 5 10 15 Gly Glu Arg Gln Asn Ala Thr Glu Ile Arg Ala Ser Val Gly Arg Met 20 25 30 Val Gly Gly Ile Gly Arg Phe Tyr Val Gln Met Cys Thr Glu Leu Lys 35 40 45 Leu Asn Asp His Glu Gly Arg Leu Ile Gln Asn Ser Ile Thr Ile Glu 50 55 60 Arg Met Val Leu Ser Ala Phe Asp Glu Arg Arg Asn Lys Tyr Leu Glu 65 70 75 80 Glu His Pro Ser Ala Gly Lys Asp Pro Lys Lys Thr Gly Gly Pro Ile 85 90 95 Tyr Arg Arg Lys Asp Gly Lys Trp Met Arg Glu Leu Ile Leu His Asp 100 105 110 Lys Glu Glu Ile Met Arg Ile Trp Arg Gln Ala Asn Asn Gly Glu Asp 115 120 125 Ala Thr Ala Gly Leu Thr His Met Met Ile Trp His Ser Asn Leu Asn 130 135 140 Asp Thr Thr Tyr Gln Arg Thr Arg Ala Leu Val Arg Thr Gly Met Asp 145 150 155 160 Pro Arg Met Cys Ser Leu Met Gln Gly Ser Thr Leu Pro Arg Arg Ser 165 170 175 Gly Ala Ala Gly Ala Ala Val Lys Gly Val Gly Thr Met Val Met Glu 180 185 190 Leu Ile Arg Met Ile Lys Arg Gly Ile Asn Asp Arg Asn Phe Trp Arg 195 200 205 Gly Glu Asn Gly Arg Arg Thr Arg Ile Ala Tyr Glu Arg Met Cys Asn 210 215 220 Ile Leu Lys Gly Lys Phe Gln Thr Ala Ala Gln Arg Ala Met Met Asp 225 230 235 240 Gln Val Arg Glu Gly Arg Asn Pro Gly Asn Ala Glu Ile Glu Asp Leu 245 250 255 Ile Phe Leu Ala Arg Ser Ala Leu Ile Leu Arg Gly Ser Val Ala His 260 265 270 Lys Ser Cys Leu Pro Ala Cys Val Tyr Gly Leu Ala Val Thr Ser Gly 275 280 285 Tyr Asp Phe Glu Lys Glu Gly Tyr Ser Leu Val Gly Ile Asp Pro Phe 290 295 300 Lys Leu Leu Gln Asn Ser Gln Ile Phe Ser Leu Ile Arg Pro Lys Glu 305 310 315 320 Asn Pro Ala His Lys Ser Gln Leu Val Trp Met Ala Cys His Ser Ala 325 330 335 Ala Phe Glu Asp Leu Arg Val Leu Asn Phe Ile Arg Gly Thr Lys Val 340 345 350 Ile Pro Arg Gly Gln Leu Thr Thr Arg Gly Val Gln Ile Ala Ser Asn 355 360 365 Glu Asn Met Glu Thr Ile Asn Ser Ser Thr Leu Glu Leu Arg Ser Lys 370 375 380 Tyr Trp Ala Ile Arg Thr Arg Ser Gly Gly Asn Thr Ser Gln Gln Arg 385 390 395 400 Ala Phe Ala Gly Gln Ile Ser Val Gln Pro Thr Phe Ser Val Gln Arg 405 410 415 Asn Leu Pro Phe Glu Arg Ala Thr Ile Met Ala Ala Phe Thr Gly Asn 420 425 430 Thr Glu Gly Arg Thr Ser Asp Met Arg Thr Glu Ile Ile Arg Met Met 435 440 445 Glu Asn Ala Lys Ser Glu Asp Val Ser Phe Gln Gly Arg Gly Val Phe 450 455 460 Glu Leu Ser Asp Glu Lys Ala Thr Asn 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Ala Gly Ser Ser Glu 185 190 195 cag gca gca gag gcc atg gag gtt gct agt agg gct agg cag atg gta 678 Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala Ser Arg Ala Arg Gln Met Val 200 205 210 cag gca atg aga acc att ggg acc cac cct agc tcc agt gcc ggt ttg 726 Gln Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His Pro Ser Ser Ser Ala Gly Leu 215 220 225 aaa gat gat ctc ctt gaa aat tta cag gcc tac cag aaa cgg atg gga 774 Lys Asp Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln Ala Tyr Gln Lys Arg Met Gly 230 235 240 245 gtg caa atg cag cga ttc aag tgatcctctc gttattgcag caagtatcat 825 Val Gln Met Gln Arg Phe Lys 250 tggaatcttg cacttgatat tgtggattct tgatcgtctt ttcttcaaat tcatttatcg 885 tcgccttaaa tacgggttga aaagagggcc ttctacggaa ggagtacctg agtctatgag 945 ggaagaatat cggcaggaac agcagaatgc tgtggatgtt gacgatggtc attttgtcaa 1005 catagagctg gagtaaaaaa ctaccttgtt tctactaata cgagacgata t 1056 <210> 8 <211> 252 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 8 Met Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Tyr Val Leu Ser Ile Val Pro 1 5 10 15 Ser Gly Pro Leu Lys Ala Glu Ile Ala Gln Arg Leu Glu Asp Val Phe 20 25 30 Ala Gly Lys Asn Thr Asp Leu Glu Ala Leu Met Glu Trp Leu Lys Thr 35 40 45 Arg Pro Ile Leu Ser Pro Leu Thr Lys Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe 50 55 60 Thr Leu Thr Val Pro Ser Glu Arg Gly Leu Gln Arg Arg Arg Phe Val 65 70 75 80 Gln Asn Ala Leu Ser Gly Asn Gly Asp Pro Asn Asn Met Asp Arg Ala 85 90 95 Val Lys Leu Tyr Arg Lys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His Glu Ala 100 105 110 Lys Glu Val Ala Leu Ser Tyr Ser Thr Gly Ala Leu Ala Ser Cys Met 115 120 125 Gly Leu Ile Tyr Asn Arg Met Gly Thr Val Thr Thr Glu Val Ala Phe 130 135 140 Gly Leu Val Cys Ala Thr Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln His Arg 145 150 155 160 Ser His Arg Gln Met Val Thr Thr Thr Asn Pro Leu Ile Arg His Glu 165 170 175 Asn Arg Met Val Leu Ala Ser Thr Thr Ala Lys Ala Met Glu Gln Met 180 185 190 Ala Gly Ser Ser Glu Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala Ser Arg 195 200 205 Ala Arg Gln Met Val Gln Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His Pro Ser 210 215 220 Ser Ser Ala Gly Leu Lys Asp Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln Ala Tyr 225 230 235 240 Gln Lys Arg Met Gly Val Gln Met Gln Arg Phe Lys 245 250 <210> 9 <211> 870 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (29)..(718) <400> 9 ggagcaaaag cagggtgaca aaaacata atg gat tcc aac act gtg tca agc 52 Met Asp Ser Asn Thr Val Ser Ser 1 5 ttt cag gta gac tgt ttt ctt tgg cat gtc cgc aaa cga ttc gca gac 100 Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp His Val Arg Lys Arg Phe Ala Asp 10 15 20 caa gaa ctg ggt gat gcc cca ttc ctt gac cgg ctt cgc cga gac cag 148 Gln Glu Leu Gly Asp Ala Pro Phe Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln 25 30 35 40 aag tcc cta agg gga aga ggt agc act ctt ggt ctg gac atc gaa aca 196 Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser Thr Leu Gly Leu Asp Ile Glu Thr 45 50 55 gcc act cat gca gga aag cag ata gtg gag cag att ctg gaa aag gaa 244 Ala Thr His Ala Gly Lys Gln Ile Val Glu Gln Ile Leu Glu Lys Glu 60 65 70 tca gat gag gca ctt aaa atg acc att gcc tct gtt cct gct tca cgc 292 Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr Ile Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg 75 80 85 tac tta act gac atg act ctt gat gag atg tca aga gac tgg ttc atg 340 Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Asp Glu Met Ser Arg Asp Trp Phe Met 90 95 100 ctc atg ccc aag caa aaa gta aca ggc tcc cta tgt ata aga atg gac 388 Leu Met Pro Lys Gln Lys Val Thr Gly Ser Leu Cys Ile Arg Met Asp 105 110 115 120 caa gca atc atg gat aag aac atc ata ctt aaa gca aac ttt agt gtg 436 Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val 125 130 135 att ttc gaa agg ctg gaa aca cta ata cta ctt aga gcc ttc acc gaa 484 Ile Phe Glu Arg Leu Glu Thr Leu Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu 140 145 150 gaa gga gca gtc gtt ggc gaa att tca cca tta cct tct ctt cca gga 532 Glu Gly Ala Val Val Gly Glu Ile Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly 155 160 165 cat act aat gag gat gtc aaa aat gca att ggg gtc ctc atc gga gga 580 His Thr Asn Glu Asp Val Lys Asn Ala Ile Gly Val Leu Ile Gly Gly 170 175 180 ctt aaa tgg aat gat aat acg gtt aga atc tct gaa act cta cag aga 628 Leu Lys Trp Asn Asp Asn Thr Val Arg Ile Ser Glu Thr Leu Gln Arg 185 190 195 200 ttc gct tgg aga agc agt cat gaa aat ggg aga cct tca ttc cct tca 676 Phe Ala Trp Arg Ser Ser His Glu Asn Gly Arg Pro Ser Phe Pro Ser 205 210 215 aag cag aaa cga aaa atg gag aga aca att aag cca gaa att 718 Lys Gln Lys Arg Lys Met Glu Arg Thr Ile Lys Pro Glu Ile 220 225 230 tgaagaaata agatggttga ttgaagaagt gcgacataga ttgaaaaata cagaaaatag 778 ttttgaacaa ataacattta tgcaagcctt acaactattg cttgaagtag aacaagagat 838 aagaactttc tcgtttcagc ttatttaatg at 870 <210> 10 <211> 230 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 10 Met Asp Ser Asn Thr Val Ser Ser Phe Gln Val Asp Cys Phe Leu Trp 1 5 10 15 His Val Arg Lys Arg Phe Ala Asp Gln Glu Leu Gly Asp Ala Pro Phe 20 25 30 Leu Asp Arg Leu Arg Arg Asp Gln Lys Ser Leu Arg Gly Arg Gly Ser 35 40 45 Thr Leu Gly Leu Asp Ile Glu Thr Ala Thr His Ala Gly Lys Gln Ile 50 55 60 Val Glu Gln Ile Leu Glu Lys Glu Ser Asp Glu Ala Leu Lys Met Thr 65 70 75 80 Ile Ala Ser Val Pro Ala Ser Arg Tyr Leu Thr Asp Met Thr Leu Asp 85 90 95 Glu Met Ser Arg Asp Trp Phe Met Leu Met Pro Lys Gln Lys Val Thr 100 105 110 Gly Ser Leu Cys Ile Arg Met Asp Gln Ala Ile Met Asp Lys Asn Ile 115 120 125 Ile Leu Lys Ala Asn Phe Ser Val Ile Phe Glu Arg Leu Glu Thr Leu 130 135 140 Ile Leu Leu Arg Ala Phe Thr Glu Glu Gly Ala Val Val Gly Glu Ile 145 150 155 160 Ser Pro Leu Pro Ser Leu Pro Gly His Thr Asn Glu Asp Val Lys Asn 165 170 175 Ala Ile Gly Val Leu Ile Gly Gly Leu Lys Trp Asn Asp Asn Thr Val 180 185 190 Arg Ile Ser Glu Thr Leu Gln Arg Phe Ala Trp Arg Ser Ser His Glu 195 200 205 Asn Gly Arg Pro Ser Phe Pro Ser Lys Gln Lys Arg Lys Met Glu Arg 210 215 220 Thr Ile Lys Pro Glu Ile 225 230 <210> 11 <211> 2191 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (4)..(2151) <400> 11 taa atg gaa gac ttt gtg cga cag tgc ttc aat cca atg atc gtc gag 48 Met Glu Asp Phe Val Arg Gln Cys Phe Asn Pro Met Ile Val Glu 1 5 10 15 ctt gcg gaa aag gca atg aaa gaa tat gga gag aac ccg aaa atc gaa 96 Leu Ala Glu Lys Ala Met Lys Glu Tyr Gly Glu Asn Pro Lys Ile Glu 20 25 30 aca aac aaa ttt gca gca ata tgc act cac ttg gaa gtc tgc ttc atg 144 Thr Asn Lys Phe Ala Ala Ile Cys Thr His Leu Glu Val Cys Phe Met 35 40 45 tac tcg gat ttc cac ttt ata aat gaa ctg ggt gag tca gtg gtc ata 192 Tyr Ser Asp Phe His Phe Ile Asn Glu Leu Gly Glu Ser Val Val Ile 50 55 60 gag tct ggt gac cca aat gct ctt ttg aaa cac aga ttt gaa atc att 240 Glu Ser Gly Asp Pro Asn Ala Leu Leu Lys His Arg Phe Glu Ile Ile 65 70 75 gag ggg aga gat cga aca atg gca tgg aca gta gta aac agc atc tgc 288 Glu Gly Arg Asp Arg Thr Met Ala Trp Thr Val Val Asn Ser Ile Cys 80 85 90 95 aac acc aca aga gct gaa aaa cct aaa ttt ctt cca gat tta tac gac 336 Asn Thr Thr Arg Ala Glu Lys Pro Lys Phe Leu Pro Asp Leu Tyr Asp 100 105 110 tat aag gag aac aga ttt gtt gaa att ggt gtg aca agg aga gaa gtt 384 Tyr Lys Glu Asn Arg Phe Val Glu Ile Gly Val Thr Arg Arg Glu Val 115 120 125 cac ata tac tac ctg gag aaa gcc aac aaa ata aag tct gag aaa aca 432 His Ile Tyr Tyr Leu Glu Lys Ala Asn Lys Ile Lys Ser Glu Lys Thr 130 135 140 cat atc cac att ttc tca ttt aca gga gaa gaa atg gct aca aaa gcg 480 His Ile His Ile Phe Ser Phe Thr Gly Glu Glu Met Ala Thr Lys Ala 145 150 155 gac tat act ctt gat gaa gag agt aga gcc agg atc aag acc aga cta 528 Asp Tyr Thr Leu Asp Glu Glu Ser Arg Ala Arg Ile Lys Thr Arg Leu 160 165 170 175 ttc act ata aga caa gaa atg gcc agt aga ggc ctc tgg gat tcc ttt 576 Phe Thr Ile Arg Gln Glu Met Ala Ser Arg Gly Leu Trp Asp Ser Phe 180 185 190 cgt cag tcc gag aga ggc gaa gag aca att gaa gaa aga ttt gaa atc 624 Arg Gln Ser Glu Arg Gly Glu Glu Thr Ile Glu Glu Arg Phe Glu Ile 195 200 205 aca gga acg atg cgc aag ctt gcc aat tac agt ctc cca ccg aac ttc 672 Thr Gly Thr Met Arg Lys Leu Ala Asn Tyr Ser Leu Pro Pro Asn Phe 210 215 220 tcc agc ctt gaa aat ttt aga gtc tat ata gat gga ttc gaa ccg aac 720 Ser Ser Leu Glu Asn Phe Arg Val Tyr Ile Asp Gly Phe Glu Pro Asn 225 230 235 ggc tgc att gag agt aag ctt tct caa atg tcc aaa gaa gta aat gcc 768 Gly Cys Ile Glu Ser Lys Leu Ser Gln Met Ser Lys Glu Val Asn Ala 240 245 250 255 aaa atc gaa cca ttt tca aag aca aca ccc cga cca ctc aaa atg cca 816 Lys Ile Glu Pro Phe Ser Lys Thr Thr Pro Arg Pro Leu Lys Met Pro 260 265 270 ggt ggt cca ccc tgc cat cag cga tcc aaa ttc ttg cta atg gat gct 864 Gly Gly Pro Pro Cys His Gln Arg Ser Lys Phe Leu Leu Met Asp Ala 275 280 285 ctg aaa ctg agc att gag gac cca agt cac gag gga gag ggg ata cca 912 Leu Lys Leu Ser Ile Glu Asp Pro Ser His Glu Gly Glu Gly Ile Pro 290 295 300 cta tat gat gca atc aaa tgc atg aaa act ttc ttt gga tgg aaa gag 960 Leu Tyr Asp Ala Ile Lys Cys Met Lys Thr Phe Phe Gly Trp Lys Glu 305 310 315 ccc agt att gtt aaa cca cat aaa aag ggt ata aac ccg aac tat ctc 1008 Pro Ser Ile Val Lys Pro His Lys Lys Gly Ile Asn Pro Asn Tyr Leu 320 325 330 335 caa act tgg aag caa gta tta gaa gaa ata caa gac ctt gag aac gaa 1056 Gln Thr Trp Lys Gln Val Leu Glu Glu Ile Gln Asp Leu Glu Asn Glu 340 345 350 gaa agg acc ccc aag acc aag aat atg aaa aaa aca agc caa ttg aaa 1104 Glu Arg Thr Pro Lys Thr Lys Asn Met Lys Lys Thr Ser Gln Leu Lys 355 360 365 tgg gca cta ggt gaa aat atg gca cca gag aaa gtg gat ttt gag gat 1152 Trp Ala Leu Gly Glu Asn Met Ala Pro Glu Lys Val Asp Phe Glu Asp 370 375 380 tgt aaa gac atc aat gat tta aaa caa tat gac agt gat gag cca gaa 1200 Cys Lys Asp Ile Asn Asp Leu Lys Gln Tyr Asp Ser Asp Glu Pro Glu 385 390 395 gca agg tct ctt gca agt tgg att caa agt gag ttc aac aag gct tgt 1248 Ala Arg Ser Leu Ala Ser Trp Ile Gln Ser Glu Phe Asn Lys Ala Cys 400 405 410 415 gag ctg aca gat tca agc tgg ata gag ctc gat gaa att ggg gag gat 1296 Glu Leu Thr Asp Ser Ser Trp Ile Glu Leu Asp Glu Ile Gly Glu Asp 420 425 430 gtc gcc cca ata gaa tac att gcg agc atg agg aga aat tat ttt act 1344 Val Ala Pro Ile Glu Tyr Ile Ala Ser Met Arg Arg Asn Tyr Phe Thr 435 440 445 gct gag att tcc cat tgt aga gca aca gaa tat ata atg aaa gga gta 1392 Ala Glu Ile Ser His Cys Arg Ala Thr Glu Tyr Ile Met Lys Gly Val 450 455 460 tac atc aac act gct cta ctc aat gca tcc tgt gct gcg atg gat gaa 1440 Tyr Ile Asn Thr Ala Leu Leu Asn Ala Ser Cys Ala Ala Met Asp Glu 465 470 475 ttt caa tta att ccg atg ata agt aaa tgc agg acc aaa gaa ggg aga 1488 Phe Gln Leu Ile Pro Met Ile Ser Lys Cys Arg Thr Lys Glu Gly Arg 480 485 490 495 agg aaa aca aat tta tat gga ttc ata ata aag gga agg tcc cat tta 1536 Arg Lys Thr Asn Leu Tyr Gly Phe Ile Ile Lys Gly Arg Ser His Leu 500 505 510 aga aat gat act gac gtg gtg aac ttt gta agt atg gaa ttt tct ctc 1584 Arg Asn Asp Thr Asp Val Val Asn Phe Val Ser Met Glu Phe Ser Leu 515 520 525 act gat cca aga ttt gag cca cac aaa tgg gaa aaa tac tgc gtt cta 1632 Thr Asp Pro Arg Phe Glu Pro His Lys Trp Glu Lys Tyr Cys Val Leu 530 535 540 gaa att gga gac atg ctt cta aga act gct gta ggt caa gtg tca aga 1680 Glu Ile Gly Asp Met Leu Leu Arg Thr Ala Val Gly Gln Val Ser Arg 545 550 555 ccc ata ttt ttg tat gta agg aca aat gga acc tct aaa att aaa atg 1728 Pro Ile Phe Leu Tyr Val Arg Thr Asn Gly Thr Ser Lys Ile Lys Met 560 565 570 575 aaa tgg gga atg gaa atg aga cgc tgc ctc ctt cag tct ctg caa cag 1776 Lys Trp Gly Met Glu Met Arg Arg Cys Leu Leu Gln Ser Leu Gln Gln 580 585 590 att gaa agc atg atc gaa gct gag tcc tca gtc aaa gaa aag gac atg 1824 Ile Glu Ser Met Ile Glu Ala Glu Ser Ser Val Lys Glu Lys Asp Met 595 600 605 acc aaa gaa ttt ttt gag aac aaa tca gag aca tgg cct ata gga gag 1872 Thr Lys Glu Phe Phe Glu Asn Lys Ser Glu Thr Trp Pro Ile Gly Glu 610 615 620 tcc ccc aaa gga gtg gaa gag ggc tca atc ggg aag gtt tgc agg acc 1920 Ser Pro Lys Gly Val Glu Glu Gly Ser Ile Gly Lys Val Cys Arg Thr 625 630 635 tta tta gca aaa tct gtg ttt aac agt tta tat gca tct cca caa ctg 1968 Leu Leu Ala Lys Ser Val Phe Asn Ser Leu Tyr Ala Ser Pro Gln Leu 640 645 650 655 gaa gga ttt tca gct gaa tct agg aaa tta ctt ctc att gtt cag gct 2016 Glu Gly Phe Ser Ala Glu Ser Arg Lys Leu Leu Leu Ile Val Gln Ala 660 665 670 ctt aga gat gac ctg gaa cct gga acc ttt gat att ggg ggg tta tat 2064 Leu Arg Asp Asp Leu Glu Pro Gly Thr Phe Asp Ile Gly Gly Leu Tyr 675 680 685 gaa tca att gag gag tgc ctg att aat gat ccc tgg gtt ttg ctt aat 2112 Glu Ser Ile Glu Glu Cys Leu Ile Asn Asp Pro Trp Val Leu Leu Asn 690 695 700 gca tct tgg ttc aac tcc ttc ctc aca cat gca ctg aag tagttgtggc 2161 Ala Ser Trp Phe Asn Ser Phe Leu Thr His Ala Leu Lys 705 710 715 aatgctacta tttgttatcc atactgtcca 2191 <210> 12 <211> 716 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 12 Met Glu Asp Phe Val Arg Gln Cys Phe Asn Pro Met Ile Val Glu Leu 1 5 10 15 Ala Glu Lys Ala Met Lys Glu Tyr Gly Glu Asn Pro Lys Ile Glu Thr 20 25 30 Asn Lys Phe Ala Ala Ile Cys Thr His Leu Glu Val Cys Phe Met Tyr 35 40 45 Ser Asp Phe His Phe Ile Asn Glu Leu Gly Glu Ser Val Val Ile Glu 50 55 60 Ser Gly Asp Pro Asn Ala Leu Leu Lys His Arg Phe Glu Ile Ile Glu 65 70 75 80 Gly Arg Asp Arg Thr Met Ala Trp Thr Val Val Asn Ser Ile Cys Asn 85 90 95 Thr Thr Arg Ala Glu Lys Pro Lys Phe Leu Pro Asp Leu Tyr Asp Tyr 100 105 110 Lys Glu Asn Arg Phe Val Glu Ile Gly Val Thr Arg Arg Glu Val His 115 120 125 Ile Tyr Tyr Leu Glu Lys Ala Asn Lys Ile Lys Ser Glu Lys Thr His 130 135 140 Ile His Ile Phe Ser Phe Thr Gly Glu Glu Met Ala Thr Lys Ala Asp 145 150 155 160 Tyr Thr Leu Asp Glu Glu Ser Arg Ala Arg Ile Lys Thr Arg Leu Phe 165 170 175 Thr Ile Arg Gln Glu Met Ala Ser Arg Gly Leu Trp Asp Ser Phe Arg 180 185 190 Gln Ser Glu Arg Gly Glu Glu Thr Ile Glu Glu Arg Phe Glu Ile Thr 195 200 205 Gly Thr Met Arg Lys Leu Ala Asn Tyr Ser Leu Pro Pro Asn Phe Ser 210 215 220 Ser Leu Glu Asn Phe Arg Val Tyr Ile Asp Gly Phe Glu Pro Asn Gly 225 230 235 240 Cys Ile Glu Ser Lys Leu Ser Gln Met Ser Lys Glu Val Asn Ala Lys 245 250 255 Ile Glu Pro Phe Ser Lys Thr Thr Pro Arg Pro Leu Lys Met Pro Gly 260 265 270 Gly Pro Pro Cys His Gln Arg Ser Lys Phe Leu Leu Met Asp Ala Leu 275 280 285 Lys Leu Ser Ile Glu Asp Pro Ser His Glu Gly Glu Gly Ile Pro Leu 290 295 300 Tyr Asp Ala Ile Lys Cys Met Lys Thr Phe Phe Gly Trp Lys Glu Pro 305 310 315 320 Ser Ile Val Lys Pro His Lys Lys Gly Ile Asn Pro Asn Tyr Leu Gln 325 330 335 Thr Trp Lys Gln Val Leu Glu Glu Ile Gln Asp Leu Glu Asn Glu Glu 340 345 350 Arg Thr Pro Lys Thr Lys Asn Met Lys Lys Thr Ser Gln Leu Lys Trp 355 360 365 Ala Leu Gly Glu Asn Met Ala Pro Glu Lys Val Asp Phe Glu Asp Cys 370 375 380 Lys Asp Ile Asn Asp Leu Lys Gln Tyr Asp Ser Asp Glu Pro Glu Ala 385 390 395 400 Arg Ser Leu Ala Ser Trp Ile Gln Ser Glu Phe Asn Lys Ala Cys Glu 405 410 415 Leu Thr Asp Ser Ser Trp Ile Glu Leu Asp Glu Ile Gly Glu Asp Val 420 425 430 Ala Pro Ile Glu Tyr Ile Ala Ser Met Arg Arg Asn Tyr Phe Thr Ala 435 440 445 Glu Ile Ser His Cys Arg Ala Thr Glu Tyr Ile Met Lys Gly Val Tyr 450 455 460 Ile Asn Thr Ala Leu Leu Asn Ala Ser Cys Ala Ala Met Asp Glu Phe 465 470 475 480 Gln Leu Ile Pro Met Ile Ser Lys Cys Arg Thr Lys Glu Gly Arg Arg 485 490 495 Lys Thr Asn Leu Tyr Gly Phe Ile Ile Lys Gly Arg Ser His Leu Arg 500 505 510 Asn Asp Thr Asp Val Val Asn Phe Val Ser Met Glu Phe Ser Leu Thr 515 520 525 Asp Pro Arg Phe Glu Pro His Lys Trp Glu Lys Tyr Cys Val Leu Glu 530 535 540 Ile Gly Asp Met Leu Leu Arg Thr Ala Val Gly Gln Val Ser Arg Pro 545 550 555 560 Ile Phe Leu Tyr Val Arg Thr Asn Gly Thr Ser Lys Ile Lys Met Lys 565 570 575 Trp Gly Met Glu Met Arg Arg Cys Leu Leu Gln Ser Leu Gln Gln Ile 580 585 590 Glu Ser Met Ile Glu Ala Glu Ser Ser Val Lys Glu Lys Asp Met Thr 595 600 605 Lys Glu Phe Phe Glu Asn Lys Ser Glu Thr Trp Pro Ile Gly Glu Ser 610 615 620 Pro Lys Gly Val Glu Glu Gly Ser Ile Gly Lys Val Cys Arg Thr Leu 625 630 635 640 Leu Ala Lys Ser Val Phe Asn Ser Leu Tyr Ala Ser Pro Gln Leu Glu 645 650 655 Gly Phe Ser Ala Glu Ser Arg Lys Leu Leu Leu Ile Val Gln Ala Leu 660 665 670 Arg Asp Asp Leu Glu Pro Gly Thr Phe Asp Ile Gly Gly Leu Tyr Glu 675 680 685 Ser Ile Glu Glu Cys Leu Ile Asn Asp Pro Trp Val Leu Leu Asn Ala 690 695 700 Ser Trp Phe Asn Ser Phe Leu Thr His Ala Leu Lys 705 710 715 <210> 13 <211> 2299 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (22)..(2292) <400> 13 gaaagcaggc aaaccatttg a atg gat gtc aat ccg act cta ctt ttc tta 51 Met Asp Val Asn Pro Thr Leu Leu Phe Leu 1 5 10 aag gtg cca gcg caa aat gct ata agc aca aca ttc cct tat 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cct 435 Thr Gln Gly Arg Gln Thr Tyr Asp Trp Thr Leu Asn Arg Asn Gln Pro 125 130 135 gcc gca aca gca ctt gct aat acg att gaa gta ttc aga tca aat ggt 483 Ala Ala Thr Ala Leu Ala Asn Thr Ile Glu Val Phe Arg Ser Asn Gly 140 145 150 ctg act tcc aat gaa tcg ggg aga ttg atg gac ttc ctc aaa gat gtc 531 Leu Thr Ser Asn Glu Ser Gly Arg Leu Met Asp Phe Leu Lys Asp Val 155 160 165 170 atg gag tcc atg aac aag gag gaa atg gaa ata aca aca cac ttc caa 579 Met Glu Ser Met Asn Lys Glu Glu Met Glu Ile Thr Thr His Phe Gln 175 180 185 cgg aag aga aga gta aga gac aac atg aca aag aga atg ata aca cag 627 Arg Lys Arg Arg Val Arg Asp Asn Met Thr Lys Arg Met Ile Thr Gln 190 195 200 aga acc ata ggg aag aaa aaa caa cga tta agc aga aag agc tat cta 675 Arg Thr Ile Gly Lys Lys Lys Gln Arg Leu Ser Arg Lys Ser Tyr Leu 205 210 215 atc aga aca tta acc cta aac aca atg acc aag gac gct gaa aga ggg 723 Ile Arg Thr Leu Thr Leu Asn Thr Met Thr Lys Asp Ala Glu Arg Gly 220 225 230 aaa ttg aaa cga cga gca atc gct acc cca ggg atg cag ata aga gga 771 Lys Leu Lys Arg Arg Ala Ile Ala Thr Pro Gly Met Gln Ile Arg Gly 235 240 245 250 ttt gta tat ttt gtt gaa aca cta gct cga aga ata tgt gaa aag ctt 819 Phe Val Tyr Phe Val Glu Thr Leu Ala Arg Arg Ile Cys Glu Lys Leu 255 260 265 gaa caa tca gga ttg cca gtt ggc ggt aat gag aaa aag gcc aaa ctg 867 Glu Gln Ser Gly Leu Pro Val Gly Gly Asn Glu Lys Lys Ala Lys Leu 270 275 280 gct aat gtc gtc aga aaa atg atg act aat tcc caa gac act gaa ctc 915 Ala Asn Val Val Arg Lys Met Met Thr Asn Ser Gln Asp Thr Glu Leu 285 290 295 tcc ttc acc atc act ggg gac aat acc aaa tgg aat gaa aat cag aac 963 Ser Phe Thr Ile Thr Gly Asp Asn Thr Lys Trp Asn Glu Asn Gln Asn 300 305 310 cca cgc ata ttc ctg gca atg atc aca tac ata act aga aat cag cca 1011 Pro Arg Ile Phe Leu Ala Met Ile Thr Tyr Ile Thr Arg Asn Gln Pro 315 320 325 330 gaa tgg ttc aga aat gtt cta agc att gca ccg att atg ttc tca aat 1059 Glu Trp Phe Arg Asn Val Leu Ser Ile Ala Pro Ile Met Phe Ser Asn 335 340 345 aaa atg gca aga ctg ggg aaa gga tat atg ttt gaa agc aaa agt atg 1107 Lys Met Ala Arg Leu Gly Lys Gly Tyr Met Phe Glu Ser Lys Ser Met 350 355 360 aaa ttg aga act caa ata cca gca gaa atg cta gca agc att gac cta 1155 Lys Leu Arg Thr Gln Ile Pro Ala Glu Met Leu Ala Ser Ile Asp Leu 365 370 375 aaa tat ttc aat gat tca aca aaa aag aaa att gaa aag ata cga cca 1203 Lys Tyr Phe Asn Asp Ser Thr Lys Lys Lys Ile Glu Lys Ile Arg Pro 380 385 390 ctc ctg gtt gac ggg act gct tca ctg agt cct ggc atg atg atg gga 1251 Leu Leu Val Asp Gly Thr Ala Ser Leu Ser Pro Gly Met Met Met Gly 395 400 405 410 atg ttc aac atg ttg agc act gtg ctg ggt gta tcc ata tta aac ctg 1299 Met Phe Asn Met Leu Ser Thr Val Leu Gly Val Ser Ile Leu Asn Leu 415 420 425 ggc cag agg aaa tat aca aag acc aca tac tgg tgg gat ggt ctg caa 1347 Gly Gln Arg Lys Tyr Thr Lys Thr Thr Tyr Trp Trp Asp Gly Leu Gln 430 435 440 tca tcc gat gac ttt gct ttg ata gtg aat gcg cct aat cat gaa gga 1395 Ser Ser Asp Asp Phe Ala Leu Ile Val Asn Ala Pro Asn His Glu Gly 445 450 455 ata caa gct gga gta gac aga ttc tat aga act tgc aaa ctg gtc ggg 1443 Ile Gln Ala Gly Val Asp Arg Phe Tyr Arg Thr Cys Lys Leu Val Gly 460 465 470 atc aac atg agc aaa aag aag tcc tac ata aat aga act gga aca ttc 1491 Ile Asn Met Ser Lys Lys Lys Ser Tyr Ile Asn Arg Thr Gly Thr Phe 475 480 485 490 gaa ttc aca agc ttt ttc tac cgg tat ggt ttt gta gcc aat ttc agc 1539 Glu Phe Thr Ser Phe Phe Tyr Arg Tyr Gly Phe Val Ala Asn Phe Ser 495 500 505 atg gaa cta ccc agt ttt ggg gtt tcc gga ata aat gaa tct gca gac 1587 Met Glu Leu Pro Ser Phe Gly Val Ser Gly Ile Asn Glu Ser Ala Asp 510 515 520 atg agc att gga gtg aca gtc atc aaa aac aac atg ata aat aat gat 1635 Met Ser Ile Gly Val Thr Val Ile Lys Asn Asn Met Ile Asn Asn Asp 525 530 535 ctc ggt cct gcc acg gca caa atg gya ctc caa ctc ttc att aag gat 1683 Leu Gly Pro Ala Thr Ala Gln Met Xaa Leu Gln Leu Phe Ile Lys Asp 540 545 550 tat cgg tac aca tac cgg tgc cat aga ggt gat acc cag ata caa acc 1731 Tyr Arg Tyr Thr Tyr Arg Cys His Arg Gly Asp Thr Gln Ile Gln Thr 555 560 565 570 aga aga tct ttt gag ttg aag aaa ctg tgg gaa cag act cga tca aag 1779 Arg Arg Ser Phe Glu Leu Lys Lys Leu Trp Glu Gln Thr Arg Ser Lys 575 580 585 act ggt cta ctg gta tca gat ggg ggt cca aac cta tat aac atc aga 1827 Thr Gly Leu Leu Val Ser Asp Gly Gly Pro Asn Leu Tyr Asn Ile Arg 590 595 600 aac cta cac atc ccg gaa gtc tgt tta aaa tgg gag cta atg gat gaa 1875 Asn Leu His Ile Pro Glu Val Cys Leu Lys Trp Glu Leu Met Asp Glu 605 610 615 gat tat aag ggg agg cta tgc aat cca ttg aat cct ttc gtt agt cac 1923 Asp Tyr Lys Gly Arg Leu Cys Asn Pro Leu Asn Pro Phe Val Ser His 620 625 630 aaa gaa att gaa tca gtc aac agt gca gta gta atg cct gcg cat ggc 1971 Lys Glu Ile Glu Ser Val Asn Ser Ala Val Val Met Pro Ala His Gly 635 640 645 650 cct gcc aaa agc atg gag tat gat gct gtt gca aca aca cat tct tgg 2019 Pro Ala Lys Ser Met Glu Tyr Asp Ala Val Ala Thr Thr His Ser Trp 655 660 665 atc ccc aag agg aac cgg tcc ata ttg aac aca agc caa agg gga ata 2067 Ile Pro Lys Arg Asn Arg Ser Ile Leu Asn Thr Ser Gln Arg Gly Ile 670 675 680 cta gaa gat gag cag atg tat cag aaa tgc tgc aac ctg ttt gaa aaa 2115 Leu Glu Asp Glu Gln Met Tyr Gln Lys Cys Cys Asn Leu Phe Glu Lys 685 690 695 ttc ttc ccc agc agc tca tac aga aga cca gtc gga att tct agt atg 2163 Phe Phe Pro Ser Ser Ser Tyr Arg Arg Pro Val Gly Ile Ser Ser Met 700 705 710 gtt gag gcc atg gta tcc agg gcc cgc att gat gca cga att gac ttc 2211 Val Glu Ala Met Val Ser Arg Ala Arg Ile Asp Ala Arg Ile Asp Phe 715 720 725 730 gaa tct gga cgg ata aag aag gat gag ttc gct gag atc atg aag atc 2259 Glu Ser Gly Arg Ile Lys Lys Asp Glu Phe Ala Glu Ile Met Lys Ile 735 740 745 tgt tcc acc att gaa gag ctc aga cgg caa aaa tagtgaa 2299 Cys Ser Thr Ile Glu Glu Leu Arg Arg Gln Lys 750 755 <210> 14 <211> 757 <212> PRT <213> Influenza A virus <220> <221> misc_feature <222> (547)..(547) <223> The 'Xaa' at location 547 stands for Ala, or Val. <400> 14 Met Asp Val Asn Pro Thr Leu Leu Phe Leu Lys Val Pro Ala Gln Asn 1 5 10 15 Ala Ile Ser Thr Thr Phe Pro Tyr Thr Gly Asp Pro Pro Tyr Ser His 20 25 30 Gly Thr Gly Thr Gly Tyr Thr Met Asp Thr Val Asn Arg Thr His Gln 35 40 45 Tyr Ser Glu Lys Gly Lys Trp Thr Thr Asn Thr Glu Ile Gly Ala Pro 50 55 60 Gln Leu Asn Pro Ile Asp Gly Pro Leu Pro Glu Asp Asn Glu Pro Ser 65 70 75 80 Gly Tyr Ala Gln Thr Asp Cys Val Leu Glu Ala Met Ala Phe Leu Glu 85 90 95 Glu Ser His Pro Gly Ile Phe Glu Asn Ser Cys Leu Glu Thr Met Glu 100 105 110 Val Ile Gln Gln Thr Arg Val Asp Lys Leu Thr Gln Gly Arg Gln Thr 115 120 125 Tyr Asp Trp Thr Leu Asn Arg Asn Gln Pro Ala Ala Thr Ala Leu Ala 130 135 140 Asn Thr Ile Glu Val Phe Arg Ser Asn Gly Leu Thr Ser Asn Glu Ser 145 150 155 160 Gly Arg Leu Met Asp Phe Leu Lys Asp Val Met Glu Ser Met Asn Lys 165 170 175 Glu Glu Met Glu Ile Thr Thr His Phe Gln Arg Lys Arg Arg Val Arg 180 185 190 Asp Asn Met Thr Lys Arg Met Ile Thr Gln Arg Thr Ile Gly Lys Lys 195 200 205 Lys Gln Arg Leu Ser Arg Lys Ser Tyr Leu Ile Arg Thr Leu Thr Leu 210 215 220 Asn Thr Met Thr Lys Asp Ala Glu Arg Gly Lys Leu Lys Arg Arg Ala 225 230 235 240 Ile Ala Thr Pro Gly Met Gln Ile Arg Gly Phe Val Tyr Phe Val Glu 245 250 255 Thr Leu Ala Arg Arg Ile Cys Glu Lys Leu Glu Gln Ser Gly Leu Pro 260 265 270 Val Gly Gly Asn Glu Lys Lys Ala Lys Leu Ala Asn Val Val Arg Lys 275 280 285 Met Met Thr Asn Ser Gln Asp Thr Glu Leu Ser Phe Thr Ile Thr Gly 290 295 300 Asp Asn Thr Lys Trp Asn Glu Asn Gln Asn Pro Arg Ile Phe Leu Ala 305 310 315 320 Met Ile Thr Tyr Ile Thr Arg Asn Gln Pro Glu Trp Phe Arg Asn Val 325 330 335 Leu Ser Ile Ala Pro Ile Met Phe Ser Asn Lys Met Ala Arg Leu Gly 340 345 350 Lys Gly Tyr Met Phe Glu Ser Lys Ser Met Lys Leu Arg Thr Gln Ile 355 360 365 Pro Ala Glu Met Leu Ala Ser Ile Asp Leu Lys Tyr Phe Asn Asp Ser 370 375 380 Thr Lys Lys Lys Ile Glu Lys Ile Arg Pro Leu Leu Val Asp Gly Thr 385 390 395 400 Ala Ser Leu Ser Pro Gly Met Met Met Gly Met Phe Asn Met Leu Ser 405 410 415 Thr Val Leu Gly Val Ser Ile Leu Asn Leu Gly Gln Arg Lys Tyr Thr 420 425 430 Lys Thr Thr Tyr Trp Trp Asp Gly Leu Gln Ser Ser Asp Asp Phe Ala 435 440 445 Leu Ile Val Asn Ala Pro Asn His Glu Gly Ile Gln Ala Gly Val Asp 450 455 460 Arg Phe Tyr Arg Thr Cys Lys Leu Val Gly Ile Asn Met Ser Lys Lys 465 470 475 480 Lys Ser Tyr Ile Asn Arg Thr Gly Thr Phe Glu Phe Thr Ser Phe Phe 485 490 495 Tyr Arg Tyr Gly Phe Val Ala Asn Phe Ser Met Glu Leu Pro Ser Phe 500 505 510 Gly Val Ser Gly Ile Asn Glu Ser Ala Asp Met Ser Ile Gly Val Thr 515 520 525 Val Ile Lys Asn Asn Met Ile Asn Asn Asp Leu Gly Pro Ala Thr Ala 530 535 540 Gln Met Xaa Leu Gln Leu Phe Ile Lys Asp Tyr Arg Tyr Thr Tyr Arg 545 550 555 560 Cys His Arg Gly Asp Thr Gln Ile Gln Thr Arg Arg Ser Phe Glu Leu 565 570 575 Lys Lys Leu Trp Glu Gln Thr Arg Ser Lys Thr Gly Leu Leu Val Ser 580 585 590 Asp Gly Gly Pro Asn Leu Tyr Asn Ile Arg Asn Leu His Ile Pro Glu 595 600 605 Val Cys Leu Lys Trp Glu Leu Met Asp Glu Asp Tyr Lys Gly Arg Leu 610 615 620 Cys Asn Pro Leu Asn Pro Phe Val Ser His Lys Glu Ile Glu Ser Val 625 630 635 640 Asn Ser Ala Val Val Met Pro Ala His Gly Pro Ala Lys Ser Met Glu 645 650 655 Tyr Asp Ala Val Ala Thr Thr His Ser Trp Ile Pro Lys Arg Asn Arg 660 665 670 Ser Ile Leu Asn Thr Ser Gln Arg Gly Ile Leu Glu Asp Glu Gln Met 675 680 685 Tyr Gln Lys Cys Cys Asn Leu Phe Glu Lys Phe Phe Pro Ser Ser Ser 690 695 700 Tyr Arg Arg Pro Val Gly Ile Ser Ser Met Val Glu Ala Met Val Ser 705 710 715 720 Arg Ala Arg Ile Asp Ala Arg Ile Asp Phe Glu Ser Gly Arg Ile Lys 725 730 735 Lys Asp Glu Phe Ala Glu Ile Met Lys Ile Cys Ser Thr Ile Glu Glu 740 745 750 Leu Arg Arg Gln Lys 755 <210> 15 <211> 2370 <212> DNA <213> Influenza A virus <220> <221> CDS <222> (42)..(2318) <400> 15 tattggtctc agggagcgaa agcaggtcaa atatattcaa t atg gag aga ata aaa 56 Met Glu Arg Ile Lys 1 5 gaa ctg aga gat ctg atg tta caa tcc cgc acc cgc gag ata cta aca 104 Glu Leu Arg Asp Leu Met Leu Gln Ser Arg Thr Arg Glu Ile Leu Thr 10 15 20 aaa act act gtg gac cac atg gcc ata atc aag aaa tac aca tca gga 152 Lys Thr Thr Val Asp His Met Ala Ile Ile Lys Lys Tyr Thr Ser Gly 25 30 35 aga caa gag aag aac cct gca ctt agg atg aaa tgg atg atg gca atg 200 Arg Gln Glu Lys Asn Pro Ala Leu Arg Met Lys Trp Met Met Ala Met 40 45 50 aaa tac cca att aca gca gat aag agg ata atg gag atg att cct gag 248 Lys Tyr Pro Ile Thr Ala Asp Lys Arg Ile Met Glu Met Ile Pro Glu 55 60 65 aga aat gaa cag gga caa acc ctt tgg agc aaa acg aac gat gct ggc 296 Arg Asn Glu Gln Gly Gln Thr Leu Trp Ser Lys Thr Asn Asp Ala Gly 70 75 80 85 tca gac cgc gta atg gta tca cct ctg gca gtg aca tgg tgg aat agg 344 Ser Asp Arg Val Met Val Ser Pro Leu Ala Val Thr Trp Trp Asn Arg 90 95 100 aat gga cca aca acg aac aca att cat tat ccg aaa gtc tac aaa act 392 Asn Gly Pro Thr Thr Asn Thr Ile His Tyr Pro Lys Val Tyr Lys Thr 105 110 115 tat ttt gaa aag gtt gaa aga ttg aaa cac gga acc ttt ggc ccc gtt 440 Tyr Phe Glu Lys Val Glu Arg Leu Lys His Gly Thr Phe Gly Pro Val 120 125 130 cat ttt agg aat caa gtc aag ata aga cga aga gtt gat gta aac cct 488 His Phe Arg Asn Gln Val Lys Ile Arg Arg Arg Val Asp Val Asn Pro 135 140 145 ggt cac gcg gac ctc agt gct aaa gaa gca caa gat gtg atc atg gaa 536 Gly His Ala Asp Leu Ser Ala Lys Glu Ala Gln Asp Val Ile Met Glu 150 155 160 165 gtt gtt ttc cca aat gaa gtg gga gcc aga att cta aca tca gaa tca 584 Val Val Phe Pro Asn Glu Val Gly Ala Arg Ile Leu Thr Ser Glu Ser 170 175 180 caa cta aca ata acc aaa gag aaa aag gaa gaa ctt cag gac tgc aaa 632 Gln Leu Thr Ile Thr Lys Glu Lys Lys Glu Glu Leu Gln Asp Cys Lys 185 190 195 att gct ccc ttg atg gta gca tac atg cta gaa aga gag ttg gtc cga 680 Ile Ala Pro Leu Met Val Ala Tyr Met Leu Glu Arg Glu Leu Val Arg 200 205 210 aaa aca agg ttc ctc cca gta gta ggc gga aca agc agt gta tac att 728 Lys Thr Arg Phe Leu Pro Val Val Gly Gly Thr Ser Ser Val Tyr Ile 215 220 225 gaa gtg ttg cat ctg act cag gga aca tgc tgg gag caa atg tac acc 776 Glu Val Leu His Leu Thr Gln Gly Thr Cys Trp Glu Gln Met Tyr Thr 230 235 240 245 cca gga gga gaa gtt aga aac gat gat att gat caa agt tta att att 824 Pro Gly Gly Glu Val Arg Asn Asp Asp Ile Asp Gln Ser Leu Ile Ile 250 255 260 gca gcc cgg aac ata gtg aga aga gca aca gta tca gca gat cca cta 872 Ala Ala Arg Asn Ile Val Arg Arg Ala Thr Val Ser Ala Asp Pro Leu 265 270 275 gca tcc cta ctg gaa atg tgc cac agt aca cag att ggt gga aca agg 920 Ala Ser Leu Leu Glu Met Cys His Ser Thr Gln Ile Gly Gly Thr Arg 280 285 290 atg gta gac atc ctt aag cag aac cca aca gag gaa caa gct gtg gat 968 Met Val Asp Ile Leu Lys Gln Asn Pro Thr Glu Glu Gln Ala Val Asp 295 300 305 ata tgc aaa gca gca atg gga ttg aga att agc tca tca ttc agc ttt 1016 Ile Cys Lys Ala Ala Met Gly Leu Arg Ile Ser Ser Ser Phe Ser Phe 310 315 320 325 ggt gga ttc acc ttc aaa agg aca agt gga tca tca gtc aag aga gaa 1064 Gly Gly Phe Thr Phe Lys Arg Thr Ser Gly Ser Ser Val Lys Arg Glu 330 335 340 gaa gaa atg ctt acg ggc aac ctt caa aca ttg aaa ata aga gtg cat 1112 Glu Glu Met Leu Thr Gly Asn Leu Gln Thr Leu Lys Ile Arg Val His 345 350 355 gag ggc tat gaa gaa ttc aca atg gtc gga aga aga gca aca gcc att 1160 Glu Gly Tyr Glu Glu Phe Thr Met Val Gly Arg Arg Ala Thr Ala Ile 360 365 370 atc aga aag gca acc aga aga ttg att caa ttg ata gta agt ggg aga 1208 Ile Arg Lys Ala Thr Arg Arg Leu Ile Gln Leu Ile Val Ser Gly Arg 375 380 385 gat gaa caa tca att gct gaa gca ata att gta gcc atg gtg ttt tcg 1256 Asp Glu Gln Ser Ile Ala Glu Ala Ile Ile Val Ala Met Val Phe Ser 390 395 400 405 caa gaa gat tgc atg ata aaa gca gtt cga ggc gat ttg aac ttt gtt 1304 Gln Glu Asp Cys Met Ile Lys Ala Val Arg Gly Asp Leu Asn Phe Val 410 415 420 aat aga gca aat cag cgt ttg aac ccc atg cat caa ctc ttg agg cat 1352 Asn Arg Ala Asn Gln Arg Leu Asn Pro Met His Gln Leu Leu Arg His 425 430 435 ttc caa aaa gat gca aaa gtg ctt ttc caa aat tgg gga att gaa ccc 1400 Phe Gln Lys Asp Ala Lys Val Leu Phe Gln Asn Trp Gly Ile Glu Pro 440 445 450 atc gac aat gta atg ggg atg att gga ata ttg cct gac atg acc cca 1448 Ile Asp Asn Val Met Gly Met Ile Gly Ile Leu Pro Asp Met Thr Pro 455 460 465 agc acc gag atg tca ttg aga gga gtg aga gtc agc aaa atg gga gtg 1496 Ser Thr Glu Met Ser Leu Arg Gly Val Arg Val Ser Lys Met Gly Val 470 475 480 485 gat gag tac tcc agc act gag aga gtg gtg gtg agc att gac cgt ttt 1544 Asp Glu Tyr Ser Ser Thr Glu Arg Val Val Val Ser Ile Asp Arg Phe 490 495 500 tta aga gtt cgg gat caa agg gga aac ata cta ctg tcc cct gaa gaa 1592 Leu Arg Val Arg Asp Gln Arg Gly Asn Ile Leu Leu Ser Pro Glu Glu 505 510 515 gtc agt gaa aca caa gga acg gaa aag ctg aca ata att tat tcg tca 1640 Val Ser Glu Thr Gln Gly Thr Glu Lys Leu Thr Ile Ile Tyr Ser Ser 520 525 530 tca atg atg tgg gag att aat ggt ccc gaa tca gtg ttg gtc aat act 1688 Ser Met Met Trp Glu Ile Asn Gly Pro Glu Ser Val Leu Val Asn Thr 535 540 545 tat caa tgg atc atc aga aac tgg gaa att gta aaa att cag tgg tca 1736 Tyr Gln Trp Ile Ile Arg Asn Trp Glu Ile Val Lys Ile Gln Trp Ser 550 555 560 565 cag gac ccc aca atg tta tac aat aag ata gaa ttt gaa cca ttc caa 1784 Gln Asp Pro Thr Met Leu Tyr Asn Lys Ile Glu Phe Glu Pro Phe Gln 570 575 580 tcc ctg gtc cct agg gcc acc aga agc caa tac agc ggt ttc gta aga 1832 Ser Leu Val Pro Arg Ala Thr Arg Ser Gln Tyr Ser Gly Phe Val Arg 585 590 595 acc ctg ttt cag caa atg cga gat gta ctt gga aca ttt gat act gct 1880 Thr Leu Phe Gln Gln Met Arg Asp Val Leu Gly Thr Phe Asp Thr Ala 600 605 610 caa ata ata aaa ctc ctc cct ttt gcc gct gct cct ccg gaa cag agt 1928 Gln Ile Ile Lys Leu Leu Pro Phe Ala Ala Ala Pro Pro Glu Gln Ser 615 620 625 agg atg cag ttc tct tct ttg act gtt aat gta aga ggt tcg gga atg 1976 Arg Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Val Asn Val Arg Gly Ser Gly Met 630 635 640 645 agg ata ctt gta aga ggc aat tcc ccg gtg ttc aac tac aat aaa gtc 2024 Arg Ile Leu Val Arg Gly Asn Ser Pro Val Phe Asn Tyr Asn Lys Val 650 655 660 act aaa agg ctc aca gtc ctc gga aag gat gca ggt gcg ctt act gag 2072 Thr Lys Arg Leu Thr Val Leu Gly Lys Asp Ala Gly Ala Leu Thr Glu 665 670 675 gac cca gat gaa ggt acg gct gga gta gaa tct gct gtt cta aga ggg 2120 Asp Pro Asp Glu Gly Thr Ala Gly Val Glu Ser Ala Val Leu Arg Gly 680 685 690 ttt ctc att tta ggt aaa gaa aac aag aga tat ggc cca gca cta agc 2168 Phe Leu Ile Leu Gly Lys Glu Asn Lys Arg Tyr Gly Pro Ala Leu Ser 695 700 705 atc aat gaa ctt agc aaa ctt gca aaa ggg gag aaa gcc aat gta cta 2216 Ile Asn Glu Leu Ser Lys Leu Ala Lys Gly Glu Lys Ala Asn Val Leu 710 715 720 725 att ggg caa ggg gac gta gtg ttg gta atg aaa cgg aaa cgt gac tct 2264 Ile Gly Gln Gly Asp Val Val Leu Val Met Lys Arg Lys Arg Asp Ser 730 735 740 agc ata ctt act gac agc cag aca gcg acc aaa agg att cgg atg gcc 2312 Ser Ile Leu Thr Asp Ser Gln Thr Ala Thr Lys Arg Ile Arg Met Ala 745 750 755 atc aat tagtgttgaa ttgtttaaaa acgaccttgt ttctactaat acgagaccat at 2370 Ile Asn <210> 16 <211> 759 <212> PRT <213> Influenza A virus <400> 16 Met Glu Arg Ile Lys Glu Leu Arg Asp Leu Met Leu Gln Ser Arg Thr 1 5 10 15 Arg Glu Ile Leu Thr Lys Thr Thr Val Asp His Met Ala Ile Ile Lys 20 25 30 Lys Tyr Thr Ser Gly Arg Gln Glu Lys Asn Pro Ala Leu Arg Met Lys 35 40 45 Trp Met Met Ala Met Lys Tyr Pro Ile Thr Ala Asp Lys Arg Ile Met 50 55 60 Glu Met Ile Pro Glu Arg Asn Glu Gln Gly Gln Thr Leu Trp Ser Lys 65 70 75 80 Thr Asn Asp Ala Gly Ser Asp Arg Val Met Val Ser Pro Leu Ala Val 85 90 95 Thr Trp Trp Asn Arg Asn Gly Pro Thr Thr Asn Thr Ile His Tyr Pro 100 105 110 Lys Val Tyr Lys Thr Tyr Phe Glu Lys Val Glu Arg Leu Lys His Gly 115 120 125 Thr Phe Gly Pro Val His Phe Arg Asn Gln Val Lys Ile Arg Arg Arg 130 135 140 Val Asp Val Asn Pro Gly His Ala Asp Leu Ser Ala Lys Glu Ala Gln 145 150 155 160 Asp Val Ile Met Glu Val Val Phe Pro Asn Glu Val Gly Ala Arg Ile 165 170 175 Leu Thr Ser Glu Ser Gln Leu Thr Ile Thr Lys Glu Lys Lys Glu Glu 180 185 190 Leu Gln Asp Cys Lys Ile Ala Pro Leu Met Val Ala Tyr Met Leu Glu 195 200 205 Arg Glu Leu Val Arg Lys Thr Arg Phe Leu Pro Val Val Gly Gly Thr 210 215 220 Ser Ser Val Tyr Ile Glu Val Leu His Leu Thr Gln Gly Thr Cys Trp 225 230 235 240 Glu Gln Met Tyr Thr Pro Gly Gly Glu Val Arg Asn Asp Asp Ile Asp 245 250 255 Gln Ser Leu Ile Ile Ala Ala Arg Asn Ile Val Arg Arg Ala Thr Val 260 265 270 Ser Ala Asp Pro Leu Ala Ser Leu Leu Glu Met Cys His Ser Thr Gln 275 280 285 Ile Gly Gly Thr Arg Met Val Asp Ile Leu Lys Gln Asn Pro Thr Glu 290 295 300 Glu Gln Ala Val Asp Ile Cys Lys Ala Ala Met Gly Leu Arg Ile Ser 305 310 315 320 Ser Ser Phe Ser Phe Gly Gly Phe Thr Phe Lys Arg Thr Ser Gly Ser 325 330 335 Ser Val Lys Arg Glu Glu Glu Met Leu Thr Gly Asn Leu Gln Thr Leu 340 345 350 Lys Ile Arg Val His Glu Gly Tyr Glu Glu Phe Thr Met Val Gly Arg 355 360 365 Arg Ala Thr Ala Ile Ile Arg Lys Ala Thr Arg Arg Leu Ile Gln Leu 370 375 380 Ile Val Ser Gly Arg Asp Glu Gln Ser Ile Ala Glu Ala Ile Ile Val 385 390 395 400 Ala Met Val Phe Ser Gln Glu Asp Cys Met Ile Lys Ala Val Arg Gly 405 410 415 Asp Leu Asn Phe Val Asn Arg Ala Asn Gln Arg Leu Asn Pro Met His 420 425 430 Gln Leu Leu Arg His Phe Gln Lys Asp Ala Lys Val Leu Phe Gln Asn 435 440 445 Trp Gly Ile Glu Pro Ile Asp Asn Val Met Gly Met Ile Gly Ile Leu 450 455 460 Pro Asp Met Thr Pro Ser Thr Glu Met Ser Leu Arg Gly Val Arg Val 465 470 475 480 Ser Lys Met Gly Val Asp Glu Tyr Ser Ser Thr Glu Arg Val Val Val 485 490 495 Ser Ile Asp Arg Phe Leu Arg Val Arg Asp Gln Arg Gly Asn Ile Leu 500 505 510 Leu Ser Pro Glu Glu Val Ser Glu Thr Gln Gly Thr Glu Lys Leu Thr 515 520 525 Ile Ile Tyr Ser Ser Ser Met Met Trp Glu Ile Asn Gly Pro Glu Ser 530 535 540 Val Leu Val Asn Thr Tyr Gln Trp Ile Ile Arg Asn Trp Glu Ile Val 545 550 555 560 Lys Ile Gln Trp Ser Gln Asp Pro Thr Met Leu Tyr Asn Lys Ile Glu 565 570 575 Phe Glu Pro Phe Gln Ser Leu Val Pro Arg Ala Thr Arg Ser Gln Tyr 580 585 590 Ser Gly Phe Val Arg Thr Leu Phe Gln Gln Met Arg Asp Val Leu Gly 595 600 605 Thr Phe Asp Thr Ala Gln Ile Ile Lys Leu Leu Pro Phe Ala Ala Ala 610 615 620 Pro Pro Glu Gln Ser Arg Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Val Asn Val 625 630 635 640 Arg Gly Ser Gly Met Arg Ile Leu Val Arg Gly Asn Ser Pro Val Phe 645 650 655 Asn Tyr Asn Lys Val Thr Lys Arg Leu Thr Val Leu Gly Lys Asp Ala 660 665 670 Gly Ala Leu Thr Glu Asp Pro Asp Glu Gly Thr Ala Gly Val Glu Ser 675 680 685 Ala Val Leu Arg Gly Phe Leu Ile Leu Gly Lys Glu Asn Lys Arg Tyr 690 695 700 Gly Pro Ala Leu Ser Ile Asn Glu Leu Ser Lys Leu Ala Lys Gly Glu 705 710 715 720 Lys Ala Asn Val Leu Ile Gly Gln Gly Asp Val Val Leu Val Met Lys 725 730 735 Arg Lys Arg Asp Ser Ser Ile Leu Thr Asp Ser Gln Thr Ala Thr Lys 740 745 750 Arg Ile Arg Met Ala Ile Asn 755

Claims (40)

  1. 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)에 특허 기탁 번호 PTA-7694로 기탁된 서브타입 H3N8의 단리된 개 인플루엔자 바이러스.
  2. 제1항에 있어서, 불활성화된 단리된 개 인플루엔자 바이러스.
  3. 제1항에 있어서, 약화된 단리된 개 인플루엔자 바이러스.
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KR1020087008658A 2005-10-18 2006-10-17 개 인플루엔자 바이러스 및 관련 조성물 및 사용 방법 KR101412897B1 (ko)

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