KR101252548B1

KR101252548B1 - 해송자 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101252548B1
Application number: KR1020060005801A
Authority: KR
Inventors: 김한성; 김연준; 이성일; 주희경; 김덕희; 김한곤; 장이섭
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2006-01-19
Filing date: 2006-01-19
Publication date: 2013-04-08
Also published as: KR20070076656A; JP2009523785A; JP5175744B2; WO2007083868A1; CN101360478A; CN101360478B

Abstract

본 발명은 유효성분으로 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명에 의한 화장료 조성물은 유효성분으로 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유함으로써, 우수한 각질형성세포 성장촉진 효과, 활성산소 소거효과, MMP-1의 생합성 감소를 통한 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진 효과, 노화방지 효과 및 피부보습 효과를 나타낸다.

해송자 * 매자 * 적소두 * 모과 * 거승자 * 각질형성세포 * 활성산소 * 타입1 프로콜라겐 * 노화 * 보습

Description

해송자 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{A cosmetic composition containing as available ingredient the extracts of Pinus koraiensis}

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 제기관을 온도 및 습도 변화와 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 하고 있다. 그러나, 자외선, 외부로부터 받는 과도한 물리적, 화학적 자극 및 스트레스, 영양결핍 등은 피부의 정상기능을 저하시키고 탄력손실, 각질화, 주름생성 등의 피부 노화현상을 촉진시키게 된다.

특히, 각질세포가 차례차례로 계속해서 만들어지고, 최외층의 오래된 각질세포가 때때로 이탈해가므로 표피가 일정한 두께를 유지하게 되는 각화과정이 순조롭지 못하면 비정상적인 각질 세포가 생성되고 피부 표면에 쌓여 각질층이 두꺼워지게 되어 피부가 거칠어지고 칙칙해지며, 미세한 잔주름이 생기게 되고 결국 피부 노화가 진행되는 것이다. 또한, 자외선에 의해 생성되는 활성산소 및 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성을 통한 타입 1 프로콜라겐의 생합성 감소도 피부 노화와 관련이 있다.　

따라서, 이러한 현상을 방지하고 보다 건강하고 탄력 있는 피부를 유지하기 위하여 종래 각종 동물, 식물, 미생물 등으로부터 얻은 생리활성물질들이 강화된 화장품을 사용함으로써, 피부의 고유기능을 유지시키고 피부세포를 활성화시켜 피부노화를 효과적으로 억제하기 위한 노력이 있어 왔다. 그러나, 기존의 화장품 원료들은 대부분 효능이 미진하거나 피부 부작용을 유발하는 등 여러 가지 문제점을 가지고 있다.

이에, 본 발명자들은 천연물 중에서 피부 부작용을 유발하지 않으면서 피부보습 효과 및 피부 노화 방지효과를 가지는 원료를 찾기 위해 노력한 결과, 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어 진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 조성물이 각질형성세포 성장촉진 효과, 활성산소 소거 효과, MMP-1의 생합성을 감소시켜 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진하는 효과, 노화방지 효과 및 피부보습 효과가 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 유효성분으로 해송자 추출물 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하여 각질형성세포 성장촉진 효과, 활성산소 소거효과, MMP-1의 생합성 감소를 통한 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진 효과, 노화방지 효과 및 피부보습 효과를 갖는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 의한 화장료 조성물은 유효성분으로 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 한다. 상기 본 발명에 의한 화장료 조성물은 상기 유효성분을 함유함으로써 우수한 각질형성세포 성장촉진 효과, 활성산소 소거효과, MMP-1의 생합성 감소를 통한 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진 효과, 노화방지 효과 및 피부보습 효과를 나타냄을 특징으로 한다.

이하, 본 발명에 의한 화장료 조성물의 각 유효성분을 자세히 설명한다.

해송자(Pinus koraiensis)는 소나무과에 속하는 잣나무의 여문 씨를 말린 것으로서, 한방에서 잣을 약재로 이르는 말로 백자(柏子), 송자(松子), 실백(實柏)이라고도 한다. 이는 솔방울처럼 생긴 구과(毬果)에 들어 있으며, 종자는 삼각난상형이다. 옛날부터 해송자는 자양강장제로 많이 사용하였으며, 병후 회복기에 먹으면 좋은 것으로 알려져 있다. 또한, 이는 지방 및 단백질이 풍부한 고열량 식품이며, 특히 비타민 B가 풍부하고 피부를 부드럽게 하며 혈압을 내리는 작용을 한다.

매자(Prunus mume)는 장미과에 속한 매화나무의 열매로 주로 매실이라고 불리어 진다. 매자는 중국고서인 신농본초경에서 가장 오래된 과일나무로 약용으로 사용되었다는 기록이 남아있으며, 동의보감 등 각종 의서에서도 한약재로 사용되었다는 기록이 많다. 한방에서는 건위, 지혈, 지사, 거담, 주독, 해독 등에 효과를 나타내는 한약재로 이용하고 있다. 매자는 알카리성 식품으로 피로회복에 좋으며, 체질개선 효과가 있다. 특히, 이는 해독작용이 뛰어나고 피부미용에도 좋으며, 살균효과도 있다. 최근에는 항암식품으로도 많은 연구가 이루어지고 있다.

적소두(Phaseolus angularis)는 콩과의 식물로서, 팥의 생약명으로 소두라고도 한다. 적소두의 원산지는 중국 일대일 것으로 추정되고 있으며, 동양에서 오래전부터 재배한 작물이다. 한방에서는 이수, 산혈, 축기, 행풍, 소종, 제습, 화혈, 해독, 배농, 건비위, 개심규, 견근골, 벽온벽 등에 효과를 나타내는 한약재로 이용하고 있다

모과(Chaenomeles sinensis)는 모과나무의 열매로 중국원산의 재배 식물이며, 참외처럼 생겼지만 나무에 달리는 것이기 때문에 목과라고도 불리운다. 모과의 주요성분으로는 사포닌(saponin), 유기산(organic acid), 플라보노이드(flavonoid), 탄닌(tannin) 등을 함유하고 있다. 한방에서는 서근, 활락, 평간, 화위, 거습, 지통 등에 효과를 나타내는 한약재로 이용하고 있다.

거승자(Sesamum indicum)는 만성위장염, 신경염, 고혈압, 변비, 강장, 빈혈 등에 효과가 우수하고, 본초학에 의하면 콜레스테롤을 감소시키고 혈액순환을 원활히 하며 피부와 머리카락을 윤택하게 하는 작용이 있다고 기록되어 있다. 한방에서는 윤오장, 보간신, 오수발, 명이목, 전정수, 장기육, 이대소장에 효과를 나타내는 한약재로 이용하고 있다. 거승자의 단백질은 주로 글로불린(globulin)이고 항산화 작용을 도와주는 감마 토코페롤(γ-tocopherol)이 많이 들어 있어서 항산화 작용에 의해 피부노화를 방지하며 피부 신진대사를 활발하게 하여 부분적으로 검게 변한 색소 침착 현상에도 도움이 된다.

본 발명에 의한 화장료 조성물에 함유되는 상기 추출물들은 식물체로부터 유효성분을 추출하기 위하여 통상적으로 사용되고 당업자에게 주지된 방법에 의해 제조된 것이다. 예를 들면, 생약재 분쇄물에 물, 탄소수 1∼3의 무수 또는 함수 저급알콜, 아세톤, 에틸아세테이트 또는 디에틸에테르를 분쇄물 건조중량에 대하여 1∼15부피배의 양으로 부가한 다음, 냉각콘덴서가 부착된 추출기에서 50∼100℃ 온도로 5∼24시간동안 가열하여 추출하거나; 상기 분쇄물에 물, 탄소수 1∼3의 무수 또는 함수 저급알콜, 아세톤, 에틸아세테이트 또는 디에틸에테르를 분쇄물 건조중량에 대하여 1∼15부피배의 양으로 부가한 다음, 4∼25℃ 온도로 3∼20일간 침적시 켜 추출물을 얻거나; 무수 또는 함수 에탄올 또는 메탄올 추출물에 적당한 양의 물을 가한 뒤 생기는 침전물을 여과하여 제거하고, 여기에 에틸아세테이트, 부탄올 또는 디에틸에테르를 가하여 잘 섞은 다음 방치하여 층을 분리시킨 뒤 상층을 분리한 후, 냉각콘덴서가 부착된 추출기에서 추출물을 얻는다. 상기한 방법에 의해 추출한 생약재 추출물의 추출여액을 감압농축하고, 건조한 후, 화장료 조성물에 배합한다.

본 발명에 의한 추출물은 각 생약재의 별도의 추출물을 혼합하여 이용할 수도 있고, 생약재를 혼합한 후 한꺼번에 추출하여 제조된 것을 사용할 수도 있다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 전체 조성물 중 총 유효성분 즉, 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하고, 상기 유효성분은 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 내지 25 중량%의 농도로 함유하는 것이 바람직하다. 이는 유효성분이 0.001 중량% 미만일 경우에는 그 효과가 미미하고, 25 중량%를 초과하는 경우에는 제품의 사용감 및 제형의 안정도에 문제가 발생하기 때문이다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 우수한 각질형성세포 성장촉진 효과, 활성산소 소거효과, MMP-1의 생합성 감소를 통한 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진 효과, 노화방지 효과 및 피부보습 효과를 나타낸다.

또한, 본 발명에 의한 화장료 조성물은 상기한 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하며, 본 발명의 추출물 이 외에 다른 성분들은 기타 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.

예컨대, 상기 화장료 조성물은 그 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 물질을 포함할 수 있다.

뿐만 아니라, 본 발명의 화장료 조성물은 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 포함할 수 있고, 이의 예로서 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함될 수 있는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니고, 또한 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 가능하지만, 조성물 총 중량에 대하여 바람직하게는 0.01~10 중량%, 보다 바람직하게는 0.01~5 중량%로 배합된다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 에센스, 팩, 젤, 파우더, 립스틱, 메이크업 베이스, 파운데이션, 로션, 연고, 겔, 패취, 미용액, 클렌징 폼, 클렌징 크림, 클렌징 워터, 비누 또는 분무제 등과 같은 제형을 들 수 있다.

이하, 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명이 이들 예로만 한정되는 것은 아니다.

[참고예 1] : 생약재 추출물의 제조

해송자, 매자, 적소두, 모과, 거승자(건화약품㈜) 각 약재를 채취한 후 품질이 우수한 약재만을 선별하고 수세하여 불순물을 제거한 다음 그늘에서 건조하였다. 다음, 해송자, 매자, 적소두, 모과, 거승자 각 100g을 취하여 정제수 2L씩을 첨가한 후 약 95~100℃ 환류장치 하에서 18시간동안 끓이면서 추출하였다. 추출완료 후 계속 증류 농축하여 총 무게 약 500g이 될 때까지 달인 후 상온으로 냉각하였다. 다음, 여과포에 넣고 압착하여 고형분을 분리하고 제거한 후, 여과하여 점성있는 농축액을 얻었다. 농축액을 80℃ 감압 하에서 농축하여 물을 완전히 제거한 다음, 진공 건조하여 분말 고체 상태의 추출물(해송자 5.0g, 매자 10g, 적소두 5.0g, 모과 5.0g, 거승자 5.0g)을 수득하였다.

[실시예 1~15 및 비교예 1]

상기 참고예 1에서 얻은 각 생약재 물 추출물을 하기 표 1의 조합으로 혼합하여 실시예 1~15 및 비교예 1을 제조하여 실험에 사용하였다. 이때, 각 추출물의 혼합비율은 동량으로 하였다.

성분

실시예

비교예

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

1

해송자

○

매자

○

적소두

○

모과

○

거승자

○

[시험예 1] 각질형성세포의 성장촉진(MTT assay) 효과

상기 실시예 1~15및 비교예 1의 추출물이 각질형성세포의 성장능에 미치는 효과를 MTT 방법으로 측정하였으며, 그 방법을 간략하게 설명하면 하기와 같다.

먼저, 각질형성세포를 96 웰 플레이트(well plate)에 웰 당 200 ㎕ 당 5 × 10³ 개 농도로 심어서 24시간 배양한 후, 실시예 1~15 및 비교예 1의 추출물을 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1 % 농도로 처리하여 48시간 동안 배양한 다음, 배양액을 흡입하여 제거한 후, PBS로 1회 세척하고 MTT(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, Sigma, USA) (0.5 ㎎/㎖)용액을 100 ㎕씩 세포에 첨가하고, 4 시간 동안 37 ℃, 5% CO₂에서 배양하였다. 그 후, 배양액을 흡입하여 제거한 다음 DMSO(dimethyl sulfoxide) 용액 200 ㎕를 첨가하고, 쉐이커(shaker)에서 10분간 흔들어 준 후 ELISA 리더(reader)(DIbiotech, Korea)로 540 ㎚에서의 흡광도를 판독하였다. 이 때 대조군으로는 실시예 1~15 및 비교예 1의 추출물의 무처리군을 사용하였다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.

%	0.0001	0.001	0.01	0.1
실시예　 1	136	197	245	277
실시예　 2	136	197	245	277
실시예　 3	139	201	244	276
실시예　 4	137	199	247	278
실시예　 5	141	205	257	286
실시예　 6	141	210	255	285
실시예　 7	143	215	255	284
실시예　 8	145	217	260	287
실시예 9	141	216	259	284
실시예 10	155	219	265	285
실시예 11	164	222	273	293
실시예 12	173	225	277	297
실시예 13	168	223	275	299
실시예 14	169	219	279	299
실시예 15	185	238	288	331
비교예 1	135	185	235	251
대조군	100	100	100	100

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 모든 경우에 있어서 그 효과가 나타남을 알 수 있었고, 대체로 사용한 추출물의 농도가 높을수록 각질형성세포의 성장촉진 효과도 증가하였다. 또한, 해송자 추출물만을 함유하는 비교예 1의 조성물보다 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 실시예 1 내지 15의 조성물이 더 효과적이며, 해송자 추출물에 부가되는 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출물의 종류가 많을수록 각질형성세포의 성장 촉진 효과도 그에 따라 증가함을 알 수 있었다.

[시험예 2] 활성산소 소거 효과

　　　　　　 상기 실시예 1~15 및 비교예 1의 추출물의 자외선에 의해 생성되는 활성산소 생성 억제 효과 즉, 활성산소 소거 효과를 알아보기 위하여 형광물질을 이용하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

먼저, 실험에 사용한 세포주는 독일 암연구센터의 퓌세니그 박사(Dr. Fusenig)로부터 분양 받은 인간 각질세포 HaCaT 세포주(Human keratinocytes HaCaT cell line)로서 이를 형광측정용 96 웰 블랙 플레이트(well black plate)에 웰당 2.0 ×10⁴개로 분주하고, 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin) 첨가된 DMEM(Dulbeccos Modification of Eagles Medium, FBS 10%, Gibco, USA) 배지를 사용하여 37 ℃, 5% CO₂ 조건에서 1 일간 배양한 후, 실시예 1~15 및 비교예 1의 추출물을 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625, 0.03125 % 농도로 처리하였다.

다음, 시험시료를 넣고 24 시간 배양한 후 HCSS(HEPES-buffered control salt solution, Gibco, USA)로 세척하여 남아있는 배지를 제거하고, HCSS에 20 μM로 준비된　 DCFH-DA(2',7'-dichlorodihydro-fluorescein diacetate, Molecular Probes, USA)를 100 ㎕가하고 37 ℃, 5 % CO₂ 조건에서 20 분간 배양하고 HCSS로 세척하였다. 이 후 각 시료 농도별로 처리된 HCSS를 100 ㎕ 가한 후 초기에 활성산소로 산화된 DCF(dichlorofluorescein)의 형광도를 형광플레이트 리더(Ex=485 nm, Em=530 nm)로 측정하였다. 이후 UVB(30mJ/cm²)를 조사하고 처리직후(표 3) 및 처리 3시간 후(표 4)의 형광도를 형광플레이트 리더(Ex=485 nm, Em=530nm)로 측정하였다. 이때, 대조군으로는 실시예 1~15 및 비교예 1의 추출물의 무처리군을 사용하였다.

%	0.5	0.25	0.125	0.0625	0.03125
실시예　 1	71.57	75.70	75.73	82.75	82.75
실시예　 2	71.49	75.68	75.70	82.70	82.71
실시예　 3	71.47	75.50	75.67	82.69	82.73
실시예　 4	71.39	75.51	75.65	82.71	82.70
실시예　 5	71.41	75.38	75.40	82.51	82.62
실시예　 6	71.36	75.27	75.41	82.52	82.65
실시예　 7	71.38	75.25	75.42	82.50	82.53
실시예　 8	71.38	75.23	75.31	82.32	82.55
실시예 9	71.31	75.31	75.51	82.43	82.43
실시예 10	71.33	75.27	75.50	82.41	82.41
실시예 11	71.15	74.55	75.33	81.37	82.01
실시예 12	70.87	74.57	76.15	81.37	81.96
실시예 13	71.11	74.42	75.00	81.33	81.83
실시예 14	70.94	74.41	75.01	81.30	81.81
실시예 15	70.65	73.50	74.50	80.20	81.21
비교예　 1	72.49	76.25	76.26	83.61	83.73
대조군	100	100	100	100	100

%	0.5	0.25	0.125	0.0625	0.03125
실시예　 1	61.05	68.88	73.63	80.83	80.50
실시예　 2	61.03	68.85	73.51	80.52	79.96
실시예　 3	61.02	69.01	73.60	80.55	80.65
실시예　 4	61.00	69.00	73.61	80.57	79.99
실시예　 5	60.97	69.05	73.02	80.52	79.99
실시예　 6	61.34	68.94	72.99	80.52	79.99
실시예　 7	60.85	68.93	73.01	80.51	80.43
실시예　 8	60.91	69.05	72.82	80.40	79.99
실시예 9	61.00	69.00	73.64	80.41	80.45
실시예 10	60.96	69.05	73.21	80.35	79.96
실시예 11	60.55	68.62	71.61	79.50	79.95
실시예 12	60.41	68.41	71.42	79.73	79.95
실시예 13	60.27	68.42	71.41	79.71	79.94
실시예 14	60.34	68.42	71.42	79.66	79.94
실시예 15	59.37	66.31	71.16	78.57	78.71
비교예　 1	61.45	69.97	73.77	81.82	80.77
대조군	100	100	100	100	100

상기 표 3 및 표 4에 나타낸 바와 같이, 모든 시험시료에 있어서 활성산소 생성억제 효과가 나타남을 알 수 있었고, 대체로 사용한 추출물의 농도가 높을수록 활성 산소 생성이 더 억제됨을 알 수 있었다. 또한, 해송자추출물만을 함유하는 비교예 1의 조성물보다 해송자추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 실시예 1~ 15의 조성물이 더 효과적이며, 해송자 추출물에 부가되는 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출물의 종류가 많을수록 활성산소 생성도 그에 따라 더 억제됨을 알 수 있었다. 또한, 처리직후 보다 처리 3시간 후 그 효과가 더 높음을 알 수 있었다.

[시험예 3] MMP-1 및 프로콜라겐 분석(procollagen assay)

상기 실시예 1~15및 비교예 1의 추출물의 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성을 감소시켜 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과를 알아보기 위하여 MMP-1 및 프로콜라겐 분석(procollagen assay)을 하기와 같은 방법으로 수행하였다.

먼저, 정상표피의 지방층을 제거하고 잘게 잘라 콜라겐아제(collagenase)로 표피와 진피를 분리한 후, 표피와 진피조직을 각각 0.25 % 트립신(trypsin) 용액에 넣고 37 ℃, 5% CO₂ 배양기에서 10분간 처리하였다. 이후 보텍스(vortex)를 시행하여 각질형성세포와 섬유아세포를 각각 유리시켰다. 유리된 세포를 모아 세척한 후 각질형성세포는 KGM(keratinocyte growth medium, Clonetics, USA)에 1 ×10⁴ cells/cm² 농도로 배양하였으며, 섬유아세포는 10 % 우태아혈청(FBS)이 첨가된 DMEM 배지에서 배양하였다. 70-80 % 정도 자라면 1:3의 비율로 분주하여 계대 배양하였고, 3-4차 계대배양한 세포를 실험에 이용하였다.

MMP-1의 양을 측정하는 실험을 위해서 섬유아세포를 48 웰 플레이트(well plate)에 90 % 이상 배양한 후 하루동안 기아(starvation)상태로 하였다. 이후 PBS로 2회 세척한 다음 PBS를 100 ㎕씩 넣어준 상태에서 플레이트(plate)의 뚜껑을 열고 자외선 A(UVA filters가 장치된 Dermlight cube 401, UVAtec, USA)를 15J/cm²로 조사하였다. 조사 직후 다시 PBS로 1회 세척하고, 상기 실시예 1~15 및 비교예 1의 추출물이 각각 0.001, 0.01 % 포함된 우태아 혈청을 포함하지 않은 DMEM을 넣어 37 ℃, 5% CO₂ 배양기에서 48시간동안 배양한 후, 배지 중에 유리된 MMP-1의 양을 MMP-1 인간 ELISA 시스템(human ELISA system) (RPN2610, Amersham Pharmacia Biothch, UK)을 이용하여 측정하였고, 섬유아세포의 총 단백질 양으로 보정하였다(표 5). 이 때, 대조군으로는 실시예 1~15 및 비교예 1의 추출물의 무처리군을 사용하였다.

한편, 프로콜라겐의 양을 측정하기 위해 상기 MMP-1의 양을 측정하는 방법과 동일한 조건에서 기아(starvation)상태로 자외선 조사 없이 실시예 1~15및 비교예 1의 추출물을 각각 0.001 및 0.01%로 가하고, 24시간 후에 배지 중에 유리된 프로콜라겐의 양을 프로콜라겐 타입-1 C-펩타이드 EIA 키트(procollagen type-1 C-peptide EIA kit) (MK101, Takara, Japan)를 사용하여 측정하였다(표 6). 대조군으로는 실시예 1~15 및 비교예 1의 추출물의 무처리군을 사용하였다.

%	0.001	0.01
실시예　 1	93	77
실시예　 2	93	74
실시예　 3	88	72
실시예　 4	89	72
실시예　 5	87	61
실시예　 6	85	59
실시예　 7	83	61
실시예　 8	81	59
실시예 9	83	60
실시예 10	74	53
실시예 11	74	54
실시예 12	73	56
실시예 13	75	55
실시예 14	74	54
실시예 15	70	51
비교예　 1	95	79
대조군	100	100

%	0.001	0.011
실시예 1	108	116
실시예 2	108	115
실시예 3	105	116
실시예 4	109	116
실시예 5	111	123
실시예 6	114	124
실시예 7	116	124
실시예 8	115	127
실시예 9	117	125
실시예 10	126	136
실시예 11	125	135
실시예 12	125	137
실시예 13	127	137
실시예 14	127	135
실시예 15	135	144
비교예 1	103	111
대조군	100	100

상기 표 5의 MMP-1 억제 효과를 나타낸 바와 같이, 모든 시험시료에 있어서 MMP-1 억제효과가 나타남을 알 수 있었으며, 대체로 사용한 추출물의 농도가 높을수록 생성된 MMP-1의 양이 감소함을 알 수 있었다. 또한, 해송자 추출물만을 함유하는 비교예 1의 조성물보다 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 실시예 1 ~ 15의 조성물이 더 효과적이며, 해송자 추출물에 부가되는 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출물의 종류가 많을수록 생성된 MMP-1의 양도 그에 따라 감소함을 알 수 있었다.

또한, 하기 표 6의 타입 1 프로콜라겐의 생합성 증가 효과를 나타낸 바와 같이, 모든 시험시료에 있어서 타입 1 프로콜라겐의 생합성 증가 효과가 나타남을 알 수 있었으며, 대체로 사용한 추출물의 농도가 높을수록 생성된 프로콜라겐의 양이 증가함을 알 수 있었다. 또한, 해송자 추출물만을 함유하는 비교예 1의 조성물보다 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 실시예 1~15의 조성물이 더 효과적이며, 해송자 추출물에 부가되는 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출물의 종류가 많을수록 생성된 프로콜라겐의 양도 그에 따라 증가함을 알 수 있었다.

[제형예 1~15 및 비교제형예 1] 화장료 조성물의 제조

상기 실시예 1~15및 비교예 1의 추출물을 함유하는 것으로 하기 표 7의 조성으로 제형예 1~15 및 비교제형예 1의 화장료 조성물을 제조하였다. 하기 표 7의 조성으로 성분 1~7까지의 유상파트와 성분 8~15항까지의 수상파트를 각각 가열하여 용해한 후, 수상을 교반하면서 유상 파트를 수상에 서서히 첨가하여 유화하였다.

상기 제형예 1~15의 화장료 조성물은 유효성분으로서 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 조성물인 반면, 비교제형예 1의 화장료 조성물은 오로지 해송자 추출물만을 함유하는 것이다. 상기 조성물은 각각 유상과 수상은 65~75 ℃에서 완전 용해시키고, 7,000 내지 8,000 rpm에서 5분간 유화시켜 크림제형을 제조하였다.

성분 (함량;중량 %)	제형예 1~15	비교제형예 1
1. 비즈왁스	2	2
2. 스테아릴알코올	3	3
3. 스테아린산	8	8
4. 스쿠알렌	10	10
5. 프로필렌글리콜모노스테아레이트	3	3
6. 폴리옥시에틸렌에테르	1	1
7. 방부제, 항산화제	적량	적량
8. 글리세린	5	5
9. 프로필렌글리콜	4	4
10. 트리에틸아민	1	1
11. 소디윰폴리아크릴레이트	0.2	0.2
12. 정제수	To 100	To 100
13. 비교예 1	-	5
14. 실시예 1~15 각각	5	-
15. 카보머	적량	적량

[시험예 4] 주름 개선 효과

상기 제형예 15 및 비교제형예 1의 주름개선효과를 알아보기 위하여 하기와 같은 방법을 수행하였다.

30대 여성 140명을 각각 20명씩 7조로 나누어　아침 저녁 매일 2회씩 8주간 지정된 눈가 부위에 제형예 15 및 비교제형예 1의 크림을 각각 도포하게 한 후, 실리콘 재질의 모사판(replica)을 제작하여 지정 부위의 주름의 상태를 화상분석기인 비지오미터(visiometer : SV60, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)로 측정하였다. 대조군으로는 제형예 15 및 비교제형예 1의 크림의 무처리군을 사용하였다. 그 결과를 하기 표 8 에 나타내었으며, 이 결과는 8주 후의 각각의 파라미터(parameter) 값에서 8주 전 파라미터 값을 뺀 것의 평균을 나타낸 것이다. 즉, 이 값이 음수가 나올수록 주름 개선 효과가 높다는 것을 의미한다.

구분	R1	R2	R3	R4	R5
제형예 15	-0.23	-0.19	-0.11	-0.09	-0.07
비교제형예 1	-0.10	-0.09	-0.05	-0.05	-0.03
대조군	0.28	0.27	0.22	0.04	0.04
R1 : 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값 R2 : 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값 들의 평균 R3 : 5개씩 나눈 R1값 중 최고치 R4 : 주름 등고선의 기선(baseline)에서 각 각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값 R5 : 주름 등고선의 기선에서 각 각의 주름 윤곽을 뺀 값의 평균값

상기 표 8 에서 알 수 있는 바와 같이, 해송자 추출물만을 함유하는 비교제형예 1의 조성물에 비하여 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물을 모두 함유한 제형예 15의 조성물의 피부 주름 개선 효과가 크게 증진되었음을 확인할 수 있었다.

[시험예 5] 각질형성세포 분화 촉진 효과

사람의 각질형성세포를 배양용 플라스크에 넣고 배양하여 약 80% 정도로 성장시킨 후, 하기 표 9의 시료를 각각 5ppm 농도로 첨가하여 4일간 처리하였다. 다음, 요소(urea)나 SDS(sodium dodecyl sulfate)와 같은 변성제 및 β-머캅토에탄올(β-mercaptoethanol)과 같은 환원제를 혼합하여 용해되는 단백질을 제거하였다. 그 후, 남은 각질층을 310㎚에서의 흡광도를 측정하여 펩타이드 농도를 분석하였으며, 음성대조군인 증류수를 기준(0%)으로 각 시료에 의한 증가량을 비교하여 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다.

물질	각질형성세포 분화촉진 효과
실시예　 1	43
실시예　 2	47
실시예　 3	45
실시예　 4	43.
실시예　 5	55
실시예　 6	57
실시예　 7	55
실시예　 8	57
실시예 9	56
실시예 10	58
실시예 11	65
실시예 12	68
실시예 13	66
실시예 14	68
실시예 15	76
비교예　 1	32
대조군(증류수)	0

상기 표 9의 결과로부터, 본 발명의 실시예 1~15의 각질형성세포 분화 촉진효과가 매우 우수함을 확인할 수 있었다.

[제형예 16~30 및 비교제형예 2] 피부 보습용 화장료의 제조

상기 실시예 1~15 및 비교예 1의 추출물을 함유하는 것으로 하기 표 10의 조성으로 제형예 16~30 및 비교제형예 2의 화장료 조성물을 제조하였다. 하기 표 10의 조성으로 성분 1~5까지의 수상파트와 성분 6~9까지의 알코올파트를 각각 실온에서 용해한 후, 수상을 교반하면서 알코올 파트를 수상에 서서히 첨가하여 가용화하였다. 다음, 알코올 파트의 첨가가 완료된 후 3-5분 가량 교반을 계속한 다음, 진공 탈기하여 화장료의 제조를 완성하였다.

성분 (함량;중량 %)	제형예 16~30	비교제형예 2
1. 정제수	To 100	To 100
2. 글리세린	3	3
3. 카보머	0.2	0.2
4. 실시예 1~15 각각	1	-
5. 비교예 1	-	1
6. 에탄올	3	3
7. 폴리옥시에틸렌하이드로제네이티드캐스터오일	3	3
8. 향	적량	적량
9. 방부제	적량	적량

[시험예 6] 피부 장벽기능 회복 효과

상기 제형예 16~30의 피부 장벽기능 회복효과를 측정하기 위해, 무모생쥐(hairless mouse)의 피부에 아세톤을 반복적으로 도포하여 장벽기능을 손상시킨 후, 표피 수분 손실량(TEWL, transdermal water loss)을 servomed사(스웨덴) evaporimeter EP1으로 측정하여 4.0g/㎡/h에 도달하면, 상기 제형예 16~30의 시료를 5㎠ 면적에 도포한 후, 표피 수분 손실량을 1시간, 2시간, 4시간, 8시간 경과 후에 측정하여 감소되는 정도를 평가함으로써 장벽기능이 회복되는 정도를 평가하였다. 이때, 공지의 지질혼합물(ceramide : cholesterol : fatty acid의 2:1:1 혼합물)을 양성 대조군으로 사용하였다. 결과는 초기 손상된 장벽 상태에서의 표피 수분 손실량을 기준(100%)으로 하여 시간에 따른 변화를 비교하여 하기 표 11에 나타내었다.

표피 수분 손실량(%)

시료	1시간 후	2시간 후	4시간 후	8시간 후
제형예 16	69	60	49	35
제형예 17	64	51	48	37
제형예 18	70	61	49	36
제형예 19	69	59	47	37
제형예 20	62	54	41	27
제형예 21	60	55	40	30
제형예 22	61	51	37	29
제형예 23	59	50	41	31
제형예 24	57	55	39	31
제형예 25	61	55	43	27
제형예 26	55	49	35	24
제형예 27	57	50	39	26
제형예 28	56	47	35	26
제형예 29	57	51	35	24
제형예 30	50	43	36	21
비교제형예 2	88	80	75	70
지질혼합물 (양성대조군)	64	43	37	26

상기 표 11의 결과에서 보는 바와 같이, 해송자추출물만을 함유하는 비교제형예 2의 조성물보다 해송자추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 제형예 16 ~ 30의 조성물이 더 효과적이며, 해송자 추출물에 부가되는 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물, 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출물의 종류가 많을수록 장벽기능 회복 효과가 더 높음을 알 수 있었다.

하기에서 본 발명에 의한 화장료 상기 조성물의 제형예들을 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

<비누제형>

성분	함량(중량%)
실시예 1 ~ 15의 추출물 각각	1.00 (%)
유지	적당량
수산화나트륨	적당량
염화나트륨	적당량
향료	소 량
정제수	To 100

<로션제형>

성분	함량(중량%)
실시예 1 ~ 15의 추출물 각각	3.00
L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염	1.00
수용성 콜라겐 (1 % 수용액)	1.00
시트르산나트륨	0.10
시트르산	0.05
감초 엑기스	0.20
1,3-부틸렌글리콜	3.00
정제수	To 100

< 크림 제형>

성분	함량(중량%)
실시예 1 ~ 15의 추출물 각각	1.00
폴리에틸렌글리콜모노스테알레이트	2.00
자기유화형모노스테아르산글리세린	5.00
세틸알코올	4.00
스쿠알렌	6.00
트리2-에틸헥산산글리세릴	6.00
스핑고당지질	1.00
1,3,-부틸렌글리콜	7.00
정제수	To 100

<팩 제형>　

성분	함량(중량%)
실시예 1 ~ 15의 추출물 각각	5.00
폴리비닐알코올	13.00
L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염	1.00
라우로일히드록시프롤린	1.00
수용성 콜라겐 (1 % 수용액)	2.00
1,3-부틸렌글리콜	3.00
에탄올	5.00
정제수	To 100

<미용액 제형>

성분	함량(중량%)
실시예 1 ~ 15의 추출물 각각	2.00
히드록시에틸렌셀룰로오스(2 % 수용액)	12.00
크산탄검(2 % 수용액)	2.00
13-부틸렌글리콜	6.00
진한 글리세린	4.00
히알루론산나트륨 (1 % 수용액)	5.00
정제수	To 100

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 의한 화장료 조성물은 유효성분으로 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하여 우수한 각질형성세포의 성장촉진 효과, 자외선에 의해 생성되는 활성산소 소거 효과, 피부기질의 분해에 관련된 자외선에 의한 MMP-1의 생합성을 감소시켜 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과, 노화방지 효과 및 피부보습 효과가 있으므로, 상기 조성물은 각질형성세포 성장촉진용 조성물, 활성산소 소거용 조성물, MMP-1의 생합성 감소를 통한 타입 1 프로콜라겐의 생합성 촉진용 조성물, 피부노화방지용 조성물 및 피부보습용 조성물로서 화장품에 유용하게 이용할 수 있다.　

Claims

삭제
유효성분으로 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 활성산소 소거용 화장료 조성물.
삭제
유효성분으로 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
유효성분으로 해송자 추출물에 매자 추출물, 적소두 추출물, 모과 추출물 및 거승자 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 보습용 화장료 조성물.
제 2항, 제 4항 및 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 물을 추출용매로 하여 추출한 것으로 특징으로 하는 화장료 조성물.
　　　　　　　제 6항에 있어서, 상기 조성물은 1,3-부틸렌글리콜을 더 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 2항, 제 4항 및 제 5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대해서 0.0001 내지 25 중량%로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.