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KR100899837B1 - 진세노사이드 Rg1 또는 Rg3를 고농도 함유하는 인삼또는 홍삼 추출물 및 이의 제조방법 - Google Patents

진세노사이드 Rg1 또는 Rg3를 고농도 함유하는 인삼또는 홍삼 추출물 및 이의 제조방법 Download PDF

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KR100899837B1
KR100899837B1 KR1020080060097A KR20080060097A KR100899837B1 KR 100899837 B1 KR100899837 B1 KR 100899837B1 KR 1020080060097 A KR1020080060097 A KR 1020080060097A KR 20080060097 A KR20080060097 A KR 20080060097A KR 100899837 B1 KR100899837 B1 KR 100899837B1
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KR
South Korea
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ginseng
acetic acid
extract
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ginsenoside
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KR1020080060097A
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임순성
강일준
김영식
Original Assignee
(주)해나천연물연구소
재단법인서울대학교산학협력재단
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Publication date
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Abstract

본 발명은 인삼 및/또는 홍삼을 고농도 초산 처리 및 열처리, 또는 초산발효 및 열처리하여 얻어진 진세노사이드 Rg1및/또는 Rg3의 함량이 증가된 인삼 추출물, 이로부터 얻어진 프로토파낙사다이올계 화합물 및/또는 프로토파낙사트리올계 화합물을 고함량으로 포함하는 분획물, 및 이들의 제조 방법에 관한 것이다.
Figure R1020080060097
진세노사이드, 초산 발효, 흡착용수지, Rg1, Rg3, Rh1, Rh2

Description

진세노사이드 Rg1 또는 Rg3를 고농도 함유하는 인삼 또는 홍삼 추출물 및 이의 제조방법{EXTRACT OF GINSENG OR RED GINSENG COMPRISING GINSENOSIDE Rg1 OR Rg3 IN HIGH CONCENTRATION AND METHOD OF PREPARING THE SAME}
본 발명은 인삼 및/또는 홍삼을 고농도 초산 처리 및 열처리, 또는 초산발효 및 열처리하여 얻어진 진세노사이드 Rg1및/또는 Rg3의 함량이 증가된 인삼 추출물, 이로부터 얻어진 프로토파낙사다이올계 화합물 및/또는 프로토파낙사트리올계 화합물을 고함량으로 포함하는 분획물, 및 이들의 제조 방법에 관한 것이다.
고려인삼은 한반도 지역에서 재배되는 Panax ginseng C.A. Meyer를 지칭하며 주로 4-6년 동안 성장한 뿌리를 약용으로 사용한다. 이 인삼은 사포닌, 페놀성 성분, 폴리아세칠렌 성분, 알카로이드 성분, 다당체 등이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 화학 성분의 조성을 살펴보면 사포닌이 3~5%, 지용성 성분이 1%, 단백질 12~16%, 탄수화물이 50~60%를 차지하며, 이들 성분들이 각각의 생리 활성을 나타내지만, 그 중 사포닌 (ginsenoside)에 대한 약물학적, 화학적 연구가 대부분을 차지 하고 있고 그 생리활성으로는 중추신경계, 각종 스트레스, 항당뇨 작용, 간 기능 강화작용, 심혈관계 장애 개선작용 등이 밝혀졌다.
그러나 인삼의 ginsenoside는 고분자 구성성분과 연결되어 있어서 섭취 후 체내 흡수가 용이하지 않으므로 반드시 장내에 서식하는 미생물에 의해 분해가 되어야 흡수된다. 즉 여러 가지 당이 떨어져 나간 ginsenoside 형태가 되어야만 인체에 잘 흡수 된다고 볼 수 있다. 예를 들어 홍삼은 수삼에는 없는 미량 성분인 ginsenoside Rg3, Rh1, Rh2 등의 특이 성분을 가지고 있다. 이 홍삼의 특이성분은 원래 수삼에 있던 ginsenoside Rb1, Rb2, Rc, Rd등의 사포닌이 변화하여 생성된 것이다. 수삼을 쪄서 건조한 홍삼은 열에 의해 생성되는 홍삼 특유 성분인 ginsenoside Rg3, Rh1, Rh2등이 암예방작용, 암세포성장 억제작용, 혈압강하 작용, 뇌신경세포 보호작용, 항혈전작용, 항산화작용이 있다고 하여 홍삼만의 특,장점으로 주목받고 있다.
또한, 홍삼 특유 성분은 인삼사포닌 배당체가 열에 의해서 가수 분해 되어 생성되는 prosaponin 형태의 인공물인데, 최근에 열이나 압력과 같은 물리적인 방법과 효소나 산을 이용한 생화학적인 방법에 의해서 고농도 인삼 prosaponin 제제가 개발되고 있다.
특히, 고려인삼은 서양삼(Panax quinquefolium)에 비해 다량의 페놀계 화합물, 폴리아세틸렌 및 산성 다당체 성분을 함유하고 있으므로, 보다 강한 생리활성이 기대된다. 고려인삼의 주된 약리성분으로 알려진 인삼 사포닌은 진세노사이드라 불리는데, 동경대학의 시바타(Shibata) 그룹에 의해 그 화학구조가 확인되었다. 이 와 같이 고려인삼에 함유되어 있는 인삼 사포닌은 30 여종으로 서양삼 14 종과 삼칠삼(Panax notoginseng) 15 종에 비해 월등히 많다. 진세노사이드는 프로토파낙사디올 (protopanaxadiol) 그룹과 프로토파낙사트리올(protopanaxatriol) 그룹으로 크게 나누어지는데, 프로토파낙사디올 그룹의 주요 성분은 진세노사이드 Rb1이고, 이는 중추신경 억제작용을 나타내며, 프로토파낙사트리올 그룹의 주요 성분은 진세노사이드 Rg1으로 중추신경 흥분작용을 나타내고, 고려인삼의 어댑토젠(adaptogen) 활성에 주요하게 기여하는 것으로 알려져 있다.
고려인삼은 프로토파낙사디올 그룹과 프로토파낙사트리올 그룹의 함량비(디올/트리올)와 진세노사이드 Rb1과 진세노사이드 Rg1의 함량비(Rb1/Rg1)가 각각 1.96과 3.14를 나타내므로, 지나친 중추신경 억제작용을 나타내는 서양삼의 2.48 및25.96에 비해 균형적이면서도, 흥분적이기 보다는 진정적인 보기작용을 나타낸다. 따라서 고려인삼은 한방 약리학적인 효능으로 보원기와 더불어 안정신(安精神) 작용의 진세노사이드 Rb1과 익지(益智)의 진세노사이드 Rg1이 균형적이면서도 안정신 작용이 강화된, 진정한 의미에서의 현대인들의 최고의 강장제라고 사료된다. 이와 같이 프로토파낙사디올 그룹과 프로토파낙사트리올 그룹의 비율은 인삼의 종류와 부위에 따라 다르며, 이들의 비율에 따라 활성차이가 있거나, 혹은 프로토파낙사디올 계 화합물 군과 프로토파낙사트리올계 화합물 분획의 기능이 각각 다르게 나타난 다는 것이 잘 알려져 있다. (Li et al. Food and Chemical Toxicology 46(2008) 886-892, Choi et al Planta medica 69(2003), Kang et al. Life science 56(1995))
따라서, 이들을 효율적으로 분획하는 방법은 중요한 개발 분야이다. 이를 분획하기 위해서 여러 화학자들은 다양한 화학적 방법을 고안하여 분획하는 방법을 개발하였다. [Sanada et al Chem. Pharm. Bull. 22 (1974), Shibata et al. Chem. Pharm. Bull. 14(1966), Osamu et al Chem. Pharm. Bull. 14 (1966)] 그러나, 인삼으로부터 이 프로토파낙사디올계 화합물 군과 프로토파낙사트리올계 화합물군을 효율적이고 단순한 과정을 거쳐 분획하는 방법은 아직 개발되지 않았다.
이상 설명한 바와 같은 고려인삼은 오랜 기간 최고의 브랜드로 인식되어 왔지만, 현재는 세계 인삼시장에서 3% 정도의 시장 점유율을 차지하고 있는 실정인데, 이와 같은 인삼산업의 혁신을 위해서는 고부가가치 인삼 제품의 개발이 필요하다. 그럼에도 불구하고 지금까지의 인삼 제제 및 홍삼 제제는 단순 추출물 수준의 제제가 주류를 이루어 강장제 정도의 수준에서 개발되고 있는 실정이다.
이에 본 발명자들은 전문적이며 기능성을 갖는 인삼 제제를 개발하기 위해서는, 무엇보다 생리활성이 강하면서 안전성이 확보된 기능성 물질이 고농도로 함유된 인삼 제제의 개발의 필요를 확인하여, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 일 실시예는 인삼의 초산균 발효물 또는 초산 가수분해물에 열처리하여 얻어진 진세노사이드 Rg1 및/또는 Rg3를 고농도로 함유하는 인삼 추출물을 제공한다.
본 발명의 다른 실시예는 상기 인삼 추출물을 흡착수지로 흡착하여 얻어진 프로토파낙사디올계 화합물 및/또는 프로토파낙사트리올계 화합물을 고농도로 함유하는 인삼 추출물을 제공한다.
본 발명의 또 다른 실시예는 상기 인삼 추출물을 제조하는 방법을 제공한다.
본 발명은 인삼의 유용한 성분, 예컨대, 프로토파낙사디올계 화합물 및/또는 프로토파낙사트리올계 화합물, 특히, 진세노사이드 Rg1 및 Rg3의 함량이 고도로 증가된 인삼 추출물 제조 기술을 제공한다.
본 발명자들은 인삼에 단순히 산을 첨가하는 것이 아닌 초산균을 이용한 초산 발효를 수행하고 열처리하면 진세노사이드 성분, 특히 진세노사이드 Rg3, Rh1 및 Rh2 성분의 함량이 증가하는 것을 발견하였으며, 산을 처리하는 경우에도 그 농 도에 따라 미량으로 존재하는 진세노사이드 Rg1, Rg3, Rh1 및 Rh2 등의 유효성분의 함량이 현저하게 증가하는 것을 발견하였으며, 또한, 이들 초산가수분해물을 대상으로 기존에 알려진 폴리스틸렌계 흡착고분자 등을 활용하여 인삼의 초산균 발효물 또는 초산가수분해물을 흡착시키고, 증류수와 주정의 비율을 조정하여 가수분해에 사용한 초산을 완전히 제거함으로써, 프로토파낙사트리올계 화합물 (진세노사이드 Rg1, Re) 및 프로토파낙사디올계 화합물 (진세노사이드 Rg3, Rd, Rc, Rb1)을 효과적으로 분획하여 본 발명을 완성하였다.
우선, 본 발명은 진세노사이드 Rg1 및/또는 Rg3의 함량이 현저하게 증가된 인삼 추출물 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 있어서, 상기 제조 방법은 인삼을 초산균을 이용하여 초산 발효하는 단계, 및 상기 얻어진 인삼의 초산 발효물을 가열하여 추출하는 단계를 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 실시예에 있어서, 상기 제조 방법은 인삼에 12 내지 30 v/v%, 바람직하게는 15 내지 25 v/v%의 고농도 초산을 인삼의 3 내지 15 w/w%, 바람직하게는 5 내지 10 v/w%로 처리하는 단계, 및 상기 인삼의 초산 처리물을 가열 처리하는 단계를 포함할 수 있다.
상기와 같은 초산균 발효 또는 초산 처리, 및 열처리 단계를 거침으로써, 인삼에 미량으로 존재하거나 존재하지 않는 유용 성분인 진세노사이드 Rg1 및/또는 Rg3의 함량이 현저하게 증가된 인삼 추출물을 제조할 수 있다.
인삼은 두릅나무과 약용식물로서, 가공 방법에 따라서 가공하지 아니한 수 삼, 수삼을 건조시킨 건삼 (백삼), 수삼을 쪄서 건조시킨 홍삼, 등이 있으며, 재배 방법에 따라서, 인삼밭에서 인위적으로 재배한 재배삼, 인삼씨를 산중에 뿌려서 자연 상태에서 재배한 장뇌삼, 자연상태로 자생한 산삼 등이 있으며, 본 발명에서의 인삼은 상기 모든 인삼 종류를 포함하는 의미로 사용된다. 본 발명에서, 상기 인삼은 4 내지 6년근인 것이 좋으나, 이에 한정되지 않는다.
이 중에서 특히 수삼을 찌고 건조하여 얻어진 홍삼은 열에 의하여 생성되는 홍삼 특유 성분인 진세노사이드 Rg3, Rg2, Rh1, Rh2 등이 암예방작용, 암세포성장 억제작용, 혈압강하 작용, 뇌신경세포 보호작용, 항혈전작용, 항산화작용이 있다고 알려져 있다.
본 발명의 인삼 추출물의 제조방법에 따르는 경우, 얻어지는 인삼 추출물 내에 상기 진세노사이드 Rg1, Rg3, Rg2, Rh1, Rh2 등의 유효성분이 생성되거나 함량이 증가하여, 보다 증대된 항당뇨, 항암, 혈압강하, 뇌신경보호, 항혈전 및 항산화 등의 유리한 효과를 기대할 수 있다. 또한, 본 발명에 따르는 경우 홍삼 이외의 인삼을 사용하는 경우에도 홍삼과 비교하여 동등 이상의 유효성분을 고함량으로 함유할 수 있게 된다는 이점이 있다.
상기 초산 발효는 인삼과 초산균 또는 초산균 배양물을 혼합하고 발효시켜 수행하는 것으로, 바람직한 인삼의 초산균 발효물을 얻기 위하여, 초산균을 사용하는 경우 배지 100ml당 3 x 107 내지 5 x 107 CFU로 사용하고, 초산균 배양물을 이용하는 경우 상기 배양물의 산도는 약 1 내지 10 %, 바람직하게는 2.5 내지 5 %인 것 이 좋으며, 인삼을 상기 배양물의 약 0.1 내지 10 w/v%, 바람직하게는 0.1 내지 2 w/v%의 양으로 사용할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 초산균은, 특별한 제한은 없으나, 아세토박터 아세티(Acetobacter aceti), 아세토박터 서브복크시단스(Acetobacter suboxydans), 아세토박터 쿠진지아누스(Acetobacter kutzingianus), 아세토박터 슈첸바히(Acetobacter schutzenbachii), 아세토박터 오를레앙스(Acetobacter orleanense), 아세토박터 비니아세타티(Acetobacter viniacetati), 아세토박터 로세움(Acetobacter roseum), 아세토박터 자일리넘(Acetobacter xylinum) 및 아세토박터 커붐(Acetobacter curvum)으로 이루어지는 군에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 바람직하게는 아세토박터 아세티(Acetobacter aceti)일 수 있다.
상기 발효는 통상적인 조건하에서 수행하며, 예컨대, 약 25 내지 35℃에서 10 내지 120 시간, 바람직하게는 24 내지 80시간 동안 수행하는 것일 수 있다.
상기 가열 단계는 약 60 내지 150 ℃, 바람직하게는 90 내지 120 ℃의 온도에서 수행하는 것이 좋으며, 환류추출, 열수추출, 초음파추출 등의 방법에 의하여 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니고 통상적인 열추출 방법을 모두 이용할 수 있다.
본 발명의 또 다른 실시예에 있어서, 상기 제조 방법은 상기 초산균 발효 또는 고농도 초산 처리 단계 이후의 가열 처리 단계 다음에, 폴리스타이렌계 흡착수지, 폴리스티렌-다이비닐벤젠계 흡착 수지 및 이온교환수지 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 흡착용 수지를 이용하여 상기 가열처리된 추출물을 흡착시키 고 알코올 또는 물과 알코올의 혼합물로 탈착시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 예컨대, 상기 흡착 수지는 폴리스티렌계, 폴리스티렌-다이비닐벤젠계, diaion HP 시리즈, Amberlite XAD 시리즈 (Amberlite XAD-2, 4, 7, 8, 16, 1180, 1600), 2MG, Sepabead SP-850 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 것일 수 있다.
이와 같은 방법으로 진세노사이드 Rg1, Re 등의 프로토파낙사트리올계 화합물 및/또는 진세노사이드 Rg3, Rd, Rc, Rb1 등의 프로토파낙사디올계 화합물의 함량이 현저하게 증가된 인삼 추출물을 제조할 수 있다. 또한, 상기 탈착 단계에서 사용되는 알코올의 농도에 따라서 프로토파낙사트리올계 화합물 또는 프로토파낙사디올계 화합물을 고농도로 함유하는 분획물을 얻을 수 있다. 예컨대, 알코올 농도가 30 내지 70 v/v%, 바람직하게는 약 50 v/v%인 경우에는 프로토파낙사트리올계 화합물이, 진세노사이드 총량에 대하여, 21.3 w/w% 이상, 바람직하게는 25 w/w% 내지 99.99 w/w%의 고농도로 함유된 프로토파낙사트리올계 화합물 분획을 얻을 수 있다. 또한, 알코올 농도가 90 내지 100 v/v%인 경우에는 프로토파낙사디올계 화합물이, 진세노사이드 총량에 대하여, 80 w/w% 이상, 바람직하게는 82 내지 95 w/w%의 고농도로 함유된 프로토파낙사디올계 화합물 분획을 얻을 수 있다. 상기 알코올은 탄소수 1 내지 5의 알코올 및 주정으로 이루어진 군에서 선택된 것일 수 있다.
상기 프로토파낙사디올계 화합물은 진세노사이드 Rh2, Rg3, Rd, Rc, Rb1, 및 Rb3를 포함하며, 상기 프로토파낙사트리올계 화합물은 진세노사이드 Rh1, Rg2, Rg1, Re, 및 Rf를 포함한다.
또 다른 실시예에 있어서, 본 발명에 따른 제조 방법은 상기와 같은 가열에 의한 추출단계, 또는 흡착 및 탈착 단계 이후에, 물, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지형 알코올, 헥산, 아세톤, 에틸아세테이트 등으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매, 바람직하게는 이소프로판올 또는 부탄올로 추출하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
또 다른 측면에 있어서, 본 발명은 상기 제조방법에 의해서 제조되고, 진세노사이드 Rg1 및 Rg3를 비롯하여 Rh1, Rh2, Rd, Rc, Rb1, Rb3, Rg2, Rg1, Re, 및 Rf 등의 진세노사이드류 화합물 함량이 현저하게 증가된 인삼 추출물을 제공한다.
상기 제조 방법, 특히 초산균 발효 및 열처리에 의하여 얻어진 인삼 추출물은 진세노사이드 Rg3 함량이 현저하게 증가된 것을 특징으로 하며, 예컨대, 진세노사이드 Rg3 함량이, 전체 추출물의 총량을 기준으로, 약 9.62 w/w% 이상, 바람직하게는 9.62 내지 30 w/w%, 보다 바람직하게는 9.62 내지 23.57 w/w%인 것일 수 있다.
또한, 상기 제조 방법, 특히 고농도 초산 처리 및 열처리에 의하여 얻어진 인삼 추출물은 진세노사이드 Rg1의 함량이 현저하게 증가된 것을 특징으로 하며, 예컨대, 진세노사이드 Rg1의 함량이, 전체 추출물의 총량을 기준으로, 약 1.58 w/w% 이상, 바람직하게는 1.58 내지 20 w/w%, 보다 바람직하게는 1.58 내지 12.88 w/w%인 것일 수 있다.
또한, 본 발명에 인삼 추출물은 진세노사이드 Rg1 및 Rg3 이외에도, 전체 추출물의 총량을 를 기준으로, 진세노사이드 Rh1를 0.29 w/w% 이상, 바람직하게는 0.29 내지 3.12 w/w%, 진세노사이드 Rh2를 0.32 w/w% 이상, 바람직하게는 0.32 내지 9.32 w/w%를 함유하는 것일 수 있다.
또 다른 실시예에 있어서, 상기한 바와 같은 흡착수지를 이용한 흡착 및 탈착에 의하여 얻어진 인삼 추출물은, 90 내지 100 v/v% 알코올에 의하여 탈착된 것으로, 진세노사이드 총 중량을 기준으로, 프로토파낙사디올계 화합물 함량이 79 w/w% 이상, 바람직하게는 79 내지 99.9 w/w%, 보다 바람직하게는 79 내지 90 w/w%인 것일 수 있으며, 이 중에서 진세노사이드 Rg3의 함량이 20 w/w% 이상, 바람직하게는 20 내지 80 w/w, 보다 바람직하게는 50 내지 70 w/w%인 것일 수 있다. 또는, 상기한 바와 같은 흡착수지를 이용한 흡착 및 탈착에 의하여 얻어진 인삼 추출물은, 30 내지 70 v/v%, 바람직하게는 약 50 v/v% 알코올에 의하여 탈착된 것으로, 진세노사이드 총 중량을 기준으로, 프로토파낙사트리올계 화합물 함량이 22 w/w% 이상, 바람직하게는 22 내지 99.99 w/w%, 보다 바람직하게는 50 내지 99.99 w/w%인 것일 수 있으며, 이 중에서 Rg1의 함량이 4 w/w% 이상, 바람직하게는 5 내지 60 w/w%, 보다 바람직하게는 30 내지 50 w/w%인 것일 수 있다.
상기한 바와 같이, 본 발명에 따른 인삼 추출물에 함유된 진세노사이드 Rg3, Rg2, Rh1, Rh2 등은 항당뇨, 암예방 작용, 암세포성장 억제작용, 혈압강하 작용, 뇌신경세포 보호작용, 항혈전작용, 항산화작용 등이 있다고 알려져 있다.
따라서, 본 발명의 또 다른 측면은 상기와 같은 인삼 추출물을 포함하는 당뇨, 암, 고혈압, 뇌신경질환(기억력감퇴, 치매) 및/또는 혈전 치료 또는 예방용 조성물을 제공한다.
상기 치료 또는 예방용 조성물은 상기 인삼 추출물을 단독 유효성분으로 단독으로 포함하거나, 해당 질병 유효 치료 성분을 1종 이상 추가로 포함할 수 있고, 이외 제형 형태, 사용방법 및 사용목적에 따라 추가성분 즉, 약제학적으로 허용되거나 영양학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 및/또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다.
보다 상세하게는 상기 예방 또는 치료용 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. 또한, 상기 담체, 부형제 또는 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아키시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀루로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다.
상기 예방 또는 치료용 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 인삼 추출물을 0.001 중량% 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 99 중량%, 더욱 바람직하게는 1중량% 내지 50 중량% 포함될 수 있다. 또한, 상기 추가성분의 함량은 바람직하게는 상기 항진균 조성물 100 중량부 당 0.1 내지 20 중량부 범위에서 추가할 수 있다.
또한, 상기 예방 또는 치료용 조성물은 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구 모두 사용 할 수 있다.
구체적으로 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 인삼 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 예방 또는 치료용 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당 업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 과립제, 산제, 시럽제, 액제, 현탁제, 정제, 주사제, 주정제, 카타플라스마제(cataplasma), 캅셀제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.
더 나아가 본 발명의 예방 또는 치료용 조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 바람직하게 제형화될 수 있다.
본 발명에 따른 예방 또는 치료용 조성물의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 일예로, 본 발명의 예방 또는 치료용 조성물은 상기 항균조성물을 기준으로 할 때, 0.0001 mg/kg 내지 1000 mg/kg으로, 보다 효과적이기 위해서는 0.01 mg/kg 내지 100 mg/kg으로 투여할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 상기 인삼 추출물을 포함하는 식품을 제공한다. 본 명세서에서 식품이란 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 통상의 식품, 음료, 식품 첨가제, 음료 첨가제, 건강기능성 식품 등을 모두 포함하는 의도이다.
본 발명의 식품은 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식 품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 건강기능식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.
본 발명에서 건강기능식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다.
상기 건강기능식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.
본 발명에서 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 건강기능음료를 포함하는 의도이다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 인삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상기의 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 식품 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 5 내지 12g일 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 본 발명의 인삼 추출물을 100 중량부 당 0 내지 20 중량부 범위에서 선택될 수 있다.
본 발명에서 건강기능음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.
상기 건강기능음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명의 인삼 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.
상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디 사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 5 내지 12 g이다.
본 발명의 식품은 상기 인삼 추출물을 전체 식품 중량의 0.001 내지 50 중량%, 0.01 내지 20 중량%의 양으로 포함할 수 있으며, 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.001 내지 10 g, 바람직하게는 0.1 내지 5g의 비율로 포함할 수 있다.
본 발명의 초산 고농도 처리 또는 초산발효, 및 열처리에 의하여 얻어진 진세노사이드 Rg1 및 Rg3의 함량이 증가 된 인삼 추출물 및 이의 제조방법은, 인삼, 예컨대 홍삼을 고농도 초산 처리 또는 초산 발효시킨 후, 가열 추출하여 인삼에 미량으로 존재하거나 존재하지 않는 진세노사이드 Rg1, Rg3, Rh1, Rh2의 함량을 증가시키고, 흡수가 용이하고 뛰어난 생리 활성 효과를 나타내므로, 진세노사이드 Rg1, Rg3, Rh1, Rh2 등의 유리한 효과를 이용하는 각종 의약, 식품 제조에 사용 가능하다.
또한, 이들 추출물을 대상으로 폴리스틸렌계 흡착고분자를 활용하여 인삼 초산가수분해물을 흡착시키고, 증류수를 사용하여 가수분해에 사용한 초산을 완전히 제거하고, 주정과 증류수의 비율을 조절하여 프로토파낙사트리올계 화합물 (진세노사이드 Rg1, Re) 프로토파낙사디올계 화합물 (진세노사이드 Rg3, Rd, Rc, Rb1)을 효과적으로 분획하여 용도에 따라 프로토파낙사트리올계와 프로토파낙사디올계 화합물의 비율을 조절할 수 있는 소재로서의 가치가 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 인삼의 전처리
6년근 수삼 (경동시장 구입) 50 kg을 깨끗이 세척하여 절단 후 열풍건조기에 말린 후 분쇄기(PIN MILL, MYEONG WOO MICRON SYSTEM, Korea)를 사용하여 분말 10.2 kg을 얻었다.
실시예 2. 초산균 배양
Glucose 5g, Yeast extract 1g, Peptone 1g, Ethanol 5ml, 및 Distilled water 95ml를 함유하는 배지를 만들고, 여기에 Acetobacter aceti 균 4 x 107 CFU를 접종해서 shaking Incubation에서 30℃, 180rpm으로 초산균을 배양해서 3%의 산 농 도를 가진 초산균 배양물을 제조하였다.
실시예 3. 홍삼의 제조
6년근 건삼 2 kg을 홍삼제조기(고려천삼제조기 KG-700)에 넣어 24시간 훈증하여65℃ dry oven에 말려 검은색의 홍삼 1.98 kg을 얻었다.
대조예 1. 인삼 추출물 대조군(control)의 제조
대조군은 증류수 90ml에 10w/v%가 되도록 상기 실시예 1에서 제조된 건삼 분말을 넣은 뒤, 2시간 동안 100 ℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결건조하여 대조군 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
비교예 1. 인삼의 산 및 열처리 추출물의 제조
3% 초산(glacial acetic acid) 90ml에 10w/v%가 되도록 상기 실시예 1에서 제조된 건삼 분말을 넣은 뒤, 2시간 동안 100 ℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화 BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 산 및 열처리 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
비교예 2. 인삼의 초산발효 추출물의 제조
상기 실시예 2에서 제조한 초산균을 이용한 배양물에 2w/v%가 되도록 상기 실시예 1에서 제조된 건삼 분말을 넣은 뒤, 30℃에서 Shaking Incubation에서 72h동안 발효시켰다. 상기 발효물에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심분리하여 수포화BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 초산발효 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
실시예 4. 인삼의 초산발효 및 열처리 추출물의 제조
상기 실시예 2에서 제조한 초산균을 이용한 배양물에 2w/v%가 되도록 상기 시릿예 1에서 제조된 건삼 분말을 넣은 뒤 30℃에서 Shaking Incubation에서 72h동안 발효시킨 후 2시간 동안 100 ℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 수포화BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 초산발효 및 열처리 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
대조예 2. 홍삼의 대조군(control) 추출물의 제조
증류수 90ml에 10w/v%가 되도록 상기 실시예 3에서 제조된 홍삼을 넣은 뒤 2시간 동안 100 ℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 수포화 BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동 결건조하여 홍삼의 대조군 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
비교예 3. 홍삼의 산 및 열처리 추출물의 제조
3% 초산(glacial acetic acid) 90ml에 10w/v%가 되도록 상기 실시예 3에서 제조된 홍삼을 넣은 뒤 2시간 동안 100℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 수포화 BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 산 및 열처리 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
비교예 4. 홍삼의 초산발효 추출물의 제조
상기 실시예 2에서 제조한 초산균을 이용한 배양물에 2w/v%가 되도록 상기 실시예 3에서 제조된 홍삼을 넣은 뒤, 30℃에서 Shaking Incubation에서 72h동안 발효시켰다. 얻어진 발효물에 동량의 수포화 BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 수포화 BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 초산발효 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
실시예 5. 홍삼의 초산발효와 열처리 추출물의 제조
상기 실시예 2에서 제조한 초산균을 이용한 배양물에 10w/v%가 되도록 상기 실시예 3에서 제조된 홍삼을 넣은 뒤, 30℃에서 Shaking Incubation에서 72h동안 발효시킨 후 2시간 동안 100 ℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화 BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 수포화 BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 초산발효 및 열처리 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
비교예 5. 1% 초산 산 및 열처리 인삼 추출물의 제조
1% 초산(glacial acetic acid) 90ml에 10w/v%가 되도록 실시예 1에서 제조된 건삼 분말을 넣은 뒤, 2시간 동안 100 ℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 산 및 열처리 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
비교예 6. 5% 초산 산 및 열처리 인삼 추출물의 제조
5% 초산(glacial acetic acid) 90ml에 10w/v%가 되도록 실시예 1에서 제조된 건삼 분말을 넣은 뒤 2시간 동안 100 ℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 수포화BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 산 및 열처리 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
비교예 7. 10% 초산 산 및 열처리 인삼 추출물의 제조
10% 초산(glacial acetic acid) 90ml에 10w/v%가 되도록 실시예 1에서 제조된 건삼 분말을 넣은 뒤 2시간 동안 100 ℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 수포화BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 산 및 열처리 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
실시예 6. 20% 초산 산 및 열처리 인삼 추출물의 제조
20% 초산(glacial acetic acid) 90ml에 10w/v%가 되도록 실시예 1에서 제조된 건삼 분말을 넣은 뒤 2시간 동안 100 ℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 수포화BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 산 및 열처리 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
대조예 3. 1% 초산 산 및 열처리 인삼 추출물의 제조
1% 초산(glacial acetic acid) 10 liter 에 10w/v%가 되도록 실시예 1에서 제조된 건삼 분말을 넣은 뒤 2시간 동안 100℃에서 환류 추출하고, 냉각시켰다. 여기에 동량의 수포화BuOH를 넣고 7500 rpm으로 원심 분리하여 BuOH층을 취한 후, 이를 감압농축 및 동결 건조하여 산 및 열처리 추출물을 제조하였다. 상기 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
실시예 7. diaion HP-20 컬럼을 이용한 프로토파낙사트리올계 화합물 고농도 함유 추출물 제조
Diaion HP-20 (Mitsubishi Chem. Ind. Co, Ltd.) 3kg을 직경 10cm 길이 1200cm의 유리 컬럼에 장치하여, 초기 아세톤 (5 liter)를 흘려 세척한 후 증류수로 이차 세척을 하고, 상기 초산처리 후 가열 추출물 5liter를 로딩하여 흡착을 시킨 후, 먼저 증류수 20 liter 를 넣어 당과 초산을 세척하였다. 그리고 나서, 50 v/v% 주정을 사용하여 흡착된 사포닌을 탈착시켰다. 얻어진 탈착물을 감압 농축하고, 동결 건조하여 31.68g의 프로토파낙사트리올계 화합물 분획을 수득하였다. 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
실시예 8. 프로토파낙사디올 계 화합물 분획
상기의 프로토파낙사트리올계 화합물 분획을 획득한 후, 100 v/v% 주정을 사용하여 흡착된 사포닌을 탈착시켰다. 얻어진 탈착물을 감압 농축하고, 동결 건조하여 8.58g의 프로토파낙사디올계 화합물 분획을 수득하였다. 얻어진 추출물은 HPLC법에 준하여 분석하여 함유 성분을 분석하였다.
실험예 : HPLC 법을 통한 진세노사이드 함량 및 성분 확인
상기 실시예 4 내지 8, 대조예 1 내지 3 및 비교예 1 내지 7에서 제조된 추출물을 동일 농도로 환산하여 대조군은 1.462 mg/mL, 비교예 1 (1% 초산 + 가열군) 은 1.624 mg/mL, 비교예 2 (초산발효군)는 1.534 mg/mL, 실시예 3 (초산발효 + 열처리군)은 1.926 mg/mL, 대조예 2(홍삼)은 0.5782mg/mL, 비교예 3 (홍삼+ 1%초산+가열군)은 0.612 mg/mL, 비교예 4 (홍삼+ 초산발효군)은 0.628 mg/mL, 실시예 5 (홍삼+초산발효+열처리군)은 0.657 mg/mL, 비교예 5 (1%초산+가열군)은 1.512 mg/mL, 비교예 6 (5%초산+가열군)은 1.325 mg/mL, 비교예 7 (10%초산+가열군)은 1.531 mg/mL, 실시예 6 (20%초산+가열군)은 1.638 mg/mL, 대조예 3 (1%초산+가열군)은 1.342 mg/mL, 실시예 7 (프로토파낙사트리올 분획)은 1.342 mg/mL, 실시예 8 (프로토파낙사다이올 분획)은 1.342 mg/mL 로 메탄올에 녹여 0.45 μm syringe filter 하여 vial에 담아 HPLC로 확인하였다. HPLC 분석조건은 표 1에 나타내었으며, 얻어진 성분 분석 결과를 그 결과는 아래의 표 2, 3, 4 및 도 1, 2, 3, 4에 나타내었다.
[표 1]
Instrument                Agillent 1100 series
HPLC Column PrevailTM Carbohydrate ES, 5μm, 250mm X 4.6mm
Mobile phase   A: Acetonitrile : Water :Isopropyl alcohol (80:5:15)   B: Acetonitrile : Water :Isopropyl alcohol (80:25:15)
Gradient   28 min 25-85B%, 35 min 85-80B%,    45 min 80-75B%, 50 min 75-90B%,   51 min 90-100B%, 55 min 100-25B%
Detector   Alltech ELSD 2000
Flow rate   0.8 mL/min
Injection Vol.   5 μL
ELSD Drift Tube Temperature 110℃
Gas Flow rate 2.5SLPM
Gain 1
Gas Nitrogen(purity=99.9%)
[표 2] (단위: 인삼 건량 기준으로 한 중량%)
진세노사이드 성분 인삼대조군 (대조예 1) 인삼초산가열 (비교예1) 인삼초산발효 (비교예2) 인삼초산발효후 가열처리 (실시예 4)
Rh2 0 0.082 0.095 0.102
Rh1 0.021 0.119 0.098 0.302
Rg2 0.028 0.139 0.118 0.334
Rg3 0 3.998 3.702 9.660
Rg1 1.690 0.629 0.400 1.627
Rf 0.069 0.099 0.077 0.177
Re 0.415 0.073 0.048 0.128
Rd 0 0 0 0
Rc 0.168 0 0 0
Rb3 2.360 0.775 0.621 2.323
Rb1 0.319 0 0 0
추출수율 (%) 25.5 28.1 30.2 32.5
실험결과, 상기 표 2에서 나타나는 바와 같이, 본 발명의 실시예 4에 따른 초산발효 및 가열처리에 의하여 얻어진 인삼 추출물에서는 대체적으로 당이 많이 붙어 있는 화합물군 진세노사이드 (Rb1, Rb3, Rc, Re, Rg1 등)의 함량은 감소하고, 당이 잘린 형태인 진세노사이드 (Rg3, Rg2, Rh 1, Rh2 등)이 증가함하는 것으로 나타났다. 특히 진세노사이드 Rg3의 증가가 가장 두드러지게 확인되었으며, 초산+가열군 (비교예 1), 초산발효군 (비교예 2) 보다 이 두 과정을 합친 초산발효 후 가열과정을 거친 인삼 추출물의 진세노사이드 Rg3 함량이 현저하게 증가하는 것을 확인할 수 있다. 또한 상기 결과를 나타낸 도 1를 통해서도 초산발효 후 가열처리 조건에서 진세노사이드 Rg3의 증가를 관찰할 수 있다.
[표 3] (단위: 홍삼 건량 기준으로 한 중량%)
진세노사이드 성분 홍삼대조군 (대조예2) 홍삼초산가열 (비교예3) 홍삼초산발효 (비교예 4) 홍삼초산발효후 가열처리 (실시예 5)
Rh2 0.034 0.058 0.067 0.124
Rh1 0.326 2.251 1.322 2.331
Rg2 0.468 0.985 0.864 1.898
Rg3 0.898 1.348 0.943 4.856
Rg1 2.487 0.087 0.287 0.187
Rf 0.894 - - -
Re 1.067 0.145 0 -
Rd 0 0 0 0
Rc 1.259 - - -
Rb3 0.051 - 0 0
Rb1 0.021 - - -
추출수율 28.1 29.8 29.4 29.6
실험결과, 상기 표 3에서 나타나는 바와 같이, 본 발명의 실시예 5에 따른 초산발효 및 가열처리에 의하여 얻어진 홍삼 추출물에서는 대체적으로 당이 많이 붙어 있는 화합물군 진세노사이드 (Rb1, Rb3, Rc, Re 등)의 함량은 감소하고, 당이 잘린 형태인 진세노사이드 (Rg3, Rg2, Rh 1, Rh2 등)이 증가하는 것으로 나타났다. 특히 진세노사이드 Rg3의 증가가 가장 두드러지게 확인되었으며, 초산+가열군 (비교예 3), 초산발효군 (비교예 4) 보다 이 두 과정을 합친 초산발효 후 가열과정을 거친 인삼 추출물의 진세노사이드 Rg3 함량이 현저하게 증가하는 것을 확인할 수 있다. 또한, 상기 결과를 나타낸 도 2를 통해서도, 홍삼의 초산발효 후 가열처리 조건에서 진세노사이드 Rg3의 증가를 관찰할 수 있다.
[표 4] (단위: 인삼 건량 기준으로 한 중량%)
진세노사이드 성분 대조군 (대조예1) 1%초산가열 (비교예 5) 5%초산가열 (비교예6) 10%초산가열 (비교예7) 20%초산가열 (실시예 6)
Rh2 0 0.072 0.072 0.098 0.112
Rh1 0 0.124 0.110 0.181 0.175
Rg2 0 0.129 0.089 0.132 0.132
Rg3 0 3.254 2.744 4.892 4.368
Rg1 1.690 0.712 0.452 1.724 4.213
Rf 0.069 0.085 0.073 0.074 0.074
Re 0.415 0.068 0.045 0.069 0.105
Rd 0 0 0 0 0
Rc 0.168 0 0 0 0
Rb3 2.360 0.853 0.452 0.175 0.012
Rb1 0.319 0 0 0 0
추출수율(%) 25.5 28.2 28.5 29.8 32.7
실험결과, 상기 표 4에서 나타나는 바와 같이, 본 발명의 실시예 6에 따른 20% 초산가열처리에 의하여 얻어진 인삼 추출물에서는 대체적으로 당이 많이 붙어 있는 화합물군 진세노사이드 (Rb1, Rb3, Rc, Re 등)의 함량은 감소하고, 당이 잘린 형태인 진세노사이드 (Rg3, Rg1, Rg2, Rh 1, Rh2 등)이 증가함하는 것으로 나타났다. 특히 진세노사이드 Rg3와 Rg1의 증가가 가장 두드러지게 확인되었으며, 초산농도가 낮은 비교예 5, 6, 및 7보다 15% 이상, 약 20% 정도 이상의 고농도 초산처리 후 가열과정을 거친 인삼 추출물의 진세노사이드 Rg3 와 Rg1 함량이 현저하게 증가하는 것을 확인할 수 있다. 상기 결과를 나타낸 도 3을 통해서도, 20% 초산농도 처리군에서 진세노사이드 Rg1과 Rg3의 증가를 관찰할 수 있다.
[표 5] (단위: 인삼 추출물 총량을 기준으로 한 중량%)
진세노사이드 성분 대조군 (대조예3) 프로토파낙사트리올분획 (실시예7) 프로토파낙사디올 분획 (실시예 8)
Rh2 0.48 0 0.54
Rh1 0.61 0.05 5.23
Rg2 0.72 0 1.26
Rg3 19.78 0 58.5
Rg1 3.17 39.41 0.01
Rf 0.52 0 3.24
Re 0.32 12.34 0
Rd 0.05 0.04 1.21
Rc 0.01 0 2.52
Rb3 3.29 0 0
Rb1 0 0 2.34
총사포닌 18.77 51.84 74.85
프로토파낙사디올 계 (Rh2+Rg3+Rd+Rc+Rb1+Rb3)/ Ginsenosides (Rh2+Rh1+Rg2+Rg3+Rg1+Rf+Re+Rd+Rc+Rb3+Rb1) 78.9 0.08 86.99
프로토파낙사트리올 계 (Rh1+Rg2+Rg1+Re+Rf)/ Ginsenosides (Rh2+Rh1+Rg2+Rg3+Rg1+Rf+Re+Rd+Rc+Rb3+Rb1) 21.1 99.92 13.01
상기 표 5는 초산 가수분해물을 대상으로 흡착수지 (Diaion HP-20)를 이용하여 사포닌을 흡착시키고, 주정의 농도를 조절하여 프로토파낙시디올계 화합물과 프로토파낙시트리올계 화합물의 분획을 얻은 결과를 추출물에 대한 사포닌 조성과 함량을 나타낸 것이다. 대조예 3의 총사포닌 함량의 경우 추출물에 18.77%에 그치고 있으나, 본 발명의 실시예 7, 8에 따른 diaion HP-20 흡착과 탈착과정을 거친 분획의 경우 프로토파낙시디올계 화합물은 51.84%, 프로토파낙시트리올계 화합물은 74.85%의 높은 사포닌 함량을 나타낸다. 또한, 실시예 7의 경우, 프로토파낙시디올계 화합물 중에서 Rg1 (39.41%), Re (12.34%)의 높은 선택성과 함량을 나타내며, 실시예 8의 경우는 선택적으로 진세노사이드 Rg3가 58.5%로 함량이 현저하게 증가하는 것을 확보 할 수 있는 기술이라 할 수 있다. 상기 결과를 나타낸 도 4를 통해서도, 에탄올 50%로 탈착한 분획물에 프로토파낙사트리올계 화합물이 주요물질을 차지하고, 에탄올 95%로 탈착한 분획물에서는 프로토파낙사디올계 화합물이 주를 이루는 것을 관찰할 수 있다.
도 1은 인삼의 초산가열, 초산발효, 초산발효 후 가열처리 조건에 따른 진세노사이드 Rg3의 함량 변화를 HPLC chromatogram으로 나타낸 그래프이다.
도 2는 홍삼의 초산가열, 초산발효, 초산발효 후 가열처리 조건에 따른 진세노사이드 Rg3 함량 변화를 HPLC chromatogram으로 나타낸 그래프이다.
도 3은 가열처리 인삼에 있어 초산 농도에 따른 진세노사이드 Rg3, 및 Rg1 함량 변화를 HPLC chromatogram으로 나타낸 그래프이다.
도 4는 Diaion HP-20 column을 사용한 흡착에 의한 진세노사이드의 프로토파낙사디올계 화합물과 프로토파낙사트리올계 화합물의 분획한 정도를 HPLC chromatogram으로 나타낸 그래프이다.

Claims (17)

  1. 삭제
  2. 초산균인 아세토박터 아세티(Acetobacter aceti) 또는 산도 1 내지 10%인 상기 초산균의 배양물을 이용하여 인삼을 초산균 발효하는 단계; 및
    상기 얻어진 인삼의 초산균 발효물을 60 내지 150℃로 가열하여 추출하는 단계
    를 포함하고,
    상기 얻어진 추출물 내의 Rg3 함량이 9.62 내지 30 w/w%인 것을 특징으로 하는
    인삼 추출물의 제조 방법.
  3. 삭제
  4. 제2항에 있어서,
    상기 인삼은 홍삼, 수삼, 건삼, 장뇌삼, 및 산삼으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 것인 제조 방법.
  5. 제2항에 있어서,
    상기 가열 추출 단계 이후에 물, 및 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출하는 단계를 추가로 포함하는 제조 방법.
  6. 제2항에 있어서,
    상기 가열 추출 단계는 환류추출, 열수추출, 및 고압추출로 이루어진 군에서 선택된 추출 방법으로 수행하는 것인 제조 방법.
  7. 제2항에 있어서,
    폴리스틸렌계 수지, 폴리스티렌-다이비닐벤젠계 수지, 및 이온 교환 수지로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 흡착 수지를 사용하여 상기 얻어진 추출물을 흡착시키는 단계를 추가로 포함하는 제조 방법.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 흡착단계 이후에, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 알코올, 및 상기 알코올과 물과의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 용매로 탈착하는 단계를 추가로 포함하는 제조 방법.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 탈착 단계 이후에, 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지형 알코올로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 알코올, 및 상기 알코올과 물과의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 용매로 추출하는 단계를 추가로 포함하는 제조 방법.
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 제8항에 있어서,
    상기 용매는 30 내지 70 v/v%의 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지형 알코올이고,
    진세노사이드 총량에 대하여, 프로토파낙사트리올계 화합물 함량이 25 w/w% 내지 99.99 w/w%인 프로토파낙사트리올계 화합물 분획이 얻어지는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
  17. 제9항에 있어서,
    상기 용매는 90 내지 100 v/v%의 탄소수 1 내지 5의 직쇄 또는 분지형 알코올이고,
    진세노사이드 총량에 대하여, 프로토파낙사디올계 화합물 함량이 82 w/w% 내지 95 w/w%인 프로토파낙사디올계 화합물 분획이 얻어지는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
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