KR100898311B1 - 두유 복합발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 두유를 기질로 하여 유산균과 효모를 복합 배양하여 얻어진 발효액으로부터 제조한 추출물을 함유하는 화장료에 관한 것으로서, 세포재생, 주름개선 효과, 미백, 항염증 등 피부개선 효과가 우수하다.

복합발효, 유산균, 효모, 두유, 화장료, 피부외용제

Description

두유 복합발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing extract of mixed fermentation with soy bean milk}

본 발명은 유산균과 효모의 복합배양 추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 류코노스톡 메센터로이드(Leuconostoc mesenteroides), 락토바실러스 케피리(Lactobacillus kefiri), 클루베로마이세스(Kluyveromyces)로 구성되는 복합 균주를 두유에 첨가하고 배양하여 얻은 발효물을 여과하여 얻은 추출액을 함유하는 화장품 조성물에 관한 것이다.

두유는 이소플라빈 등 유효성분을 포함하고 있어 피부개선 효과 및 라이트닝 효과가 있다고 알려져 오래 전부터 피부에 사용되어 왔다(특허 10-0505322, 특허 출원 10-2006-7009159).

최근 발효를 이용한 식품 및 화장품 개발이 활기를 띠면서 천연 발효 소재에 대한 관심이 증가하고 있다. 발효는 미생물에 의하여 유기물이 분해 또는 합성되는 과정으로서, 생명체에 필수적인 영양분으로 재생산되는 과정이다. 두유 발효 생성물을 화장료에 이용하는 기술로는 리조푸스(Rhizopus) 속의 미생물을 사용하거나(일본 공개특허 平 1-10211호) 유산균을 사용한 것(일본 공개특허 平 3-127715호) 이 있다. 또, 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속 미생물을 대두 추출액에 작용시켜 얻어지는 발효생성물을 유기용매로 추출하여 거친 피부 및 주름 개선에 효과가 있는 대두발효 추출물에 대한 발명도 개시되어 있다(대한민국특허 10-0577914). 또한, 대한민국특허공개 제2003-61447호에는 두유 발효생성물과 비타민 A 또는 그 유도체를 함유하고 피부의 거침이나 각질을 방지, 개선하는 피부외용제가 개시되어 있다.

효모를 발효한 배양액을 화장료로 사용한 사례는 극히 제한되어 있는데, 콤부차 배양액이 피부재생 및 피부노화를 지연하는 효과가 있다는 보고가 있다 (특허 10-0466623). 또한, 찹쌀가루와 유당 등에 비피더스와 효모를 배양하여 생리활성이 높은 음료를 발명한 보고도 있다(특허 10-0561765).

일반적으로 유산균은 항균활성물질이나 유산 등의 생리활성 물질을 생산하는 것으로 알려져 있으며 효모는 각종 비타민을 대사 산물로 생산하는 것으로 알려져 있다. 특히 효모 중 클루베로마이세스(Kluyveromyces) 속 균주는 유산균의 증식을 도와주는 특징이 있다고 보고되었다(Rada V. Folia Microbiol. 42, 145-148, 1997).

그러나 아직 유산균과 효모를 이용하고 두유를 기질로 하여 얻어진 복합배양액이나 그 추출물을 주름방지, 미백 효과, 세포재생, 항염증 효과가 있는 화장료로 발명한 사례는 아직 없다.

본 발명의 목적은 식물성 소재이며 피부개선에 효과가 있는 두유를 이용함에 있어 두유 자체에 있는 성분 이외에 다양한 생리활성 물질이 함유된 화장료 소재를 제공하려는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명자들은 효모와 유산균으로 두유를 복합 발효하여 단일 미생물로 발효하여 얻어지는 발효액보다 더 우수한 항노화, 항염 및 미백 기능을 나타내는 발효액을 얻을 수 있었다.

본 발명은 두유에 유산균과 효모를 가하고 배양하여 얻어지는 복합발효물의 추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 유산균이 루코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스케피리(Lactobacillus kefiri) 중 선택되는 1종 이상이고, 효모는 클루베로마이세스(Kluyveromyces) 속인 것을 특징으로 하는 두유 복합발효물의 추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 복합발효물의 추출액이 다당을 함유하는 것을 특징으로 하는 두유 복합발효물의 추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 다당이 0.01% ~ 0.5%의 농도로 함유된 것을 특징으로 하는 두유 복합발효물의 추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한 다.

또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물이 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중 선택된 1종임을 특징으로 하는 두유 복합발효물의 추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따르면 두유의 복합발효 추출액은 우수한 항노화, 항염 및 미백효능을 나타내어 화장료 조성물의 유효성분으로 포함될 수 있으며, 미용산업, 식품산업 및 제약산업 등과 같은 다양한 분야에 폭넓게 적용될 수 있다.

본 발명의 목적을 달성하기 위해 사용하는 두유(soy bean milk)는 콩을 침지하여 파쇄한 후 비지를 거르고 남은 고형물 5% 이상의 두유 유장액이거나 두유 분말을 일정한 농도로 현탁한 용액을 포함한다.

본 발명에서 정의되는 복합발효물은 루코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) 및 락토바실러스 케피리(Lactobacillus kefiri) 로 구성되는 유산균 중 1종 이상과 클루베로마이세스(Kluyveromyces)속의 효모를 상기 두유에 첨가하여 배양하여 얻어지는 것을 의미한다.

또한, 본 발명의 복합발효 추출액은 상기와 같이 유산균과 효모를 두유에 첨가, 배양하여 얻어진 복합발효물을 여과하거나 본 발명이 속하는 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 널리 알려진 다양한 추출방법으로 추출한 것을 의미한다.

본 발명은 두유 복합발효 추출액을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 상기 두유 복합발효 추출액의 함량이 화장료 조성물 전체에 대해서 건조 중량 기준 0.001~30.0중량%인 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 거의 없으며, 30.0중량%을 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하다.

본 발명은 상기 복합발효물의 추출액이 다당을 함유하는 것을 특징으로 하는 두유 복합발효물의 추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 상기 다당이 상기 복합발효물의 추출액 중 0.01% ~ 0.5%의 농도로 함유된 것을 특징으로 하는 두유 복합발효물의 추출액을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다. 상기 다당 함량이 상기 복합발효물의 추출액 중 0.01% 미만인 경우 피부개선 효과가 현저하지 아니하며, 상기 복합발효물의 추출액 중 0.5%를 초과하는 경우 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 크지 않다.

또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물이 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 두유 복합발효 추출액을 주요 활성성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물을 유효성분으로 하는 도포형 화장료는 통상적인 제조방법에 따라 어떤 형태로든 용이하게 제조할 수 있다. 일례로서 크림형 도포제를 제조함에 있어서는 일반적인 수중유형(O/W) 또는 유중수형(W/O)의 크림 베이스에 본 발명의 천연물 조성물을 함유시키고 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등을 필요에 따라 사용하는 한편, 물성개선을 목적으로 단백질, 미네랄, 비타 민 등 합성 또는 천연소재를 병용할 수 있다.

뿐만 아니라, 본 발명의 화장료 조성물은 pH 조절제, 향료, 유화제, 방부제 등을 필요에 따라 부가하여 통상의 화장료 제조 방법으로 화장수, 젤, 수용성 파우더, 지용성 파우더, 수용성 리퀴드, 크림 또는 에센스 등으로 제형화할 수 있다.

이하 실시예를 들어 본 발명의 구성을 좀 더 자세히 설명한다. 그러나, 본 발명의 범위가 아래 실시예의 기재범위 내로 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1] 유산균과 효모 복합 발효물의 제조

대두 분말 10% (w/v)를 정제수에 현탁한 다음 120℃에서 30분간 멸균하였다. 멸균한 배지에 루코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) E-1(KCTC10724BP), 락토바실러스 케피리(Lactobacillus kefiri) R-1(KCTC10725BP)로 구성되는 유산균과 클루베로마이세스(Kluyveromyces)속의 효모를 포함한 분말을 종균으로 접종하였다. 상기 각 유산균과 효모는 0.1%(W/V) 농도로 사용하였다. 배양 온도를 25℃로 하여 pH가 4.5로 떨어질 때까지 약 20~24시간 배양하였다.

발효 전후의 배지와 배양액 성분 변화를 표 1에 나타내었다. 두유를 상기방법으로 복합배양하였을 때 배양 전에 비하여 비타민 성분이 크게 증가하였으며 다당이 생성된 것을 알 수 있다.

성분	배양 전 함량(㎎/100g)	배양 후 함량(㎎/100g)
비타민 B1	0.33	0.88
비타민 B6	0.02	0.05
니아신	0.006	0.04
다당	0.0	13.4

[비교예 1, 2]

상기 실시예 1과 동일한 조건으로 실시하되, 다만 각 유산균과 효모를 복합배양하지 않고, 상기 2종의 유산균을 접종한 것을 비교예 1, 상기 효모를 접종한 것을 비교예 2로 하여 실시하였다.

[실시예 2] 복합 발효물로부터 추출액의 제조

실시예 1에서 얻은 복합 발효물을 연속원심분리기에서 8000rpm으로 상등액을 분리하였다. 상등액으로부터 균체를 제거하기 위하여 0.2㎛ 필터가 장착된 막 여과기(membrane filtrator)를 사용하였다. 적절한 방부제를 첨가한 후 4~10℃에서 하루 동안 보존하였다. 막 여과기를 사용하여 반복해서 고형물을 제거하여 투명한 복합발효 추출액을 얻었다.

[평가예 1] 자외선에 의한 피부세포독성 완화 및 성장 촉진 효과

사람 섬유아세포(normal human fibroblast)를 페니실린(100 IU/㎖), 스트렙토마이신(100g/㎖), 10% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 넣고 37℃를 유지하며 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다. 배양 후 얻어진 섬유아세포를 6-웰 플레이트에 각 웰당 3× 10⁵개로 분주한 다음 세포배양조건에서 24시간 배양하였다. 배양 후 세포에 25mJ/㎠ 량의 자외선을 조사하고, 실시예 2에서 얻은 복합발효 추출액 및 각각의 대조구를 첨가한 후 24시간 추가 배양하였다. 세포수를 측정하여 세포사멸 및 성장 촉진 정도를 측정하였다.

도 1에서 보는 바와 같이 복합 발효 추출액을 사용하는 경우 대조구 및 두유 상등액, 그리고 효모나 유산균을 단독으로 사용한 군에 비해 세포성장 촉진 효과가 우수한 것을 알 수 있다.

[평가예 2] 자외선에 의해 유발되는 염증반응 억제실험

사람 피부각질세포(human keratinocyte : ATCC CRL-2404)를 페니실린(100IU/㎖), 스트렙토마이신(100g/㎖), 10% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 넣고 37℃를 유지하며 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다. 수득된 피부각질세포를 6-웰 플레이트에 각 웰당 3 X 10⁵ 개로 분주한 다음 세포배양조건에서 24시간 배양하였다. 배양 후 세포에 25mJ/㎠ 양의 자외선을 조사하고, 복합발효 추출액을 첨가한 후 24시간 추가 배양하였다. 배양 상등액을 회수하여 염증성 사이토카인인 TNF-α의 분비량을 측정하여 도 2에 각각 나타내었다.

복합발효 추출액의 경우 두유 상등액 또는 효모나 유산균을 단독으로 사용한 군에 비해 자외선의 자극에 의한 TNF-α의 분비 증가를 억제함으로서 우수한 항염증 효과를 보이는 것을 알 수 있다. 또한 항염증 유효 성분으로 많이 사용되는 덱사메타손(dexamethasone)과 유사한 효능을 보임을 알 수 있다.

[평가예 3] 콜라겐 합성 촉진 효과 (항노화 효과)

실시예 2에서 얻은 복합발효 추출액의 항노화 효과를 측정하기 위하여 사람 섬유아세포에서의 콜라겐 합성 촉진 효과를 알아보았다.

사람 섬유아세포 (normal human fibroblast : ATCC CCL110) 를 페니실린 (100IU/㎖), 스트렙토마이신(100g/㎖), 10% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 넣고 37℃를 유지하며 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다. 얻어진 섬유아세포를 6-웰 플레이트에 각 웰당 3 X 10⁵ 개로 분주한 다음 세포배양조건에서 24시간 배양하였다.

배양 후 세포에 25mJ/㎠ 량의 자외선을 조사하고, 실시예 2의 복합발효 추출액을 첨가한 후 24시간 배양하였다. 세포를 회수하고 파쇄한 후 서콜 콜라겐 어세이 키트(Sircol assay kit)를 이용하여 콜라겐 양을 측정하였다.

도 3과 같이, 두유 복합발효 추출액의 경우 두유나 효모발효 추출액, 유산균발효 추출액을 단독으로 처리한 군에 비해 자외선의 자극에 의한 콜라겐의 분해를 억제하고 콜라젠의 합성을 촉진하는 효과가 우수함을 알 수 있다.

[평가예 4] 멜라닌 종양 세포에서의 멜라닌 합성 저해 효과

실시예 2에서 얻은 복합발효 추출액의 멜라닌 합성 저해 효과를 알아보기 위하여 아래와 같은 실험을 수행하였다.

먼저 마우스 유래 악성 멜라닌 종양 세포주 B16F1 (KCLB 8007)를 페니실린(100IU/㎖), 스트렙토마이신(100g/㎖), 10% FBS(fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 넣고 37℃를 유지하며 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다. 수득된 멜라닌 종양 세포를 24웰 플레이트(well plate)에 1 × 10⁴ 세포/웰 (cells/well)에 접종하여 하루 동안 배양하였다. 배양 후 배지를 제거한 다음, 멜라닌 합성을 유도하기 위하여, 비처리군을 제외하고 α-MSH(melanocyte stimulating hormone; 멜라노사이트 자극 호르몬) 5nM을 첨가하여 멜라닌 합성을 유도하였고, 동시에 복합발효 추출액 및 코지산(양성 대조군) 800μM를 가한 DMEM 배지를 첨가하여 3일간 배양하였다. 각 처리군의 멜라닌 종양세포가 분비한 합성된 멜라닌 양을 육안으로 확인하고 그 변화를 디지털 카메라로 촬영하였고, 각 처리군의 세포를 수거하여 10% DMSO(Dimethyl sulfoxide)와 1N NaOH 100㎕를 각각 첨가하여 멜라닌을 용해하였고, 405㎚에서의 흡광도를 측정하여 멜라닌 양을 측정하였다.

도 4에서 보는 바와 같이 실시예 2의 복합발효 추출액은 자외선 조사에 의한 멜라닌 생성을 농도 의존적으로 줄여주는 것을 알 수 있다.

실시예 2에서 제조한 복합발효 추출액을 이용하여 하기 조성에 따라 각각 비누형, 로션형, 크림형, 팩형, 미용액형 제제들을 제조하였다.

[실시예 3] 비누형 제제

실시예 2의 복합발효 추출액 5.00

유지 75

수산화나트륨 5

향료 10

정제수 잔량

(단위: 중량%)

[실시예 4] 로션형 제제

실시예 2의 추출액 3.00

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00

수용성 콜라겐 (1% 수용액) 1.00

시트르산나트륨 0.10

시트르산 0.05

감초 엑기스 0.20

1,3-부틸렌글리콜 3.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

[실시예 5] 크림형 제제

실시예 2의 추출액 1.00

폴리에틸렌글리콜모노스테아레이트 2.00

자기유화형 모노스테아르산글리세린 5.00

세틸알코올 4.00

스쿠알렌 6.00

트리2-에틸헥산글리세릴 6.00

스핑고당지질 1.00

1.3-부틸렌글리콜 7.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

[실시예 6] 팩형 제제

실시예 2의 추출액 5.00

폴리비닐알코올 13.00

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00

라우로일히드록시프롤린 1.00

수용성 콜라겐 (1% 수용액) 2.00

1,3-부틸렌글리콜 3.00

에탄올 5.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

[실시예 7] 미용액형 제제

실시예 2의 추출액 2.00

히드록시에틸렌셀룰로오스 (2% 수용액) 12.00

크산탄검 (2% 수용액) 2.00

1,3-부틸렌글리콜 6.00

진한 글리세린 4.00

히알루론산나트륨 (1% 수용액) 5.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

도 1은 두유 및 두유 복합발효 추출액이 세포의 성장 및 독성에 미치는 영향을 비교한 결과를 나타낸 그래프이다.

도 2는 두유 및 두유 복합발효 추출액이 항염증 인자인 TNF-α의 생성을 억제하는 효과를 비교한 결과를 나타낸 그래프이다.

도 3은 두유 및 두유 복합발효 추출액이 자외선을 조사한 후 콜라겐 양의 변화에 미치는 영향을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다. 좌측은 대조군과 비교한 콜라겐 함량(%)이다.

도 4는 두유 복합발효 추출액의 농도에 따른 멜라닌 생합성 양을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다. 좌측은 대조군과 비교한 405㎚ 흡광도(%)이다. KA는 코지산(Kojic Acid)을 나타낸다.

Claims (5)

1. 두유에 루코노스톡 메센테로이드(Leuconostoc mesenteroides) E-1 및 락토바실러스케피리(Lactobacillus kefiri) R-1 중 선택되는 1종 이상의 유산균과 클루베로마이세스(Kluyveromyces) 속 효모를 가하고 배양하여 얻어지는 복합발효물의 추출액을 유효성분으로 함유하고, 0.01% ~ 0.5%의 농도로 다당을 함유하는 미백 기능성 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제

Images