KR100661398B1 - 큰느타리버섯, 오가피 및 삼칠근의 혼합 생약재 추출물 및이를 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 큰느타리버섯, 오가피 및 삼칠근의 혼합 생약재 추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 조골세포로부터 OPG의 발현을 촉진시켜 파골세포의 생성 및 활성을 감소시키고 파골세포의 증식을 억제하여 치조골의 파괴를 억제하고, 치주인대세포 및 치은섬유아세포의 증식을 유지하는 혼합 생약재 추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

Description

큰느타리버섯, 오가피 및 삼칠근의 혼합 생약재 추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물{ Herbal mixture extract of Pleurotus eryngii, Acanthopanacis Cortex and Notoginseng Radix and composition comprising the same for prevention and treatment of periodontitis }

도 1은 혼합 생약재 추출물과 각각의 추출물이 치은섬유아세포의 오스테오프로테게린(OPG) 발현에 미치는 영향을 나타낸 도이다.

도 2는 혼합 생약재 추출물이 파골세포의 형성 및 활성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.

도 3은 혼합 생약재 추출물이 사람 치주인대세포에 미치는 영향을 나타내는 도이다.

도 4는 혼합 생약재 추출물이 사람 치은섬유아세포의 증식활성에 미치는 영향을 나타내는 도이다.

본 발명은 큰느타리버섯(Pleurotus eryngii), 오가피(Acanthopanacis Cortex) 및 삼칠근(Notoginseng Radix)의 혼합 생약재 추출물 및 이를 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

치주조직은 치조골, 치은(잇몸) 및 치주인대로 이루어져 있다. 잇몸은 우리가 입안에서 볼 수 있는 치아 지지조직의 일부분으로 여기서 질환(치은염)이 시작되는데, 질환이 심화되어 지지조직으로 점점 깊게 퍼져나가면 치아 뿌리면과 치아를 둘러싸고 있는 뼈 조직에 결합되어 있는 치주인대가 파괴되고 치아를 싸고 있는 치조골도 파괴되면서 치주병이 발생하게 된다.

치은염 및 치주병을 포함하는 치주질환은 세균에 의해 야기되는 치아지지 조직의 염증상태로서, 출혈, 치주낭의 형성 및 치조골의 파괴 등으로 인하여 치아의 상실을 가져오는 질환이다. 이러한 치주질환은 세균의 집락형성, 세균의 치주조직 침투 및 치주조직 파괴의 과정으로 진행된다. 구체적으로, 불량한 구강 위생상태로 인하여 구강 세균이 치면 세균막을 형성하면 염증이 생겨 가끔 잇몸에서 피가 나고 구취가 나며, 이러한 상태로 더 진행되면 치아와 잇몸 사이의 벌어진 틈이 더 깊어져서 치주낭이 생기고, 여기에 치주질환을 일으키는 세균들이 번식하여 치주염이 발생된다. 치주염이 진행되면 칫솔질과 같은 약한 자극에도 잇몸에서 피가 나기도 하며 붓고, 종종 급성염증으로 변화되어 통증을 유발한다. 이러한 염증은 교원질, 칼슘 및 인의 침척물(hydroxyapatite)로 단단한 뼈를 만드는 조골세포(osteoblast)의 골을 만드는 기능을 저하시키고, 파골세포(osteoclast)의 뼈를 파괴 또는 흡수 (resorption)하는 작용이 높아져서 치조골이 점점 낮아지고 파괴되어 결국 치아를 상실하게 된다. 이때, 파골세포는 골수 내의 단핵구/대식세포 계통의 세포로부터 유래하고, 이 단핵전구세포는 혈액 내로 순환되며 골내막층에서 전구세포들이 증식되어 다핵세포를 형성하기 위해 융합된다고 알려져 있으며(Scheven, B. A. A. et al., Nature, 321:79-81, 1986), 파골세포에는 특징적으로 타르트레이트(tartrate)에 대해 저항성을 나타내는 산성 포스파타제(acid phosphatase)인 TRAP(tartrate-resistant acid phosphatase)을 가지며 이는 다른 골조직 세포와 구별할 수 있는 파골세포의 세포화학적 표지효소로 이용된다고 알려져 있다(Minkin, C., Calcif. Tissue Int., 34:285-290, 1982).

치주질환의 원인은 여러 가지가 있으나, 국소적 요인으로 치태가 치주낭 내에 축적되면 주변에 존재하는 혐기성 그람음성 세균들의 서식처가 되어, 치주낭의 심부로 증식되게 된다. 이때 증식된 혐기성 그람음성 세균의 독소 및 모든 산물이 직접 조직을 파괴하거나 면역계를 자극하여 자극된 면역계에서부터 여러 가지 작용이 일어나 치주조직 파괴와 더불어 염증을 유발하게 된다. 이에 대한 방어기전으로서 다형핵 백혈구의 기능과 면역반응이 전신적인 요인으로서 작용하게 된다.

즉, 혐기성 그람음성 세균들의 대사결과, 치주조직에 유독한 황화수소, 암모니아 및 유독한 아민과 같은 세포의 독소가 분비됨과 동시에 세포벽 구성분인 지질다당질(Lipopolysaccharide)와 같은 내독소에 의하여 직접조직을 파괴하거나, 생체 면역계를 자극하여 자극된 체액성 및 세포성 면역계의 여러 가지 작용에 의하여 세포 외부로 분비된 활성산소, 프로스타글란딘즈(Prostaglandins), 루코트리엔즈 (Leukotriens), 히스타민(Histamine), 인터루킨즈(interleuckins)와 같은 여러 가지 종류의 사이토카인(Cytokine) 등에 의하여 잇몸염증을 유발시킨다. 또한, 세균 및 백혈구로부터 분비된 콜라게네이즈와 같은 효소에 의하여 치주조직의 기질인 콜라젠이 분해되어 잇몸퇴축이 일어나고, 계속 방치하게 되면 치주질환으로 진행되는 것이다.

따라서 근원적인 인자인 혐기성 그람음성 세균에 대한 항균작용 및 정균작용과 이들 세균의 독성산물을 제거하는 방법 또는 소실된 치주조직을 원상 회복시키는 것이 치주질환의 예방 및 치료에 중요한 관건이 되는 것으로 알려져 있다.

치주질환의 치료는 환자의 개선된 구강위생의 확립, 비외과적 혹은 외과적인 치석제거술, 치근활택술, 치은소파술과 신부착을 응용한 치주조직의 재생술들이 이용되어져 왔다. 그러나 이런 외과적인 치료 방법은 치료를 위해 치과를 가야하는 번거로움으로 인해 효과적인 치료가 어렵고 또한 병의 예방보다는 병이 어느 정도 진행되었을 경우 행하는 치료에 국한되어 있어, 치료를 하지 않을 경우 만성질환으로 진행되는 경우가 대부분이다. 부가적인 치료로 전신적인 항생제의 복용과 국소 서방형 제재가 사용되어 왔으나, 불필요한 부위에도 약물이 너무 많이 전달되어 그로 인한 부작용과 최근 사용되는 항생제에 대한 내성을 나타내는 치주질환균이 분리된 예가 보고되고 있어 심각한 문제점을 안고 있다.

이러한 외과적 치료의 한계성과 항생제 사용의 문제점을 보완하고 치주질환 예방 및 치료효과를 발현하기 위해서는 파괴 및 소실된 치주조직을 원상회복시키는 활성 을 지닌 제제의 출현이 필요하였다.

멜쳐(Melcher)에 의하면 치주조직의 재생에 관여하는 세포의 유래에 따라 재생의 결과에 차이가 있다고 한다. 뼈에서 유래된 세포가 재생에 관여하면 골유착이 일어나고, 결체조직에서 유래된 세포(치은섬유아세포 등)가 관여할 경우 치근의 흡수가 야기되며, 상피조직에서 유래된 세포가 관여하면 긴 부착상피가 생겨나게 되어, 이상적인 치주조직의 재생이 일어나지 않게 되지만, 치주인대세포에서 유래된 세포가 재생에 관여할 경우 가장 이상적인 치주조직의 재생이 유도된다고 하였다 (Melcher, A. H., Journal of Periodontology, 47(5):256-260, 1976).

본 발명자들은 염증성 사이토카인들(TNF-α, IFN-γ, GM-CSF, IL-2, IL-6)을 분비하도록 하는 CD4⁺ T 세포가 활성화됨에 따라 조골세포 표면에 오스테오프로테그린 리간드(osteoprotegerin ligand)가 발현되어 파골세포 생성(osteoclastogenesis)을 촉진하여 골 파괴에 결정적인 역할을 한다는 사실에 근거하여, 치주질환의 치료를 위해서는 사이토카인의 유리를 억제시켜 염증을 억제하여 치조골의 파괴를 막고, 또한 조골세포의 증식 및 분화를 촉진하며 파골세포의 형성 및 활성을 감소시켜 치조골을 보호하며 치은섬유아세포 및 치주인대 세포의 증식에는 큰 영향을 주지 않을 수 있는 약제의 개발이 필요하다고 판단하였다(Kong, Y. Y. et al., Nature 402:304-309, 1999).

이런 의견을 종합할 때, 치주인대세포의 성장을 촉진시키면서, 치은섬유아세포의 성장은 정상치를 유지시킬 수 있는 것이 치주조직의 재생에 가장 이상적인 도움을 줄 수 있다고 할 수 있다. 또한 두 가지의 조건을 모두 만족하지 못한다면 차선의 선택은 두 세포의 증식, 특히 치은 섬유아세포의 증식에 의한 연조직 대체 치유를 방지하면서 두 세포의 증식에 크게 영향을 주지 않는 것이 가장 이상적이라 하겠다(Melcher, A. H., Journal of Periodontology, 47(5):256-260, 1976).

이에, 본 발명자들은 생약 추출물 중에서 사이토카인의 유리를 억제시키며, 조골세포의 증식 및 분화를 촉진하며 파골세포의 형성 및 활성을 감소시켜 치조골의 파괴를 막을 수 있는 큰느타리버섯, 오가피 및 삼칠근의 혼합 생약 추출물이 상기한 작용에 의하여 치주질환의 염증을 억제하고 치은섬유아세포 및 치주인대세포의 증식에는 큰 영향을 주지 않고 정상수치를 유지할 수 있는 등 효과적임을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 큰느타리버섯, 오가피 및 삼칠근의 혼합 생약재 추출물을 제공하고자 한다. 또한, 본 발명은 상기 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주 질환 예방 및 치료용 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 큰느타리버섯(Pleurotus eryngii), 오가피(Acanthopanacis Cortex) 및 삼칠근(Notoginseng Radix)을 포함하는 혼합 생약재 추출물을 제공한다.

큰느타리버섯(Pleurotus eryngii)은 느타리버섯과 느타리버섯속에 속하는 사물 기생균으로 아열대지방의 대초원에서 발생하며 유럽에서는 초원의 버섯 (Boletus of the steppes) 또는 왕느타리버섯(King oyster mushroom)으로 불려지고 있다. 동의보감에 의하면 큰느타리버섯은 무독하며, 맛이 달고 향이 짙으며, 위와 장의 기능을 도와주고 기운의 순환을 촉진해서 손발이 저리고 힘이 없거나 허리와 무릎이 시린 증상이 있을 때 좋은 약재로 사용되고 있으며, 그 성분은 아직 완전히 밝혀지지 않은 상태이나 알칼리성 식품이고, 콜레스테롤 수치를 낮춰주며, 항암작용을 한다는 보고도 있다. 단백질과 비타민이 풍부하며 편도선, 유선염, 탈하증 및 각종 성인병에 약효가 있는 것으로 알려져 있다. 특히 알칼리성 식품으로 일본에서는 항암효과가 큰 자연건강 식품으로 널리 각광받고 있다.

오가피(五加皮, Acanthopanacis Cortex)는 두릅나무과(Araliaceae)에 속하는 관목식물로, 북반구 극동아시아에만 분포하며 남한에는 멸종 위기에 있는 야생보호식물이다. 오가피의 종류로는 가시오가피, 일반오가피, 향오가피가 있고, 한방에서 독성과 부작용이 없다는 상약으로 분류하여 뿌리와 껍질을 약재로 사용한다. 잎에는 지사노사이드(Chiisanoside)가 있어 약리적 기능을 갖고 있으며, 뿌리에서는 오가피 배당체 뿐만 아니라 지링긴(Sylrgin), 쿠마린 배당체 등이 있다. 오가피에는 오가피 배당체인 아칸토사이드(Acanthoside B, D)와 면역성을 높혀 주는 수용성 다당체가 있다. 오가피는 맛이 맵고 쓰며 따뜻한 성질을 갖고 있고, 간경(肝經), 신경( 神經)에 작용하여 풍습을 없애고 기를 돋우며 정수를 불러준다고 알려져 있다. 또한 오로(오장이 허약하여 생기는 허로병)와 칠상(남자가 허약해서 생기는 일곱 가지 증상)을 보해 주며 다리를 잘 쓰지 못하는 데에 쓰였으며, 이를 장복하면 신체의 기(氣)를 높여주고 위를 보해 주고 정력을 좋게 해주며 정신을 맑게 하고 의지력을 높게 하며 몸이 가벼워지고 늙는 것을 방지하고 몸 안의 나쁜 피를 맑고 깨끗이 다스려 준다고 알려져 있고, 허리 척추가 쑤시는 통증, 남자 음위증, 낭습, 여자음양증 등의 여러 가지 증상을 치료해준다고 알려져 있다.

삼칠근(三七根, Panax notoginseng(Burk.) F. H. Chen)은 드릅나무과의 다년생초본으로, 인삼보다 작고 쪽잎이 7개이며 뿌리는 작은 실북모양의 형태를 하고 있고, 주로 중국 남부 운남 사천 등지에서 재배된다. 상기 식물은 세 개의 가지에 7 개의 잎이 붙었다 하여 삼칠, 또는 그 모양이 조선인삼과 비슷하여 삼칠인삼이라 불리기도 한다. 뿌리에는 3 내지 8%의 사포닌을 포함하고 있는데, 그 주성분은 진세노시드(ginsenoside) Rb1, Rg1, Re와 노토진세노시드(notoginsenoside) R1, R2, Fa, Fc 이며, 소량의 진세노시드(ginsenoside) R2, b2, d, e, c가 있고, R0는 없거나 매우 적게 함유되어 있다. 정유 성분은 인삼보다 적으며 올레아놀산 등도 함유되어 있다. 뿌리는 지혈작용 및 강심작용이 있으며, 동물실험에서 심장동맥의 혈류량을 늘리고 심근의 산소 소비량을 줄이며 혈액내의 지질과 콜레스테롤 함량을 줄이는 효능이 있는 것으로 밝혀졌다. 이외에도, 삼칠근은 우수한 소염, 진통, 지혈작용이 있어 간염을 비롯한 많은 염증질환에 유효할 뿐 아니라, 외상 또는 절상으로 생긴 출혈과 내출혈에 유효하며, 상처에 직접 바르거나 먹어도 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

본 발명의 혼합 생약재 추출물은 큰느타리버섯, 오가피 및 삼칠근을 혼합한 혼합 생약재를 물, 알콜 또는 물과 알콜의 혼합 용매로 추출하여 제조될 수 있다. 각 생약재의 혼합비는 큰느타리버섯 25-55 중량부, 오가피 1-20 중량부 및 삼칠근 35 -75 중량부인 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 큰느타리버섯 35-45 중량부, 오가피 5-15 중량부 및 삼칠근 45-55 중량부이며, 가장 바람직하게는 큰느타리버섯 40 중량부, 오가피 10 중량부 및 삼칠근 50 중량부이다.

추출방법은 상기 용매를 사용하여 냉침, 온침, 가열 등 통상의 추출방법이 가능하며, 상기에서 알콜은 에탄올이 바람직하다. 이때, 에탄올 추출은 70 내지 80℃에서 3 내지 5시간 동안 이루어지는 것이 바람직하다.

보다 구체적으로 상기 혼합 생약재 추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다.

불순물을 제거한 큰느타리버섯, 오가피 및 삼칠근을 분쇄한 것을 혼합하여 추출용기에 넣고, 증류수를 가하여 열수 추출을 실시한다. 추출물을 실온에서 식히고 거름종이로 여과한 후, 그 추출액을 모아 진공감압으로 수분을 제거하여 농축시킨다. 보다 구체적으로 상기 농축은 20 내지 40℃에서 진공감압으로 이루어지는 것이 바람직하다.

본 발명의 혼합 생약재 추출물은 오스테오프로테그린(osteoprotegerin, OPG)의 발 현을 증가시켜 파골세포의 생성을 억제한다(도 1).

또한, 본 발명의 혼합 생약재 추출물은 파골세포로 여겨지는 TRAP(+) 다핵세포의 형성 및 파골세포의 활성을 크게 감소시켜 파골세포 형성 및 활성을 강하게 억제하여 골조직 파괴를 크게 감소시킨다(도 2).

또한, 본 발명의 혼합 생약재 추출물은 사람의 치주인대세포와 치은섬유아세포 증식을 효과적으로 유지시킨다(도 3, 4).

따라서, 본 발명의 혼합 생약재 추출물은 조골세포에 대한 세포 독성이 적으며, 조골세포로부터 OPG의 발현을 증가시켜 파골세포의 형성 및 활성을 억제시켜 치조골의 파괴를 억제할 수 있고, 인간 치주인대세포 및 치은섬유아세포의 증식을 유지시킴으로써 치주질환의 예방 및 치료에 효과적이며, 의약품 및 건강식품으로 이용될 수 있다.

본 발명은 큰느타리버섯(Pleurotus eryngii), 오가피(Acanthopanacis Cortex) 및 삼칠근(Notoginseng Radix)을 포함하는 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 상기 혼합 생약재 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 혼합 생약재 추출물에 추가로 다른 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 혼합 생약재 추출물을 유효 성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 포함한다.

본 발명의 상기 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료용 약학적 조성물 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당업계의 통상의 방법으로 또는 레밍톤의 약학(Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 일일 투여량은 경구 투여시 본 발명의 삼칠근 추출물을 기준으로 0.1 내지 100㎎/㎏, 바람직하게는 0.1 내지 10㎎/㎏ 이고, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 3㎎/㎏이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 바람직하다.

본 발명의 상기 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물은 치주질환의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주질환 예방 및 치료용 구강용 조성물을 제공한다.

본 발명의 상기 혼합 생약재 추출물은 치은염, 치주염 등 치주질환에 효과가 있으며, 항생물질이 아니면서도 잇몸의 염증을 감소시켜 줄 뿐만 아니라 잇몸을 튼튼하게 하여 주어 세균 감염으로부터 저항할 수 있게 하므로 치주 질환의 예방 및 치료를 위한 구강용 조성물로 제조될 수 있다.

본 발명의 상기 혼합 생약재 추출물을 함유하는 구강용 조성물은 그 제형에 있어 특별히 한정되지 않고 통상의 제형을 가질 수 있으며, 구체적으로는 치약, 구강세정제 또는 구강청정제 등의 제형을 가질 수 있다. 본 발명에서 제공하는 구강용 조성물은 그 제형에 따라 제제화에 필요한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다. 예를 들면, 구강용 조성물의 제형이 치약류인 경우, 연마제, 습윤제, 기포제, 결합제, 감미제, pH조절제, 방부제, 약효성분, 향료, 증백제, 색소, 용제 등을 첨가하여 제조할 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 함유하는 치주질환 개선을 목적으로 하는 건강식품 조성물을 포함한다.

본 발명의 혼합 생약재 추출물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 혼합 생약재 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 혼합 생약재 추출물이 원료에 대하여 100 중량부 이하, 바람직하게는 50 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.1～20g, 바람직하게는 약 1～10g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 점증제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100중량부 당 0.05～50중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 혼합 생약재 추출물의 제조

큰느타리버섯, 오가피 및 삼칠근은 재배산으로 시중의 건재상에서 구입하여 사용하였다.

1-1. 혼합 생약재 추출물 알콜 조추출물

각각의 생약재를 1 내지 2 ㎝의 크기로 절편한 다음, 흐르는 물에 세척하여 불순물을 제거하였다. 절편한 생약재를 분말로 분쇄하여 큰느타리버섯:오가피:삼칠근을 4:1:5로 혼합한 분말 200g을 3ℓ플라스크에 넣고, 에탄올 2,000 ㎖을 이용하여 78.5℃에서 환류 교반시키면서 4시간 동안 가열 추출을 3회 반복 실시하였다. 상기 추출액을 여과한 후, 40℃ 이하에서 회전식 진공농축증발기(vacuum rotary evaporator)를 사용하여 진공 감압농축시킴으로써 혼합 생약재 추출물을 수득하였다.

1-2. 혼합 생약재 추출물 수 조추출물

추출용매로 에탄올 대신 물을 사용한 것을 제외하고, 상기 1-1의 추출방법과 동일하게 추출하였다.

1-3. 혼합 생약재 추출물 혼합용매 조추출물

추출용매로 에탄올 대신 물 25% 와 에탄올 75%의 혼합용매를 사용한 것을 제외하고, 상기 1-1의 추출방법과 동일하게 추출하였다.

1-4. 각 생약재 추출물의 제조

큰느타리버섯, 오가피 혹은 삼칠근의 단일 추출물은 각각 상기의 방법과 동일한 방법으로 추출하였다.

실험예 1. 혼합 생약재 추출물에 의한 조골세포로부터 OPG(osteoprotegerin)의 발현 촉진 실험

상기 실시예 1에서 분리한 본 발명의 혼합 생약재 추출물 및 단일 추출물이 조골세포로부터 OPG 발현에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험들을 실시하였다.

1-1. 조골세포의 선별 및 세포 배양

하기 3 종류의 세포를 사용하여 본 발명의 혼합 생약재 추출물 및 단일 추출물이 조골세포의 증식에 미치는 영향을 확인하였다. 사람 세포로는 사람 골육종에서 유래된 세포주인 둥 종류의 MG-63 세포(ATCC No, CRL-1427)를, 마우스의 세포로는 마우스 근육 세포인 C2C12 세포(ATCC No. CRL-1772)를 미국세포주은행(ATCC, USA)에서 구입하여 10% FBS(fetal bovine serum)를 첨가한 DMEM(Gibco, BRL, USA) 배지에서 5% CO₂ 배양기에서 37℃, 100% 습도의 조건에서 배양하여 실험에 사용하였다.

또한, 일차배양 세포로는 스프래그-다우리(Sprague-Dawley) 랫트(rat)의 두개관에서 얻어진 조골세포군(RCC)을 사용하였다. 즉, 태생 19 일째 스프래그-다우리 랫트의 두개관에서 전두골과 두정골을 적출한 다음, 0.1% 콜라제나제(collagenase), 0.05% 트립신 및 0.5 mM EDTA를 포함하는 효소용액으로 37℃에서 각각 10 분, 10 분, 10 분, 20 분, 20 분간씩 연속적으로 처리하여 Ⅰ 내지 Ⅴ 군의 세포를 분리하고, 이중 조골세포의 특성을 가진 세포가 주로 존재하는 Ⅳ 및 Ⅴ 군의 세포를 혼 합하여 10% FBS가 함유된 DMEM에서 일차 배양한 후 트립신-EDTA 용액으로 세포를 수집하고 세포수를 측정하여 각 실험에 이용하였다.

1-2. 파골세포 생성을 억제하는 조골세포 OPG(osteoprotegerin)의 발현

100㎜ 세포배양접시에 약 10⁶세포/20㎖ 정도로 키워진 MG-63의 배양액을 제거하고, DPBS 5㎖로 배양접시의 표면을 세척하고 버렸다. 트립신-EDTA 0.5㎖첨가하여 배양접시에 골고루 퍼지도록 한 뒤 CO₂ 배양기에서 약 1분 정도 넣어 두고 세포가 떨어지게 하였다. 10% FBS가 들어있는 DMEM 5㎖을 넣고 잘 섞은 뒤 15㎖ 시험관에 넣고 1500rpm에서 5분간 원심 분리하였다. 원심분리 후 세포가 가라앉은 것이 확인되면 상층액을 제거하고 다시 10% FBS가 들어있는 DMEM 5㎖을 넣고 세포가 잘 풀어지도록 섞어주었다. 세포계수기(Haemacytometer)를 이용하여 세포수를 계산하고 10⁴세포/웰로 96 웰 플래이트에 분주하였다. 분주하고 24시간 후 추출물을 0.5% FBS와 페니실린/스트렙토마이신이 들어 있는 DMEM 배양액에 각각 0.22, 0.66, 2, 6 ㎎/㎖ 농도로 희석하여 세포에 처리하였다.

실험의 신뢰성을 높이기 위하여 양성 대조군에 OPG 발현을 음성대조군 대비 2-5배 높이는 20mM CaCl₂를 처리하였다. 처리하고 24시간 후 각각의 배양 상층액을 DPBS를 이용하여 1/200로 희석하여 100㎕를 ELISA 플래이트에 넣고 분석하였다. ELISA 키트는 OCT 사의 OPG ELISA 키트를 사용하였으며 흡광 파장은 450 nm의 파장을 이용 하여 측정하였다. 분석하여 나온 OPG의 발현량을 표준곡선을 이용하여 환산 후 어떤 추출물도 처리하지 않은 무처리 대조군에 대한 처리군의 OPG발현 정도를 하기 수학식 1을 이용하여 상대적인 %로 환산하여 계산하였다.

<수학식 1>

OPG 발현율(%) = (1-실험군의 O.D.₄₅₀/대조군의 O.D.₄₅₀) ×100

(상기 식에서, O.D.₄₅₀는 450nm에서의 흡광도이다.)

상기 과정으로 조골세포에서 파골세포의 생성을 억제하는 물질인 OPG의 발현을 측정한 결과, 혼합 생약재 추출물은 농도 의존적으로 OPG발현을 촉진시켰으며, 6 ㎎/㎖의 농도에서 최대 230%까지 조골세포의 OPG의 발현을 촉진하는 경향을 나타내었다. 또한, 각각의 생약재 추출물을 처리했을 때보다 OPG 발현을 탁월하게 촉진시킴을 알 수 있었다(도 1).

실험예 2. 혼합 생약재 추출물에 의한 파골세포 증식 억제 실험

혼합 생약재 추출물 및 단일 추출물에 의한 파골세포의 생성 억제와 세포 활성도 감소 확인을 위하여, 본 발명자들은 다음과 같은 실험들을 시행하였다.

2-1. 파골세포 전구세포의 순수 분리 및 성숙한 파골세포로의 분화 유도 및 혼합 생약재 추출물의 처리

마우스 골수세포를 분리하기 위해 7 내지 9 주된 웅성 마우스를 경부염전으로 희생시킨 후 대퇴골과 경골을 무균적으로 적출하고 연조직을 제거하며 장골의 양끝을 절단한 후, 26G 주사침을 이용하여 한쪽 끝의 골수강에 0.1% 콜라젠 분해효소(collagenase)(Gibco), 0.05% 트립신 및 0.5 mM EDTA(Gibco)가 포함된 효소용액 1 ㎖를 주사하여 골수를 꺼낸 후 30 분간 교반하여 골수세포를 모아 10% FBS가 포함된 α-최소필수배지(α-MEM)에 24 시간 전 배양한 후 미부착 세포들을 얻었다. 파골세포의 전구세포가 되는 미부착 세포를 웰 당 2 ×10⁵ 개의 세포가 되도록 분주하여 배양하였다. 8 일간 배양하는 동안 20 ng/㎖ M-CSF(macrophage-colony stimulating factor; Peprotech, USA)와 30 ng/㎖ RANKL(Peprotech, USA)이 포함된 α-MEM에 실시예 1에서 제조된 혼합 생약재 추출물 및 단일 추출물을 처리하여 배양하였다. 배양을 완료한 후 파골세포의 생성을 검사하기 위하여, 세포를 고정하여 TRAP 염색을 시행하였다. 또한, 파골세포의 활성을 검사하기 위하여 세포를 떼어낸 후 흡수된 부위를 관찰하였다.

2-2. TRAP(+)인 다핵세포 생성 억제

상기 골수세포 배양 후, 부착세포를 PBS로 세척한 다음 시트레이트-아세테이트-포름알데히드(citrate-acetate-formaldehyde)로 5 분간 고정시키고 나프톨(naphthol) AS-BI 포스페이트(phosphate), 패스트가넷(fast Garnet) GBC 용액과 7 mM 타르트레 이트(tartrate) 완충용액(pH 5)을 함유하는 37℃ 아세테이트(acetate) 완충용액(pH 5.0)에 1 시간 동안 배양하여 TRAP 염색을 하였다. 이때, 3 개 이상의 핵을 가지는 TRAP(+) 다핵세포들을 파골세포로 간주하였다.

본 실험예에서는 파골세포의 분화를 유도하기 위하여 파골세포의 전구세포가 있다고 알려진 골수를 이용하였으며, TRAP에 양성(+)이며 다핵인 세포를 파골세포로 간주하고, 파골세포 전구세포를 배양하면서 실시예 1에서 제조된 혼합 생약재 추출물 및 단일 추출물을 처리하여 8일 동안 배양한 후 TRAP 양성 다핵세포의 수의 변화를 측정하여 아래의 수학식 2로 생성의 억제율을 표기하였다. 상기 과정으로 파골세포의 표지효소인 TRAP 활성을 측정한 결과, 혼합 생약재 추출물을 처리한 군은 어떤 추출물도 처리하지 않은 대조군에 비해 TRAP(+) 다핵 세포의 생성을 100%까지 억제시키는 것을 확인하였다. 상기 결과로부터, 본 발명의 혼합 생약재 추출물이 파골세포의 생성 억제 작용을 한다는 것을 확인하였다(도 2).

<수학식 2>

TRAP(+)인 다핵세포 생성 억제율(%) = 100 - {(실험군 다핵세포수 / 대조군 다핵세포수) ㅧ 100}

실험예 3. 혼합 생약재 추출물에 의한 사람의 치은섬유아세포와 치주인대세포 증식 확인

상기 실시예 1에서 분리한 혼합 생약재 추출물 및 단일 추출물이 사람 치주인대세 포와 치은섬유아세포의 증식과 세포 활성도 증가에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 하기와 같은 실험들을 실시하였다.

3-1. 사람치주인대세포 및 치은섬유아세포의 선별 및 세포 배양

건강한 사람의 교정치료 목적으로 발거한 소구치의 치주인대 부분을 큐렛(curette)을 이용하여 무균적으로 긁어서 배양접시에 올려놓은 후 10% FBS(fetal bovine serum)를 첨가한 DMEM(Gibco, BRL, USA) 배양액을 소량 넣어 배양하였다. 치은섬유아세포는 동소에서 발거후의 치은을 일부 떼어내어 동일한 방법으로 배양하였다. 이 때, 배양하면서 현미경으로 관찰하여 조직으로부터 세포가 이식편(explant)으로 나오는 것을 확인한다. 세포가 군집을 이루어 자란 후 각각의 조직표본을 제거하고 세포가 단층으로 자라도록 한 후, 계대 배양하여 실험에 이용하였다.

3-2. 사람 치주인대세포와 치은섬유아세포의 증식 측정

사람 치주인대세포와 치은섬유아세포를 24-웰 플레이트에 각 웰 당 20000 개의 세포가 들어가도록 넣어 5% CO₂ 배양기에서 48 시간 배양한 후, 각 농도의 혼합 생약재 추출물 및 단일 추출물이 들어있는 배양액으로 교체하여 다시 48 시간 더 배양하였다. 배양액을 제거 후 트립신-EDTA를 첨가하고, 세포수를 헤마사이토미터(Hemacytometer)로 계수하여 어떤 추출물도 처리하지 않은 군을 대조군으로 하여 아래의 수학식 3으로 증식율을 표기하였다. 혼합 생약재 추출물에 의해 치은섬유 아세포 및 치주인대세포의 증식은 각각의 생약재를 단독으로 처리한 경우보다 증식이 정상으로 유지되는 것을 확인하였다(도 3, 4).

<수학식 3>

세포 증식율(%) = 실험군 세포수/대조군 세포수 ㅧ 100

본 발명의 혼합 생약재 추출물의 각 성분의 효과는 상기에 기술된 이상적인 특성을 나타내지는 못하고 있으나, 각 성분을 배합한 혼합 생약재 추출물은 이상적인 특성을 나타내는 바, 치은섬유아세포와 치주인대세포 모두에 대해서는 정상수치를 유지할 수 있는 것을 확인할 수가 있다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

제제예 1 : 약학적 제제의 제조

1. 산제의 제조

혼합 생약재 추출물 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

2. 정제의 제조

혼합 생약재 추출물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

3. 캡슐제의 제조

혼합 생약재 추출물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 2 : 구강청정제 가글의 제조

혼합 생약재 추출물 0.01∼1.0g

자이리톨 5∼10g

에틸알콜 5∼15g

솔비톨 5∼15g

사카린 나트륨 10∼100mg

소디움 모노플루오로포스페이트 500∼1000mg

소디움 라우릴설페이트 100∼200mg

폴리솔베이트 20 100∼1000mg

페파민트 플레이버 10∼100mg

소디움 벤조에이트 10∼100g

정제수 적량

color 적량

합계 100g

상기 성분에 따라 통상의 구강 청정제 가글의 제조방법에 따라서 치주염 예방 및 치료효과가 있는 구강용 조성물인 가글을 제조하였다.

제제예 3 : 식품의 제조

본 발명의 혼합 생약재 추출물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

1. 밀가루 식품의 제조

본 발명의 혼합 생약재 추출물 0.5∼5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

2. 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 혼합 생약재 추출물 5 ∼ 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

3. 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명의 혼합 생약재 추출물을 진공 농축기에서 감압ㅇ농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 삼칠근 추출물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30중량부, 율무 15중량부, 보리 20중량부),

종실류(들깨 7중량부, 검정콩 8중량부, 검정깨 7중량부),

혼합 생약재 추출물의 건조분말(3 중량부),

영지(0.5중량부),

지황(0.5중량부)

제제예 4 : 음료의 제조

1. ℃탄산음료의 제조

설탕 5∼10%, 구연산 0.05∼0.3%, 카라멜 0.005∼0.02%, 비타민 C 0.1∼1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79∼94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85∼98℃에서 20∼180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5∼0.82%를 주입하여 본 발명의 혼합 생약재 추출물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.

2. 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 혼합 생약재 추출물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.

3. 야채쥬스의 제조

본 발명의 혼합 생약재 추출물 5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.

4. 과일쥬스의 제조

본 발명의 혼합 생약재 추출물 1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

본 발명의 큰느타리버섯(Pleurotus eryngii), 오가피(Acanthopanacis Cortex) 및 삼칠근(Notoginseng Radix)을 포함하는 혼합 생약재 추출물은 조골세포로부터 OPG의 발현을 촉진시켜 파골세포의 생성 및 활성화를 억제할 뿐만 아니라 파골세포의 증식을 억제하며, 치주인대세포 및 치은섬유아세포의 증식 유지에 효과가 있어 치은염, 치주염 등의 치주질환의 예방 및 치료를 위한 의약품 또는 건강식품에 유용하게 사용될 수 있다.

Claims (9)

1. 삭제
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 큰느타리버섯(Pleurotus eryngii), 오가피(Acanthopanacis Cortex) 및 삼칠근(Notoginseng Radix)을 포함하는 혼합 생약재 추출물을 유효성분으로 포함하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물.
6. 삭제
7. 제 5항에 있어서, 상기 혼합 생약재 추출물은 큰느타리버섯 25 ∼45 중량부, 오가피 1 ∼20 중량부 및 삼칠근 35 ∼65 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물.
8. 제 5항에 있어서, 상기 혼합 생약재 추출물은 큰느타리버섯 35 ∼45 중량부, 오가피 5 ∼15 중량부 및 삼칠근 45 ∼55 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물.
9. 제 5항에 있어서, 상기 혼합 생약재 추출물은 큰느타리버섯 40 중량부, 오가피 10 중량부 및 삼칠근 50 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 치주질환 예방 및 치료용 조성물.

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