KR100632312B1

KR100632312B1 - 실온저장가능한정맥내주사용면역글로불린제제

Info

Publication number: KR100632312B1
Application number: KR1019980044470A
Authority: KR
Inventors: 유타카 히라오; 모토노리 하시모토; 타에 기타무라; 야히로 우에무라
Original assignee: 미쯔비시 웰 파마 가부시키가이샤
Priority date: 1997-10-23
Filing date: 1998-10-23
Publication date: 2007-05-14
Also published as: CA2251342A1; ATE224203T1; PT911037E; CN1149100C; DK0911037T3; DE69808012T2; CN1224620A; CN1520885A; HK1021698A1; KR19990037317A; EP0911037B1; ES2182202T5; DE69808012T3; ES2182202T3; US6159471A; EP0911037B2; US6485725B1; EP0911037A1; DE69808012D1

Abstract

본 발명은 1,000 내지 10,000의 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 4 내지 10w/v%을 사용하여 4.5 내지 6.5의 pH, 0.0001 내지 0.1M의 이온 농도(ionic strength) 및 0 내지 4℃의 온도에서 면역글로불린-함유 용액을 분별시켜 상등액 분획을 회수하고; 상기 상등액 분획을 3.5 내지 5.0의 pH에서 농축시키는 단계를 포함하는, 정맥내 주사용 면역글로불린 제제를 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

실온 저장가능한 정맥내 주사용 면역글로불린 제제

본 발명은 정맥내 주사용 면역글로불린 제제, 보다 특히, 실온 저장가능한 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제에 관한 것이다.

혈장 단백질 성분인 γ-글로불린 중, IgG를 포함하는 면역글로불린 제제가 각종 감염성 질환을 예방하고 치료하는데 사용되어 왔다. 면역글로불린은 용액의 형태로는 불안정하다. 면역글로불린의 중합체 또는 이량체의 형성을 유발하는 분별 공정 동안 면역글로불린의 응집의 결과로서, 즉, 면역글로불린의 변성의 결과로서, 면역글로불린은 항보체 활성이라 불리는 보체-고정 특성에서 현저한 증가를 나타내어 a) 사람 신체에 정맥내 주사할 경우 혈청 보체 농도를 저하시키거나 (b) 아나필락시 쇽과 같은 심각한 부작용을 일으키게 된다. 따라서, 면역글로불린은 액체 제제로서가 아니라, 무수 제제, 특히 동결건조된 형태로서 제형화되어 왔다. 그러나, 무수 제제는, 사용할 때 이를 주사용 증류수 등에 용해시켜야 할 필요가 있기 때문에 용이하게 투여할 수 없다는 문제점을 수반한다.

반면에, 액체 제제는 주사용 증류수 등에 용해시키는 작업을 필요로 하지 않아 무수 제제에 비해 용이하게 투여할 수 있다. 그러나, 상기한 바와 같이 액체 제제는 면역글로불린의 안정성면에서의 열등하다는 결점을 수반한다. 따라서, 용액 형태에서도 안정성을 갖는 정맥내 주사용 면역글로불린의 액체 조성물을 개발하려고 계속 시도하여 왔다.

예를 들어, JP-A-63-192724(본원에 사용되는 용어 "JP-A"는 "미심사된 공개 일본 특허원"을 의미한다(미국 특허 제4,876,088호, EP 278422))는 낮은 전도성 및 5.5±0.2의 pH를 가지고 안정화제로서 솔비톨을 함유하는, 용액 형태에서도 안정성을 갖는 정맥 주사용 액체 면역글로불린 조성물을 기술하고 있다.

JP-A-58-43914(미국 특허 제4,396,608호 및 제4,499,073호, EP 73371)는 면역글로불린의 응집체를 실질적으로 함유하지 않고 약 90%를 초과하는 면역 혈청 글로불린의 단량체 함량을 갖는 면역글로불린 조성물을 수득하기 위해, 면역 혈청 글로불린의 용액을 약 0.001 미만의 이온 농도(ionic strength) 및 3.5 내지 5.0의 pH를 가지도록 조정한다고 기술하고 있다.

JP-A-9-124507(EP 764447)은 면역글로불린의 트리-(n-부틸) 포스페이트(TNBP) 처리에 의한 바이러스 불활성화 단계 후에 항보체 활성을 저하시키기 위해 pH 3.5 내지 5.0에서 이온 농도를 낮추는 단계를 기술하고 있다.

JP-A-7-238036(EP 702960)은 안정성을 개선시키기 위해, 면역글로불린의 응집, 즉, 면역글로불린의 중합체뿐만 아니라 면역글로불린의 이량체의 증가를 산 처리 또는 실온에서의 저장에 의해 억제하는 것을 기술하고 있다.

JP-W-59-501546(본원에 사용되는 용어 "JP-W"는 "미심사된 공개 일본 국제 특허원", WO 84-891)은 0.05 내지 2w/v% 폴리에틸렌 글리콜(PEG)의 존재하에 pH 5 내지 5.6에서의 면역글로불린 제제의 한외여과 처리를 기술하고 있다.

그러나, 상기 명세서의 단계들의 효과를 고려하더라도, 면역글로불린 제제의 저장 안정성, 특히 용액 형태에서의 면역글로불린 제제의 저장 안정성을 개선시킬 여지가 여전히 존재한다.

JP-A-63-8340(미국 특허 제4,762,714호 및 제4,948,877호, EP 240856)은, 사람 혈장 공급원으로부터 약 5.4 이하의 pH에서 냉 에탄올 분별 방법에 의해 면역 혈청 글로불린을 수득하고, 당해 면역 혈청 글로불린을 약 4.25 이하의 pH에서 약 3일 이상 동안 저장하거나 또는 이를 약 6.8 이하의 pH 및 45℃ 이상의 온도에서 감염성 레트로바이러스를 실질적으로 함유하지 않을 정도로 저장함을 포함하는, 후천성 바이러스를 실질적으로 함유하지 않는 면역 혈청 글로불린을 제조하는 방법을 기술하고 있다. 그러나, 상기한 발명은 레트로바이러스의 불활성화를 목적으로 하고 있다. 이와 같이 수득된 면역글로불린 제제는 면역글로불린의 응집과 같은 문제점에서의 개선을 나타낸다고 보고되어 있지는 않다.

WO 95-3826은, 용액 상태를 유지시키기 위한 안정화제로서 비이온성 계면활성제를 0.1g/L 이하로 포함하고, 알부민을 실질적으로 함유하지 않는 면역글로불린 제제를 기술하고 있다. 그러나, 오염된 알부민은, WO 95-3826 특허에 기술된 측정 방법의 민감성 때문에 상대비로서 1% 이하의 양으로 존재할 경우 WO 95-3826에 따라 측정할 수 없다.

JP-A-63-183539(미국 특허 제5,132,406호, EP 246579)는 가열 처리 단계, 4 내지 10% PEG를 사용하는 분별 처리에 의한 상등액 분획 회수 단계 및 10 내지 15% PEG 분별 처리에 의한 침전 분획 회수 단계의 조합을 포함하는, 정맥내 주사용 면역글로불린 제제의 제조 방법을 기술하고 있다.

상기한 바와 같이, 면역글로불린은 본질적으로 불안정한 단백질이어서, 액체 조성물의 제조시 이의 안정성은 중요한 관심사 중 하나이다.

본 발명의 목적은 상기한 문제점을 극복하여, 용액 형태에서도 우수한 저장 안정성을 갖는 면역글로불린 제제를 제공하는 것이다.

본 발명의 모든 목적은:

(1) 1,000 내지 10,000의 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 4 내지 10w/v%을 사용하여 4.5 내지 6.5의 pH, 0.0001 내지 0.1M의 이온 농도 및 0 내지 4℃의 온도에서 면역글로불린-함유 수용액을 분별시켜 면역글로불린-함유 상등액 분획을 회수하고;

당해 상등액 분획을 3.5 내지 5.0의 pH에서 농축시키는 단계를 포함하는, 정맥내 주사용 면역글로불린 제제를 제조하는 방법;

(2) 바이러스 불활성화 처리를 수행하는 단계, 흡수되지 않은 분획을 음이온 교환 처리에 의해 회수하는 단계, 1 내지 100nm의 평균 세공 크기를 갖는 다공성 막을 사용하는 여과 처리를 수행하는 단계, 흡수되지 않은 분획을 콜로이드성 실리카와의 접촉 처리에 의해 회수하는 단계 중 하나 이상, 바람직하게는 모두를 추가로 포함하는, 상기 (1)에 따른 정맥내 주사용 면역글로불린 제제를 제조하는 방법; 및

(3) 상기한 제조 방법 (1) 또는 (2)에 의해 제조한 정맥내 주사용 면역글로불린 제제, 특히 화학적으로 개질되지 않은 (화학적 개질-부재) 완전한 분자형 면역글로불린을 함유하고, 5 내지 6의 pH 및 1mmho 이하의 전기 전도도(8℃에서 산정)를 갖고, 제조 후 1년 이상 동안 실온에서 저장가능하고 저장 동안 20 유니트 이하의 항보체 활성 및 7% 이하의 면역글로불린 중 이량체 함량을 계속적으로 유지할 수 있는 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제에 의해 달성할 수 있다.

(1) 출발 물질:

면역글로불린을 함유하는 분획을 출발 물질로서 사용한다. 당해 분획은, 사람 혈청으로부터 유래하고 면역글로불린 분획을 함유하는 한 특별히 제한되지 않는다. 이러한 면역글로불린-함유 분획의 구체적 예는 콘(Cohn)의 에탄올 분별[참조 문헌: E.J. Cohn et al., J. Am. Chem. Soc., 68, 459(1946)]에 의해 수득가능한 분획 II + III 및 분획 II, 및 이에 상당하는 면역글로불린-함유 분획의 페이스트를 포함한다. 출발 물질은 사람 혈액형 항체, 칼리크레인, 프리칼리크레인(prekallikrein), IgM, IgG 중합체 등과 같은 불순물을 함유할 수 있다.

(2) 공정:

(a) 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 처리:

출발 면역글로불린-함유 분획을 저농도의 PEG로 처리하고 상등액을 회수한다.

당해 출발 물질을 먼저 적합한 수성 용매에 현탁시킨다. 이때, 수성 용매를 상기 분획의 2배 이상 용적, 바람직하게는 5배 이상의 용적으로 사용한다. 당해 수성 용매는 염화나트륨, 인산나트륨, 인산칼륨, 아세트산, 아세트산나트륨, 시트르산, 시트르산나트륨 등을 함유할 수 있다.

또한, 바람직하게는, 면역글로불린 함유 수성 용매의 pH는 4.5 내지 6.5의 범위이고, 이온 농도는 0.0001 내지 0.1M의 범위이다.

생성된 현탁액을 약 1,000 내지 10,000, 바람직하게는 약 2,000 내지 6,000의 분자량을 갖는 PEG로 처리한다. 당해 처리는, 예를 들어, 당해 현탁액과 PEG를 교반시켜, 통상적으로 0 내지 4℃의 온도에서 30분 내지 6시간 동안 혼합하는 방법으로 수행한다. 권장되는 처리 조건은: 단백질 농도 1 내지 20w/v%, 바람직하게는 5 내지 15w/v%; PEG 농도 4 내지 10w/v%, 바람직하게는 4 내지 8w/v%; pH 4.5 내지 6.5, 바람직하게는 5 내지 6; 및 이온 농도 0.0001 내지 0.1M, 바람직하게는 0.0001 내지 0.01M이다.

다음, 당해 혼합물을, 예를 들어, 6,000 내지 8,000rpm에서 10 내지 30분 동안 원심분리시켜 상등액을 회수한다.

(b) 산성 pH에서의 농축 처리:

이 단계에서는, 상기 처리 (a)에서 수득한 상등액 분획을 3.5 내지 5.0의 pH(바람직하게는 4 내지 4.5의 pH)에서 농축시킨다. 구체적으로, 농축 처리는 약 100,000의 분자량 컷오프를 갖는 한외여과 막을 사용하여 수행한다. 이러한 처리는 1 내지 10kg/m²의 압력하에 수행할 수 있다.

(c) 음이온 교환체 처리:

당해 공정은 면역글로불린-함유 분획을 수성 용매에 용해시키고 상기 용액을 음이온 교환체와 접촉시켜 비흡착성 분획을 회수함을 포함한다. 음이온 교환체를 사용하는 처리는 IgM 및/또는 IgG 중합체를 제거하는데 특히 효과적이다.

사용하는 음이온 교환체는 불용성 캐리어에 결합된 음이온 교환 그룹을 포함한다. 음이온 교환 그룹은 디에틸아미노에틸(DEAE)형, 4급 아미노에틸(QAE)형 등을 포함하고, 불용성 캐리어는 아가로스, 셀룰로스, 덱스트란, 폴리아크릴아미드 등을 포함한다. 이들은 당해 분야에 공지된 방법으로 결합시킬 수 있다.

면역글로불린-함유 침전물을 5 내지 7의 pH, 바람직하게는 5.5 내지 7의 pH 및 낮은 이온 농도, 바람직하게는 0.0001 내지 0.1M의 이온 농도를 갖는 적합한 수성 용매에 용해시킨다. 당해 수성 용매는 상기 공정 (a)에서 기술한 바와 같은 용질을 함유할 수 있다. 생성된 용액의 단백질 농도는 바람직하게는 1 내지 15w/v%, 보다 바람직하게는 3 내지 10w/v%의 범위이다.

다음, 상기 면역글로불린 용액을, 위에서 사용한 것과 동일한 수성 용매로 평형화된 음이온 교환체와 뱃치 시스템 또는 연속 시스템으로 접촉시킨다. 예를 들어, 뱃치식 처리는 면역글로불린 용액을 음이온 교환체 ml당 약 10 내지 100ml의 양으로 음이온 교환체와 혼합하고, 당해 혼합물을 0 내지 4℃에서 약 0.5 내지 2시간 동안 교반시키고, 당해 혼합물을 6,000 내지 8,000rpm에서 10 내지 30분 동안 원심분리시켜 상등액을 회수하는 방법으로 수행할 수 있다. 연속 처리는 면역글로불린 용액을 음이온 교환체 ml당 약 10 내지 100ml의 유속으로 음이온 교환체의 칼럼을 통과시키고 비흡착된 분획을 회수하는 방법으로 수행할 수 있다.

본 발명에서, 상기 공정 (c)는 경우에 따라서 생략할 수 있다. 그러나, IgM 또는 IgG 중합체가 오염물로서 존재할 경우, 바람직하게는 공정 (c)를 수행한다.

(d) 다공성 막을 사용하는 처리:

본 발명에 따른 면역글로불린 제제는 불용성 이물질의 형성에 핵으로서 작용할 수 있는 미립자가 제거된 제제를 포함한다. 제거 방법의 예는 다공성 막(예를 들어, 중공사(hollow yarn) 또는 시트 형태)을 통한 여과법을 포함한다.

본 발명에서 사용가능한 다공성 막의 재료는 특별히 제한되지 않는다. 재생 셀룰로스가 바람직하다. 막 형태의 예로는 중공사 및 시트가 있고, 중공사가 바람직하다. 예를 들어, 재생 셀룰로스로 만든 다공성 중공사를 바람직하게는 암모늄 구리셀룰로스 용액으로부터 마이크로 상 분리법(micro phase separation method)[참조 문헌: American Chemical Society, 9:197-228(1985)]에 의해 제조한다.

다공성 막의 평균 세공 크기는 1 내지 100nm, 바람직하게는 10 내지 75nm, 보다 바람직하게는 10 내지 50nm, 가장 바람직하게는 35± 2nm이다. 이의 두께는 바람직하게는 35± 3.5㎛이다. 당해 막은 바람직하게는 다층 구조를 갖는다. 다공성 막이 중공사 형태일 경우, 이의 내부 직경은 바람직하게는 330± 30㎛이다.

다공성 막이 중공사 형태일 경우, 이를 바람직하게는 모듈 형태로 사용한다. 당해 모듈은 바람직하게는 0.001 내지 1.0cm²의 막 면적을 갖는 다공성 중공사 막, 당해 막으로 충전된 용기 및 이들을 집적시키는 접착제로 이루어져 있다.

다공성 막을 통한 여과 처리는, 예를 들어 다음과 같이 수행한다:

먼저, 면역글로불린 분획을 적합한 수성 용액에 용해시킨다. 수성 매질은 4 내지 7의 pH(보다 바람직하게는 pH 5 내지 6) 및 낮은 이온 농도(보다 바람직하게는 0.0001 내지 0.1M)를 갖는 것이 바람직하다. 수성 매질의 예는 염화나트륨 수용액, 주사용 증류수 및 아세테이트 완충액 등을 포함한다. 이와 같이 제조된 면역글로불린 용액은 단백질 농도 1 내지 15w/v%(보다 바람직하게는 3 내지 10w/v%) 및 pH 4 내지 7(바람직하게는 5 내지 6)을 갖는 것이 바람직하다.

이와 같이 제조된 면역글로불린 용액은 약제학적으로 허용되는 첨가제(예를 들어, 담체, 부형제, 희석제), 안정화제 및/또는 약제에 사용하는 약제학적으로 필요한 성분을 본 발명의 목적을 손상시키지 않는 범위내로 함유할 수 있다.

안정화제의 예는 단당류(예를 들어, 글루코스), 이당류(예를 들어, 사카로스, 말토스), 당 알콜(예를 들어, 만니톨, 솔비톨), 중성 염(예를 들어, 염화나트륨), 아미노산(예를 들어, 글리신) 및 비이온성 계면활성제(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체(상품명 "Pluronic"), 및 폴리옥시에틸렌 솔비탄 지방산 에스테르(상품명 "Tween")가 있다. 안정화제는 바람직하게는 약 1 내지 10w/v%의 양으로 가한다.

상기한 면역글로불린-함유 용액을 다공성 막을 통해 여과시킨다. 이때 여과 압력 또는 강도는 0.1 내지 1kgf/cm², 바람직하게는 0.1 내지 0.5kgf/cm², 보다 바람직하게는 0.1 내지 0.3kgf/cm²이다. 처리 온도는 바람직하게는 4 내지 50℃이다.

여과 처리 방식의 예는 스트레인 속도(straining rate)를 액체에 제공하면서 여과를 수행하는 크로스 유출(cross flow) 여과법(순환형) 및 스트레인 속도를 제공하지 않으면서 여과를 수행하는 데드 엔드(dead end) 여과법(비순환형)을 포함한다. 압착된 공기에 의한 크로스 유출 여과법을 채택하는 것이 바람직하다.

여과 처리는 수 시간 동안 수행할 수 있다. 상기 여과 처리에 앞서, 면역글로불린-함유 용액을 또 다른 여과 처리에 적용시킬 수 있다.

이와 같이 제조된 면역글로불린 제제는, 불용성 이물질을 형성시키는 핵이 될 수 있는, 100nm 이상, 바람직하게는 75nm 이상, 보다 바람직하게는 35nm 이상의 평균 입자 크기를 갖는 불용성 미립자 및/또는 면역글로불린의 분자량(약 150000)보다 큰 분자량을 갖는 가용성 미립자가 제거된 제제여서, 용액 형태의 면역글로불린 제제를 진탕시키면서 25℃에서 30일 이상 동안 저장하거나 또는 37℃에서 39일 이상 동안 저장할 경우에도, 면역글로불린의 응집, 즉, 불용성 이물질의 생성을 유발하지 않으며, 우수한 저장 안정성을 나타낸다. 즉, 불용성 이물질이 가시적으로 관찰되지 않는다.

또한, 추가로 면역글로불린을 정제하기 위해 공지된 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 고정화된 디아미노 화합물을 사용하는 (칼리크레인 또는 프리칼리크레인 제거용) 처리 방법 및 고정화된 사람 혈액형 물질을 사용하는 (사람 혈액형 항체 제거용) 처리 방법을 사용할 수 있다[참조 문헌: JP-A-9-176045, 미국 특허 제 5,132,406호, EP 246579].

본 발명에 따라, 공정 (d)는 경우에 따라서 생략할 수 있다.

(e) 콜로이드성 실리카를 사용하는 처리:

이는 비흡착된 분획을 콜로이드성 실리카와의 접촉 처리에 의해 회수하는 방법이다. 이 단계는 면역글로불린 제제 중의 혈청 알부민 양을 감소시킨다.

(i) 흡착제

흡착제로서 사용되는 콜로이드성 실리카의 예는 실리카 겔, 경질 무수 규산, 규조토, 산 점토, 벤토나이트, 카올린 및 마그네슘 실리케이트 알루미네이트를 포함한다. 바람직하게는, 경질 무수 규산("Aerosil", 상품명; 니폰 에어로실 캄파니, 리미티드(Nippon Aerosil Co., Ltd.)의 제품 및 "Delipid", 상품명; 제타 인코포레이티드(Zeta Inc.)의 제품)을 사용한다.

(ii) 처리 조건

정제된 면역글로불린을 적합한 수성 용매에 용해시킨다. 수성 매질은 4 내지 7의 pH(보다 바람직하게는 5 내지 6) 및 낮은 이온 농도(보다 바람직하게는 0.0001 내지 0.1M)를 갖는 것이 바람직하다. 수성 매질의 예는 상기 음이온 교환체를 사용하는 처리에서 예시한 것을 포함한다. 이와 같이 제조된 면역글로불린은 단백질 농도 1 내지 15w/v%(보다 바람직하게는 3 내지 10w/w%) 및 pH 4 내지 7(보다 바람직하게는 pH 5 내지 6)을 갖는 것이 바람직하다.

이와 같이 제조된 면역글로불린 용액은 약제학적으로 허용되는 첨가제(예를 들어, 담체, 부형제, 희석제), 안정화제 및/또는 약제에 통상적으로 사용하는 약제학적으로 필요한 성분을 본 발명의 목적을 손상시키지 않는 범위내로 함유할 수 있다.

안정화제의 예는 단당류(예를 들어, 글루코스), 이당류(예를 들어, 사카로스, 말토스), 당 알콜(예를 들어, 만니톨, 솔비톨), 중성 염(예를 들어, 염화나트륨), 아미노산(예를 들어, 글리신) 및 비이온성 계면활성제(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 중합체("Pluronic", 상품명), 폴리옥시에틸렌 솔비탄 지방산 에스테르("Tween", 상품명))를 포함한다. 안정화제는 바람직하게는 약 1 내지 10w/v%의 양으로 가한다.

다음, 면역글로불린 용액을 상기한 흡착제와의 접촉 처리에 적용시킨다. 사용하는 접촉 처리 조건으로서, 면역글로불린의 농도가 1 내지 100g/L(보다 바람직하게는 10 내지 100g/L)일 경우에 흡착제를 1 내지 30g/L의 양으로 사용한다. 당해 처리는, 예를 들어, 뱃치 방법 또는 칼럼 방법에 의해 수행할 수 있다. 이들 중, 뱃치 방법이 바람직하다. 뱃치 방법에서, 혼합 및 교반을 하기 조건, 예를 들어, 5 내지 25℃에서 약 5분 내지 1시간 동안 수행한다. 다음, 상등액(비흡착된 분획)을, 예를 들어, 여과 또는 원심분리에 의해 회수할 수 있다.

혈청 알부민을 제거한 면역글로불린 제제는 혈청 알부민의 오염물을 면역글로불린 50mg당 10㎍ 이하, 바람직하게는 5㎍ 이하의 양으로 함유한다. 구체적으로는, 면역글로불린 제제가 면역글로불린을 5w/v% 함유하는 용액의 형태일 경우, 이는 혈청 알부민의 오염물을 10㎍/ml 이하, 보다 바람직하게는 5㎍/ml 이하의 양으로 함유한다. 이러한 특성을 갖는 면역글로불린 제제는 통상의 면역글로불린 제제보다 우수한 저장 안정성을 나타낸다. 예를 들어, 진탕하에 25℃에서 30일 이상 동안 저장한 후에도, 또는 37℃에서 39일 이상 동안 저장한 후에도, 용액 형태의 면역글로불린 제제는 불용성 이물질을 함유하지 않는다. 즉, 불용성 이물질이 가시적으로 관찰되지 않는다. 면역글로불린 제제 중의 혈청 알부민의 검정으로서, 당업계에서 공지된 방법을 사용할 수 있다. 예로는 ELISA 방법, 만치니(Mancini) 방법 및 비탁계법(nephelometry)이 있다.

본 발명에서, 공정 (e)는 경우에 따라서 생략할 수 있다. 그러나, 혈청 알부민이 오염물로서 존재할 수 있는 경우, 바람직하게는 공정 (e)를 수행한다.

(f) 바이러스 불활성화 처리:

이 공정에 따라, 면역글로불린의 항체 활성의 감소를 최소화시키면서 불순물, 예를 들어, HB 바이러스, AIDS 바이러스 등을 완전히 불활성화시키는 조건하에서 면역글로불린-함유 분획을 안정화제의 존재하에 가열한다. 가열 처리는 3% 이하의 수분 함량을 갖는 무수 상태(즉, 무수 가열 처리)에서 또는 수성 용액의 형태로 용해된 상태(즉, 습윤 가열 처리)에서 수행한다.

무수 또는 습윤 가열 처리에서 사용할 수 있는 안정화제는 바람직하게는 이당류(예를 들어, 수크로스, 말토스 등) 및 당 알콜(예를 들어, 솔비톨, 만니톨 등)을 포함한다.

가해지는 안정화제의 권장량은 무수 가열 처리에서 0.5 내지 5w/v%, 바람직하게는 1 내지 3w/v%, 또는 습윤 가열 처리에서 10w/v% 이상, 바람직하게는 10 내지 50w/v%이다.

가열 처리할 면역글로불린-함유 분획의 단백질 농도는, 무수 가열 처리의 경우에 1 내지 10w/v%, 바람직하게는 3 내지 7w/v%으로, 또는 습윤 가열 처리의 경우에 0.1 내지 30w/v%, 바람직하게는 5 내지 20w/v%으로 조정하는 것이 바람직하다.

무수 가열 처리의 경우, 안정화제를 면역글로불린 분획에 가하고, 필요한 경우 여과에 의해 멸균시킨 후에, 분획의 수분 함량을, 예를 들어 동결-건조에 의해 3% 이하, 바람직하게는 1% 이하로 조정한다. 동결-건조는, 예를 들어 20 내지 40℃의 온도에서 약 24 내지 96시간 동안 0.5mmHg의 진공하에 수행할 수 있다. 다음, 분획을 50 내지 70℃, 바람직하게는 약 60℃의 온도에서 10 내지 200시간, 바람직하게는 약 50 내지 100시간 동안 가열한다. 가열 동안 면역글로불린의 안정성은 질소, 아르곤, 헬륨 등과 같은 불활성 기체 대기에서 가열 처리함으로써 확보할 수 있다.

습윤 가열 처리의 경우, 면역글로불린-함유 분획의 수성 용액을 pH 4.5 내지 6.5, 바람직하게는 5 내지 6으로 조정한 후에 당해 용액을 50 내지 70℃, 바람직하게는 약 60℃에서 10분 내지 20시간, 바람직하게는 약 10시간 동안 가열한다.

가열 처리 공정이 무수 가열 처리인 경우, 당해 공정을 최종 공정 단계에서 수행하는 것이 바람직하다. 반면, 습윤 가열 처리일 경우, 당해 공정을 출발 물질에 대해 수행하는 것이 바람직하다.

또한, 추가의 바이러스 불활성화 단계는 트리알킬 포스페이트를 사용하는 용매 세제 처리로 수행할 수 있다. 본 발명의 면역글로불린-함유 조성물과 트리알킬 포스페이트와의 접촉시 상기 조성물의 정제 정도는 특별히 제한되지 않으나 어느 정도로 정제된 조성물을 사용할 수 있다. 다음, 트리알킬 포스페이트와의 접촉은 면역글로불린에 대한 분리 단계 또는 정제 단계에서 수행할 수 있다.

특별히 제한되지는 않더라도, 본 발명에서 사용되는 트리알킬 포스페이트의 적합한 예는 트리-(n-부틸) 포스페이트, 트리-(3급-부틸) 포스페이트, 트리-(n-헥실) 포스페이트, 트리-(2-에틸헥실) 포스페이트 및 트리-(n-데실) 포스페이트 등을 포함한다. 특히 바람직한 트리알킬 포스페이트는 트리-(n-부틸) 포스페이트(이후 "TNBP"라 기재함)이다. 2가지 이상의 트리알킬 포스페이트의 혼합물도 사용할 수 있다.

본 발명의 트리알킬 포스페이트는 면역글로불린의 수용액을 기준으로 하여 0.01 내지 10%(w/v), 바람직하게는 약 0.1 내지 3%(w/v)의 양으로 사용할 수 있다.

트리알킬 포스페이트와의 접촉은 0 내지 60℃(바람직하게는 20 내지 40℃)에서 30분 이상(바람직하게는 1 내지 30시간, 보다 바람직하게는 3 내지 10시간) 동안, 약 6 내지 8의 pH에서 수행한다.

트리알킬 포스페이트는 단독으로 또는 계면활성제와 함께 사용할 수 있다. 바람직하게는, 트리알킬 포스페이트는 계면활성제와 혼합하여 사용할 수 있다. 계면활성제는 면역글로불린-함유 조성물을 트리알킬 포스페이트와 접촉시키기 전, 동안 또는 후에 임의의 단계에서 당해 조성물에 가할 수 있다. 계면활성제의 기능은 면역글로불린-함유 조성물 중의 바이러스와 트리알킬 포스페이트와의 접촉을 촉진시키는 것이다.

계면활성제의 예로는 지방산의 폴리옥시에틸렌 유도체, Tween 80, Tween 20 및 폴리솔베이트 80과 같은 솔비톨 무수물의 부분적 에스테르, 및 Triton X100(옥시에틸화 알킬페놀)과 같은 비이온성 오일 가용성 세정제가 있다. 또한, 나트륨 데옥시콜레이트 및 설포베타인, 예를 들면 N-도데실-N,N-디메틸-2-암모니오-1-에탄 설포네이트 및 이의 유사체로서 공지된 합성 쯔비터 이온 세제, 및 옥틸-β,D-글루코포이라노사이드 등과 같은 비이온성 세제도 유용하다.

계면활성제를 사용할 경우, 이의 양은 중요하지 않으나 약 0.001% 내지 약 10%, 바람직하게는 약 0.01% 내지 3%의 범위내일 수 있다.

트리알킬 포스페이트 처리는 B형 간염 바이러스, 비-A형 비-B형 간염 바이러스, 사람 면역결핍 바이러스(HIV), 소낭성 구내염 바이러스, 신드비스(sindbis) 바이러스 등과 같이 외피로 피복된 바이러스의 불활성화에 특히 유용하다.

용매 세제 처리에서, 면역글로불린은 약 0.1w/v 내지 30w/v(%), 바람직하게는 1w/v 내지 20w/v(%)의 양으로 존재한다.

(3) 최종 제제(특히 액체 제제)

(a) 액체 제제의 제조

본 발명에 따른 정맥내 주사용 면역글로불린 제제를 제조하는 상기한 방법을 사용함으로써, 정맥내 주사용 면역글로불린 제제를 수득할 수 있다. 바람직한 양태에서, 정맥내로 투여할 수 있는 화학적-개질 부재 및 완전-분자의 면역글로불린 액체 조성물(제제)은, 화학적 개질 부재 및 완전-분자의 면역글로불린의 수용액을 통상적인 방법에 의해 1 내지 10w/v%(보다 바람직하게는 3 내지 7w/v%)의 농도를 갖도록 조정하고; 생성된 용액을, 공지된 방법에 의해 안정화제, 예를 들어 솔비톨을 1 내지 20w/v%(보다 바람직하게는 2 내지 10w/v%)의 양으로 함유하고, pH 5 내지 6(보다 바람직하게는 pH 5.5±0.2) 및 낮은 전도도(보다 바람직하게는 1mmho 이하, 더욱 보다 바람직하게는 0.6mmho 이하의 전도도, 각각 8℃의 조건에서 산정)를 갖도록 조정한 다음; 생성된 용액을 소량씩 부으면서 멸균 여과에 적용시키고 통상적인 제형화 기술을 바탕으로 한 방식에 적용시킴으로써 수득할 수 있다.

이와 같이 형성된 제제로부터, 화학적-개질 부재 및 완전-분자의 면역글로불린을 함유하고, 5 내지 6의 pH(보다 바람직하게는 약 5.5± 0.2) 및 1mmho 이하의 전도도(보다 바람직하게는 0.6mmho 이하, 각각 8℃의 조건에서 산정)를 가지고, 실온에서 저장할 수 있으며, 20 유니트 이하의 항보체 활성을 가지고, 7% 이하의 면역글로불린 중 이량체 함량을 갖는 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제를 제조할 수 있다.

본원에 사용되는 바와 같은 용어 "화학적으로 개질되지 않은 완전한 분자형 면역글로불린"은 하기 특성을 갖는 면역글로불린을 의미한다:

(i) 이는 어떠한 인공적인 개질 또는 변화를 겪지 않아 온전하게(천연적으로) 유지된다. 따라서, 이는 Fab, F(ab')₂, Fc 등과 같은 면역글로불린 단편을 함유하지 않는다.

(ii) 이는 온전한 면역글로불린과 비교하여 항체 스펙트럼 또는 항체 역가의 감소를 나타내지 않는다.

(iii) 이의 항보체 활성(보체 고정 활성)은 일본 후생성에 의해 허여된 고시 제159호(1985년 10월)에 따른 일본 생물학적 제제 기준에 의거하여 안전하다고 인정되는 20 유니트(CH50치)보다 충분히 낮다. (CH50의 조건에서 1 유니트는 특정의 이온 농도 및 pH치, 및 Ca⁺⁺ 및 Mg⁺⁺의 특정량을 갖는 반응 혼합물 7.5ml 중의 감작화된 적혈구 5× 10⁸ 세포의 양을 37℃에서 60분간의 반응하에 반으로 용혈시키는데 필요한 보체의 양으로 정의한다.)

면역글로불린 이량체의 함량의 안전한 범위를, 화학적-개질 부재 및 완전-분자의 면역글로불린을 포함하는 정맥내 주사용 면역글로불린-함유 제제에 대해 고려할 경우, 면역글로불린 이량체의 함량은 7% 이하, 바람직하게는 6% 이하, 가장 바람직하게는 4% 이하로 정한다.

본 발명에 따른 제제는 실질적으로 불활성화되지 않은 면역글로불린을 가지고, IgG 중합체나 오염물을 함유하지 않으며, 우수한 용해성 및 충분히 낮은 항보체 활성을 가지며, 바이러스를, 예를 들어 가열 처리에 의해 불활성화시킬 경우, 생물학적 제제 기준을 통과할 수 있는 안전한 제제이다.

본 발명에 따른 면역글로불린 제제는 그대로 사용하거나 액체 제제일 경우에는 적합한 용매(예를 들어, 주사용 증류수, 생리 식염수, 글루코스 용액)로 희석시킬 수 있다. 한편, 무수 제제일 경우에는 상기한 면역글로불린 용액을 동결건조시킨다. 이는 사용할 때 적합한 용매(예를 들어, 주사용 증류수)에 용해시킨다.

(b) 적용가능한 치료할 질환의 예

1. 저감마글로불린혈증 및 무감마글로불린혈증

2. 중증의 염증성 질환

3. 2차 혈소판 감소 자반병

4. 가와사키(Kawasaki) 질환의 급성 상태

(c) 사용법 및 투여량

본 발명의 약제학적 제제는 정맥내 점적 주입법에 의해 또는 직접적으로 정맥내 주사에 의해 사용한다. 직접 정맥내 주사에 사용할 경우, 극히 천천히 주사하는 것이 바람직하다.

일반적으로, 성인의 경우에 사람 면역글로불린 G의 단위 투여량으로서 2,500 내지 5,000mg의 양으로 사용하거나, 아동의 경우에 사람 면역글로불린 G의 단위 투여량으로서 100 내지 150mg/kg(체중)의 양으로 사용한다. 상기 투여량 범위는 나이 및 증상에 따라 임의적으로 변화된다.

2차 혈소판 감소 자반병에서 사용할 경우, 이를 일반적으로 사람 면역글로불린 G로서 매일 200 내지 400mg/kg(체중)의 투여량으로 투여한다. 상기 투여량 범위는 나이 및 증상에 따라 임의적으로 변화된다.

가와사키 질환에서 사용할 경우, 이를 일반적으로 사람 면역글로불린 G로서 매일 400mg/kg(체중)의 투여량으로 5일 동안 투여한다. 상기 투여량 범위는 나이 및 증상에 따라 임의적으로 변화된다.

본 발명에 따라, 면역글로불린의 수율 및 실온에서 저장된 면역글로불린의 안정성을 개선시킬 수 있다. 또한, 오염된 알부민을 제거하고 불용성 이물질을 형성하는 주변의 미립자를 제거함으로써 불용성 이물질의 생성을 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명은 용액 상태에서 면역글로불린의 개선된 안정성을 갖는 제제, 특히 액체 제제를 제공한다.

이후 실시예 및 시험예에 의해 보다 구체적으로 본 발명을 기술할 것이다. 그러나, 본 발명은 이에 제한되지는 않는다는 것을 유념해야 한다.

실시예 1

사람 혈장으로부터 냉 에탄올 방법에 의해 수득된 콘 분획 II + III 1kg에, 물 10L를 가한 다음, IgG를 추출한다. 생성된 상등액 100ml당 솔비톨 50g을 가하고 pH를 5.5로 조정한 후에, 생성된 혼합물을 60℃에서 10시간 동안 가열한다. 다음, 반응 혼합물을 pH 5.5로 조정하고 주사용 냉수로 3배 희석시킨다. 희석된 액체에, 폴리에틸렌 글리콜(평균 분자량: 4000)을 가하여 최종 농도를 8w/v%로 만든다. 생성된 혼합물을 2℃에서 원심분리시켜 상등액을 수득한다. 이와 같이 수득된 상등액을 pH 4로 조정한 다음, 당해 용액을 100,000 분자량 컷오프의 한외여과 막(Pericon 2 Biomax, 밀리포어(Millipore) 제조)을 사용하여 주사용수에 대해 농축시킨다. pH 5 내지 7로 조정한 생성 용액에, 주사용수로 평형화된 DEAE-Sephadex(용액 50ml당 약 2ml)를 가한다. 0 내지 4℃의 온도하에, 생성된 혼합물을 약 1시간 동안 접촉 처리에 적용시킨다. 상기 처리 후에, DEAE-Sephadex를 여과에 의해 제거하여 여액(IgG 용액)을 회수한다.

이와 같이 회수된 IgG 용액을, 주사용수를 사용하여 5w/v% 용액으로 희석시키고, 아세트산나트륨을 사용하여 이의 pH를 약 5.5로 조정한다. 다음, 솔비톨을 이에 가하여 최종 농도를 5%로 만든다. 이와 같이 수득된 수용액(전도도: 약 1mmho)을 여과에 의해 멸균시켜 정맥내 투여용 면역글로불린 제제를 수득한다.

실시예 2

실시예 1에서 제조된 면역글로불린을 5w/v% 함유하는 용액을 무수 실리카-보유 여과기(Zeta Plus Delipid, 큐노 코포레이션(Quno Corp.) 제조)로 통과시킨다. 다음, 이를 여과에 의해 멸균시켜 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제를 수득한다.

이와 같이 수득된 5w/v% 면역글로불린-함유 용액내의 오염된 알부민의 양은 만치니 방법에 의해 측정한 결과 5㎍/ml였다.

실시예 3

구리암모늄 재생 셀룰로스를 재료로 하여 수득한, 평균 세공 크기 35± 2nm, 막 면적 0.001 내지 1.0m², 중공사 내부 직경 330± 30㎛, 막 두께 35± 3.5㎛ 및 150개 이상의 다층 구조를 갖는 다공성 중공사(벰베르그 마이크로포러스 멤브레인(Bemberg Microporous Membrane); 이후 "BMM"으로 기재함)을 모듈화시킴으로써 제조되는 다공성 중공사(BMM) 모듈(상품명: Planova 35)(구입원: 아사히 케미칼 인더스트리(Asahi Chemical Industry))을 사용한다. 폴리우레탄 접착제를 사용하여, 상기 BMM 모듈을 오토클레이브시킬 수 있는 폴리카보네이트로 만든 플라스틱 용기의 내부와 집적시키고, 주사용 증류수를 모듈내에 패킹시킨다. Planova-구성 재료의 각각의 안정성은 일본의 약전에 의해 확립된 (BMM에 대한 기술에 따른) 각각의 방법에 의해 확인되었다.

실시예 1에서 제조된 면역글로불린을 5w/v% 함유하는 용액을, 여과(0.2㎛의 세공 크기를 갖는 막 여과기에 의한 여과)에 의해 멸균시킨 다음, 0.2kfg/cm²의 여과 압력하에 5℃에서 Planova 35 모듈을 사용하는 막 여과 처리(공기압을 사용하는 데드 엔드 여과)에 1 내지 5시간 동안 적용시킨다. 냉각 후에, 멸균 처리를 다시 수행하여 주사용 면역글로불린 액체 제제를 제조한다.

실시예 4

실시예 1에서 제조된 면역글로불린을 5w/v% 함유하는 용액을 다공성/저 A1 여과기(Zeta Plus LA90, 큐노 코포레이션 제조) 및 무수 실리카-보유 여과기(Zeta Plus Delipid, 큐노 코포레이션 제조)에 통과시켜 흡수되지 않은 분획을 회수한다. 이를 여과에 의해 추가로 멸균시켜 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제를 수득한다.

실시예 5

실시예 1에서 제조된 면역글로불린을 5w/v% 함유하는 용액을 다공성/저 A1 여과기(Zeta Plus LA90, 큐노 코포레이션 제조) 및 무수 실리카-보유 여과기(Zeta Plus Delipid, 큐노 코포레이션 제조)로 통과시켜 흡수되지 않은 분획을 회수한다. 실시예 3의 과정에 따른 BMM 처리를 수행한 후에, 상기 분획을 여과에 의해 멸균시켜 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제를 수득한다.

실시예 6

액체 상태 가열 처리를 pH 5.5 및 60℃에서 10시간 동안 수행하는 대신에 분획을 TNBP(트리-n-부틸 포스페이트) 0.3w/v% 및 폴리옥시에틸렌 솔비탄 올레산 모노에스테르(Twwen 80)와 pH 7 및 30℃에서 6시간 동안 접촉시켜 바이러스 불활성화 처리를 수행하는 것을 제외하고는, 실시예 1에 기술한 바와 동일한 방법으로 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제를 제조한다.

실시예 7

pH 5.5로 조정하고 솔비톨과 혼합함으로써 액체 제제를 제조하는 대신에 분획의 pH를 6.4 내지 7.2로 조정한 다음, 분획을 0.6% 염화나트륨, 2% 만니톨 및 1% 알부민과 혼합하여 동결 건조를 수행하는 것을 제외하고는, 실시예 1에 기술한 바와 동일한 방법으로 정맥내 주사용 면역글로불린의 분말 제제를 제조한다.

실시예 8

실시예 1의 제조 단계에서 제1 단계로 pH 5.5 및 60℃에서 10시간 동안의 액체 상태 가열 처리를 수행한 다음, pH를 5.5로 조정하고 솔비톨과 혼합함으로써 액체 제제를 제조하는 반면에 실시예 8에서는 제1 단계인 액체 상태 가열 처리를 수행하지 않고, 이 대신에 용액의 pH를 6.4 내지 7.2로 조정한 다음, 0.6% 염화나트륨, 2% 만니톨 및 1% 알부민과 혼합하여 최종 단계에서 동결 건조를 수행한 후에, 60℃에서 72시간 동안 가열 처리하는 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 정맥내 주사용 면역글로불린의 분말 제제를 제조한다.

시험예 1

실시예 1 내지 8에서 제조된 정맥내 주사용 면역글로불린 제제의 특성을 조사한다. 분말 제제를 주사용수에 용해시킨 후에 조사한다.

(1) 외관:

외관과 관련하여 중요한 사항인 액체 제제의 탁도를 시각적으로 관찰한다.

또한, 600nm의 흡광도를 측정하여 탁도로서 외관을 평가한다.

(2) 중합체 함량 측정:

액체 제제 중의 면역글로불린의 총 중량을 기준으로 하여 면역글로불린 중합체의 함량을 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정한다.

(3) 항보체 역가:

문헌[참조: Capat 및 Mayer, Experimental Immunochemisrty, 225(1961) 및 Nishioka & Okada, Men-eki no Seikagaku(Biochemistry in Immunology), Vol. 103, Kyoritsu Shuppan(1971)]에 따라 측정한다. 즉, 샘플을 보체 100 유니트에 가하고, 보체의 유니트에서의 감소를 측정하고 항보체 역가로서 취한다.

(4) 홍역 항체 역가:

적혈구 응집반응 억제 시험 방법[문헌 참조: Rosen, L., Virology, 13, 139(1961)]에 따라 측정하고, 국제적 유니트(IU/100mg)로 표현한다.

(5) 전기 전도도

전기 전도도는 전도도 측정 장치인 CD-35 MII 모델(M&S 인스트루먼트 캄파니)을 사용하여 측정한다.

실시예 1 내지 6에서 제조된 정맥내 주사용 액체 제제는 하기 특성을 갖는다:

pH: 5.5

전기 전도도: 1mmho 이하(8℃에서 산정한 값)

이량체 함량: 7w/w% 이하

중합체 함량; 0.1w/w% 이하

항보체 역가: 20 유니트/ml 이하

삼투압비: 약 1(등장성 염수에 대한 비)

외관: 무색 내지 투명한 담황색

홍역 항체 역가: 40IU 이상

탁도: 0.01 이하

본 발명에 따른 액체 제제(실시예 5)를 37℃에서 40일 동안 저장한 후, 상기 특성은 저장 전(제조 직후)과 유사하다. 따라서, 본 발명에 따른 제제는 실온에서 저장할 경우 1년 이상 동안 안정할 것으로 간주된다.

실시예 7 및 8에서 제조된 정맥내 주사용 액체 제제는 하기 특성을 갖는다.

pH: 6.4 내지 7.2

이량체 함량: 7w/w% 이하

중합체 함량; 0.1w/w% 이하

항보체 역가: 20 유니트/ml 이하

삼투압비: 약 1(등장성 염수에 대한 비)

외관: 투명한 담황색 또는 경미하게 불투명함

홍역 항체 역가: 40IU 이상

실시예 9

최종 제제의 pH를 pH 5.5 대신에 pH 4.25로 조정하는 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 면역글로불린 액체 제제를 제조한다.

시험예 2

실시예 9에서 제조된 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제의 특성을 시험예 1과 동일한 방법으로 조사한다. 이는 하기 특성을 갖는다.

특성:

pH: 4.25

전기 전도도: 1 내지 2mmho 이하(8℃에서 산정)

이량체 함량: 7w/w% 이하

중합체 함량; 0.1w/w% 이하

항보체 역가: 20 유니트/ml 이하

삼투압비: 약 1(등장성 염수에 대한 비)

외관: 무색 내지 투명함

홍역 항체 역가: 40IU 이상

탁도: 0.01 이하

실시예 10

최종 제제의 pH를 pH 5.5 대신에 pH 5.2로 조정하는 것을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 면역글로불린 액체 제제를 제조한다.

시험예 3

실시예 10에서 제조된 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제의 특성을 시험예 1과 동일한 방법으로 조사한다(로트 A 내지 F). 이는 하기 특성을 갖는다.

1) 특성:

pH: 5.2

전기 전도도: 1mmho (8℃에서 산정)

이량체 함량: 7w/w% 이하

중합체 함량; 0.1w/w% 이하

항보체 역가: 20 유니트/ml 이하

삼투압비: 약 1(등장성 염수에 대한 비)

외관: 무색 내지 투명한 담황색

홍역 항체 역가: 40IU 이상

탁도: 0.01 이하

본 발명에 따른 액체 제제(실시예 10)를 30℃에서 6개월 동안 저장한 후, 상기 특성은 저장 전(제조 직후)과 유사하다.

2) 오염물

본 발명의 액체 제제(실시예 10)내의 오염된 물질을 측정한다.

측정 방법은 하기와 같다.

사람 혈청 알부민:

탁도계 방법

MCP-1(사람 단핵세포 화학주성 단백질-1):

ELISA 방법

활성화된 사람 보체 성분-3(C3a):

¹²⁵I-아르기닌을 사용하는 방사능 방법

폴리에틸렌 글리콜(PEG):

바륨 및 요오다이드를 사용하는 비색계법[참조: Microchemical Journal, 20, p190-192(1975)] 또는 겔 투과 크로마토그래피

결과는 하기 표 1에 제시한다.

표 1에 제시된 결과에 따르면, 본 발명은 실온에서 1년 이상 동안 용액 상태로 안정하고, HSA(사람 혈청 알부민)을 ml당 5마이크로그램(㎍) 이하, MCP-1(사람 단핵세포 화학주성 단백질-1)을 ml당 16피코그램(pg) 이하, C3a(활성화된 사람 보체 성분-3)를 ml당 3마이크로그램(㎍) 이하 및 폴리에틸렌 글리콜을 dl당 1mg 이하 함유하는 정맥내 주사용 면역글로불린 제제를 제공한다. 본 발명은 상세히 기술하고 이의 특정 양태를 참고로 기술하지만, 이는 발명의 범주 및 범위를 벗어나지 않으면 각종 변화 및 변형이 가능하다는 것을 당해 분야의 숙련가에게 명백하다.

본원은 일본 특허원 제(평)9-291374호를 기초로 한 것이며, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 인용되어 있다.

본 발명은 화학적으로 개질되지 않은 (화학적 개질-부재) 완전한 분자형 면역글로불린을 함유하고 5 내지 6의 pH 및 1mmho 이하의 전기 전도도(8℃에서 산정)를 갖는, 제조 후 1년 이상 동안 실온에서 저장가능하고 저장 동안 20 유니트 이하의 항보체 활성 및 7% 이하의 면역글로불린 중 이량체 함량을 계속적으로 유지할 수 있는 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제를 제공한다.

Claims

1,000 내지 10,000의 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 4 내지 10w/v%을 사용하여 4.5 내지 6.5의 pH, 0.0001 내지 0.1M의 이온 농도 및 0 내지 4℃의 온도에서 면역글로불린-함유 용액을 분별시켜 상등액 분획을 회수하고;

당해 상등액 분획을 3.5 내지 5.0의 pH에서 한외여과에 의해 농축시키는 단계를 포함하는, 정맥내 주사용 면역글로불린 제제를 제조하는 방법.

제1항에 있어서, 바이러스 불활성화 처리를 수행하는 단계를 추가로 포함하는 방법.

제1항에 있어서, 흡수되지 않은 분획을 음이온 교환체 처리에 의해 회수하는 단계를 추가로 포함하는 방법.

제1항에 있어서, 1 내지 100nm의 평균 세공 크기를 갖는 다공성 막을 사용하는 여과 처리를 수행하는 단계를 추가로 포함하는 방법.

제1항에 있어서, 콜로이드성 실리카를 사용하는 접촉 처리 후에 흡수되지 않은 분획을 회수하는 단계를 추가로 포함하는 방법.

제1항에 있어서,

a) 면역글로불린을 포함하는 분획을 바이러스 불활성화 처리에 적용시키는 단계;

b) 1,000 내지 10,000의 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 4 내지 10w/v%을 사용하여 4.5 내지 6.5의 pH, 0.0001 내지 0.1M의 이온 농도 및 0 내지 4℃의 온도에서 면역글로불린-함유 용액을 분별시켜 상등액 분획을 회수하는 단계;

c) 상등액 분획을 3.5 내지 5.0의 pH에서 한외여과에 의해 농축 처리하는 단계;

d) 흡수되지 않은 분획을 음이온 교환체 처리에 의해 회수하는 단계;

e) 콜로이드성 실리카를 사용하는 접촉 처리를 수행하는 단계; 및

f) 흡수되지 않은 분획을, 1 내지 100nm의 평균 세공 크기를 갖는 다공성 막을 사용하는 여과 처리를 통해 회수하는 단계를 포함하는 방법.

제1항에 있어서, 분별을 5 내지 6의 pH 및 0.0001 내지 0.01M의 이온 농도에서 수행하는 방법.

제1항에 있어서, 농축을 4 내지 4.5의 pH에서 수행하는 방법.

제1항에 있어서, 한외여과를 약 100,000의 분자량 컷오프를 갖는 한외여과 막을 사용하여 수행하는 방법.

제2항에 있어서, 바이러스 불활성화 단계가 용액의 형태로 가열 처리함을 포함하는 방법.

제10항에 있어서, 가열 처리를 4.5 내지 6.5의 pH 및 0.0001 내지 0.1M의 이온 농도에서 수행하는 방법.

제10항에 있어서, 가열 처리를 50 내지 70℃의 온도에서 10분 내지 20시간 동안 수행하는 방법.

제10항에 있어서, 가열 처리를 안정화제의 존재하에 수행하는 방법.

제13항에 있어서, 안정화제를 10중량/용적%(w/v%) 이상의 농도로 가하는 방법.

제10항에 있어서, 바이러스 불활성화 단계가 용액 형태의 트리알킬 포스페이트와의 접촉을 포함하는 방법.

제15항에 있어서, 트리알킬 포스페이트 처리를 0 내지 60℃의 온도에서 30분 이상 동안 수행하는 방법.

제15항에 있어서, 트리알킬 포스페이트 처리를 트리알킬 포스페이트와 계면활성제와의 혼합물로 수행하는 방법.

제15항에 있어서, 트리알킬 포스페이트 처리를 6 내지 8의 pH에서 수행하는 방법.

제3항에 있어서, 음이온 교환체 처리를 5 내지 7의 pH 및 0.0001 내지 0.1M의 이온 농도에서 수행하는 방법.

제3항에 있어서, 음이온 교환체가 디에틸아미노에틸(DEAE)형 또는 4급 아미노에틸(QAE)형을 포함하는 방법.

제4항에 있어서, 여과를 4 내지 7의 pH 및 0.0001 내지 0.1M의 이온 농도에서, 및 0.1 내지 1kgf/cm²의 압력 및 4 내지 50℃의 온도하에 수행하는 방법.

제4항에 있어서, 다공성 막이 10 내지 75nm의 평균 세공 크기를 갖는 방법.

제5항에 있어서, 콜로이드성 실리카와의 접촉 처리를 4 내지 7의 pH 및 0.0001 내지 0.1M의 이온 농도에서 수행하는 방법.

제5항에 있어서, 콜로이드성 실리카가 실리카 겔, 경질 무수 규산, 규조토, 산 점토, 벤토나이트, 카올린 또는 마그네슘 실리케이트 알루미네이트를 포함하는 방법.

제1항에 있어서, 면역글로불린-함유 용액을 다공성/저 알루미늄(A1) 여과기로 통과시킴을 추가로 포함하는 방법.

제1항에 기재된 방법에 따라 제조된 정맥내 주사용 면역글로불린 제제.

제26항에 있어서, 화학적으로 개질되지 않은 완전한 분자형 면역글로불린을 함유하고 5 내지 6의 pH 및 1mmho 이하의 전기 전도도(8℃에서 산정)를 가지고, 제조 후 1년 이상 실온에서 저장가능하고 저장 기간 동안 20 유니트 이하의 이의 항보체 역가 및 7% 이하의 면역글로불린중 이량체 함량을 계속적으로 유지할 수 있는, 정맥내 주사용 면역글로불린 액체 제제인 정맥내 주사용 면역글로불린 제제.

제26항에 있어서, 안정화제와 혼합된 정맥내 주사용 면역글로불린 제제.

실온에서 1년 이상 동안 용액 상태로 안정하고, HSA(사람 혈청 알부민)을 ml당 5마이크로그램(㎍) 이하, MCP-1(사람 단핵세포 화학주성 단백질-1)을 ml당 16피코그램(pg) 이하, C3a(활성화된 사람 보체 성분-3)를 ml당 3마이크로그램(㎍) 이하 및 폴리에틸렌 글리콜을 dl당 1mg 이하 함유하는 정맥내 주사용 면역글로불린 제제.