KR100616426B1 - 스트립 바이오센서 - Google Patents
스트립 바이오센서 Download PDFInfo
- Publication number
- KR100616426B1 KR100616426B1 KR1020050037898A KR20050037898A KR100616426B1 KR 100616426 B1 KR100616426 B1 KR 100616426B1 KR 1020050037898 A KR1020050037898 A KR 1020050037898A KR 20050037898 A KR20050037898 A KR 20050037898A KR 100616426 B1 KR100616426 B1 KR 100616426B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- enzyme
- sample
- pad
- nitrocellulose membrane
- substrate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 122
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 122
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 66
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 54
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 54
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 54
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 46
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims abstract description 42
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 claims abstract description 34
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000011161 development Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000011358 absorbing material Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 23
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 14
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 13
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 12
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 8
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 5
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical group O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical group OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 claims description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 2
- 229920002102 polyvinyl toluene Polymers 0.000 claims description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 abstract description 6
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 abstract description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 91
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 238000007813 chromatographic assay Methods 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N (e)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazine Chemical compound C1=CC=C2S\C(=N\N)N(C)C2=C1 PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N 0.000 description 2
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 2
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 2
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 2
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 2
- NEGFNJRAUMCZMY-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)benzoic acid Chemical compound CN(C)C1=CC=CC(C(O)=O)=C1 NEGFNJRAUMCZMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGRLGBBJGNXVML-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylaniline Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 NGRLGBBJGNXVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 4-chloronaphthalen-1-ol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=C(Cl)C2=C1 LVSPDZAGCBEQAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016893 Amine Oxidase (Copper-Containing) Human genes 0.000 description 1
- 108010028700 Amine Oxidase (Copper-Containing) Proteins 0.000 description 1
- 101000734008 Arthromyces ramosus Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 244000056139 Brassica cretica Species 0.000 description 1
- 235000003351 Brassica cretica Nutrition 0.000 description 1
- 235000003343 Brassica rupestris Nutrition 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N bis(2-chloroethyl) sulfide Chemical compound ClCCSCCCl QKSKPIVNLNLAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000010030 laminating Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000010460 mustard Nutrition 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000001055 reflectance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012508 resin bead Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
- G01N33/537—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody
- G01N33/538—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase with separation of immune complex from unbound antigen or antibody by sorbent column, particles or resin strip, i.e. sorbent materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/38—Flow patterns
- G01N30/46—Flow patterns using more than one column
- G01N30/461—Flow patterns using more than one column with serial coupling of separation columns
- G01N30/463—Flow patterns using more than one column with serial coupling of separation columns for multidimensional chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2291/00—Indexing codes associated with group G01N29/00
- G01N2291/02—Indexing codes associated with the analysed material
- G01N2291/025—Change of phase or condition
- G01N2291/0255—(Bio)chemical reactions, e.g. on biosensors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
본 발명은 스트립 바이오센서에 관한 것으로, 소수성 재질의 기판과; 시료를 모세관 현상에 의해 이동시키는 니트로셀룰로오즈 멤브레인과; 분석물질과 제1효소 기질을 포함한 시료를 주입하는 시료패드와; 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인을 통해 이동된 물질을 흡수하는 흡수패드와; 상기 시료에 의해 용해되어 전개되는 제2효소 기질과 탐지항체-제2효소 결합물질을 포함하는 결합체 패드와; 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인에 모세관 현상에 상관없이 물리적으로 고정되는 제1효소와 포획항체를 포함하는 측정부를 포함하여 구현하여 시료가 전개되면서 두가지 효소에 의해 면역반응과 효소반응이 순차적으로 일어나게 되어, 분석물질의 농도에 따른 발색이 나타나므로, 기질을 따로이 첨가하지 않고도 한번의 시료 전개에 의해 분석물질을 정량분석할 수 있도록 한 것이다.
스트립 바이오센서, 면역반응, 효소반응, 정량분석.
Description
도 1 은 본 발명에 따른 스트립 바이오센서의 일 실시예에 따른 단면도
도 2 는 본 발명에 따른 스트립 바이오센서의 동작관계를 도시한 도면
도 3 은 본 발명에 따른 스트립 바이오센서의 또 다른 실시예에 따른 사시도
<도면의 주요 부분에 대한 부호의 설명>
100 : 스트립 바이오센서 110 : 기판
120 : 니트로셀룰로오즈 멤브레인 130 : 시료패드
140 : 흡수패드 150 : 결합체 패드
160 : 측정부 170 : 제1커버체
171 : 시료투입구 180 : 제2커버체
181 : 측정창 200 : 분석물질
300 : 제1효소 기질 400 : 제2효소 기질
500 : 탐지항체-제2효소 결합물질 510 : 탐지항체
520 : 제2효소 600 : 제1효소 반응 생성물
700 : 라텍스비드-제1효소 결합물질 710, 810 : 라텍스 비드
720 : 제1효소 800 : 라텍스비드-포획항체 결합물질
820 : 포획항체
본 발명은 스트립 바이오센서에 관한 것으로, 분석물질을 포함한 시료에 대한 면역반응 및 효소반응에 의하여 발색된 신호를 측정함으로써 분석물질을 정량분석할 수 있는 면역크로마토그래피(Immuno Chromatographic Assay) 기술을 기반으로한 스트립 바이오센서에 관련한 것이다.
면역반응과 효소반응을 이용한 면역크로마토그래피(Immuno Chromatographic Assay) 기술을 기반으로한 스트립 바이오센서는 공개특허공보 제2004-93048호(2004. 11. 04)에서 제시한 발명과 같이 다수의 패드를 적층하여 이루어지는 층상 구조를 이루는 것이 통상적이며, 이 층상구조를 이루는 다수의 패드 각각에 어떠한 반응물질을 사용하느냐에 따라 특이성을 가지게 된다.
본 발명자는 면역반응 및 효소반응에 의하여 발색된 신호를 측정함으로써 분석물질을 정량분석할 수 있는 면역크로마토그래피(Immuno Chromatographic Assay) 기술을 기반으로 하되, 두가지 효소를 이용함으로써 시료가 전개되면서 면역반응과 효소반응이 순차적으로 일어나게되어, 분석물질의 농도에 따른 발색이 나타나므로, 기질을 따로이 첨가하지 않고도 한번의 시료 전개에 의해 분석물질을 정량분석할 수 있으며, 종래의 면역분석에서 요구되는 면역반응하지 않고 남은 물질들을 제거하기 위한 세척과정이 없어 사용이 편리한 스트립 바이오센서에 관한 연구를 하게 되었다.
본 발명은 상기한 취지하에 발명된 것으로, 두가지 효소를 이용함으로써 시료가 전개되면서 면역반응과 효소반응이 순차적으로 일어나게되어, 분석물질의 농도에 따른 발색이 나타나므로, 기질을 따로이 첨가하지 않고도 한번의 시료 전개에 의해 분석물질을 정량분석할 수 있는 스트립 바이오센서를 제공함을 그 목적으로 한다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 일 양상에 따르면, 본 발명에 따른 스트립 바이오센서는 소수성(Hydrophobic) 재질의 기판과; 상기 기판위에 적층되되, 시료를 모세관 현상에 의해 이동시키는 니트로셀룰로오즈 멤브레인과; 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인의 일측단 위에 부분 적층되되, 분석물질과 제1효소 기질을 포함한 시료를 주입하는 시료패드와; 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인의 타측단 위에 적층되되, 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인을 통해 이동된 물질을 흡수하는 흡수패드와; 상기 시료패드와 흡수패드간의 니트로셀루로오즈 멤브레인 위에 적층되되, 상기 시료에 의해 용해되어 전개되는 제2효소 기질과 탐지항체-제2효소 결합물질을 포함하는 결합체 패드와; 상기 결합체 패드와 흡수패드간의 니트로셀룰로오즈 멤브레인 위에 형성되되, 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인에 모세관 현상에 상관없이 물리적으로 고정되는 제1효소와 포획항체를 포함하는 측정부를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.
따라서, 본 발명에 따른 스트립 바이오센서는 제1효소 기질과 제1효소가 효소반응하여 제1효소 반응 생성물이 생성되고, 이 제1효소 반응 생성물과 제2효소 기질이 제2효소의 기질로 작용하여 제2효소의 효소반응이 일어나 발색되는 현상을 측정함으로써 분석물질을 정량적으로 분석할 수 있게 된다.
이 때, 상기 발색의 정도는 분석물질의 서로 다른 부분을 인식하여 결합하는 탐지항체 제2효소 결합물질과 포획항체에 의한 면역반응에 의해 포획되는 분석물질의 농도에 따르게 된다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 기술되는 바람직한 실시예를 통하여 본 발명을 당업자가 용이하게 이해하고 재현할 수 있도록 상세히 기술하기로 한다.
도 1 은 본 발명에 따른 스트립 바이오센서의 일 실시예에 따른 단면도, 도 2 는 본 발명에 따른 스트립 바이오센서의 동작관계를 도시한 도면이다.
도면에 도시한 바와같이, 본 발명에 따른 스트립 바이오센서(100)는 기판(110)과, 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)과, 시료패드(130)와, 흡수패드(140)와, 결합체 패드(150)와, 측정부(160)를 포함하여 이루어진다.
상기 기판(110)은 본 발명에 따른 스트립 바이오센서(100)를 구성하는 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)과, 시료패드(130)와, 흡수패드(140)와, 결합체 패드(150)와, 측정부(160)를 적층하기 위한 베이스 기판으로, 플라스틱 카드 등의 소수성(Hydrophobic) 재질의 물질인 것이 바람직하다.
상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)은 상기 기판(110)위에 적층되되, 시료를 모세관 현상에 의해 이동시킨다.
이 때, 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)은 모세관 현상에 의한 시료의 이동시 시료의 불균일한 흐름과 비특이적 반응을 제거하기 위하여 단백질, 고분자 물질, 계면활성제 등으로 처리하는 것이 바람직하다. 이러한 시료의 불균일한 흐름과 비특이적 반응을 제거하기 위한 처리는 이 출원 이전에 이미 다양하게 공지되어 시행되는 통상의 기술이므로, 이에 대한 자세한 설명은 생략하기로 한다.
상기 시료패드(130)는 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)의 일측단 위에 부분 적층되되, 분석물질(200)과 제1효소 기질(300)을 포함한 시료를 주입한다.
이 때, 상기 시료패드(130)에 주입되는 시료가 모세관 현상에 의해 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)을 통해 이동시 시료의 균일한 흐름을 위해 계면활성제를 더 포함하는 것이 바람직하다. 이 계면활성제는 시료가 혈액일 경우 적혈구를 용혈하는 등의 목적으로도 이용될 수 있다.
한편, 시료에 포함되는 분석물질(200)과, 제1효소 기질(300) 및 계면활성제는 모세관 현상에 의해 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)을 따라 전개가 가능하도록, 상기 분석물질(200)과, 제1효소 기질(300) 및 계면활성제의 크기가 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)의 미세구멍 크기보다 작은 것이 바람직하다.
상기 흡수패드(140)는 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)의 타측단 위에 적층되되, 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)을 통해 이동된 물질을 흡수한다.
즉, 이 흡수패드(140)는 면역반응 및 효소반응에 의해 결합되지 못한 여분의 물질들을 흡수한다.
상기 결합체 패드(150)는 상기 시료패드(130)와 흡수패드(140)간의 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120) 위에 적층되되, 상기 시료에 의해 용해되어 전개되는 제2 효소 기질(400)과 탐지항체-제2효소 결합물질(500)을 포함한다.
이 때, 상기 결합체 패드(150)가 제2효소 기질(400)과 제2효소(520)간에 효소반응을 일으키는 제1효소 반응 생성물(600)이 결합체 패드내에 존재하지 않으므로, 결합체 패드내에 제2효소 기질(400)과 탐지항체-제2효소 결합물질(500)이 동시에 포함되어도 효소반응이 일어나지 않게 된다.
한편, 상기 제2효소 기질(400) 및 탐지항체-제2효소 결합물질(500)이 모세관 현상에 의해 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)을 따라 전개가 가능하도록, 상기 제2효소 기질(400) 및 탐지항체-제2효소 결합물질(500) 크기가 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)의 미세구멍 크기보다 작은 것이 바람직하다.
상기 탐지항체(510)와 제2효소(520)는 물리 또는 화학적 방법으로 접합시킬 수 있으며, 이러한 접합 기술은 이 출원 이전에 이미 다양하게 공지되어 시행되는 통상의 기술이므로, 이에 대한 자세한 설명은 생략하기로 한다.
상기 측정부(160)는 상기 결합체 패드(150)와 흡수패드(140)간의 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120) 위에 형성되되, 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)에 모세관 현상에 상관없이 물리적으로 고정되는 제1효소(720)와 포획항체(820)를 포함한다.
상기 니트로셀루로오즈 멤브레인(120)에 모세관 현상에 상관없이 제1효소(720)와 포획항체(820)를 물리적으로 고정하는 방법은 다양하게 실시 가능하며, 제1효소(720)와 포획항체(820)를 각각 라텍스비드(710)(810)에 접합시켜 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)에 고정하는 것이 바람직하다.
상기 라텍스비드(710)(810)는 폴리스티렌(polystyrene), 폴리메틸 메타크릴레이트(polymethyl metacrylate), 폴리비닐톨루엔(polyvinyltoluene) 등의 수지계 비드를 사용하거나, 실리카 비드가 사용 되어질 수 있다. 상기에서 라텍스비드(710)(810)를 사용하는 이유는 측정의 용이를 위해서 이며, 상기 라텍스비드(710)(810)에 제1효소(720)나 포획항체(820)를 물리적인 방법으로 접합시킬 수 도 있으며, 카르복실기나 아민기로 활성화된 라텍스비드(710)(810)를 사용할 경우 제1효소(720)나 포획항체(820)를 화학적인 방법으로 접합시킬 수 있다. 상기한 라텍스비드(710)(810)에 제1효소(720)나 포획항체(820)를 접합하는 방법은 이 출원 이전에 이미 다양하게 공지되어 시행되는 통상의 기술이므로, 이에 대한 자세한 설명은 생략하기로 한다.
이 때, 라텍스비드-제1효소 결합물질(700)과 라텍스비드-포획항체 결합물질(800)을 각각 따로 인접한 거리에 위치하도록 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)에 고정할 수 도 있으며, 라텍스비드-제1효소 결합물질(700)과 라텍스비드-포획항체 결합물질(800)을 같이 섞어서 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)에 고정할 수 도 있다.
이와는 달리, 라텍스비드-제1효소-포획항체 결합물질을 제작하여 이를 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)에 고정할 수 도 있다.
한편, 라텍스비드를 사용하지 않고 직접 제1효소(720)와 포획항체(820)를 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)에 상기 제1효소(720)와 포획항체(820)가 각각 따로 인접한 거리에 위치하도록 또는 섞어서 고정할 수 도 있다.
상기 측정부(160)는 제1효소 기질(300)과 제1효소(720)가 효소반응하여 제1효소 반응 생성물(600)이 생성되고, 이 제1효소 반응 생성물(600)과 제2효소 기질(400)이 제2효소(520)의 기질로 작용하여 제2효소(520)의 효소반응이 일어나 발색되게 된다.
이 때, 상기 발색의 정도는 분석물질(200)의 서로 다른 부분을 인식하여 결합하는 탐지항체-제2효소 결합물질(500)과 포획항체(820)에 의한 면역반응에 의해 포획되는 분석물질(200)의 농도에 따르게 된다.
한편, 상기 제1효소(720)와, 제2효소(520)가 산화환원효소(Oxidoreductases)인 것이 바람직하다.
상기 제1효소(720)는 산화효소(Oxidase)로서, 글루코오즈 산화효소(Glucose Oxidase), 디-아미노산 산화효소(D-amino acid Oxidase), 디아민 산화효소(Diamine Oxidase), 단일아민 산화효소(Monoamine Oxidase) 등을 사용할 수 있다.
상기 제2효소(520)는 과산화효소(Peroxidase)로서, 겨자무 과산화효소(Horseradish Peroxidase), 알쓰로마이시스 라모서스 과산화효소(Arthromyces ramosus Peroxidase) 등을 사용할 수 있다.
상기 제1효소 기질(300)과 제2효소 기질(400)은 상기 각각의 제1효소(720) 및 제2효소(520)에 알맞은 기질이 사용되게 된다. 만일, 제1효소(720)가 글루코오즈 산화효소인 경우에는 제1효소 기질(300)은 글루코오즈(Glucose)가 사용되며, 제2효소 기질(400)은 효소반응으로 인하여 발색을 나타낼 수 있는 물질이 사용된다. 예컨데, 제2효소(520)가 겨자무 과산화효소(Horseradish Peroxidase)인 경우 제2효 소 기질(400)로 3-메틸-2-벤조티아조리논 하이드라존(3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazone)과 3-디메틸아미노벤조익산(3-dimethylaminobenzoic acid)를 같이 사용하면 푸른색의 발색을 육안으로 확인할 수 있다. 또한, 제2효소 기질(400)로 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine) 또는 4-클로로-1-나프톨(4-chloro-1-naphtol)을 사용해도 푸른색의 발색을 육안으로 확인할 수 있다.
상기 제1효소(720)와, 제2효소(520)가 산화환원효소(Oxidoreductases)일 경우, 상기 제1효소 기질(300)과 제1효소(720)가 효소반응하여 생성되는 제1효소 반응 생성물(600)이 과산화수소(H2O2)가 된다.
상기한 구성을 갖는 본 발명에 따른 두가지 효소를 이용한 스트립 바이오센서(100)의 동작을 도 2 를 참조하여 알아본다.
먼저, 본 발명에 따른 두가지 효소를 이용한 스트립 바이오센서(100)의 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)의 일측단 위에 부분 적층된 시료패드(130)에 분석물질(200)과 제1효소 기질(300)을 포함한 시료를 주입하면, 모세관 현상에 의해 시료가 소수성(Hydrophobic) 재질의 기판(110) 위에 적층된 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)을 통해 이동된다.
분석물질(200)과 제1효소 기질(300)을 포함한 시료가 이동하다가 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120) 위에 적층된 결합체 패드(150)에 도달하면, 시료는 결합체 패드(150)에 포함된 제2효소 기질(400)과 탐지항체-제2효소 결합물질(500)을 용해 시켜 모세관 현상에 의해 제2효소 기질(400)과 탐지항체-제2효소 결합물질(500)을 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)을 통해 전개시킨다.
이 때, 분석물질(200)에 대하여 탐지항체-제2효소 결합물질(500)의 탐지항체(510)가 면역반응하여 분석물질(200)과 탐지항체-제2효소 결합물질(500)이 결합되어 전개되게 된다.
제1효소 기질(300)과, 제2효소 기질(400)과, 분석물질(200)과 탐지항체-제2효소 결합물질(500)이 결합된 물질이 이동하다가 니트로셀루로오즈 멤브레인(120) 위에 형성된 측정부(160)에 도달하면, 제1효소 기질(300)과 측정부(160)에 고정된 라텍스비드-제1효소 결합물질(700)의 제1효소(720)가 효소반응하여 제1효소 반응 생성물(600)이 생성된다.
한편, 측정부(160)에 고정된 라텍스비드-포획항체 결합물질(800)의 포획항체(820)는 분석물질(200)과 탐지항체-제2효소 결합물질(500)이 결합된 물질의 분석물질(200)과 면역반응하여 결합된다. 즉, 이는 탐지항체(510)와 포획항체(820)가 분석물질(200)의 서로 다른 부분을 인식하여 결합하는 성질을 이용한 것이다.
그러면, 상기 제1효소 기질(300)과 제1효소(720)가 효소반응하여 생성된 제1효소 반응 생성물(600)과 제2효소 기질(400)이 제2효소(520)의 기질로 작용하여 제2효소(520)의 효소반응이 일어나 발색되게 된다. 이 과정에서 제2효소 기질(400)로 어떠한 물질을 사용하느냐에 따라 발색되는 색이 달라질 수 있다.
이 때, 상기 발색의 정도는 분석물질(200)의 서로 다른 부분을 인식하여 결합하는 탐지항체-제2효소 결합물질(500)과 라텍스비드-포획항체 결합물질(800)에 의한 면역반응에 의해 포획되는 분석물질(200)의 농도에 따르게 되므로, 포획되는 분석물질(200)의 양이 많을 수 록 색이 진해지게 되므로, 이 색을 관찰함에 의해 분석물질을 정략적으로 분석할 수 있게된다. 만일, 라텍스비드-제1효소 결합물질(700)과 라텍스비드-포획항체 결합물질(800)에 결합되는 라텍스비드(710)(810)를 사용하면 분석물질 측정시 방해되지 않으므로 측정이 용이하다.
분석물질을 정량분석하는 방법으로는 포토다이오드 또는 포토트랜지스터를 이용한 확산반사분광법(Diffusive reflectance spectrophotometry)을 이용한 기기분석방법 등에 의해 가능하다. 상기 확산반사분광법은 발색되어진 색의 고유의 파장의 확산 반사 정도를 측정하고 수치화함으로써 정량화하는 방법으로, 이 출원 이전에 이미 다양하게 공지되어 시행되는 통상의 기술이므로, 이에 대한 자세한 설명은 생략하기로 한다.
한편, 상기 측정부(160)에 고정된 라텍스비드-제1효소 결합물질(700) 및 라텍스비드-포획항체 결합물질(800)에 의해 포획되지 않은 여분의 물질들은 상기 니트로셀루로오즈 멤브레인(120)의 타측단 위에 적층된 흡수패드(140)를 통해 흡수되게 되므로, 기존과는 달리 면역분석법에서 항체와 결합하지 못하고 남은 물질들을 세척과정을 통해 제거할 필요가 없게 된다.
따라서, 위와 같이 함에 의해 본 발명에 따른 스트립 바이오센서는 두가지 효소를 이용함으로써 시료가 전개되면서 면역반응과 효소반응이 순차적으로 일어나게되어, 분석물질의 농도에 따른 발색이 나타나므로, 기질을 따로이 첨가하지 않고도 한번의 시료 전개에 의해 분석물질을 정량분석할 수 있게 된다.
도 3 은 본 발명에 따른 스트립 바이오센서의 또 다른 실시예에 따른 사시도이다.
이 실시예는 도 1 에 도시한 스트립 바이오센서를 커버체를 이용해 수납함으로써, 스트립 바이오센서의 오염을 효과적으로 방지할 수 있도록 한 실시예이다.
이 실시예에 따른 스트립 바이오센서는 도 1 에 도시한 실시예의 구성에 부가하여, 제1커버체(170)와, 제2커버체(180)를 더 포함하여 이루어진다.
상기 제1커버체(170)는 상기 시료패드(130)에 시료를 투입하기 위한 시료투입구(171)가 형성된 소수성(Hydrophobic) 재질로 이루어진다.
상기 제2커버체(180)는 상기 제1커버체(170)와 대응하여 결합되어 기판(110)과, 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)과, 시료패드(130)와, 흡수패드(140)와, 결합체 패드(150)와, 측정부(160)를 수납하되, 상기 측정부(160)에 의해 포획된 분석물질의 농도를 확인하기 위한 측정창(181)이 형성된 소수성(Hydrophobic) 재질로 이루어진다.
따라서, 이 실시예에 따른 스트립 바이오센서(100)는 상기 제1커버체(170) 및 제2커버체(180)에 의해 기판(110)과, 니트로셀룰로오즈 멤브레인(120)과, 시료패드(130)와, 흡수패드(140)와, 결합체 패드(150)와, 측정부(160)가 수납되고, 상기 제1커버체(170)에 형성된 시료투입구(171)를 통해 시료패드(130)에 시료를 주입하고, 상기 제2커버체(180)에 형성된 측정창(181)을 통해 분석물질의 농도를 확인할 수 있으므로, 오염물질이 내부로 유입되는 것을 방지할 수 있어 분석물질에 대한 정량분석의 정확성을 향상시킬 수 있게 된다.
이상에서 설명한 바와 같은 본 발명에 따른 스트립 바이오센서는 두가지 효소를 이용함으로써 시료가 전개되면서 면역반응과 효소반응이 순차적으로 일어나게되어, 분석물질의 농도에 따른 발색이 나타나므로, 기질을 따로이 첨가하지 않고도 한번의 시료 전개에 의해 분석물질을 정량분석할 수 있으며, 기존과는 달리 면역분석법에서 항체와 결합하지 못하고 남은 물질들을 세척과정을 통해 제거할 필요가 없어 사용이 편리한 효과를 가진다.
본 발명은 첨부된 도면에 의해 참조되는 바람직한 실시예를 중심으로 기술되었지만, 이러한 기재로부터 후술하는 특허청구범위에 의해 포괄되는 범위내에서 본 발명의 범주를 벗어남이 없이 다양한 변형이 가능하다는 것은 명백하다.
Claims (13)
- 소수성(Hydrophobic) 재질의 기판과;상기 기판위에 적층되되, 시료를 모세관 현상에 의해 이동시키는 니트로셀룰로오즈 멤브레인과;상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인의 일측단 위에 부분 적층되되, 분석물질과 제1효소 기질을 포함한 시료를 주입하는 시료패드와;상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인의 타측단 위에 적층되되, 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인을 통해 이동된 물질을 흡수하는 흡수패드와;상기 시료패드와 흡수패드간의 니트로셀루로오즈 멤브레인 위에 적층되되, 상기 시료에 의해 용해되어 전개되는 제2효소 기질과 탐지항체-제2효소 결합물질을 포함하는 결합체 패드와;상기 결합체 패드와 흡수패드간의 니트로셀룰로오즈 멤브레인 위에 형성되되, 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인에 모세관 현상에 상관없이 물리적으로 고정되는 제1효소와 포획항체를 포함하는 측정부를;포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 1 항에 있어서, 상기 시료패드에 주입되는 시료가:시료의 균일한 흐름을 위한 계면활성제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 1 항에 있어서, 상기 결합체 패드가,제2효소 기질과 제2효소간에 효소반응을 일으키는 제1효소 반응 생성물이 결합체 패드내에 존재하지 않으므로, 결합체 패드내에 제2효소 기질과 탐지항체-제2효소 결합물질이 동시에 포함되어도 효소반응이 일어나지 않는 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 1 항에 있어서, 상기 측정부에 포함되는 제 1 효소와 포획항체가:폴리스티렌(polystyrene), 폴리메틸 메타크릴레이트(polymethyl metacrylate), 폴리비닐톨루엔(polyvinyltoluene) 등의 수지계 비드인 라텍스비드나, 실리카 비드에 물리적 또는 화학적으로 접합되어 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인에 고정되는 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 1 항에 있어서, 상기 분석물질과, 제1효소 기질과, 제2효소 기질 및 탐지항체-제2효소 결합물질이:모세관 현상에 의해 상기 니트로셀룰로오즈 멤브레인을 따라 전개가 가능하도록, 상기 분석물질과, 제1효소 기질과, 제2효소 기질 및 탐지항체-제2효소 결합물질 크기가 상기 니트로셀루로오즈 멤브레인의 미세구멍 크기보다 작은 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 1 항 내지 제 5 항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 측정부가:제1효소 기질과 제1효소가 효소반응하여 제1효소 반응 생성물이 생성되고, 이 제1효소 반응 생성물과 제2효소 기질이 제2효소의 기질로 작용하여 제2효소의 효소반응이 일어나 발색되는 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 6 항에 있어서, 상기 발색의 정도는 분석물질의 서로 다른 부분을 인식하여 결합하는 탐지항체-제2효소 결합물질과 포획항체에 의한 면역반응에 의해 포획되는 분석물질의 농도에 따르는 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 7 항에 있어서, 상기 제1효소와, 탐지항체-제2효소 결합물질에 포함된 제2효소가 산화환원효소(Oxidoreductases)인 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 8 항에 있어서, 상기 제1효소가 산화효소(Oxidase)인 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 8 항에 있어서, 상기 제2효소가 과산화효소(Peroxidase)인 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 6 항에 있어서, 상기 제1효소 반응 생성물이 과산화수소(H2O2)인 것을 특 징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 1 항 내지 제 5 항중의 어느 한 항에 있어서, 상기 스트립 바이오센서가:상기 시료패드에 시료를 투입하기 위한 시료투입구가 형성된 소수성(Hydrophobic) 재질의 제1커버체와;상기 제1커버체와 대응하여 결합되어 기판과, 니트로셀룰로오즈 멤브레인과, 시료패드와, 흡수패드와, 결합체 패드와, 측정부를 수납하되, 상기 측정부에 의해 포획된 분석물질의 농도를 확인하기 위한 측정창이 형성된 소수성(Hydrophobic) 재질의 제2커버체를;더 포함하는 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
- 제 6 항에 있어서, 상기 스트립 바이오센서가:상기 시료패드에 시료를 투입하기 위한 시료투입구가 형성된 소수성(Hydrophobic) 재질의 제1커버체와;상기 제1커버체와 대응하여 결합되어 기판과, 니트로셀룰로오즈 멤브레인과, 시료패드와, 흡수패드와, 결합체 패드와, 측정부를 수납하되, 상기 측정부에 의해 포획된 분석물질의 농도를 확인하기 위한 측정창이 형성된 소수성(Hydrophobic) 재질의 제2커버체를;더 포함하는 것을 특징으로 하는 스트립 바이오센서.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020050037898A KR100616426B1 (ko) | 2005-05-06 | 2005-05-06 | 스트립 바이오센서 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020050037898A KR100616426B1 (ko) | 2005-05-06 | 2005-05-06 | 스트립 바이오센서 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR100616426B1 true KR100616426B1 (ko) | 2006-08-28 |
Family
ID=37601221
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020050037898A Expired - Fee Related KR100616426B1 (ko) | 2005-05-06 | 2005-05-06 | 스트립 바이오센서 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR100616426B1 (ko) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013176458A1 (ko) * | 2012-05-22 | 2013-11-28 | 고려대학교 산학협력단 | 광학 바이오센서 |
| KR20180058646A (ko) * | 2016-11-24 | 2018-06-01 | 고려대학교 세종산학협력단 | 생화학-면역 하이브리드 바이오센서 및 이를 포함하는 센서시스템 |
| WO2022114530A1 (ko) * | 2020-11-26 | 2022-06-02 | 바디텍메드(주) | 면역 진단을 위한 진단 카트리지 및 이를 이용한 리더기와 진단 시스템 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020004246A1 (en) | 2000-02-07 | 2002-01-10 | Daniels Robert H. | Immunochromatographic methods for detecting an analyte in a sample which employ semiconductor nanocrystals as detectable labels |
| US20040171092A1 (en) | 2001-03-26 | 2004-09-02 | Response Biomedical Corporation | Compensation for variability in specific binding in quantitative assays |
| US20040214253A1 (en) | 2003-04-25 | 2004-10-28 | Paek Se Hwan | Membrane strip biosensor system for point-of-care testing |
| KR20060009665A (ko) * | 2004-07-26 | 2006-02-01 | 주식회사 인포피아 | 면역크로마토그래피법을 이용한 당화혈색소 측정센서 |
-
2005
- 2005-05-06 KR KR1020050037898A patent/KR100616426B1/ko not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020004246A1 (en) | 2000-02-07 | 2002-01-10 | Daniels Robert H. | Immunochromatographic methods for detecting an analyte in a sample which employ semiconductor nanocrystals as detectable labels |
| US20040171092A1 (en) | 2001-03-26 | 2004-09-02 | Response Biomedical Corporation | Compensation for variability in specific binding in quantitative assays |
| US20040214253A1 (en) | 2003-04-25 | 2004-10-28 | Paek Se Hwan | Membrane strip biosensor system for point-of-care testing |
| KR20060009665A (ko) * | 2004-07-26 | 2006-02-01 | 주식회사 인포피아 | 면역크로마토그래피법을 이용한 당화혈색소 측정센서 |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013176458A1 (ko) * | 2012-05-22 | 2013-11-28 | 고려대학교 산학협력단 | 광학 바이오센서 |
| KR20130130640A (ko) * | 2012-05-22 | 2013-12-02 | 고려대학교 산학협력단 | 광학 바이오센서 |
| KR101670032B1 (ko) | 2012-05-22 | 2016-10-28 | 고려대학교 산학협력단 | 광학 바이오센서 |
| US9903856B2 (en) | 2012-05-22 | 2018-02-27 | Korea University Research And Business Foundation | Optical biosensor |
| KR20180058646A (ko) * | 2016-11-24 | 2018-06-01 | 고려대학교 세종산학협력단 | 생화학-면역 하이브리드 바이오센서 및 이를 포함하는 센서시스템 |
| KR101916608B1 (ko) | 2016-11-24 | 2018-11-08 | 고려대학교 세종산학협력단 | 생화학-면역 하이브리드 바이오센서 및 이를 포함하는 센서시스템 |
| WO2022114530A1 (ko) * | 2020-11-26 | 2022-06-02 | 바디텍메드(주) | 면역 진단을 위한 진단 카트리지 및 이를 이용한 리더기와 진단 시스템 |
| KR20220073277A (ko) * | 2020-11-26 | 2022-06-03 | 바디텍메드(주) | 면역 진단을 위한 진단 카트리지 및 이를 이용한 리더기와 진단 시스템 |
| KR102530556B1 (ko) | 2020-11-26 | 2023-05-09 | 바디텍메드(주) | 면역 진단을 위한 진단 카트리지 및 이를 이용한 리더기와 진단 시스템 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5939252A (en) | Detachable-element assay device | |
| US7186566B2 (en) | Combining transmittance detection and chromatographic strip techniques for quantification of analyte in biological fluids | |
| US9599609B2 (en) | Lateral flow strip assay with immobilized conjugate | |
| US5989840A (en) | Estimation of active infection by heliobacter pylori | |
| CN103257225B (zh) | 控制穿过测定装置的流体流动 | |
| EP2765422B1 (en) | Membrane sensor enabled with sequential change of reaction condition with single sample injection | |
| US7288413B2 (en) | Combined chemical and immunochemical fecal occult blood test | |
| US20090311141A1 (en) | Immunochromatographic strip for use in immunoassay and kit comprising the same | |
| RU2006135394A (ru) | Система из измерительного устройства уровня анализируемых веществ в биологических жидкостях и кассеты для выполнения комбинированных общих химических и специфических анализов связывания | |
| EP0736176A1 (en) | Binding assay | |
| JP2000258417A (ja) | ２種以上の分析対象物を含む側流検定を実施するための試験具 | |
| AU2004298660A1 (en) | Assay | |
| JPH07503063A (ja) | 生体分子検定施行法及び当該方法に使用する固相担体 | |
| JP3693680B2 (ja) | 磁性粒子を使用するアッセイ | |
| US5895765A (en) | Method for the detection of an analyte by immunochromatography | |
| CN100430726C (zh) | 免疫色谱试验片及色谱分析方法 | |
| KR100616426B1 (ko) | 스트립 바이오센서 | |
| KR101788221B1 (ko) | 팽창재를 이용한 멤브레인 스트립 센서 | |
| JPH11133023A (ja) | 尿試料を使用する免疫クロマトグラフィー検定の尿素の影響を減らすための配合物 | |
| JP2004085425A (ja) | 物質の検出試薬及び検出方法 | |
| JP3284896B2 (ja) | 酵素免疫アッセイ装置及び方法 | |
| JP3408751B2 (ja) | 免疫クロマトグラフィー装置 | |
| KR102585794B1 (ko) | 미세유체 기반 면역진단 칩 및 이의 제조방법 | |
| KR102817155B1 (ko) | 측면 유동 면역 진단 센서 | |
| CN101175996A (zh) | 半定量免疫色谱装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20050506 |
|
| PA0201 | Request for examination | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| PE0701 | Decision of registration |
Patent event code: PE07011S01D Comment text: Decision to Grant Registration Patent event date: 20060724 |
|
| GRNT | Written decision to grant | ||
| PR0701 | Registration of establishment |
Comment text: Registration of Establishment Patent event date: 20060821 Patent event code: PR07011E01D |
|
| PR1002 | Payment of registration fee |
Payment date: 20060822 End annual number: 3 Start annual number: 1 |
|
| PG1601 | Publication of registration | ||
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20090108 Start annual number: 4 End annual number: 4 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20100820 Start annual number: 5 End annual number: 5 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20110818 Start annual number: 6 End annual number: 6 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20120820 Year of fee payment: 7 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20120820 Start annual number: 7 End annual number: 7 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20130820 Year of fee payment: 8 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20130820 Start annual number: 8 End annual number: 8 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20140820 Year of fee payment: 9 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20140820 Start annual number: 9 End annual number: 9 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20150820 Year of fee payment: 10 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20150820 Start annual number: 10 End annual number: 10 |
|
| FPAY | Annual fee payment |
Payment date: 20160809 Year of fee payment: 11 |
|
| PR1001 | Payment of annual fee |
Payment date: 20160809 Start annual number: 11 End annual number: 11 |
|
| PC1903 | Unpaid annual fee |