KR100563621B1 - 인간 혈액으로부터의 유전체 ｄｎａ 추출용 키트 및이것을 이용한 유전체 ｄｎａ 추출 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인간 혈액으로부터 유전체 DNA를 추출할 수 있는 시약들로 이루어진 키트 및 그것을 사용하여 인간 혈액으로부터 유전체 DNA를 추출하는 방법에 관한 것으로서, 응고되지 않은 인간 혈액에 20mM, pH 7.5의 Tris-HCl 완충 용액으로 이루어진 적혈구 용해용 용액 키트를 가하여, 적혈구, 혈장, 혈소판 성분 등을 제거하고 백혈구 만을 수득하는 제1단계; 수득한 백혈구에 10mM, pH 8.0의 Tris-HCl 완충 용액, 1.0mM EDTA 및 1.0% SDS로 이루어진 백혈구 용해용 용액 키트를 가하여 백혈구의 핵을 용출시키는 제2단계; 용출된 백혈구의 핵에 3M, pH 5.2의 소듐 아세테이트 용액으로 이루어진 단백질 침전용 용액 키트를 가하여 상기 백혈구의 핵으로부터 유전체 DNA 및 핵 단백질을 분리하는 제3단계; 및 상기에서 분리된 유전체 DNA에 10mM, pH 8.0의 Tris-HCl 완충 용액 및 1.0mM EDTA로 이루어진 유전체 DNA 회수용 TE 완충 용액 키트를 가하여 유전체 DNA를 회수하는 제4단계로 이루어진 인간 혈액으로부터의 유전체 DNA 추출 방법을 제공한다.

혈액, 유전체 DNA, 유전체 DNA 추출용 키트

Description

인간 혈액으로부터의 유전체 ＤＮＡ 추출용 키트 및 이것을 이용한 유전체 ＤＮＡ 추출 방법{KIT FOR EXTRACTING GENOMIC DNA FROM HUMAN BLOOD AND METHOD FOR EXTRACTING GENOMIC DNA USING THE SAME}

도1a는 본 발명에 따른 적혈구 용해용 용액 키트를 나타낸 사진.

도1b는 본 발명에 따른 백혈구 용해용 용액 키트를 나타낸 사진.

도1c는 본 발명에 따른 단백질 침전용 용액 키트를 나타낸 사진.

도1d는 본 발명에 따른 유전체 DNA 회수용 TE 완충 용액 키트를 나타낸 사진.

도2는 본 발명에 따른 실험예1 및 비교예1의 결과를 나타낸 사진.

도3은 본 발명에 따른 실험예2의 결과를 나타낸 사진.

도4는 본 발명에 따른 실험예3의 결과를 나타낸 사진.

도5a는 본 발명에 따른 실험예4에서 CYP450 3A4의 염기 서열 분석 결과를 나타낸 사진.

도5b는 본 발명에 따른 실험예4에서 포토리아제의 염기 서열 분석 결과를 나타낸 사진.

도5c는 본 발명에 따른 실험예4에서 RANKL의 염기 서열 분석 결과를 나타낸 사진.

도5d는 본 발명에 따른 실험예4에서 p53 유전자의 염기 서열 분석 결과를 나타낸 사진.

도5e는 본 발명에 따른 실험예4에서 프리제닐린-1의 염기 서열 분석 결과를 나타낸 사진.

도5f는 본 발명에 따른 실험예4에서 BRCA2의 염기 서열 분석 결과를 나타낸 사진.

도5g는 본 발명에 따른 실험예4에서 알데히드 데히드로게나제2의 염기 서열 분석 결과를 나타낸 사진.

본 발명은 인간 혈액으로부터 유전체 DNA를 추출할 수 있는 시약들로 이루어진 키트 및 그것을 사용하여 인간 혈액으로부터 유전체 DNA를 추출하는 방법에 관한 것이다.

근래, 인간 유전체 DNA의 염기 서열이 밝혀지고 난 후, 인간의 질병을 치유하거나, 예방하고자 하는 등의 목적으로 유전체 DNA 차원에서 행하는 분자 생물학적인 검사가 활발하게 이루어지고 있다. 즉, 예를 들면, 유전자 차원에서의 질병 검사, 새로 개발된 약물에 대한 효과의 검사, 혈액 공여자의 바이러스나 박테리아 감염 여부를 사전에 알기 위한 검사 뿐만 아니라, 친생자나 범죄자의 확인을 위한 법의학 등의 다양한 분야에서, 인간 세포로부터 추출된 유전체 DNA를 이용하여 그것을 분석하는 것이 오늘날 보편적으로 수행되고 있다.

이러한 유전자 차원의 검사에서 정확성을 기하기 위해서는 인간의 세포로부터 순도가 높은 유전체 DNA를 대량으로 추출하여 반복 실험함으로써, 재현성있는 결과를 얻도록 하는 것이 중요하다. 고순도의 DNA를 수득하기 위해 지금까지 개발된, 인간의 세포로부터 유전체 DNA를 추출하는 일반적인 방법에는, 페놀, 이소아밀 알코올 등의 유해한 유기 용매를 사용하거나, 단백질 분해 효소 등의 다양한 시약을 사용하기 때문에 요구되는 세척 단계, 단백질 분해 단계 등의 여러 단계가 포함되어 있다. 이러한 방법에 의하면, 여러 단계를 거침으로써 많은 시간이 소요될 뿐만 아니라, 다량의 시료를 동시에 처리하는데 한계가 있다(Sambrook,J.,E.F.Fritsch, and T.Maniatis, 1989. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. CHS Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY.).

최근, 보다 신속하고 간편하게 유전체 DNA를 추출하고자 하는 다양한 방법들이 고안되었으나, 이러한 방법들 또한 단백질 분해 효소 처리 후, 페놀 등의 유해한 유기 용매를 사용하는 기존의 방법과 유사한 방법(Parzer,S., and C.Mannhalter. 1991. A rapid method for the isolation of genomic DNA from citrated whole blood. Biochem.J.273(Pt1):229-231.; Albarino,C.G and V.Romanowski. 1994. Phenol extraction revisited: a rapid method for the isolation and preservation of human genomic DNA from whole blood. Mol. Cell Probes 8:423-427)이거나, 인간 혈액으로부터의 유전자 DNA 추출 과정에 여러 단계를 요구함으로써 많은 시간이 소요되는 방법들(Wang,L., K.Hirayasu, M.Ishizawa, and T.Kobayashi. 1994. Purification of genomic DNA from human whole blood by isopropanol-fractionation with concentrated NaI and SDS. Nuclecic Acids Res. 22:1774-1775.; Robbins,V., M.P.Aguinaga, and M.S.Valenzuela. 1995. Efficiencet isolation of whole genomic DNA frome cell cultures and blood samples. BioTechniques 18:414-418)이다. 2001년 Sambrook, J. 등은 상기한 문제점들을 개선하기 위하여, 인간 혈액으로부터의 유전체 DNA 추출 과정 중 최고 16시간이 소요되는 단백질 분해 효소를 처리하는 과정을 생략함으로써, 페놀 등의 유해한 유기 용매를 사용하는 단계를 줄임과 동시에 시간을 단축시키는 방법(Sambrook.J, and D.W.Russell. 2001. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. CHS Laboratory Press. Cold Spring Harbor. N.Y.)을 고안하였으나, 이 방법 또한 대량의 인간 혈액으로부터 다양한 유전체 DNA를 추출하기 위한 목적에는 적합하지 못하다. 그밖에 상기한 문제점들을 개선한 유전체 DNA 추출 키트(QIAGEN Inc. Valencia. USA)가 출시되어 있으나, 이 키트 역시 대량의 인간 혈액에서 다량의 유전체 DNA를 추출하는 데에는 많은 비용이 소모된다는 문제점이 있다.

본 발명의 목적은, 대량의 인간 혈액을 대상으로하여 신속하고 간편하게 고순도의 유전체 DNA를 다량 추출할 수 있는 방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 또다른 목적은, 대량의 인간 혈액으로부터 신속하고 간편하게 고순도의 유전체 DNA를 다량 추출할 수 있는 시약으로 이루어진 상품화된 키트를 제공하는데 있다.

본 발명에서는 상기와 같은 기술적 과제를 달성하기 위하여 예의 연구를 거듭한 결과, 유전체 DNA 추출을 위한 시료의 대상을 인간의 혈액만으로 국한함으로써, 기존의 인간 세포를 대상으로 하여 유전체 DNA를 추출하기 위해 사용된 다양한 시약을 일부 시약만으로 단순화시킬 수 있고, 시약을 소량 사용하여도 대량의 시료를 대상으로 신속하고 간편하게 순도가 높은 유전체 DNA를 추출할 수 있음에 착안하여 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명은, (a) 20mM의 pH 7.5인 Tris-HCl 완충 용액으로 이루어진 적혈구 용해용 용액 키트; (b) 10mM의 pH 8.0인 Tris-HCl 완충 용액, 1.0mM의 EDTA 및 0.1%의 SDS(sodium dodecyl sulfate)로 이루어진 백혈구 용해용 용액 키트; (c) 3M의 pH 5.2인 소듐 아세테이트로 이루어진 단백질 침전용 용액 키트; 및 (d) 10mM의 pH 8.0인 Tris-HCl 완충 용액 및 1.0mM EDTA로 이루어진 유전체 DNA 회수용 TE(Tris-HCl·EDTA) 완충 용액 키트;로 이루어진 인간 혈액으로부터의 유전체 DNA 추출용 용액 키트에 관한 것이다.

또한, 본 발명은, 인간 혈액 중에서 적혈구, 혈장, 혈소판 성분 등을 제거하여 백혈구 만을 수득하는 제1단계; 수득한 백혈구의 핵을 용출시키는 제2단계; 용 출된 백혈구의 핵으로부터 유전체 DNA 및 핵 단백질을 분리하는 제3단계; 및 분리된 유전체 DNA를 회수하는 제4단계;로 이루어진 인간 혈액으로부터의 유전체 DNA 추출 방법에 관한 것이고, 보다 구체적으로는, 응고되지 않은 인간 혈액에 20mM, pH 7.5의 Tris-HCl 완충 용액을 가하여, 적혈구, 혈장, 혈소판 성분 등을 제거하고 백혈구 만을 수득하는 제1단계; 수득한 백혈구에 10mM, pH 8.0의 Tris-HCl 완충 용액, 1.0mM EDTA 및 1.0% SDS를 가하여 백혈구의 핵을 용출시키는 제2단계; 용출된 백혈구의 핵에 3M, pH 5.2의 소듐 아세테이트 용액을 가하여 상기 백혈구의 핵으로부터 유전체 DNA 및 핵 단백질을 분리하는 제3단계; 및 분리된 유전체 DNA에 10mM, pH 8.0의 Tris-HCl 완충 용액 및 1.0mM EDTA를 가하여 유전체 DNA를 회수하는 제4단계;로 이루어진 인간 혈액으로부터의 유전체 DNA 추출 방법에 관한 것이다.

상기에서 설명한 본 발명의 유전체 DNA 추출용 시약 키트 및 유전체 DNA 추출 방법은, 혈액의 특성에 착안하여 이루어진 것이다. 혈액은 혈장 성분과 세포 성분으로 이루어져 있어, 헤파린 등의 혈액 응고제를 투입하여 응고되지 않은 혈액을 시험관에 넣고 세워두면 투명한 담황색의 액체(혈장)와 세포 성분(적혈구, 혈소판, 백혈구 등)으로 분리된다. 시험관을 기울여 혈장 성분을 제거한 후, 세포 성분에 혈액보다 낮은 삼투압의 식염수를 투입하면, 혈구 속에 수분이 빨려 들어가 용혈 현상이 일어나게 되는데, 본 발명에서는 이러한 혈액의 특성을 이용하여, 먼저 응고 방지제가 처리된 혈액에서 혈장 성분을 제거한 후 저농도 완충 용액을 혈액에 가함으로써, 핵을 포함하고 있지 않은 적혈구, 혈소판 및 소량의 혈장 단백질 등을 미리 제거한다. 이때, 상기 혈장 성분은, 저농도 완충 용액을 혈액에 가하여 적혈구, 혈소판 등을 제거할 때 함께 제거할 수도 있다. 이어서, 남은 백혈구 세포를 낮은 pH에서 SDS 등의 계면 활성제와 접촉시켜, 상기 백혈구 내의 유전체 DNA를 포함하는 핵이 상기 백혈구를 이루는 세포막, 세포질 등과 분리되어 용출된 상태가 되도록 한다. 여기에, 소듐 아세테이트 등의 아세트산염을 가할 경우, 상기 용출된 핵으로부터 유전체 DNA와 핵 단백질이 분리되고, 원심 분리에 의하면 핵 단백질이 침전된 상태로 존재하므로, 상층액 만을 취함으로써 유전체 DNA를 수득할 수 있다. 이러한 유전체 DNA는 이소프로필 알코올에 의해 침전된 후, 에탄올 세척 과정을 통해 협잡물이 포함되지 않은 순도 높은 유전체 DNA화 되고, 이러한 유전체 DNA를 대상으로 중합 효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, PCR), 제한 효소 처리, 염기 서열 분석 등의 분자 생물학적 검사 등을 바람직하게 행할 수 있다.

이하, 본 발명에 따른 인간 혈액으로부터의 유전체 DNA 추출용 키트 및 그것을 사용하여 유전체 DNA를 추출하는 방법에 대해, 하기 실시예 및 첨부된 도면을 참조하여 보다 상세하게 설명한다. 하기 실시예 및 첨부된 도면은 본 발명을 제한하는 것은 아니며, 본 발명은 청구 범위에 기재된 사항을 바탕으로 적절한 변형 및 수정이 가능하다.

실시예

제1단계: 헤파린으로 처리된 혈액 300㎕ 및 20mM의 pH 7.5인 Tris-HCl 완충 용액 1.2㎖를 1.5㎖ 짜리 마이크로 원심 분리 튜브에 넣고, 볼텍스 혼합한 후, 실온에서 10분간 방치하였다. 이어서, 이것을 마이크로 원심 분리기에서 16,000×g 로 30초 동안 원심 분리한 후, 용혈된 적혈구 세포, 혈소판, 혈청 등이 포함된 상층액을 튜브를 기울여 제거하였다. 상기 튜브 바닥에 남은 백혈구 세포에 다시 상기 20mM의 pH 7.5인 Tris-HCl 완충 용액을 가하여 3회 반복하여 세척하였다. 상기 20mM의 pH 7.5인 Tris-HCl 완충 용액을 적혈구 용해용 용액으로서 키트화(도1a참조, 적혈구 용해용 용액 키트Ⅰ)하여 실온에서 보관하였다.

제2단계: 상기 제1단계에서 세척 후 튜브 바닥에 남아있는 백혈구 세포를 볼텍스 혼합기로 풀어지도록 한 다음, 10mM의 pH 8.0인 Tris-HCl 완충 용액, 1.0mM EDTA 및 0.1%의 SDS의 혼합 용액 600㎕를 첨가한 후, 오비탈 쉐이커에서 30분 동안 교반하여 백혈구 세포의 핵을 용출시켰다. 상기 10mM의 pH 8.0인 Tris-HCl 완충 용액, 1.0mM EDTA 및 0.1%의 SDS의 혼합 용액을 백혈구 용해용 용액으로서 키트화(도1b 참조, 백혈구 용해용 용액 키트Ⅱ)하여 실온에서 보관하였다.

제3단계: 상기 백혈구 세포의 핵이 용출된 튜브에 200㎕의 pH 5.2인 3M 소듐 아세테이트를 가한 후, 볼텍스 혼합하고, 4℃ 마이크로 원심 분리기에서 16,000×g로 3분 동안 원심 분리하여, 핵 단백질을 비롯한 비중이 큰 성분을 침전시킴으로써 백혈구 핵의 유전체 DNA와 핵 단백질을 서로 분리시켰다. 상기 pH 5.2인 3M 소듐 아세테이트 용액을 단백질 침전용 용액으로서 키트화(도1c 참조, 단백질 침전용 용액 키트Ⅲ)하여 실온에서 보관하였다.

제4단계: 상기 제3단계에서 원심 분리 후의 튜브에 존재하는 상층액을 800㎕ 취하여 또다른 1.5㎖ 마이크로 원심 분리 튜브로 옮기고, 이것에 이소 프로필 알코올을 600㎕ 첨가한 후 잘 혼합하여 유전체 DNA를 침전시켰다. 상기 튜브를 마이크 로 원심 분리기에서 16,000×g로 1분간 원심 분리한 후, 상층액을 조심스럽게 따라 버리고 상기 튜브 바닥에 존재하는 유전체 DNA 펠렛의 손실없이, 흡수지를 사용하여 펠렛 주변의 잔여액까지 완전히 제거하였다. 상기 유전체 DNA 펠렛에 300㎕의 70% 에탄올을 가하고, 상기 튜브를 상하로 수회 흔들어 유전체 DNA 펠렛을 세척하였다. 이를 다시 16,000×g로 1분 동안 원심 분리한 후, 상층액은 따라 버리고 튜브 바닥에 존재하는 유전체 DNA 펠렛 주변의 잔여액은 흡수지로 빨아들여 제거한 후, 실온에서 10분 동안 건조시켰다.

상기 튜브의 바닥에 존재하는 유전체 DNA 펠렛에 10mM의 pH 8.0인 Tris-HCl 완충 용액 및 1.0mM EDTA 혼합액 100㎕를 가하여 유전체 DNA 펠렛을 용해하였다. 상기 용해된 유전체 DNA를 장기간 보관하기 위해 -20~-80℃에 보관하였다. 상기 10mM의 pH 8.0인 Tris-HCl 완충 용액 및 1.0mM EDTA 혼합 용액을 유전체 DNA 회수용 TE 완충 용액으로서 키트화(도1d 참조, 유전체 DNA 회수용 TE 완충 용액 키트Ⅳ)하여 실온에서 보관하였다. 상기 총 4단계의 과정을 수행하는 데에는 총 1시간여 소요되었다.

본 발명에 따라, 인간 혈액으로부터 유전체 DNA를 추출하는 방법으로 수득한 유전체 DNA를 대상으로, 그 순도를 판별하기 위해 하기와 같은 실험을 행하였다.

실험예1 전기 영동

0.7% 아가로스 겔 및 1×TBE 완충 용액을 준비하여, 10V/㎝의 전기 영동 조건으로 본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA를 전기 영동하였다. 0.5㎍/㎖ 에티 디움 브로마이드(ethidium bromide)로 염색한 후, 300㎚ 자외선 발광기 하에서 폴라로이드 사진으로 촬영하여 전기 영동의 결과를 도2에 나타내었다.

비교예1 전기 영동

상기 실험예1과 같은 조건 하에서, Sambrook 방법으로 수득한 유전체 DNA 및 상용 유전자 추출용 키트를 이용하여 수득한 유전체 DNA를 대상으로 전기 영동을 실시한 후, 그 결과를 실험예1의 결과와 함께 도2에 나타내었다.

도2에서, 레인 M은 표준 DNA 마커로서 NEB 2-log DNA ladder를 사용한 사이즈 마커를 나타내고, 레인 1 및 레인 2는 본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA의 전기 영동 결과를 나타낸다. 또한, 레인 3및 레인 4는 Sambrook 방법으로 수득한 유전체 DNA의 전기 영동 결과를 나타내고, 레인 5및 레인 6은 상용 유전자 추출용 키트를 이용하여 수득한 유전체 DNA의 전기 영동 결과를 나타낸다.

도2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA의 전기 영동 결과는, 기존의 Sambrook 방법으로 수득한 유전체 DNA의 전기 영동 결과나, 상용 유전자 추출용 키트를 이용하여 수득한 유전체 DNA의 전기 영동 결과와 거의 차이를 보이지 않고 깨끗한 단일의 발광선 만을 재현성있게 나타내었다. 따라서, 본 발명의 방법에 의해서도, 단백질, RNA 등의 오염없는 순도 높은 유전체 DNA를 수득할 수 있음을 확인할 수 있다.

실험예2 제한 효소 절단

HindⅢ, MspⅠ, PvuⅡ, RsaⅠ, NotⅠ 및 SacⅠ 등의 제한 효소를 준비하여, 본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA를 상기 제한 효소들로 처리한 후, 상기 실험예1과 같은 조건하에서 전기 영동하였다. 그 결과를 도3에 나타내었다.

도3에서, 레인 M은 표준 DNA 마커로서 NEB 2-log DNA ladder를 사용한 사이즈 마커를 나타내고, 레인 1, 레인 2, 레인 3, 레인 4, 레인 5 및 레인 6은 차례대로, HindⅢ, MspⅠ, PvuⅡ, RsaⅠ, NotⅠ 및 SacⅠ를 본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA에 처리한 후 전기 영동한 결과를 나타낸다.

도3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA를 제한 효소로 처리한 후 전기 영동한 결과는, 표준 DNA 마커와 비교해 보았을때, 상기 유전체 DNA가 상기 제한 효소들에 의해 정확한 위치에서 절단되었음을 확인할 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법에 의하면, 단백질, RNA 등에 의한 오염이나 특정 요인에 의한 변이가 발생하지 않은 순도 높은 유전체 DNA를 수득할 수 있음을 알 수 있다.

실험예3 PCR-전기 영동

본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA에서 CYP450 3A4, 포토리아제(photolyase), RANKL, p53 유전자, 프리제닐린-1(presenilin-1), BRCA2 및 알데히드 데히드로게나제2 위치에 대해 각각 PCR하였다. 1.5% 아가로스 겔 및 1×TBE 완충 용액을 준비하여, 10V/㎝의 전기 영동 조건으로 상기 PCR 결과 산물을 전기 영동한 후, 0.5㎍/㎖ 에티디움 브로마이드로 염색하여 관찰한 결과를 도4에 나타내었다.

도4에서, 레인 M은 표준 DNA 마커로서 NEB 2-log DNA ladder를 사용한 사이즈 마커를 나타내고, 레인 1, 레인 2, 레인 3, 레인 4, 레인 5, 레인 6 및 레인 7은 차례로, 본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA에서 CYP450 3A4, 포토리아제, RANKL, p53 유전자, 프리제닐린-1, BRCA2 및 알데히드 데히드로게나제2 위치에 대한 PCR 후의 전기 영동 결과를 나타낸다,

도4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA에서 특이 유전자에 해당하는 부분을 PCR한 후 전기 영동한 결과는, 표준 DNA 마커와 비교해 보았을때 예상되는 정확한 위치에서 뚜렷한 발광을 나타내는 것으로 보아, 상기 유전체 DNA에는 특이 유전자에 해당하는 부분들이 정확하게 존재하며, PCR에 의해서 오염없이 증폭되었음을 확인할 수 있다. 따라서, 본 발명의 방법에 의하면, 단백질, RNA 등에 의한 오염이 없고, 변이가 발생하지 않은 순도 높은 유전체 DNA를 수득할 수 있음을 알 수 있다.

실험예4 PCR-염기 서열 분석

본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA에서 CYP450 3A4, 포토리아제, RANKL, p53 유전자, 프리제닐린-1, BRCA2 및 알데히드 데히드로게나제2 위치에 대해 각각 PCR하였다. 상기 PCR 산물에 대해 염기 서열을 각각 분석하여, 그 결과를 도5a 내지 도5g에 차례로 도시한다.

도5a 내지 도5g에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 방법으로 수득한 유전체 DNA를 각각 PCR한 후 상기 PCR 산물에 대한 각 서열 분석한 결과는, 기존에 분석된 각 유전자들의 서열과 오차없이 분석되었고, 따라서, 본 발명의 방법에 의하면, 단백질, RNA 등에 의한 오염이 없고, 변이가 발생하지 않은 순도 높은 유전체 DNA를 수득할 수 있음을 알 수 있다.

본 발명에 의하면, 인간의 세포 중에서도 혈액 세포인 백혈구 만을 대상으로 상기 백혈구 핵 내의 유전체 DNA를 추출하고자 하므로, 사용되는 시약을 단순화하고, 또한 시약을 소량 사용함으로써, 경제적이고 간편하게 유전체 DNA를 수득할 수 있다.

또한, 인간 혈액으로부터 유전체 DNA를 추출할 수 있는 시약을 키트화함으로써, 유전체 DNA 추출 단계를 네단계로 간략화하여 보다 신속하게 대량의 시료를 대상으로 유전체 DNA를 추출할 수 있다. 그 결과로서 수득한 유전체 DNA는, 기존의 방법 또는 상용화된 키트를 사용한 것과 다름없는 순도를 가지므로, 유전자 차원의 검사 등에 바람직하게 사용할 수 있다.

Claims (3)

1. (a) 20mM의 pH 7.5인 Tris-HCl 완충 용액으로 이루어진 적혈구 용해용 용액 키트;

   (b) 10mM의 pH 8.0인 Tris-HCl 완충 용액, 1.0mM의 EDTA 및 0.1%의 SDS로 이루어진 백혈구 용해용 용액 키트;

   (c) 3M의 pH 5.2인 소듐 아세테이트로 이루어진 단백질 침전용 용액 키트; 및

   (d) 10mM의 pH 8.0인 Tris-HCl 완충 용액 및 1.0mM EDTA로 이루어진 유전체 DNA 회수용 TE 완충 용액 키트;

   로 이루어진 인간 혈액으로부터의 유전체 DNA 추출용 시약 키트.
2. 삭제
3. 응고되지 않은 인간 혈액에 20mM, pH 7.5의 Tris-HCl 완충 용액을 가하여, 적혈구, 혈장, 혈소판 성분 등을 제거하고 백혈구 만을 수득하는 제1단계;

   수득한 백혈구에 10mM, pH 8.0의 Tris-HCl 완충 용액, 1.0mM EDTA 및 1.0% SDS를 가하여 백혈구의 핵을 용출시키는 제2단계;

   용출된 백혈구의 핵에 3M, pH 5.2의 소듐 아세테이트 용액을 가하여 상기 백혈구의 핵으로부터 유전체 DNA 및 핵 단백질을 분리하는 제3단계; 및

   상기에서 분리된 유전체 DNA에 10mM, pH 8.0의 Tris-HCl 완충 용액 및 1.0mM EDTA을 가하여 유전체 DNA를 회수하는 제4단계;

   로 이루어진 인간 혈액으로부터의 유전체 DNA 추출 방법.

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