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KR100201585B1 - Vasodilator composition - Google Patents

Vasodilator composition Download PDF

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KR100201585B1
KR100201585B1 KR1019960053685A KR19960053685A KR100201585B1 KR 100201585 B1 KR100201585 B1 KR 100201585B1 KR 1019960053685 A KR1019960053685 A KR 1019960053685A KR 19960053685 A KR19960053685 A KR 19960053685A KR 100201585 B1 KR100201585 B1 KR 100201585B1
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ginseng
ginsenoside
ginsenosides
present
fraction
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Inventor
김낙두
박만기
박정일
김종문
강수연
김왕유
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손경식
제일제당주식회사
박만기
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Publication date
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Priority to EP96939357A priority patent/EP0873131B1/en
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Priority to AU76563/96A priority patent/AU7656396A/en
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Abstract

본 발명은 인삼의 성분중의 하나인 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5를 활성성분으로서 함유하는 혈관이완제 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르는 조성물의 활성성분인 진세노사이드 Rg3및 Rg5는 내피의존적으로 혈관이완작용을 나타내며, 일반적인 사포닌 성분과는 달리 내피세포를 파괴하지 않아 용혈작용이나 어독성 등의 부작용이 없이 사용할 수 있는 안전한 의약성분이다. 진세노사이드 Rg3및 Rg5는 수삼, 백삼 등의 인삼식물에는 거의 존재하지 않고 홍삼중에 극미량으로만 존재하는 성분으로, 인삼 식물을 110 내지 180℃ 의 고온에서 0.5 내지 20시간 동안 가열함으로써 그 함량이 현저히 증가한다.The present invention relates to a vasodilator composition comprising ginsenoside Rg 3 and / or Rg 5 as one of the components of ginseng as an active ingredient. Ginsenosides Rg 3 and Rg 5 , the active ingredients of the composition according to the present invention exhibits vascular relaxation in an endothelial manner, and unlike general saponin components, do not destroy endothelial cells and thus can be used without side effects such as hemolytic action or fish toxicity. It is a safe medicinal ingredient. Ginsenosides Rg 3 and Rg 5 are rarely present in ginseng plants such as ginseng and white ginseng, and are present only in trace amounts in red ginseng.The contents of ginseng plants are heated by heating the ginseng plants at a high temperature of 110 to 180 ° C. for 0.5 to 20 hours This increases significantly.

Description

혈관이완제 조성물Vasodilator composition

제1도는 진세노사이드 Rg3를 내피존재하에서 단독투여하였을 때의 혈관이완효과(--)를 내피를 제거하고 투여하였을 때(-○-), 내피존재하에서 Rg3를 10-6M 의 메틸렌블루(MB) 와 병용투여하였을 때(-△-) 및 10-6M의 L-니트로알기닌(L-NLA)과 병용투여하였을 때(--)의 혈관이완효과와 비교하여 나타낸 그래프이다.Figure 1 shows the vasorelaxant effect of ginsenoside Rg 3 administered alone in the presence of endothelial cells. When endothelium was removed and administered (-○-), when Rg 3 was co-administered with 10 -6 M of methylene blue (MB) in the presence of endothelium (-△-) and 10 -6 M of L- When combined with nitroarginine (L-NLA) (- This graph is compared with the vasorelaxant effect of-).

제2도는 실시예 7에서 제조한 가공 파낙사디올계 사포닌 분획을 내피존재하에서 투여하였을 때(--) 및 내피를 제거하고 투여하였을 때의 혈관이완효과를 비교하여 나타낸 그래프이다.Figure 2 is when the processed panaxanthol-based saponin fraction prepared in Example 7 was administered in the presence of endothelial (- -) And a graph showing a comparison of the vasorelaxant effect when the endothelium was removed and administered.

제3도는 HUVEC 세포에 대한 진세노사이드 Rg3와 용배로 사용한 디메틸설폭사이드(DMSO)의 세포독성 실험결과를 나타낸 그래프로 세포에 DMSO를 가하여 배양하였을 때(-○-) 및 진세노사이드 Rg3를 DMSO 에 용해시킨 용액을 가하여 배양하였을 때(--)의 세포의 생존율을 비교하여 나타낸 그래프이다.FIG. 3 is a graph showing the results of cytotoxicity test of ginsenoside Rg 3 and dimethyl sulfoxide (DMSO) used for HUVEC cells when cultured with DMSO (-○-) and ginsenoside Rg 3. Was cultured by adding a solution dissolved in DMSO (- It is a graph comparing the survival rate of the cells of-).

제4도는 진세노사이드 Rg5를 내피 존재하에서 단독투여하였을 때의 혈관이완효과(-○-)를, 내피를 제거하고 투여하였을 때(--), 내피존재하에서 Rg5를 10-6M 의 매틸렌블루(MB) 와 병용투여하였을 때(--) 및 10-6M 의 L-니트로알기닌(L-NLA)과 병용투여하였을 때(-△-)의 혈관이완효과와 비교하여 나타낸 그래프이다.FIG. 4 shows the vasorelaxant effect (-○-) when ginsenoside Rg 5 was administered alone in the presence of endothelial cells. When Rg 5 was coadministered with 10-6 M of methylene blue (MB) in the presence of endothelial cells (-) -) And 10-6 M L-nitroarginine (L-NLA) when combined with (-Δ-) vascular relaxation effect compared with the graph shown.

제5도는 HUVEC 세포에 대한 진세노사이드 Rg5와 용매로 사용한 디메틸설폭사이드(DMSO)의 세포독성 실험결과를 나타낸 그래프로서, 세포에 DMSO를 가하여 배양하였을 때(--) 및 진세노사이드 Rg5를 DMSO 에 용해시킨 용액을 가하여 배양하였을 때(--)의 세포의 생존율을 비교하여 나타낸 그래프이다.FIG. 5 is a graph showing the results of cytotoxicity test of ginsenoside Rg 5 and dimethyl sulfoxide (DMSO) used as a solvent for HUVEC cells. And cultured by adding a solution of ginsenoside Rg 5 dissolved in DMSO (- It is a graph comparing the survival rate of the cells of-).

본 발명은 인삼의 특정 유효성분을 활성성분으로서 함유하는 혈관이완제 조성물에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 인삼의 사포닌계 성분중의 하나인 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5를 활성성분으로 함유하는 혈관이완제 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a vasodilator composition containing a specific active ingredient of ginseng as an active ingredient. More specifically, the present invention relates to a vasodilator composition containing ginsenoside Rg 3 and / or Rg 5 as one of the saponin-based components of ginseng as an active ingredient.

인삼은 고래로부터 가장 대표적인 자양강장제로서 널리 사용되어 오고 있으며, 최근에는 그 성분과 약효에 대한 많은 연구결과가 보고되고 있어 그 신비한 약효가 현대과학적인 조명을 받고 있다.Ginseng has been widely used as the most representative nourishing tonic from whales, and recently, many researches on its ingredients and efficacy have been reported, and the mysterious effects of it are being illuminated by modern science.

일반적으로 인삼은 재배하여 채취한 그대로의 수삼, 수삼을 상온에서 건조시킨 백삼 또는 수삼을 98 내지 100℃에서 가열처리하여 제조되는 홍삼의 형태로 이용되고 있다. 이중에서 특히 홍삼은 백삼보다 훨씬 약효가 강한 것으로 알려져 있는데, 최근들어 홍삼의 특이성분에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다. 이러한 성분들은 홍삼을 제조하는 과정에서 생성되는 것으로 홍삼의 우수한 약효를 설명해줄 수 있는 성분으로 평가되고 있다.In general, ginseng is used in the form of red ginseng, which is produced by heat-treating white ginseng or ginseng dried at room temperature as it is grown and harvested. Among them, red ginseng is known to be much stronger than white ginseng. Recently, research on specific components of red ginseng has been actively conducted. These ingredients are produced during the manufacturing process of red ginseng and are evaluated as a component that can explain the excellent efficacy of red ginseng.

따라서 본 발명자들은 홍삼의 특이성분들을 증가시켜 인삼의 약효를 강화시킬 수 있는 수단을 연구하게 되었으며, 그 결과 인삼을 110 내지 180℃의 고온에서 0.5 내지 20 시간 동안 가열하여 처리하게 되면 기존의 수삼이나 백삼 또는 홍삼보다 약효가 훨씬 증강된 가공인삼이 제조되는 것을 확인하였다. 이러한 가공인삼에 존재하는 각종 성분들을 분리하여 그의 약효를 검증하는 과정에서 본 발명자들은 백삼이나 홍삼에는 전혀 존재하지 않거나 매우 미량으로 존재하는 성분으로 지금까지는 약효가 거의 알려지지 않았던 진세노사이드 Rg3및 Rg5가 우수한 혈관이완효과를 나타냄을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.Therefore, the present inventors have studied a means to enhance the efficacy of ginseng by increasing the specific components of red ginseng, and as a result, when the ginseng is heated and treated at a high temperature of 110 to 180 ° C. for 0.5 to 20 hours, the existing ginseng or It was confirmed that processed ginseng with much enhanced efficacy than white ginseng or red ginseng. In the process of separating the various components present in such processed ginseng and verifying its efficacy, the present inventors have no ginsenoside Rg 3 and Rg, which have not been known so far in the white ginseng or red ginseng. It was confirmed that 5 exhibits an excellent vasorelaxant effect and completed the present invention.

따라서, 본 발명은 활성성분으로서 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5를 함유하는 혈관이완제 조성물에 관한 것이다.Accordingly, the present invention relates to vasodilator compositions containing ginsenosides Rg 3 and / or Rg 5 as active ingredients.

본 발명에 따르는 조성물에서 활성성분으로 사용되는 진세노사이드 Rg3및 Rg5는 다음과 같은 구조를 갖는 사포닌 화합물로서 본 발명에서는 순수한 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5를 사용하거나, 또는 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5성분이 강화된 가공인삼 또는 그의 추출물을 사용할 수도 있다.Ginsenosides Rg 3 and Rg 5 used as the active ingredient in the composition according to the present invention is a saponin compound having the structure as follows. In the present invention, pure ginsenosides Rg 3 and / or Rg 5 are used, or ginsenosides. Processed ginseng or extracts thereof enhanced with the side Rg 3 and / or Rg 5 components may also be used.

본 발명에 따른 조성물에서 Rg3및/또는 Rg5를 함유하는 가공 인삼추출물을 활성성분으로 사용하는 경우에 추출물중의 Rg3및/또는 Rg5의 함량은 적어도 10%(w/w)인 것이 바람직한데, 이는 Rg3및/또는 Rg5의 함량이 10% 미만일 경우에는 목적하는 혈관이완 효과를 충분히 얻기 위해서 너무 다량의 인삼추출물이 사용되어야 하기 때문이다.Rg 3 and / or the content of Rg 5 of the extract when using the processed ginseng extract containing Rg 3 and / or Rg 5 in the composition according to the invention as the active component is at least 10% (w / w) This is preferable because when the content of Rg 3 and / or Rg 5 is less than 10%, too much ginseng extract must be used in order to sufficiently obtain the desired vasorelaxant effect.

본 발명에 따르는 조성물에서 순수한 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5, 또는 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5가 강화된 인삼추출물은 인삼 또는 인삼잎 등을 고온에서 가열처리하여 얻은 가공인삼, 또는 인삼추출물의 산가수분해물로 부터 수득할 수 있다.Ginseng extract with enhanced ginsenoside Rg 3 and / or Rg 5 , or ginsenoside Rg 3 and / or Rg 5 in the composition according to the present invention is processed ginseng obtained by heating ginseng or ginseng leaves at a high temperature, Alternatively, it can be obtained from the acid hydrolyzate of ginseng extract.

진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5가 강화된 인삼추출물은 인삼사포닌을 함유하는 파낙스속 식물, 예를들면 파낙스 진셍(Panax ginseng), 파낙스 노토진생(Panax notoginseng), 파낙스 퀸퀘폴리움(Panax quinquefolium), 파낙스 야포니쿠스(Panax japonicus) 등이나 또는 이들 식물의 잎, 이들 식물의 조직배양물, 또는 이들의 물 또는 저급알콜에 의한 추출물을 110 내지 180℃ 의 온도에서 0.5 내지 20시간 동안 가열처리하고, 수득된 가공인삼을 물 또는 적절한 유기용매, 예를들면 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 후에 추출물을 감압하에 농축시키고 물에 현탁시킨 다음, 비극성 유기용매, 예를들면 헥산, 에테르, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 이들의 혼합용매로 추출한 후에 남은 수층을 부탄올과 같은 극성 유기용매로 추출하여 이 추출물을 크로마토그라피함으로써 Rg3또는 Rg5를 함유하는 분획을 얻거나 Rg3및 Rg5를 동시에 함유하는 분획을 수득할 수 있다. 이때 크로마토그라피를 반복수행하면 진세노사이드 Rg3또는 Rg5의 함량을 더욱 높일 수 있으며, 함량이 높아진 분획을 적절한 용매계, 예를들면 물, 저급알콜, 저급케톤, 클로로포름 또는 이들의 혼합용매와 같은 용매계에서 결정화시키면 순수한 진세노사이드 Rg3또는 Rg5를 수득할 수 있다. 이 방법에서는 인삼을 가열처리하는 과정에서 인삼중에 존재하는 파낙사디올계 사포닌인 진세노사이드 Ra, Rb1, Rb2, Rc, Rd 의 20번 탄소에 결합한 당이 떨어져 나감으로써 목적하는 진세노사이드 Rg3가 생성되고, Rg3가 계속하여 탈수반응을 일으켜 20번 위치에 이중결합이 생성됨으로써 Rg5가 생성된다. 경우에 따라 상기의 과정에서 가열처리하는 단계와 유기용매 추출단계를 바꾸어서 수행하거나, 고온에서 가열처리하는 대신에 온화한 조건하에서, 예를들면 30 내지 100℃에서, 바람직하게는 70℃에서 가열하면서 산, 예를들면 염산, 질산, 과염소산 등과 같은 묽은 광산, 또는 아세트산, 타타르산, 옥살산 등과 같은 저급 유기산으로 산처리하여 수행하는 경우에도 동일한 결과를 얻을수 있다.Ginseng extracts fortified with ginsenosides Rg 3 and / or Rg 5 include Panax plants containing ginseng saponins, such as Panax ginseng, Panax notoginseng, Panax quinquefolium ), Panax japonicus, or the like, or the leaves of these plants, tissue cultures of these plants, or extracts from water or lower alcohols, are heated at a temperature of 110 to 180 ° C. for 0.5 to 20 hours. The obtained ginseng is extracted with water or a suitable organic solvent such as methanol, ethanol or a mixed solvent thereof, and then the extract is concentrated under reduced pressure and suspended in water, followed by a nonpolar organic solvent such as hexane, ether, After extracting with dichloromethane, chloroform, ethyl acetate or a mixed solvent thereof, the remaining aqueous layer is extracted with a polar organic solvent such as butanol and extracted. By Mato calligraphy it is possible to obtain a fraction to obtain a fraction containing Rg or Rg 3 or 5 containing Rg Rg 3 and 5 at the same time. At this time, repeated chromatography can increase the content of ginsenosides Rg 3 or Rg 5 , and the fractions with higher contents can be added to an appropriate solvent system, such as water, lower alcohol, lower ketone, chloroform or a mixed solvent thereof. Crystallization in the same solvent system can yield pure ginsenosides Rg 3 or Rg 5 . In this method, the ginsenoside of ginsenoside Ra, Rb 1 , Rb 2 , Rc, and Rd, which is a panaxidiol-based saponin present in ginseng, falls off in the process of heat-treating ginseng. Rg 3 is generated, Rg 3 continues to dehydrate and a double bond is generated at position 20 to generate Rg 5 . In some cases, the heat treatment step and the organic solvent extraction step may be alternately performed, or the acid may be heated under mild conditions, for example, at 30 to 100 ° C., preferably at 70 ° C., instead of being heated at a high temperature. The same result can be obtained by performing acid treatment with dilute mineral acid such as hydrochloric acid, nitric acid, perchloric acid, or lower organic acid such as acetic acid, tartaric acid, oxalic acid.

또한 상기의 과정에서 인삼 대신에 공지의 화합물인 진세노사이드 Ra, Rb1, Rb2, Rc, Rd 등의 성분 또는 이들의 분획을 직접 상기한 바와 같은 방법으로 가열하거나, 산가수분해하여도 동일한 결과를 얻을 수 있다.In the above process, instead of ginseng, known compounds such as ginsenosides Ra, Rb 1 , Rb 2 , Rc, and Rd or fractions thereof may be directly heated or acid hydrolyzed in the same manner as described above. You can get the result.

한편, Rg3및/또는 Rg5를 함유하는 인삼추출물을 제조하는 경우에, 인삼을 가열하기 전에 유기용매, 예를들면 메탄올, 에탄올, 부탄올 등의 알콜 용매, 에테르 용매, 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 원치않는 성분인 파낙사트리올게 사포닌 성분을 제거하여 파낙사디올계 사포닌 성분을 고농도로 함유하는 분획을 얻어 이것을 상기 언급한 바와 동일한 방법으로 가열처리함으로써 Rg3및/또는 Rg5를 다량으로 함유하고 원치 않는 파낙사트리올계 샤포닌 성분을 함유하지 않는 가공 파낙사디올계 사포닌 분획을 수득하여 이것을 Rg3및/또는 Rg5를 함유하는 가공인삼추출물로 사용할 수도 있다.On the other hand, when preparing a ginseng extract containing Rg 3 and / or Rg 5 , before heating the ginseng, using an organic solvent, for example, an alcohol solvent such as methanol, ethanol, butanol, ether solvent, or a mixed solvent thereof Extraction of undesired panaxantholol saponin components to obtain a fraction containing a high concentration of panaxadiol-based saponin components and heat-treated in the same manner as mentioned above to a large amount of Rg 3 and / or Rg 5 A processed panaxadiol-based saponin fraction containing no unwanted panaxtriol-based chaponin components may be obtained and used as a processed ginseng extract containing Rg 3 and / or Rg 5 .

본 발명에 따르는 활성성분으로서 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5를 함유하는 조성물은 강력한 혈관이완효과를 가지고 있어 순환기계 장애로 인한 고혈압, 동맥경화, 혈액순환장애, 당뇨병, 성기능장애, 기억력장애 등의 질환에 대한 예방 및 치료제로서 유용하게 사용될 수 있다. 이러한 목적으로 임상적으로 이용시에 본 발명의 조성물은 약제학적 분야에서 통상적인 담체와 함께 배합하여 약제학적 분야에서 통상적인 제제, 예를들면 정제, 캅셀제, 트로치제, 액제, 현탁제 등의 경구투여용 제제, 주사용 용액 또는 현탁액, 또는 주사시에 주사용 증류수로 재조제하여 사용할 수 있는 즉시 사용형 주사용 건조분말 등의 형태인 주사용 제제, 연고제, 크림제, 액제 등의 국소적용형 제제 등의 다양한 제제로 제형화시킬 수 있다.The composition containing ginsenoside Rg 3 and / or Rg 5 as an active ingredient according to the present invention has a strong vasorelaxant effect, hypertension, arteriosclerosis, blood circulation disorders due to circulatory disorders, diabetes, sexual dysfunction, memory disorders It can be usefully used as a prophylactic and therapeutic agent for such diseases. When used clinically for this purpose, the composition of the present invention may be combined with a conventional carrier in the pharmaceutical field to provide oral administration of conventional agents in the pharmaceutical field, such as tablets, capsules, troches, solutions, suspensions, and the like. Topical formulations, such as injectable preparations, ointments, creams, liquids, etc., in the form of preparations for injection, injectable solutions or suspensions, or ready-to-use injectable dry powders which can be prepared by injection with distilled water for injection. It can be formulated into a variety of formulations, such as.

본 발명의 조성물에서 사용될 수 있는 담체는 약제학적 분야에서 통상적인 것으로, 예를들어 경구투여용 제제의 경우에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등이 있으며, 주사제의 경우에는 보존제, 무통화제, 가용화제, 안정화제 등이 있고, 국소투여용 제제의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제, 보존제 등이 있다. 이렇게 제조된 약제학적 제제는 경구적으로 투여하거나, 비경구적으로, 예를들면 정맥내, 피하, 복강내 투여 또는 국소적용할 수 있다. 또한 경구투여시에 약제가 위산에 의해 분해되는 것을 방지하기 위하여 제산제를 병용하거나, 정제등의 경구투여용 고형제제를 장용피로 피복된 제제로 제형화하여 투여할 수도 있다.Carriers that can be used in the compositions of the present invention are conventional in the pharmaceutical field, for example in the case of oral preparations, binders, suspending agents, disintegrants, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspending agents, pigments And fragrances. In the case of injectables, there are preservatives, analgesics, solubilizers, stabilizers, and the like, and in the case of topical administration, there are bases, excipients, lubricants, and preservatives. The pharmaceutical preparations thus prepared can be administered orally or parenterally, eg, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally, or topically. In addition, in order to prevent the decomposition of the drug by gastric acid during oral administration, an antacid may be used in combination, or a solid dosage form for oral administration such as tablets may be formulated into a formulation coated with enteric skin.

본 발명에 따르는 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5의 인체에 대한 투여량은 체내에서의 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증도 등에 따라 적절히 선택되나, 일반적으로는 성인에게 1일에 5 내지 500mg, 바람직하게는 10 내지 200mg의 양이 투여되도록 한다. 따라서, 본 발명의 조성물을 단위투여형으로 제조시에 각각의 단위투여형은 상기 언급된 유효용량 범위를 고려하여 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5를 5 내지 500mg, 바람직하게는 10 내지 200mg 함유하도록 제형화시킬 수 있다. 이렇게 제형화된 단위투여형은 필요에 따라 약제의 투여를 감시하거나 관찰하는 전문가의 판단과 개인의 요구에 따라 전문화된 투약법을 사용하거나, 일정시간 간격으로 수회, 바람직하게는 1 내지 6회 분할 투여할 수 있다.The dose of ginsenosides Rg 3 and / or Rg 5 to the human body according to the present invention depends on the absorption rate, inactivation rate and excretion rate of the active ingredient in the body, the age, sex and condition of the patient, the severity of the disease to be treated, and the like. Although appropriately selected, generally an adult is allowed to receive an amount of 5-500 mg, preferably 10-200 mg per day. Therefore, when preparing the composition of the present invention in unit dosage form, each unit dosage form is 5 to 500 mg, preferably 10 to 200 mg of ginsenoside Rg 3 and / or Rg 5 in consideration of the above-mentioned effective dose range. It can be formulated to contain. The unit dosage form thus formulated may be divided into several times, preferably 1 to 6 times, using specialized dosing methods or according to the needs of the individual who monitors or observes the administration of the drug as needed and according to the needs of the individual. May be administered.

본 발명에 따르는 조성물의 활성성분인 진세노사이드 Rg3및 Rg5는 후술하는 실험결과로 부터 입증되는 바와 같이 혈관내피에 대한 손상없이 혈관을 이완시키는 작용을 나타내므로 용혈이나 어독성 등의 부작용이 없을 뿐만 아니라, 실험동물에 대하여 급성독성을 나타내지 않아 안전하게 사용할 수 있다.Ginsenosides Rg 3 and Rg 5 of the active ingredient of the composition according to the present invention exhibits the effect of relaxing the blood vessels without damaging the vascular endothelial as demonstrated by the experimental results described later, so side effects such as hemolysis or fish toxicity In addition, it is not acutely toxic to experimental animals and can be used safely.

본 발명은 이하의 실시예 및 실험예에 의해 더욱 상세히 설명되나 본 발명이 이들에 의해 어떤 식으로든 제한되는 것은 아니다.The present invention is explained in more detail by the following examples and experimental examples, but the present invention is not limited in any way by these.

[실시예 1]Example 1

진세노사이드 Rg3를 함유하는 인삼추출물의 제조Preparation of Ginseng Extract Containing Ginsenoside Rg 3

밀폐된 용기에 수삼 100g을 넣고 130℃에서 2시간 동안 가열처리하였다. 이 가공인삼을 메탄올 200ml 로 추출하여 메탄올 추출물을 얻고 메탄올을 증발시켜 제거한 후에 남은 잔사를 물 100㎖에 현탁시켜 에테르 100㎖씩으로 3회 추출한 다음, 남은 수층을 수포화 부탄올 100㎖씩으로 3 회 추출하여 사포닌이 함유된 부탄올 추출액을 얻었다. 이 부탄올 추출액을 건조하여 에틸아세테이트/메탄올/물(20:1:1)의 혼합용매을 용출제로 사용하여 실리카겔 컬럼상에서 크로마토그라피시켜 목적하는 진세노사이드 Rg3를 60% 함유하는 분획 1.5g을 수득하였다.100 g of fresh ginseng was put in a sealed container and heated at 130 ° C. for 2 hours. The processed ginseng was extracted with 200 ml of methanol to obtain a methanol extract, and methanol was evaporated and removed. The remaining residue was suspended in 100 ml of water, extracted three times with 100 ml of ether, and the remaining aqueous layer was extracted three times with 100 ml of saturated butanol. A butanol extract containing saponin was obtained. The butanol extract was dried and chromatographed on a silica gel column using a mixed solvent of ethyl acetate / methanol / water (20: 1: 1) as eluent to obtain 1.5 g of a fraction containing 60% of the desired ginsenoside Rg 3 . .

[실시예 2]Example 2

진세노사이드 Rg5를 함유하는 인삼추출물의 제조Preparation of Ginseng Extract Containing Ginsenoside Rg 5

실시예 1에서와 동일하게 실시하여 목적하는 진세노사이드 Rg5를 50% 함유하는 분획 1.0g을 수득하였다.In the same manner as in Example 1, 1.0 g of a fraction containing 50% of the desired ginsenoside Rg 5 was obtained.

[실시예 3]Example 3

진세노사이드 Rg3를 함유하는 인삼추출물의 제조Preparation of Ginseng Extract Containing Ginsenoside Rg 3

건조된 미삼1kg에 메탄올 2를 가하여 수욕상에서 4시간 동안 환류시켜 추출하고 여과하여 수득한 인삼 엑기스를 감압하에서 건조시켰다. 수득한 시럽상의 인삼 추출물을 가압멸균기에 넣고 120℃에서 4시간 동안 가열하였다. 가열처리된 인삼 추출물을 실시예 1에서와 동일한 방법으로 실리카겔 컬럼상에서 크로마토그라피시켜 목적하는 진세노사이드 Rg3를 65% 함유하는 분획 20g을 분리하여 수득하였다.Methanol 2 was added to 1 kg of dried ginseng, refluxed in a water bath for 4 hours, extracted, and the ginseng extract obtained by filtration was dried under reduced pressure. The obtained syrup-like ginseng extract was put into an autoclave and heated at 120 ° C. for 4 hours. The heat treated ginseng extract was chromatographed on a silica gel column in the same manner as in Example 1 to obtain 20 g of a fraction containing 65% of the desired ginsenoside Rg 3 .

[실시예 4]Example 4

진세노사이드 Rg5를 함유하는 인삼추출물의 제조Preparation of Ginseng Extract Containing Ginsenoside Rg 5

실시예 3에서와 동일하게 실시하여 목적하는 진세노사이드 Rg5를 60% 함유하는 분획 10g을 수득하였다.In the same manner as in Example 3, 10 g of a fraction containing 60% of the desired ginsenoside Rg 5 was obtained.

[실시예 5]Example 5

진세노사이드 Rg3를 함유하는 인삼추출물의 제조Preparation of Ginseng Extract Containing Ginsenoside Rg 3

백삼 1kg에 메탄올 2ℓ 가하여 수욕상에서 4시간 동안 환류 추출하고 여과하여 수득된 인삼 엑기스를 감압하에서 건조시켰다. 수득한 시럽상의 인삼 추출물을 공지된 방범[참조: 약학회지 제35권 5호, 432-437 (1991)]에 의하여 산처리하였다. 즉 인삼 추출물을 물/아세트산(1:1) 혼합용매 1ℓ에 용해 시키고 70℃에서 2시간 동안 교반하면서 가열한 다음 용매를 제거하여 얻은 산처리된 인삼 추출물을 실시예 1에서와 동일한 방법으로 실리카겔 컬럼상에서 크로마토그라피시켜 목적하는 진세노사이드 Rg3를 72% 함유하는 분획 20g을 분리하여 수득하였다.2 g of methanol was added to 1 kg of white ginseng, reflux extracted for 4 hours in a water bath, and the ginseng extract obtained by filtration was dried under reduced pressure. The ginseng extract of the obtained syrup was acid-treated by well-known crime prevention (Refer .: Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 35, No. 432-437 (1991)). That is, the ginseng extract was dissolved in 1 L of a water / acetic acid (1: 1) mixed solvent, heated with stirring at 70 ° C. for 2 hours, and then the solvent was removed. Chromatography on the separation gave 20 g of a fraction containing 72% of the desired ginsenoside Rg 3 .

[실시예 6]Example 6

진세노사이드 Rg5를 함유하는 인삼추출물의 제조Preparation of Ginseng Extract Containing Ginsenoside Rg 5

실시예 5에서와 동일하게 실시하여 목적하는 진세노사이드 Rg5를 60% 함유하는 분획 10g을 수득하였다.In the same manner as in Example 5, 10 g of a fraction containing 60% of the desired ginsenoside Rg 5 was obtained.

[실시예 7]Example 7

가공 파낙사디올계 사포닌 분획의 제조Preparation of Processed Panaxanadiol Saponin Fraction

인삼 1kg을 메탄올 200㎖로 추출하여 메탄올 추출물을 얻고 메탄올을 증발시켜 제거한 후에 남은 잔사를 물 100㎖에 현탁시켜 에테르 100㎖씩으로 3회 추출하였다. 남은수층을 에틸아세테이트 : 부탄올=10 : 1 혼합용매로 3회 추출하고, 남은 수층을 다시 부탄올 100㎖로 3회 추출하여 파낙사디올계 사포닌 분획을 얻었다. 이 파낙사디올계 사포닌 분획을 실시예 1 에서와 동일한 방법으로 130℃에서 3시간 동안 가열처리하여 가공 파낙사디올계 사포닌 분획 약 40g을 수득하였다.1 kg of ginseng was extracted with 200 ml of methanol to obtain a methanol extract, and methanol was evaporated and removed. The remaining residue was suspended in 100 ml of water and extracted three times with 100 ml of ether. The remaining aqueous layer was extracted three times with ethyl acetate: butanol = 10: 1 mixed solvent, and the remaining aqueous layer was extracted three times with 100 ml of butanol again to obtain a panaxadiol-based saponin fraction. This panaxanadiol-based saponin fraction was heat-treated at 130 ° C. for 3 hours in the same manner as in Example 1 to obtain about 40 g of a processed panaxadiol-based saponin fraction.

[실시예 8]Example 8

진세노사이드 Rg3의 제조Preparation of Ginsenoside Rg 3

상기 실시예 3에서 수득한 진세노사이드 Rg3함유 분획 1g을 에틸아세테이트/메탄올/물(20:1:1)의 혼합용매를 용출제로 사용하여 실시예 1에서와 동일한 방법으로 실리카겔 컬럼상에서 크로마토그라피를 반복 수행하여 목적하는 진세노사이드 Rg3를 92% 함유하는 분획 500mg을 수득하였다. 수득된 진세노사이드 Rg3함유 분획을 메탄올 및 에틸아세테이트 혼합용매로부터 재결정화시켜 목적하는 진세노사이드 Rg3약 400mg을 수득하였다.1 g of the ginsenoside Rg 3- containing fraction obtained in Example 3 was chromatographed on a silica gel column in the same manner as in Example 1, using a mixed solvent of ethyl acetate / methanol / water (20: 1: 1) as the eluent. Was repeated to obtain 500 mg of the fraction containing 92% of the desired ginsenoside Rg 3 . The obtained ginsenoside Rg 3 containing fractions were recrystallized from methanol and ethyl acetate mixed solvent to obtain about 400 mg of the desired ginsenoside Rg 3 .

수득한 진세노사이드 Rg3는 문헌[참조: 일본약학잡지, 103(6), 612-622 (1983) 또는 약학회지 제35권 5호, 432-437 (1991)]에 공지된 것과 일치하는13C-NMR 스펙트럼 및 질량 스펙트럼을 나타낸다. 즉 수득한 진세노사이드 Rg3약 10mg을 피리딘-d5(99.5%) 600㎕에 용해시키고 탄소핵자기공명스펙트럼을 측정하면 특징적인 Rg3의 피크를 나타낸다. 또한 진세노사이드 Rg3의 질량 스펙트럼(FAB+)은 785([M+H]+)나 807([M+Na]+)의 분자이온 피크를 나타낸다.The obtained ginsenoside Rg 3 is 13 consistent with that known in Japanese Pharmaceutical Journal, 103 (6), 612-622 (1983) or Pharmacy Journal No. 35, No. 5, 432-437 (1991). C-NMR spectrum and mass spectrum are shown. That is, about 10 mg of the obtained ginsenoside Rg 3 was dissolved in 600 µl of pyridine-d 5 (99.5%), and the carbon nuclear magnetic resonance spectrum was measured to show a characteristic peak of Rg 3 . In addition, the mass spectrum (FAB +) of ginsenoside Rg 3 shows a molecular ion peak of 785 ([M + H] + ) or 807 ([M + Na] + ).

[실시예 9]Example 9

진세노사이드 Rg5의 제조Preparation of Ginsenoside Rg 5

상기 실시예 4에서 수득한 진세노사이드 Rg5함유 분획 1g에 대해 실시예 8에서와 동일하게 실시하여 Rg5를 약 90% 함유하는 분획 200mg 수득하였으며, 수득된 진세노사이드 Rg5함유 분획을 메탄올 및 에틸아세테이트 혼합용매로부터 재결정화시켜 목적하는 진세노사이드 Rg5약 150mg을 수득하였다.1 g of the ginsenoside Rg 5- containing fraction obtained in Example 4 was obtained in the same manner as in Example 8 to obtain 200 mg of the fraction containing about 90% of Rg 5 , and the obtained ginsenoside Rg 5 -containing fraction was methanol. And recrystallization from an ethyl acetate mixed solvent to obtain about 150 mg of the desired ginsenoside Rg 5 .

수득한 진세노사이드 Rg5는 다음과 같은 이화학적 특징을 나타낸다.The obtained ginsenoside Rg 5 has the following physicochemical characteristics.

MS(FAB+, m/z): 789([M+NA]+), 805([M+K]+)MS (FAB +, m / z): 789 ([M + NA] + ), 805 ([M + K] + )

13C-NMR (ppm, 피리딘-d5): δ 13.0, 16.0, 16.5, 16.6, 17.0, 17.8, 18.5, 25.8, 26.7, 27.0, 27.4, 28.1, 32.3, 32.6, 35.3, 37.0, 39.2, 39.7, 40.2, 50.5, 50.9, 51.2, 56.4, 62.6, 62.8, 71.4, 72.4, 72.6, 77.2, 77.9, 78.1, 78.3, 78.3, 83.5, 88.9, 105.2, 106.1, 123.5, 124.6, 131.2, 140.2 13 C-NMR (ppm, pyridine-d 5 ): δ 13.0, 16.0, 16.5, 16.6, 17.0, 17.8, 18.5, 25.8, 26.7, 27.0, 27.4, 28.1, 32.3, 32.6, 35.3, 37.0, 39.2, 39.7, 40.2, 50.5, 50.9, 51.2, 56.4, 62.6, 62.8, 71.4, 72.4, 72.6, 77.2, 77.9, 78.1, 78.3, 78.3, 83.5, 88.9, 105.2, 106.1, 123.5, 124.6, 131.2, 140.2

[실험예 1]Experimental Example 1

[진세노사이드 Rg3및 Rg5의 혈관이완작용]Vasorelaxation of Ginsenosides Rg 3 and Rg 5

혈관의 내피는 혈류 및 혈관의 긴장도를 조절하고 혈소판 응집을 억제하는 등 체내 항상성 유지에 매우 중요한 역할을 하고 있다. 특히 혈관의 내피는 EDRF(endothEndothelial vessels play a very important role in maintaining homeostasis, such as regulating blood flow and blood vessel tension and inhibiting platelet aggregation. In particular, the endothelium of blood vessels is called

elium-derived relaxing factor, 내피유리인자), 즉 일산화질소(NO)를 유리하며, 일산화질소는 혈관평활근에 작용하여 가용성 구아닐레이트 사이클라제를 활성화하며 조직내 사이클릭 GMP를 증가시켜 혈관을 이완시키는 것으로 알려져 있다. 고혈압, 고콜레스테롤혈증 등의 순환기계 질환에 의하여 내피의 기능이 손상되면 일산화질소의 유리가 감소되어 정상적인 혈관조절기능이 손실된다. 그러나 대부분의 사포닌 성분들은 내피세포까지 파괴하면서 혈관이완작용을 나타내므로 용혈이나 어독성등의 심각한 부작용을 나타내므로 바람직하지 못하였다. 따라서 내피에 대한 손상이 없이 혈관에 대해 이완작용을 나타내는 성분이 필요하다.elium-derived relaxing factor, or nitric oxide (NO), which acts on vascular smooth muscle to activate soluble guanylate cyclase and increase cyclic GMP in tissues to relax blood vessels It is known to make. When endothelial function is impaired by circulatory diseases such as hypertension and hypercholesterolemia, the release of nitric oxide is reduced and normal vascular control function is lost. However, most saponin components were not desirable because they showed serious side effects such as hemolysis or fish toxicity because they showed vascular relaxation while destroying endothelial cells. Therefore, there is a need for a component that exhibits a relaxing effect on blood vessels without damaging the endothelium.

본 발명자들은 진세노사이드 Rg3및 Rg5가 통상의 사포닌 성분과는 달리 강력한 내피의존성 혈관이완작용을 나타내는 것을 확인하였으며, 이하에서는 이를 실험적으로 입증한다.The present inventors confirmed that ginsenosides Rg 3 and Rg 5 exhibit potent endothelial-dependent vasorelaxation unlike conventional saponin components, which is demonstrated experimentally below.

1. 실험방법1. Experiment Method

300 내지 400g의 스프라그-도울리(Sprague-Dowley: SD) 랫트의 흉부 대동맥을 신속하게 적출하여 크렙스-링거-중탄산나트륨 용액(대조용액, NaCl 118.3; KCl 4.7; MgSO41.2; KH2PO41.2; CaCl22.5; NaHCO325; CaEDTA 0.016; 포도당 11.1 mM)에 옮겼다. 내부의 혈액과 혈관 주위의 지방 및 결합조직을 제거하고 약 2 내지 3mm 길이로 대동맥환을 만들어 pH 7.4인 대조용액이 채워진 25㎖ 장기 챔버에 수직으로 현수하였다. 일부의 대동맥환은 내부에 핀셋을 넣어 종이타올위에서 7 내지 8회 굴려서 내피세포를 제거한 혈관으로 사용하였다. 대동맥환의 하부는 장기챔버에 고정하고 상부는 등자를 통하여 등척성장력의 기록을 위해 트랜스듀서 커플러(transducer coupler)에 연결하였다.Rapid extraction of thoracic aorta from Sprague-Dowley (SD) rats of 300-400 g was performed with Krebs-Ringer-Sodium bicarbonate solution (Control, NaCl 118.3; KCl 4.7; MgSO 4 1.2; KH 2 PO 4). 1.2; CaCl 2 2.5; NaHCO 3 25; CaEDTA 0.016; glucose 11.1 mM). Fat and connective tissue around blood and blood vessels were removed, and aortic rings about 2 to 3 mm long were made and suspended vertically in a 25 ml organ chamber filled with a control solution of pH 7.4. Some aortic rings were used as blood vessels in which endothelial cells were removed by rolling tweezers 7-8 times on paper towels. The lower part of the aortic ring was fixed in the organ chamber and the upper part was connected to a transducer coupler for recording the isometric growth force through the stirrup.

장기챔버에 페닐에프린 10-6M을 가하여 안정된 수축을 나타내는 대동맥환에 진세노사이드 Rg3또는 Rg5의 디메틸설폭사이드 용액을 단독으로, 또는 매틸렌블루(MB) 10-6M 또는 L-니트로알기닌(L-NNA) 10-6M과 함께 가하여 혈관이완작용을 관찰하였다. 페닐에프린 10-6M에 의한 수축도를 100%로 하고 이것을 기준으로 진세노사이드 Rg3또는 Rg5에 의한 이완도를 % 로 나타내었다.Phenylephrine 10-6 M was added to the long-term chamber, and dimethylsulfoxide solution of ginsenoside Rg 3 or Rg 5 alone or methylene blue (MB) 10-6 M or L- was added to the aortic ring showing stable contraction. Nitroarginine (L-NNA) was added together with 10-6 M to observe vascular relaxation. Shrinkage by phenylephrine 10 -6 M was 100%, and the relaxation degree by ginsenoside Rg 3 or Rg 5 was expressed as% based on this.

2. 실험결과2. Experimental Results

제1도 및 4도에 도시된 바와 같이, 진세노사이드 Rg3및 Rg5는 각각 내피에 존재하는 혈관을 농도의존적으로 이완시켰다. 그러나 내피를 제거한 혈관에 대해서는 작용을 나타내지 않았고, 일산화질소 합성효소의 저해제인 L-니트로알기닌(L-NLA) 및 가용성 구아닐레이트 사이클라제 억제제인 메틸렌블루(MB)에 의해 진세노사이드 Rg3또는 Rg5의 혈관이완작용은 유의성있게 억제되었다.As shown in FIGS. 1 and 4, ginsenosides Rg 3 and Rg 5 relaxed concentration-dependently the blood vessels present in the endothelium, respectively. However, it showed no action on endothelial vessels and ginsenoside Rg 3 by L-nitroarginine (L-NLA), an inhibitor of nitric oxide synthase, and methylene blue (MB), a soluble guanylate cyclase inhibitor. Alternatively, vascular relaxation of Rg 5 was significantly inhibited.

이러한 결과로 부터 진세노사이드 Rg3및 Rg5는 내피세포가 있는 혈관에서만 혈관이완작용을 나타냄을 알 수 있었다. 따라서 진세노사이드 Rg3및 Rg5는 내피세포까지 파괴하는 다른 사포닌 성분과는 달리 용혈작용이나 어독성 등의 부작용을 나타내지 않는 안전한 의양성분임을 알 수 있었다.From these results, ginsenosides Rg 3 and Rg 5 showed a vascular relaxation only in the vessels with endothelial cells. Therefore, ginsenosides Rg 3 and Rg 5 was found to be a safe medicinal component that does not show side effects such as hemolytic action and fish toxicity, unlike other saponin components that destroy even endothelial cells.

[실험예 2]Experimental Example 2

[가공 사포닌 분획의 혈관이완작용][Vascular relaxation of processed saponin fraction]

1. 실험방법1. Experiment Method

전술한 실시예 7에서 수득한 가공 파낙사디올계 사포닌 분획에 대하여 실험예 1의 실험방법과 동일한 방법으로 혈관이완작용을 측정하였다.Vasorelaxiolation was measured in the same manner as in Experimental Example 1 with respect to the processed panaxadiol-based saponin fraction obtained in Example 7.

2. 실험결과2. Experimental Results

제2도에 도시된 바와 같이 가공 파낙사디올계 사포닌 분획은 내피가 존재하는 헐관을 농도의존적으로 이완시켰다. 그러나 내피를 제거한 혈관에 대해서는 작용을 나타태지 않았고 일산화질소 합성효소의 저해제인 L-니트로알기닌 및 가용성 구아닐레이트 사이클라제 억제제인 메틸렌블루에 의해 혈관이완작용은 유의성있게 억제되었다.As shown in FIG. 2, the processed panaxadiol-based saponin fraction relaxed concentration-dependently the hull tube in which the endothelium was present. However, it showed no effect on the endothelial vessels and vasorelaxation was significantly inhibited by L-nitroarginine, an inhibitor of nitric oxide synthase, and methylene blue, a soluble guanylate cyclase inhibitor.

이러한 결과로부터 실시예 7에서 수득된 가공 파낙사디올계 분획은 내피세포가 있는 혈관에서만 혈관이완작용을 나타냄을 알 수 있었다. 따라서 가공 파낙사디올계 분획은 내피세포까지 파괴하는 다른 사포닌 성분과는 달리 용혈작용이나 어독성 등의 부작용을 나타내지 않는 안전한 의약성분임을 알 수 있었다.From these results, it can be seen that the processed panaxanadiol fraction obtained in Example 7 exhibited vasorelaxation only in blood vessels with endothelial cells. Therefore, it was found that the processed panaxanadiol fraction is a safe pharmaceutical ingredient that does not exhibit side effects such as hemolysis or fish toxicity, unlike other saponin components that destroy even endothelial cells.

[실험예 3]Experimental Example 3

[진세노사이드 Rg3의 세포독성 실험][Cytotoxicity Test of Ginsenoside Rg 3 ]

1. 실험방법 :1. Experimental method:

M199 배지에서 배양한 HUVEC(사람의 제대정맥 내피세포)을 세포 20000개/180㎕의 농도가 되도록 생리식염수에 현탁시켜 세포현탁액을 만들어 96-웰 플레이트에웰당 180㎕씩 가하고 용매인 디메틸설폭사이드와 디메틸설폭사이드에 용해된 Rg3를 20㎕씩 가한 다음, 37℃, 5% 이산화탄소의 세포배양기에서 48시간 동안 배양하였다. 이어서 인산염완충액에 용해시킨 MTT[3-(4,5-dimethyl-thiazol-2'-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] 용액(2mg/㎖을 50㎕씩 가하고 다시 4시간 동안 상기와 동일한 조건하에서 배양한 후, 상등액을 제거하고 디메틸설폭사이드를 200㎕ 가하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다. 흡광도값을 세포수로 환산하여 용매인 디메틸설폭사이드이 경우와 Rg3의 경우에 세포성장을 50% 억제시키는 농도인 IC50값을 구하여 세포독성의 지표로 하였다.HUVEC (human umbilical vein endothelial cells) cultured in M199 medium was suspended in physiological saline to a concentration of 20000 cells / 180 μl to make a cell suspension, and 180 μl per well was added to a 96-well plate and solvent dimethyl sulfoxide and 20 μl of Rg 3 dissolved in dimethyl sulfoxide was added thereto, followed by incubation for 48 hours in a cell incubator at 37 ° C. and 5% carbon dioxide. Subsequently, 50 µl of 2 mg / ml of MTT [3- (4,5-dimethyl-thiazol-2'-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide] solution dissolved in a phosphate buffer solution was added thereto, followed by the same conditions for 4 hours. After culturing under supernatant, the supernatant was removed, and 200 µl of dimethyl sulfoxide was added to measure absorbance at 540 nm, and the absorbance value was converted into cell number to inhibit cell growth by 50% in the case of solvent dimethyl sulfoxide and Rg 3 . The IC 50 value, a concentration, was determined and used as an indicator of cytotoxicity.

2. 실험결과 :2. Experimental results:

디메틸설폭사이드의 경우(대조군)는 0.6%부터 세포독성을 보이기 시작하여 6%에서는 100% 세포성장을 억제하여 용량-반응성을 보였으며, IC50은 18.4㎕/㎖ 이었고, Rg3는 1 내지 100㎍/㎖ 농도 범위에서 디메틸설폭사이드와 같은 양상을 보였으며, IC50은 26.7㎍/㎖로서, 오히려 약간 놓은 값을 보여 세포독성이 적은 경향을 나타냈다. 즉 Rg3투여군은 대조군보다 세포의 생존율이 더 높아 오히려 세포성장 촉진효과가 있는 것으로 나타났다 (제3도).In the case of dimethyl sulfoxide (control), it began to show cytotoxicity from 0.6% and showed dose-response by inhibiting 100% cell growth in 6%, IC 50 was 18.4 μl / ml, and Rg 3 was 1 to 100 In the concentration range of ㎍ / ㎖ showed the same pattern as dimethyl sulfoxide, IC 50 was 26.7 ㎍ / ㎖, rather slightly placed value showed a tendency to be less cytotoxic. That is, the Rg 3 administration group showed higher cell survival rate than the control group, and rather, had a cell growth promoting effect (FIG. 3).

[실험예 4]Experimental Example 4

[진세노사이드 Rg5의 세포독성 실험][Cytotoxicity Test of Ginsenoside Rg 5 ]

1. 실험방법 :1. Experimental method:

M199 배지에서 배양한 HUVEC(사람의 제대정맥 내피세포)을 세포 20000개/180㎕의 농도가 되도록 생리식염수에 현탁시켜 세포현탁액을 만들어 96-웰 플레이트에웰당 180㎕씩 가하고 용매인 정제수와 정제수에 용해된 Rg5를 20㎕씩 가한 다음, 37℃, 5% 이산화탄소의 세포배양기에서 48시간 동안 배양하였다. 이어서 인삼염완충액에 용해시킨 MTT[3-(4,5dimethyl- thiazol-2'-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] 용액(2mg/㎖)을 50㎕씩 가하고 다시 4시간 동안 상기와 동일한 조건하에서 배양한 후, 상등액을 제거하고 디메틸설폭사이드를 200㎕가하여 540nm에서 흡광도를 측정하였다.HUVEC (human umbilical vein endothelial cells) cultured in M199 medium was suspended in physiological saline to a concentration of 20000 cells / 180 μl to make a cell suspension, and 180 μl per well was added to a 96-well plate and purified water and purified water as solvents. 20 μl of lysed Rg 5 was added, followed by incubation for 48 hours in a cell incubator at 37 ° C. and 5% carbon dioxide. Subsequently, 50 µl of MTT [3- (4,5dimethylthiazol-2'-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide] solution (2 mg / ml) dissolved in ginseng salt buffer solution was added thereto, followed by the same conditions for 4 hours. After culturing under the supernatant, the supernatant was removed, and 200 µl of dimethyl sulfoxide was added, and the absorbance was measured at 540 nm.

2. 실험결과 :2. Experimental results:

제5도에 나타낸 바와 같이, 진세노사이드 Rg5투여군은 비록 통계적인 유의성은 없었으나 대조군에 비하여 세포성장이 더욱 활발하였다. 따라서, 진세노사이드 Rg5는 세포에 대한 독성이 없음을 알 수 있었다.As shown in FIG. 5, the ginsenoside Rg 5 administration group showed more active cell growth than the control group, although there was no statistical significance. Thus, ginsenoside Rg 5 was found to be non-toxic to cells.

[조성물예][Composition]

이하에서, 활성성분으로 사용된 Rg3는 Rg5, Rg3및 Rg5에 의해 대체될 수 있고, Rg3를 함유하는 분획은 Rg5, Rg3및 Rg5를 함유하는 분획에 의해 대체될 수 있다.In the following, the Rg 3 used as active ingredient is Rg 5, Rg 3 and may be replaced by an Rg 5, fraction containing Rg 3 can be replaced by a fraction containing Rg 5, Rg 3 and Rg 5 have.

[조성예 1][Composition Example 1]

계 100g100 g in total

상기한 처방에 따라 각 성분을 균일하게 혼합한 다음 타정기에서 압축 성형하여 1정 500mg의 정제를 제조하였다. 이 정제 1정에는 실시예 1에서 수득한 분획 50mg이 함유되어 있다. 성인 1일 3 내지 10정을 수회에 나누어 복용한다.According to the prescription described above, each component was uniformly mixed and then compression-molded in a tableting machine to prepare a tablet of 500 mg. This tablet contains 50 mg of the fraction obtained in Example 1. Adults take 3 to 10 tablets several times a day.

[조성예 2][Composition Example 2]

상기한 처방에 따라 결정성 셀룰로오즈, 10% 하이드록시프로필셀룰로오즈 에탄올용액 및 실시예 5에서 수득한 분획을 유일하게 혼합하여 통상의 방법에 따라 조립기를 이용하여 건조시키고 분쇄한 후 카르복시메틸셀룰로오즈칼슘 및 마그네슘스테아레이트를 혼합하여 타정기에서 압축 성형하여 1정 500mg의 정제를 제조하였다. 이 정제1정에는 실시예 5에서 수득한 분획 50mg이 함유되어 있다. 성인 1일 3 내지 10정을 수회에 나누어 복용한다.Crystalline cellulose, 10% hydroxypropyl cellulose ethanol solution and the fractions obtained in Example 5 were uniquely mixed and dried and pulverized using a granulator according to a conventional method, followed by carboxymethyl cellulose calcium and magnesium according to the above-described prescription. Stearates were mixed and compression molded in a tablet press to prepare 500 mg of tablets. This tablet contains 50 mg of the fraction obtained in Example 5. Adults take 3 to 10 tablets several times a day.

[조성예 3][Composition Example 3]

상기 처방에 따라 실시예 8에서 수득한 Rg3를 에탄올 및 대두인지질에 융해시키고, 여기에 주사용 증류수와 글리세린의 용액을 가하여 유화시켜 주사제를 제조하였다.Rg 3 obtained in Example 8 was dissolved in ethanol and soy phospholipid according to the prescription, and an injection was prepared by emulsifying by adding distilled water for injection and a solution of glycerin.

[조성예 4][Composition Example 4]

염산 피리독신 300mg Pyridoxine Hydrochloride 300mg

니코틴산아미드 1g 1 g nicotinic acid amide

칼슘판토테네이트 1g Calcium Pantothenate 1g

리보플라빈 200mg Riboflavin 200mg

시트르산 30g 30 g citric acid

실시예 1에서 수득한 분획 20g 20 g of fraction obtained in Example 1

음양곽 엑기스 200mg Yin Yang Extract 200mg

물을 가하여 총 10ℓ로 한다. Add water to make total 10ℓ.

상기 처방에 따라 성분내지에 용해시켜 액제를 제조하였다. 이 액제 100㎖는 실시예 1에서 얻은 분획 200mg을 함유한다.Ingredients according to the above prescription To of It was dissolved in to prepare a liquid. 100 ml of this liquid contains 200 mg of the fraction obtained in Example 1.

[조성예 5][Composition Example 5]

상기한 처방에 따라 모든 성분들을 균일하게 혼합하여 통상의 방법에 따라 조립기를 이용하여 조립하고 충전기에 충전하여 캅셀당 500mg의 캅셀제를 제조하였다. 이 캅셀제 1캅셀에는 Rg350mg이 함유되어 있다. 성인 1일 3 내지 10캅셀을 수회에 나누어 복용한다.According to the prescription described above, all the ingredients were uniformly mixed, assembled using a granulator according to a conventional method, and filled in a charger to prepare 500 mg of capsules per capsule. One capsule of this capsule contains 50 mg of Rg 3 . Adults take 3 to 10 capsules several times a day.

Claims (6)

활성성분으로서 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5를 함유하는 혈관이완제 조성물.A vasodilator composition comprising ginsenosides Rg 3 and / or Rg 5 as active ingredients. 제1항에 있어서, 활성성분인 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5가 순수한 Rg3및/또는 Rg5임을 특징으로 하는 혈관이완제 조성물.The vasodilator composition according to claim 1, wherein the active ginsenosides Rg 3 and / or Rg 5 are pure Rg 3 and / or Rg 5 . 제1항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 단위투여형으로 제형화됨을 특징으로 하는 혈관이완제 조성물.The vasodilator composition according to claim 1, which is formulated in a unit dosage form with a pharmaceutically acceptable carrier. 제3항에 있어서, 단위투여형 약제학적 제형이 정제, 경질 또는 연질캅셀제, 과립제, 액제, 현탁제, 주사용 용액 또는 현탁액임을 특징으로 하는 혈관이완제 조성물.4. The vasodilator composition according to claim 3, wherein the unit dosage form is a tablet, hard or soft capsule, granule, liquid, suspension, injectable solution or suspension. 제4항에 있어서, 단위투여형이 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5를 10 내지 500mg 함유하도록 제형화됨을 특징으로 하는 혈관이완제 조성물.The vasodilator composition according to claim 4, wherein the unit dosage form is formulated to contain 10 to 500 mg of ginsenosides Rg 3 and / or Rg 5 . 제1항에 있어서, 활성성분인 진세노사이드 Rg3및/또는 Rg5가 Rg3및/또는 Rg5를 10% 이상 함유하는 인삼 추출물임을 특징으로 하는 혈관이완제 조성물.The vasodilator composition according to claim 1, wherein the active ginsenosides Rg 3 and / or Rg 5 are ginseng extracts containing at least 10% of Rg 3 and / or Rg 5 .
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