KR100199314B1

KR100199314B1 - 방사선 방호제로 유용한 폴리아민 페놀

Info

Publication number: KR100199314B1
Application number: KR1019920000637A
Authority: KR
Inventors: 엘. 에드워즈 마이클; 디. 스나이더 로널드
Original assignee: 슈테펜엘.네스비트; 메렐 다우 파마슈티칼스 인크.
Priority date: 1991-01-17
Filing date: 1992-01-17
Publication date: 1999-06-15
Also published as: HU9200152D0; IL100687A; ES2077880T3; HUT62255A; NO178495C; EP0495450B1; PT100026A; IE920133A1; JPH04334354A; AU1014492A; EP0495450A2; NZ241294A; NO920206D0; AU647569B2; JP3173667B2; FI920186A0; ATE125528T1; EP0495450A3; IE66986B1; NO920206L

Abstract

본 발명은 방사선 방호제로서 유용한 특정 폴리아민 페놀에 관한 것이다.

Description

방사선 방호제로 유용한 폴리아민 페놀

본원 발명은 1991년 1월 17일자로 출원된 미합중국 특허 출원 번호 제07/642,599호의 일부 계속 출원이다.

방사선 방호제는 세포 또는 기관을 전리성 방사선 노출의 유해한 세포 효과로부터 방호하는 물질로서 정의된다. 이러한 유해한 세포 효과에는 DNA 가닥 절단과 같은 세포 DNA의 손상, 세포 기능의 장애, 세포사, 종양 유도화 등이 포함된다. 방호 효과의 기작은 적어도 부분적으로 방사선 방호제의 근치적 배제(radical scavenging) 성질에 기인된 것이다.

이들 물질의 암 방사선 요법 뿐만 아니라 환경 방사선 노출에 대한 방호에 있어서의 잠재적 용도는 이미 오래전에 인식되어져 있었다. 이들 물질은 노출 전 또는 도중에 투여되어 핵폭발, 방사성 물질, 방사성 유사 물질의 유출결과로 환경 전리성 방사선에 노출되어 유발된 유해한 세포 효과의 심각성을 제거하거나 경감시킨다.

게다가, 이들 물질은 암 방사선 요법동안 암 세포가 아닌 정상 세포를 선택적으로 방호하는 것으로 생각된다. 예를 들어, 이들 물질은 방사선 요법 전 또는 도중에 부여되고 암세포가 아닌 정상 세포에 흡수되어 방호 효과를 제공한다. 그러나, 방사선 방호제는 종양과 관련하여 조악한 혈관분포 상태 때문에 종양 세포에 의해 동일한 양만큼 흡수되지 않는다. 따라서, 방사선 방호제는 종양 세포와 비교하여 정상 세포에 선택적 방호 효과를 제공하며 정상 세포에 대한 방사선 요법의 유해한 세포 효과의 심각성을 제거하거나 경감시킨다. 또한, 몇몇 방사선 방호제는 프로약제(prodrugs)로서 작용할 수 있으며 암 세포에서는 완전히 활성이 없는 세포 효소적 과정에 의한 활성화를 필요로 한다. 이들 물질은 정상 세포 및 암 세포에 유사한 농도로 흡수된다하더라도 암세포가 아닌 정상 효소적 과정을 갖는 세포에서만 활성화될 수 있다. 이들 프로약제 방사선 방호제는 활성화되어 정상 세포에만 선택적인 방호 효과를 제공하므로 정상 세포에 대한 방사선 요법의 유해한 세포 효과의 심각성을 제거하거나 경감시킨다.

또한, 특정 방사선 방호제는 시스플라틴, 시클로포스파미드, 디에틸너트로소아민, 벤조(자)피렌, 카르보플라틴, 독소루비신, 미토마이신-C 등과 같은 특정 DNA-반응성 물질에 의해 유발된 정상 세포내 유해한 세포 효과에 대한 선택적 방호를 제공한다. 이들 DNA-반응성 물질 중 다수가 암 치료에 유용한 화학 요법제이다, 방사선 방호제는 예를 들어, DNA-반응성 화학요법제를 사용한 암 치료시에 DNA-반응성 물질에 노출되어 유발된 정상 세포내 유해한 효과의 심각성을 제거하거나 경감시키는데 유용하다.

게다가, 특정 방사선 방호제는 연발성 종양(secondary tumor)유도화에 대한 선택적 방호를 제공한다(문헌[Grdina et at., Pharmac. Ther. 39, 21(1988)]참조). 방사선 요법 및 화학요법은 각종 신생물 질병에 유효한 치료법이다. 불행하게도, 이들 치료법 자체는 종종 변이 유발성 및/또는 발암성이어서 치료법-유도된 연발성 종양 유도화를 가져오게 된다. 예를 들어, 호지킨병을 치료받는 환자에게는 치료법-유도된 급성 골수성 백혈병 및 호지킨병이 아닌 임파종에 대한 위험성이 비교적 높은 것으로 나타났다. 방사선 방호제는 방사선 요법 또는 DNA-반응성 화학 요법제를 이용한 화학 요법에 의해 유발된 종양 유도화와 같은 유해한 세포 효과에 대한 선택적 방호를 제공한다. 따라서, 방사선 방호제는 방사선 요법 또는 화학 요법에 의한 연발성 종양 유도화의 위험성을 제거하거나 감소시키는데 유용하다.

그러므로, 방사선 방호제는 전리성 방사선 환경적 노출, 암 방사선 요법 및 DNA-반응성 화학 요법제를 이용한 치료법에 의해 유발된 정상 세포내 유해한 세포 효과의 심각성을 제거하거나 경감시키는데 유용하다 (문헌[Weiss and Simic, Pharmac. Ther. 39, 1 (1988)] 참조).

월터 리이드 국방 연구소(Walter Reed Army Institute of Research)의 항방사선 약제 개발 프로그램에 의해 개발된 표준 방사선 방호제는 하기 구조를 갖는 WR-2721 또는 S-2(3-아al노프로필아미노)에틸포스포로티오산이다.

기타 공지된 방사선 방호제는 하기 구조를 갖는 WR-2721의 대사 산물로 사료되는 WR-1065

및 하기 구조를 갖는 WR-151,327

이다.

본 발명은 하기 일반식 (1)의 신규한 방사선 방호제를 제공한다.

식중,

R₁및 R₂는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬기이고,

n은 0 내지 3의 정수이며,

Z는 C₂-C₆알킬렌기이고,

m은 4 내지 9의 정수이다.

또한, 본 발명은 하기 일반식(2)의 신규한 방사선 방호제를 제공한다.

식중, R₁및 R₂는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬기이고,

n은 0 내지 3의 정수이며,

Z는 C₂-C₆알킬렌기이다.

또한, 본 발명은 포유동물 세포를 방호량의 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물과 접촉시키는 것으로 이루어진, 전리성 방사선 또는 DNA-반응성 물질에 노출되어 유발된 유해한 세포 효과로부터 포유 동물 세포를 방호하는 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 인간에게 방호량의 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물을 투여하는 것으로 이루어진, 전리성 방사선 또는 DNA-반응성 물질에 노출되어 유발된 유해한 세포 효과로부터 인간의 암세포가 아닌 세포를 방호하는 방법을 제공한다.

나아가, 본 발명은 방사선 요법을 필요로 하는 환자, 또는 DNA-반응성 화학 요법제틀 사용한 화학 요법을 필요로 하는 환자에게 방호량의 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물을 부여하는 것으로 이루어진 상기 환자의 치료 방법을 제공한다.

여기에 사용되는 다음 용어들은 하기 의미를 갖는다: (1) 용어 C₁-C₆알킬은 탄소 원자수 1 내지 6의 포화 직쇄 또는 분지쇄 히드로카르빌 라디칼을 말하고, 여기에는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, n-헥실 등이 포함되며, (2) 용어 C₂-C₆알킬렌은 직쇄 배위의 탄소 원자수 2 내지 6의 포화 히드로카르빌렌 라디칼을 말하고, 여기에는 구체적으로 라디칼 -CH₂CH₂-, -CH₂CH₂CH₂-, -CH₂(CH₂)₂CH₂-, CH₂(CH₂)₃CH₂-, -CH₂(CH₂)₄CH₂-가 포함되며 ; (3) 용어 할로 또는 용어 Hal은 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 말하고; (4) 용어 Ts는 하기 식의 토실레이트 관능기틀 말하며

(5) 용어 BOC는 하기 식의 t-부틸옥시카르보닐 관능기를 말한다.

n=1인 일반식 (1)의 화합물은 당업자에게 주지되어 있고 평가되어 있는 방법 및 기술을 이용함으로써 제조될 수 있다. 이들 화합물의 일반적 합성 도식은 달리 표시되지 않는 한 모든 치환체가 이미 정의되어 있는 도식 A에 나타나있다.

도식 A는 n=1인 일반식 (1)의 화합물을 제조하기 위한 일반적 합성 도식을 제공한다.

단계 (a)에서는, N-(t-부틸옥시카르보닐)-N-[(4-메틸페닐)설폰아미드] (1')를 구조 (2')의 적절한 할로알칸올로써 알킬화하여 구조 (3)의 적절한 N-(t-부틸옥시카르보닐)-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-할로알킬아민을 얻는다.

예를 들어, N-(t-부틸옥시카르보닐 )-N-[(4-메틸페닐 )설폰아미드] (1')을 등몰량의 트리페닐포스핀, 등몰량의 구조 (2')의 적절한 할로알칸올 및 등몰량의 디에틸 아조디카르복실레이트와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 테트라히트로푸란과 같은 적당한 유기 용매 중에서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 실온에서 2 내지 24시간 동안 함께 교반한다. 구조 (3)의 N-(t-부틸옥시카르보닐)-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-할로알킬아민을 용매를 증발시킴으로써 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (b)에서는, 구조 (3)의 적절한 N-(t-부틸옥시카르보닐)-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-할로알킬아민의 알킬 할라이드 관능기를 구조 (4)의 적절한 비스[(4-메틸페닐)설포닐]-디아자알킬으로써 아민화하여 구조 (5)의 적절한 비스(t-부틸옥시카르보닐)-테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-테트라아자알칸을 얻는다.

예를 들어, 구조 (4)의 적절한 비스[(4-메틸페닐)설포닐]-디아자알칸을 2몰 양의 수소화나트륨과 같은 비친핵성 염기와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 디메틸포름아미드와 같 적당한 유기 용매중에서 접촉시킨다. 반응물 대표적으로 0℃ 내지 실온의 온도 범위에서 수소 만출이 정지할 때까지 함께 교반한다. 이어서, 구조 (3)의 적절한 N-(t-부틸옥시카르보닐)-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-할로알킬아민을 반응 혼합물에 가한다. 반응물을 대표적으로는 0℃ 내지 50℃의 온도 범위에서 2 내지 24시간동안 함께 교반한다. 구조 (5)의 비스(t-부틸옥시카르보닐)-테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-테트라아자알칸을 당분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (C)에서는, 구조 (5)의 적절한 비스(t-부틸옥시카르보닐)-테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-테트라아자알칸의 t-부틸옥시카르보닐 관능기를 가수분해시켜서 구조 (6)의 적절한 테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-테트라아자알칸을 얻는다.

예를 들어, 구조 (5)의 적절한 비스(t-부틸옥시카르보닐)-테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-테트라아자알칸을 염산과 같은 몰과량의 산과 접촉시진다. 반응물을 대표적으로는 메탄올과 같은 적당한 양성자성 유기 용매중매서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 0℃ 내지 실온의 온도 범위에서 2 내지 24시간동안 함께 교반한다. 구조 (6)의 테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-테트라아자알칸을 당분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로 부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (d)에서는, 구조 (6)의 적절한 테트라[(4-메틸페닐)설포닐)-테트라아자알칸의 설폰아미드 관능기틀 절단하여 구조 (7)의 적절한 테트라아자알칸을 얻는다.

예를 들어, 구조 (6)의 적절한 테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-테트라아자알칸을 액체 암모니아 중에서 몰과량의 나트륨과 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 -40℃ 내지 -20℃의 온도에서 1 내지 10시간 동안 함께 교반한다. 구조 (7)의 테트라아자알칸을 암모니아를 증발시켜서 반응 대역으로부터 회수한다, 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (e)에서는, 구조 (7)의 적절한 테트라아자알칸의 아미노 말단 관능기를 구조 (8)의 적절한 4-히드록시벤즈알데히드로써 환원적으로 알킬화시켜서 구조 (9)의 적절한 비스[(4-히드록시페닐)메틸]-테트라아자알칸을 얻는다.

예를 들어, 구조 (7)의 적절한 테트라아자알칸을 2몰 양의 구조(8)의 적절한 4-히드록시벤즈알데히드, 몰과량의 시아노수소화 붕소나트륨 및 촉매량의 브로크레졸 그린과 같은 산-염기 지시약과 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 에탄올과 같은 적당한 양성자성 유기 용매중에서 접촉시킨다. 황색으로 나타나는 약간 산성인 매질을 유지하도록 염산과 같은 적당한 산을 가하면서 반응물을 대표적으로는 함께 교반한다. 반응물을 대표적으로는 실온에서 황색을 유지하는데 필요한 시간동안 함께 교반한다, 구조 (9)의 비스[(4-히드록시페닐)메틸]-테트라아자알칸을 당분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로부터 회수한다.

구조 (9)의 비스[(4-히드록시페닐)매틸]-테트라아자알칸을 4몰양의 디-t-부틸디카르보네이트를 사용하여 유리 아미노 관능기를 그의 대응 t-부틸옥시카르복사미드로 먼저 전환시킴으로써 정제시킨다.

반응물을 대표적으로는 디옥산/수소화나트륨과 같은 혼화성 유기 용매/수정 염기 용매 혼합물 중에서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 실온에서 1 내지 10시간동안 함께 교반한다. 비스[(4-히드록시페닐)메틸]-비스(t-부틸옥시카르보닐)-테트라아자알칸을 당분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다. 이어서 정제된 비스[(4-히드록시페닐)메틸]-비스(t-부틸옥시카르보닐)-테트라아자알칸의 t-부틸카르복사미드 관능기를 메탄올성 염산으로 가수분해하여 구조 (9)의 정제된 비스[(4-히드록시페닐)메틸]-테트라아자알칸을 그의 테트라히드로클로라이드 염으로서 얻는다.

도식 A에 개략된 일반적 합성 방법에 사용하기 위한 출발 물질은 당업자에서 통상적인 것으로서 용이하게 입수가능한 것이다. 예를 들어, N-(t-부틸옥시카르보닐)-N-[(4-메틸페닐)설폰아미드]는 문헌[Tetrahedron Lett., 30, 5709-12 (1989)]에 기재되어 있다.

하기 실시예는 도식 A에 기재된 대표적인 합성을 나타낸다. 이 실시예는 본 발명의 설명을 위한 것이며 어떤 방식으로도 본 발명의 범주를 제한하려는 것이 아니다. 여기에 사용되는 용어와 그 의미는 다음과 같다 : g은 그램을 말하며, m㏖은 밀리몰을 말하고, ㎖은 밀리리터를 말하며, bp는 비점을 말하고, ℃는 섭씨 온도를 말하며, ㎜Hg는 수은의 밀리미터를 말하고, ㎕은 마이크로리터를 말하며, ㎍은 마이크로그램을 말하고, ㎛은 마이크로몰을 말한다.

[실시예 1]

1,19-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸1-1,6,14,19-테트라아자노나데칸, 테트라히드로클로라이드

단계 a : N-(t-부틸옥시카르보닐)-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-4-클로로부틸아민

무수 테트라히드로푸란(3㎖)에 N-(t-부틸옥시카르보닐)-N-[(4-메틸페닐)설폰아미드](88㎎, 0.322m㎖)을 용해시키고 트리페닐포스핀(84㎎, 0.322m㏖)을 가한다. 질소 분위기하에 교반하고 클로로-1-부탄올(34.9㎎, 0.322m㏖)에 이어 디에틸아조디카르복실레이트(0,050㎖, 0.322m㏖)을 가한다. 실온에서 수시간동안 교반하고 진공 중에서 용매를 증발시킨다. 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜서 표제 화합물을 얻는다.

단계 b : 1,19-비스(t-부틸옥시카르보닐)-1,6,14,19-테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-1,6,14,19-테트라아자노나데칸

피리딘(50㎖)에 1,9-디아자노난(13g, 0.1㏖)을 용해시키고 0℃로 냉각시킨다. p-톨루엔설포닐 클로라이드(41.9g, 0.22㏖)을 나누어 가하고 밤새 교반한다. 클로로포름으로 추출하고, 물, 5% 염산, 물로 세척하고 (MgSO₄로) 건조시킨다. 용매를 진공중에서 증발시키고 실러카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜서 1,9-비스[(4-메틸페닐)설포닐]-1,9-디아자노난을 얻는다.

무수 디메틸포름아미드(100㎖)에 수소화나트륨(4,8g, 0.2㏖)을 현탁시키고 0℃로 냉각시키고 질소 분위기하에 놓는다. 디메틸포름아미드중의 1,9-비스[(4-메틸페닐)설포닐]-1,9-디아자노난(43,8g, 0.1㏖)의 용액을 적가한다, 수소 만출이 정지한 때까지 교반한다. 디메틸포름아미드(100㎖)중의 N-(t-부틸옥시카르보닐)-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-4-클로로부틸아민(72,4g, 0.2㏖)의 용액을 적가한다. 실온에서 밤새 교반한 후 포화 염화 암모늄으로 조심스럽게 급냉시킨다. 에틸 아세테이트로 추출하고 (MgSO₄로)건조시키고 진공중에서 용매를 증발시킨다. 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜서 표제 화합물을 얻는다.

단계 c : 1,6,14,19-테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-1,6,14,19-테트라아자노나데칸

포화 메틸렌성 염산(100㎖)에 1,19-비스(t-부틸옥시카르보닐)-1,6,14,19-테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-1,5,14,19-테트라아자노나데칸(11.7g, 10m㏖)을 용해시킨다. 수시간 동안 교반하고 진공 중에서 용매를 증발시킨다. 잔류물을 물에 용해시키고 포화 탄산수소나트륨으로 중화시키고 에틸 아세테이트로 추출한다.(MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공중에서 증발시킨다. 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜서 표제 화합물을 얻는다.

단계 d : 1,6,14,19-테트라아자노나데칸

-40℃의 무수 액체 암모늄(25㎖)중에 1,6,14,19-테트라[(4-메틸페닐)설포닐]-1,6,14,19-테트라아자노나데칸(3.9g, 4m㏖)을 혼합한다. 영구히 청색을 유지할 때까지 작은 조각의 나트륨을 가한다. 포화 염화 암모늄을 사용하여 과량의 나트륨을 방출시킨다. 암모니아가 자발적으로 증발하도록 하고 잔류물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시킨다. 유기상을 분리하여 (MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공중에서 증발시킨다. 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻는다.

단계 e : 1,19-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)-메틸]-1,6,14,19-테트라아자노나데칸, 테트라히드로클로라이드

메탄올(Mg로부터 증류됨, 50㎖)에 1,6,14,19-테트라아자노나데칸(1,35g, 0.005㏖)을 용해시키고 3,5-디-t-부틸-4-히드록시벤즈알데히드(2.34g, 0.01㏖), 시아노수소화붕소나트륨(0.62g, 0.010㏖) 및 메탄올중의 1% 브로모크레졸 그린 1방울을 가한다. 메탄올중의 1N 염산을 사용하여 지시약이 더 이상 변화되지 않을 때까지 반응액의 pH틀 유지시킨다. 용매를 진공 중에서 증발시키고 잔류물을 1N 수산화나트륨(50㎖)과 에틸 아세테이트(100㏖) 사이에 분배시킨다.

유기층을 분리하고, (MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공중에서 증발시켜서 조 생성물을 얻는다.

50/50 디옥산/물(25㎖)에 조 1,19-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,6,14,19-테트라아자노나데칸(3,54g, 5m㏖)을 용해시키고, 1N 수산화나트륨을 사용하여 완충액의 pH를 10으로 만든다. 10℃에서 디-t-부틸 디카르보네이트(4,8g, 22m㏖)의 에테르 용액을 적가한다. 실온으로 승온시키고 완충액을 가끔 pH 10으로 유지시킨다. 시트르산 나트륨/시트르산 완충액을 사용하여 pH 5로 산성화시키고, 에테르로 추출하고(3회), (MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공중에서 증발시킨다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜서 1,19-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸1-1,6,14,19-테트라(t-부틸옥시카르보닐)-1,6,14,19-테트라아자노나데칸을 얻는다.

포화 메탄올성 염산(100㎖)에 1,19-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,6,14,19-테트라(t-부틸옥시카르보닐)-1,6,14,19-테트라아자노나데칸(10.8g, 10m㏖)을 용해시킨다. 수시간동안 교반하고 용매를 진공중에서 증발시켜서 표제 화합물을 얻는다.

하기 화합물은 실시에 1에 기재된 바와 유사하게 제조될 수 있다.

1,16-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,12,16-테트라아자헥사데칸, 테트라히드로클로라이드; 1,18-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,14,18-테트라아자옥타데칸, 테트라히드로클로라이드.

n=0,2 또는 3인 일반식 (1)의 화합물은 당분야에 공지되어 있고 통상 기술 중 하나로 평가되어 있는 방법 빛 기술을 이용함으로써 제조될 수 있다. 이들 화합물을 제조하기 위한 일반적 합성 도식을 다른 표시가 없는 한 모든 치환제가 이미 정의되어 있는 도식 B에 나타낸다.

도식 B는 n=0,2 또는 3인 일반식 (1)의 화합물을 제조하기 위한 일반적 합성 도식을 제공한다.

단계 (a)에서는, 구조 (10)의 적절한 (4-히드록시페닐)알킬아민의 질소 관능기를 알킬화하여 구조 (11)의 적절한 [(4-히드록시페닐) 알킬아미노]-알킬니트릴을 얻는다. 적절한 알킬화제는 니트릴 관능기를 함유한 것이다. 예를 들어, 일반식 (1)의 목적 화합물이 Z가 C₃알킬렌기를 나타내는 것일 경우, 적절한 알킬화제는 아크릴로니트릴 이다. 일반식 (1)의 목적 화합물이 Z가 C₂또는 C₄-C₆-알킬렌기를 나타내는 것일 경우, 적절한 알킬화제는 대응 할로알킬니트릴이다.

예를 들어, 구조 (10)의 적절한 (4-히드록시페닐)알킬아민을 몰과량의 적절한 알킬화제와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 에탄올과 같은 적당한 양성자성 유기 용매 중매서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 실온 내지 환류점의 온도 범위에서 5 내지 24시간 동안 함께 교반한다. 구조 (11)의 [(4-히드록시페닐)알킬아미노]-알킬니트릴을 용매를 증발시킴으로써 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 증류 또는 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (b)에서는, 구조. (11)의 적절한 [(4-히드록시페닐)알킬아미노]-알킬니트릴의 니트릴 관능기를 환원시켜 구조 (12)의 [(4-히드록시페닐)알킬]-디아자알칸을 얻는다.

예를 들어, 구조 (11)의 적절한 ((4-히드록시페닐)알킬아미노]-알킬니트릴을 몰과량의 수소화리튬알루미늄과 같은 환원제와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 에틸 에테르와 같은 적당한 유기 용매중에서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 실온에서 2 내지 24시간동안 함께 교반한다. 구조 (12)의 [(4-히드록시페닐)알킬]-디아자알칸을 당분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로부터 회수한다. 이것은 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다,

단계 (c)에서는, 구조 (12)의 적절한 [(4-히드록시페닐)알킬]-디아자알칸의 아미노 관능기를 t-부틸옥시카르보닐 유도체로서 보호시켜 구조 (13)의 대응 [(4-히드록시페닐)알킬]-비스(t-부틸옥시카르보닐)디아자알칸을 얻는다.

예를 들어, 구조 (12)의 적절한 [(4-히드록시페닐)알킬]-디아자알칸을 2몰 양의 디-t-부틸디카르보네이트와 같은 적절한 t-부틸옥시카르보닐화제와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 디옥산/수산화나트륨과 같은 혼화성 유기 용매/수성 염기 혼합물 중에서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 실온에서 1 내지 10시간동안 함께 교반한다. 구조 (13)의 [(4-히드록시페닐알킬]-비스(t-부틸옥시카르보닐)-디아자알칸을 당분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (d)에서는, 구조 (13)의 적절한 [(4-히드록시페닐)알킬]-비스(t-부틸옥시카르보닐)-디아자알칸의 t-부틸옥시카르바미드 말단 관능기를 구조 (14)의 적절한 디할로알칸으로써 알킬화시켜 구조 (15)의 비스[(4-히드록시페닐)알킬]-테트라(t-부틸옥시카르보닐)-테트라아자알칸을 얻는다.

예를 들어, 구조 (13)의 적절한 [(4-히드록시페닐)알킬]-비스(t-부틸옥시카르보닐)-디아자알칸을 2몰 양의 수소화나트륨과 같은 비친핵성 염기와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 디메틸포름아미드와 같은 적당한 유기 용매중매서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 8℃ 내지 실온의 온도 범위에서 수소의 반출이 정지할 때까지 함께 교반한다. 이어서 구조 (14)의 적절한 디할로알칸을 반응 혼합물에 가한다. 반응물을 대표적으로는 0℃ 내지 실온의 온도 범위에서 2 내지 24시간동안 함께 교반한다. 구조 (15)의 비스[(4-히드록시페닐)알킬]-테트라(t-부틸옥시카르보닐)-테트라아자알칸을 당분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (e)에서는, 도식 A 단계 (c)에 이미 기재된 바와 같이 구조 (15)의 적절한 비스[(4-히드록시페닐)알킬]-테트라(t-부틸옥시카르보닐)-테트라아자알칸의 t-부틸옥시카르복사미드 관능기를 가수분해하여 구조 (16)의 대응 비스[(4-히드록시페닐)알킬]-테트라아자알칸을 얻는다.

도식 B에 사용되는 출발 물질은 당업자에게 통상적인 것으로서 용이하게 입수가능한 것이다. 예를 들어, 2,6-디-t-부틸-4-아미노페놀은 문헌[Tetrahedron, 18, 61 (1962)]에 기재되어 있다.

하기 실시예는 도식 B에 기재된 대표적인 합성을 나타낸다. 이 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이며 어떤 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.

[실시예 2]

1,15-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)]-1,5,11,15,-테트라아자헵타데칸, 테트라히드로클로라이드

단계 a : 3N-[3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐]-3-아미노-프로피오니트릴

에탄올(700㎖)에 2,6-디-t-부틸-4-아미노페놀(41g, 0.185㎖) 및 아크릴로니트릴(11.7g, 0.22㏖)을 용해시키고 환류점에서 18시간동안 가열한다. 용매를 진공중에서 증발시키고 증류에 의해 정제시켜 표제 화합물을 얻는다.

단계 b : 1-[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)]-1,5-디아자펜탄

에테르(25㎖)에 수소화리튬알루미늄(2.1g, 0.054㏖)을 현탁시킨다. 에테르(250㎖)중의 염화알루미늄(7.3g, 0.054㏖)의 용액을 적가한다. 20분간 교반하고, 에테르(25㎖)중의 3N-[3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐]-3-아미노프로피오니트릴(14.7g, 0.054㏖)의 용액을 가한다. 주위 온도에서 18시간 동안 교반한다. 물(20㎖)및 30% 수성 수산화칼륨(100㎖)을 조심스럽게 가함으로써 환원제를 분해시킨다. 여과하고 용매를 진공 중에서 증발시키고 실러카 겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜서 표제 화합물을 얻는다.

단계 c : 1-[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)]-1,5-비스(t-부틸옥시카르보닐)-1,5-디아자펜탄

50/50 디옥산/물(25㎖)에 1-[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)-1,5-디아자펜탄(1.39g, 5m㏖)을 용해시키고, 1N 수산화나트륨을 사용하여 환충액의 pH를 10으로 만든다. 10℃에서 디-t-부틸디카르보네이트(2,4g, 11m㏖)의 에테르 용액을 적가한다. 실온으로 승온시키고 환충액을 가끔 pH 10으로 유지시킨다. 시트르산 나트륨/시트르산 완충액을 사용하여 pH 5로 산성화시키고, 에테르로 추출하고(3회), (MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공중에서 증발시킨다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜서 표제 화합물을 얻는다.

단계 d : 1,15-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)]-1,5,11,15-테트라(t-부틸옥시카르보닐)-1,5,11,15-테트라아자펜타데칸

무수 디메틸포름아미드(2㎖)에 수소화나트륨(48㎎, 2m㏖) 및 아니솔(215㎎, 2m㏖)을 현탁시키고, 0℃로 냉각시키고, 질소 분위기하에 놓는다. 디메틸포름아미드(2㎖) 중의 1-[(3.5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)]-1,5-비스(t-부틸옥시카르보닐)-1,5-디아자펜탄(0.91g, 4m㏖)의 용액을 적가한다. 수소 만출이 정지할 때까지 교반한다. 디메틸포름아미드(2㎖)중의 1,5-디브로모펜탄(230mg, 1m㏖)의 용액을 적가한다. 실온에서 밤새 교반한 후, 포화 염화 암모늄으로 조심스럽게 급랭시킨다. 에틸 아세테이트로 추출하고 (MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공중에서 증발시킨다. 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜 표제 화합물을 얻는다.

단계 e : 1,15-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)]-1,5,11,15-테트라아자펜타데칸, 테트라히드로클로라이드

포화 메탄올성 염산(100㎖)에 1,15-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)]-1,5,11,15-테트라(t-부틸옥시카르보닐)-1,5,11,15-테트라아자펜탄(10.24g, 10m㏖)을 용해시킨다. 수시간동안 교반하고 용매를 진공중에서 증발시켜서 표제 화합물을 얻는다.

하기 화합물은 실시예 2에 기재된 바와 유사하게 제조될 수 있다: 1,19-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)에틸]-1,6,14,19-테트라아자노나데칸, 테트라히드로클로라이드; 1,18-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)]-1,5,14,18-테트라아자옥타데칸, 테트라히드로클로라이드; 1,19-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)프로필]-1,6,14,19-테트라아자노나데칸, 테트라히드로클로라이드.

n=1,2 또는 3인 일반식 (2)의 화합물은 당업자에게 공지되어있고 통상 기술 중 하나로 평가되어 있는 방법 및 기술을 이용함으로써 제조될 수 있다. 이들 화합물을 제조하기 위한 일반적 합성 도식을 다른 표시가 없는 한 모든 치환체가 이미 정의되어 있는 도식 C에 나타낸다.

도식 C는 n=1,2 또는 3인 일반식 (2)의 화합물을 제조하기 위한 일반적 합성 도식을 제공한다.

단계 (a)에서는, 구조 (17)의 적절한 비스(히드록시알킬)-t-부틸카르복사미드를 미쓰노부(Mitsunobu) 조건하에 프탈이미드(18)과 반응시켜서 구조 (19)의 대응 비스[3-(1,3-디히드로-1,3-디옥소-2H-이소인돌-2-일)]-t-부틸옥시카르복사미드를 얻는다.

예를 들어, 구조 (17)의 비스(히드록시알킬)-t-부틸옥시카르복사미드를 2몰 양의 프탈이미드(18), 2몰 양의 트리페닐포스핀 및 2몰양의 디에틸 아조디카르복실레이트와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 테트라히드로푸란과 같은 적당한 유기 용매 중에서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 10분 내지 5시간 동안 함께 교반한다. 구조 (19)의 비스[3-(1,3-디히드로-1,3-디옥소-2H-이소인돌-2-일)]-t-부틸옥시카르복사미드틀 용매를 증발시킴으로써 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (b)에서는, 도식 A단계 (c)에 이미 기재된 바와 같이 구조 (19)의 적절한 비스[3-(1,3-디히드로-1,3-디옥소-2H-이소인돌-2-일]-t-부틸옥시카르복사미드의 t-부틸옥시카르보닐 관능기를 가수분해 하여 구조 (20)의 대응 비스[3-(1,3-디히드로-1,3-디옥소-2H-이소인돌-2-일)]아민을 얻는다.

단계 (c)에서는, 구조 (20)의 적절한 비스[3-(1,3-디히드로-1,3-디옥소-2H-이소인돌-2-일)]아민의 프탈이미드 관능기를 제거하여 구조 (21)의 대응 트리아자알칸을 얻는다.

예를 들어, 구조 (20)의 적절한 비스[3-(1,3-디히드로-1,3-디옥소-2H-이소인돌-2-일)]아민을 2몰 양의 히드라진과 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 메탄올과 같은 적당한 양성자성 유기 용매중에서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 환류 온도에서 2 내지 24시간동안 함께 교반한다. 구조 (21)의 트리아자알칸을 당분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (d)에서는, 도식 단계 (e)에 이미 기재된 바와 같이, 구조 (21)의 적절한 트리아자알칸의 아미노 말단 관능기를 구조 (22)의 적절한 페닐알킬알데히드로써 아민화시켜 구조 (23)의 적절한 비스[(페닐)알킬]-트리아자알칸을 얻는다.

도식 C에 사용되는 출발 물질은 당업자에게 통상적인 것으로서 용이하게 입수가능한 것이다.

하기 실시예는 트리아자알칸(21) 및 적절한 페닐알킬알데히드(22)가 시판이용가능한 도식 C에 기재된 대표적 합성을 나타낸다.

[실시예 3]

1,9-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,9-트리아자노난, 트리히드로클로라이드

단계 d : 1,9-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,9-트리아자노난, 트리히드로클로라이드

메탄올(Mg로 부터 증류됨, 200㎖)에 1,5,9-트리아자노난(2.6g, 0.02㏖)을 용해시킨다. 3,5-디-t-부틸-4-히드록시벤즈알데히드(18.8g, 0.08㏖), 시아노수소화붕소나트륨(0.5g, 0.08㏖) 및 메탄올중의 1% 브로모크레졸 그린 1방울을 가한다. 지시약이 청색에서 황색으로 변할 때까지 메탄올 중의 1N 염산을 가한다. 3,5-디-t-부틸-4-히드록시벤즈알데히드(10g, 0.04㏖) 및 시아노수소화 붕소나트륨(2.5g, 0.04㏖)을 부가적으로 가한다. 용매를 진공중에서 증발시킨다. 테트라히드로푸란(200㎖)을 가한다. 1N 수산화나트륨을 사용하여 용액을 염기성으로 만든다. 용액을 10℃로 냉각시키고 t-부틸 디카르보네이트(17.4g, 0.08㏖)의 에테르 용액을 적가한다.

혼합물을 실온으로 승온시키고 가를 완충액을 염기성으로 유지시킨다. 용매를 진공중에서 증발시킨다. 잔류물을 메틸렌클로라이드(200㎖)에 재용해시키고 1N HCl로 추출한다. 유기층을 분리하고 용매를 진공중에서 증발시키고 잔류물을 실리카 겔 컬럼크로마토그래피로써 정제시켜 1,9-비스[3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,9-트리(t-부틸옥시카르보닐)-1,5,9-트리아자노난을 얻는다. 수득량 (3.6g), C₅₁H₇₈N₃O₈·0.87C₇H₈에 대한 분석

이론치 C%=72.31, H%=9.77, N%=4.43;

실측치 C%=72.22, H%=9.92, N%=4.62

메탄올(50㎖)에 1,9-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,9-트리(t-부틸옥시카르보닐)-1,5,9-트리아자노난(3,6g, 4.1㏖)을 용해시킨다. 메탄올중의 염산 용액(50㎖, 1N)을 가한다. 수시간동안 교반한다. 이어서, 용매를 증발시켜 표제 화합뭍을 얻는다. 잔류물을 따뜻한 2-프로판올(150㏖)에 재용해시킨다. 생성물을 결정화한다. 고채를 분리한다. 결정화를 반복한다. 표제 생성물을 진공중에서 건조시킨다. 수득량 (1.6g). C₃₆H₆₁N3O₂·3HCl·0.75H₂O에 대한 분석

이론치 C%=62.59, H%=9.56, N%=6.08, Cl%=15.40, H₂O%=2.0;

실측치 C%=62.28, H%=9.62, N%=5.93, (마이크로 번호 910486).

분광분석 NMR, IR, MS, (91-0989).

하기 화합물은 실시예 3에 기재된 바와 유사하게 제조될 수 있다:

1,11-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)에틸]-1,6,11-트리아자운데칸, 트리히드로클로라이드;

1,9-비스[(3,6-디-t-부틸-4-히드록시페닐)프로틸]-1,5,9-트리아자노난, 트리히드로클로라이드.

n=0인 일반식 (2)의 화합물은 당업자에게 공지되어 있고 통상 기술 중 하나로 평가되어 있는 방법 빛 기술을 이용함으로써 제조될 수 있다. 이들 화합물을 제조하기 위한 일반적 합성 도식을 다른 표시가 없는 한 모든 치환체가 이미 정의되어 있는 도식 D에 나타낸다.

도식 D는 n=0인 일반식 (2)의 화합물을 제조하기 위한 일반적 합성 도식을 제공한다.

단계 (a)에서는, 구조 (24)의 적절한 페놀을 질산화시켜 구조(25)의 대응 4-히드륵시-니트로벤젠을 얻는다.

예를 들어, 구조 (24)의 적절한 페놀을 몰과량의 니트로늄 테트라플루오로보레이트와 같은 질산화재와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 메틸렌 클로라이드와 같은 적당한 유기 용매 중에서 접촉시킨다, 반응물을 대표적으로는 -60℃ 내지 10℃의 온도 범위에서 10 내지 50시간동안 함께 교반한다. 구조 (25)의 4-히드록시-니트로벤젠을 당분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (b)에서는, 구조(25)의 적절한 4-히드록시-니트로벤젠의 니트로 관능기를 환원시켜 구조(25)의 대응 4-히드록시-아닐린을 얻는다.

예를 들어, 구조 (25)의 적절한 4-히드록시-니트로벤젠을 촉매량의 10% 팔라듐/탄소와 같은 수소첨가반응 촉매와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 테트라히도로푸란/물과 같은 적당한 용매 혼합물 중에서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 35 내지 45 psi의 수소 압력하 실온에서 5 내지 24시간 동안 진탕시킨다. 구조 (26)의 4-히드록시-아닐린을 용매를 증발시킴으로써 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래퍼에 의해 정재할 수 있다.

단계 (c)에서는, 구조 (26)의 4-히드록시-아닐린의 아닐린 관능기를 구조 (27)의 대응 4-히드록시-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-아닐린으로 전환시킨다.

예를 들어, 구조 (26)의 적절한 4-히드록시-아닐린을 약간 몰과량의 P-톨루엔설포닐 클로라이드와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 우수 피리딘과 같은 유기 염기 중에서 접촉시킨다.

반응물을 대표적으로는 0℃ 내지 실온의 온도 범위에서 2 내지 24시간동안 함께 교반한다. 구조 (27)의 4-히드록시-N-[(4-메틸페닐)설포널]-아닐린을 당 분야에 공지된 추출법에 의해 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (d)에서는, 구조 (27)의 적절한 4-히드록시-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-아닐린을 구조(17)의 적절한 비스(히드록시알킬)-t-부틸카르복사미드로써 알킬화하여 구조 (28)의 적절한 비스[4-히드록시페닐]-비스[N-(4-메틸페닐)설포닐]-(t -부틸옥시카르보닐)-트리아자알칸을 얻는다.

예를 들어, 구조 (27)의 적절한 4-히드록시-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-아닐린을 몰과량의 트리페닐포스핀, 1/2몰 양의 구조 (17)의 적절한 비스(히드록시알킬)-t-부틸카르복사미드 및 몰과량의 디에틸 아조디카르복실레이트와 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 테트라히드로푸란과 같은 적당한 유기 용매 중에서 접촉시킨다. 반응물을 대표적으로는 실온에서 2 내지 24시간 동안 함께 교반한다. 구조 (28)의 비스[4-히드록시페닐]-비스[N-(4-메틸페닐)설포닐]-(t-부틸옥시카르보닐)-트리아자알칸을 용매를 증발시킴으로써 반응 대역으로부터 회수한다. 이것을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다.

단계 (e)에서는, 도식 A 단계(d)에 이미 기재된 바와 같이, 구조(211)의 적절한 비스[4-히드록시페닐)-비스[N-(4-메틸페닐)설포닐]-(t-부틸옥시카르보닐)-트리아자알칸의 설폰아미드 관능기틀 절단하여 구조 (25)의 적절한 비스[4-히드록시페닐]-(t-부틸옥시카르보닐)-트리아자알칸을 얻는다.

단계 (f)에서는, 도식 A 단재 (c)에 이미 기재된 바와 같이, 구조 (29)의 적절한 비스[4-히드록시페닐]-(t-부틸옥시카르보닐)트리아자알킨의 t-부틸옥시카르보닐 관능기를 가수분해하여 구조(30)의 적절한 비스[4-히드록시페닐]-트러아자알칸을 얻는다.

도식 D에 사용되는 출발 물질은 당업자에게 통상적인 것으로서 용이하게 입수가능한 것이다.

하기 실시에는 도식 D에 기재된 대표적인 합성을 나타낸다. 이 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 것이며 어떤 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.

[실시예 4]

1,9-비스[3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐]-1,5,9-트리아자노난, 트리히드로클로라이드

단계 a : 3,5-디-t-부틸-4-히드록시-니트로벤젠

메틸렌 클로라이드(10㎖)에 2,6-디-t-부틸페놀(721mg, 3.5m㏖)을 용해시키고 -60℃로 냉각시킨다. 메틸렌 클로라이드(15㎖) 중의 니트로늄 테트라플루오로보레이트(설포란 중의 0.5M 용액 25㎖, 12.5m㏖)의 용액을 적가한다. 서서히 10℃로 승온시키고 메틸렌 클로라이드(75㎖)와 물(75㎖)간에 분배시킨다. 수성상을 분리하고 메틸렌 클로라이드(50㎖)로 추출한다. 유기상을 혼합하고 (MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공중에서 증발시킨다. 플래쉬 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정재 및 분리하여 표제 화합물을 얻는다.

단계 b : 3,5-디-t-부틸-히드록시-아닐린, 히드로클로라이드

테트라히드로푸란(6㎖)에 3,5-디-t-부틸-4-히드록시-니트로벤젠(17.3㎎, 0.069m㏖)을 용해시킨다. 10% 팔라듐/탄소(20㎎) 및 물(3㎖)을 가한다. 45 psi 수소 압력하 실온에서 5시간 동안 진탕한다. 여과하고 여액을 IN 염산과 메틸렌 클로라이드 사이에 분배시킨다. 수성상을 분리하고 동결건조시켜서 표제 화합물을 얻는다.

단계 c : 3,5-디-부틸-4-히드록시-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-아닐린

무수 피리딘(25㎖)에 3,5-디-t-부틸-4-히드록시아닐린(2.21g, 10m㏖)을 용해시키고 5℃로 냉각시킨다. p-톨루엔설포닐 클로라이드(2.1g, 11m㏖)을 적가하고 밤새 교반한다. 물과 에틸아세테이트 사이에 분배시키고 유기상을 분리한다. 유기상을 냉 1N 염산, 포화 탄산수소나트륨 및 염수로써 세척한다. (MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공중에서 증발시켜 표제 화합물을 얻는다.

단계 d : 1,9-비스[3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐]-1,9-비스[N- (4-메틸페닐)설포닐]-5-(t-부틸옥시카르보닐)-1,5,9-트리아자노난

50/50 디옥산/물(25㎖)에 비스(3-히드록시프로필)아민(1.33g, 10m㏖)을 용해시키고, IN 수산화나트륨을 사용하여 완충액의 pH를 10으로 만든다. 10℃에서 t-부틸 아조디포르메이트(1.58g, 11lm㏖)의 에테르 용액을 적가한다. 실온으로 승온시키고 완충액을 가끔 pH 10으로 유지시킨다. 시트르산 나트륨/시트르산 완충액을 사용하여 pH 5로 산성화시키고, 에테르로 추출하고(3회), (MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공 중에서 증발시킨다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜서 비스(3-히드록시프로필)-t-부틸카르복사미드를 얻는다. 무수 테트라히드로푸란(3㎖)에 3,5-디-t-부틸-4-히드록시-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-아닐린(142㎎, 0.43m㏖)을 용해시키고 트리페닐포스핀(168㎎, 0.645m㏖)을 가한다. 질소 분위기 하에 교반하고 비스(3-히드록시프로필)-t-부틸카르복사 미드(83.6㎎, 0.215m㏖)에 이어 디에틸 아조디카르복실레이트(0.083㎖, 0.530m㏖)을 가한다. 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻는다.

단계 e : 1,9-비스[3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐]-5-(t-부틸옥시카르보닐)-1,5,9-트리아자노난

-40℃에서 무수 액체 암모니아(25㎖)에 1,9-비스[3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐]-1,9-비스[N-(4-메틸페닐)설포닐]-5-(t-부틸옥시 카르보닐)-1,5,9-트리아자노난 (946㎎, 1m㏖)을 혼합한다. 영구히 청색을 유지할 때까지 작은 조각의 나트륨을 가한다. 포화 염화 암모늄으로써 과량의 나트륨을 방출한다. 암모니아가 자발적으로 증발되도록 하고 잔류물을 에틸 아세테이트와 물 사이에 분배시킨다.

유기상을 분리하고 (MgSO₄로) 건조시키고 용매를 진공중에서 증발시킨다. 실라케 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻는다.

단계 f : 1,9-비스[3,5-디-T-부틸-4-히드록시페닐]-1,5,9-트리아자노난, 트리히드로클로라이드

포화 메탄올성 염산(100㎖)에 1,19-비스[3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐]-5-(t-부틸옥시카르보닐)-1,5,9-트리아자노난(6,39g, 10m㏖)을 용해시킨다. 수시간동안 표제 화합물을 얻는다.

하기 화합물은 실시에 4에 기재된 바와 유사하게 제조될 수 있다.

1,11-리스[3,5-t-부틸-4-히드록시페닐]-1,6,11-트리아자운데칸, 트리히드로클로라이드;

1,15-비스 [3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐]-1,8,15-트리아자운데칸, 트리히드로클로라이드.

본 발명은 전리성 방사선또는 DNA-반응성 물질에 노출되어 유발된 유해한 세포 효과로부터 세포를 방호하는 방법을 제공한다.

전리성 방사선은 X-선 또는 감마선과 같은 고 에너지 방사선이며 물질 중에 상호작용의 결과로 이온 쌍을 생성한다. 핵 폭발, 방사선 물질, 방사성 유사 물질의 유출 등의 결과와 같은 환경 방사선의 결과로서 전리성 방사선에 노출될 수 있다. 보다 일반적으로는, 각종 유형의 암을 치료하기 위한 방사선 요법과 같은 방사선 치료 과정의 결과로서 전리성 방사선에 노출될 수 있다.

DNA-반응성 물질은 알킬화제, 가교제 및 BNA 삽입제와 같은 물질이며, 특정 유해한 세포 효과를 유발시키는 세포 DNA와 공유적으로 또는 비공유적으로 상호작용한다. 예를 들어, NAA-반응성 물질에는 시스플라틴, 시클로포스파미드, 디에틸니트로소아민, 벤조(자)피렌, 카르보플라틴, 독소루비신, 미토마이신-C 등이 포함된다. DNA-반응성 물질 중 다수(예, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 독소루비신 및 미토마이신-C)는 암 치료시에 DNA-반응성 화학 요법제로서 유용하다.

전리성 방사선 또는 DNA-반응성 물질에 노출되어 유발된 유해한 세포 효과에는 DNA 가닥 절단과 같은 세포 DNA의 손상, DNA 기능의 장애와 같은 세포 기능의 장애, 세포사, 치료법-유도된 연발성 종양 유도화와 같은 종양 유도화가 포함된다. 이들 유해한 세포 효과는 연발성 종양, 골수 억압, 신장 손상, 말초 신경 손상, 위장관 손상 등을 야기시킬 수 있다. 예를 들어, 암 방사선 요법시 방사선에 노출시키는 것은 암 세포내에 세포사를 유발시키기 위한 것이다.

불행하게도, 치료법과 관련된 해로운 결과의 대부분은 암 세포에 대항하는 정상 세포에 대한 방사선의 유해한 세포 효과에 의해 유발된다.

본 발명은 상기 효과를 방지하거나 제거시킴으로써 또는 그의 심각성을 경감시킴으로써 유해한 세포 효과로부터 세포를 방호하는 방법을 제공한다. 본 발명에 있어서, 세포가 전리성 방사선 또는 DNA-반응정 물질에 노출되기 전 또는 노출되는 동안에 세포를 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물과 접촉시킨다. 예를 들어, 본 발명 화합뭍의 용액을 세포에 처리함으로써 또는 본 발명 화합물을 포유 동물에게 투여함으로써 세포를 직접적으로 접촉시킬 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 다르게는 노출에 의해 유발된 세포 효과의 심각성을 제거하거나 경감시켜 세포에 방호 효과를 제공한다.

보다 상세하게는, 본 발명은 포유동물의 전리성 방사선 또는 DNA-반응성 물질에 노출되어 유발된 유해한 세포 효과로부터 포유동물의 암세포가 아닌 정상세포를 방호하는 방법을 제공한다.

여기에 사용된 용어 포유동물은 생쥐, 쥐, 개 및 인간과 같은 온혈동물을 말한다. 본 발명의 화합물은 암 방사선 요법동안 및 DNA-반응성 물질을 사용한 화학 요법동안 암 세포가 아닌 정상 세포를 선택적으로 방호하는 것을 제공한다. 본 발명에 있어서, 본 발명의 화합물을 전리성 방사선 또는 DNA-반응성 물질에 노출되기 전 또는 노출되는 동안에 포유동물에게 투여한다. 본 발명은 포유 동물의 전리성 방사선 또는 DNA-반응성 물질에 노출되어 유발된 암세포가 아닌 세포에 대한 유해한 세포 효과를 심각성과 정도면에서 제거하거나 경감시키는 방법을 제공한다.

게다가, 본 발명은 방사선 요법 또는 DNA-반응성 화학요법제를 사용한 화학 요법을 필요로 하는 환자를 치료하는 방법을 제공한다. 여기서, 사용된 용어 환자는 방사선 요법 또는 DNA-반응성 화학요법제를 사용한 화학 요법을 필요로 하는 신생물 질병에 걸린 생쥐, 쥐, 개 및 인간을 포함한 포유동물을 말한다. 여기에 사용된 용어 신생물 질병은 세포 성장 또는 신생물을 신속히 증폭시키는 것으로 특징지위지는 비정상 상태를 말한다.

일반식 (1) 또는 (2)의 화합물을 방사선 요법 또는 DNA-반응성 화학 요법제를 사용한 화학요법과 결합하여 사용하는 것은 신생물 질병 치료에 특히 유용하다. 신생물질병에는 비제한적인 급성 암파아구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 임파구성 백혈병, 급성 골수아구성 백혈병 및 만성 골수구성 백혈병과 같은 백혈병; 비제한적인 경관암, 식도암, 위암, 췌장암, 유방암, 난소암, 소장암, 결장암 및 폐암과 같은 암; 비제한적인 골육종, 지방종, 지방육종, 혈관종 및 혈관육종과 같은 육종; 무흑색소성 흑종 빛 흑색소성 흑종과 같은 색소 세포종; 비제한적인 육종양암, 임파양 조직형 신형성, 포상망 신형성, 세포 육종, 호지킨병 및 호지킨 병이 아닌 임파종과 같은 혼합형 신형성이 포함된다. 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물을 방사선 요법 또는 화학요법과 결합시켜 사용하는 것은 호지킨병, 췌장암, 진보성 암, 유방암, 난소암, 결장암 등을 포함한 신생물 질병 치료에 특히 바람직하다.

게다가, 본 발명의 화합물을 사용한 치료법은 방사선 요법 또는 DNA-반응성 화학 요법제를 사용한 화학 요법에 의해 유발된 치료법-유도된 연발성 종양 유도화와 같은 유해한 세포 효과에 대해 선택적 방호를 제공한다. 따라서, 본 발명 화합물을 사용한 치료법은 호지킨병 치료용 방사선 요법 또는 화학 요법에 의해 유발된 치료법-유도된 급성 골수성 백혈병 및 호지킨병이 아닌 임파종과 같은 연발성 종양 유도화의 위험성을 제거하거나 감소시키는데 유용하다,

본 발명에 있어서, 방사선 요법 또는 DNA-반응성 물질을 사용한 화학 요법 전 또는 동안에 환자에게 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물을 투여하는 것은 환자의 암세포가 아닌 정상 세포에 선택적 방호를 제공한다. 따라서, 환자를 전리성 방사선 또는 DNA-반응성 화학 요법제를 사용하여 치료함으로써 유발된 암세포가 아닌 세포에 대한 유해한 세포 효과는 그의 심각성 또는 크기 면에서 제거되거나 감소된다.

일반식 (1) 또는 (2)의 화합물의 방호량은 포유동물 또는 환자에게 단일 투여 또는 다중 투여되어 전리성 방사선 또는 DNA-반응성 물질을 사용한 치료법 또는 노출에 의해 유발된 유해한 세포 효과를 그의 심각성 또는 크기 면에서 제거시키거나 감소시키는데 유효한 양을 말한다. 또한, 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물의 방호량은 단일 또는 다중 부여되어 전리성 방사선 노출 또는 DNA-반응성 물질에 노출됨으로써 유발된 유해한 세포 효과를 심각성 또는 크기면에서 제거시키거나 감소시키는데 유효한 양을 말한다.

포유동뭍 또는 환자에게 투여되는 방호량은 공지된 기술을 사용하여 유사한 환경하에 얻어진 결과를 관찰함으로써 당업자로서 소속 진단 전문의에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 방호량 또는 투여량을 결정할 때에는 비제한적인 포유 동물의 종; 그 크기, 연령 및 공중 보건; 연관된 특정 질병; 질병의 상태 또는 병발 또는 심각성; 각 환자의 반응; 투여되는 특정 화합물; 투여 방식; 투여된 제형의 생물학적 이용가능성; 선택되는 규정식이법: 공동 투약법 사용; 및 기타 관련 환경을 포함한 각종 요인을 고려해야 한다.

일반식 (1) 또는 (2)의 화합물은 전리성 방사선 또는 DNA-반응성 물질에 노출되기 전 및/또는 노출되는 동안에 단일 투여량 또는 다중 투여량으로 경구 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 발명 화합물이 방사선 요법과 결합되어 부여되는 경우, 본 발명 화합물은 방사선 요법동안 최대 선택적 방호 효과를 제공하도록 고안된 계획에 따라 방사선 요법 전에 단일 또는 다중 투여량으로 부여된다. 일반적으로, 본 발명 화합물이 DNA-반응성 화학 요법제와 함께 투여되는 경우, 본 발명 화합물은 화학 요법동안 최대 선택적 방호 효과를 제공하도록 고안된 계획에 따라 화학 요법 전과 동안에 단일 또는 다중 투여량으로 투여된다.

전리성 방사선 또는 DNA-반응성 물질에 노출될 때 최대 선택적 방호 효과를 제공하는데 필요한 본 발명 화합물에 대한 계획의 세부 사항은 공지된 기술을 이용하여 유사한 환경하에 얻어진 결과를 관찰함으로써 당업자로서 주치의에 의해 용이하게 절정될 수 있다.

포유 동뭍 또는 환자에게 투여되는 일반식 (1) 또는 (2)의 방호량은 약 5㎎/㎏체중/일(㎎/㎏/일) 내지 약 1000(㎎/㎏/일의 범위에서 변할 수 있다. 바람직한 양은 약 50 내지 약 500㎎/㎏/일이다.

세포에 접촉시키는 일반식 (1) 또는 (2)의 화합뭍의 방호량은 접촉시 약 100마이크로몰 내지 약 5밀리몰이다.

일반식 (1) 또는 (2)의 화합물은 경구 또는 비경구 경로를 포함하여 화합물을 유효량으로 생물학적으로 이용할 수 있는 임의의 제형 또는 방식으로 포유 동물 또는 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물은 경구, 피하, 근육내, 정맥내, 경피, 비내, 직장내 등으로 투여될 수 있다. 일반적으로 경구 투여가 바람직하다, 당 제형 제조업자는 선택된 화합물의 특이한 특성, 치료하고자 하는 질병, 질병 상태, 및 기타 관련 환경에 따라 적절한 제형 및 투여 방식을 용이하게 선택한 수 있다.

화합물은 단독으로 부여될 수 있고, 분량 및 성질이 선택된 화합물의 용해성 및 화학 륵성, 선택된 투여 경로 및 표준 제약 진료에 의해 결정되는 제약적으로 허용되는 담체와 함께 제약 조성물 형태로 투여될 수 있다. 본 발병 화합물은 자체가 유효한 한편, 안정성, 결정화의 용이성, 증가된 용해성 등을 목적으로 제약적으로 허용되는 산 부가염 형태로 제형화되고 부여될 수 있다.

또 다른 실시태양에 있어서, 본발명은 1종 이상의 불활성 담체와 혼합 또는 다른 방식으로 결합된 일반식(1) 또는 (2)의 화합물로 이루어진 조성물을 제공한다. 이들 조성물은 예를 들어, 분석 기준으로서, 충전을 위한 용이한 수단으로서, 또는 제약 조성물로서 유용하다. 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물의 분석가능한 양은 당업자에게 주지되고 평가되어 있는 표준 분석 방법 및 기술에 의해 용이하게 측정가능한 양이다. 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물의 분석가능한 양은 일반적으로 조성물의 약 0.001 중량% 내지 약 75 중량% 범위에서 변할 수 있다. 불활성 담체는 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물을 분해하거나 또는 그와 공유적으로 반응하지 않는 임의의 물질일 수 있다. 적당한 불활성 담체의 예는 물; 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 분석시에 일반적으로 유용한 것과 같은 수성 완충액; 아세토니트릴, 에틸 아세테이트, 헥산 등과 같은 유기 용매; 및 제약적으로 허용되는 담체 또는 부형제이다.

보다 상세하게는, 본 발명은 1종 이상의 제약적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합 또는 다른 방식으로 결합된 치료적 유효량의 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물로 이루어진 재약 조성물을 제공한다.

제약 조성물은 재약 분야에 주지된 방법으로 제조된다. 담체 또는 부형제는 고체, 반고체 또는 액체 뭍질일 수 있고, 활성 성분에 대한 비이클 또는 매질로서 작용할 수 있다. 적당한 담체 또는 부형제는 당분야에 주지되어 있다. 제약 조성물은 경구 또는 비경구용으로 변형될 수 있고 환자에게 정제, 캡슐제, 좌약제, 용액제, 현탁액제 등의 형태로 투여될 수 있다.

본 발명 화합물은 예를 들어 불활성 희석제 또는 식이성 담체와 함께 경구 투여될 수 있다. 이것은 젤라틴 캡슐제로 봉입되거나 정제로 압축될 수 있다. 경구 투여를 위해서 화합물을 부형제에 혼합하여 정제, 트로우키(troches), 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼, 츄잉검 등의 형태로 사용될 수 있다. 이들 제형은 적어도 4%의 활성성분 본 발명 화합물을 함유해야 하지만, 특정 제형에 따라 변할 수 있고 편리하게는, 단위 제형의 4 중량% 내지 약 70중량%일 수 있다. 조성물에 존재하는 화합물의 양은 적당한 투여가 이루어지는 양이다. 본 발명에 따른 조성물 및 제형은 경구 단위 제형이 5.0 내지 300㎎의 본 발명 화합물을 함유하도록 제조된다. 정제, 환제, 캡슐제, 트로우키재 등은 미결정질 셀룰로오스, 트라가칸트 고무 또는 잴라틴과 장은 결합제: 전분 또는 락토스와 같은 부형제; 알긴산, 프리모겔^TM(Primogel^TM), 옥수수 전분 등과 같은 붕해제; 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로텍스^TM(Sterotex^TM)과 같은 윤활제; 콜로이드 이산화규소와 같은 활주제; 및 수크로스 또는 사카린과 같은 감미제 등의 보조약 1종 이상을 하유할 수 있고, 페퍼민트, 메틸 살리실레이트와 같은 풍미제 또는 유기 풍미제를 첨가할 수 있다. 단위 제형이 캡슐일 경우, 상기 유형의 물질에 부가하여 폴리에틸렌 글리콜 또는 지방 오일과 같은 액체 담체를 함유할 수 있다. 기타 단위 제형은 도포물로서 단위 제형의 물리적 형태를 개질시키는 기타 각종 물질을 함유할 수 있다. 따라서, 정제 또는 환제는 당, 셀락, 또는 기타 장용피복제로써 회복될 수 있다.

시럽에는 본 발명 화합물 뿐만 아니라 감미제 및 특정 방부제로서 수크로스, 염료 및 색소 및 풍미제가 함유되어 있다. 이들 각종 조성물 제조에 사용되는 물질은 제약적으로 순수하며 사용량이 비독성이어야 한다.

비경구 투여로 치료하기 위해서, 본 발명 화합물은 용액 또는 현탁액에 혼합될 수 있다. 이들 제형은 0.1% 이상의 본 발명 화합물을 함유해야 하지만, 그의 0.1중량% 내지 약 50중량% 범위에서 변할 수 있다. 이러한 조성물에 존재하는 본 발명 화합물의 양은 적당한 투여가 이루어지는 양이다. 본 발명에 따른 바람직한 조성뭍 및 제형은 비경구 단위 제형이 5.0 내지 100㎎의 본 발명 화합물을 함유하도록 제조된다.

용액제 또는 현탁액제는 1종 이상의 하기 보조약을 함유할 수 있다; 주사용 증류수, 식염 용액, 비휘발성 기름, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매와 같은 무균 희석제; 벤질 알코올 또는 메틸 파라벤과 같은 항균제; 아스코르브산 또는 중아황산 나트튬과 같은 산화방지제; 에틸렌 디아민태트라아세트산과 같은 킬레이트화제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충액 및 염화암모늄 또는 덱스트로스와 같은 긴장성 조절제, 비경구 제형은 앰플, 일회용 주사기 또는 유리 또는 플라스틱제 다중 투여 바이알에 봉입될 수 있다.

특히 포괄적 용도를 갖는 구조적으로 관련된 화합물의 임의의 기를 갖는 특정 기 및 배위는 일반식 (1) 또는 (2)의 화합물의 최종 용도 처리시에 바람직하다.

R_l및 R₂가 각각 t-부틸 또는 이소프로필인 일반식 (1)의 화합물이 일반적으로 바람직하다. n이 1 또는 2인 일반식 (1)의 화합물이 바람직하다. Z가 C₃또는 C₄알킬렌기인 일반식 (1)의 화합물이 일반적으로 바람직하다. m이 6, 7 또는 8인 하기식 (1)의 화합물이 일반적으로 바람직하다.

R_l및 R₂가 각각 t-부틸인 일반식 (2)의 화합물이 일반적으로 바람직하다. n이 1 또는 2인 하기식 (1)의 화합물이 일반적으로 바람직하다. Z가 C₃또는 C₄알킬렌기인 일반식 (1)의 화합물이 일반적으로 바람직하다.

본 발명 화합물의 용도는 시험관내 및 생체내에서 방사선 방호제로서 입증될 것이다. 하기 연구는 일반식 (1)의 화합물의 용도를 설명한다. 이것은 본 발명을 설명하려는 것이며 어떤 방식으로도 본 발명의 범주를 제한하려는 것이 아니다. 여기에 사용되는 용어와 그의 의미는 다음과 같다: KeV는 1000eV 단위를 말하며; Rads는 전리성 방사선으로부터 생체 에너지계내에 흡수된 선량 단위이고; ㎜은 면적 단위로 밀리미터를 말하며: μM은 농도 단위로 마이크로몰을 말하고: MEM은 배양 매질 단위로 최소 필수 배지를 말한다.

예를 들어, 배양된 세포의 콜론(콜로니)를 형성하는 능력은 X-선 노출 선량 또는 화학적 사용량의 함수로서 평가될 수 있다. 세포는 약제 처리되어 있지 않은 것이거나 노출되기 30분 전에 시험 물질로 처리되며 있는 것이다. 노출 후 콜론을 형성하는 능력 보유도는 처리되지 많은 세포와 비교하여 약제의 방호 효과와 적접적으로 관련되어 있다. 이러한 유형의 실험은 기본적으로 문헌 [Snyder and Lachman, Radiation Res. 120, 121 (1989)]에 개재된 바에 따라 수행될 수 있다.

시험관내 방사선 방호

배양된 인간 경관암 세포를 60㎜ 조직 배양 접시내 10% 태아 소혈청을 보충시킨 표준 MEM 배지중에 플레이트화시키고, 성장시키고 보존시킨다. 처리시 세포의 밀도는 접시당 2 내지 6×10⁵세포이어야 한다. 배양물을 약제 처리하지 않거나 또는 37℃의 완전 배지중에서 시험 화합물로 30분간 처리한다. 이어서 약제-함유 배지에 계속 존재하는 배양물을 선량계에 의해 결정된 약 160 Rads/분을 전달하는 50KeV의 TfΙ 빅쇼트 캐비넷(Bigshot cabinet)형 X-선 단위 장치중에서 0 내지 2400 Rads의 선량 범위에 걸쳐 조사시킨다.

이어서 콜로니 형성능 연구를 수행한다. 배양물을 1.0㎖의 트립신으로 3분간 도포하고, 트립신을 제거하고 1.0㎖ MEM으로 대체시키고, 세포를 세포 소파기(scarper)를 사용하여 접시로부터 소파시킨다. 쿠울터 카운터 분석에 의해 세포 수를 결정하기 위해 부분 표본을 취한다. 이어서 50 내지 400 콜로니가 생성되도록 각각의 재접종용 배양물로부터 적절한 세포 수를 취한다. 일례로는, 조사시키지 않은 배양물을 500세포/접시로 재접종할 수 있는 반면, 1600 Rads 조사시킨 배양물을 30,000세포/접시로 재접종한다.

이어서, 접종된 60㎜ 조직 배양물 접시를 콜로니 형성을 위해 10일간 배양시킨다. 이어서, 매탄올로 헹구고 디프-퀵(Dif Quik) 염색함으로써 콜로터를 구별한 후 확대하에 손으로 센다.

콜로니 형성능은 50 세포보다 큰 콜로니로 성장할 수 있는 플레이트화된 세포의 백분율로서 나타낸다. 조사시키지 않은 HeLa 세포는 보통 40 내지 70%의 콜로니 형성능을 나타낸다. 콜로니 형성능을 결정하기 위해서 조사시키거나 또는 약제-처리된 조사시킨 배양물에 형성된 콜로니의 수를 적절한 조사시키지 않거나 약제-처리된 조사시키지 않은 대조군 배양물과 비교한다. 일반적으로, 이 연구를 이미 나타낸 최고 선량으로 수행하여도 치료 프로토콜상에 심각한 독성을 유발시키지 않는다. 따라서, 조사시키지 않은 배양물과 X-선 선량 범위에서 약제 처리된 배양물의 생존 곡선을 비교함으로써 데이타를 해석하고, 콜로니 형성능을 37% 억제하는데 필요한 X-선 선량(IB₃₇)을 결정한다. 1,9-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,9-트리아자노난에 대한 결과는 다음과 같다:

ID₃₇대조군=750 Rads, ID₃₇(1μM 약제)=1100 Rads.

또 다르게는, X-선 선량 또는 화학 사용량에 노출될 때 DNA가닥 절단을 평가할 수 있다. 세포를 약제 처리하지 않거나 또는 노출 약 30분 전에 시험 물질로 처리한다. 노출 후, DNA가닥 절단 정도는 미처리 세포의 것과 비교하여 약제의 방호 효과와 역관계이다.

이러한 유형의 대표적인 실험은 기본적으로 문헌[Synder, Int, J. Radiat, Biol. 55, 733(1989)]에 기재된 바와 동일하게 수행될 수 있다.

생체내 방사선 신호

전신 조사 또는 DNA-반응성 물질에 노출된 생귀의 생존성을 평가할 수 있다. 시험 물질로 예비처리된 동물 또는 미처리된 동물(대조군)을 전신 조사(1500 Rads)에 노출시킨다. 미처리 대조군 동물은 약 12 내지 15일간 생존할 것으로 예상된다. 처리된 동물의 생존성은 미처리 대조군과 비교하여 약제 처리의 방호 효과와 직접적으로 관련되어 있다. 이러한 유형의 대표적 실험은 기본적으로 문헌[Carroll et al. J. Med. Chem. 33, 2501(1990)]에 기재된 바와 동일하게 수행될 수 있다.

전신 X-선 조사의 치명적 효과로부터 생쥐를 방호하는 시험 화합물의 능력을 X-선 조사 30분 전에 약제를 단일 i.p로 주사함으로써 시험할 수 있다. 약제 투여 후 시험 동물을 90 KeV의 TFI 빅쇼트 캐비넷형 X-선 단위 상부상에서 10분간 조사시킨다.

조사시킨 후 동물을 우리에 넣고 생존성을 모니터한다. 시험군은 보통 6 내지 8 생쥐로 이루어진다. 군의 각 인원에 대한 사망일을 기록하고 생존값을 계산한다. 이 값은 실험시 약제 처리하지 않은 대조군의 갑과 비교한다. 1,9-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,9-트리아자노난, 트리클로라이드에 대한 결과는 다음과 같다 ; 실험 번호1 대조군 생존값 19,7 ±2.3일 n=4, 시험군 생존값(1㎎/㎏) 25.8 ±7.0일 n=4, 실험 번호2 대조군 생존값 21.6 ±3.5일 n=9, 시험군 생존값(2㎎/㎏) 42.5일 초과 n=9.

전신 조사 또는 DNA-반응성 물질에 노출된 처리 동물로부터 취한 임파구내 DNA가닥 절단을 미처리 대조군과 비교하여 평가할 수 있다.

또 다르게는, 전신 조사 또는 DNA-반응성 물질에 노출된 처리 동물로부터 취한 골수 세포의 생육성 및 콜론 형성능을 문헌[Pike and Robinson, J. Cell Physiol. 76, 77(1970)]에 기재된 바와 같이 미처리 대조군과 비교하여 평가할 수 있다.

Claims

하기 일반식 (1)의 화합물.

식중, R₁및 R₂는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬기이고, n은 0 내지 3의 정수이며, Z는 C₂-C₆알킬렌기이고, m은 4 내지 9의 정수이다.
하기 일반식 (1)의 화합물.

식중, R₁및 R₂는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬기이고, n은 0 내지 3의 정수이며, Z는 C₂-C₆알킬렌기이다.
제1항에 있어서, 1,19-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,6,14,19-테트라아자노나데칸으로 명명되는 화합물.
제1항에 있어서, 1,15-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,11,15-테트라아자펜타데칸으로 명명되는 화합물.
제2항에 있어서, 1,9-비스[(3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐)메틸]-1,5,9-트리아자노난으로 명명되는 화합물.
제2항에 있어서, 1,9-비스[3,5-디-t-부틸-4-히드록시페닐]-1,5,9-트리아자노난으로 명명되는 화합물.
1종 이상의 제약적으로 허용되는 불활성 담체 또는 부형제와 혼합 또는 다른 방식으로 결합된, 방호량의 하기 일반식(1) 또는 (2)의 화합물로 이루어진 제약 조성물.

식중, R₁및 R₂는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬기이고, n은 0 내지 3의 정수이며, Z는 C₂-C₆알킬렌기이고, m은 4 내지 9의 정수이다.
하기 일반식 (7)의 테트라아자알칸을 염기성 조건하에 하기 일반식 (8)의 4-히드록시 벤즈알데히드에 의해 환원적 알킬화시키는 것으로 이루어진, 하기 하기 일반식 (9')의 화합물 및 제약적으로 허용되는 그의 염의 제조 방법.

식중, R₁및 R₂는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬기이고, n은 0 내지 3의 정수이며, Z는 C₂-C₆알킬렌기이고, m은 4 내지 9의 정수이다.
하기 일반식 (13)의 t-부틸옥시카르바미드를 염기 존재하에 하기 일반식 (14)의 디할로알칸에 의해 알킬화시켜 하기 일반식 (15')의 화합물을 얻고 이것을 산성 조건하에 더 반응시켜 Boc-치환체를 수소로써 치환시키는 것으로 이루어진, 하기 일반식 (16)의 화합물 및 제약적으로 허용되는 그의 염의 제조 방법.

식중, R₁및 R₂는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬기이고, n은 0 내지 3의 정수이며, n'는 0, 2 또는 3이고, Z는 C₂-C₆알킬렌기이고, m은 4 내지 9의 정수이고, Boc-는 식의 t-부틸옥시카르보닐기이며, Hal-은 염소, 브롬 또는 요오드이다.
하기 일반식 (21)의 테트라아자알칸을 산성 조건하에 하기 일반식 (22)의 4-히드록시벤즈알데히드에 의해 알킬화시키는 것으로 이루어진, 하기 일반식 (23)의 화합물 및 제약적으로 허용되는 그의 염의 제조방법.

R₁및 R₂는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬기이고, n은 0 내지 3의 정수이며, n'는 0, 2 또는 3이고, Z는 C₂-C₆알킬렌기이다.
하기 일반식 (27)의 적절한 4-히드록시-N-[(4-메틸페닐)설포닐]-아닐린을 하기 일반식(17)의 적절한 비스(히드록시알킬)-t-부틸카르복사미드에 의해 알킬화시켜 하기 일반식(28)의 적절한 비스[4-히드록시페닐]-비스[N-(메틸페닐)설포닐]-(t-부틸옥시카르보닐)-트리아자알칸을 얻고, 이것을 더 반응시켜 설폰아미드 관능기(Ts)를 제거하여 하기 일반식 (29)의 비스-[4-히드록실페닐]-(t-부틸옥시카르보닐)-트리아자알칸을 얻고, 이것을 더 반응시켜 Boc-관능기를 수소로써 치환시키는 것으로 이루어진, 하기 일반식 (30)의 화합물 및 제약적으로 허용되는 그의 염의 제조방법.

식중, R₁및 R₂는 각각 독립적으로 C₁-C₆알킬기이고, n은 0 이며, Z는 C₂-C₆알킬렌기이고, Ts-는 식의 토실레이트기이며, Boc-는 위에서 정의한 바와 같은 t-부틸옥시카르보닐기이다.