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KR0144144B1 - Lhrh 동족체 및 이를 함유하는 약제학적 조성물 - Google Patents

Lhrh 동족체 및 이를 함유하는 약제학적 조성물

Info

Publication number
KR0144144B1
KR0144144B1 KR1019900011999A KR900011999A KR0144144B1 KR 0144144 B1 KR0144144 B1 KR 0144144B1 KR 1019900011999 A KR1019900011999 A KR 1019900011999A KR 900011999 A KR900011999 A KR 900011999A KR 0144144 B1 KR0144144 B1 KR 0144144B1
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KR
South Korea
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boc
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leu
lys
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Application number
KR1019900011999A
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English (en)
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KR910004661A (ko
Inventor
하비브 포투나
그리어 조나단
Original Assignee
야스치카 하세가와
탭 파마슈티칼즈 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 야스치카 하세가와, 탭 파마슈티칼즈 인코포레이티드 filed Critical 야스치카 하세가와
Publication of KR910004661A publication Critical patent/KR910004661A/ko
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Publication of KR0144144B1 publication Critical patent/KR0144144B1/ko

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

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  • Molecular Biology (AREA)
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  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

내용 없음

Description

LHRH 동족체 및 이를 함유하는 약제학적 조성물
제1도는 서열(a):서열(b)의 시험관 내에서의 장내 안정성 비교도이다.
Figure kpo00001
본 발명은 하나 이상의 아미드 결합의 질소원자가 알킬화된 황체 형성 호르몬 방출 호르몬(LHRH:luteinizing hormone releasing hormone)이 슈도(psedo) 노나펩타이드 및 데카펩타이드 동족체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이러한 화합물의 제조방법, 이를 함유하는 약학 조성물 및 암수 포유동물에 있어서 성 호르몬의 수준을 조절하기 위한 이러한 화합물의 용도에 관한 것이다.
LHRH는 GnRH로 알려져 있는 황체 형성 호르몬 방출 호르몬은 다음과 같은 아미노산 서열의 데카 펩타이드이다:
Figure kpo00002
LHRH는 시상하부에서 방출되어 RH(황체 형성 호르몬) 및 FSH(여포-자극 호르몬)의 방출을 야기하는 뇌하수체상의 수용체에 결합한다. 계속해서, LH 및 FSH는 생식선에 작용하여 스테로이드계 성 호르몬의 합성을 자극한다. LHRH의 맥동성 방출 및 이에 따른 LH 및 FSH의 방출은 가축 및 사람의 생식 사이클을 조절한다. LHRH 효능제의 급성 용량은 동물 및 사람 모두에서 LH 및 스테로이드계 성 호르몬의 수준을 증가시킨다.
역설적으로, 이들 효능제의 만성 용량은 LH 및 스테로이드계 호르몬의 수준을 억제시킨다.
결론적으로 말해서, 다수 용량의 LHRH효능제의 효과는 암컷에서는 에스트로겐의 형성을 억제하고 숫컷에서는 테스토스테론의 형성을 억제하는 것이다.
이와 동일한 효과가 동물 및 사람 모두에서 급성 또는 만성 용량의 LHRH 길항제를 투여한 후에 관찰된다.
LHRH 효능제는 현재 전립선암, 양성 전립선 이상비대, 자궁 내막 증식증, 자궁 유섬유증, 조방 청춘기 및 유방암과 같은 몇몇 호르몬 의존성 질환의 치료에 대한 임상학적 연구에 사용되고 있다.
이들은 피임제로도 사용되어 왔다.
LHRH 동족체의 고찰을 위하여 문헌(참조:J. Sandow, et al., Hypothalamic Hormones. Chemistry, Physiology, and Clinical Applications, edited by D. Gupta and W. Voeters, p. 307(1978))을 참조한다.
생물학적 활성 LHRH 동족체가 동물 및 사람에서 연구되어 왔다.
LHRH 동족체는 정맥내 투여, 피하 투여 또는 데포우 투여에 의하여 효과적인 것으로 밝혀졌다.
비내 투여 및 질내 투여는 매우 높은 용량에서만 효과적이다.
보고된 LHRH 동족체 모두는 정맥내 투여 용량에 비하여 경구 투여시 0.1 내지 1% 효능을 나타냈다.
이와 같이 낮은 효능에 대한 주요 이유중 하나는 이들 펩타이드가 혈액 시스템에 도달하기 전에 위에서 각종 단백질 분해효소에 의하여 분해되기 때문이다.
동물 및 사람에 경구 투여한 후에도 단백질 분해효소에 대하여 안정하고 생물학적으로 효능이 있는 LHRH 동족체를 제조하는 것이 바람직하다.
본 발명은 LHRH의 슈도 노나펩타이드 및 데카펩타이드 유도체에 관한 것이다.
특히, 본 발명은 아미드 결합의 적어도 하나의 질소원자가 알킬화된 LHRH 유도체에 관한 것이다.
본 발명에 따른 화합물 및 이의 약제학적으로 허용되는 염은 일반식(Ⅰ)로 표현된다.
Figure kpo00003
상기 식에서,
Figure kpo00004
Figure kpo00005
Figure kpo00006
Figure kpo00007
Figure kpo00008
Figure kpo00009
Figure kpo00010
Figure kpo00011
Figure kpo00012
Figure kpo00013
이드)알라닐, N-(R32)-D-3-(3-피리딜-N'-옥사이드)알라닐, L-3-(2-티아졸릴)-알라닐, D-3-(2-티아졸릴)알라닐, α-아자-3-(1-나프틸)알라닐, α-아자-트립틸, α-아자-페닐알라닐, α-아자-3-(2-티에닐)알라닐, α-아자-3-(4-메틸페닐-알라닐, α-아자-3-(펜타메틸페닐)알라닐, α-아자-3-(2-나프틸)알라닐, 알파-아자-3-(3-벤즈티에닐)알라닐, α-아자-3-(3-벤족사졸릴)알라닐, α-아자-3-(사이클로헥실)알라닐, α-아자-3-(1-아다만틸)알라닐, α-아자-3-(4-메톡시페닐)알라닐, α-아자-3-(4-클로로페닐)알라닐, α-아자-3-(4-브로모페닐)알라닐, α-아자-트립틸(N-인돌-메틸), α-아자-3-(3-피리딜)알라닐, α-아자-3-(3-퀴놀릴)알라닐, α-아자-3-(2-티아졸릴)알라닐, N-(R32)-L-3-(2-티에닐)알라닐, N-(R32)-D-3-(2-티에닐)알라닐, L-3-(3-퀴놀릴)알라닐, D-3-(3-퀴놀릴)알라닐, L-3-(2-나프틸)알라닐, D-3-(2-나프틸)알라닐, N-(R32)-D-페닐알라닐, N-(R32)-L- 페닐알라닐, N-(R32)-D-트립틸, N-(R32)-L-트립틸, N-(R32)-L-트립틸(N-인돌-포르밀), N-(R32)-D-트립틸(N-
Figure kpo00014
Figure kpo00015
Figure kpo00016
Figure kpo00017
(여기서, n은 1 내지 4이고; R30는 수소, 메틸,에틸, 프로필 또는 이소프로필이고; R1은 아미노, 알킬아미노, 사이클로알킬아미노 또는 알카노일아미노이거나, -N(R3)C(O)(CH2)ffR60또는 -NHC(NH(R3))=NR4여기서, R3는 수소, 저급 알킬 또는 사이클로알킬이며, R4는 수소, 저급알킬, 사이클로알킬, 아미노 또는 시아노이고, ff는 0 내지 6이며, R60는 저급 알킬, 디알킬아미노, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릭, (헤테로사이클릭)알킬 또는 -NHR120[여기서, R120는 수소, 저급 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릭, (헤테로사이클릭)알킬, 아미노, 알카노일아미노 또는 -NHR62(여기서, R62는 저급 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릭, (헤테로사이클릭)알킬 또는 -C(O)R63(여기서, R63는 저급 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴 알킬, 헤테로사이클릭 또는 (헤테로사이클릭)알킬이다)이다)이다]이다이거나 -C(O)R**(여기서, R**는 하이드록시, 알콕시, 아미노, 페녹시 또는 -페녹시페닐이다)이고;
Figure kpo00018
여기서, y는 1 내지 3이고, R5는 C1내지 C6직쇄 또는 측쇄 알킬, C3내지 C7사이클로알킬, 하이드록시, 알콕시, 티오알킬, 아릴 또는 헤테로사이클릭 방향족 환이거나, -(CH2)mR6또는(CH2)m
Figure kpo00019
(여기서, m은 0 내지 4이고, R6는 아미노, 알킬아미노, 사이클로알킬아미노 또는 알카노일아미노이거나, NH-C(CH(R'))=NR 또는 -N(R')-C(O)(CH2)ggR65[여기서, R'는 수소, 저급 알킬 또는 사이클로알킬이고, R는 수소, 저급 알킬, 사이클로알킬, 아미노 또는 시아노이며, gg는 0 내지 6이고, R65는 저급 알킬, 디알킬아미노, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릭, (헤테로사이클릭)알킬 또는 -NHR66(여기서, R66는 수소, 저급 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴 알킬, 헤테로사이클릭, (헤테로사이클릭)알킬, 아미노, 알카노일아미노 또는 -NHR67(여기서, R67은 수소, 저급 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릭, (헤테로사이클릭)알킬 또는 -C(O)R68(여기서, R68은 저급 알킬, 사이크로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릭 또는 (헤테로사이클릭)알킬이다)이다)이다)이다]이다)이며; R34는 수소, 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필이고; R35및 R36는 독립적으로 수소 및 저급 알킬 중에서 선택된다의 D-아미노아실 잔기를 포함(그러나, 이에 한정되지는 않는다)하는 천연 α-아미노산 또는 합성의 비천연 α-아미노산으로부터 유도된 D-아미노아실 잔기이거나, 일반식
Figure kpo00020
(여기서, z는 0 내지 3이고; R37은 하이드록시, 알콕시, 페녹시, 아미노 또는 p-메톡시페닐이며; R34는 수소, 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필이다)의 D-아미노아실 잔기이거나, D-세린 또는 D-트레오닌의 글리코실 유도체이며;
G는 L-루이실, L-이소루이실, L-N-(R38)-루이실, 알로이소루이실, 발릴, 노르발릴, 세릴((O-3급-부틸), 티로실, 트립틸, 2-아미노부티릴, L-(사이클로헥실)알라닐, N-N-(R38)-사이클로헥실알라닐, N-(R38)-발릴, 페닐알라닐, N-R(N38)-페닐알라닐, N-(R38)-트립틸, n-(R32)-티로실, 세릴(O-PO3H2), 세릴(O-PO3Me2), N-(R38)-세릴(O-PO3H2), N-(R38)-세릴(O-PO3Me2), 프롤릴, 피페콜릴, 세릴 및 N-(R38)-세릴(여기서, R38은 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필이다)로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 아미노 아실 잔기이거나, 세린 또는 트레오닌의 글리코실 유도체이거나;
F와 G는
Figure kpo00021
(여기서, R47은 수소, 저급 알킬, 3-인돌릴메틸, 2-나프틸메틸, 벤질 또는 치환된 벤질(여기서, 페닐환은 수소, 하이드록시 및 메톡시 중에서 선택된 치환체로 치환된다)이고 Roo는 저급 알킬이다)를 형성하고;
H는 일반식
Figure kpo00022
(여기서, p는 1 내지 4이고; R39는 수소, 메틸, 에틸, 프로필 또는 이소프로필이며; R9는 아미노, 알킬아미노, 사이클로알킬아미노 또는 알카노일아미노이거나, -N(R11)C(O)(CH2)hhR70또는 -NH-C(NH(R11))-NR12[여기서, R11은 수소, 저급 알킬 또는 사이클로알킬이고, R12는 수소, 저급 알킬, 사이클로알킬, 아미노 또는 시아노이며, hh는 0 내지 6이고, R70는 저급 알킬, 디알킬아미노, 사이클로알킬, 아릴, 아릴 알킬, 헤테로사이클릭, (헤테로사이클릭)알킬 또는 -NHR71(여기서, R71는 수소, 저급 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릭, (헤테로사이클릭)알킬, 아미노, 알카노일아미노 또는 -NHR72(여기서, R72는 수소, 저급 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릭, (헤테로사이클릭)알킬 또는 -C(O)R73(여기서, R73는 저급 알킬, 사이클로알킬, 아릴, 아릴알킬, 헤테로사이클릭 또는 (헤테로사이클릭)알킬이다)이다)이다)이다]이거나, R***C(O)-(여기서, R***는 하이드록시, 알콕시, 아미노, 페녹시 또는 p-메톡시페닐이다)의 아미노아실 잔기이며,
I는 L-프롤릴, L-피페콜릴, α-아자-프롤릴, 트란스-β-아미노사이크로펜탄카보닐, 시스-β-아미노 사이클로펜탄카보닐, 3-(저급 알킬)-프롤릴, N-메틸-L-알라닐, N-메틸-노르발라리, 1-디하이드로이소인돌-2-L-카보닐 및 티아졸리딘-5-L-카보닐로 이루어지는 그룹 중에서 선택된 아미노 아실 또는 지방족 아미노 아실 잔기이고;
J는 1-피롤리디닐, 1-피페리디닐, 4-모르폴리닐, 또는 D-알라닐
Figure kpo00023
중의 하나 이상간의 아미드 결합이 두 잔기를 연결하는 아미드 결합의 질소원자 상에서 알킬화되며 화합물은 (피로)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-N-Me-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2, (피로)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-N-Me-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2, (피로)Glu-His-Trp0Ser-Tyr-Gly-N-Me-Leu-Arg-Pro-NH2, (피로)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-N-Me-Leu-Arg-Pro-NH2는 아니다.
이들 화합물은 LHRH 수용체에 친화성을 나타낸다. 통상, 1, 2, 3 및 10위치 또는 1 및 2 위치, 또는 2 및 3위치에 D 아미노산을 갖거나 2위치가 결실된 본 발명의 화합물은 LHRH 길항제이다.
상기 제시한 바와 같이, 또한 본 발명의 설명의 편의를 위해, 펩타이드 기술 분야에 널리 수용되고 있는 바와 같이 여러 가지 일반적인 아미노산에 대한 종래의 약어를 사용하였다(참조:IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature, Biochemistry Ⅱ, 1726(1972)). 이들은 아키랄 아미노산 글리신, 및 아키랄이거나 D-로 표시되는 비천연 또는 천연 아미노산을 제외하고는 L-아미노산을 나타낸다. 본 명세서에 언급된 펩타이드 서열은 모두 N-말단 아미노산은 왼편에 C-말단 아미노산은 오른편에 나타내는 널리 받아들여지고 있는 관례에 따라 표시하였다.
본 발명을 기술하는데 유용한 다른 약어는 하기와 같다.
Figure kpo00024
Figure kpo00025
Figure kpo00026
Figure kpo00027
Figure kpo00028
은 (N-Ac-Sar1-N-Me-Ser4-D-(2)-Nal6)LHRH로 나타내고 서열 (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp6-Leu-Arg-Pro-NHEt은 (N-Me-Ser4-D-Trp6-Pro9-NHEt)LHRH로 나타낸다.
본원에 사용된 약제학적으로 허용가능한 염은 모화합물의 바람직한 생물학적 활성은 유지하지만 원치 않은 어떤 독소학적 영향도 끼치지 않는 염을 말한다. 이런 염의 예로써는 (a) 예를 들어, 염산, 브롬화 수소산, 황산, 인산 및 질산 등의 무기산; 예를 들어, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 옥살산, 타르타르산, 숙신산, 마레산, 푸마르산, 글루콘산, 시트르산, 말산, 아스코르브산, 벤조산, 탄닌산, 파모산, 알긴산, 폴리글루탐산, 메탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌설폰산, 나프탈렌디설폰산 및 폴리갈락투론산 등의 유기산을 사용하여 생성시킨 산부가염; (b) 아연, 칼슘, 비스무트, 바륨, 마그네슘, 알루미늄, 구리, 코발트, 니켈, 카드뮴 및 기타의 다가 금속 양이온; 또는, N,N'-디벤질에틸렌-디아민 또는 에틸렌 디아민으로부터 생성된 유기 양이온 등을 사용하여 생성시킨 염; 또는 (c) (a)와 (b)와의 혼합물, 예를 들어 아연 탄닌산염 및 기타 등이 있다.
저급 알킬은 직쇄 또는 측쇄 포화 탄화수소 그룹으로 탄소수 1 내지 6을 가지며 예를 들면, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, 2급-부틸, 3급-부틸, n-펜틸 및 n-헥실 등을 말한다.
탄소수 1 내지 12의 알킬이란 탄소수 1 내지 12의 직쇄 또는 측쇄 라디칼을 나타낸다.
사이클로알킬은 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸 등 탄소수 3 내지 7의 사이클릭 포화 탄화수소 그룹을 나타낸다.
알콕시란 -OR41을 나타내며, 여기에서 R41은 메톡시, 에톡시, t-부틸옥시 및 기타를 포함하는 저급 알킬이며 이에 제한되지 않는다.
티오알콕시란 -SR42를 나타내며, 여기서에 R42는 -SCH3, -SCH2CH3및 기타를 포함하는 저급 알킬을 나타내며 이에 제한되지 않는다.
알킬아미노란 -NHR44를 나타내며, 여기에서 R44는 메틸아미노, 에틸아미노 및 기타를 포함하는 저급 알킬을 나타내며 이에 제한되지 않는다.
디알킬아미노는 -NR45R46을 나타내며, 여기에서 R45및 R46은 독립적으로 디메틸 아미노, N-메틸-N-에틸-아미노 및 기타를 포함하는 저급 알킬을 나타내며 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 사이클로알킬아미노란 -NHR130을 나타내며, 여기에서 R130은 사이클로알킬 그룹이다.
본원에 사용된 할로겐 또는 할로란 I, Br, Cl 또는 F를 나타낸다.
본원에 사용된 알카노일이란 -C(O)R131을 나타내며, 여기에서 R131는 저급 알킬을 나타낸다.
본원에 사용된 알카노일아미노란 R90(CO)NH-를 나타내며, 여기에서 R90은 저급 알킬이다.
본원에 사용된 알콕시카보닐이란 R91OC(O)-를 나타내며 여기에서 R91은 저급 알킬이다.
본원에 사용된 아릴은 방향족 카보사이클릭 환을 포함하는 모노사이클릭 또는 비사이클릭 키보사이클릭 환 시스템을 나타낸다. 아릴 그룹은 페닐, 나프틸, 인다닐, 인데닐, 테트라하이드로나프틸 및 기타를 포함하며 이에 제한되지 않는다. 아릴 그룹은, 할로겐, 저급 알킬, 하이드록시, 알콕시, 티오알콕시, 니트로, 시아노, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알카노일아미노, 트리할로메틸 및 알콕시카보닐로부터 독립적으로 선택된 하나, 둘 또는 세개의 치환체에 의해서 치환되거나 비치환될 수 있다. 본 발명에 따른 화합물중에서 특정의 아릴 그룹이 치환체로서 언급되긴 했으나, 본 발명은 언급된 특정의 아릴 그룹 대신 어떤 아릴 그룹을 함유하는 화합물이라도 포함한다는 것을 명심해야 한다. 특히, 본 발명에 따른 화합물중 치환체로서 특정의 치환된 페닐 그룹이 언급되었으나, 본 발명은 언급된 특정의 치환체(들) 대신에 선택된 다른 치환체를 가진 페닐 그룹도 포함한다는 것을 명심해야 한다.
본원에 사용된 아릴알킬이란, 벤질, 나프틸메틸, 4-메톡시벤질 및 기타를 포함하는 저급 알킬 라디칼에 결합된 아릴 그룹을 나타내며, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 헤테로사이클릭 또는 헤테로 사이클릭 그룹은 산소, 황 및 질소로부터 선택된 헤테로 원자를 포함하는 3-, 4-, 5- 또는 6-원 환, 또는 하나, 둘 또는 세개의 질소원자; 하나의 질소 및 하나의 황 원자; 또는 하나의 질소 및 하나의 산소원자를 포함하는 5- 또는 6-원 환을 나타내며, 여기에서 질소와 황 헤테로원자는 임의로 산화될 수 있고; 질소 헤테로원자는 임의로 4급화시킬 수 있음, 5-원 환은 0 내지 2개의 이중 결합을 6-원 환은 0 내지 3개의 이중 결합을 지닌다.
헤테로사이클릭은 또한 어떤 비사이클릭 그룹도 포함하며, 여기에서 상기의 어떠한 헤테로사이클릭 환도 각기 독립적으로 상기 정의한 벤젠환 또는 다른 5- 또는 6-원 헤테로사이클릭 환과 융합한다. 헤테로사이클릭은 퀴놀릴, 인돌릴, 벤조푸릴, 벤조티에닐, 이미다졸일, 티아졸일, 벤족사졸일, 푸릴, 티에닐, 피리딜, 피리미디닐, 모르폴리닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 티에닐, 피라지닐, 피라졸릴, 티오모르폴리닐, 이소퀴놀릴, 인다졸릴 및 기타를 포함하며, 이에 제한되지 않는다.
특정의 헤테로사이클릭 그룹이 본 발명에 따른 화합물 중의 치환체로서 언급되었으나, 본 발명은 언급된 특정의 헤테로사이클릭 그룹(들) 대신 어떤 헤테로사이클릭 그룹을 함유하는 화합물도 포함함을 명심해야 한다.
헤테로사이클릭은 하이드록시, 할로, 아미노, 알킬, 아미노, 디알킬아미노, 알콕시, 티오알콕시, 포르밀, 알카노일, 알카노일아미노, 벤질, 저급 알킬, 사이클로알킬 및 트리할로알킬로부터 선택된 치환체로 치환 또는 비치환될 수 있다.
본원에 사용된 (헤테로사이크릭)알킬이란, 저급 알킬 라디칼에 붙어 있는 헤테로사이클릭 그룹을 나타낸다.
본원에 사용된 세린 또는 트레오닌의 글리코실 유도체는 하이드록시 그룹(α- 또는 β-글리코사이드적으로)을 통해 글리코실 라디칼과 결합한 세린 또는 트레오닌 잔기를 나타낸다. 글리코실 라디칼은 글리코피라노스, 글리코푸라노스 또는 올리고당류(이들 모두는 임의로 보호될 수 있다)으로부터 유래된다.
이들 글리코실 라디칼은 리보스, 아라미노스, 크실로스, 릴록스, 알로스, 알트로스, 글루코스, 만노스, 굴로스, 이도스, 갈락토스, 탈로스, 에리트로스, 트레오스, 프시코스, 푸락토스, 소르보스, 타가토스, 자이룰로스, 푸코스, 람노스, 올리보스, 올리오스, 미카로스, 로도스아민, N-아세틸글루코스아민, N-아세틸갈락토스아민, N-아세틸만노스아민 등의 D- 또는 L-단당류; 또는 말토스, 락토스, 셀로비오스, 겐티비오스, N-아세틸락토스아민, 치토비오스, β-갈락토피라노실-(1,3)-N-아세틸갈록토스아민 및 β-갈라토피라노실-(1,3)- 또는 (1,4)-N-아세틸글루코스아민 등의 이당류 뿐만 아니라 2-데옥시, 2-아미노, 2-아세트아미데오- 또는 2-할로게노 유도체 등의 합성 유도체로부터 유래한다.
글리코실 라디칼을 보호하는 그룹은 C1내지 C10아실 그룹(즉, 아세틸, 벤조일, 트리클로로아세틸 및 기타) 및 메틸에테르, 메톡시메틸, 에테르, 벤질 에테르, 테트라하이드로피라닐에테르, 벤질리덴 아세탈, 이소프로필리덴 아세탈 및 트리틸 에테르 등의 다양한 에테르 및 아세탈이 포함하여 탄수화물 화학에서 일반적으로 사용되는 라디칼을 포함하며, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 화합물에 하기의 것이 포함된다:
Figure kpo00029
((2)-n-(에틸아미노카보닐)-(5)-에틸아미도-Glu1-N-Me-Ser4-D-2-Nal)LHRH;
(N-Me-Ser4-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)6,7-Pro9LHEt)LHRH;
(N-Ac-Sar1-N-Me-Ser4-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-이소프로필메틸아세틸)6,7-Pro9NHEt)LHRH;
(Phe2-N-Me-Ser4-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)6,7-Pro9NHEt)LHRH;
(N-Ac-D-4-Cl-Phe1-D-4-Cl-Phe2-D-Trp3,6-N-Me-Ser4-D-Ala10)LHRH;
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'
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LHRH 효능제 및 길항제의 효과 및 이용
본 발명의 LHRH 효능제 및 길항제 화합물은 조발 청춘기, 전립선 암, 양성 전립성 이상 비대, 자궁 내막증식증, 자궁 유섬유종, 유방암, 좌창, 월경전 증후군, 다낭성 난소 증후군 및 사람 및 동물의 어느 한쪽의 성에서 생식 호르몬 생성의 과다 또는 결핍으로 초래된 질병의 치료에 유용하다. 본 발명의 LHRH 효능제 및 길항제는 또한 여성과 남성 모두에서 생식을 조절하는데 유용하다. 맥동성 투여시 LHRH 효능제는 수정 촉진제로서 유용하다. 본 발명의 화합물은 디하이드로테스토스테론(DHT)의 수준을 억제시키는데 유용하다. 본 발명의 LHRH 효능제 화합물은 동물 암컷의 성장 촉진 및 어류의 산란 촉진에 유용하다.
본 발명의 화합물은 또한 스테로이드 또는 비-스테로이드성 항안드로겐제와 배합하여 투여할 때 유용하다. 적당한 항안드로겐제의 예로는 5,5-디메틸-3-(4-니트로-3-트리플루오로메틸페닐)-2,4-이미다졸린디온 및 2-메틸-N-(4-니트로-3-트리-플루오로메틸페닐)-프로판 아미드가 포함되나 제한적인 것은 아니다.
본 발명의 방법의 실행에 있어서 유효량의 본 발명의 화합물 또는 그 화합물을 함유하는 약제학적 조성물을 이의 치료를 필요로 하거나 원하는 사람 또는 동물에 투여한다. 본 발명의 화합물 또는 조성물은 특별한 사용 목적에 따라 사용한 경로, 즉, 경구로, 비경구로(피하, 근육내 및 정맥내의 투여를 포함하여), 질로(특히 피임 동안), 직장으로, 구강으로(설하를 포함하여), 피부를 통해 또는 비내로의 어느 것에 의해서도 투여될 수 있다. 특정 경우에서 가장 적당한 경로는 용도, 특정활성성분, 치료 환자 및 의사의 판단에 의존할 것이다. 본 화합물 또는 조성물은 또한 하기에 좀더 충분하게 기술된 서방출제, 데포우 또는 삽입물제를 통해 투여할 수 있다.
일반적으로, 상기에 기술된 이용을 위해 암수 포유동물의 성 호르몬 수준을 조절하기 위해, 1일당 약 0.01 내지 10mg/kg 체중의 양으로, 바람직하게는 약 0.1 내지 5.0mg/kg 체중의 양으로 활성성분을 투여하는 것이 편리하다. 이 투여는 1일 1회 투여, 수회의 적용에 의한 분산 또는 가장 효율적인 결과를 얻기 위한 서방출에 의해 이루어진다.
본 화합물 및 조성물의 투여에 대한 정확한 용량 및 요법은 필히 치료할 개개 환자의 필요, 치료 방식, 고통 또는 필요의 정도 및 물론 의사의 판단에 의존할 것이다. 일반적으로 비경구 투여는 흡수에 보다 의존적인 다른 투여 방법보다 낮은 용량을 요구한다.
본 발명의 또다른 양태는 활성성분으로의 본 발명의 화합물이 약제학적으로 허용되는 무-독성 담체와 혼합된 약제학적 조성물에 관한 것이다. 상술한 바와 같이 이러한 조성물은 비경구(피하, 근육내 및 정맥내) 투여로의 이용을 위해 특히, 액체 용액제 또는 현탁액제의 형태로; 질 또는 직장 투여로의 이용을 위해, 특히 크림 및 좌제와 같은 반고체 형태로; 경구 또는 구강 투여를 위해, 특히 정제 또는 캡슐의 형태로, 또는 비내 투여를 위해, 특히 산제, 점비제 또는 에어로졸의 형태로 제조할 수 있다.
본 조성물은 단위 용량형으로 편리하게 투여할 수 있고 약제학적 기술분야에 익히 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다(참조:Remington's Pharmaceuticals Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA., 1970). 비경구 투여용 제제는 통상적인 부형제로서 멸균수 또는 염수, 폴리알킬렌 글리콜, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 수소화 나프탈렌 등을 함유할 수 있다. 흡입 투여용 제제는 고체일 수 있으며, 부형제로서, 예를 들면, 락토오즈를 함유하거나, 점비제 형태로 투여하기 위한 수성 또는 오일상 용액제일 수 있다. 구강 투여를 위한 통상적인 부형제는 당, 칼슘 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 예비 젤라틴화 전분 등을 포함한다.
본 발명의 화합물의 환자에게 장기간에 걸쳐서, 예를 들면, 단독 투여로 1주일 내지 1년에 걸쳐서 투여하는 것이 특히 바람직하다. 각종 서방출, 데포우 또는 삽입물 용량형이 사용될 수 있다. 예를 들면, 용량형은 체액 속에서의 용해도가 낮은 본 발명의 화합물의 약제학적으로 허용되는 무독성 염, 예를 들면, (a) 폴리염기산, 예를 들면, 인산, 황산, 시트르산, 타르타르산, 탠산, 파모산, 알긴산, 폴리글루탐산, 나프탈렌 모노- 또는 디-설폰산, 폴리갈락투론산 등을 사용한 산 부가염; (b) 다가 금속 양이온, 예를 들면, 아연, 칼슘, 비스무트, 바륨, 마그네슘, 알루미늄, 구리, 코발트, 니켈, 카드뮴 등 또는 예를 들면, N,N'-디벤질에틸렌디아민 또는 에틸렌디아민으로 형성된 유기 양이온을 사용한 염; 또는 (c)와 (a)와 (b)의 배합물, 예를 들면, 아연탠네이트를 함유할 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물 또는 바람직하게는 상술한 바와 같은 비교적 불용성인 염은 예를 들어 주입에 적합한 호마유를 사용하여 겔, 예를 들면, 알루미늄 모노스테아레이트 겔로 제형화할 수 있다. 특히 바람직한 염은 아연염, 아연탠네이트염, 파모에이트 염 등이다. 다른 타입의 주입용 서방출 데포우 제제는 천천히 분해되는 무독성 비항원성 중합체, 예를 들면, 폴리락트산/폴리글리콜산 중합체(참조:미합중국 특허 제3,773,919호) 속에 분산되거나 캡슐화된 화합물 또는 염을 함유할 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 바람직하게는 상술한 바와 같은 비교적 불용성인 염은 특히 동물에 사용하기 위한 콜레스테롤 매트릭스 펠렛내에 제형화될 수 있다. 추가의 서방출, 데포우 또는 삽입물제, 예를 들면, 리포좀은 문헌에 익히 공지되어 있다(참조:Ststained and Controlled Release Drug Delivery Systerm, J. R, Robinson ed., Marcel Dekker, Ine., New York, 1978). LHRH형 화합물에 관해 특정 참조 사항이 예를 들어 미합중국 특허 제4,010,125호에 언급되어 있다.
본 발명이 폴리펩타이드는 당해 기술분야의 숙련가들에게 공지된 기술에 의해 합성될 수 있다. 고체상 펩타이드 합성을 위한 다수의 기술에 대한 요약이 문헌에 기술되어 있다(참조:J. M. Stewart and J. D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, W. H. Freeman Co., San Francisco, 1963 and J. Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, Vol. 2., p. 46, Academic Press(New York), 1973). 고전적인 용액 합성을 위해서는 지, 슈로더(G. Schroder) 및 케이. 룹케(K. Lupke)의 문헌(참조:The Peptides, Vol. 1, Academic Press(New York), 1965)을 참조한다.
일반적으로, 이들 방법은 1종 이상의 아미노산 또는 적절히 보호된 아미노산을 성장하는 펩타이드 쇄에 연속 첨가함을 포함한다. 통상적으로, 첫번째 아미노산의 아미노 또는 카복실 그룹이 적절한 보호 그룹에 의해 보호된다. 이어서 아미드 결합이 생성되기에 적합한 조건하에서, 보호되거나 유도된 아미노산을 불활성 고체 지지체에 결합시키거나 상보적 그룹(아미노 또는 카복실 그룹)을 갖는 서열에 다음 아미노산을 가함으로써 용액 속에서 사용한다. 이어서 새로 가한 아미노산 잔기로부터 보호 그룹을 제거하고, (적절히 보호된) 다음 아미노산을 가한다. 결국 희망하는 아미노산이 적당한 서열로 결합되고, 남은 보호 그룹(및 고체 지지체)을 순서대로 또는 동시에 제거하여 최종 폴리펩타이드를 수득한다. 통상적인 공정을 간단히 수정함으로써, 예를 들면, 보호된 트리펩타이드와 적절히 보호된 디펩타이드를(키랄 중심을 라세미화하지 않는 조건하에서) 커플링시켜 탈보호시킨 후 펜타펩타이드를 제조함으로써 하나 이상의 아미노산을 동시에 성장하는 쇄에 가할 수 있다.
본 발명의 화합물을 제조하는 특히 바람직한 방법은 고체상 펩타이드 합성을 포함한다.
이러한 특히 바람직한 방법에 있어서, 아미노산의 α-아미노 작용기는 산 또는 염기 민감 그룹에 의해 보호된다. 이러한 보호 그룹은 펩타이드 결합 생성 조건에 대해 안정한 반면, 성장하는 펩타이드 쇄를 파괴하지 않거나 이에 함유된 키랄 중심을 라세미화하지 않고 쉽게 제거될 수 있는 특정을 가져야 한다. 적절한 보호 그룹은 t-부틸옥시카보닐(Boc), 벤질옥시카보닐(Cbz), 비페닐이소프로필옥시카보닐, t-아밀옥시카보닐, 이소보르닐옥시카보닐, (α,α)-디메틸-3,5-디메토시벤질옥시카보닐, o-니트로페닐설페닐, 2-시아노-t-부틸옥시카보닐, 9-플루오레닐메틸옥시카보닐 등이다. t-부틸옥시카보닐(Boc) 보호 그룹이 바람직하다.
특히 바람직한 측쇄 보호 그룹은 아르기닌의 경우, 니트로, p-톨루엔설포닐, 4-메틸벤젠설포닐, Cbz, Boc 및 아다만틸옥시카보닐이고; 티로신의 경우, 벤질, O-브로모벤질옥시카보닐, 2,6-디클로로벤질, 이소프로필, 사이클로헥실, 사이크로펜틸 및 아세틸이고; 세린의 경우, 벤질 및 테트라하이드로피라닐이고; 히스티딘의 경우, 벤질, Cbz, p-톨루엔설포닐 및 2,4-디니트로페닐이고; 트립토판의 경우, 포르밀이다.
고체상 펩타이드 합성법에 있어서, C-말단 아미노산을 적합한 고체 지지체에 결합시킨다. 상기의 합성에 유용한 적합한 고체 지지체는 시약 및 단계적 축합-탈보호 반응의 반응조건에 대해 불활성이고 사용되는 매질에 불용성인 물질이다. 적합한 고체 지지체는 클로로메틸폴리스티렌-디비닐벤젠 중합체, 하이드록시메틸-폴리스티렌-디비닐벤젠 중합체 등이다. 클로로메틸-폴리스티렌-1% 디비닐벤젠 중합체가 특히 바람직하다.
화합물의 C-말단이 글리신아미드인 특별한 경우에 있어서, 특히 유용한 지지체는 벤즈하이드릴아미노-폴리스티렌-디비닐벤젠 중합체(참조:P. Rivaille, et al, Helv. Chim. Acta., 54, 2772(1971))이다. 수지의 클로로메틸 폴리스티렌-디비닐벤젠 타입에 대한 커플링은 α-N-보호된 아미노산, 특히 세슘, 테트라메틸암모늄, 트리에틸암모늄, 1,5-디아자비사이클로-(5.4.0)운데스-5-엔, 또는 유사한 염으로서의 Boc-아미노산의 반응법을 사용하여 수행한다. 커플링 반응은 에탄올, 아세토니트릴, N,N-디메틸포름아미드(DMF) 등의 용매 속에서, 예를 들면, 약 40℃ 내지 60℃의 승온에서, 약 12 내지 48시간 동안 클로로메틸 수지를 사용하여 수행한다. 바람직한 시약 및 반응 조건은 DMF 속에서 약 50℃에서 α-N-Boc 아미노산 세슘염과 수지를 약 24시간 동안 커플링시키는 것이다. 용매, 예를 들면, 디클로로메탄 또는 DMF, 바람직하게는 디클로로메탄 속에서 약 10℃ 내지 50℃, 바람직하게는 25℃의 온도에서 N,N'-디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 또는 N,N'-디이소프로필카보디이미드(DIC)를 사용하여 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBT), 벤조트리아졸-1-일옥시-트리스(디메틸아미노)포스포늄-헥사플루오로포스페이트(BOP) 또는 비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스핀클로라이드(BOPC1)의 존재 또는 부재하에 약 1 내지 24시간, 바람직하게는 약 12시간 동안 커플링시킴으로써 α-N-Boc-아미노산을 벤즈하이드릴아민 수지에 결합시킨다. 카복실 그룹을 펩타이드 수지에 결합된 N-메틸-Ser(OBZl)에 커플링시키는 것은 카보디이미드 시약 이외에 4-디메틸아미노피리딘(DMAP)에 의한 촉매 작용을 필요로 한다.
연속적으로 보호된 아미노산의 커플링은 당해 기술 분야에 익히 공지된 자동 폴리펩타이드 합성기내에서 수행될 수 있다. α-N-보호 그룹의 제거는 예를 들면, 메틸렌클로라이드 중의 트리플루오로아세트산 용액, 디옥산 중의 염화수소 용액, 아세트산 중의 염화수소 용액 또는 기타의 강산 용액, 바람직하게는 디클로로메탄중의 50% 트리플루오로아세트산의 존재하에 대략 주위 온도에서 수행할 수 있다. 각각의 보호된 아미노산은 바람직하게는 0.4M 농도 및 대략 3.5몰 과량으로 도입할 수 있으며 커플링은 디클로로메탄, 디클로로메탄/DMF 혼합물, DMF 등, 특히 메틸렌클로라이드 중에서 대략 주위 온도에서 수행할 수 있다. 커플링제는 통상적으로 디클로로메탄 중의 DCC이지만 단독 또는 HOBT, N-하이드록시석신이미드, 기타의 N-하이드록시이미드 또는 옥심 존재하의 N,N'-디-이소프로필카보디이미드(DIC) 또는 기타의 카보디이미드일 수 있다. 또한 보호된 아미노산 활성 에스테르(예를 들면, p-니트로페닐, 펜타플루오로페닐 등) 또는 대칭 무수물을 사용할 수도 있다.
고체상 합성의 완결시 충분히 보호된 폴리펩타이드를 수지부터 제거한다. 수지 지지체에 대한 결합이 벤질 에스테르 형태일 때, 절단은 프롤린 C-말단을 갖는 펩타이드를 알킬아민 또는 플루오로알킬아민으로 아미노 분해시키거나, 예를 들면, 글리신 C-말단을 갖는 펩타이드를 약 10℃ 내지 50℃, 바람직하게는 약 25℃의 온도에서, 약 12시간 내지 48시간, 바람직하게는 약 18시간 동안 암모니아/메탄올 또는 암모니아/에탄올로 아미노 분해시킴으로써 수행한다. 또한, 펩타이드는, 예를 들어, 메탄올로 트랜스 에스테르화시킨 후, 아미노 분해 또는 직접적인 트랜스 아미드화시킴으로써 수지로부터 제거될 수 있다. 보호된 펩타이드는 이 시점에서 실리카 겔 크로마토그라피에 의해서 정제되거나 다음 단계로 직접 취할 수 있다. 폴리펩타이드로부터 측쇄 보호 그룹을 제거하는 것은 아미노분해 생성물을, 예를 들면, 아니졸 및 디메틸포스파이트또는 기타의 카보늄 소거제의 존재하에 무수 액체 불화수소로 처리하거나, 불화수소/피리딘 컴플렉스로 처리하거나, 트리스(트리플루오로아세틸)붕소 및 트리플루오로아세트산으로 처리하거나, 수소 및 Pd/C/폴리비닐피롤리돈으로 환원시키거나, 액체 암모니아 중의 나트륨으로 환원시킴으로써 수행한다. 측쇄 보호 그룹은 바람직하게는 아니졸 및 디메틸포스파이트의 존재하에 약 -10℃ 내지 +10℃, 바람직하게는 약 0℃의 온도에서, 약 15분 내지 1시간 동안 액체 불화 수소를 사용하여 제거한다. 이후에 충분히 탈보호된 폴리펩타이드를 다음의 단계 중의 어떤 것 또는 모두를 사용하는 크로마토그라피 단계의 순서에 의해 정제한다: 아세테이트 형태의 약염기성 수지상에서의 이온 교환; 비유도체화된 폴리스티렌-디비닐벤젠(예를 들면, 앰버리트 XAD(Amberlite XAD))상에서의 소수성 흡착 크로마토그라피; 카복시메틸셀룰로오즈 상에서의 이온 교환 크로마토그라피; 분배 크로마토그라피, 예를 들면, 세파덱스(Sephadex) G-25, LH-20 또는 역류분배; 고성능 액체 크로마토그라피(HPLC), 특히 옥틸- 또는 옥타데실실릴-실리카 결합된 상 컬럼 패킹 상에서의 역상 HPLC.
6번 위치에서 라세미체 아미노산의 사용되는 경우, 부분 입체이성체 노나펩타이드 또는 데카펩타이드 최종 조성물을 분리하고, 적합한 위치에 D-아미노산을 함유하는 목적하는 펩타이드를 바람직하게는 상술한 크로마토그라피 과정 동안에 분리 및 정제한다.
C-말단 아자글리신 아미드를 갖는 펩타이드의 제조는 바람직하게는 공지된 펩타이드 중간체를 사용하는 고전적 펩타이드 용액 합성으로 수행한다. 이는 실시예 9에 더욱 상세히 기술되어 있다.
고전적 펩타이드 용액 합성을 이용하는 펩타이드 제조의 세부사항의 실시예 2에 기술되어 있다.
하기 실시예는 본 발명의 신규한 화합물의 제조를 초가로 설명하기 위해 제공된다.
(제조예 A)
N-(3급-부톡시카보닐)-N-메틸-O-벤질-L-세린 사이클로헥실아민염
메틸 요오다이드(227.2g)를 질소하에 교반하고 0℃로 냉각된 새로 증류된 무수 디메톡시에탄(DME)(370ml)중 N-Boc-O-벤질-L-세린(23.68g)의 용액에 가한다. 이어서, 수소화나트륨(50% 오일 분산액)(6.4g)을 15분에 걸쳐 분취량으로 가한다.
반응 혼합물을 0 내지 5℃에서 22시간 동안 추가로 교반시킨 후, 물로 분해시키고, 유기층을 농축시킨다. 잔사를 물(500ml)에 용해시키고, 에테르(3×100ml)로 세척한다. 수성층을 1N 냉염산으로 pH 3.0으로 산성화시키고, 분리된 오일을 에테르(3×300ml) 중으로 추출한다. 에테르성 층을 1N 냉 티오황산나트륨 용액(2×150ml) 및 염화나트륨 용액(2×150ml)으로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4),농축시킨다. 조 생성물을 에테르(300ml) 중에 용해시키고, 사이클로헥실아민(8.3g)을 가한다. 분리된 염을 여과하고 건조시켜서 N-(3급-부톡시카보닐)-N-메틸-O-벤질-L-세린 사이클로헥실아민 염(CHA)을 수득한다.
융점 134 내지 136℃
[α]D 24-8.61(C 1, Etoh);
C22H34N2O5에 대한 원소분석
이론치:C, 65.00; H, 8.43; N, 6.89;
실측치:C, 65.06; H, 8.88; N, 6.91.
[제조예 B]
N-아세틸-사르코신
4-디메틸아미노피리딘(3.66g)을 0℃에서 냉각된 디옥산-물(1:1)(150ml) 중 사르코신(26.7g) 및 트리에틸아민(50ml)의 용액에 가한다. 디옥산(20ml)중 아세틸 클로라이드(22.37ml)의 용액을 30분에 걸쳐 적가한다. 그후, 반응 용액을 실온에서 1시간 동안 교반시키고, 이어서 50% 냉수성 HCl로 pH 3으로 산성화시킨다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출한다. 추출물을 포화 NaCl 용액으로 세척하고, Na2SO4상에서 건조시키고, 농축한다. 잔사를 에틸 아세테이트로부터 결정화시켜서 N-아세틸-사르코신을 수득한다.
융점 135 내지 137℃
Fab 질량 스펙트럼 m/e 132(M+H);
C5H9NO3에 대한 원소분석
이론치:C, 45.79; H, 6.91; N, 10.68;
실측치:C, 45.78; H, 7.03; N, 10.64.
[제조예 C]
하기 중간체를 문헌에 따라 제조한다:
Figure kpo00065
[실시예 1]
(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt
바이오서치(Biosearch) 9500 펩타이드 합성기의 반응용기 내에 Boc-Pro-O-수지(메리피일드 수지) 1.5g(1.05mmol)을 넣는다. 아미노산을 하기 합성 사이클에 따라 이 수지에 연속적으로 가한다:
1. 탈블록킹을 45% 트리플루오로아세트산(TFA), 2.5% 아니솔, 2.0% 디메틸 포스파이트, 및 50.5% 메틸렌 클로라이드의 용액을 사용하여 수행하여 펩타이드의 α-아미노 작용기로부터 3급-Boc 그룹을 제거한다. 상기 기술한 탈블록킹 용액으로 수지를 1분 동안 예비세척한 후, 탈블록킹 반응을 20분 동안 수행한다.
2. 염기세척을 메틸렌 클로라이드 중 10% N,N'-디이소프로필에틸아민 용액으로 수행하여 탈보호에 사용되는 TFA를 제거하고 중화시킨다. 수지를 각각의 탈블록킹 단계 후 매번 1분 동안 염기로 3회 세척한다.
'3. 커플링 반응을 활성화제로서 3.5배 몰 과량을 디이소프로필카보디이미드의 0.4M 메틸렌 클로라이드 용액과 함께 3.5배 몰 과량의 3급-Boc 보호된 아미노산 유도체의 0.4M DMF 용액으로 수행한다. 활성화된 아미노산을 펩타이드-수지의 유리 α-아미노 그룹에 커플링시킨다. 반응시간은 하기 프로토콜에 기술된 바와 같다.
4. 세척, 각 반응 단계 후 각각 1분의 세척을 3회 수행한다:메틸렌 클로라이드 1회, 메틸렌 클로라이드-DMF(1:1) 1회 및 프로토콜:
아미노산을 지시된 조건을 이용하여 하기 순서로 수지에 커플링시킨다:
Figure kpo00066
Figure kpo00067
합성의 완결시, 수지를 반응 용기로부터 제거하고, 진공하에 건조시켜서 보호된 폴리펩타이드 수지를 수득한다. 보호된 펩타이드를 10% DMF 또는 메탄올의 존재 또는 부재하에 무수 에틸아민으로 48시간 동안 실온에서 처리하여 수지로부터 제거한다. 수지 비드(bead)를 여과하여 메탄올로 세척한다. 여액을 진공하에 농축시키고, 잔사를 물로 연마시켜서 여과 및 건조 후 백색 분말로서 보호된 펩타이드를 수득한다. 보호 그룹을 아니솔 1ml 및 디메틸 포스파이트 0.5ml의 존재하에 5 내지 10ml 무수 액체 HF로 1시간 동안 0℃에서 처리하여 최종적으로 제거한다. HF를 증발시키고, 잔사를 메탄올 중에 용해시키고 진공하에 농축시킨다. 잔사를 에테르로 2회 세척한 후, 물:아세토니트릴:아세트산(1:1:0.1)의 용액 중에 용해시키고, 여과하고, 동결건조시켜 조 생성물 0.7g을 수득한다. 조 펩타이드를 89% H2O/11% CH3CN/0.1% TFA로부터 49% H2O/51% CH2CN/0.1% TFA에 이르는 범위의 구배 중에서 용매 혼합물을 사용하여 50분에 걸쳐 및 그 후 100% CH2CN/0.1% TFA로 변화시켜 10분에 걸쳐 25cm×2.5cm 다이나믹스 C-18 컬럼(25-40마이크론)상 고성능 액체 크로마토그래피시켜 정제한다. 유속은 분당 15ml이며, UV 검출은 260nM에서이다. 생성물을 단일 피크로서 33.7분에 용출되며, 수집하여 동결건조시켜서 순수한 (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다. Fab(고속 원자 충격) 질량 스펙트럼 m/e 1296(M+H)+.
아미노산 분석:0.8 Pro; 0.8 Arg; 1.0 Leu; 1.0 Tyr; 1.6 Trp; 1.0 His; 1.0 Glu.
[실시예 2]
(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt
(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt를 하기 반응도식에 따라 용액 합성을 이용하여 제조한다:
Figure kpo00068
Figure kpo00069
합성의 세부사항은 하기와 같다:
(a) FMOC-N-Me-Ser(O-Bzl)
톨루엔(40ml) 중 FMOC-Ser(O-Bzl)(4.16g), 파라포름알데히드(2.0g), 및 p-톨루엔설폰산(0.2g)의 현탁액을 공비수제거와 함께 환류하에 45분 동안 가열한다. 용액을 냉각시키고 에틸 아세테이트(250ml)로 희석시키고, 5% 수성 NaHCO3로 3회 세척하고, 건조시키고(Na2SO4) 진공하에 농축시킨다. 잔사를 헥산:에틸아세테이트(8:2)로 용출시키며 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피시켜 정제하여 FMOC-Ser(O-Bzl)-옥사졸리딘-4-온을 결정성 생성물로서 수득한다. 융점 108 내지 109℃. Fab 질량 스펙트럼 m/e 430 (M+N)+. FMOC-Ser-(O-Bzl)-옥사졸리딘-4-온(3.14g)을 클로로포름(40ml)중에 용해시키고, 트리플루오로 아세트산(40ml) 및 트리에틸실란(2.55g)을 가한다. 용액을 실온에서 22시간 동안 교반시킨 후, 진공하에 농축시킨다. 잔사를 메틸렌클로라이드:메탄올(95:5)로 용출시키며 실리카 겔 컬럼크로마토그래피시켜 정제하여 FMOC-N-Me-Ser(O-Bzl)-OH를 무색 오일로서 수득한다. Fab 질량 스펙트럼 m/e 432(M+N)+.
(b) FMOC-N-Me-Ser(O-Bzl)-Tyr-D-Leu-OEt
0℃로 냉각된 DMF(10ml) 중 Tyr-D-Leu-OEt 염산염(1.649g)의 교반용액에 DMF(1ml) 중 N-에틸모르폴린(0.59ml), DMF(5ml) 중 FMOC-N-Me-Ser(O-Bzl)-OH(2.18g)의 용액, DMF(5ml) 중 HOBt(0.9315g)의 용액, 및 DMF(2ml) 중 DCC(0.947g)의 용액을 가한다. 반응 용액을 0℃에서 1시간 동안 및 그후 실온에서 4시간 동안 교반시킨다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔사를 메틸렌클로라이드:메탄올(95:5)로 용출시키며 실리카겔 컬럼크로마토그래피시켜 정제한다. 생성물은 반고체로서 수득된다. Rf 0.35. Fab 질량 스펙트럼 m/e 736(M+N)+.
(c) N-Me-Ser(O-Bzl)-Tyr-D-Leu-OEt
탈기된 무수 DMF(10ml) 중 FMOC-N-Me-Ser(O-Bzl)-Tys-D-Leu-OEt(1.95g) 및 N,N-디이소프로필아민(10ml)의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반시킨다. 용매 및 과량의 시약을 진공하에 제거하고, 잔사를 메틸렌 클로라이드/메탄올(95:5)로 용출시키며 실리카겔 컬럼크로마토그래피시켜 정제한다. 생성물은 저융점 고체로서 수득된다. Rf 0.24, Fab 질량 스펙트럼 m/e 514 (M+N)+.
스펙트럼 m/e 514 (M+H)+.
C28H39N3O6에 대한 원소분석
이론치:C, 65.47; H, 7.65; N, 8.18;
실측치:C 65.10; H, 7.77; N, 7.98.
(d) FMOC-Trp-N-Me-Ser(O-Bzl)-Tyr-D-Leu-OEt
아세토니트릴(50ml) 중 N-Me-Ser(O-Bzl)-Tyr-D-Leu-Oet(1.316g), FMOC-L-Trp(1.09g) 및 벤조트리아졸-1-일옥시 트리스-(디메틸아미노(포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP)(1.13g)의 교반용액에 트리에틸아민(0.347ml)을 가한다. 용액을 실온에서 5시간 동안 교반시킨다. 용매를 진공하에 제거한다. 잔사를 에틸아세테이트 중에 용해시키고, 5% 수성 NaHCO3, 1N HCl, 및 최종적으로 포화 NaCl 수용액으로 세척하고, 건조시키고(Na2SO4), 진공하에 농축시킨다. 잔사를 메틸렌 클로라이드:메탄올(95:5)로 용출시키며 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피시켜 정제한다. 생성물은 반고체 잔사로 수득된다. Rf 0.25. Fab 질량 스펙트럼 m/e 922 (M+N)+.
(e) Trp-N-Me-Ser(O-Bzl)-Tyr-D-Leu-OEt
아세토니트릴(5ml) 및 디에틸아민(5ml) 중 FMOC-Trp-N-Me-Ser(O-Bzl)-Tyr-D-Leu-Et(0.280g)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반시킨다. 용매 및 과량의 시약을 진공하에 제거하여 생성물을 기포성 잔사로 수득한다. Fab 질량 스펙트럼 m/e 700 (M+N)+. 생성물을 추가의 정제없이 다음 단계에서 사용한다.
(f) Cbz-(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser(O-Bzl)-Tyr-D-Leu-OEt
0℃로 냉각된 DMF(5ml) 중 Trp-N-Me-Ser(O-Bzl)-Tyr-D-Leu-OEt(0.2665g)의 용액에 DMF(10ml) 중 Cbz-(피로)Glu-His(0.167g), DMF(2ml) 중 HOBt(0.777g) 및 DMF(2ml) 중 DCC(0.078g)을 차례로 가한다. 용액을 0℃에서 2시간 동안 및 그 후 실온에서 밤새 교반시킨다. 용매를 진공하에 제거하고, 잔사를 메틸렌 클로라이드:메탄올(9:1)로 용출시키며 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피시켜 정제한다. 생성물은 고체로서 수득된다. Rf 0.317. Fab 질량 스펙트럼 m/e 1082 (M+N)+.
(g) (피로) Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-OEt
DMF-물(9:1)(15ml) 중 Cbz-(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser(O-Bzl)-Tyr-D-Leu-OEt(0.787g)의 용액을 10% Pd(OH)2/C(0.79g)의 존재하에 4atm 하에 밤새 수소화시킨다. 촉매를 여과하고, 여액을 진공하에 농축시킨다. 잔사를 물로 연마시켜 목적하는 생성물을 무정형 고체로서 수득한다. Fab 질량 스펙트럼 m/e 857 (M+N)+.
(h) (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-OH
0℃로 냉각된 디옥산-물(1:1)(16ml) 중 (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-OEt(0.519g)의 용액에 2N 수성 NaOH(0.6ml)를 가한다. 생성된 용액을 0℃에서 4시간 동안 교반시킨 후,0.1M 수성 HCl로 pH 5.0으로 산성화시키고, 동결건조시킨다. 조 생성물의 Fab 질량 스펙트럼은 (M+N)에 대해 m/e 830을 나타낸다. 조 생성물을 추가의 정제없이 다음 단계에 사용한다.
(i) (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt
0℃로 냉각된 DMF(2ml) 중 Leu-Arg-Pro-NHEt 디하이드로클로라이드(0.159g)의 용액에 DMF(0.2ml) 중 N-에틸모르폴린(0.042ml), DMF(5ml) 중 (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-OH(0.3g), DMF(2ml) 중 HOBt(0.066g), 및 DMF(2ml) 중 DCC(0.0677g)을 차례로 가한다. 생성된 용액을 0℃에서 2시간 동안 및 그 후 실온에서 밤새 교반시킨다. 용매를 진공하에 제거한다. 잔사를 아세트산-물(1:9)중에 용해시키고, 불용성 물질을 여과한다. 여액을 동결건조시킨다. 수득된 분말을 90% H2O/11% CH3CN/0.1% TFA로부터 49%H2O/51% CH3CN/0.1% TFA에 이르는 용매 혼합물 구배로 50분에 걸쳐 25cm×2.5cm 다이나막스 C-18 컬럼(25 내지 40마이크론)을 이용하여 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)시켜 정제한다. 유속은 분당 15ml이며, UV 검출은 260nm에서이다. 생성물을 30.4분에서 용출시켜 수집하여 동결건조시켜서 순수한 (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-Arg-Pro-NHEt를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다. Fab 질량 스펙트럼 m/e 1223(M+N)+. 아미노산 분석:0.8 Pro; 0.8 Arg; 1.8 Leu; 1.0 Tyr; 1.0 Hia; 1.0 Glu.
[실시예 3]
(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-(2)-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2
실시예 1에 기술된 것과 유사한 방법 및 동일한 기기를 사용하여, Boc-Gly-O-수지 1.5g(1.12mol)에서 출발하고 하기 표에 기술된 순서로 아미노산을 커플링하여 (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-(2)-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2를 제조한다.
Figure kpo00070
Figure kpo00071
펩타이드를 N,N-디메틸에탄올아민 10%를 함유하는 수성 액체 암모니아(30ml) 및 메탄올(5ml)로 실온에서 48시간 동안 처리하여 수지로부터 분해시킨다. 반응물은 실시예 1에 기술한 바와 같은 방법으로 후처리한다. 0℃에서 1시간 동안 HF/아니솔/디메틸포스파이트를 사용하여 펩타이드로부터 보호그룹을 제거한다. 생성된 조 펩타이드를 실시예 1에 기술한 것과 동일한 컬럼 및 용매 구배를 사용하는 고성능 액체 크로마토그래피로 정제한다. 생성물을 34.9에서 단일 피크로 응출시킨 뒤, 수집하고 동결건조시켜 트리플루오로아세테이트 염으로서 (피로)Glu-Gis-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-(2)Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2를 수득한다. FAB 질량 스펙트럼 m/e 1336(M+H)+. 아미노산 분석:1.0 Gly; 0.8 Pro; 0.9 Arg; 1.0 Leu; 1.0 Tyr; 0.9 Trp; 1.0 His; 1.0 Glu.
[실시예 4]
실시예 1에 기술한 방법을 사용하고 적합한 아미노산으로 치환하여, C-말단 Pro-NHCH2CH3를 갖는 다음 화합물을 합성할 수 있다:
(피로)글루타밀-페닐알라닐-트립틸-N-메틸세릴-티로실-D-트립틸-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
(피로)글루타밀-히스티딜-3-(1-나프틸)-알라닐-N-메틸세릴-티로실-D-트립틸-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
(피로)글루타밀-히스티딜-트립틸-N-메틸세릴-아르기닐-D-트립틸-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸페닐알라닐-D-3-4-클로로페닐알라닐-트립틸-N-메틸세릴-티로실-D-티로실-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-4-플루오로페닐알라닐-트립틸-n-메틸세릴-티로실-D-리실-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
(피로)글루타밀-히스티딜-트립틸-N-메틸세릴-티로실-D-리실(N-ε-이소프로필)-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
(피로)-글루타밀-히스티딜-트립틸-N-메틸세릴-티로실-D-세릴(O-t-부틸)-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
(피로)글루타밀-히스티딜-트립틸-N-메틸세릴-티로실-D-리실(N-ε-니코티노일)-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
(피로)글루타밀-α-메틸-페닐알라닐-트립틸-N-메틸세릴-티로실-D-사이클로헥실알라닐-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
(피로)글루타밀-히스티딜-트립틸-N-메틸세릴-티로실-D-리실(N-ε-피라지닐-카보닐)-사이클로헥실-알라닐-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸-사르코실-D-3-4-플루오로페닐알라닐-트립틸-N-메틸세릴-티로실-D-트립틸-루이실-리실-(N-ε-이소프로필)-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸-D-페닐알라닐-D-3-4-클로로페닐-알라닐-D-3-(1-나프틸)알라닐-N-메틸세릴-티로실-D-프롤릴-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸사르코실-히스티딜-3-(1-나프틸)-알라닐-N-메틸세릴-티로실-D-티로실-사이클로헥실알라닐-아르기닐-프로필에틸아미드;
N-아세틸사르코실-D-페닐알라닐-D-티로실-(O-메틸)-N-메틸세릴-티로실-D-세릴-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸사르코실-페닐알라닐-3-(2-나프틸)-알라닐-N-메틸세릴-티로실-D-세릴(O-t-세릴)-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
(피로)글루타밀-페닐알라닐-트립틸-N-메틸-세릴-티로실-D-트립틸-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴에틸아미드;
(피로)글루타밀-히스티딜-3-(1-나프틸)-알라닐-N-메틸세릴-티로실-D-3-(2-나프틸)알라닐-루이실-리실(N-e-ε-이소프로필)-프롤릴에틸아미드.
[실시예 5]
실시예 2에 기술된 방법을 사용하고 적합한 아미노산으로 치환하여 하기 화합물을 제조한다:
(피로)글루타밀-히스티딜-트립실-N-메틸세릴-티로실-D-세릴(O-t-부틸)-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸-사르코실-히스티딜-3-(1-나프틸-알라닐)-N-메틸세릴-티로실-D-티로실-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴에틸아미드;
(피로)-글루타밀-D-페닐알라닐-트립틸-N-메틸세릴-티로실-D-사이클로헥실알라닐-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸사르코실-히스티딜-트립틸-N-메틸-세릴-티로실-O-t-부틸-D-세릴-사이클로헥실알라닐-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸-사르코실-D-α-메틸-페닐알라닐-3-(1-나프틸)알라닐-N-메틸세릴-티로실-O-t-부틸-D-세릴-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸-알라닐-D-3-4-클로로페닐알라닐-D-트립틸-N-메틸-세릴-티로실-D-티로실-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸사르코실-히스티딜-트립틸-N-메틸-세릴-리실(N-ε-피라지닐-2-카보닐)-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
(피로)글루타밀-히스티딜-3-(1-나프틸)알라닐-N-메틸세릴-티로실-D-프롤릴-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸사르코실-히스티딜-트립틸-N-메틸세릴-리실(N-피라지닐-2-카보닐)-D-사이클로헥실알라닐-사이클로헥실알라닐-오르니티닐(N-δ-이소프로필)-프롤릴에틸아미드.
[실시예 6]
(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-N-Me-Leu-Arg-Pro-NHEt
실시예 1에 기술된 방법을 사용하되, Boc-Leu를 Boc-N-메틸-루이신으로 치환하고 DMF 중의 Boc-N-포르밀-D-Trp 용액에 0.1% DMAP를 가하여, (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-N-Me-Leu-Arg-Pro-NHEt를 제조할 수 있다.
[실시예 7]
N-Ac-Sar-His-Trp-(3)-N-Et-(2)-N-Me-Dap-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt
실시예 1에 기술된 방법을 사용하되, Cbz-(피로) Glu를 N-Ac-Sar로 치환시키고 Bco-N-Me-Ser(OBzl)을 Boc-N-Me-DeAla로 치환하여, 수지에 결합된 보호된 펩타이드를 제조한다. 이 수지를 실시예 1에 기술된 것과 같이, 에틸아민으로 처리한 뒤 다시 HF로 처리하여 조 생성물을 수득한다. 이 펩타이드를 실시예 1에 기술된 것과 동일한 조건을 사용하여 고성능 액체 크로마토그래피로 정제한다. 트리플루오로아세테이트 염으로서 31.05분에서 단일 피크로 용출된 N-Ac-Sar-His-Trp-(3)-N-Et-(2)-N-Me-Dap-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt를 수집한 뒤 동결건조시킨다. Fab 질량 스펙트럼 m/e 1325 (M++H). 아미노산 분석:1.0 Pro; 1.0 Arg; 1.0 Leu; 1.7 Trp; 1.0 Tyr; 0.9 His; 1.0 Glu.
[실시예 8]
실시예 7에 기술된 방법을 사용하되, 적합한 아미노산으로 치환하여 하기 펩타이드를 제조할 수 있다.
(피로)글루타밀-히스티딜-트립틸-3-N-에틸-2-N-메틸-2,3-디아미노프로피오닐-티로실-D-트립틸-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아민;
N-아세틸사르코실-D-페닐알라닐-D-트립틸-3-N-에틸-2-N-메틸-2,3-디아미노프로피오닐-티로실-D-티로실-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드;
N-아세틸-D-3-4-클로로페닐알라닐-D-페닐알라닐-D-3-(1-나프틸)알라닐-3-N-에틸-2-N-메틸-2,3-디아미노-프로피오닐-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-아르기닐-프롤릴에틸아미드.
N-아세틸-3,4-데하이드로-프롤릴-D-3-4-클로로페닐-알라닐-D-트립틸-3-N-에틸-2-N-메틸-2,3-디아미노프로피오닐-티로실-D-리실(N-ε-피콜릴)-발릴-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴에틸아미드.
[실시예 9]
(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-AzaGly-NH2
하기의 반응도식에 따라 고전적인 용액 합성을 통해 본 펩타이드를 제조한다.
Figure kpo00072
분획(1)의 합성방법은 실시예 2에 기술되어 있으며, 분획(2)의 합성 방법은 문헌(참조:A.S. Dutta, J. Med. Chem. 21, 1018(1978))에 기술되어 있다. 분획(2)를 가수소분해를 통해 (3)으로 전환시킨 뒤 DCC/HOBt를 사용하여 (1)과 커플링시킨다. 실시예 1에 기술된 것과 유사한 조건을 사용하여 고성능 크로마토그래피로 생성물을 정제한다.
[실시예 10]
실시예 3의 방법을 사용하되, Boc-D-(2) Nal을 Boc-D-3-(2-벤즈이미다졸릴)-알라네이트 또는 Boc-D-3-(2-벤족사졸릴)-알라네이트로 치환하여 N-아세틸사르코실-페닐알라닐-트립틸-N-메틸세릴-티로실-3-(2-벤즈이미다졸릴)-D-알라닐-루이실-아르기닐-프로릴에틸아미드 및 N-아세틸-페닐알라닐-D-3-4-클로로페닐알리닐-D-트립틸-N-메틸-세릴-티로실-3-(2-벤족사졸릴)-알라닐-사이클로헥실알라닐-아르기닐-프롤릴 에틸아미드 각각을 수득한다.
[실시예 11]
N-Ac-Sar-D-Phe-D-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-(3)-Pal-Leu-Arg-Pro-NHEt
실시예 1의 방법을 사용하되, Boc-D-Leu를 Boc-3-(3-피리딜)-D-Ala로 치환하고 각각 5시간 동안 4회에 걸쳐 산으로 커플링시켜 N-아세틸사르코실-D-페닐알라닐-D-트립틸-N-메틸-세릴-티로실-D-3-피리딜알라닐-루이실-아르기닐-프롤릴 에틸아미드를 수득할 수 있다.
[실시예 12]
(2)-N-(에틸아미노카보닐)-(5)-N-에틸아미노-Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt
실시예 1에 기술된 것과 동일한 방법 및 아미노산을 사용하여, Cbz-(피로)Glu-His(Cbz)-Trp-(N-포르밀)-N-Me-Ser(OBzl)0Tyr(O-2-Br-Cbz)-D-Trp(N-포르밀)-Leu-Arg(Tos)-Pro-O-수지를 수득한다. 이 펩타이도 수지를 10% 디메틸에탄올아민을 함유하는 메탄올(4ml) 및 에틸아민(30ml)로 처리한다. 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반한다. 수지를 여과하고 여액을 진공하에서 농축한다. 잔사를 물로 연마한다. 고체를 P2O4상에서 24시간 동안 건조시켜 무수 백색 분말 상태의 보호된 펩타이드를 수득한다. 보호그룹을 아니솔 1ml 및 디메틸포스파이트 0.5ml에 존재하여 0℃에서 무수 액체 HF로 1시간 동안 처리하여 제거한다. 과량의 시약을 진공 중에서 제거하고 잔사를 메탄올 중에 용해시킨 뒤 진공 중에서 농축시킨다. 잔사를 에테르로 2회 세척한 다음 물:아세토니트릴:아세트산(1:1:0.1)의 용액 중에 용해시키고 여과하며 동결건조시켜 조 생성물을 수득한다. 이 생성물을 실시예 1에 기술된 것과 동일한 구배를 사용하여 24cm×2.5cm 다이나믹스(Dynamax) C-18컬럼(25 내지 40마이크론) 상에서 고성능 액체 크로마토그래피로 정제한다. 생성물을 36.5분에서 단일 피크로 용출시킨 뒤 수집하고 동결건조시켜 순수한 (2)-N-(에틸아민카보닐)-(5)-N-에틸아미도-Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다. FAB 질량 스펙트럼 m/e 1412 (M+H)+. 아미노산 분석:1.0 Pro, 1.2 Arg, 1.0 Leu, 0.9 Tyr, 0.9 Trp, 0.8 His, 0.6 Glu.
[실시예 13]
(피로)-Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-6,7-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-Arg-Pro-NHEt
하기 단계에 따라 (피로)-Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-6,7-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-Arg-Pro-NHEt를 제조한다.
(a) H-Arg(Tos)-Pro-NHEt
보호된 디펩타이드 Arg(Tos)-Pro-NHEt는 Boc-Pro-O-수지(메리필드 수지)를 사용하고, 탈블록킹화시키고, 실시예 1에 기술된 것과 동일한 기기 및 방법을 사용하여 Boc-Arg(Tos)와 커플링시킨 뒤 펩타이드-수지를 전술한 탈블록킹 용액으로 탈블록킹화시키는 고체상 방법으로 제조할 수 있다. 이어서 수득된 Arg(Tos)Pro-O- 수지를 실온에서 48시간 동안 에틸아민으로 처리한다. 생성물을 후처리하고 물로 연마하고 P2O5에서 건조시켜 H-Arg(Tos)-Pro-NHEt를 수득한다.
(b) Boc-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필 메틸아세트산
문헌(참조:D.F. Veber 및 R.M. Freidinger, 미합중국 특허 제4,493,934호)에 기술된 공정을 이용하여 Boc-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필 메틸아세트산을 합성할 수 있다.
(c) Boc-(2-S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-아르기닐-프롤릴에틸아미드
Boc-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세트산 10mmol을 가스를 제거한 DMF 70ml 중에 용해시킨 다음 질소하에서 0℃로 냉각시킨다. 전술한 바 있는 H-Arg(Tos)-Pro-NHEt 19mmol을 가스를 제거한 DMF 30ml 중에 용해시킨 뒤 냉각시킨다. 산 용액에 디페닐포스포릴아지드 11mmol 및 트리에틸아민 11mmol을 가한 뒤 예비-냉각시킨 펩타이드 용액을 가한다. 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반한 뒤 다시 실온에서 밤새 교반한다. 생성물을 후처리하고 실리카겔컬럼 크로마토그래피를 사용하여 70:30:3의 클로로포름/메탄올/수성 암모니아로 용출시켜 정제한다.
(d) (2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-아르기닐(Tos)-프롤릴에틸아미드
전술한 반응에서 수득된 Boc-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-아르기닐(Tos)-프롤릴-에틸아미드를 0℃에서 아니솔 1.5% 및 디메틸포스파이트 1%를 함유하는 트리플루오로아세트산(60ml)에 용해시킨다. 이어서, 용액을 실온에서 30분 동안 교반한 뒤 진공중에서 농축시킨다. 잔사를 에테르로 2회 세척하고 P2O5상에서 건조시켜 (2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-아르기닐(Tos)-프롤릴에틸아미드를 수득한다.
(e) Cbz-(피로)Glu-His(Cbz)Trp-N-Me-Ser(OBzl)-Tur-(O-2-Br-Cbz)-NHNH2
실시예 1에 기술된 고체상 방법을 사용하되, Boc-Tyr(O-2-Br-Cbz)-O-수지(메리필드 수지)를 사용하여 출발하고 탈블록킹화시키며 Boc-N-Me-Ser(OBzl), Boc-Trp(N-포르밀), Boc-His(Cbz) 및 Cbz-(피로)Glu 순서로 보호된 아미노산과 커플링시켜 Cbz-(피로)Glu-His(Cbz)-Trp-N-Me-Ser(OBzl)-Tyr-(O-2-Br-Cbz)-O-수지를 합성한다. 수득된 Cbz-(피로)Glu-His(Cbz)-Trp(N-포르밀)-N-Me-Ser-(OBzl)-Tyr(O-2-Br-Cbz)-O- 수지를 실온에서 48시간 동안 10% 메탄올 용액 중의 무수 하이드라진으로 처리한다. 수지를 여과한 뒤 여액을 진공 중에서 농축시킨다. 잔사를 에테르로 연마하고 P2O5상에서 건조시켜 Cbz-(피로)Glu-His(Cbz)-Trp-N-Me-Ser(OBzl)-Trp(2-Br-Cbz-)-NHNH2를 수득한다.
(f) Cbz-(피로)Glu-His(Cbz)-Trp-N-Me-Ser(OBzl)-Tyr(2-Br-Cbz)-6,7-(2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필 메틸아세틸)-Arg(Tos)-Pro-NHEt
히드라지드 Cbs-(피로)Glu-His(Cbz)-Trp-N-Me-Ser(OBzl)-Tyr(O-2-Br-Cbz)-NHNH22.6mmole을 탈기된 DMF 26ml에 용해시키고 질소하에 -10℃로 냉각시킨다. 이 용액에 5.8M 염산/THF 2.4ml를 가한다. 반응 혼합물을 -25℃로 냉각시키고 이에 이소아민니트라이트/DMF의 (1:19) 용액을 양성 전분/KI 시험 반응이 수득될 때까지 가한다. 용액은 약 16ml가 필요하다. TLC 분서깅 하이드라지드가 잔류하지 않음을 나타내는 경우, 반응 혼합물을 -40℃로 냉각시키고 이에 미리 제조한 (2-(S-3-아미노-2-옥소-피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-아르기닐(Tos)-프롤릴에틸아미드의 차가운 DMF 용액 4ml를 가한다. 트리에틸아민을 사용하여 pH를 8로 상승시킨다. 반응물을 -20℃에서 24시간 동안 교반한 후 pH를 8로 재조정한다. 추가의 펩타이드를 가하고 반응물을 동일한 온도에서 추가로 24시간 동안 교반한다. 반응 혼합물을 진공 중에 농축시킨다. 잔류물을 물로 연마한다. 고체를 여과하고 P2O5로 건조시켜 Cbz-(피로)Glu-His(Cbz)-Trp-N-Me-Ser(OBzl)-Tyr(O-2-Br-Cbz)-6,7-(2-(S-3-아미노-2-옥소피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-Arg(Tos)-Pro-NHEt를 수득한다.
(g) (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-6,7-(2-(S-3-아미노-2-옥소피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸-아세틸)-Arg-Pro-NHEt
상기 실험으로부터 수득된 Cbz-(피로)Glu-His(Cbz)-Trp-N-Me-Ser(OBzl)-Tyr(O-2-Br-Cbz)-6,7-(2-(S-3-아미노-2-옥소피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-Arg(Tos)-Pro-NHEt를 아니솔 1.5ml와 디메틸포스파이트 1ml의 존재하에 무수 분화수소 10ml로 0℃에서 1시간 동안 처리한다. 과량의 시약을 진공중에 제거한다. 잔류물을 에테르로 3회 세척한 다음 물-아세토니트릴의 (1:1)용액 3.0ml에 용해시키고 동결건조시킨다. 조 생성물을 HPLC로 처리하여 정제시킴으로써(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-6,7-(2-(S-3-아미노-2-옥소피롤리딘-1-일)-S-2-이소프로필메틸아세틸)-Arg-Pro-NHEt를 수득한다.
[실시예 14]
N-AcSar-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt
N-AcSar-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt를 (피로)Glu를 N-AcSar 및 Boc-D-Leu를 Boc-D-Trp-N(포르밀)로 대체시키는 것 이외에는 실시예 1에 기술된 기구와 방법을 사용하여 합성한다. 조 생성물을 24cm×2.5cm Dynamax C-18 컬럼상에서 89% H2O/11% CH3CN/0.1% TFA 내지 49% H2O/51% CH3CN/0.1% TFA의 구배 범위의 용매 혼합물으 ㄹ사용하여 50분 동안 HPLC로 처리함으로써 정제시킨다. 유동소도는 15ml/분이고 UV 검출은 260nM에서 수행한다. 생성물을 17.59분에서 단일 피크로서 용출시키고 수집하고 동결건조시켜 트리플루오로아세테이트 염으로서 순수한 (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt를 수득한다. Fab 질량 스펙트럼 m/e(M+H)+. 아미노산 분석:1.0 Pro, 1.1 Age, 1.1 Leu, 1.6 Trp, 1.0 Tyr, 0.9 His.
[실시예 15]
(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt
(피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D0Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt는 Boc-D-Leu를 Boc-D-Trp-(N-포르밀)로 대체하는 것 이외에는 실시예 1에 기술된 기구와 방법을 사용하여 합성한다. 조 생성물은 상기에서 기술한 조건에 따라서 HPLC로 처리하여 정제시킨다. 생성물을 33.7분에서 단일 피크로서 용출시키고 수집하고 동결건조시켜 트리플루오로아세테이트 염으로서 순수한 (피로)Glu-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt를 수득한다. Fab 질량 스펙트럼 m/e 1296(M+H)+.
아미노산 분석:1.0 Pro, 1.0 Arg, 1.0 Leu, 1.6 Trp, 1.0 Tyr, 1.0 His, 0.8 Glu.
[실시예 16]
N-AcSar-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2
N-AcSar-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2는 Cbz-(피로)Glu를 N-AcSar로 대체하는 것 이외에는 실시예 3에 기술된 기구 및 방법을 사용하여 합성한다. 조생성물은 상기에서 기술한 조건에 따라서 HPLC로 처리하여 정제시킨다. 생성물을 24.5분에서 단일 피크로 용출시키고 수집하고 동결건죄켜 트리플루오로아세테이트 염으로서 순수한 N-AcSar-His-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-2-Nal-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2를 수득한다. Fab 질량 스펙트럼 m/e 1338(M+H)+.
아미노산 분석:1.0 Pro, 1.1 Arg, 0.9 Leu, 1.0 Tyr, 0.8 Trp, 0.8 His.
[실시예 17]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2는 Cbz-(피로)Glu 및 Boc-His-N-im-Cbz를 Boc-D-4-Cl-Phe로, Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 및 Boc-D-2-Nal을 Boc-D-Trp-CN-인돌-포르밀)ㄹ, 및 boc-Gly-O- 수지를 Boc-D-Ala-O- 수지로 대체하고 Boc 그룹을 TFA를 사용하여 펩타이드-수지로부터 제거하고 아세틸이미다졸을 사용하여 N-말단을 아실화하는 것 이외에는 실시예 3에 기술된 기구와 방법을 사용하여 합성할 수 있다. 보호된 펩타이드를 무수 암모니아를 사용하여 수지로부터 분리한다. 이어서 보호 그룹을 아니솔 및 디메틸포스파이트의 존재하여 액체 HF로 0℃에서 1시간 동안 처리하여 분리시킨다. 조 생성물을 HPLC로 처리하여 정제시킴으로써 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2를 수득한다.
[실시예 18]
적합한 아미노산으로 대체시켜 실시예 17에 기술된 방법을 사용하여 하기 화합물을 합성할 수 있다.
N-아세틸-3,4-데하이드로-프롤릴-D-3,4-Cl-페닐알라닐-D-트립틸-N-메틸-세릴-티로실-D-트립틸-루실-아르기닐-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-(δ)3.4-프롤릴-D-3-4-F-페닐알라닐-D-2-나프틸알라닐-N-메틸-세릴-티로실-D-2-나프틸알라닐-루이실-아르기닐-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-4-Cl-페닐알라닐-D-2-나프틸알리닐-D-트립틸-N-메틸-세릴-티로실-D-아르기닐-루이실-아르기닐-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-4-Cl-페닐알라닐-D-페닐알라닐-D-1-나프틸알라닐-N-메틸-세릴-티로실-D-3-피리딜알라닐-N-메틸-루이실-아르기닐-프롤릴-D-알라닐아미드; 및
N-아세틸프롤릴-D-3-4-Cl-페닐알라닐-D0트립틸-N-메틸-세릴-티로실-D-2-나프틸알라닐사이클로헥실알라닐-리실-N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드.
[실시예 19]
(피로)Glu-N-Me-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-ProNHEt
Boc-His(N-im-CBZ) 대신 Boc-N-Me-Phe, Boc-D-Leu 대신 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀), 및 Boc-N-Me-Ser(OBzl) 대신 Boc-Ser(OBzl)을 사용하고 Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 용액 대신 (Cbz-p-Glu 용액에 0.1% DMAD를 가하는 것 이외에는 실시예 1에서 기술된 동일한 방법과 프로토콜을 사용한 다음, 상기에서 기술한 바와동일한 후처리를 하여 조 생성물로서 (피로)Glu-N-Me-Phe-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-ProNHEt를 수득한다. 화합물을 상기에서 기술한 바와 같이 HPLC로 처리함으로써 정제시킨다.
생성물을 27.3분에서 단일 피크로서 용출시킨다. Fab 질량 스펙트럼 m/e 1306(M+H)+. 아미노산 분석:1.0 Pro, 1.1 Arg, 1.0 Leu, 1.6 Trp, 0.9 Tyr, 0.7 Ser, 0.9 Glu.
[실시예 20]
(피로)Glu-His-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-ProNHEt
Boc-D-Leu를 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)로, Boc-N-Me-Ser(OBzl)을 Boc-Ser(OBzl)로, 및 (Boc-Tyr(O-Br-CBz)를 Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-디-Cl-Bzl)로 대체시키는 것 이외에는 실시예 1에서 기술된 동일한 방법과 프로토콜을 사용하고 Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 용액 대신 Boc-Ser-(OBzl)의 용액에 0.1% DMAP를 가한 다음, 상기에서 기술한 바와 동일하게 후처리하여 (피로)Glu-His-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-ProNHEt를 조 생성물로 수득하낟. 화합물을 상기에서 기술한 바와 같이 HPLC로 처리함으로써 정제시킨다. 생성물을 25.15분에서 단일 피크로서 용출시킨다. Fab 질량 스펙트럼 m/e 1296(M+H)+. 아미노산 분석:1.1 Pro, 1.2 Arg, L1.1 eu, 1.3 Trp, 0.7 Ser, 0.9 His, 0.9 Glu.
[실시예 22]
(피로)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-N-Me-D-Leu-Leu-Arg-ProNHEt
Boc-N-Me-Ser(OBzl)을 Boc-Ser(OBzl)로 및 Boc-D-Leu를 Boc-N-Me-D-Leu로 대체시키는 것 이외에는 실시예 1에서 기술된 동일한 방법과 프로토콜을 사용하고 Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 용액 대신에 Boc-Tyr(O-Br-CBZ) 용액에 0.1% DMAP를 가한 다음, 상기에서 기술한 바와동일하게 후처리하여 (피로)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-N-Me-D-Leu-Leu-Arg-ProNHEt를 조 생성물로 수득한다. 화합물을 상기에서 기술한 바와 같이 HOLC로 처리함으로써 정제시킨다. 생성물을 34.3분에서 단일 피크로서 용출시킨다 Fab 질량 스펙트럼 m/e 1223(M+H)+. 아미노산 분석:1.0 Pro, 0.9 Arg, 0.8 Leu, 0.8 Tyr, 0.7 Ser, 0.7 Trp, 0.9 His, 0.9 Glu.
[실시예 23]
(피로)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-N-Me-Arg-ProNHEt
Boc-N-Me-Ser(OBzl)을 Boc-Ser(OBzl)로, Boc-D-Leu를 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)로, 및 Boc-Arg(Tos)를 (Boc-N-Me-Arg(Tos)로 대체시키는 것 이외에는 실시예 1에 기술된 동일한 방법을 사용하고 Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 용액 대신 Boc-Leu의 용액에 0.1% DMAP를 가한 다음, 상기에서 기술된 바와 동일하게 후처리하여 (피로)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-N-Me-Arg-ProNHEt를 조 생성물로서 수득한다. 화합물을 상기에서 기술한 바와 동일한 조건을 사용하여 HPLC로 처리함으로써 정제시킨다. 생성물을 18분에서 단일 피크로서 용출시킨다. Fab 질량 스펙트럼:m/e 1296 (M+H). 아미노산 분석:0.95 Pro; 1.08 Leu; 2.16 Trp; 1.09 Ser; 1.00 His; 0.88 Glu.
[실시예 24]
(피로)Glu-His-N-Me-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-ProNHEt
Boc-N-Me-Ser(OBzl)을 Boc-Ser(Bzl)로, Boc-Trp(N-인돌-포르밀)을 Boc-N-Me-Trp(N-인돌-포르밀)로, 및 Boc-D-Leu를 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)로 대체시키는 것 이외에는 실시예 1에서 기술된 동일한 방법을 사용하고 Boc-His(N-im-CBZ) 용액에 0.1% DMAP를 가한 다음, 상기에서 기술한 바와동일하게 후처리하여 (피로)Glu-His-N-Me-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-ProNHEt를 수득할 수 있고, 이어서 상기에서 기술한 바와 동일한 조건을 사용하여 HPLC로 처리함으로써 정제시킨다.
[실시예 25]
(피로)Glu-His-N-Me-1-NaI-Ser-Tyr-D-Trp-N-Me-Leu-Arg-ProNHEt
Boc-N-Me-Ser(OBzl)을 Boc-Ser(OBzl)로, Boc-Trp(N-인돌-포르밀)을 Boc-N-Me-1-Nal로, Boc-D-Leu를 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)로, 및 Boc-Leu를 Boc-N-Me-Leu로 대체시키는 것 이외에는 실시예 1에서 기술된 동일한 방법을 사용하고 Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 용액 대신에 Boc(N-im-CBZ)-His 및 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀) 용액에 0.1% DMAP를 가하여 (피로)Glu-His-N-Me-1-NaI-Ser-Tyr-D-Trp-N-Me-Leu-Arg-ProNHEt를 수득할 수 있고, 이어서 상기에서 기술한 바와 동일한 조건을 사용하여 HPLC로 처리함으로써 정제시킨다.
[실시예 26]
N-Ac-3,4-데하이드로-프로-4-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
Boc-Pro-O-수지(메리필드 수지)을 Boc-D-Ala-NH-수지(4-메틸-벤즈하이드릴아민 수지)로, CBz-(피로)-Glu를 N-Ac-Pro로 Boc-His(N-im-CBZ)를 Boc-4-Cl-D-Phe로, Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 및 Boc-D-Leu를 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)로, 및 Boc-Tyr(O-2-Br-CBz)를 Boc-N-Me-Tyr(O-2,3-디-Cl-Bzl)로 대체시키는 것 이외에는 실시예 1에서 기술된 동일한 방법과 프로토콜을 사용하고 Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 용액 대신에 Boc-Ser(OBzl) 용액에 0.1% DMAP를 가하고 N-아세틸이미다졸을 사용하여 수지상의 펩타이드의 N-말단을 아실화하여 펩타이드 수지인 N-Ac-3,4-데하이드로-Pro-4-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser(OBzl)-N-Me-Tyr-(O-2,6-디-Cl-Bzl)-D-Trp(N-인돌-포르밀)-Leu-Arg(Tos)-Pro-D-Ala-NH-수지를 수득할 수 있다. 펩타이드를 5% 및 아니솔 및 5% 디메틸포스파이트의 존재하에 0℃에서 1시간 동안 HF로 처리하여 분리한다. 후처리하고 HPLC로 정제시킨 후, N-Ac-3,4-데하이드로-Pro-4-Cl-D-Phe-D-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-D-Ala NH2를 수득할 수 있다.
[실시예 27]
N-Ac-Sar-Phe-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-SarNH2
Boc-D-AlaNH-수지를 Boc-Sar-NH-수지(4-메틸-벤즈하이드릴아민 수지)로, N-Ac-3,4-데하이드로-Pro를 CBz-9-Glu로, Boc-4-Cl-D-Phe를 Boc-Phe로, 3 위치의 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)을 Boc-Trp-(N-인돌-포르밀)로, 및 Boc-Ser(OBzl)을 Boc-N-Me-Ser(OBzl)로 대체시키는 것 이외에는 실시예 26에서 기술된 동일한 방법과 프로토콜을 사용하고 Boc-Trp-(N-인돌-포르밀)의 용액에 0.1% DMAP를 가하고, HF 분리, 후처리 및 HPLC로 정제시킨 후, N-Ac-Sar-Phe-Trp-N-Me-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-SarNH2를 수득할 수 있다.
[실시예 28]
N-Ac-Sar-N-Me-His-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Tyr-Leu-Arg-Pro-NHEt
실시예 1에 기술한 동일한 프로토콜 및 방법을 사용하지만, Boc-His(N-im-CBZ)를 Boc-N-Me-His(N-im-CBZ)로, Boc-N-Me-Ser(OBzl)을 Boc-Ser-(OBzl)로, Boc-Tyr(O-2-Br-CBz)를 Bco-N-Me-Tyr(O-2, 6-di-Cl-Bzl)로, Boc-D-Leu을 Boc-D-Tyr(O-2-Br-Cbz)로 치환하고, 0.1% DMAP를 Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 용액 대신 N-Ac-Sar 용액 및 Boc-Ser(OBzl) 용액에 가하여, 후처리 및, HPLC 정제한 후, (피로)Glu-N-Me-His-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Tyr-Leu-Arg-ProNHEt를 수득할 수 있다.
[실시예 29]
N-Ac-3,4-디하이드로-Pro-D-4-Cl-Phe-D-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Arg-N-Me-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 26에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 위치로 6의 Boc-D-Trp-(N-인돌-포르밀)을 Boc-D-Arg(Tos)로, Boc-Leu을 Boc-N-Me-Leu로 치환하고, 또한 0.1% DMAP를 Boc-D-Arg(Tos) 용액에 가하여, 후처리하고 HPLC 정제한 후, N-Ac-3,4-디하이드로-Pro-D-4-Cl-Phe-D-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Arg-N-Me-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 들 수 있다.
[실시예 30]
(피로)Glu-N-Me-Phe-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-SarNH2
실시예 27에 기술한 동일한 프로토콜 및 방법을 사용하지만 Boc-Phe를 Boc-N-Me-Phe로, Boc-N-Me-Ser(OBzl)를 Boc-Ser(OBzl)로, Boc-Tyr(O-2-Br-CBZ)를 Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-di-Cl-Bzl)로 치환하고, 0.1% DMAP를 Boc-Trp(N-인돌-포르밀) 용액 대신 CBz-(피로)Glu, Boc-Ser(OBzl) 및 Boc-Pro 용액에 가하고, 이어서 HF 절단, 후처리 및 HPLC 정제를 한 후, (피로)Glu-N-Me-Phe-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-SarNH2를 수득할 수 있다.
[실시예 31]
N-Ac-Sar-His-Trp-N-Me-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-ProNHEt
실시예 1에 기술한 동일한 프로토콜 및 방법을 사용하지만 CBz-(피로)-Glu를 N-Ac-Sar로, Boc-Tyr(O-2-Br-CBZ)를 Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-di-Cl-Bzl)로, Boc-D-Leu를 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)로 치환하고, 또한 0.1% DMAP를 Boc-N-Me-Ser(OBzl) 용액에 가하여, 후처리 및 HPLC 정제를 한 후, N-Ac-Sar-His-Trp-N-Me-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-ProNHEt를 수득할 수 있다.
[실시예 32]
N-Ac-Sar-3-Tic-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-N-Me-Leu-Leu-Arg-ProNHEt
실시예 21에 기술한 동일한 프로토콜 및 방법을 사용하지만 Cbz-(피로)Glu를 N-Ac-Sar로, Boc-His(N-im-CBZ)를 Boc-3-Tic로, Boc-D-Leu을 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)로, Boc-Leu을 Boc-N-Me-Leu로 치환하고, 또한 0.1% DMAP를 Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀) 용액에 가하여, 후처리 및 HPLC 정제를 한 후, N-Ac-Sar-3-Tic-Trp-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-N-Me-Leu-Leu-Arg-ProNHEt를 수득할 수 있다.
[실시예 33]
N-Ac-D-2-Nal-N-Me-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-Lys(ε-N-니코티닐)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 1에서 기술한 방법과 유사한 방법과 합성 프로토콜을 사용하지만 Boc-Pro-O-수지(메리필드 수지)를 Boc-D-Ala-NH-수지(4-메틸-벤즈하이드릴아민 수지)로 치환하고 하기 순서와 커플링 프로토콜에 따라 아미노산을 커플링한다.
Figure kpo00073
0.1% DMAP 존재 또는 부재
합성이 종료되면 수지를 CH2Cl2/DMF 용액중 20% 피페리딘으로 밤새 처리하여 2개 Lys으로부터 FMOC 보호 그룹을 제거한다. CH2Cl2로 수회 세척하고 진공에서 건조시킨 후, 수지상 펩타이드를 펩타이드 합성기 및 2 내지 1시간 커플링 프로토콜을 사용하여 니코틴산과 커플링시킨다. 이어서 아니소로가 디메틸 포스파이드의 존재하에 0℃에서 1시간 동안 HF로 수지로부터 펩타이드를 절단시켜 조 생성물로서 N-Ac-D-2-Nal-N-Me-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-Lys(ε-N-니코티닐)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 수득한다. 펩타이드는 상기 조건을 사용하여 HPLC로 정제할 수 있다.
[실시예 34]
N-Ac-D-2-Nal-N-Me-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-Lys(N-ε-니코티닐)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys-(N-ε-이소프로필)-Pro-SarNH2
실시예 33에 기술한 동일한 방법, 프로토콜 아미노산을 사용하지만 Boc-D-Ala-수지를 Boc-Sar-NH-수지(4-메틸-벤즈히드릴아민 수지)로 치환하고 또한 0.1% DMAP를 Boc-Pro 용액에 가하여, 후처리 및 HPLC 정제한 후, N-Ac-D-2-Nal-N-Me-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-Lys(N-ε-니코티닐)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys-(N-ε-이소프로필)-Pro-SarNH2를 수득할 수 있다.
[실시예 35]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-N-Me-Ser-Lys-(N-ε-니코티닐)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys-(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 33에 기술한 동일한 방법, 프로토콜 및 아미노산을 사용하지만, Boc-N-Me-D-4-Cl-Phe를 Boc-D-4-Cl-Phe로, Boc-Ser(OBzl)을 Boc-N-Me-Ser(OBzl)로 치환하고 0.1% CMAP를 Boc-Pal 용액에만 가하고, 이어서 후처리 및 HPLC 정제를 한다. N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-N-Me-Ser-Lys-(N-ε-니코티닐)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys-(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다. Rf=16.3분 질량 스펙트럼 m/e 1605 (M+H)+.
아미노산 분석:0.9 Ala; 1.12 Pro; 2.06 Lys; 0.94 Leu.
[실시예 36]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-(N-ε-2-피콜리닐)-Leu-Lys-(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH
실시예 33에 기술한 동일한 방법, 프로토콜 및 아미노산을 사용하지만, Boc-Lys-(N-ε-FMOC)를 Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)로 치환하고 0.1% DMAP를 Boc-Ser(OBzl)의 DMF 용액에만 가하고 마지막에 니코틴산 대신 프콜린산과 커플링시킨다. 이어서 후처리 및 HPLC 정제 후, 목적하는 화합물을 수득할 수 있다.
[실시예 37]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Paa-Me-Ser-Tyr-D-Lys-(N-ε-6-메틸-니코티닐)-Leu-Lys-(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH
실시예 33에 기술한 동일한 방법, 프로토콜 및 아미노산을 사용하지만, Boc-Ser-(O-Bzl)을 Boc-N-Me-Ser(OBzl)로 치환하고, 0.1% DMAP를 Boc-D-3-Pal의 DMF 용액에만 가하고 마지막에 니코틴산 대신 6-메틸니코틴산과 커플링시키고, 이어서 후처리 및 HPLC로 정제한 후, 목적하는 화합물을 수득할 수 있다.
[실시예 38]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys-(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 33에 기술한 동일한 방법을 사용하지만 합성시에는 Boc-Lys-(N-ε-FMOC)를 Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)로 치환하고, 0.1% DMAP를 Boc-Ser(OBzl)의 DMF 용액에만 가하고 Boc-N-Me-4-Cl-Phe을 Boc-D-4-Cl-Phe로 치환하여 사용한다. 후처리 및 HPLC 정제를 한 후, 표제 화합물을 트리플루오로아세테이트염으로서 수득할 수 있다. RT=24.9분. 질량 스펙트럼 m/e 1535 (M+H)+. 아미노산 분석:0.97 Ala; 0.94 Pro; 1.04 Lys; 1.07 Leu; 0.46 Ser.
[실시예 39]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D02-Thia-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 20에 기술한 방법을 사용하지만 Boc-D-Ala-NH-수지(벤즈하이드릴아민 수지)로 시작하고 합성할 때 Cbz-피로-Glu를 N-Ac-D-4-Cl-Phe로, Boc-His(Cbz)를 Boc-D-4-Cl-Phe로, Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)을 Boc-D-2-Thia로, Boc-D-Trp(N-인돌-포르밀)을 Boc-D-Lys(N-ε-Cbz)로 치환하고, Boc-Pro를 첫번째로 수지와 커플링시키고 0.1% DMAP를 Boc-Ser(OBzl) 용액에 가한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제를 한 후, 목적하는 화합물을 트리플루오로아세테이트염으로서 수득한다.
RT=26.46분. 질량 스펙트럼 m/e (M+H)+. 아미노산 분석:0.95 Ala; 1.05 Pro; 1.00 Arg; 1.02 Leu; 0.98 Lys; 0.57 Ser.
[실시예 40]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-N-Me-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 39에 기술한 방법을 사용한다. 단 Boc-Ser(OBzl)을 Boc-N-Me-Ser(OBzl)로, Boc-N-Me-Tyr(O-di-2,6-Ci-Bzl)을 Boc-Tyr(O-2Br-Cbz)로 치환한다. 0.1% DMAP를 Boc-D-2-Thia의 용액에 가한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제를 한 후, 목적하는 화합물을 수득한다.
[실시예 41]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-N-Me-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-N-Me-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 39에 기술한 방법을 사용하지만 Boc-N-Me-Tyr(O-di-2,6-Cl-Cbz)를 Boc-Tyr(O-2-Br-Cbz)로, Boc-Arg(tos)를 Boc-N-Me-Arg(tod)를 치환한다 1% DMAP를 Boc-Leu 용액에 가한다. HF 처리, 후처리 및 정제를 한 후, 목적하는 생성물을 수득한다.
[실시예 42]
N-Ac-Gly-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-이-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시에 N-Ac-D-2-Nal을 N-Ac-Gly로 치환한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제를 한 후, N-Ac-Gly-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-이-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로 수득한다. RT=19.8분; 질량 스펙트럼 m/e 1394(M+H)+. 아미노산 분석:1.01 Ala; 1.13 Pro; 1.01 Leu; 1.01 Lys; 0.51 Ser; 0.98 Gly.
[실시예 43]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-4-Thiaz-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-AlaNH2
실시예 38에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시에 Boc-D-3-(3-피리딜)알라닐을 Boc-D-3-(4-티아졸릴)알라닐로 치환한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제를 한 후 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-4-Thiaz-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로 수득한다; RT=25.57분; 질량 스펙트럼 m/e(M+H)+. 아미노산 분석:1.12 Sar; 0.97 Pro; 1.03 Leu; 1.01 Lys; 0.49 Ser.
[실시예 45]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-N-Me-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 39에 동이한 방법을 사용하지만 합성시에 Boc-Leu를 Boc-N-M3-Leu으로 치호나하고 0.1% DMAP를 Boc-D-Lys(N-ε-Cbz)의 용액에 가한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제를 한 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-N-Me-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로 수득한다; RT=20.66분; 질량 스펙트럼 m/e 1419 (M+H)+. 아미노산 분석:1.05 Ala; 0.97 Pro; 1.05 Arg; 0.99 Lys; 0.53 Ser.
[실시예 46]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 39에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D02-Thia을 Boc-D-1-Nal로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=28.98분; 질량 스펙트럼 m/e 1488 (M+H)+. 아미노산 분석:1.00 Ala; 1.00 Pro; 1.04 Arg; 1.05 Leu; 1.03 Lys; 0.62 Ser.
[실시예 47]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Cha-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 46에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-Leu를 Boc-Cha로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Cha-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=28.98분; 질량 스펙트럼 m/e 1488 (M+H)+. 아미노산 분석:1.01 Ala; 1.00 Pro; 0.94 Arg; 0.85 Cha; 0.99 Lys; 0.59 Ser.
[실시예 48]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 46에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 N-Ac-D-4-Cl-Phe를 N-Ac-Sar로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=28.80분; 질량 스펙트럼 m/e 1338 (M+H)+. 아미노산 분석:1.01 Ala; 1.10 Pro; 0.99 Arg; 1.01 Leu; 0.99 Lys; 0.59 Ser.
[실시예 49]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 48에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-1-Nal를 Boc-D-2-Thia로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=24.04분; 질량 스펙트럼 m/e 1294 (M+H)+. 아미노산 분석:1.02 Ala; 1.10 Pro; 0.99 Arg; 0.85 Leu; 0.99 Lys; 0.52 Ser.
[실시예 50]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-3-Pal-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 48에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-Lys(N-ε-Cbz)를 Boc-D-3-Pal로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-3-Pal-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 대체한다; RT=24.81분; 질량 스펙트럼 m/e 1358 (M+H)+. 아미노산 분석:0.98 Ala; 1.02 Pro; 0.99 Arg; 1.01 Leu; 0.57 Ser.
[실시예 51]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 N-Ac-D-2-Nal를 N-Ac-Sar로, Boc-D-3-Pal를 Boc-D-1-Nal로 및 Boc-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)를 Boc-Arg(Tos)로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=20.72분; 질량 스펙트럼 m/e 1443 (M+H)+. 아미노산 분석:0.97 Ala; 1.09 Pro; 1.01 Arg; 1.06 Leu; 0.94 Lys; 0.49 Ser.
[실시예 52]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 48에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-1-Nal를 Boc-1-Nal로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=29.20분; 질량 스펙트럼 m/e 1338 (M+H)+. 아미노산 분석:1.02 Ala; 1.12 Pro; 0.99 Leu; 0.98 Lys; 0.49 Ser.
[실시예 53]
N-Ac-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 48에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 N-Ac-Sar를 N-Ac-Gly로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 N-Ac-Gly로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=21.93분; 질량 스펙트럼 m/e 1324 (M+H)+. 아미노산 분석:1.01 Ala; 1.09 Pro; 0.99 Arg; 1.03 Leu; 0.56 Ser; 0.95 Gly.
[실시예 54]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-3-Bal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 39에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-2-Thia를 Boc-D-3-Bal로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-3-Bal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=27.9분; 질량 스펙트럼 m/e 1454 (M+H)+. 아미노산 분석:0.97 Ala; 1.07 Pro; 1.00 Arg; 1.02 Leu; 1.00 Lys; 0.55 Ser.
[실시예 55]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-Trp(포르밀)-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 39에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-2-Thia을 Boc-D-Trp(포르밀)로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-Trp(포르밀)-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=39.96분; 질량 스펙트럼 m/e 1465 (M+H)+. 아미노산 분석:1.01 Ala; 0.78 Pro; 0.97 Arg; 1.01 Leu; 1.01 Lys; 0.48 Ser; 0.59 Trp.
[실시예 56]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-N-Me-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 39에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-2-Thia를 Boc-N-Me-D-1-Nal로 대체시키고 0.1% DMAP를 Bco-D-4-Cl-Phe의 용액에가한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-N-Me-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=24.86분; 질량 스펙트럼 m/e 1462 (M+H)+. 아미노산 분석:1.06 Ala; 1.10 Pro; 1.00 Arg; 1.00 Leu; 0.98 Lys; 0.57 Ser.
[실시예 57]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-N-Me-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 N-Ac-D-2-Nal를 N-Ac-D-4-Cl-Phe로, Boc-D-3-Pal를 Boc-D-2-Nal로, Boc-Leu를 Boc-N-Me-Leu로 및 Boc-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)를 Boc-Arg(Tos)로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-N-Me-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=29.05분; 질량 스펙트럼 m/e 1567 (M+H)+. 아미노산 분석:0.97 Ala; 1.09 Pro; 1.03 Arg; 1.00 Lys; 0.46 Ser.
[실시예 58]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-SarNH2
실시예 39에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-di-Cl-Bzl)를 Boc-Tyr(O-2-Br-Cbz)로 및 Boc-D-Ala-NH-수지를 Boc-Sar-NH-수지로 대체하고 0.1% DMAP를 Boc-Ser(O-Bzl) 대신 Boc-Pro 용액에 가한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-Arg-Pro-SarNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=38.52분; 질량 스펙트럼 m/e 1390 (M+H)+. 아미노산 분석:1.21 Sar; 0.91 Pro; 0.98 Arg; 1.02 Leu; 1.04 Lys; 0.96 Tyr; 0.59 Ser,
[실시예 59]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-H-Cit-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 46에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-Lys(N-ε-Cbz)를 Boc-D-H-Cit로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-H-Cit-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=26.32분; 질량 스펙트럼 m/e 1491 (M+H)+. 아미노산 분석:1.02 Ala; 1.10 Pro; 0.97 Arg; 1.10 Leu; 0.90 Lys; 0.57 Ser.
[실시예 60]
N-Ac-d-4-Cl-Phe-d-4-Cl-Phe-D-3-Bal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-이소프로필)-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 54에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-Lys(N-ε-Cbz)를 Boc-D-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-d-4-Cl-Phe-d-4-Cl-Phe-D-3-Bal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-이소프로필)-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득한다; RT=27.07분 질량 스펙트럼 m/e 1497 (M+H)+. 아미노산 분석:0.97 ala; 1.04 Pro; 0.97 Arg; 1.02 Leu; 0.53 Ser.
[실시예 61]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-3-Pal-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-Lys(N-ε-FMOC)를 Boc-D-3-Pal로 대체하고 Boc-D-3-Pal에 대해 각각 6시간의 2회의 커플링을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-3-Pal-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=25.67분; 질량 스펙트럼 m/e 1449 (M+H)+. 아미노산 분석:0.94 Ala; 1.10 Pro; 1.06 Leu; 0.54 Ser.
[실시예 62]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-2-피라진카보닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 니코틴산을 2-피라진카복실산으로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-2-피라진카보닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=26.49분; 질량 스펙트럼 m/e 1555 (M+H)+. 아미노산 분석:0.97 Ala; 1.07 Pro; 1.06 Leu; 1.02 Lys; 0.57 Ser.
[실시예 63]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys-(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 각각 2시간의 2회 커플링을 사용하고 합성시 N-Ac-D-2-Nal을 N-Ac-Sar로 및 Boc-d-3-Pal를 Boc-D-1-Nal로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys-(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=27.13분; 질량 스펙트럼 m/e 1457 (M+H)+. 아미노산 분석:0.98 Ala; 1.09 Pro; 1.08 Leu; 0.95 Lys; 0.49 Ser; 1.12 Sar.
[실시예 64]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-3-Bal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-Ala-NH2
실시예 63에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-D-1-Nal을 Boc-D-3-Bal로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-3-Bal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-Ala-NH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=23.89분; 질량 스펙트럼 m/e 1463 (M+H)+. 아미노산 분석:0.93 Ala; 1.00 Pro; 1.03 Leu; 0.97 Lys; 0.54 Ser.
[실시예 65]
N-Ac-α-Azagly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 63에 기술한 방법을 N-Ac-Sar와 커플링시키기 이전 단계에서 사용된다. 수지상의 펩타이드를 DMF(18ml) 중 카보닐이미다졸(1.13g) 용액으로 10분간 처리하고 메틸렌 클로라이드로 3회 세척하여 (1:1) DMF/메틸렌 클로라이드(18ml) 중 아세트산하이드라자이드(0.53g) 용액으로 발생 처리한다. 이어서 합성을 실시예 63에 기술한 바와 같이 계속한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-α-Azagly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득한다; RT=21.86분; 질량 스펙트럼 m/e 1444 (M+H)+. 아미노산 분석:0.95 Ala; 1.05 Pro; 1.05 Leu; 0.95 Lys; 0.49 Ser.
[실시예 66]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-2-니코티닐)-Cha-Arg-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-Leu을 Boc-Cha로 및 Boc-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)를 Boc-Arg(Tos)로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-2-니코티닐)-Cha-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=24.39분; 질량 스펙트럼 m/e 1560 (M+H)+. 아미노산 분석:1.03 Ala; 1.14 Pro; 0.96 Leu; 0.91 Cha; 1.01 Lys; 0.52 Ser.
[실시예 67]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-2-니코티닐)-N-Me-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 Boc-Leu를 Boc-N-Me-Leu로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-2-니코티닐)-N-Me-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=19.18분; 질량 스펙트럼 m/e 1549 (M+H)+. 아미노산 분석:1.00 Ala; 1.10 Pro; 1.00 Lys; 0.56 Ser.
[실시예 68]
N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-(N-ε-니코티닐)-N-Me-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2
실시예 57에서와 동일한 방법을 사용하고, 단 Boc-D-2-Nal 대신에 Boc-D-2-Thia를 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후에 N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-(N-ε-니코티닐)-N-Me-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=27.93분; 질량 스펙트럼 m/e 1524 (M+H)+. 아미노산 분석:0.98 ala; 1.10 Pro; 1.01 Arg; 1.01 Lys; 0.51 Ser.
[실시예 69]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-CO-Morph)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에서와 동일한 방법을 FMOC 그룹의 제거 단계까지 사용한다. 니코틴산과 커플링하는 대신에 수지상의 펩타이드를 우선 50% TFA/메틸렌 클로라이드 용액으로 20분 동안 탈블록킹화시킨 후, 디이소프로필에틸아민으로 세척한 다음(2X), 메틸렌 클로라이드로 세척하고, (3X) DMF(18ml)중 카보닐디이미다졸의 용액으로 10분 동안 처리한 후, 메틸렌클로라이드로 세척하고(3X), (1:1)DMF/메틸렌 클로라이드(18ml) 용액중 모르폴린(0.8ml)의 용액과 밤새 반응시킨다. 수지는 메틸렌 클로라이드로 세척하고(3X), P2O5상에서 밤새 건조시킨 후 0℃에서 1시간 동안 HF/아니졸로 처리한다. 후처리 및 HPLC 정제에 의해 트리플루오로아세테이트 염으로서 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-CO-Morph)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 수득한다; RT=23.55분; 질량 스펙트럼 m/e 1542 (M+H)+. 아미노산 분석:1.16 ala; 1.04 Pro; 0.99 Leu; 0.97 Lys; 0.35 Ser.
[실시예 70]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-CO-NMePip)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 69에 기술한 동일한 방법을 사용하지만, 합성시 모르폴린을 N-메틸-피페라진으로 대체한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-CO-NMePip)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다; RT=18.41분; 질량 스펙트럼 m/e 1556 (M+H)+. 아미노산 분석:0.93 Ala; 1.10 Pro; 1.05 Leu; 1.02 Lys; 0.55 Ser.
[실시예 71]
실시예 65와 동일한 방법을 사용하며, 단 아세트산 하이드라자이드 대신에 적절한 산 하이드라자이드로 치환하여 하기 화합물을 제조한다;
Figure kpo00074
Figure kpo00075
Figure kpo00076
[실시예 72]
실시예 65와 동일한 방법을 사용하며, 단 3-위치에서 D-1-(3-나프틸)알라닐 대신에 적절한 아미노산으로 치환하여 하기 화합물을 제조한다.
Figure kpo00077
Figure kpo00078
알라닐 아미드.
[실시예 73A]
실시예 72와 동일한 방법을 사용하며, 단 N-α-메틸-티로실 대신에 N-α-메틸-티로실(O-메틸)로 치환하여 하기 화합물을 제조한다:
Figure kpo00079
Figure kpo00080
Figure kpo00081
[실시예 73B]
3 위치에서 D-1(3-나프틸)알라닐을 적절한 아미노산을 치환하는 점을 제외하고, 실시예 63에 기술한 동일한 방법을 사용하여 하기 화합물을 제조할 수 있다:
Figure kpo00082
Figure kpo00083
Figure kpo00084
[실시예 74]
6 위치에서는 D-리실(N-ε-니코티닐)을 D-3-(3-피리딜)알라닐로 치환하는 점을 제외하고는, 실시예 72에 기술한 동일한 방법을 사용하여 하기 화합물을 제조할 수 있다:
Figure kpo00085
Figure kpo00086
Figure kpo00087
[실시예 75]
적절한 아미노산을 3 위치에서 D-3-(4-클로로페닐)알라닐을 D-3-(4-플루오로페닐)알라닐로 치환하는 점을 제외하고는, 실시예 72에 기술한 동일한 방법을 사용하여 하기 화합물을 제조할 수 있다:
Figure kpo00088
Figure kpo00089
Figure kpo00090
[실시예 76]
D-3-(4-플루오로페닐)알라닐을 D-3-(2-나프틸)알라닐로 치환하는 점을 제외하고는, 실시예 75에 기술한 동일한 방법을 사용하여 하기 화합물을 제조할 수 있다.
Figure kpo00091
Figure kpo00092
Figure kpo00093
[실시예 77]
D-3-(2-나프틸)알라닐을 D-페닐알라닐로 치환하는 점을 제외하고는, 실시예 76에 기술한 동일한 방법을 사용하여 하기 화합물을 제조할 수 있다:
Figure kpo00094
Figure kpo00095
[실시예 78]
N-Ac-D-2-Nal-α-아자-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에서 기술된 동일한 과정으로 펩타이드-잔기 Boc-D-3-Pal-Ser(O-Bzl)-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)-D-Lys(N-ε-FMOC)-Leu-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH-수지를 합성할 수 있다. 탈블록킹 용액(실시예 1을 참고)으로 Boc 그룹을 제어하기 위해 20분 동안 이 수지를 처리한 다음, 염기 세척을 2회 메틸렌 클로라이드로 3회 세척하고 10분간 DMF(18ml)하에서 카보닐디이미다졸(1.13g)과 반응시킨다. 펩타이드-잔기를 메틸렌 클로라이드로 3회 세척하고 (1:1) 메틸렌 클로라이드/DMF(18ml)중 N-Boc-N'-(4-Cl-벤질)하이드라진 용액(1.8g)과 밤새 반응시켜 N-Boc-α-아자-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser(O-Bzl)-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)-D-Lys(N-ε-FMOC)-Leu-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH-수지를 수득한다. 이것을 20분간 탈블록킹 용액으로 처리하고, 염기 세척한 후, 실시예 38에서와 동일하게 합성한다. HF로 처리한 다음, 후처리하고 HPLC로 정제하여 트리플루오로아세테이트염으로서 N-Ac-D-2-Nal-α-아자-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 수득한다.
[실시예 79]
실시예 78에서 기술한 동일한 방법을 사용하고 N-Boc-N'-(4-Cl-벤질)하이드라진을 적절한 N-Boc-N'-아릴-하이드라진 또는 N-Boc-N'-알킬-하이드라진으로 치환하여 다음의 화합물들이 수득한다.
Figure kpo00096
Figure kpo00097
[실시예 80]
N-Ac-α-아자-Gly-α-아자-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-AlaNH2
Boc-α-아자-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser(O-Bzl)-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)-D-Lys(N-ε-FMOC)-Leu-Lys(N,N-ε-이소프로필 Cbz)-Pro-D-AlaNH-수지의 펩타이드를 합성하는데 있어서, 실시예 65에서 기술한 동일한 방법을 사용한다. 이 수지를 탈블록킹화한 후, 카보닐디이미다졸과 반응시키고, 실시예 65에서 기술한 바와 같이 아세트산 하이드라지드와 반응시켜 N-Ac-α-아자-Gly-α-아자-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser(O-Bzl)-N-Me-Tyr-(O-2,6-diCl-Bzl)-D-Lys(N-ε-FMOC)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH-잔기를 수득한다. 실시예 65에서 기술한 바와 같이, 합성을 진행한다. HF 처리 후, 후처리한 다음, HPLC 정제로 N-Ac-α-아자-Gly-α-아자-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득한다.
[실시예 81]
Boc-D-1-Nal을 적절한 Boc-D-아미노산으로 치환한 것 외에는, 실시예 80에서 기술한 동일한 과정을 사용하여 다음의 화합물들을 수득할 수 있다:
Figure kpo00098
Figure kpo00099
[실시예 82]
N-Ac-Sar-α-아자-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 80에서 기술한 방법을 이 단계에서 사용하여, Boc-α-아자-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser(OBzl)-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)-D-Lys(N-ε-FMOC)-Leu-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH-수지를 수득한다. 이 수지를 N-Ac-Sar에 커플링시키고 실시예 63에서 기술한 바와 같이 합성을 완료시킨다. HF 처리 후, 후처리하고, HPLC 정제로 N-Ac-Sar-α-아자-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로써 수득한다.
[실시예 83]
Boc-D-1-Nal 대신에 적절한 Boc-D-아미노산을 치환하는 것 외에는 실시예 82에서 기술한 방법을 사용하여 다음의 화합물들을 수득할 수 있다.
N-아세틸-사르코실-α-아자-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(3-벤즈티에닐-알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-사르코실-α-아자-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(2-티에닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-사르코실-α-아자-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-트립틸-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-사르코실-α-아자-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-트립틸(N-인돌-포르밀)-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-사르코실-α-아자-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드; 및
N-아세틸-사르코실-α-아자-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(4-메톡시페닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드.
[실시예 84]
합성에 있어서 Boc-D-3-Pal 대신 Boc-D-아미노산으로 치환하는 것 외에는, 실시예 38에 기술한 같은 방법을 사용한다. HF 처리 후, 후처리하고, HPLC 정제로 다음 화합물들을 수득한다.
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(1-나프틸)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(3-벤즈티에닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(2-티에닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라밀아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(2-나프틸)알라닐-세릴-N-α=메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-트립틸(N-인돌-메틸)-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)-알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(4-메톡시페닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐- D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-티로실(O-메틸)-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(3-퀴놀릴)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드; 및
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(사이클로헥실)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드.
[실시예 85]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-N-α-아자-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-Ser(O-Bzl)-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)-D-Lys(N-ε-FMOC)-Leu-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH-수지단계까지 실시예 38에서 기술된 방법을 사용한다. 수지를 탈블록킹용액으로 20분동안 처리하여 Boc 그룹을 제거하고, 염기로 세척한 다음 카보닐디이미다졸과 10분동안 반응시키고 메틸렌 클로라이드로 3회 세척한 후 실시예 78에 기술된 것과 같은 N-Boc-N'-(3-피리딜메틸)하이드라진과 밤새 반응시켜 Boc-α-아자-3-Pal-Ser(O-Bzl)-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)-D-Lys(N-ε-FMOC)-Leu-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH-수지를 수득한다. 상기 수지를 탈블록킹시킨 다음, 실시예 38에 기술된 바와 같이 Boc-D-4-Cl-Phe 및 N-Ac-D-2-Nal과 커플링시킨다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC 정제후, N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-N-α-아자-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 86]
실시예 85에 기술된 방법을 사용하되, N-α-아자-3-Pal 대신 적절한 N-α-아자-아미노산을 사용하여 하기 화합물을 제조할 수 있다.
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-알파-아자-3-(1-나프틸)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-알파-아자-3-(3-벤즈티에닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-α-아자-트립틸-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-α-아자-트립틸(N-인돌-포르밀)-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-α-아자-트립틸(N-인돌-메틸)-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-α-아자-3-(4-메틸페닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실(리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-α-아자-3-(2-티에닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-α-아자-3-(4-클로로페닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-α-아자-3-(4-메톡시페닐)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-α-아자-3-(3-퀴놀릴)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드; 및
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)-알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-N-α-아자-3-(사이클로헥실)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실(N-ε-니코티닐)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드.
[실시예 87]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Dl-Phe-D-1-Nal-N-Me-Ser-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-N-Me-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 65에 기술된 방법을 사용하되, Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl) 대신 Boc-Tyr(O-2-Br-Cbz)를 사용하고 Boc-Leu 대신에 Boc-N-Me-Leu를 사용하며 Boc-D-1-Nal과 Boc-D-Lys(N-ε-FMOC)의 용액에 0.1%의 DMAP를 첨가한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Dl-Phe-D-1-Nal-N-Me-Ser-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-N-Me-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 88]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-N-Me-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(M-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 87에 기술된 방법을 사용하되, Boc-Tyr(O-2-Br-Cbz) 대신 Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)를 사용하고, Boc-N-Me-Leu 대신 Boc-Leu를 사용하며 Boc-D-Lys(N-ε-FMOC) 대신 Boc-N-Me-Ser(O-Bzl)의 용액에 0.1%의 DMAP를 첨가한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-N-Me-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(M-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 89]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Thr-N-Me-Tyr-D-Lys-(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 65에 기술된 방법을 사용하되, Boc-Ser(O-Bzl) 대신 Boc-Thr(O-Bzl)을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Thr-N-Me-Tyr-D-Lys-(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 90]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ala-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-N-Me-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 65에 기술된 방법을 사용하되, Boc-Ser(O-Bzl) 대신 Boc-Ala를 사용하고, Boc-Leu 대신 Boc-N-Me-Leu를 사용하며 Boc-Lys(N-ε-FMOC)의 용액에 0.1%의 DMAP를 첨가한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ala-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-N-Me-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 91]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Gln-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 65에 기술된 방법을 사용하되, Boc-Ser(O-Bzl) 대신 Boc-Gln을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Gln-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 92]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr(O-Me)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 38에 기술된 방법을 사용하되, Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl) 대신 Boc-N-Me-Tyr(O-Me)를 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr(O-Me)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 93]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-(O-Me)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 65에 기술된 방법을 사용하되, Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl) 대신 Boc-N-Me-Tyr(O-Me)를 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-(O-Me)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 94]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Phe-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 93에 기술된 방법을 사용하되, Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl) 대신에 Boc-N-Me-Phe를 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Phe-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 95]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-4-F-Phe-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 94에 기술된 방법을 사용하되, Boc-N-Me-Phe 대신 Boc-N-Me-4-F-Phe를 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-4-F-Phe-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 96]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-3-Bal-Ser-N-Me-Tyr(O-Me)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
실시예 63에 기술된 방법을 사용하되, Boc-D-1-Nal 대신 Boc-D-3-Bal를 사용하고 Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl) 대신 Boc-N-Me-Tyr(O-Me)를 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-3-Bal-Ser-N-Me-Tyr(O-Me)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 97]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Arg-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)를 Boc-N-Me-Arg(Tos)로 치환시키는 것을 제외하고는 실시예 65의 공정을 사용한다. HF 후처리 및 HPLC 정제후에 N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Arg-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 98]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Lys-(N-ε-니코티닐)-D-Lys(N-ε-니코티닐)Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)를 Boc-N-Me-Lys(N-ε-FMOC)로 치환시키는 것을 제외하고는, 실시예 38의 공정을 사용하고 FMOC 제거후에 2배량의 니코틴산을 사용하여 커플링한다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC 정제 후에 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Lys-(N-ε-니코티닐)-D-Lys(N-ε-니코티닐)Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 99]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Orn(N-δ-니코티닐)-D-Trp-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-N-Me-Lys(N-ε-FMOC)를 Boc-N-Me-Orn(N-δ-FMOC)롤 그리고 Boc-D-Lys(N-ε-FMOC)를 Boc-D-Trp로 치환시키고, 2배량의 니코틴산이 없는 것을 제외하고는 실시예 98의 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC 정제후에 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Orn(N-δ-니코티닐)-D-Trp-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 100]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Arg-D-Lys(N-ε-아니식)-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
니코틴산을 4-메톡시벤조산으로 그리고 Boc-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)를 Boc-Arg(Tos)로 치환시키는 것을 제외하고는 실시예 97의 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC 정제후에 N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Arg-D-Lys(N-ε-아니식)-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 101]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Arg-D-Lys(N-ε-아니식)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)를 Boc-N-Me-Arg(Tos)로, Boc-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)를 Boc-Arg(Tos)로 그리고 니코틴산을 4-메톡시벤조산으로 치환시키는 것을 제외하고는 실시예 38의 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC, 정제후에 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Arg-D-Lys-N-ε-아니식)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 102]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Hcit(NH2)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)을 Boc-N-Me-Lys(N-ε-FMOC)로 그리고 Boc-D-Lys(N-ε-FMOC)를 Boc-D-Lys(N-ε-니코티닐)로 치환시키는 것을 제외하고는, 실시예 38의 공정을 사용한다 합성이 종결되면, 수지를 DMF 중의 30% 피페리딘(30ml)으로 밤새 처리하여 FMOC 그룹을 제거하고, 메틸렌 클로라이드로 3회 세척한 후, DMF(18ml)중의 카보닐디이미다졸의 용액(1.13g)과 반응시키고, 메틸렌 클로라이드로 3회 세척한후, 메틸렌 클로라이드/DMF(1:1)(18ml)중의 무수 하이드라진의 용액(2ml)과 밤새 반응시킨다. 수지를 메틸렌 클로라이드로 3회 세척하고, 건조시킨후, HF/아니졸로 처리한다. 후처리 및 HPLC 정제후에 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Hcit(NH2)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 103]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Hcit(NHAc)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
무수 하이드라진을 아세트산 하이드지드로 치환시키는 것을 제외하고는, 실시예 102의 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC 정제후에 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Hcit(NHAc)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 104]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-Tmp-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-D-1-Nal를 Boc-D-Tmp로 치환시키는 것을 제외하고는 실시예 65의 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC 정제 후에 N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-Tmp-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 105]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-3-Bal-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-D-Lys(N-ε-FMOC)를 Boc-D-3-Bal로 치환시키는 것을 제외하고는 실시예 39의 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC 정제후에 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-3-Bal-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 106]
Boc-D-3-Bal을 적절한 Boc-D-아미노산으로 치환시키는 것을 제외하고는 실시예 105의 공정을 사용하여 다음과 같은 화합물들을 수득할 수 있다:
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(3-피리딜)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-리실-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(3-피리딜)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-오르니틸-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(3-피리딜)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-시트룰릴-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(3-피리딜)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-호모시트룰릴-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드;
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(3-피리딜)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-아르기닐(NG-디에틸)-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드; 및
N-아세틸-D-3-(2-나프틸)알라닐-D-3-(4-클로로페닐)알라닐-D-3-(3-피리딜)알라닐-세릴-N-α-메틸-티로실-D-아르기닐-루이실-리실(N-ε-이소프로필)-프롤릴-D-알라닐아미드.
[실시예 107]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-아니식)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
2-파라진카복실산을 4-메톡시벤조산으로 치환시키는 것을 제외하고는 실시예 62의 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC 정제후에 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-아니식)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 108]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Ser(O-α-L-Rha)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
펩타이드 Leu-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH2를 실시예 38에 기술된 고상 합성법으로 제조한다. 이 펩타이드를 DCC 및 HOBt의 존재하에서 DMF 중의 N-α-FMOC-D-Ser(O-트리-Ac-α-L-람노실)-OH에 커플링시키고 정제후에 4-D-Ser-O-트리-Ac-L-람노실)-Leu-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH2를 수득한다. 수득한 펩타이드를 상술한 조건을 사용하여 Boc-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-OH에 커플링시켜 Boc-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr=D-Ser-(O-트리-Ac-L-람노실)-Lu-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH2를 수득한다. 수득한 펩타이드를 상술한 조건을 사용하여 정제하고 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-OH에 커플링시켜, N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Ser-(O-트리-Ac-L-람노실)-Leu-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz)-Pro-D-AlaNH2를 수득한다. 펩타이드를 Pd 촉매의 존재하에 pH 4.5에서 메탄올 중에서 촉매적으로 수소화된다. 반응이 종결되면 촉매를 여과하고 여액을 진공중에서 농축한다. 잔사를 디메틸 아세트아미드 중에 용해시키고 실온에서 4시간 동안 하이드라진 수화물로 처리한다. 진공중에서 용매 제거 및 HPLC 정제 후에 잔사 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Ser(O-α-L-Rha)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 109]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Cha-Lys(N-ε-이소프로필)Pro-D-AlaNH2
Boc-Leu를 Boc-Cha로 치환시키는 것을 제외하고는, 실시예 38의 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리, 및 HPLC 정제 후에 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Cha-Lys(N-ε-이소프로필)Pro-D-AlaNH2를 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득할 수 있다.
[실시예 110]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-N-Me-Cha-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-Leu 대신 Boc-N-Me-Cha를 사용하고 Boc-D-Lys(N-ε-FMOC)의 용액에 0.1% DMAP를 가하는 것을 제외하고는, 실시예 63에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후, N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-N-Me-Cha-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2가 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 111]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Ileu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-Leu를 Boc-Ileu로 대체시키는 것을 제외하고는, 실시예 65에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Ileu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2가 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 112]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Ser-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2
Boc-Leu 대신 Boc-Ser(O-Bzl)를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 63에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-Sar-D-r-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-(N-ε-니코티닐)-Ser-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2가 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 113]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Ser-N-Me-Arg-Pro-DlaNH2
Boc-Arg(Tos) 대신 Boc-N-Me-Arg(Tos)를 사용하고 Boc-Leu 용액에 0.1% DMAP를 가하는 것을 제외하고는, 실시예 51에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Ser-N-Me-Arg-Pro-DlaNH2가 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 114]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys-Pro-D-AlaNH2
Boc-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz) 대신 Boc-Lys(N-ε-Cbz)를 사용하는 것을 제외하고, 실시예 38에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제 후, N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys-Pro-D-AlaNH2가 트리플루오로 아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 115]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-사이클로헥실)-Pro-D-AlaNH2
Boc-Lys(N.N-ε-이소프로필, Cbz) 대신 Boc-Lys(N,N-ε-사이클로헥실, Cbz)를 사용하는 것을 제외하고, 실시예 38에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-사이클로헥실)-Pro-D-AlaNH2가 트리플루우로아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 116]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Hcit-Pro-D-AlaNH2
Boc-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz) 대신 Boc-Hcit를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 38에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Hcit-Pro-D-AlaNH2가 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 117]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-CO-hyz)-Pro-D-AlaNH2
Boc-Lys(N,N-ε-이소프로필, Cbz) 대신 Boc-Lys(N-ε-FMOC)를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 38에 기술된 공정을 사용하여 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser(O-Bzl)-N-Me-Tyr(O-2,6-diCl-Bzl)-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-FMOC)-Pro-D-AlaNH-수지를 획득한다. 이 수지를 30% 피페리딘-DMF 용액으로 밤새 처리하고, 메틸렌 클로라이드로 3회 세척한 다음, DMF(18ml) 중 카보닐디이미다졸(1.13g)의 용액과 10분 동안 반응시킨후, 메틸렌 클로라이드로 3회 세척하고, (1:1) DMF/메틸렌 클로라이드중 무수 하이드라진(1.5ml)의 용액으로 밤새 처리하고, 건조시킨 다음, 0℃에서 HF/아니솔로 1시간동안 처리한다. 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-CO-hyz)-Pro-D-AlaNH2가 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 118]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-CO-hyzAc)-pro-D-AlaNH2
무수 하이드라진 대신 아세트산 하이드라지드를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 117에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후 N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-CO-hyzAc)-pro-D-AlaNH2가 트리플루오로아세테이트 염으로 수득될 수 있다.
[실시예 119]
N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-아자-GlyNH2
Boc-D-Ala-NH-수지 대신 Boc-아자-Gly-NH-수지를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 63에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-Sar-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-아자-GlyNH2가 트리플루오로아세테이트 염으로 수득될 수 있다.
[실시예 120]
N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-SerNH2
Boc-D-Ala-NH-수지 대신 Boc-D-Ser-NH-수지를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 63에 기술된 공정을 사용한다. HF 처리, 후처리 및 HPLC 정제후, N-Ac-아자-Gly-D-4-Cl-Phe-D-1-Nal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-SerNH2가 트리플루오로아세테이트 염으로서 수득될 수 있다.
[실시예 121]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-NMe-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-AzaglyNH2
N-Ac-Sar 대신 N-Ac-D-2-Nal을 사용하고 Boc-D-1-Nal 대신 Boc-D-3-Pal을 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 119에 기술된 공정을 사용하여 표제화합물을 수득한다.
[실시예 122]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Arg-D-Mbha-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
Boc-D-2-Thia 대신 Boc-D-3-Pal을 사용하고 Boc-N-Me-Tyr(O-2,6-DicL-Bzl) 대신 Boc-N-Me-Arg(Tos)를 사용하고 Boc-D-Lys(N-ε-Cbz) 대신 Boc-D-4-(4-메톡시벤조일) HomoAla를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 39에 기술된 공정을 사용하여 표제화합물을 수득한다.
[실시예 123]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Harg(NG,NG-diEt)-Leu-Harg(NG,NG-diEt)-Pro-D-AlaNH2
Boc-D-Lys(N-ε-FMOC)를 Boc-D-HomoArg(NG,NG-diEt) p-톨루엔설포네이트로 대체시키고 Boc-Lys(N-ε-이소프로필, Cbz)를 Boc-HomoArg(NG,NG-diEt) p-톨루엔설포네이트로 대체시킴으로써, 실시예 38에 기술된 공정을 사용하여 표제 화합물을 수득한다.
[실시예 124]
N-Ac-D-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-NMeTyr-D-Cit-Leu-Arg-Pro-D-AlaNH2
Boc-2-Thia 대신 Boc-D-3-Pal을 사용하고 Boc-D-Lys(N-ε-Cbz) 대신 Boc-D-Cit를 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 39에 기술된 공정을 사용하여 표제화합물을 수득한다.
분석공정
본 발명의 화합물의 생물학적 활성은 하기의 분석에 의해 측정된다:
(a) 수용체 결합
방사성 리간드 수용체 결합분석은 하기 문헌에 기술된 방법과 유사한 방법으로 수행한다(참조:J. Marion et al., Mol. Pharmacol. 19 399(1981)). (D-Leu6-desGly10)-LHRH 에틸 아미드를 클로라민-T법에 의해 방사성 요오드화 처리하고, 방사성 리간드로서 사용한다. 래트의 급속-냉동된 뇌하수체(Hilltop Labs로부터 수득)로부터 뇌하수체 막-함유 LHRH 수용체를 배치식으로 제조한다. 방사성 리간드(50pM), 수용체, 및 시험 화합물을 4℃에서 2시간 동안 함께 항온처리시킨다. 결합된 리간드를 원심분리 및 흡출에 의해 유리 리간드로부터 분리한다. 화합물을 6중분의 1/2-log 농도에서 시험하고, 특이 결합 방사성 리간드의 50%를 대체시키는 농도로부터 평형 해리 상수의 -log값(pKI)을 계산한다.
(b) 시험관내 LH 방출
상기 분석은 문헌(참조:H. A. Jinnah and P. M. Conn, Endrocrinology 118 2599(1986))으로부터 채택된다. 미성숙 암컷 래트로부터 래트 뇌하수체를 회수하여, 잘게 썰고 콜라게나제/히알루로니다제로 분해시킨다. 이를 48개-웰 미세역가 평판에 부착시킨 다음, 시험화합물에 37℃에서 3시간 동안 노출시킨다. 배지를 RIA(방사선 면역검정)로 방출된 LH에 대해 분석한다. 상기 분석법을 사용하여 LH의 최대 방출을 1/2을 산출하는 -log 농도(pD2)로부터 LHRH 효능제의 효능을 정량적으로 측정한다.
LHRH 길항제를 분석하기 위하여, 외인성 슈퍼 효능제(D-Leu6-Pro9NHEt) LHRH를 가한다. 길항제에 의한 LH 방출억제는 투여량과 관련되어 있다. 상기 분석으로 LH의 최대 억제의 1/2을 산출하는 -log 농도(PA2)부터 LHRH 길항제의 효능을 측정한다.
(c) 생체내 LH 방출
시험할 화합물을 난소 제거시킨 래트에게 정맥내 투여하고 여러 시점에서 혈청 LH 농도를 RIA로 측정한다. 시간 적분된 LH 반응을 계산하고 최대 LH 방출의 1/2을 산출하는 용량(ED50)을 기록한다.
(d) 생체내 LH 억제
시험할 화합물을 30ug/kg으로 난소 제거시킨 암컷 래트에게 블러스 주입으로 근육내 투입하고 혈액 샘플을 24시간에 걸쳐 주기적으로 수집한다. 시간의 함수로서 LH 억제 데이타의 AUC(커브 아래 영역)를 log(LHt/LHi)(여기서 LHt는 t·시간에서의 혈중 LH 농도이고 LHi는 혈중 LH 농도에 대한 초기 기초 값이다)를 사용하여 계산한다. AUC 값은 음수이다.
(e) 효소분해에 대한 안정성
본 발명 화합물의 장내 안정성을 재관류 시스템(reperfusion system)으로 시험관내 래트 공장을 사용하여 측정한다. 분획적 점막 손실은 루미날 배스(luminal bath) 도입 30분 경과후 화합물의 상대적인 분해속도의 척도이다(제1도 참조).
대표적인 화합물의 시험관내 및 생체내 생물학적 활성을 하기에 나타낸다:
상기 내용은 단지 본 발명을 설명하기 위함이며 기술된 화합물로 본 발명을 제한하고자 함은 아니다. 본 기술분야의 숙련가에게 있어서 첨부되는 특허청구의 범위에서 정의되는 본 발명의 범주 및 성질내에서의 변형 및 변화는 명백하다.
Figure kpo00100

Claims (12)

  1. 서열식(Ⅰ)의 펩타이드.
    Figure kpo00101
    Figure kpo00102
    Figure kpo00103
  2. 제1항에 있어서, R°가 메틸인 펩타이드.
  3. 서열식(Ⅰ)의 펩타이드.
    Figure kpo00104
    Figure kpo00105
    D는 L-세릴 및 N-메틸-L-세릴로 이루어진 그룹중에서 선택된 아미노 아실 잔기이며;
    Figure kpo00106
    Figure kpo00107
  4. 서열식(Ⅰ)의 펩타이드.
    Figure kpo00108
    Figure kpo00109
  5. Figure kpo00110
    N-Ac-D-4-Cl-Phe-D-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys-D-Lys-Leu-Arg-Pro-AlaNH2;
    Figure kpo00111
    Figure kpo00112
    피로-Glu-His-Trp-N-Me-Ser-N-Me-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NHEt; 및 N-Ac-D-4-Cl-Phe-d-4-Cl-Phe-D-2-Thia-Ser-Tyr-D-Lys-Leu-N-Me-Arg-Pro-D-AlaNH2로 이루어진 그룹 중에서 선택된 화합물.
  6. N-Ac-3-2-Nal-D-4-Cl-Phe-D-3-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Lys(N-ε-니코티닐)-Leu-Lys(N-ε-이소프로필)-Pro-D-AlaNH2또는 약제학적으로 허용되는 이의 염.
  7. LHRH 길항 활성을 갖는 서열식(Ⅰ)의 화합물.
    Figure kpo00113
    N-아세틸-α-아자-페닐알라닐,
    N-메틸-α-아자-피로글루타밀,
    Figure kpo00114
    Figure kpo00115
    Figure kpo00116
    Figure kpo00117
    Figure kpo00118
    Figure kpo00119
    I는 L-프롤릴, L-피페콜일 및 N-메틸-L-알라닐로 이루어진 그룹중에서 선택된 아미노 아실 또는 지방족 아미노 아실 잔기이고;
    Figure kpo00120
    아미드 결합의 질소원자가 알킬화된 것이다.
  8. 하기 서열식의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
    Figure kpo00121
    Figure kpo00122
  9. N-아세틸-아자-글리실-D-4-클로로페닐알라닐-D-3-(벤조(b)티엔-3-일)알라닐-세릴-N-메틸틸실-D-(N-ε-니코티닐-리실-루이실-(N-ε-이소프로필)리실-프롤릴-D-알라닐아미드인 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염.
  10. 약제학적 담체 및 치료학적 유효량의 제1항의 LHRH 길항 화합물을 함유하는 암수 포유동물에서 성호르몬의 수준을 억제하기 위한 약제학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 제1항의 LHRH 길항 화합물이 치료학적 유효량의 항안드로겐제와 배합된 조성물.
  12. 약제학적 담체 및 치료학적 유효량의 제7항의 LHRH 길항 화합물을 함유하는, 암수 포유동물에서 성호르몬의 수준을 억제하기 위한 약제학적 조성물.
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