JPS6197300A - エストリオ−ル３−サルフエ−ト−６−ｏ−置換ｂｓａ複合体ならびにその製造法 - Google Patents
エストリオ−ル３−サルフエ−ト−６−ｏ−置換ｂｓａ複合体ならびにその製造法Info
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- JPS6197300A JPS6197300A JP59218275A JP21827584A JPS6197300A JP S6197300 A JPS6197300 A JP S6197300A JP 59218275 A JP59218275 A JP 59218275A JP 21827584 A JP21827584 A JP 21827584A JP S6197300 A JPS6197300 A JP S6197300A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は式、
Ｈ
ＮＯＣＨ２ＣＯＮＨＢＳＡ
（式中、ＮＨＢＳＡはウシ血清アルブミンの残基を表わ
す） で表わされるエストリオール３−サルフェート−６−０
−置換ＢＳＡ複合体訃よびその製造法に関する。
す） で表わされるエストリオール３−サルフェート−６−０
−置換ＢＳＡ複合体訃よびその製造法に関する。
さらに詳しく言えば、本発明は、エストリオール３−サ
ルフェートのラジオイムノ７シセイに使用される新規な
抗体を製造するのに有用な新規な抗原であるエストリオ
ール３−サルフェート−６−６−置換ＢＳＡ複合体（前
記式りならびにその製造法を提供するものである。
ルフェートのラジオイムノ７シセイに使用される新規な
抗体を製造するのに有用な新規な抗原であるエストリオ
ール３−サルフェート−６−６−置換ＢＳＡ複合体（前
記式りならびにその製造法を提供するものである。
エストリオール３−サルフェートは、＠娠母体中におい
て胎児が積極的に合成する代謝産物であると報告されて
おシ、妊娠過程の胎盤の診断あるいは胎児の機能（発育
）の診断において、そのエストリオール３−サルフエー
トヲ測定スることは極めて重要な意義を有する。ところ
で、従来、そのエストリオール３−サルフエートヲ直接
測定するだめの信頼性の高い方法は、未だに開発されて
いない。本発明者らは、ニス計ＩＪオール３−サルフェ
ートに対して特異性を有する抗体を産生じ、さらに標識
抗原を合成して、こレヲ用いて、エストリオール３−サ
ルフェートを直接ラジオイムノアッセイにより測定する
ための方法につき種々研究を行った結果、前記式（１１
で表わされる新規なエストリオール３−サルフエー）−
６−０−置換ＢＳＡ複合体を製造することに成功した。
て胎児が積極的に合成する代謝産物であると報告されて
おシ、妊娠過程の胎盤の診断あるいは胎児の機能（発育
）の診断において、そのエストリオール３−サルフエー
トヲ測定スることは極めて重要な意義を有する。ところ
で、従来、そのエストリオール３−サルフエートヲ直接
測定するだめの信頼性の高い方法は、未だに開発されて
いない。本発明者らは、ニス計ＩＪオール３−サルフェ
ートに対して特異性を有する抗体を産生じ、さらに標識
抗原を合成して、こレヲ用いて、エストリオール３−サ
ルフェートを直接ラジオイムノアッセイにより測定する
ための方法につき種々研究を行った結果、前記式（１１
で表わされる新規なエストリオール３−サルフエー）−
６−０−置換ＢＳＡ複合体を製造することに成功した。
本発明によす、エストリオール３−サルフェートに対し
て、特異性を有する抗体がはじめて、提供され、それに
より、エストリオール３−サルフェート特に、体液中の
ニス計ＩＪオール３−サルフエートの精度の高い測定が
可能となったものである。
て、特異性を有する抗体がはじめて、提供され、それに
より、エストリオール３−サルフェート特に、体液中の
ニス計ＩＪオール３−サルフエートの精度の高い測定が
可能となったものである。
したがって、本発明は、前記式（Ｉ）で表わされる新規
なニス計りオール３−サルフェート−６−〇−置換ＢＳ
Ａ複合体およびその製造法を提供するものである。
なニス計りオール３−サルフェート−６−〇−置換ＢＳ
Ａ複合体およびその製造法を提供するものである。
前記式（Ｉ）で表わされるエストリオール３−サルフエ
ー）−６−０−置換ＢＳＡ複合体は、既知物質から出発
して、以下の反応式で表わされる過程により、製造され
る。なお、式中のＲはアシル基を表わし、ＮＩ（ＢＳＡ
はウシ血清アルヅミ／の残基を表わす。
ー）−６−０−置換ＢＳＡ複合体は、既知物質から出発
して、以下の反応式で表わされる過程により、製造され
る。なお、式中のＲはアシル基を表わし、ＮＩ（ＢＳＡ
はウシ血清アルヅミ／の残基を表わす。
Ｍ （Ｘ”ｒ
■ （Ｉｎ）（［ｒｌ（１
１ 以下に本発明の詳細な説明する。
１ 以下に本発明の詳細な説明する。
まず、前記式吹）で表わされる６−オキツエストリオー
ルー１６ 、１７−ジアンレートは以下の如くして製造
される。
ルー１６ 、１７−ジアンレートは以下の如くして製造
される。
６−オキツエストリオールー３，１６．１７− ）ジア
ジレート（ロ）のアシル基をに２Ｃ０３で処理すること
により部分的に加水分解させ、６−オキンエストリオー
ルー１６ 、１７− ）アシレート（ｖ）を生成させる
。次いで、得られる式（ｖ）のシア７レートをトリメチ
ルシリルエーテルに変換する（これは質量スはクトル分
析により確認することができる）。
ジレート（ロ）のアシル基をに２Ｃ０３で処理すること
により部分的に加水分解させ、６−オキンエストリオー
ルー１６ 、１７− ）アシレート（ｖ）を生成させる
。次いで、得られる式（ｖ）のシア７レートをトリメチ
ルシリルエーテルに変換する（これは質量スはクトル分
析により確認することができる）。
弐Ｎ）のジアジレートを０−力ルボキシメチルヒドロキ
シアミンとそれ自体既知の方法で縮合させることにより
、式■のカルボキシメチルオキシム誘導体を生成させる
ことができる。こうして得られた式■のカルボキシメチ
ルオキシム誘導体をクロルスルホン酸もしくはその反応
性誘導体と反応させ、式（ＩＩｒ）の３−サルフェート
を生成させる。次いで、この３−サルフェートを加水分
解することによシ、弐（ＩＴ）のエストリオール−３−
サルフェートカルホキツメチルオキシム誘導体が得られ
る。
シアミンとそれ自体既知の方法で縮合させることにより
、式■のカルボキシメチルオキシム誘導体を生成させる
ことができる。こうして得られた式■のカルボキシメチ
ルオキシム誘導体をクロルスルホン酸もしくはその反応
性誘導体と反応させ、式（ＩＩｒ）の３−サルフェート
を生成させる。次いで、この３−サルフェートを加水分
解することによシ、弐（ＩＴ）のエストリオール−３−
サルフェートカルホキツメチルオキシム誘導体が得られ
る。
エストリオール−３−サルフェートカルボキシメチルオ
キシム誘導体（■）とウシ血清アルブＳン（ＢＳｋ）と
の複合体の１成。
キシム誘導体（■）とウシ血清アルブＳン（ＢＳｋ）と
の複合体の１成。
式（１［）のカルボキシメチルオキシム誘４体とＢ Ｓ
、Ａとを水溶性カルボジイミド例えば、ｌ −エチル−
３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドを
用いて温和な条件下に反応させると、式（Ｉ）で表わさ
れるニス） ｌ）オール−３−サルフエ−１−７６−０
−置換ＢＳＡ複合体が得られる。本発明者らは、完全な
官能性基を有するハプテン−ＢＳＡ複合体（Ｉ）の生成
が、活性化されているエステル化剤ではなく、通常のカ
ルボジイミドを使用することにより達成し得ることを見
い出した。得られだノ・ブテン−ＢＳＡ複合体およびＢ
ＳＡの呈色反応におけるスＲクトルは・・ブチ／分子が
この抗原のＢＳＡに充分に結合していることを示す。
、Ａとを水溶性カルボジイミド例えば、ｌ −エチル−
３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドを
用いて温和な条件下に反応させると、式（Ｉ）で表わさ
れるニス） ｌ）オール−３−サルフエ−１−７６−０
−置換ＢＳＡ複合体が得られる。本発明者らは、完全な
官能性基を有するハプテン−ＢＳＡ複合体（Ｉ）の生成
が、活性化されているエステル化剤ではなく、通常のカ
ルボジイミドを使用することにより達成し得ることを見
い出した。得られだノ・ブテン−ＢＳＡ複合体およびＢ
ＳＡの呈色反応におけるスＲクトルは・・ブチ／分子が
この抗原のＢＳＡに充分に結合していることを示す。
以下に、本発明を具体的な実施例により説明する。
下記の実施例において、融点は、ヤナギモト融点測定装
置を使用して測定したものである（未補正）。工Ｒスズ
クトルは、ＫＢｒ−ＦレットでＨｉｔａｃｈｉ Ｐｅｒ
ｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ２２５分光計を用いて測定したも
のであり、ＭｓスはクトルおよびＮＭＲスはクトルはＨ
ｉｔａｃｈｉ ＲＭＵ −７Ｍ分光計およびＪＥＯＪＪ
ＮＭ ＦＸ −１００分光計でそれぞれ記録したもので
ある。ＴＬＣは、シリカゲルＧまたはＨＦ０層で被覆さ
れている板上で行なった。
置を使用して測定したものである（未補正）。工Ｒスズ
クトルは、ＫＢｒ−ＦレットでＨｉｔａｃｈｉ Ｐｅｒ
ｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ２２５分光計を用いて測定したも
のであり、ＭｓスはクトルおよびＮＭＲスはクトルはＨ
ｉｔａｃｈｉ ＲＭＵ −７Ｍ分光計およびＪＥＯＪＪ
ＮＭ ＦＸ −１００分光計でそれぞれ記録したもので
ある。ＴＬＣは、シリカゲルＧまたはＨＦ０層で被覆さ
れている板上で行なった。
実施例
ａ） ６−オキツエストリオールー１６ 、１７−ジ
アセテート（ｖ）の製造 メタノール３０ｄに溶かした６−オキンエストリオー／
ｌ／ −３，１６，１７−トリアセテート（Ｖｌｌ ５
００ ｍ７を、５係炭酸カリウム溶液５ ｍｌを用いて
、水冷却しながら加水分解し、得られた溶液を０℃で２
時間放置する。次いで、０．１ Ｎ Ｈ（Ｊでこれを中
和した後に、反応混合物を濃縮し、次いで酢酸エチルで
抽出する。得られた有機相を水で洗浄し、硫酸ナトリウ
ム上で乾燥させ、次い１′減圧で蒸発させ、得られた残
留物をシリカゲル上でクロマトグラフィ処理する。ｎ−
ヘキサン−酢酸エチル（２：１）で溶出し、溶出液をメ
タノールから再結晶すると、６−オキツニストリオール
ー１６ 、１７−ジアセテート２４８■が・μ；色プリ
ズム状物として得られる。
アセテート（ｖ）の製造 メタノール３０ｄに溶かした６−オキンエストリオー／
ｌ／ −３，１６，１７−トリアセテート（Ｖｌｌ ５
００ ｍ７を、５係炭酸カリウム溶液５ ｍｌを用いて
、水冷却しながら加水分解し、得られた溶液を０℃で２
時間放置する。次いで、０．１ Ｎ Ｈ（Ｊでこれを中
和した後に、反応混合物を濃縮し、次いで酢酸エチルで
抽出する。得られた有機相を水で洗浄し、硫酸ナトリウ
ム上で乾燥させ、次い１′減圧で蒸発させ、得られた残
留物をシリカゲル上でクロマトグラフィ処理する。ｎ−
ヘキサン−酢酸エチル（２：１）で溶出し、溶出液をメ
タノールから再結晶すると、６−オキツニストリオール
ー１６ 、１７−ジアセテート２４８■が・μ；色プリ
ズム状物として得られる。
融点：２３６〜２３９° ； ＩＲ（ＫＢｒ ） ニジ
ｍａｘ ３４２０ ＣＡｒ−ＯＨ）、１７４０ （−０
ＣＯＣＨ３）、１７６０ （、Ｃｏ ） ： ＮＭＲ（
ＣＤＣ１３）：δ帆８４ （３Ｈ，８，１８−ＣＨ５）
、２．０６ （３Ｈ。
ｍａｘ ３４２０ ＣＡｒ−ＯＨ）、１７４０ （−０
ＣＯＣＨ３）、１７６０ （、Ｃｏ ） ： ＮＭＲ（
ＣＤＣ１３）：δ帆８４ （３Ｈ，８，１８−ＣＨ５）
、２．０６ （３Ｈ。
Ｓ 、 １７−０ＣＯＣＨ３）、２．０９ （３Ｈ，８
，１６−０ＣＯＣＨ３）、４．９２ （ＩＨ，ｄ、Ｊ＝
６Ｈｚ、１７α−Ｈ）、６．９８〜７．５４（３Ｈ，ｍ
、ｈｒ−Ｈ）。
，１６−０ＣＯＣＨ３）、４．９２ （ＩＨ，ｄ、Ｊ＝
６Ｈｚ、１７α−Ｈ）、６．９８〜７．５４（３Ｈ，ｍ
、ｈｒ−Ｈ）。
なお、生成物（６−オキンエストリオールー１６．１７
−ジアセテート）をトリメチルシリルクローリドおよび
ヘキサメチルジ７ラザンを用いてピリジン中で処理する
と、相当するトリメチルシリル（ＴＭＳ ）誘導体が得
られる；Ｍｓ（ｍ／ｚ）：４５８（Ｍ）。
−ジアセテート）をトリメチルシリルクローリドおよび
ヘキサメチルジ７ラザンを用いてピリジン中で処理する
と、相当するトリメチルシリル（ＴＭＳ ）誘導体が得
られる；Ｍｓ（ｍ／ｚ）：４５８（Ｍ）。
ｂ） ６−オキノニストすオールーＱ−カルボキ／メ
チルオキシム−１６，１７）アセテート■の製造 上記ａ）で得られた６−オキツエストリオールー１６
、１７−ジアセテート１５０■をメタノール１０ｒｒｔ
ｌに溶解し、その溶液にＱ−力ルポキシメチルヒドロキ
フルアミン塩酸塩１００７’＋９を加える。次いで、こ
の溶液をＩ Ｎ ＮａＯＨで中和し、室温で一夜、放置
する。得られた溶液を濃縮し、酢酸エチルで抽出し、そ
の有機相を、ンリカゲルカラムクロマトグラフイにより
、溶出液としてｆ、−ヘキサン−酢酸エチル（２：１）
を用いてｆ！製し、メタノールから再結晶すると、６−
オキツニストすオールー〇−力ルボキシメチルオキシム
−１６、１７−ジアセテート（［Ｖ）１２６■が無色プ
リズム状物として得られる。融点：１８８〜１９０°Ｃ
；工Ｒ（ＫＢｒ）ニジｍａｘ ３４００ （Ａｒ −Ｏ
Ｈ）、１６２０−１５４（１（ゝＣ＝Ｎ −、Ｃ０ＯＨ
）。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ５） ：δ帆７ｅ（３Ｈ。
チルオキシム−１６，１７）アセテート■の製造 上記ａ）で得られた６−オキツエストリオールー１６
、１７−ジアセテート１５０■をメタノール１０ｒｒｔ
ｌに溶解し、その溶液にＱ−力ルポキシメチルヒドロキ
フルアミン塩酸塩１００７’＋９を加える。次いで、こ
の溶液をＩ Ｎ ＮａＯＨで中和し、室温で一夜、放置
する。得られた溶液を濃縮し、酢酸エチルで抽出し、そ
の有機相を、ンリカゲルカラムクロマトグラフイにより
、溶出液としてｆ、−ヘキサン−酢酸エチル（２：１）
を用いてｆ！製し、メタノールから再結晶すると、６−
オキツニストすオールー〇−力ルボキシメチルオキシム
−１６、１７−ジアセテート（［Ｖ）１２６■が無色プ
リズム状物として得られる。融点：１８８〜１９０°Ｃ
；工Ｒ（ＫＢｒ）ニジｍａｘ ３４００ （Ａｒ −Ｏ
Ｈ）、１６２０−１５４（１（ゝＣ＝Ｎ −、Ｃ０ＯＨ
）。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ５） ：δ帆７ｅ（３Ｈ。
Ｓ 、 １８− ＣＨ３）、２．０５ （３Ｈ，Ｓ 、
１７−０ＣＯＣＨ３） 、 ２ ｔ）８（３Ｈ，Ｓ、
１６−０ＣＯＣＨ３）、４．７２ （２Ｈ，Ｓ 、
＝ｌｉ（’Ｃ）−２）、６．８２−７．３７ （３Ｈ，
ｍ、 ｈｒ−Ｈ）。
１７−０ＣＯＣＨ３） 、 ２ ｔ）８（３Ｈ，Ｓ、
１６−０ＣＯＣＨ３）、４．７２ （２Ｈ，Ｓ 、
＝ｌｉ（’Ｃ）−２）、６．８２−７．３７ （３Ｈ，
ｍ、 ｈｒ−Ｈ）。
元素分析： Ｃ２４Ｈ２９０８Ｎ として計算値：
Ｃ６２，７３； Ｈ６，３６； Ｎ３．５０実測値二Ｃ
６３，７５； Ｈ７，１８； Ｎ ２．３０Ｃ）６−オ
キソエストリオール−３−サルフェート−〇−カルボキ
シメチルオキンム（：ｍ。
Ｃ６２，７３； Ｈ６，３６； Ｎ３．５０実測値二Ｃ
６３，７５； Ｈ７，１８； Ｎ ２．３０Ｃ）６−オ
キソエストリオール−３−サルフェート−〇−カルボキ
シメチルオキンム（：ｍ。
■）の製造
（１） −１０°に冷却したピリ） ｙ ４ ｒｕｇ
に；溶かしたクロルスルホン酸２００ｍ９を、ピリジン
Ｅｌ ｍｌに溶かした６〜オキソエストリオール−〇
−カルボキ７メチルオキシム−１６、１７−ジアセテー
ト（上記ｂ）で得られたもの）１００７７１９の溶液に
加え、反応混合物を３７°で２．５時間攪拌する。これ
により、６−オキソエストリオール−３−サルフェート
−ｏ−カルホキ／メチルオキシム−１６、１７−ジアセ
テート（２））が得られる。
に；溶かしたクロルスルホン酸２００ｍ９を、ピリジン
Ｅｌ ｍｌに溶かした６〜オキソエストリオール−〇
−カルボキ７メチルオキシム−１６、１７−ジアセテー
ト（上記ｂ）で得られたもの）１００７７１９の溶液に
加え、反応混合物を３７°で２．５時間攪拌する。これ
により、６−オキソエストリオール−３−サルフェート
−ｏ−カルホキ／メチルオキシム−１６、１７−ジアセ
テート（２））が得られる。
（２）上記（１）で得られたジアセテート（１１１）を
含む反応混合物を０．Ｉ Ｎ ＮａＯＨ溶液中に汗ぎ入
れ、次いで室温で一夜、放置する。得られた溶液を、水
３００ｍ１で稀釈した後、アンバーライト（Ａｍｂｅｒ
−１ｉｔｅ ） ＸＡＤ−２樹脂のカラムに通す。次い
で、水で洗浄した後に、吸着した化合物をメタノール５
０ ｍｌで溶出する。所望の留分を減圧下に２５°Ｃで
蒸発乾硫させると、粗製サルフェートが無色油状生成物
として得られる。この残留物を、溶剤としてＣＨＣＬ３
−ＭｅＯＨ−ＮＨ，ＯＨ（１５： ５ ： １ ；容量
／容量）を用いて、分取ＴＬＣにより処理する。
含む反応混合物を０．Ｉ Ｎ ＮａＯＨ溶液中に汗ぎ入
れ、次いで室温で一夜、放置する。得られた溶液を、水
３００ｍ１で稀釈した後、アンバーライト（Ａｍｂｅｒ
−１ｉｔｅ ） ＸＡＤ−２樹脂のカラムに通す。次い
で、水で洗浄した後に、吸着した化合物をメタノール５
０ ｍｌで溶出する。所望の留分を減圧下に２５°Ｃで
蒸発乾硫させると、粗製サルフェートが無色油状生成物
として得られる。この残留物を、溶剤としてＣＨＣＬ３
−ＭｅＯＨ−ＮＨ，ＯＨ（１５： ５ ： １ ；容量
／容量）を用いて、分取ＴＬＣにより処理する。
相当する吸収帯（Ｒｆ＝ｏ、１ ）を、ｃＨｃｔ３−
Ｍｅｏａ’ ＮＨ４ＯＨ（１５： ７ ：４
：容量／容量）で溶出すｊ ると、６−オキソエ
ストリオール−３−サルフェート−０−カルホキ７メチ
ルオキ’／ Ａ （Ｕ） ７８ ｍｇが無色無定形物質
として得られる。融点 ＞３００’；ＩＲ（ＫＢｒ ）
ニジｍａｘ １０６０ （−８ｏ３Ｈ）； ＮＭＲ（す
）、ＯＤ 、）δ０．７６ （３Ｈ，Ｓ、 １８−ＣＨ
５）、４．５２ （２Ｈ，Ｂ、 二Ｎ０ＣＦ ）、７．
２７ （２Ｈ，ｅ、 １−および２−Ｈ）、７．７６
（１１（。
Ｍｅｏａ’ ＮＨ４ＯＨ（１５： ７ ：４
：容量／容量）で溶出すｊ ると、６−オキソエ
ストリオール−３−サルフェート−０−カルホキ７メチ
ルオキ’／ Ａ （Ｕ） ７８ ｍｇが無色無定形物質
として得られる。融点 ＞３００’；ＩＲ（ＫＢｒ ）
ニジｍａｘ １０６０ （−８ｏ３Ｈ）； ＮＭＲ（す
）、ＯＤ 、）δ０．７６ （３Ｈ，Ｓ、 １８−ＣＨ
５）、４．５２ （２Ｈ，Ｂ、 二Ｎ０ＣＦ ）、７．
２７ （２Ｈ，ｅ、 １−および２−Ｈ）、７．７６
（１１（。
Ｓ、４−Ｈ）；
元素分析 Ｃ２ｏＨ２３０，ＮＳ −Ｎａ２−２ Ｈ２
０として計算値： Ｃ４４，８７、Ｈ５，０８； Ｎ
２．６２実測値： Ｃ４５，１９； Ｈ４，９６； Ｎ
２．６５ｄ）６−オキソエストリオール−３−サルフｌ
−トー０−カルボキ／メチルオキシム−ＢＳＡ複合体の
製造 ０．１ Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，１） ０．５ ｔ
ｈ・’ ” ｌこ１−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ツブｌ：、ヒル）カルボジイミド塩酸塩１００ｍｊ７お
よび甲面ニア。
０として計算値： Ｃ４４，８７、Ｈ５，０８； Ｎ
２．６２実測値： Ｃ４５，１９； Ｈ４，９６； Ｎ
２．６５ｄ）６−オキソエストリオール−３−サルフｌ
−トー０−カルボキ／メチルオキシム−ＢＳＡ複合体の
製造 ０．１ Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，１） ０．５ ｔ
ｈ・’ ” ｌこ１−エチル−３−（３−ジメチルアミ
ツブｌ：、ヒル）カルボジイミド塩酸塩１００ｍｊ７お
よび甲面ニア。
アルブミン５０■を溶かした溶液を、ピ’） ／；／（
１，５ゴ中の６−オキソエストリオール−３−升ルフェ
ート−〇−カルボキゾメチルオキンム（Ｆ゛上記Ｃ）で
得られたもの）３０ｍｇの溶液中ム薩下して加え、その
混合物を４°Ｃで一夜、攪拌する。
１，５ゴ中の６−オキソエストリオール−３−升ルフェ
ート−〇−カルボキゾメチルオキンム（Ｆ゛上記Ｃ）で
得られたもの）３０ｍｇの溶液中ム薩下して加え、その
混合物を４°Ｃで一夜、攪拌する。
生成する溶液を透析し、次いで凍結乾燥させると、標題
のハプテン−ＢＳＡ複合体（Ｉ１４７ｍｇが得られる。
のハプテン−ＢＳＡ複合体（Ｉ１４７ｍｇが得られる。
得られた６−オキソエストリオール−３−サルフェート
−ｏ−カルボキンメチルオキシム−ＢＳＡ複合体は濃硫
酸による呈色反応を用いる分析により、その複合体１分
子当り約１４分子のステロイドが存在すること・が確認
された。
−ｏ−カルボキンメチルオキシム−ＢＳＡ複合体は濃硫
酸による呈色反応を用いる分析により、その複合体１分
子当り約１４分子のステロイドが存在すること・が確認
された。
前記ａ）において、原料物質として用いられている前記
式（ＶＴＩの６−オキンエストリオールー３．１６．１
７− トリアセテートは、例えば、ライト（Ｗｒｉｇｈ
ｔ ）氏等の方法［５ＴＥＲＯＩＤＳ’、 ２１．７５
５頁（１９７３年）〕に従い合成することができる。
式（ＶＴＩの６−オキンエストリオールー３．１６．１
７− トリアセテートは、例えば、ライト（Ｗｒｉｇｈ
ｔ ）氏等の方法［５ＴＥＲＯＩＤＳ’、 ２１．７５
５頁（１９７３年）〕に従い合成することができる。
免疫付与
３匹の雄のモルモットを免疫付与に用いる。
ハプテン−ＢＳ’Ａ複合体（Ｉ） ０．５ ｍｇを殺菌
した等張の塩類溶液０．５ｍＪに溶解し、フレンド完全
アリユバ７）０．５ｍｌで乳化する。このエマルジョン
をモルモットの各肩甲骨の下および各大腿部に皮下注射
する。皮下注射は、最初の注射後の１４日目および２８
日目に繰返し、その後３０日目毎に行なう。動物からツ
ースター注射後１０日目）・こ採血する。血清を３５０
０ ｒｐｍで遠心分離して分趙し、−２５° で貯蔵す
る。
した等張の塩類溶液０．５ｍＪに溶解し、フレンド完全
アリユバ７）０．５ｍｌで乳化する。このエマルジョン
をモルモットの各肩甲骨の下および各大腿部に皮下注射
する。皮下注射は、最初の注射後の１４日目および２８
日目に繰返し、その後３０日目毎に行なう。動物からツ
ースター注射後１０日目）・こ採血する。血清を３５０
０ ｒｐｍで遠心分離して分趙し、−２５° で貯蔵す
る。
上記の式（Ｉ）、（Ｕ）、＠）で表わされる物質は、い
ずれも、本発明者らによって創製された新規物質であシ
、本発明により、エストリオール−３−サルフェート抗
原が初めて合成されたものである。本発明の方法は、活
性エステル化？表によるステップを経ることなく、より
少ない工Ｎ’ｘ ＜１で、しかも、簡易な一般的方法に
よりエストリオール−３−サルフェート抗原が合成でキ
；６ 、、＝。
ずれも、本発明者らによって創製された新規物質であシ
、本発明により、エストリオール−３−サルフェート抗
原が初めて合成されたものである。本発明の方法は、活
性エステル化？表によるステップを経ることなく、より
少ない工Ｎ’ｘ ＜１で、しかも、簡易な一般的方法に
よりエストリオール−３−サルフェート抗原が合成でキ
；６ 、、＝。
め、極めて画期的なものである。
なお、前記式へ１）の化合物の６位をＯＨ基Ｑ（変彩し
、それを無水コハク酸を用いて処理すること○−ＣＣＨ
２ＣＨ２ＣＯＯ１−１ で表わされるヘミサクシネートとし、次いで、３位のＡ
ＣＯ基のみを加水分解することにより−ＯＨ基に変換し
、以下、本発明方法の前記の（［Ｖ）→＠）→（ＴＩ）
→（Ｉ）の反応経路と同様に経由して、６位の側鎖の異
る抗原物質が得られる。
、それを無水コハク酸を用いて処理すること○−ＣＣＨ
２ＣＨ２ＣＯＯ１−１ で表わされるヘミサクシネートとし、次いで、３位のＡ
ＣＯ基のみを加水分解することにより−ＯＨ基に変換し
、以下、本発明方法の前記の（［Ｖ）→＠）→（ＴＩ）
→（Ｉ）の反応経路と同様に経由して、６位の側鎖の異
る抗原物質が得られる。
本発明方法と同様にして、式（［）において、６位の側
鎖が、 Ｎ−０（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨあるいは ｏ−ｃｏ （ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ （ｎは１〜４） のタイプの各種の物質を製造することが可能である。
鎖が、 Ｎ−０（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨあるいは ｏ−ｃｏ （ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ （ｎは１〜４） のタイプの各種の物質を製造することが可能である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＮＨＢＳＡはウシ血清アルブミンの残基を表わ
す） で表わされるエストリオール３−サルフエート−６−０
−置換ＢＳＡ複合体。 ２、式 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） で表わされる６−オキソエストリオール３−サルフェー
ト０−カルボキシメチルオキシムとウシ血清アルブミン
とを、水溶性カルボジイミド試薬を用いて反応させるこ
とを特徴とする式、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＮＨＢＳＡはウシ血清アルブミンの残基を表わ
す） で表わされるエストリオール３−サルフニート−６−０
−置換ＢＳＡ複合体の製造法。 ３、一般式、 ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （式中、Ｒはアシル基である） で表わされる６−オキソエストリオール３−サルフエー
ト０−カルボキシメチルオキシム１６，１７−ジアシレ
ートの１６、１７位のアシル基をアルカリ性加水分解に
より、解離せしめて、式、 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） で表わされる６−オキソエストリオール３−サルフエー
ト０−カルボキシメチルオキシムに変換し、次に該オキ
シムとウシ血清アルブミンとを、水溶性カルボジイミド
試薬を用いて反応させることを特徴とする式、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＮＨＢＳＡはウシ血清アルブミンの残基を表わ
す） で表わされるエストリオール３−サルフエート−６−０
−置換ＢＳＡ複合体の製造法。 ４、一般式、 ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） （式中、Ｒはアシル基である） で表わされる６−オキソエストリオール０−カルボキシ
メチルオキシム１６，１７−ジアシレートをクロルスル
ホン酸もしくはその反応性誘導体と反応せしめ、一般式
、 ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （式中、Ｒは前述の定義を有する） で表わされる６−オキソエストリオール３−サルフェー
ト０−カルボキシメチルオキシム１６，１７−ジアシレ
ートを生成させ、次いで、アルカリ性加水分解により、
上記ジアシレートの１６、１７位のアシル基を解離せし
めて、式、▲数式、化学式、表等があります▼（II） で表わされる６−オキソエストリオール３−サルフエー
ト０−カルボキシメチルオキシムに変換し、次に該オキ
シムとウシ血清アルブミンとを、水溶性カルボジイミド
試薬を用いて反応させることを特徴とする式、 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＮＨＢＳＡはウシ血清アルブミンの残基を表わ
す） で表わされるエストリオール３−サルフニート−６−０
−置換ＢＳＡ複合体の製造法。
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59218275A JPS6197300A (ja) | 1984-10-19 | 1984-10-19 | エストリオ−ル３−サルフエ−ト−６−ｏ−置換ｂｓａ複合体ならびにその製造法 |
| EP85113262A EP0178683B1 (en) | 1984-10-19 | 1985-10-18 | Imunoassay for estriol-3-sulfate |
| DE8585113262T DE3572177D1 (de) | 1984-10-19 | 1985-10-18 | Imunoassay for estriol-3-sulfate |
| CA000493315A CA1285866C (en) | 1984-10-19 | 1985-10-18 | Immunoassay for estriol-3-sulfate |
| KR1019850007728A KR930000057B1 (ko) | 1984-10-19 | 1985-10-19 | 6-치환-에스트리올-3-설페이트 단백질 접합체의 제조방법 |
| AU48884/85A AU590731B2 (en) | 1984-10-19 | 1985-10-21 | Estriol-3-sulfate protein conjugates and antibodies thereto |
| US06/789,977 US4740476A (en) | 1984-10-19 | 1985-10-21 | Immunoassay for estriol-3-sulfate |
| KR1019920016406A KR930000056B1 (ko) | 1984-10-19 | 1992-09-08 | 에스트리올-3-설페이트의 면역분석 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59218275A JPS6197300A (ja) | 1984-10-19 | 1984-10-19 | エストリオ−ル３−サルフエ−ト−６−ｏ−置換ｂｓａ複合体ならびにその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6197300A true JPS6197300A (ja) | 1986-05-15 |
Family
ID=16717309
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59218275A Pending JPS6197300A (ja) | 1984-10-19 | 1984-10-19 | エストリオ−ル３−サルフエ−ト−６−ｏ−置換ｂｓａ複合体ならびにその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6197300A (ja) |
-
1984
- 1984-10-19 JP JP59218275A patent/JPS6197300A/ja active Pending
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