JPS6034992A - ペプチド誘導体及び酵素ｃ↓１―エステラーゼの測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 人間の血液中には０１−エステラーゼプロ酵素という名
前で知られている作用物へか含まれ、これは抗体と抗原
との結合作用下に活性酵素Ｃ１−エステラーゼに活性化
される。この酵素は補体系でカスケード状に他のプロ酵
素な活性酵素に活性化する。これらの活性化された酵素
は細菌又は死滅した赤血球の細胞膜を溶解し、それ故免
疫学的な防御の際に重要な役割な果たす。血しようはＣ
１−エステラーゼシ抑制しかつＣ１−エステラーゼイン
ヒビターと呼ばれる重要なインヒビターも含有する。炎
症の場合、Ｃ１−エステラーゼが活性化され、その際に
血液のエステラーゼインヒビター濃度に応じて補体系は
迅速に又は緩慢に活性化される。臨床の立場からは、そ
のような場合匠血液中のＣＩ−エステラーゼの度もＣ１
−エステラーゼインヒビー濃度も測定することが望まし
い。

従来の技術 現在この測定は偵雑で殆んど正確ではない免役学的及び
滴定による方法で実施される（Ｗ、Ｊ。

Ｃａｎａｄｙ　）ｂひその仙共著、”　Ｉｍｍｕｎｎｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ”、１６巻、２２９〜２３３頁（１９
７６年）：Ｄ、ＯｇｅｔＯｎ及びその仙共著、Ｔｈｒｏ
ｍｂ６ｅｉｑＲｅｓｅａｒｃｈ″、９巻、２１７〜２２
２戸（１９７６年）参照〕。

発明が解決しようとする問題点 本発明の課題はＣ１−エステラーゼの測定をより迅速に
かつ正確に実施することである。

ところで、本発明の目的である一定の簡単なペプチド誘
導体を基質として使用する場合に、前記の課題が解決さ
れることが判明した。

本発明は、式： ％式％ ） 〔式中 Ｒ１は酵素加水分解により着色又は螢光化合物の形成下
に脱離■」能であり、芳香族基又はヘテロ環式基で置換
されている色素形成アミン基４表わし、 Ｒ２は水素な表わすか又は ａ）炭素原子２〜６個な有する直鎖状又は分枝鎖状のア
ルカノイル基、 ｂ）　シクロへキシルカルボニル基、 Ｃ）アルカノイル中に炭素原子２〜４個な有するω−カ
ルボキシル−１ω−メトキシカルボニル−又はω−エト
キシカルボニル−アルカノイル基、 ｄ）アルコキシ中に炭素原子１〜４個？有する直鎖状又
は分枝鎖状のアルキルスルホニル基、 θ）アルキル中に炭素原子１又は２個を有するアルキル
スルホニル基もしくはフェニル−又ハｐ　−トルイル−
スルホニル基、 ｆ）置換されていないか又は１〜換されているベンゾイ
ル基、又は ｇ）核が置換されていないか又はＨｒｔ換さオしている
ベンジルオキシカルボニル基を表わし、Ｒ３は核が１６
゛換されていないか又は置換されているベンジル基な表
わし、 Ｘはグリンル基又はアラニル基り表わし、Ｙは単結合で
あるか又は式： −ＮＨ−（ＯＨ２）　−ｃＨ−ｃｏ　（式中Ｒ４はベン
ジル基、）ｍＩ ４ エニル基、シクロヘキシル基、シクロヘキシルメチル基
、４−ヒドロキシベンジル基、４−ヒドロキシシクロヘ
キシルメチルＭ＆表わしかつｍは数値ゼロでありかつＹ
により定義されるアミノ酸はＬ−又はＤ−配置な有する
かあるいはＲ４は水素を表わしかつｍは数値０．１又は
２を表わす）の基を表わす〕のペプチド誘導体もしくは
鉱酸又は有機酸とのその塩に関する。

例工ばＲ１はｐ−ニトロフェニルアミノ基、１−又は２
−ナフチルアミノ基、４−メトキシ−２−ナフチルアミ
ノ基、４−メチル−７−クマリルアミノ基又は１．３−
ジ（メトキシカルボニル）−５−フェニルアミノ基であ
ってよい。

例えばＲ３はベンジル基、４−メチルベンジル基、４−
メトキシベンジル基、もしくは２−１６−又は４−クロ
ルベンジル基であってよい。

Ｒ２が炭素原子２〜６個を有するアルカノイル基又は炭
素原子１〜４個を有するアルコキシカルボニル基を表わ
しかつＹが単結合４表わし、Ｒ３カベンジル基を表わし
かつＨｌ及びＸが前記のものを・表わすペプチド誘導体
がＣニーエステラーゼに対して特にυｊい敏感さを有す
る。

前記の一般式のペプチド誘導体の例として次の化合物が
挙げられる： ５ｏａ−Ｌｙｅ（ｔ−Ｃｂｏ　）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐ
ＮＡ、ＡｃＯＨ、２ＡＣＯＨ。

Ｈ−Ｌｙｓ　（ｇ−Ｃｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ
　、　Ａｃ−Ｌｙｓ　（ｅ−Ｃｂｏ　）−Ｇｌｙ−Ａｒ
ｇ−ｐＮＡ、　ＡｃＯＨ、ＣＨ５０ＣＯ−Ｌｙｇ（ｔ−
Ｃｂｏ　）−Ｇｌｙ−Δｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ１０２
１５０００−Ｌｙｅ（ε−Ｃｂｏ　）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ
−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ、１ｓｏ−Ｂｕｔｏｏｏ−Ｌｙｅ（
ε−ｃｂｏ　）−Ｇａｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ、
ＣＨ３ＣＨ２０Ｏ−Ｌｙｓ（ε−Ｃｂｏ）−０１７−へ
ｒｐ−ｐＮＡ、へ〇〇〇　、Ｃ）１．、（ＣＨ２）２Ｃ
Ｏ−Ｌｙｅ（ε−Ｃｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮ　Ａ
　、　Ａ　ＣＯＨ、Ｃ：Ｈ、ｃｌ（２０ｃＯ−ＯＨ２Ｃ
ｏ−Ｌ７ＦＪ　（ｔ　−Ｃｂｏ　）−Ｇｌｙ　Ａｒｇ−
ｐＮＡ、ＡｃＯＨ１ＢＯＣ−Ｌｙｅ（ｇ−Ｃｂｏ）　Ａ
ｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡ　、ＡｃＯＨ、Ｈ−Ｌｙｅ（１−
ｃｂｏ）−八ｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡ　。

２０Ｆ３Ｃ！ＯＯＨ、ＡＣ−Ｌｙｅ（ｇ−Ｃｂｏ）−Ａ
ｌａ−Ａｒｇ−’ｐＮＡ、ＡＣ！ＯＨ。

ＣＨ，０００−Ｌｙｅ（ε−Ｃ！ｂｏ）−Ａｌａ−Ａｒ
ｇ−ｐＮＡ、Δｃ０１（、ｓｏｃ−ｏｌｙ−Ｌｙｇ（ε
−Ｃｂｏ）−（）ｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ、２
ｃｖ、ｃｏｏＨ。

Ｈ−Ｇｌｙ−Ｌｙｅ（ｇ−Ｃｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−
ｐＮＡ　、ＣＨ，Ｏｏ−Ｃｏ−Ｇ１７Ｌｙｓ（Ｃ！ｂｏ
）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ，ＣＨ３（！Ｈ
２−Ｃｏ−Ｇ１ｙ（ｇ−ＣｂＯ）−Ｇ１７−Ａｒｇ−ｐ
ＮＡ、ＡｃＯＨ０本発明によるペプチド誘導体はペプチ
ド合成で常用の方法で、例えば次に記載の方法により製
造することができる： １）色素形成基１（１１，、：　Ｏ−末端アルギニンの
カルボキシ基に結合させ、その際にアルギニンのα−ア
ミノ基は保霞基、例えばカルボベンゾキシ基又はｔ−ブ
トキシカルボニル基により及びアルギニンのδ−グアニ
ジル基は例えばＨＣＪによるプロトン化、ニトロ化又は
トシル化により保砕する。Ｃ−末端基Ｒ１も段階的なペ
プチド鎖の形成の際に保詩基として有用である。他の保
存基は、所望のペプチド鎖が完全に構成されるまで他の
アミノ酸誘導体を結合させるために必要に応じて選択的
に脱離することができる。

最後に　Ｒ１に作用を及ぼさずに、残留している保憔基
な完全に脱離することができる〔例えばＭｉｋｌｏｓ及
びその仙共著、”　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅ日ｉ
ｓ”、１６３〜１６５頁（１９６６年）　、Ｉｎｔｏｒ
ｓｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｅｈｅｒｓ出版参照〕。

２）初めにペプチド鎖（Ｂｏｄｅｎｅｋ７による前記文
献）を構成するが、その除アルジ二ノのＣ−末端カルボ
ベキシル基シ常用のニスフル基、例えばメトキシ基、エ
トキシ基又はベンジルオキシ基で保詐する。エステル基
はアルカリ性加水分解により脱め（ｔすることができ、
但しｔ−ブトキシ基は選択的にトリフルオロ酊Ａｎ用い
て脱離しなければならな（・０アルイニンのδ−グアニ
ジル基がゾロトー／化されている場合には、前記のエス
テル基はトリプシンむτより脱臼（（シ、そのｌ（９ラ
セミ化は起らない。これに次いで、色素形成基Ｒ１を結
合させる。アルギニンのδ−グアニジ、ノ基がニトロ基
又はトシル基に」、り及びペプチド脱導体のＮ−末端α
−アミノ基がカルボベンゾキシ基、ｐ−メチル−１ｐ−
メトキシ−又１−ｚｐ−クロルペンジルオキシカルボニ
ル基もしくけし一ブトキシ基により保Ｈφされている場
合これらの保護基も同時に脱１■［する。脱離は仙“草
されたペプチド誘導体を室幅で無水）げで処理すること
Ｋより実施することができ、その際に前記のすべてのア
ミノ−もしくはδ−グア；ジノ保蒔基は脱離する。脱離
は、保駒されたペプチド誘導体がニトロ−又はトシル保
膿基を含まない場合には、氷酢酸中の２　Ｎ　−ＨＢｒ
を用いて室温で処理しても実施することができる。

実施例 次の実施例で本発明によるペプチド誘導体の製造を詳説
する。温度はセラ氏である。

実施例で得られた溶出液及び生成物の分析は二酸化珪素
ｒルで塗布したガラス板（Ｍｅｒｃｋ社、Ｆ２５４）を
使って薄層クロマトグラフィにより行なった。薄層クロ
マトグラムは次の溶剤系で展開させｌｙ　’　ｎ−ブタ
ノール／酢酸／水（３：１：１）。

次の略語シ使った： Ａｃ　−アセチル Ａ（ｊ２０ニアセトアンヒドリド ＡｃＯＨ二酢　酸 Ａｌａ　＝　Ｌ−アラニン β−Ａｌａ二β−アラニン Ａｒｇ二Ｌ−アルギニン ＢＯ（！　：　ｔ−ブトキシカルボニルｒ−Ｂｕｔ　＝
　４−アミノ酪酸 Ｂ　＝　ペン１戸イル Ｂ２２０−熱水安息香酸 ＣＨＡ：　Ｌ　−３−シクロヘキシルアラニン（！Ｈ（
）　＝　Ｌ　−２−シクロヘキシルグリシンＤ−ＣＨＧ
　：　Ｄ　−２−シクロへキシルグリシンＣＲＴ　＝　
Ｌ　−３−（’　４−ヒドロキシシクロヘキシル）アラ
ニン−核水素化チロシ ン Ｃｂｏニカルボペンゾキシ ＤＭＦニジメチルホルムアミド ＤＰＡ　：　５−アミド−イソフタル酸−ジメチルエス
テル Ｄ８Ｃ＝　ｆｌｌ　Ｉｒ４クロマトダラムもしくは一り
ツフイ Ｆｉｔ　−エチル ｇｔｏ　＝エトキシ ＋！！ｔ３Ｎニトリエチルアミン Ｇｌｙ　＝グリシン ＨＭＰＴＡ＝Ｎ　、Ｎ　、　Ｎ’、Ｎ’、　Ｎ”、　Ｎ
”−ヘキシルメチルリン酸トリアミド １ｓｏ−ＢｕＯ−インブトキシ ＬＭＳ　：溶剤系 Ｌ７．　＝＝　Ｌ−リシン ＭＣＡ＝７−アミド−４−メチルクマリンＭｅＯ−メト
キシ ＭｅＯＨ：メタノール ＮＡ−ナフチルアミド ０Ｔ）ＮＰ：ｐ−ニトロフェノキシ ｐＮＡ　＝＝　ｐ−ニトロアニリド Ｐｈ’　Ｇｌｙ　＝　Ｌ　−２−フェニルグリシンｐｈ
ｅ　＝　Ｌ−フェニルアラニン Ｄ−ＰｈＯ−Ｄ−フェニルアラニン Ｓｕｅニスクシニル ＴＨＦ−テトラヒドロフラン Ｔｏθ＝ｐ−トルエンスルホニル 特に記載のない限りアミノ酸はＬ形である。

例　１ 内容積２５０がの三首丸底フラスコ中で、Ｐ２Ｏ５上で
真空乾燥させた、無水）ＩＭＰＴＡ　９　Ｑ　ｍＡ中の
ｃｂｏ−Ａｒｇ−ＯＨ，Ｈ（Ｊ　１．６．０　、！ｉ’
　（４７，０ミリモル）？湿気の遮断下に２０　で溶解
した。室温で得られた溶液に初めＫ　ＨＭＰＴＡ　ｊ　
Ｑ　ｍＡ中の”ｔ３Ｎ　４．７４　、！ｉ’　（４７，
０ミリモル）の溶液？、次Ｋｐ−二トロフェニルインシ
アネート（１００％の過剰）　１６．４９　（１００ミ
リモル）を少量ずつ添加した。２０℃で２４時間の反応
後に）ＩＭＰＴＡを真空中で殆んど留去させた。残渣２
数回６０チー　Ａｃ０Ｉ（で抽出した。残渣を廃棄した
。合したＡｃＯＨ抽出物な贋に精製する７こめに３０チ
ーＡｃＯＨで平衡化した“セファデックス”−Ｇ−１５
−カラム上に施しかつろ０チーＡＣＯＨで溶離した。ト
リゾシン処理によりｐ−ニトロアニリンの遊離下に脱離
し得るＡＣＯＨ溶出液の両分を凍結乾燥させた。無定形
粉末１２．６　＆が得られ、これはｐ８ａＶＣおいてＬ
ＭＳ中で均一であった。

元素分析及び実験式Ｃ２ｏＨ２，Ｎ６０５Ｃ１からの計
算により次の斂値が得られた：Ｃ＝５１．２９’２（５
１，（５７チ）、Ｈ＝　５．４８チ（５，４２％）、Ｎ
＝１７．９２％（１８，０８チ）、ＣＩ！＝　７．５０
％（７，６３％）。カッコ内の数値は計算値である。

ｌｂ、　２ＨＢｒ、Ｈ−ｋｒｇ−ｐＮＡ湿分の遮断下に
化合物１ａ４．６５．Ｆ（１０ミリモル）な氷酢酸中の
２　Ｎ　−ＨＢｒ　４０　ｍ／！で２０４５分間攪拌下
に処理した。その際に、アミノ酸誘導体はＣＯ２発生下
に溶Ｍ１〜だ。反応溶液を激しい猾拌下に無水エーテル
２５０ｍ１Ｋ滴加した。その際に２ＨＢｒ　、Ｈ−Ａｒ
ｇ−ｐＮＡが沈殿した。エーテル相な吸引濾別し、次に
同相を１回当り１ＱＱｍ／！の無水エーテルで４回ａ浄
して、副生成物として形成した臭化ベンジル並びに過剰
分のＨＢｒ及びＡｃＯＨ￥除去した。残渣ｆ　ＭｅＯＨ
５Ｑｍｉ中に溶かし、Ｅｔ３Ｎで−１４，５に訴節しか
つ真空中６０６Ｃで濃縮乾固した。そのようにして得ら
れた生成物をＭｅＯＨ７５ｍｌ中に溶かしがっＭｅＯＨ
で平衡化した”セファデックス″ＬＨ−２０（架橋アギ
ストランク９ル）カフラム中な流動させた。

溶出液の１つの両分かＩ’、　、ｐｓににおいてＬＭＳ
中で均一で）、っＴこ無定形化合物１ｂ４．１８　ｇ（
理論量の９１．６係）が得られた。元ネ分析及び実験式
’　”１２Ｈ２０’６０ＫＢｒ２からの’Ｉｔ３’）か
ら次のｖ値が得られた；Ｃ二６１．１５％（５１，６０
％）、＋（＝４．３５％（４，４２チ）、Ｎ二１８．８
４％（１８，４３％）、Ｂｒ　＝　５４．８１％（３５
，０３，％　）１ｃ、　Ｏｂｏ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮ
Ａ、）（Ｂｒ化合物１ｂ４．５．！？（１０ミｌＪモル
）ｋｌｉＬ、＜蒸留したＤＭＦ　３　Ｑ　ｍｌ中に溶解
しかっ−ｉｏ’に、９　却ｕ＜　ｔｉｉ’拌下ＩＢｔ、
Ｎ１．４（Ｅ＋ｌ　１０　ミリモル）を加資た。形成し
たＥ　ｔ　３　Ｎ　、　）Ｉ　Ｂ　ｒう：濾ｊ！ｙＬが
っ少１．１の冷いＤＭＦで洗った。Ｃζ１亀に攪拌下（
τ−１ｏ）でＣｂｏ−Ｇ］、ｙ−ＯｐＮＰ　３．６５　
ｇ　（１１ミリモル）を添加しかつこの混合物を水分の
、ｉｈ下に２〜３時間反応させた。その際反応溶液のｒ
ｌ！′２Ｉｆは徐々に約２０〜に上昇し７た。この溶ｍ
シ＋ｌｒび一１０’Ｕに冷却しカッＩ’２ｔ３”　Ｑ、
；７０ｍｌ　（５ミ’）　モｋ　）　テ緩衝させた。反
応溶液？−１０で約２時間及び室温で６時間反応させた
。この処理をもう一度”ｔ！ＩＮＯ，７０ｒｕｉで緑返
し、更に１６時間後に反応溶液を真空中５０　でｅＪ縮
乾固さセた。残渣を５０チ一酢酸７５ｍｆ、中に溶かし
かっ５０チーΔｃＯＨで平衡化した”セファデックス”
Ｇ−１５０カラム上でケ９ル濾過によりｆｉｖ興した。

トリプシン処理によりｐ−ニトロアニリンの遊離下に分
離するＡｃＯＨ溶出液の両分な真空中４０’で濃縮乾固
した。残渣ンＭｅＯＨ１５０ｍｌ中に溶かしかつ再び濃
縮乾固した。イりられた残渣を頁窒乾燥箱中でＰ２Ｏ５
上で６０　で乾燥後、ＤＳｃにおいて１・ＩＡＳ中で均
一であった無定形化合物１ｃ５．８５　ｆｌ　（理論量
の８８．６チ）が得られた。元素分析及び実験式：　Ｃ
２２１１２ＢＮ７０６Ｄｒからの計算により次の数値が
イりられた二〇二４６．６６係（４６，６５ブリ、ＩＩ
　＝　５．０４昏（４，９８％）、Ｎ＝１７．８８　％
　（１７，５１％　）　刀−び　Ｂｒ＝１４．２０％（
１４，１１％） 化合物１ｃ４．５６．！ｉ’（８ミ’Ｊモル）を水分遮
断下に２　Ｎ　−ＨＢｒ　３２ｍｌと氷酢酸６２ｒｎ／
！中で攪拌下に４０分間２０　で処理した。その際に、
このペプチド誘導体は徐々にＣＯ２発生下に溶けた。反
応溶液を激しい攪拌下に無水エーテル２５０　ｍＡに満
願すると、２ＨＢｒ、Ｈ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡが沈
殿し７た。エーテル相シ吸引滓別し、次いで（印相を無
水エーテル１回当り１ｏｏｍｌで４回洗浄して、副生成
物として形成した臭化ベンジル並びに過剰分のＨＢｒ及
びＡｃＯＨを殆んど除去した。残渣ｆ　ＭｅＯＨ５Ｑ　
ｍｌ中に溶解した。＋；ｔ３ＮでｐＨ４，５に鯛節後、
溶液を真空中６０°で重縮乾固した。このようにして得
られた残渣ＩＭθＯＨ５Ｑｍ／中に溶解しかつＭｅＯＨ
で平衡化した”セファデックス”　ＬＨ−２００カラム
上で精製した。トリプシン処理によりｐ−ニトロアニリ
ンの遊離下に分離するＭθＯＨ溶出液の画分紮ｐ、空中
３０°で濃縮乾固した。得られた傅渣髪真空乾燥箱中Ｐ
２０δ上４０°で乾燥後、ＤＳｃにおいてＬＭＳ中均−
である無定形化合物１．ｉ　３．７８　、！ｉ’　（理
論ｉ（の９２．１％）がイｆｔられだ６１元素分析及び
実験式：　０１４Ｈ２５Ｎ７０４Ｂｒ２からの引算によ
り次ノａ値が得られた：Ｃ二３２．３１　ｆ）（６２，
７７％）、１１＝４．５９チ（４，５２％）、Ｎ＝１９
．４７％（１９，１１％　＞及びＢＴ＝３０．７８％（
３１，１４壬）。

ｉＱ、ＢＯＣ！−Ｌｙｅ（Ｅ−ＣｈＯ）−４１７−Ａｔ
−ｇ、−ｐＮＡ、ＨＢｒ化合物１ａ　２．５７１１　（
５ミリモル）を新しく蓋留したＤＭＦ　２０　”中に溶
解（７かつ−１０に冷却拶・持拌ＦＫ　）’；ｔ３Ｎ　
Ｏ，７０ｉ１４　（５ミリモル）を加えた。形成したＦ
＝ｔ　３　Ｎ　、１１Ｂ　ｒを濾取しかつ冷い少（７ｔ
：　ＤＭＦで７多洗浄した。戸数むτ−１０°で捜拌丁
にＢｏＣ−Ｌ７８　（ε−Ｃｂｏ）−０ｐＮＰ　２．７
６　、Ｓ？　（５，５ミリモル）な添加り、　’ｉｍＺ
。反応γ幌合物を水分遮断下に２〜３時１１ｔ１反応さ
せ、次いで反応溶液の温度が徐々に杓２０　に上昇した
。この溶液を再び−１１）Ｋ冷却しかツＥｔ３Ｎ　ｒ３
．．３５　ｍｅ　＋：　２．５ミリモル）で緩で１１さ
せ１こ。反応溶液な−２０で２時間及び室ｌ晶でろｈ間
反応させた。この処理な再度ＩＧｔ３Ｎ　Ｏ，３５”’
で秤返し、更に１６時１…後に反応溶液ン１゛Ｊ、空中
５０℃で濃縮Ｊぞ、固した。残イ査を５０チーＡＣＯ）
（５Ｑ　！ＩＩ／！中＋−１溶かしかつ５０％−ΔｃＯ
Ｈで平衡ｆｌ′した７セフアデツクス″Ｇ−１５のブＪ
ラムー１二゛でケ９、ル酌２；１１ケよりオ冑製１、た
。トリノシン処Ｊ’ｌ！４τよりｐ　−−トロアニリノ
の遊離下りこ分ｔ°１トすＺ）静ＯＨ溶出魂の画分を肖
窒中４００で、Ｐ　縮Ｆ固１．た。残渣’ｓ（ＭｏＯＨ
１００：ｎｔ　中（ｃ　溶カｌ２、次（・でこの溶ｔｒ
ｆを再ρ二槍縮乾固しブ・。イｕらＪまた残、査ｆ、ｆ
１窄乾４”ｒ：　９ｑ’＋中Ｐ２Ｏ５上６ｏ０で乾燥後
、ＤＳＱＫト：し・て１・ＭＳ中で均一でに不・無定Ｊ
ど化合物１０６．５７ｇ（、″！ＩＩ論雀の８９．８係
）力豐Ｈられた。

元素分析及びノロへ７式’　Ｃ，，３Ｈ４８ＮａＯ，Ｂ
ｒ　７”＋・らの計算により次の数値が（４１られた：
Ｃ＝４９．ろ８係（４９，３７資）、Ｈ＝　５．００　
％　（６，０’、°チ）、１１　＝１６．０６％　（１
５，８６チ）及びＢｒ＝９．８５俤（１０，０５チ）。

アミノ酸分析により所期のアミノ酸が正しいＦヒで得ら
Ｊまた： ０１ｙ　１．００　：　Ｌｙｅ０．９９　：　Ａ＞−６
０，９７ｉｆ、　Ｂｏｏ−Ｌ７ｎ（ｉ　Ｃｂｏ）−Ｇｌ
ｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、Ａｃ０Ｈｉｅ４（より製造したＢ
ｏｏ−Ｌ７Ｆ＋　（（−０ｂｏ　）−（１１ｙ−Ａｒｇ
−ｐＮＡ、ＲＢｒ　７．９５　！ｌ　（１０ミリモル）
を６０％−水性ＭｓＯＨ７５ｍｌ中に溶解した。この溶
液をアセテートをの６アンバージイト”ＪＲＡ　−４０
１０カラム上に加えた。カラムを６０１−水性ＭｅＯＨ
を用いて溶がすると、イオン交換によりＨｓｒが八Ｌ！
　ＯＨに代えられた。溶出敲を゛真空中４００でぶ縮乾
固した。真空乾燥箱ｐＰ２０５上４００で乾燥後に、臭
化物を含まないＨＯＣ−ＬＹ日（ε−ｃｂｏ）−Ｇｌｙ
　’ｒｇ−−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ７，５８，９（、Ｑ論’
Ｊの９７．９　％　）が得られた。

こ（・−）方法により、前記のトリベグチド賃導体から
有機酸、例えばゼ酸、プロピオン酸、ンユウ酸、酒石酸
、クエン酸、ｆＬ酸、安息香酸、クロロ安、ｔｉＬ　＠
　ｎ　、サリチル酸又はフタル酸で仙の境？製造するこ
とができる。イオノ父換体として例えばヒドロクロリド
型の”アンバーライ１”ＪＲＡ−４０１を使用し、かつ
前記・つイオン交換体を力士・インータ゛で処理して＋
Ｍ−４性ＯＨ型に変換し、その後で６０１−水性ＭｏＯ
Ｈ中の所望の有機酸とそのナトリウム塩との１：１混合
物の溶液で処理することにより所望の酸塩形に変換する
ことができる。

例　２ 市販（ｒ）　Ｃｂｏ−Ａｒｇ−ＭＣ！Ａ、Ｈ（Ｊ　１３
．０　、！ｉ’　（２５−９ミリモル）を例１ｂＦｃよ
り氷酢酸中の２　Ｎ　−ＨＢｒ溶液１０４ｍ１（２０８
ミリモル）で脱ブロックした。乾燥残渣なＭｅＯＨ４Ｑ
　Ｑ　７中に溶解しかつ“セファデックス”ＬＨ−２０
０カラム上で精製した。トリプシン処理により４−メチ
ル−７−アミノ−クマリンの遊離下に分離したＭｅＯＨ
溶出液の両分を真空中５−００で濃縮乾固した。

得られた残渣り真空乾燥箱中Ｐ２０．．上４０’Ｇで乾
燥後、Ｄ８ｃＶｃおいてＬＭＳ中で均一な無定形化合物
２ｂが得られた。元素分析及び実験式：０１１’１Ｈ２
３Ｎ５ＯＮＢｒ２からの計算から次の数値が得られり：
　Ｏ＝３９．４０％（３８，９６％　）、Ｈ−４，６１
％（４，７０％）、Ｎ　＝　１４．４８　％（１４，２
０％　）及びＢｒ　＝　３１．９０　％（３２，４０％
） ２Ｃ，Ｏｂｏ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＭＯＡ、ＨＢｒ化合物
２ｂと０１）Ｏ−（）１７−ＯｐＨＰ　３．６５　ｇ　
（１１ミリモル）を新しく蒸留したＤＭＦ　７５　ｍＡ
に添加した。−１０°に冷却後、＋ｙｒ拌下にＦｉｔ３
Ｎを初めに１．４０ｄ（１０ミリモル）、次いで０．７
０　ｍ１（５ミリモル）な添加した。混合物を水分の遮
断下に初めに一１０°で６時間、次に室温で４時間反応
させた。反応浴ｏ、す再び一１０°に冷却し、Ｋｔ３Ｎ
０．７０献で緩衝しかつ一晩２０℃で攪拌した。反応混
合物を真空中５０°Ｃで濃縮乾固シ、次ＩＣ残渣ｆ　５
　Ｑ　％　−Ａｃｔ）（２Ｑ　Ｑ　ｍＡ中に溶解しかつ
”セファデックス”Ｇ−１５０カラム上で精製した。ト
リプシン処理により４−メチル−７−アミノ−クマリン
の遊離下に分離したＡｃＯＨ溶出液の画分な真空中４０
　で濃縮乾固した。得られた残渣を真空乾保箱中Ｐ２Ｏ
５上６０°で乾燥後、Ｄ６ＣにおいてＬＭＳ中で均一で
あった無定形化合物２　（！　４．９８９　（理論量の
８２．５　％　’）が得られた。元素分析及び実験式：
Ｃ２６Ｈ３１Ｎ６０６Ｂｒからの言１算により次の数値
が得られた：ｃ＝５１．４８チ（５１，７５％）、Ｈ＝
５．２４％　（５，１８％　）、’＝１　６．７０　％
（１３，９？ｉ　％　）及びＢｒ　＝　１３．１４　％
　（１３，２４％）２（１，２ＨＢｒ、ＩＴ−Ｇｌｙ−
Ａｒｇ−ＭＯＡ化合物２　ｃ　４．８３　、！ｉ’　（
８ミリモル）を例１ｄにより氷酢酸中２　Ｎ　−ＨＢｒ
　３２　ｍｌで脱ブロックした。イυらｈた粗製生成物
をＭｅＣｍ　１［Ｉ　Ｑ　ｍｌ中に溶かしかつ”セファ
デックス”ＬＨ−２Ｑのカラム上で精製した。トリプシ
ン処理により４−メチル−７−アミノ−クマリンの遊離
下に分ｌ１ｌＩ＃するＭθＯＩＩ溶出液の両分な真空中
６０　で濃縮乾固した。得られた残渣な真空乾燥箱中Ｐ
２Ｏ５上４０°で乾燥後、ＤＳＣにおいてＬＭＳ中で均
一であった無定形化合物２　ａ　４．０５　ｇ　（理論
量−の９２．０％）が得られた。元素分析及び実験式：
ｃｌｏＩ（２６Ｎ６０４Ｂｒ２からの計算により次の数
値が明らかになった：Ｃ＝３９．０２％（３９，２９チ
）、１（＝　４．７８幅（４，７６係）、Ｎ＝　１５．
３９％（１５，２７％）及びｓｒ　＝　２８．７２　％
（２９，０４チ） ２　ｅ、　Ｂｏｃ−Ｌ　ｏ　ｇ−ＣｂＯ−Ｇ１−八ｒ　
−ＭａＡ、ＨＢｒ化合物２　ａ　２．７５　、！ｉ’　
（５ミリモル）を例１θによりＢＯＱ−Ｌｙｅ−（ε−
ｃｂｏ）−〇Ｔ）ＮＰ　２．７６９　（５−５ミリモル
）と反応させた。得られた粗製生成物を５０％−ＡｃＯ
Ｈ７５ｍｌ中に溶かしかつ”セファデックス”Ｇ−１５
０カラム上で精製した。

トリプシン処理により４−メチル−７−アミノ−クマリ
ンの遊離下に分離したＡ　ｃＯＨ溶出液の両分を真空中
４０°で濃縮乾固した。残渣な、１生乾燥箱中Ｐ２Ｏ５
上６０°で乾燥後、ＤＳＣにおいてＬＭＳ中で均一であ
った無定形化合物２８３．４１９　（理論量の８２．０
チ）が得られた。元素分析及び実験式：　Ｃ５７Ｈ，５
１ＮＢＯｏＢｒからの計算により次の数値が明らかとな
った二〇＝５３．１３チ（５３，４３％）、Ｈ＝　６．
２４％（６，１８チ）、Ｎ＝１３．７６％（１３，４７
係）及びＢｒ　ｍ９．４５　’！＝　（９，６１％　）
アミノ酸分析により所期のアミノ酸が正しい比で得られ
た： ａｌｙｌ、００　：　Ｌｙｓ　１．０２　：　Ａｒｇ　
Ｏ，９８２ｆ、Ｂｏａ−Ｌｙｅ（ε−０ｂｏ　）−Ｇｘ
ｙ−Ａｒｇ−ＭＣＡ　、ＡｃＯＨ化合物２０Ｂ、３２．
９　（１０ミリモル）を例１ｆにより相応するアセテー
ト塩に変換した。該生ｈｌ物７．９５　、！ｉ’　（理
論量の９８．０％）が得られた。

例　６ 内容積１０００＋ｎ／！の三首丸底フラスコ中で乾燥Ｃ
ｂｏ−Ａｒｇ−ＯＨ０ＨＣｉ　４．４　Ｂ　、’７　（
０，１モル）を新しく蒸留した無水ＤＭＦ　１５　Ｑ　
ｍＡ、及び無水ＴＨＦ３００　ｍ／！の混合物中に２０
　で溶解した。−１０に冷却した溶液な攪拌及び水分痒
断下にｙ２ｔ３Ｎ１０．２　、！７　（０，１モル）？
添加した。その後、この混合物に２０分間でＴＨＦ　５
　Ｑ　ｍｌ中のクロル蝦酸イソブチルエステル１３．６
５９　（０，１モル）の溶液を、反応温度が一５°り・
上廻らないように満願した。更に−１０〜−５°で１０
分間反応させた後で、反応混合物Ｋ　ＤＭＦ　７５厭中
の５−アミノ−イソフタル酸−ジメチルエステル２０．
９２　＆　（０，１モル）の溶液を６０分間で満願し、
その際に反応温度は常に一５°を下廻るようにした。反
応混合物を一５°で更に１時間反応させた。その後、２
０　で−晩攪拌し、次に−１５に冷却してＥｔ３Ｎ、Ｈ
ＣＪ、を結晶させた。

形成した１ｃｔ３Ｎ、ｉｚを濾取しかつ冷い少量のＤＭ
Ｆで後洗浄した。濾液を洗浄溶液と一緒に真空中５０　
で濃縮乾固した。残渣を５０％−ＡｃＯＨ１０００ＴＬ
ｌ中に溶かしかつ５０　％　−ＡｃＯＨで平衡化した”
セファデックス”Ｇ−１５０カラム上でｒル濾過するこ
とにより精製した。トリプシン処理により５−アミノ−
イソフタル酸−ジメチルエステルの遊離下に分離したＡ
ｃＯＨ溶出液の両分な真空中４０°で濃縮乾固した。残
渣を真空乾燥箱中Ｐ２Ｏ３上５０°で乾燥後、ＤＳＣに
おいてＬＭＳ中で均一な無定形化合物３　ａ　２４．６
ｆｌ（理論量の４５．９１　）が得られた。元素分析及
び実験式’　Ｃ２４Ｈ３゜Ｎ　５０　、％Ｊからの計算
により次の数値が明らかになった：ＣＩ＝５３．２１１
（５３，７８％　）、Ｈ＝５．７１　％（５，６４チ）
、Ｎ＝１３．２０％（１３，０７チ）及びＣＺ＝６．５
２係（６，６２％　） ３ｂ、２ＨＢｒ、Ｈ−Ａｒｇ−ＤＰＡ 化合物３ａ２１．４４．！ｉｉ’（４０ミリモル）￥例
１ｂにより脱ブロックした。後処理後、得られた粗製生
成物をＭｅＯＨ２５０ｍｌ中に溶解しかつ”セファデッ
クス”ＬＨ−２００カラム上でｒル濾過することにより
精製した。トリプシン処理により５−アミノ−イソフタ
ル酸−ジメチルエステルの遊離下に分離したＭｅＯＨ溶
出液の両分を真空中で濃縮乾固した。残渣な真空乾燥箱
中Ｐ２Ｏ５上４０　で乾燥後、ＤＳＣにおいてＬＭＳ中
で均一な無定形化合物３　ｂｌ　９．６３９　（理論量
１’）９３．１％）が得られた。元素分析及び実験式：
Ｃ１６Ｈ２５Ｎ！＋０５８ｒ２からの計算により次の数
値が明らかになった：ａ＝３６．８２％（３６、４５％
）、Ｈ＝　４．６７％（４，７８チ）、Ｎ＝１３．４５
チ（１３，２８％）及びＢｒ　＝　２９．８５％（３０
，３１１）化合物３　ｂ　５．２７．９　（１０ミリモ
ル）を例１Ｃにより０ｂｏ−Ｇｌｙ−ＯｐＮＰ　３．６
５１７　（１１ｚ−リモル）と反応させた。後処理後に
得られた粗製生成物を５０　％　−ＡＣＯＨ２０’Ｏｍ
／中に溶解しかっ０セフアデツクス”Ｇ−１５０カラム
上で精製した。トリプシン処理により５−アミノ−イソ
フタル酸−ジメチルエステルの遊離下に分離したＡｃＯ
Ｈ溶出液の両分を真空中４００で濃縮乾固した。残渣？
真空乾燥箱中Ｐ２Ｏ５上６００で乾燥後、ＤＳｃにおい
てＬＭＳ中で均一な無定形化合物３　Ｑ　５．２９　、
Ｐ　（理論量の８６．０％）が得られた。元素分析及び
実験式’　ｃ２６Ｈ３Ａ”６ｏ８”ｒからの計ｎＶＣよ
り次の数値が得られた：ｃ−４８．５０チ（４８，９９
チ）、Ｈ＝　５．２８％（５，２２チ）、Ｎ＝１２．９
２％（１３，１８％）及びＢｒ＝１２．３３％（１２，
５３％　）３ｔ１．２ＨＢｒ、Ｈ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｄ
ＰＡ化合物３ｃ５．１０ｇ（８ミリモル）を例１ｄによ
り氷酢酸中の２Ｎ　ＨＢｒ３２１１Ｖで脱ブロックした
。得られた粗製生成物の後処理後、ＭｅＯＨ１００ｍ／
中に溶解しかつ“セファデックス”ＬＨ−２００カラム
上で精製した。トリプシン処理により５−アミノ−イソ
フタル酸−ジメチルエステルの遊離下に分離−したＭｅ
ＯＨ溶出液の両分を真空中３０°で濃縮乾固した。残渣
を真空乾燥箱中Ｐ２Ｏ５上４０で乾燥後、ＤＳＣにおい
てＬＭＳ中で均一であった無定形化合物３ｄ４．２５　
＃　（理論量の９０．９％）が得られた。元素分析及び
実験式”　１８Ｈ２［］Ｎ６０６Ｂｒ２からの計算によ
り次の数値が明らかになった：Ｃ＝３６．８５％（３７
，００チ）、［（＝　４．９０％（４，８３％）、Ｎ　
＝　１４．７２チ（１４，３８％）及びＢｒ　＝　２６
．９５％（２７，３５％）３θ、ＢＯＣ−Ｌｙｓ（ε−
Ｃｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＤＰＡ、ＨＢｒ化合物３　
ａ　２．９２９　（５ミリモル）を例１θによりＢＯ０
−Ｌｙｓ　（ε−０ｂｏ）−０ｐＮＰ　２．７６１１　
（５，５ミリモル）と反応させ、後処理後に得られた粗
製生成物を５０％−ＡｃＯＨ１０Ｑ献中に溶かしかつ”
セファデックス”Ｇ−１５０カラム上で精製した。トリ
プシン処理により５−アミノーイソフタル酸−ジメチル
エステルの遊離下に分離したＡｃＯＨ溶出液の画分を真
空中４０°で濃縮乾固した。残渣す真空乾燥箱中Ｐ２Ｏ
５上６０　で乾燥後、ＤＥＩＯにおいてＬＭＥＩ中で均
一な無定形化合物３　ｅ　３．６４　ｇ　（理論量の８
４．１％）が得られた。

元素分析及び実験式：　０３７Ｈ５３”８”□、Ｂｒか
らの計算により次の数値が得られた：ｃ＝ｓｔ、ｏｓ％
（５１，３３チ）、Ｈ＝　６．２５％（６，１７％）、
Ｎ二１３．２６　％　（１２，９４％　）及びＢｒ−９
，１０チ（９，２３チ） アミノ酸分所産より正しい比の所期のアミノ酸が認めら
れた： Ｇｌｙ　１．００　：　Ｌｙｅ　１．００　：　Ａｒｇ
ｏ、９７３ｆ、　Ｂｏｏ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｏｂｏ）−Ｇｌ
ｙ−Ａｒｇ−ＤＰＡ、ＡｃＯＨ化合物６８８．６６１　
（１ｏミリモル）を例１　、ｆ　Ｋ　ヨり相応するアセ
テート塩に変換した。

生成物８．２４．９’　（理論量の９７．５％）が得ら
れた。

例　４ Ｂｏｏ−Ｌｙｓ（ｔ−（！ｂｏ　）−八ｌａ−Ａｒｇ−
２−ＮＡ、Ａｃ０Ｈ４ｂ、２ＨＢｒ、Ｈ−Ａｒｇ−２−
ＮＡ市販のｃｂｏ−Ａｒｇ−２−ＮＡ、）ｌｃｉ９−４
０　ｇ　（２０ミリモル）を例１ｂにより氷酢酸中の２
８−　ＨＢｒ８Ｑｍｉの溶液で脱ブロックした。後処理
後にイむられた生成物をＭθＯＨ１５０ｍ／中に溶かし
かつ”セファデックス”ＬＨ−２Ｑのカラム上で精製し
た。トリプシン処理により２−ナフチルアミンの遊離下
に分離したＭθＯＨ溶出液の両分？真空中３０°で濃縮
乾固した。残渣す真、空乾燥箱Ｐ２Ｏ５上４０°で乾燥
後、ＤＳＱにおいてＬＭＳ中で均一な無定形化合物４　
ｂ　Ｂ、６０　ｇ（理論量の９３．２％）が得られた。

元素分析及び実験式：０１６Ｈ２３Ｎ　５０Ｂ　ｒ　２
からの計算から次の数値が明らかになった：ｃ＝４２．
０８％（４１，６７％）、Ｈ＝５．１２９６（５，０３
％）、Ｎ＝１４．６８％（１５，１９％）及びＢｒ　＝
　３３．９６　％（３４，６５％）。

４ｃ、　Ｏｂｏ−Ａｌａ−Ａｒｇ−２−ＮＡ、ＨＢｌ−
化合物４　ｂ　４．６　ｇ（１０ミリモル）を例１Ｃに
よりｃｂｏ−Ａｌａ−０１）ＮＰ　３．８０１／　（１
１ミリモル）と反応させた。後処理後得られた粗製生成
物を５０　％　−Ａｃｏｌ（１５０１ｎｌ中に溶かしか
つ”セファデックス”Ｇ−１５０カラム上で精製した。

トリプシン処理により２−ナフチルアミンの遊離下に分
離したＡＣ！ＯＨ溶出液の画分な真空中４０℃で濃縮乾
固した。残渣を真空乾燥箱中Ｐ２Ｏ５上６０°で乾燥後
Ｄ８Ｑ　ＶｒおいてＬＭＳ中テ均一な無定形化合物４　
Ｃ４，９５、！？　（理論量の８４．５％）が得られた
。実験式二元素分析及び０２７　Ｈ３３Ｎ　６０４　Ｂ
　ｒからの計算から次の数値が明らかになった：０＝５
５．７２チ（５５，３９％）、Ｈ二６．７３チ（５，６
８％）、Ｎ＝　１４．６８チ（１４，３５％）及びＢｒ
＝＝　１３．４２％（１３，６５％）。

４ｄ、２ＨＢｒ、Ｈ−Ａｌａ−Ａｒｇ−２−ＮＡ化合物
４０４．６８１１（８ミリモル）を例１ｄＫより氷酢酸
中の２　Ｎ　−ＨＢｒ　２８ｍＡで脱ブロックした。後
処理して得られた精製生成物ＱＭｅＯＨ１ｏｏｍｌ中に
溶かしかつ”セファデックス″ＬＨ−２００カラム上で
精製した。トリプシン処理により２−ナフチルアミンの
遊離下に分離したＭｅＯＨ溶出液の両分を真空中３００
で濃縮乾固しγこ。残渣を真空乾燥箱中Ｐ２Ｏ５上４０
°で乾燥後、ＤＳＱ　ＶｃおいてＬＭＳ中で均一な無定
形化合物４ｄ４．０８．９　（理論量の９５．８％）が
得られた。元素分析及び実１式”　ｌＱ’ｔ８Ｎ６ｃ２
ｓｒ２カラノ計算から次の数値が明らかになった：Ｃ二
４３．９％（４２，８７％　）、Ｈ＝　５．３２％（５
，３０％　＞、Ｎ　＝　１６．０２％（１５，７９％　
）及びＢｒ＝＝２９．６８％（６０゜０２チ） ４ｅ、　ＢＯＣ−Ｌｙｅ（ε−Ｃｂｏ）−Ａｌａ−Ａｒ
ｇ−２−ＮＡ、ＨＢｒ化合物４　ｄ　２．６６　ｌＩ（
５ミリモル）す例１ｅによりＢｏｏ−Ｌｙｅ（ｇ−Ｏｂ
ｏ）−０ｐＮＰ　２．７６　／／　（５，５ミリモル）
と反応させた。後処理して得られた粗製生成物を５０％
−ＡｃＯＨ１Ｑ　Ｑ　ｍＡ　中Ｋ　溶／ｌ’　シかつ”
七ファデックス”Ｇ−１５０カラム上で精製した。トリ
プシン処理により２−ナフチルアミンの遊ｔｙｔ下忙分
離したＡｃＯＨ溶出液の最初の主要主画分な↓−１空中
４０’で濃縮乾固肱その後真空乾燥箱中Ｐ２ｏ５上６０
０で乾燥させた。

ＤＥＩＱにおいてＬＭＳ中で均一な無定形の化合物４θ
ろ、４５．？（理論量の８４．８チ）が得られた。

元素分析及び実験式”　３８Ｈ５１Ｎ８０７Ｂｒからの
計算により次の砂値がａられた：ＣＣ５０５，８８％（
５６，０８％）、Ｈ＝６．６３％（６，５６チ）、Ｎ　
＝　１４．０２％（１３，７７％）及びＢｒ＝９．８０
％（９，８２チ） アミノ酸分析により正しい比の所期のアミノ酸が認めら
れた： Ａｌａ　１．００、Ｌ７１１１１．０２、Ａｒｇ　０．
９７４ｆ、　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ε−ｃｂｏ）−Ａｌａ−
Δｒｐ−２ＮＡ　ＡｃＯＨ化合物４０８．１４．９　（
１０ミリモル）２例１ｆＫより相応するアセテート塩に
変換した。

この生成物７．６５．９（ｙＰ論、最の９６．５％）が
イ□られた。

例　５ 十分に乾燥したｃｂｏ−ｋｒｇ−ＯＨ，ＨＣｆ　３．４
５１（１０ミリモル）　ヲｉｉＨＭＰＴＡ　１００ｒｎ
ｉ中テ水分遮断下に溶解した。−１０°に冷却後、Ｋｔ
３Ｎ１．３９＋＋＋／！（１０ミリモル）？その溶液に
溶かしかつその後でＨＭＰＴＡ　２　Ｑ　ｍｌ中のクロ
ル蟻酸イソブチルエステル１．３５Ｆ（１０ミリモル）
ヲ１５分間滴加満願その際温度は−１０〜−５゜に保持
した。その後、得られた溶液にＨＭＰＴＡ１５ｍｌ中の
１−ナフチ／ｌ／７ミ７１．７２ｇ、（１２ミリモル）
を満願し、その際前記の温度を保持した。反応混合物を
８０　で丁・空中で濃縮乾固した。残渣をＭθＯＨｊ［
１３ｍｌ中に溶かしかつＭｅＯＨ中の”セファデックス
”ＬＨ−２Ｑのカラムでｒル濾過すること九より精製し
た。トリプシン処理により１−ナフチルアミンの遊離下
に分離した溶出液の両分がＤＳＱにおいてＬＭＩＥ中で
均一であることが明らかになった。この両分を濃縮乾固
した。無定形化合物５　ａ　２．８２　！！（理論量の
６０．１％）が得られた。

元素分析及び実験式：Ｃ２４Ｈ２８Ｎ５０３ｃ１からの
計算により次の数値が明らかになった：ＣＣ６０１，０
７％（６１，５３％）、Ｈ＝６．１０１（６，０１係）
、Ｎ＝１５．０５チ（１４，９Ｑチ）及びＣに７．３８
チ（７，５４％） ５ｂ、２ＨＢｒ、Ｈ−Ａｒｇ−１−ＮＡ化合物５　ａ　
９．４０．９　（２０ミリモル）を例１ｂにより氷酢酸
中の２　Ｎ　−ＨＢｒ　３　Ｑ　ｕ／の溶液で脱ブロッ
クした。後処理して）、＋１られた生成物をＩＡｅＯＨ
１５０ｍｌ中に溶かしかつ”セファデックス″ＬＨ−２
Ｑのカラム上で精製した。トリプシン処理により１−ナ
フチルアミンの遊離下に分離した。ＭｅＯＨ溶出液の両
分な真空中６０て濃縮乾固した。残渣を真空乾燥箱中Ｐ
、０．上４０°で乾燥後、ＤＳＯにおいてＴＪＭＳ中で
均一な無定形化合物５　ｂ８．４０　＆　（理論量の９
０．８チ）が得られた。元素分析及び実験式： Ｃ１６■Ｉ２３Ｎ５０Ｂｒ２からの計算により次の数値
が明らかになった：ｃ＝４２．２Ｄ係（４１，７Ｓ　７
チ）、Ｈ＝　５．０８チ（５，０３％）、Ｎ　＝　１５
．３３％（１５，１９係）及びＢｌ−＝３４．１０　％
（３４，６５係）。

化合物５　ｂ　４．６　ｇ（Ｉ　Ｑミリモル）を・例１
ｃによりｃｂｏ−Ａｌａ−ＯｐＮＰ　３．８０９　（１
１ミリモル）と反応させた。後処理して得られた粗製生
成物な５０％−ＡｃＯ）ｌ　１５　［１ｍｌ）中に溶か
しがっ”セファデックス゛’Ｇ−１５のカラム上で精製
した。

トリプシン処理により１−ナノチルアミンの遊離下に分
離したＡＣＯＨ−ｉ出港の両分を真空中４０°で濃縮乾
固した。残渣な泊空軟燥箱中Ｐ２ｏ５上６０°で乾燥後
に、Ｄ８ＣにおいてＬＭＳ中で均一な無定形ｆヒ合物５
　ｃ　４．８０９　（理論量の８２．１％）が得られた
。元素分析及び実験式＝０２７Ｈ３３Ｎ６０４Ｂｒから
の計算により次のむ値が得られた：０＝５５．６２係（
５５，ろ９チ）、Ｈ＝６．７０％（５，６８％）、ｘｑ
＝１４．６３係（１４，３５％）及びＢｌ−＝１３．３
５％（１３，６５％）。

５ａ、　２ＨＢｒ、Ｈ−Ａｌａ−Ａｒｇ−４−ＮＡ化合
物５０４．６８　＆（８ミリモ＃）ｋｆｔｌｌｄにより
氷酢酸中の２　Ｎ　−ＨＢｌ・２８ｍ１で脱ブロックし
た。後処理して得られた粗製生成物＋１ＭｅＯＨＩＱＱ
ｍＡ中に溶がしかっ”セファデックス″ＬＩ（−２０の
カラム上で和製した。トリプシン処理により１−ナフチ
ルアミンの；Ｆｉ：　ｍｌ下に分離したＭｅＯＨ溶出液
の両分？や空中３０．０で濃縮乾固した。残渣を１５空
乾燥箱中ｐ２ｏ５上４０’で乾燥後にＤＳＱにおいてＬ
ＭＳ中で均一な無定形化合物５ｄが得られた。実験式：
元素分析及びＣ□、Ｈ２ＲＮ、０２Ｂγ２がらの刷ｒｉ
により次のむ値が得られた：ｃ＝４３．０９％（４２−
８７％）、Ｈに５．３８　％　（５，３０％　）、Ｎ＝
１６．１０％（１５，７９％）　ｌｉｔ、　（Ｊ　Ｓｒ
　＝　２９．８０　％　（３０，０２％）５ｅ、　ＢＯ
（！−Ｌｙｓ（ｔ−（！ｂｏ）−Ａｌａ−Ａｒｃ（−１
−ＮＡ、ＨＢｒ−一　−１１蜘、。１−１−２ 化合物５　ｄ２．６６　、？　（５ミリモル）ｅ例１ｅ
によりＢＯＱ−Ｌｙｓ　（ｔ−０ｂｏ　）−。ｐＮＰ　
２．７６９　（５，５ミリモル）と反応させた。後処理
してイ■られた粗製生成物を５　Ｑ　％　−ＡＴ！ＯＨ
ｉ　［］　０＋＋＋坤Ｋｉｆ７ＭＬかつ”セファデック
ス”Ｇ−１５０カラム上で精製した。トリプシン処理に
より１−ナフチルアミンの遊離下に分離したＡｃＯＨ溶
出液の最初の主要画分をへ空中４０’で濃縮乾固し、そ
の後真空乾燥相中Ｐ２ｏδ上６ｏ０で乾燥させた。、Ｄ
ｓｃにお（・てＬ＋ＡＳ中で均一な無定形化合物５ｅ３
．４６　、Ｐ　（理論杯の８５チ）が得られた。元素分
析及び実験式：　ｅ３８Ｈ，、、Ｎ８Ｑ、Ｂｒがらの計
算により次の数値が得られた：ｃ＝５５．９８％（５６
，０８る）、Ｉ（＝　６．６８φ（６，５６％）、Ｎ＝
１３．０２予（１３，７７％）及びＢｒ＝９．８０係（
９，８２係り。

アミンｆ′β分析により正しい比のθ「期のアミノ酸が
イ０られた： Ａｌｅ　１．００　：　Ｌｙｓ　１．０１　：　Ａｒｇ
Ｏ，９７５ｆ、ＢＯＣ−Ｌｙｅ（ε−Ｏｂａ）−Ａｌａ
−Ａｒｇ−１−ＮＡ、ＡｃＯＨ化合後＋５ｅ８．１４ｇ
１Ｏミリモル）を例１ｆにより相応するア七デート塔に
変換した。

この生成物７．’７７　、？　（理論ｔ：の９Ｂ、０％
）が得「）第１た。

１４す６ 市販のＯｂｏ−Ａｒｇ−４−ＭｅＯ−２−ＮＡ、ＨＣｊ
！　ｉ　Ｑ、Ｑ　ｊｉ（２０ミリモル）を例１ｂにより
氷酢酸中の２Ｎ−ＨＢｒ　３０　ＴＴｌｌで脱ゾロツク
した。後処理して得られた粗製生成物をＭｅＯＨｉ　５
　Ｑ　ｒｒＪ中に′＃解しかつ”セファデックス″Ｌ）
１−２００カラム上でＸｒｔ　Ｄ”した。トリプシン処
理により４−メトキシ−２−ナフチルアミンのＪｌ　ａ
下に分離したＭ　ｅ　ＯＨ溶出液の主要フラクションを
真空中３０゜で濃縮乾固Ｉ７た。残渣を真空乾燥箱中Ｐ
２Ｏ３上４０　で乾燥伏、ＤＳＣにおいてＬＭＳ中で均
一な無定形化合物６　ｂ　８．９８　ｆ／　（理論是の
９１．４％）が得らＪまた。元素分析及び実路一式：Ｃ
１ツＨｐｓｋ”ｈＯ２Ｂｒ２からのＨＦ算によりυこの
改ｊｔイ直が得られた：０＝４１．２２％（４１，５７
悸）、Ｈ−５，１９％（５，１３チ）、ＩＩ　＝＝　１
４．４０％（１４，２６％　）及びＢｒ　＝　３２．０
１　ｆｒ　（３２，５３％）（５ｃ、Ｃ！ｂｏ−Ａｌａ
−Ａｒｇ−４−ＭＱＯ−２−ＮＡ、！（Ｄｒ化合物６　
、ｂ　４．９１　ｇ（１０ミリモル）を例１ＣによりＣ
ｂｏ−Ａｌａ−ＯｐＮＰ　５．８０９　（１１ミリモル
）と反応さ眩た。後処理後、得られた粗製生成物な５０
チーＡｃＯＨｉ　５０　ｍｌＩ中に溶解しがつ”セファ
デックヌ°’Ｇ−１５０カラム上で精製した。トリプシ
ン処理により４−メトキシ−２〜ナフチルアミノの遊離
下に分１ζｔしたΔｃＯＨ１゛ｄ出液の最初の主ツシフ
ラクショ／を貞孕中４０゜で濃縮乾固した。残渣なｎ空
乾燥箱中Ｐ２Ｏ５上６０°で乾燥後、ＤＳＣにおいてＬ
ＭＳ中で均一なブ、・１．（定ガイ化０物ｒ６ｃ４．８
６Ｆ／Ｃ理ｉ’６ｉｉ　＋、ｉの７９．０％）が１０ら
ノまた。元素分析及び実験式：Ｃ２８Ｈ３５Ｎ６０．Ｂ
ｒからの計獅−により次の数値が明らかｒ（なった：ｃ
＝５４．”＋８チＣ５４，６４係）、１４　＝　５．８
１　％（５，７３％　）、１１＝１３．９３％（１６，
６５％　）及びＢｒ二１２．７５％＜　１２．９８％）
６ｄ、２１ｉＨｒ、＋（−Ａｌａ−へｒｇ−４−ＭｅＯ
−２−Ｌ４八化合物６　ｅ　４．３１．９　（７ミリモ
ル）も７例１ｄにより氷０百１゛２″中の２１薯−１１
Ｂｒ２εｊ　ｍｌ＋で脱ブロック［、た。後処理して得
らｔ【た粗製生成物ＩＭｅＯＨ１００１中に俗戻し、か
つ°°セファデックス′。

ＬＨ−２０の力シム上でＦ／７製した。トリプシン処理
（（より４−メトギン−２−ナフチルアミンの形成）に
分Ｎ１４シたλべθＯＥ＋晶出液の主要画分ン真空中６
０°で一縮乾周した。残渣をｐ空乾燥相中Ｐ２Ｏ５上４
０°で乾燥後、ＤＳＣ番τ」ｄいてＬＭＢ中で均一な無
定形化合物６ｂ３．７４ｇ（理論量の９５．０　ｇ））
が仕らねた。元素分析及び実験式：０２０Ｈ３ＯＮ６０
３８ｒ２からの計看により次の数値が明・らかになった
：０＝４３．０１φ（４２，７２俤）、Ｈ＝　５．４４
％（５，３８乃）、ＩＪ　＝　１５．．２５係（１４，
９５１）及びＢｒ　＝　２８．０３１　（２８−４Ｍ＞
６０、ＢＯＣ−Ｌｙｓ（ε−○ｂｏ）−Ａｌａ−Ａｒｇ
−４−ＭｅＯ−２−ＮＡ、ＨＢＩ−化合物６　ｄ　２．
８１　ｇ　（５ミリモル）を例１θによりＢｏｏ−Ｌｙ
ｓ（ε−Ｃｂｏ）−０ｐＮＰ　２．７６９　（５，５ミ
リモル）と反応させた。後処理して得られた粗製生成物
を５０チーｐ−ＣｃＷ　１２５　ｍ／！中に溶かしかつ
”セファデックス’Ｇ−１５のカラム上で精製した。ト
リゾシン処理により４−メトキシ−２−ナフチルアミン
の遊猷「下に分離したＡｃＯＨ浴出液の最初の主要画分
を゛ム窒中４０°で濃縮乾固した。残渣をｐ°空乾燥箱
相中２Ｏ−、上６０°で乾燥後、ＤＳＣにおいてＬ？４
Ｓ中で均一な無定形化合物６８３．３１９　（理論量の
７８．５係）が得られた。元素分析及び実験式：　［’
！３ｇＨ５３ＮＢＯＢＢｒからの計９により次のむ値が
得られた：ｃ＝５５．０５％（５５，５１チ）、Ｈ二６
．６６％（６，５７チ）、Ｎ＝１’３．４０％（１３，
２８％）及びＢｒ＝９．６０％　（９，４７％） ６ｆ、Ｂｏｏ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−Ａｌａ−Ａｒｇ
−４−ＭｅＯ−２−ＮＡ、へｃＯＨ化合物６　ｅ、８．
４４．！ｉ＋　（１０ミリモル）を例１ｆにより相応す
るアセテ−）　ｋＭに変換した。

この生成物８．０５　！！（理論ｂｉ’の９７．８％）
がイ（）られた。

次表には、本発明によるペプチド誘導体のＣ１−エステ
ラーゼによる分解性についての数値データが掲載されて
いる◎記載の数値は次のように測定したニドリスイミダ
ゾール緩衝液１．８ｓ＋／と、浴１ｆｆ１１−当’）８
００）シルチロシンエチルエステル単位（ＴＴＥｇ　）
　Ｃ１−エステラーゼを含有する溶液０．０１５４の混
合物に、２　Ｘ　１０−”モルのペプチド誘導体浴ｆｉ
０．２ｍｌを６７°で添加した。その後、ペプチド誘導
体の分解の際に生成する脱離生成物（例えばｐ−ニトロ
アニリン、４−メ・□′トキシー２−ナフチルアミ／又
は４−メチル−７−アミノクマリン）により５分間の短
時間で惹起された光学密度ΔＯＤの窄加を４０５　ｎｍ
で測定した◎螢光性脱離生成物（例えば１−又は２−ナ
フチルアミン又は１．６−ジ（メトキシカルボニル）−
５−アミノ−ベンゼン）の場合、光学密度のノ・Ｒ加は
相応する発光波長で測定した。単位時間当りの光学密度
の増〃■の測足値からモル吸光係数に蘂いて単位時間当
りに形成された分解生成物のｉ七をナノモルで計算する
。

表 １　２．９７　２　２．５０ ３　２．６０　４　２．５５ ５　２．５０　６　２．２７ ７　２．９７　８５．２７ ９　７．２７　１０　６．４７ １１　５．８７　１２　５．６０ １ろ　４．９３　１４　４．１３ １５　２、．５７　１６　２．６７ １７　１．００　１８　３．６７ １９　４．１３　２０　９．５０ ２１　５．９０　２２　８．ｔＪＵ ２３　９．８７　２４　７．６３ ２５　６．５０　２６　２．１０ ２７　２．９３　２８　２．８３ ２９　３．５７　３［）　４．６３ ３１　’２．６７　３２　１．８７ ３６　３．６７　３４　４．００ ３５　４．６０　３６　５．８０ ３７　５．１３　３８　６．４０ ３９　９．５３　４０　１．００ ４１　１０．５０　４２　０．６７ ４３　４．９０　４４　０．６７ ４５　ろ、３０　４６　３．１７ ４７　４．５０　４８　１．［Ｊ０ ４９　７．２７　５０　０．８３ ５１　６．７０　５２　０．６７ ５３　１．００　５４　０．５０ ５５　６、ろ０　５６　ろ、１０ ５７　３．１７　５８　２．８３ ５９　２．３３　６０　５．８３ ６１　２．６７　６２　５．００ ６３　５．６７ この分解性は１分間当りに１ＴＴｉｃ１−エステラーゼ
により形成された分解生成物（ナノモル）で表わす。

血しよう中の０１−エステラーゼインヒビター濃度の６
１１１定は次のように実施することができる：　ｐＨ７
，４、イオン濃度０．２のトリスイミダ・戸−ル緩衝液
１．６ｍｌ及びチトレート血しよう０．１ｍｌの混合物
を４ｆＪ＃ｃ１−エステラーゼｏ、ｉ　ｙ＋εと６７°
で４分間恒温保持する。培養物に本発明による基質の２
　Ｘ　１０−３モルの水ｆＧ　７（＋、　０．２　ｍｅ
を添加した。基質が色原体の基（Ｒ１）としてｐ−ニト
ロアニリノ基を有する場合、１分間当りに遊離する分解
生成物ｐ−ニトロアニリン（Ｒ”−Ｈ）の破を４　［］
　５　ｎｍで分光光度法により測定する。

血しようを含有しないが、その他は同じ組成の試験系で
１分間当りに遊離するｐ−ニトロアニリンの肴を前記の
ように測定する。両者の測定値の差から血しようの０１
−エステラーゼインヒビター濃度を測定する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式： ％式％ ） 〔式中 Ｒ１は酵素加水分解により着色又は（？Ｚ光光合合物形
   ｂν下に脱離可能であり、芳香族基又はヘテロ環式基で
   １１９換されている色素形ｎＭアミツノ、（２表わし、 Ｒ２は水素り表わすか又は ａ）炭素原子２〜６個？有する直鎖状又は分枝鎖状のア
   ルカノイル基、 ｂ）　シクロヘキシルカルボニル基、 Ｃ）アルカノイル中に炭素原子２〜４個な有するω−カ
   ル？キシルー１ω−メトキシカルボニル−又はω−エト
   キシカル？ニルーアルカノイル基、 ｄ）アルコキシ中に炭素原子１〜４個を有する直鎖状又
   は分枝鎖状のアルコキシカルボニル基、 ｅ）アルキル中に炭素１ｑ子１〜２個？有するアルキル
   スルホニル基もしくはフェニル−又はｐ−トルイル−ス
   ルホニル基、 ｆ）置換さ第１ていないか又は置換されているペン・ｔ
   イル基、又は ｇ）核が置換されていないか又は置換されているベンジ
   ルオキシカルボニル基な表わし、Ｒ３は核が１か換され
   ていないか又は置換されているベンジル基な表わし、 Ｘはグリシル基又はアラニル基を表わし、Ｙは単結合で
   あるか又は式ニ ーＮＨ−（Ｃ！Ｈ２）　−ｃＨ−ｃｏ−（式中Ｒ４はベ
   ンジル基、Ｉ ４ フェニル基、シクロヘキシル基、シクロヘキシルメチル
   基、４−ヒドロキシベンジル基、４−ヒドロキシシクロ
   ヘキシルメチル基ヲ表わしかつｍは０値ゼロでありかつ
   Ｙにより定義されるアミノ酸はＬ−又はＤ−耐傷１を有
   するかあるいはＲ４は水素な表わしかつｍは敷値０．１
   又は２を表わす）の基を表わす〕のベゾチド誘導体もし
   くは鉱酸又は有機酸とのその塩。 ２、Ｒ１がｐ−ニトロフェニルアミノ基、１−又は２−
   ナフチルアミノ基、４−メトキシ−２−ナフチルアミノ
   基、４−メチル−７−クマリルアミノ基又は１．３−ジ
   （メトキシカルボニル）−５−フェニルアミノ基である
   特許請求の範囲第１項記載の誘導体。 ６、Ｒ３がベンジル基、４−メチルベンジル基、４−メ
   トキシベンジル基、もしくは２−１ろ−又は４−クロル
   ベンジル基である特許請求の範囲第１項又は第２項記載
   の誘導体。 ４、Ｒ２が炭素原子２〜６個を有するアルカノイル基又
   はアルコキシ中に炭素原子１〜４個？有するアルコキシ
   カルボニル基を表わしかつＹが単結合を表わしかつＲ３
   がベンジル基を表わす〕特許請求の範囲第１珀又は第２
   　ＪＪ記叔の誘導体。 ５、Ｂｏｏ−Ｌｙｅ（ｇ−ｃｂｏ）−４１７−４ｒｇ−
   ｐＮＡ、ＡｃＯ［（。 ２ＡＯＯＨ，Ｈ−Ｌｙｅ（ｇ−Ｃｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒ
   （ｘ−ｐＮＡ　、Ａｃ−Ｌｒｙｓ（ε−ｃｂｏ）−Ｇｌ
   ｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ，ｃＨ３ｏｃｏ−Ｌｙｓ
   （ε−Ｏｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、Ａｃ０ＨＸ
   Ｃ２１（５０００−Ｌｙｅ（ε−Ｃｂｏ）−（）１ｙ−
   Ａｒｇ−ｐＮＡ、八ｃＯＨ、ｉｑｏ−ＢｕｔＯｃＯ−Ｌ
   ｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯ
   Ｈ，ｃＨ，ｃＨ２ｃｏ−Ｌｙｅ　（ｇ−Ｏｂｏ　）−Ｇ
   ｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ、ＣＨ３（ｌｊＨ２）
   ２ＣＯ−Ｌｒｙｓ（ε−Ｃｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐ
   ＮＡ、ＡｃＯＨ５ｃＨ３ｃＨ２ｏｃｏ−Ｃ）（、、−Ｃ
   ｏ−Ｌｙｅ　（ｉ−ｃｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ
   　、Ａｃ０）Ｉ　。 ＢＯＣ−Ｌｙｅ（ε−Ｃｂｏ）−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｐＮ
   Ａ、ＡｃＯＨ５Ｈ−Ｌｙｅ（ε−Ｃｂｏ）−Ａｌａ−Ａ
   ｒｇ−ｐＮＡ、２０Ｆ３ｃ！ＯＯＨＸＡｃ−Ｌｙｓ（ｇ
   −Ｃｂｏ）−Ａｌａ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ、０Ｈ
   ３０００−Ｌｙｓ（ε−Ｃｂｏ）−Ａｈａ−Ａｒｇ−ｐ
   ＮＡ　、ＡｃＯＨ、５ｏｅ−Ｇｌｙ−Ｌｙｅ（ε−Ｏｂ
   ｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ、２ＣＦ＊Ｃ
   ００Ｈ０Ｈ−Ｇ：ｌｙ−Ｌｙｓ（ｇ−ｃｂｏ）−Ｇａｙ
   −Ａｒｇ−ｐＮＡ　１０Ｈ３０−ｃｏ−Ｇｌｙ−Ｌｙｅ
   　（ε−Ｃｂｏ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨ
   、ＣＨ３−ＣＨ２−Ｃｏ−Ｇｌｙ−Ｌｙｅ（ｇ−Ｃｂｏ
   ）−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＡｃＯＨである特許請求
   の範囲第１項から第４項までのいずれか１項に記載の誘
   導体。 ６、酵素Ｃ１−エステラーゼ？含有する培地か又は中で
   前記酵素が生成するか又は消費されるその培地中の前記
   酵素？定量測定する方法において、前記培地な式： ％式％ ） 〔式中 Ｒ１は酵素加水分解により着色又は螢光化合物の形成下
   に脱錘町６Ｕであり、芳香族基又はヘテロ環式基で置換
   されている色素形成アミノ基を表わし、 Ｒ２は水素を表わすか又は ａ）炭素原子２〜６個を有する直鎖状又は分枝鎖状のア
   ルカノイル基、 ｂ）　シクロヘキシルカルボニル基、 Ｃ）アルカノイル中に炭素原子２〜４個な有スるω−カ
   ルボキシル−１ω−メトキシカルｇ　＝　ルー　又ハω
   −エトキシカルボニルーアルカノイル基、 ｄ）アルコキシ中に炭素原子１〜４個を有する直鎖状又
   は分枝鎖状のアルコキシカルボニル基、 θ）アルギル中に炭素原子１又は２個？有するアルキル
   スルホニル基もしくはフェニル−又はｐ−）ルイルース
   ルホニル基、 ｆ）置換されていないが又は１ｒ１換されているベンゾ
   イル基、又は ｇ）核が置換されていないか又はｈ′換されているベン
   ジルオキシカルボニル基を表わし、Ｒ３は核がｌｉ・を
   換されていないか又は置換さｉｔでいるベンジル基を表
   わし、 又はグリシル基又はアラニル基を表わし、Ｙは単結合で
   あるが又は式ニ ーＮＨ−（ＣＨ２）、−Ｃ！Ｈ−ＣＯ−（式中Ｒ４はペ
   ンシル基、４ フェニル基、シクロヘキシル基、シクロヘキシルメナル
   ＆、４−ヒドロキシベンジル基、４−ヒドロキシシクロ
   ヘキシルメチル基す表わしかつｍは数値ゼロでありかつ
   Ｙにより定義されるアミノ酸はＬ−又はＤ−配置？有す
   る力・あるいはＲ４は水素を表わしかつｍは数値０．１
   又は２を表わす）の基を表わす〕のペプチド誘導体と反
   応させかつ前記酵素のペプチド誘導体への接触的加水分
   解作用により単位時間当りに遊離する脱離生成物Ｒ１−
   ｐ。 の叶を測光法、分光測光法、螢光分光測光法又はｉ＆、
   気化学的方法により測定することを特徴さする酵素Ｃ１
   −エステラーゼ測定法。