JPS5982395A - アントラサイクリン化合物、その製造法およびその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｑ、ＩＩ発明の背景 本発明は、新規なアントラーリ゛イクリン化合物。

その製造法１６よびその用途に関する。

制癌性抗生物質としてのアントラザイクリン化合物は医
薬と１７で重要な位置を占めており、既に各種のもの力
′−提案されている。

一般に、化学物質の生理活性はその化学構造に依存する
ところが太きいから、アントラザイクリン化合物につい
てもそのアグリコン部分および糖部分の種類または置換
基において既存のものと異なる化合物に対しては不断の
希求があるといえよう。

（１〕発明の概要 本発明は、上記の希求に応女ろものである。

すなわち、本発明によるアントラ−リイクリン化合物ダ
イトリサルビシンまたはその酸附加塩は、下式で示され
るものまたはその酸附加塩である。

本発明によるアントラザイクリン化合物ダイトリザルピ
シンの製造法は、１丙当な培地にストレゾトミセス属の
アントラサイクリン化合′吻グイトリザルビシン生成能
を有１−る菌株を好気叩圧培養し、培養物からアントラ
ザイクリン化合物グイトリザルビシンを採取すること、
をＩ［に徴とするものである。

本発明によろ抗肺鵠剤は、１式で示されろアントラザイ
クリン化合物グイトリサルビシンせたはその酸附加塩を
有効成分と１−るものである。

本発明によるダラム陽性菌感染症治療剤は、下式で示さ
れるアントラサイクリン化合物ダイトリサルビシンまた
はその酸附加塙を有効成分とするものである。

たｙし、式中Ｒは下記０Ａ−ＣのいずＡしかを表わす。

１）種類および化学構造 本発明によるアントラサイクリン化合物であるグイ）　
ＩＪザルビシンは、上式で示される化学構造を有する。

式中、置換基Ｒには（Ａ）、（Ｂ）および（Ｃ）の三種
があり、それぞれの場合についてダイｌ−ＩＪサルピシ
ンをそれぞれダイトリサルビシンＡ　、　１ｉｉＪ　Ｂ
および同Ｃと呼ぶ。従って、本発明で「グイトリザルビ
シン」というとぎは、ダイトリサルビシンＡ〜Ｃのいず
れか一種または二種以上の渭合物を意味するものとする
。

ダイトリサルビシンはその糖部分にジメチルアミノ基を
有するから、ダイトリサルビシンは酸附加塩をつくるこ
とができる。Ｉ！ｆ１１ｎ１塩をっくるべぎ酸としては
、ハロゲン化水素酸、たとえば塩化水素酸、硫酸、酒石
酸等がある。

２）化学構造の決定 グイトリザルビシンＡ、ＢおよびＣをそ」ｔぞれ０、Ｉ
Ｎ塩酸に溶解し、８５℃で３０分間加温して加水分解し
、クロロホルムで抽出することにより、赤色の了グリコ
ンを得た。得られたアグリコンは。

シリカケルフレート上でのＲｆ値、マススペクトル、核
磁気共鳴ス被りトルおよび紫外部可視部吸収スペクトル
より、ダイトリサルビシンＡ、ＢおよびＣのいずれの」
烏合もβ−ロドマイジノンであることを同定した。

一方、加水分解後の水ｍ性部分を炭ｒ波銀で中和後、シ
リカゲルプレート上で（ｎ−ブタノール：Ａ’ｌ酸：水
二４：１：１）のｍ繰糸で展開して、構成糖を調べた。

糖の同定は、ｐ−アニスアルデヒド−硫酸を展開後のシ
リカゲルプレートに噴霧し、８０”Ｃで５分間加熱後の
発色したスポットの色８周。

およびＲｆ値を標準試料と比較する方法で行なって、ダ
イトリザルビシンＡ、ＢおよびＣの構成糖を次の表のよ
うに決定した。

２ａ　　１　　表 （注）　＊　核？１罹気共鳴スペクトルより確認。

次に、５％Ｐ　ｄ　／　Ｂ　ａ　Ｓ　Ｏ４を触媒どして
室温で３０分間接触還元を行なったところ、ダイトリザ
ルピシンＡ、ＢおよびＣ共に、シネルロースＢ、２−デ
オキシフコースおよびロドザミンからなるトリサツカラ
イドの遊離が認められた。一方、この反応により得らｈ
た、新たな赤色のグリコサイドをシリカゲルプレー）１
で分几仔および抽出し、更になっていることが判った。

第　２　表 以上の結果、ならびに本発明の化学物質のＮＭＲスペク
トル（第３１ヌ代第６は１およびｅｔ！　９　［司ン、
赤外吸収スペクトル（第２図、第５図、第８図）お上γ
ドマススペクトルより得もオｔた分子１４等より、ダイ
トリザルビシンＡ、ＢおよびＣの１ｆ４４　造は両式の
ように決定された。

３）ダイトリサルピシンＡの理化学的ｊ’１ミ９ｆｌｌ
外　観　　赤色粉末 （２）元素分析値 実１翳値　Ｃ：　６０．１５　　Ｈ：　　７．２８Ｎ　
：　　２．４１　０　：　３０．１ｆｉ計算値　Ｃ：　
６０．９０　　Ｈ：　　６．９９Ｎ　：　　２．３７　
０　：　２９．７５（但しＣ６０’８２Ｎ２０２２とし
て）（３）分子層　　１１．８３．３１ （４）融点　１８４°〜１８７℃ （５）比旋光度：〔α〕Ｌ５−＋１１９°（ｃ　：　ｏ
、ｔ　、　ｃ）ｙｃ＋３中）（６）紫外部可視部吸１区
スペクトル（メタノール中）第１図に示した通りであり
、またその内容は下表に示した通りである。

第３表 （力赤外線吸収スペクトル（Ｋ　Ｂ　ｒ　％Ｎ　）第２
図に示した通りである。

（８）核磁気共鳴スペクトル（２５０メガヘルツ、重ク
ロロホルム中） 第３１凶に示した通りである。

（９）溶解性 グイトリザルビシンＡは、メタノール、アセトン、酢酸
エチル、クロロホルム、アセトニトリルおよびジメチル
スルホキシド（Ｉ）ＭＳＯ）　に可溶。

水、ｎ−ヘキサン、石油エーテルおよびベンゼンには離
溶である。なお、ダイトリサルビシンＡはメタノールｄ
液で赤色であるがアルカリ性で赤紫色に変化する。

（１０）その他 ダイ、トリサルピシンＡは、ニンヒドリン反応は陰性で
あり、フェーリング溶液な還元しない。

なお、ダイトリザルビシンＡのシリカゲルプレート上で
の各種Ｍ繰糸でのＲｆ値は後記第６表に示した通りであ
る。

４）ダイトリサルビシンＢの理化学的性状（１）外　観
　　赤色粉末 （２）元素分析値 実験値　Ｃ：　６０．０２　　）Ｉ　：　　７．０１Ｎ
　：　　２．３０　０　：　３０．６７計算値　Ｃ：　
６１．０１　　Ｈ：　　６．８３Ｎ　：　　２．３７　
０　：　２９．８０（但しＣ６ｏＨ８ｏＮ２０□２とし
て）（３）分子量　　１１８１．２９ （４）融点　１９６〜１９８℃ （５）比旋光度：〔α兄５＝＋１３２°（Ｃ：０．１．
Ｃ）ＩＣｌ３中）（６）紫外部可視部吸収スペクトル（
メタノール中）第４図に示した通りであり、またその内
容は下表に示した通りである。

第　４　表 （力赤外線吸収スペクトル（１（Ｂｒ　ｆ、；ｇ　）第
５繭示した通りである。

（８）核磁気共鳴スペクトル（２５０メガヘルツ、重ク
ロロホルム中） 第６図に示した通りである。

（９）溶解性 ダイトリサルビシンＢは、メタノール、アセト７、　酢
酸エチル、クロロホルム、アセトニトリルおよびＤＭＳ
Ｏに可ｍ、水、ｎ−ヘキザン１石油工が、アルカリ性で
赤紫色に変化すイ）。

（１０）その他 グイトリザルビシンＢは、ニンヒドリン反応は陰性であ
り、フェーリング溶液を環元し／ｆい。

なお、ダイトリザルピシンＢのシリカゲルプレート上で
の各種溶媒系でのＲｆ値は後記主６辰に示した通りであ
る。

５）ダイトリサルピシンＣの理化学的性状Ｃ１ｏ■外　
観　　赤色粉末 （２）元素分析値 夷、験値　Ｃ：　６１．０１　　Ｈ：　　７．１５Ｎ　
：　　２．３５　０　：　２９．５４削算値　Ｃ：　６
１．８４　　Ｈ：　　ｆｉ、９２Ｎ　：　　２．４０　
０　：　２８．８３（但しＣ６ｏ■（８ｏＮ２ｏ２□と
して）（３）分子用　　１１６５．２９ （４）融点　１７３−１７ｆｉ°゛Ｃ （５）比施光度：〔α１１．−−１−１６７°（Ｃ：　
０．１、ＣＨＣｌ３ｒｔ−リ（６）紫外部可視部吸収ス
ペクトル（メタノール中ン第７図に示した通りで、ちり
、またその内容は下表に示した通りである。

第　５　表 （力赤外腺吸１１１７スペクトル（Ｋｎｒ＜ａ□ｉ７）
第８図に示した通りである。

（８）核磁気共鳴スペク）・ル（２５０メガヘルツ、塩
クロロホルム中） 第９図に示した通りである。

（９）溶解性 グイトリサルビシンＣは、メタノール、アセトン、酢酸
エチル、クロロホルム、アセトニトリルおよびＤＭＳＯ
に可溶、水、ｎ−ヘキサン、石油エーテルおよびベンゼ
ンには難溶である。なお、グイトリサル−シンＣはメタ
ノール溶液で赤色である力く、アルカリ性で赤紫色に変
化する。

（１０）その他 グイトリサルビシンＣは、ニンヒドリン反尾、は陰性で
あり、フェーリング溶液を還元しない。

なお、ダイトリザルピシンＣのシリカゲルプレート上で
の各種ぼ繰糸でのＲｆ値は下表にボす通りである。

第　６　表 １）概　要 アントラサイクリン化合物グイトリザルビシン。

は現在のところ微生物の培養によってのみしか４５られ
ていないが、類縁化合物の合成化学的または微生物学的
修飾によって製造することも、あるいは全合成化学的に
製造することもできよう。

微生物の培養による場合の１Ｎ株としては、ストレット
ミセス属に属するチンドラサイクリン化合物ダイトリサ
ルビシン生成能を有するものが使用される。具体的には
１本発明者らの分離したストレプトミセス・シアネウス
ＭＧ３４４−ｂＦ４９１未がダイトリザルビシンを生産
することが本発明者らによって明らかにされているが、
その他の菌株については抗生物質生産菌単婦の常法によ
って適当なものを自然界より分離することが司能である
。

また、Ｓ、シアネウスＭＧ３４４−ｈＦ４９株を含めて
ダイトリ廿ルビシン生産菌を放射線処理その他の処理に
利して、ダイトリサルビシン生Ｍ　ｎｌ　’Ｙ　高める
余地も残されている。

２）　ＭＧ３４４−　ｈＦ４９株 アントラサイクリン化合物グイトリサルピシン生産能を
有するストレプトミセス属の菌株と（２て本発明者らの
見出しているＭＧ３４４−ｈＦ４９株は。

下記の内容のものである。

ｆｉｌ　　由来および寄託番号 Ｓ、シアネウスＭＧ３４４−ｈＦ４９株は昭和５５年８
月に微生物化学研究所において構内の土壌より分離さ」
ｔた放綜菌であって、昭和５７年６月四日に工（２）菌
学的性状 Ａ、形　態 ＭＧ３４４−ｈＦ’４９　　株は、顕９．鏡下で分岐し
た基中菌糸よりかぎ状あるいばらぜん状の気菌糸を形成
し、輪生枝はみとめられない。成熟した砲子鎖は１０個
以上の胞子の連鎖がみとめられ、胞子の大きさは、０．
４〜０．６　Ｘ　Ｏ０８〜１．０ミクロン位で胞子の表
面はとげ状である。

Ｂ、各種培地における生育状態 下記において色の記載について〔〕内に示す標準ハ、コ
ンテイナー・コーポレーション・オプ・アメリカ（Ｃｏ
ｎｔａｉｎｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｒ
ｎｅｒｉｃａ）　　のカラー〇ハーモニイ健マ＝　ニア
／Ｉ／　（Ｃｏ１ｏｒ　ｈａｒｍｏｎｙｍａｎｕａｌ　
）に従ったものである。

（イ）シュクｒ−１−ス・硝酸塩寒天培地（２７℃培養
）にぶ赤′紫［９１ｅ、　Ｒａ５ｐｂｅｒｒｙ］の発育
上に白色の気菌糸を５つすらと着生し、溶解性色素は紫
色をおびる。

（ロ）ダルコース・アスＡう４ン寒天培地（２７’Ｃ、
ｆ＠　；ｌｉ→黄味赤［：６１ａ、　Ｌｔ　Ｃｏｒａｌ
　Ｒｅｄ　〜６ｐｃ、Ｐａｐｒｉｋａ］の発育上に明る
い青味灰［１８ｅｃ　、　Ｌｔ　Ａｑｕａ　］の気菌糸
を着生し、溶解性色素は赤味をおびる。

（ハ）グリセリンー−ｒスパラギン寒天培地（Ｉ　Ｓ　
Ｐ　−１ｉ地５：２７℃Ｌ￥ｊイ２） 灰味紫［９１ｇ、　Ｒｏｓｅ　Ｐｌｕｍ］の発育上に白
〜灰白〜明るい１＃味灰の気菌糸を着生し、？＋ｎ　ｔ
’ｉ言（ト［へ素はみとめられない。

に）スターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４：２７
℃培養） うすピンクの発育上に白〜灰味青緑［１９ｉｅ。

Ｔｕｒｑｕｏｉｓｅ　Ｇｒｅｅｎ］の気菌糸を着生し、
溶解性色素はピンク色をおびる程度である。

（ホ）チロシン寒天培地（ｒｓｐ−培地７：２１″Ｇ培
養）明るい茶〜暗い茶の発育上に灰白〜明るい宵゛味灰
の気菌糸を着生し、溶解性色素はかすかに茶色味をおび
る。

（へ）栄養寒天培地（２７°ＣＪ＠養）灰味赤％　［８
１ｅ　、　Ｒｏｓｅ　Ｗｉｎｅ］　の発育上に明るい紫
味灰の気菌糸を着生し、茶の溶解性色素を産生ずるＯ （ト）イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２　：　
２７’Ｃ培養） 灰味赤紫［：９　ｎｅ　、　Ｒａ５ｐｂｅｒｒｙ　］　
　の発育上に白〜紫味昌゛〜Ｕ味白の気菌糸を着生し、
計解性色素はみとめられない。

（ト）オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３：２７℃
培養） ５すピンク〜にぷ紫［１０ｐｃ　、　ｌｉ”ｕｃｂ３ｉ
ａ　ｐｕｒｐｌｅ　”］の発育上に明るい青味灰〜灰味
青緑［２１１ｉ　、　Ｄｋ　ＪａｄｅＧｒａｙ〕の気菌
糸を着生し、溶解性色素は赤味なおびる程度である。

（男グリセリン・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）灰味紫
［９１ｅ　、　Ｒａ５ｐｂｅｒｒｙ］の発育上に白色の
気菌糸をわずかに着生し、溶Ｗｆ１生色素は紫色な］６
びる。

し）スターチ寒天培地（２７℃培養） 発育ハ、ｖｃフ灰味赤紫Ｃ７１／２１ｅ　、　’Ｒｏｓ
ｅ　Ｗｉｎｅ〕。

気菌糸は着生せず、溶解性色素は紫色、なおびる。

四リンゴ酸石灰寒天培地（２７℃培養）うす紫の発育上
に白色の気菌糸をうつすらと着生し、溶解性色素は紫色
をおびる程度である。

０うセルロース（Ｐ紙片添ＩＪ［Ｊ合成液、２７℃培養
）発育はみとめられない。

（ワ）−Ｉ２ラチン穿刺培養 単純ゼラチン培地（２０℃培養）では５す黄の発育上に
白色の気菌糸をわずかに着生し、茶の溶解性色素を産生
ずる。グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７℃培
養）では無色〜５ず貿の発育上にピンク白の気菌糸を着
生し、暗い茶の溶解性色素を産生する。

（力）脱脂牛乳（３７℃培養） ビンクル灰味赤の発育上に白色の気菌糸なわずかに着生
し、溶解性色素は茶色味をおびる程世である。

（３）生理的性質 Ａ、諸性質 ａ、生育温度範囲 グルコース・アスノξラギン寒天を用いて、２０℃、２
４“℃、２７℃、３０℃、３７℃および５０℃の各温度
で試験の結果、５０℃を除いて何れの温度でも発育した
が、最適温度は３０〜３７℃イ」近と思われる。

ｂ、ゼラチンの液化（１５％中、純ゼラチン：２０℃培
養。

グルコース中ペフトン・ゼラチン：２７°Ｃｊ＠　養）
単純ゼラチンの場合は培養後５日目頃から液化が始まっ
たが、グルコース・ペプトン・ゼラチンでは培養後２週
間を経過しても液化がみも牙１ず。

３週間目頃より弱い液化をみとめるようになった。

その作用は雫純ゼラチンで中等度〜弱い方、グルコース
・ペプトン・ゼラチンでは弱いものと思われる。

Ｃ，スターチの加水分解（スターチ無機塩寒天培地およ
びスターチ寒天培地。何れも２７℃培養）培養後３日目
頃から水解性がみとめら土ｔ、その作用は中等度〜弱い
方である。

ｄ、脱脂牛乳の凝固ペプトン化（脱脂牛乳。３７℃培養
） 培養後３日目頃より凝ド１が始まり、７日目頃に凝固完
了後、ペプトン化が始まる。その作用は中等度である。

ｅ、メラニン様色素の生成（トリプトン・イースレプロ
ス（ＩＳＰ−培１也１）、イブトン・イースト・鉄寒天
（ＩＳＰ−培地６）、チロシン寒天（ＴＳＰ−培地７）
。何」しも２７℃培養） 何れの培地でも色素生成がみとめられろ。

ｆ、炭素源の利用性（シリトノ・ム・ゴトリーブ・寒天
培地（ＩＳＰ−培地９）。２７℃培イζすＬ−アラビノ
ース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース％Ｄ〜フラクト
シュクロース、−イノジット、Ｌ−ラムノース、ラフィ
ノースおよヒＩ〕−マンニットを何れも利用して発育す
る。

ｇ、リンゴ酸石灰の溶解（リンゴ酸石灰寒天：２７℃培
Ｊ　） 培養後７日１］頃から発育周辺のりンザ酸石灰のｆｄ解
がみとめられたが、その作用は弱い方である。

ｈ、硝酸し舘の還元反応（１，０％硝酸カリ含有ペプト
ン水（ＩＳＰ−培地８）：２７℃培養）陽性である。

Ｂ、結論および新菌株としての同定 以上の性状を要約すると、ＭＧ３４４−ｂＦ４９株はス
トレプトミセス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）　　
媚に属し、細胞壁に含ま」する２、６−ジアミノピメリ
ンｉ１２はＬ　Ｌ−型である。また、１１厄イの５をみ
とめず、気菌糸はらせん形成を有し、輪生枝はみられず
、胞子の表面はとげ状である。種々の培地で５ず一ンク
〜灰味赤紫あるいは黄味赤の発育−ヒに白〜明るい宵味
灰〜灰味閉緑の気菌糸な着生し、溶解性色素は紫または
赤味をおびる。プよお、発育の裏側はｐＨインディケー
タ−を示して、　　Ｉ　Ｎ　−Ｎａ０１Ｉの添加により
紫色から青味紫あるいは青色に変化する。

メラニン杼色累は陽性、蛋白分解力は中等度−弱い方、
スターチの氷解性も中等度〜弱い方である。

これらの性状より既知菌種を検索すると、ストレプトミ
セスｅシアネウス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｙ
ａｎｅｕｓ　）［Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒ
ｉｏ−１ｏｇｙ、第２２巻、第２９０＠、１９７２年（
文献１）、ＷａｋｓｒｎａｎのＴｂｅ　Ａｃｔｉｎｏｒ
ｎｙｃｅｔｅｓ　ｊｆ’！２巻Ｆ１９巻貝１９９頁１年
（文献２　）　、Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ、Ｍａｎｕａｌ　ｏ
ｆ　Ｄｅｔｅｒｍ−１ｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ、ｉｉＲ７版、第７５７頁、１９５７年および
同第８版、第８２２頁、１９７４年（文献３がもつとも
近縁の種としてあげらＪしる。

次に、ＭＧ３４４−ｈＦ４９株とストレプトミセス・シ
アネウスの文献記載の性状を比較し表に示す。

第　　７　　表 第　７　表（つづき） シス ＊　前頁に示した文献２および３による表にみらｈるよ
うに、ＭＧ３４４−ｈＦ４９　　株とストレプトミセス
・シアネウスとは、硝酸塩の還元反応を除いて、はぼ一
致した性状を示す。硝酸塩の還元反応は放線菌の場合は
安定な性状とはみなし難く、この性質の異同から両者を
区別することは難しい。

従って１ＭＧ３４４−ｈＦ４９　　株はストレプトミセ
ス・シアネウスに極めて近Ｈの釉と考えられ、これらの
点より本発明者らはＭＧ３４４−ｈＦ４９　　株をスト
レプトミセス・シ了ネウス（Ｓ　ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓｃｙａｎ・ｅｕｓ）　ＭＧ３４４−ｈＦ４９　と同定
した。

３）培養／ダイトリサルビシンの生産 アントラサイクリン化合物ダイトリサルビシンは、スト
レプトミセス稍に騰するダイトリサルビシン生産菌を適
当な培地で好気的に培養し、培養物から目的物を採取す
ることによって！Ｉｌ！！造することができる。

培地は、ダイ）　ＩＪサルビシン生産菌が利用しつる任
意の栄養源を含有するものでありうる。具体的には、た
とえば、炭素源としてグリ士リン、グルコース、シュー
クロース、マルトース、デキストリン、スターチ、油脂
）・１１などが使用でき、窒素源として大豆粉、綿実粕
、肉エキス、ペプトン。

乾燥酵母、酵母エキスおよびコーンスチープリカーなど
の有機物並びにＬンモニウム塩または硝酸塩、たとえば
、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリウムおよび塩化アンモ
ニウム等の無機物が使用できろ。また、必要に応じて１
食塩、塩化カリウム、りん酸塩、重金属塩などの無機場
類を飽加することができる。発酵中の発泡を抑制する為
に、常法に従って適当な消泡剤、たとえばシリコーン等
を適宜添加することもできろ。

培養方法としては、一般に行われている抗生物質の生産
の方法と同じく、好気的液体深部培養法が最も適してい
る。培ぢ４温１隼は２０〜３！５℃が適当であるが、２
５〜３０“Ｃが好ましい。この方法でグイトリサルビシ
ンの生産量は、振盪培養１通気攪拌培養共に３〜７日で
最高に達する。

このようにして、ダイトリ廿ルビシンの蓄積された培養
物が得られる。培養物中では、グイトリサルビシンはそ
の一部は菌体中にも存在するが、その大部分は培養ろ液
中に存在する。

このような培養物からダイトリサルビシンを採取するに
は、合目的的な任意の方法カー利用可能である。その一
つの方法は、抽出の原理に基（ものであって、具体的に
は、たとえば、培養ｐ液中のダイトリサルピシンについ
てはこれを水不混和性のダイトリ甘ルビシン用溶媒（前
記参照）たとえハ酢酸エチル、酢酸ブチル、クロロホル
ム、ブタノール等で抽出する方法（培養ｐ液は中性ない
し微塩基性であると抽出効率が良好である）、あるいは
菌体内のダイトリサルピシンについては炉辺１、遠心分
離等で（ｌた菌体集陣を酢酸エチル、クロロホルム、メ
タノール、エタノール、ブタノール、アセトン、メチル
エチルケトン、４　酸ｆｅ液、酢旧溶液などで処理して
回収することができる。菌体を分離せずに培養物をその
ま〜上記抽出操作にイづすこともできる。菌体を破壊し
てから抽出に付すこともできる。向流分配法も抽出の範
１すに入Ｊすることができる。

培養物からグイトリザルビシンを採取する他の方法の一
つは、吸着の原理に基くものであって。

既に液状となっているダイトリサルビシン含有物。

たとえば培養瀘液あるいは上記のようにして抽出操作を
行なうことによって旬らｈる抽出液を対象として、適当
な吸着剤、たとえば活性炭、アルミナ、シリカゲル、「
セファデックスＬＨ２０Ｊ（ファルマシア社）等、ｋ用
いたカラムクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィ
ーその他によって目的グイトリザルビシンを吸着させ、
その？ｉ　Ｍ　ＷＩさせることによって、ダイトリ甘ル
ビシンを得ることができる。このようにしてイ４１ら」
ｔだダイトリサルビシン溶液を減圧濃縮乾固すればダイ
トリザルビシンの粗標品が赤色扮末としてＫＭられる。

このようにして得られるダイトリサルビシンの粗標品を
さらに精製するためには、上記の抽出法および吸着法を
必要に応じて組合せて必要回斂実施し、必要処応じて再
結晶を行なえばよい。たとえば、シリカゲル、１−七フ
ーｒデツクス■、Ｈ２Ｏ」、弱／ツ性イオン交換樹脂、
「ダイヤイオンＨＰ２０Ｊ（三菱化成製）などの吸着剤
や１、ゲル沖過剤を用いたカラムクロマトグラフィー法
、適当な溶１１−を用いた液体クロマトグラフィー、向
流分配法および薄層クロマトグラフィー法等を組合わせ
て実施することができる。具体的には、たとえば、ダイ
トリサルビシンの粗粉末を少量のクロロホルムに溶解し
、シリカゲルカラムを用い又適当な溶媒で展開すると各
有効成分が分かれて溶出し、目的の活性区分をまとめ減
圧濃縮乾固更に薄層クロマトグラフィーで目的成分をか
きとることにより、はぼ−＋ｐ−物質として得ることが
できる。また、更に純化する為には、高速液体クロマト
グラフィーや、適当な溶媒からの晶析により結晶として
得る方法を用いることができる。

３、ダイトリサルビシンの用途 本発明によるアントラサイクリン化合物ダイトリサルピ
シンは、制留Ｊ活性および抗菌活性を有するので、医薬
として有用な化合物である。

１）生理活性 （１）抗腫瘍性 ＣＴ）Ｆ１マウスにＬ　１．２１０白血病細胞の懸濁液
ｌＸ１（］’旧１／マウスを腹腔内に移植し、移植後よ
り薬剤を腹腔内に０．２５ｍ１ずつ１０日間注射した。

３０日間観察を行ない、生理食塩水を投与した対照群の
マウスの生存日数を１００として延命率（％）で効果を
示す。

（２）抗菌作用 本発明によるグイトリザルビシンの抗菌力を寒天希釈法
により求めた最少増殖阻止濃度（ＭＩＣ）は１次表に示
した通りである。

（３）急性毒性（Ｌ＋）５ｏ） 本発明によるグイトリザルビシンのマウス腹腔内１回注
射によるＬＤ５ｏ値は、共に５〜川用ｎｇ／Ｋｇである
。

（・１）細胞毒性 本発明によるダイトリザルビシンは培養＊ｌｔｌ　）ｊ
ａ）増殖を阻止し、特に低濃度例おいて、ＲＮＡおよび
ＤＮＡ＠成を完全に阻止した。

２）抗ｌ１１１瘍剤 このように１本発明のアントラザイクリン化合物グイト
リザルビシンは、ヒトを含む動物の１川薄。

特に悪性腫瘍、に対して抗腫瘍活性を示すことが明らか
にされた。

従って、本発明のグイトリザルビシンマタはその酸附加
塩は抗１山賜剤ないし腫瘍治療剤として使用することが
できる。

抗腫瘍剤としてのグイトリザルビシンまたはその酸附加
塩は合目的的な任意の投与経路で、また採用投４経路に
よって決まる剤型で、投与することができる。薬剤とし
ては製薬上許容さね、る担体ないし希釈剤で希釈された
形態がふつ５である。

たとえば、本発明のグイトリザルビシンまたはその酸附
加塩は、単独で、あるいは担体たとえばマルトース、ラ
クトースとの混合物として、或いは無毒性ノコンプレッ
クスたとえばデオキシリＮ核酸トのコンプレックスとし
℃、投与することができる。その場合のデオキシリボ核
酸としては、たとえば仔牛胸腺、ヒーラ細胞、酵母等の
動物又は微生物の菌体等から抽出したものを用いること
ができる。

本発明のダイトリサルビシンまたはその酸付加塩を実際
に投与する場合には、こ牙１を注射用蒸留水または生理
食塩水に溶解して注射する方法が代表的なものの一つと
して挙げも」する。具体的には。

動物の場合は腹腔内注射、皮下注射、静脈または動脈へ
の血管内注射および局所投与等の注射による方法が、ヒ
トの場合は静脈または動脈・＼の血管内注射または局所
投与等の注射による方法がある。

投与量は動物試験の結果および種々の１ｔ￥況を勘案し
て、連続的または間げつ的に投与したときに総投与情が
一定量を槌えないように定めらｔＬる。具体的な投りＱ
、は、投与方法、患者または被処理動物の状況、たとえ
ば年令１体重、性別、感受性。

食餌、長体時間、併用する薬剤、患者またはその病気の
程度（心応じて変化することはいうまでもなく、一定の
条件の下における適量と投与回数は上記の指針を基とし
て専門医の適量決定試１験によって決定されなければな
らない。

３）ダラム陽性菌感染症治療剤 本発明のダイトリサルビシンは前記の生理活性データか
ら明らかなよ５に制描件抗生物質であり、具体的にはダ
イトリサルビシンまたＱまそのｔ−々附加塩はダラム陽
性菌に対して抗菌１テ１ミを示すところより、ブドウ球
菌症、ジフテリア、肺炎等に対して有効な抗生物質とし
て使用することができる。その場合の剤型および投与−
については、上記の抗吐瘍剤に関して説明したところが
妥当し、その他投与回数、剤型等はすべて上記に述べた
と同じ注意をもって決定することができる。

実施例 実施例１ （１）錘母の調製 使用した培地は、下記の組成のものである。

ガラクトース　　　　　　２　％ デキストリン　　　　　　２　％ ノ々クトソイトン（商標）　　　　　１　　　％コーン
スチーブリ力−　　０．５％ 炭酸カルシウム　　　　　０．１％ （殺菌前ｐＨ７，４） 上記培地１００ｍ１を５００ｍ１容三角フラスコに分注
殺菌したものへ、ストレプトマイセス・シアネウスＭＧ
３４４−ｈＦ４９　　のスラントより１日金耳接種し、
ロータリーシェーカー上で、２７”（：にて７２時間振
と５培養したものを種母とした〇 （２）培　養 使用した培地は、下記の組成のものである。

デキストリン　　　　　　　　３　％ グルコース　　　　　　　　　０．３％トーストソーヤ
（大豆粉商標名）　２　％塩化コノマルト　　　　　　
　　　ｏ、ｔ２ｇ／ｌ炭酸カルシウム　　　　　　　０
．３％３０リツトル容ジヤーフアメンターに上記培地１
５／分の通気下に２７℃で９０時間培養した。

（３）ダイトリサルビシンの採取 得られた培養液を濾過し、Ｐ液をｐＨ８ｅＯに１．’Ｊ
　ｊｉ！！ｌ：後、酢酸ブチル１０リツトルによる抽出
に例し、抽出液の上層を濃縮して、油状物質２０　ｇを
イリた。こＪｌを少ｂ１のクロロポルムに溶解し、１０
０ｇのシリカゲル（メルク社「キーゼルゲル印」）のカ
ラムに吸着させ、クロロホルム−メタノールの比率を少
しずつ変化させながら、段階的に溶出し、ダイトリサル
ピシンＡ、ＢおよびＣが溶出さ第１た区分を濃縮して、
グイトリサルビシンの赤色粗粉末１７５ｍｇを得た。

実施例２ 実施例１で得られた赤色粗粉末１００ｍｇを小計のクロ
ロホルムにｎ解後、厚さ０　、２５　ｍｍ　テ２０　Ｘ
２０ｃｍのシリカゲルの薄層（メルク社［キーゼルゲル
６０　Ｆ２５４Ｊ　）　ｌ（］枚に吸着させ、クロロホ
ルム−メタノール−濃アンモニア水＝　１００　：　５
　：　０．０２混液にて展開し、分離したダイトリサル
ビシンＡ。

Ｂ及びＣ区分をそＪｌぞれかきとり、クロロホルム−メ
タノール＝］Ｏ：１の混液でシリカゲルより溶出した。

このようにして得た両分をそれぞれ濃縮後、クロロホル
ム−メタノール＝１：１混液にて平衡化した「七ファデ
ックスＬ　ＩＴ　２０　Ｊカラム１．ＯＸ　２Ｄ　ｃｒ
ｎを同じ組成の混液にて通過させ、減圧乾固後、グイト
リザルピシンＡの赤色粉末を１３．２ｒｎｇ、ダイトリ
サル−シンＢの赤色粉末を２５ｍｇ　。

およびダイトリサルビシンＣの赤色粉末を５．４ｍｇそ
れぞＪ１得た。これら得られた試料は、シリカゲルプレ
ートーヒでのＴＬＣおよび「μｍゼンダ／！！ツクＣ□
８」を用いた高速液体クロマトグラフィーで単一であっ
た。

【図面の簡単な説明】

第１図はグイトリサルビシンＡの紫外部可視部吸収スペ
クトル（メタノール中濃度２０μｇ／＋ｎ＋　）　ヲ、
第２図は同赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ錠）を、第３
図は同核磁気共鳴スペクトル（２５０メガヘルツ、重ク
ロロホルム中）を、示す図である。 第４図はグイ）　ＩＪザルビシンＢの紫外部■」況部吸
収スペクトル（メタノール中濃度２０　ｌｒ　ｇ　７ｍ
　Ｉ　）　ヲ、第５図は同赤外線吸収スペクトル（Ｋ　
Ｂｒ１−室）を、第６図は同核磁気共鳴スベク［、ル（
２５０メガヘルツ、重クロロホルム中）を、示す図であ
る。 第７図はグイトリザルピシンＣの紫外部可視部吸収スペ
クトル（メタノール中濃度加μｇ／ｒｎｌ）を、第８図
は同赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ僻）な。 第９図は同核磁気共鳴スペクトル（２５０メガヘルツ、
爪クロロホルム中）を、示す図である。 第１．４および７図において、曲椋１〜３はそれぞれ下
記の意味を持つ。 １・・・メタノール中 ２・・・０゜ＩＮ　　）ｉｃｌ−９０％メタノール中３
−０．Ｉ　Ｎ　　ＮａＯＨ−９０％メタノール中出願人
代狸人　　　猪　　股　　　　　７′ｎ受託番号変更届 １．事件の表示 昭和５７年特許願第１９２７２７号 ２、発明の名称 アントラザイクリン化合物、その 製造法およびその用途 ３手続をした者 事件との関係　特許「出願人 財団法人微生物化学研究会 ４、代　理　人 東京都千代田区丸の白玉丁目２番３号 工業技術院微生物工業技術研究所 ６、旧寄託番号 微工研菌寄第６６０５号 ９、添付書類の目録 （１）新受託番号を証明する書面（写）　１通第１頁の
続き ・′７≧）発　明　者　内円文士 横浜市鶴見区岸谷４−２２−１８岸 谷第１社宅１０２ 沈、・発　明　者　井本正哉 浦和市常盤７−１８−１４北浦和社 宅１０１ 手続補正書 昭和５７年１２月９日 特許庁長官　　若　杉　和　夫　殿 １、事件の表示 昭和５７年特許願第１９２７２７号 製造法およびその用途 ３、補正をする者 事件との関係特許出願人 財団法人　微生物化学研究会 １ １ ７、補正の対象　゛ 明細芥の「発明の詳Ｉ￥ｌｉｔな説明」の欄８補正の内
容 明ＩＹｌｌｌ喜第２６員第６表のＲｆ値のうち下から２
行目のものを、下記の通りに補止する。 （イｌ　　　　ｒ　（１，４０Ｊ　　を、　　「（Ｌ４
２Ｊ　　と？ｉｌｉ　、ｉＦ、　ｎ（口ｌ　　ｒ（１，
４６Ｊを、［０，Ｆ１６　Ｊと補正。 （ハ）　ｒｏ、４２Ｊを、［（１，４７ｊと補正。 手続補正書 昭和５８年１月λｑ２日 特許庁長官　　若　杉　和　夫　殿 １、事件の表示 昭和５７年１，５許Ｉ頭第１９２７２７号′°′”’　
”　　７　’Ｊ　）　９　”ｌ−Ａ　３１１Ｊ　’／　
１ｌＱｈ’ｌ＃、ヤ４゜制令法およびその用途 ３、補正をする者 事件との関係特許出願人 財団法人微生物化学研究会 〔電話東京（２１１）２３２１犬代表〕７、補正の対象 明＃、１＋１　前の「発明の詳細な説明」の欄８、補正
の内容 （１）明細書第１２頁第６行 ［ダイトリサルビシン」の後に、 「（Ｄｉｔｒｉｓａｒｕｂｉｃｉｎ）　Ｊを加入する。 （２）次の凹所の「、石油エーテルおよびベンゼン」を
、［および石油エーテル」と補正ずイ）。 （イ）第２０頁下から第２行 （ロ）第２，３貞第２−３行 （ハ）第５頁第４−５行 ＝９４３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下式で示されるアントラザイクリン化合物ダイトリ
   サルビシンまたはその酸附加ｊ塩Ｒ。 たマし、式中Ｒは下記のＡ−Ｃのいずれかを表２、適当
   な培地にストレプトミセス属のアントラザイクリン化合
   物グイトリザルビシン４［放卵を有する菌株を好気的に
   培養し７、培養物からアントラザイクリン化合物グイト
   リザルビシンを採取することを特徴と一イーる、下式で
   示されるアントラザイクリン化合物グイトリザルビシン
   の製造法。　　　　　　　　　　。 り たｙし、式中Ｒは下記のＡ−Ｃのいずれかを表わす。 ３、下式で示されるアントラザイクリン化合′吻グイト
   リサルピシンまたはその酸附加塩を有効成分とする、抗
   ＩＩＩＭ舟剤。 たｇし１式中Ｒは下記のＡ〜Ｃのいずれかを表わす。 ４、下式で示されるアントラサイクリン化合物グイ）　
   ＩＪサルピシンまたはその酸附加塩を有効成分とする。 ダラム陽性菌感染症治療剤。 たＫＬ、式中Ｒは下記のＡ〜Ｃのいずれかを表わす。 ９２５−