JPS5910196B2 - グルタチオンの製造法 - Google Patents
グルタチオンの製造法Info
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- JPS5910196B2 JPS5910196B2 JP15991680A JP15991680A JPS5910196B2 JP S5910196 B2 JPS5910196 B2 JP S5910196B2 JP 15991680 A JP15991680 A JP 15991680A JP 15991680 A JP15991680 A JP 15991680A JP S5910196 B2 JPS5910196 B2 JP S5910196B2
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- Japan
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- glutathione
- cells
- yeast
- cysteine
- glutamic acid
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、グルタチオンの製造法に関する。
グルタチオンは、医薬として肝疾患治療剤、解毒剤など
広く使用されている。
広く使用されている。
グルタチオンの製造法として、Ｌ−システイン、Ｌ−グ
ルタミン酸およびグリシンを原料として酵素反応により
製造する方法が知られている。
ルタミン酸およびグリシンを原料として酵素反応により
製造する方法が知られている。
本発明者らは先に、エンテロバクター属、プロテウス属
、シュードモナス属およびエルビニア属の微生物がＬ−
グルタミン酸、Ｌ−システインおよびグリシンからグル
タチオンを生成する高い酵素活性を有することを見い出
した。
、シュードモナス属およびエルビニア属の微生物がＬ−
グルタミン酸、Ｌ−システインおよびグリシンからグル
タチオンを生成する高い酵素活性を有することを見い出
した。
更に研究の結果、上記の微生物の作用によりＬ−グルタ
ミン酸、グリシンおよびＬ−シスチン又はＬ−システイ
ンよりグルタチオンを生成せしめる反応液中に、糖、酵
母菌体、マグネシウムイオンおよび燐酸イオンを含有せ
しめれば、より高い収率でグルタチオンが生成されるこ
とを知った。
ミン酸、グリシンおよびＬ−シスチン又はＬ−システイ
ンよりグルタチオンを生成せしめる反応液中に、糖、酵
母菌体、マグネシウムイオンおよび燐酸イオンを含有せ
しめれば、より高い収率でグルタチオンが生成されるこ
とを知った。
即ち、この発明は、エンテロバクター属、プロテウス属
、ジュードモナス属又はエルビニア属に属し、Ｌ−グル
タミン酸、Ｌ−システインおよびグリシンからグルタチ
オンを生成する能力を有する微生物の作用により、糖、
酵母菌体、燐酸イオンおよびマグネシウムイオンを含有
する水溶液中にて、Ｌ−グルタミン酸、グリシンおよび
Ｌ−システイン又はＬ−シスチンを反応せしめてグルタ
チオンを生成せしめることを特徴とするグルタチオンの
製造法である。
、ジュードモナス属又はエルビニア属に属し、Ｌ−グル
タミン酸、Ｌ−システインおよびグリシンからグルタチ
オンを生成する能力を有する微生物の作用により、糖、
酵母菌体、燐酸イオンおよびマグネシウムイオンを含有
する水溶液中にて、Ｌ−グルタミン酸、グリシンおよび
Ｌ−システイン又はＬ−シスチンを反応せしめてグルタ
チオンを生成せしめることを特徴とするグルタチオンの
製造法である。
エンテロバクター属、プロテウス属、シュードモナス属
又はエルビニア属に属し、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−シス
テインおよびグリシンからグルタチオンを生成する能力
を有する微生物を具体的に示せば、例えば以下の微生物
がある。
又はエルビニア属に属し、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−シス
テインおよびグリシンからグルタチオンを生成する能力
を有する微生物を具体的に示せば、例えば以下の微生物
がある。
エンテロバクター・エロケネス ＡＴＣＣ１３０４６
プロテウスーミラビリス ＩＦ０３８４９プロテウス・
プルガリウス ＦＥＲＭ−Ｐ４７９５ ７ユードモナス・エルギノＶ ＡＴＣＣ１０１４５ エルビニア・ヘルビコ７ ＡＴＣＣ ２ １ ４
３ ４このような微生物を用いて、Ｌ−グルタミン酸、
グリシンおよびＬ−システイン又はＬ−シスチンからグ
ルタチオンを生成せしめる方法は、糖、酵母菌体、マグ
ネシウムイオンおよび燐酸イオンを含有する水溶液にて
、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−システインおよびグリシンと
、上記微生物の菌体又は菌体処理物とを接触せしめれば
よい。
プルガリウス ＦＥＲＭ−Ｐ４７９５ ７ユードモナス・エルギノＶ ＡＴＣＣ１０１４５ エルビニア・ヘルビコ７ ＡＴＣＣ ２ １ ４
３ ４このような微生物を用いて、Ｌ−グルタミン酸、
グリシンおよびＬ−システイン又はＬ−シスチンからグ
ルタチオンを生成せしめる方法は、糖、酵母菌体、マグ
ネシウムイオンおよび燐酸イオンを含有する水溶液にて
、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−システインおよびグリシンと
、上記微生物の菌体又は菌体処理物とを接触せしめれば
よい。
これらの微生物の菌体を得る方法は、特定の方法を用い
ることを要せず、通常の培地を用いて、通常の方法で培
養すればよい。
ることを要せず、通常の培地を用いて、通常の方法で培
養すればよい。
菌体としては、培養終了後の培養液そのまま、培養液よ
り分離された菌体、洗浄された菌体なと、いずれも使用
可能である。
り分離された菌体、洗浄された菌体なと、いずれも使用
可能である。
菌体処理物としては凍結乾燥菌体、アセトン乾燥菌体、
トルエン、界面活性剤等と接触せしめた菌体、リゾチー
ムで処理した菌体、超音波にさらした菌体、機械的に摩
砕した菌体等のほか、これら菌体または菌体処理物から
得られた、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−システインおよびグ
リシンからグルタチオンを生成せしめる酵素活性を有す
る酵素蛋白区分、更には、これらの菌体の固定化物、菌
体処理物の不溶化物、その他いずれも使用できる。
トルエン、界面活性剤等と接触せしめた菌体、リゾチー
ムで処理した菌体、超音波にさらした菌体、機械的に摩
砕した菌体等のほか、これら菌体または菌体処理物から
得られた、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−システインおよびグ
リシンからグルタチオンを生成せしめる酵素活性を有す
る酵素蛋白区分、更には、これらの菌体の固定化物、菌
体処理物の不溶化物、その他いずれも使用できる。
水溶液中には、グルコース、フラクトース、ガラクトー
ス、リボース、キシロース、シュクロース、その他使用
する酵母により資化される糖が、含有せしめられる。
ス、リボース、キシロース、シュクロース、その他使用
する酵母により資化される糖が、含有せしめられる。
水溶液中の糖濃度は、１ないし２ ０ ０ ｆ／ｌの範
囲が好ましい。
囲が好ましい。
燐酸イオンおよびマグネシウムイオンが水溶液中に０．
１〜５ｏｔ／ｌの濃度範囲より低い場合には、燐酸イオ
ン又はマグネシウムイオンが上記の範囲の濃度になるよ
うに補添される。
１〜５ｏｔ／ｌの濃度範囲より低い場合には、燐酸イオ
ン又はマグネシウムイオンが上記の範囲の濃度になるよ
うに補添される。
燐酸イオンとしては、ソーダ塩、カリ塩等が好ましい。
又マグネシウムイオンとしては無機塩のほかに有機酸塩
も使用できる。
も使用できる。
酵母菌体としては、サツカロマイセス属、ハンゼヌラ属
、ピヒア属、トルロプシス属、ロドトルラ属等の酵母の
菌体が用いられる。
、ピヒア属、トルロプシス属、ロドトルラ属等の酵母の
菌体が用いられる。
酵母菌体としては、生菌体も用いることができるが、ア
セトン、トルエン等の有機溶剤、界面活性剤などに接触
せしめた菌体あるいは乾燥菌体を用いるのが好ましい。
セトン、トルエン等の有機溶剤、界面活性剤などに接触
せしめた菌体あるいは乾燥菌体を用いるのが好ましい。
反応液中には、Ｌ−シスチンとＬ−システインの両方が
含まれていた方が好ましい結果が得られる。
含まれていた方が好ましい結果が得られる。
Ｌ−グルタミン酸、グリシンおよびＬ−システイン又は
Ｌ−シスチンからグルタチオンを生成せしめる反応は、
水溶液中にて１０から７０℃の範囲の適当な温度、およ
びｐＨ４から１０の範囲の適当なｐＨに調節しながら行
えばより好ましい結果が得られる。
Ｌ−シスチンからグルタチオンを生成せしめる反応は、
水溶液中にて１０から７０℃の範囲の適当な温度、およ
びｐＨ４から１０の範囲の適当なｐＨに調節しながら行
えばより好ましい結果が得られる。
水溶液中に抗酸化剤、界面活性剤などを添加すれば好ま
しい結果が得られる場合が多い。
しい結果が得られる場合が多い。
また、反応中、必要ならば反応液に原料であるアミノ酸
を追補添加してもよい。
を追補添加してもよい。
反応液は特に強い攪拌をする必要はないが、必要により
適宜攪拌する。
適宜攪拌する。
反応液を上に述べた条件に暫時保てば、反応液中にグル
タチオンが生成蓄積される。
タチオンが生成蓄積される。
反応液よりグルタチオンの単離精製は通常の方法が適用
出来る。
出来る。
実施例 １
１，グルタチオン生産菌の培養
プロテウス・ミラビリスＩＦＯ３８４９を、肉エキス１
． ０ ？／ｄｌ、ペプトン１．０グ／ｄｌ、酵母エキ
スｉ．ｏグ／ｄｌ、食塩０．５グ／ｄｌおよび寒天２．
０ ？／ｄｌを含み、ｐＨ７．０に調節した固形培地
を用いて３０℃にて２４時間培養した。
． ０ ？／ｄｌ、ペプトン１．０グ／ｄｌ、酵母エキ
スｉ．ｏグ／ｄｌ、食塩０．５グ／ｄｌおよび寒天２．
０ ？／ｄｌを含み、ｐＨ７．０に調節した固形培地
を用いて３０℃にて２４時間培養した。
次に、水１ｌ当り、グルコース１０，Ｏグ、Ｋ２ＨＰＯ
４ １０．Ｏ？、ＮａＨＮＨ４ＰＯ４−７Ｈ２０１０．
０？、ＭｇＳＯ，・７Ｈ２０ ０．２グ、ペプトン１
０．０′？、クエン酸７．０グ、ロイシン５０〜、７Ａ
／ギニン５０ｒｒ１ｇ、スレオニン２５１ｒＩ９、ヒス
チジン１０ｍ９、プロリン２５７％、サイアミン１．０
即を含みｐＨ ８．５ （ＫＯＨ中和）に調整して作っ
た培地５０ｒｒＬｌを肩付フラスコ（５００ＷＬｌ容）
に入れ、１１５℃にて１５分加熱殺菌した。
４ １０．Ｏ？、ＮａＨＮＨ４ＰＯ４−７Ｈ２０１０．
０？、ＭｇＳＯ，・７Ｈ２０ ０．２グ、ペプトン１
０．０′？、クエン酸７．０グ、ロイシン５０〜、７Ａ
／ギニン５０ｒｒ１ｇ、スレオニン２５１ｒＩ９、ヒス
チジン１０ｍ９、プロリン２５７％、サイアミン１．０
即を含みｐＨ ８．５ （ＫＯＨ中和）に調整して作っ
た培地５０ｒｒＬｌを肩付フラスコ（５００ＷＬｌ容）
に入れ、１１５℃にて１５分加熱殺菌した。
これに、先に固形培地で培養した菌体を一白金耳とり接
種して、３０℃にて２８時間拡・培養した。
種して、３０℃にて２８時間拡・培養した。
このようにして得られた培養液を遠心分離処理して菌体
２０グを得た。
２０グを得た。
菌体２０ｆＩを０．０５Ｍ｝リスー塩酸緩衝液（ｐＨ
７．４ ）（’５ｍＭ ＭｇＣｌ２を含む）にて２回
洗浄したのち、同緩衝液１００ｒｒＬｌに懸濁して超音
波処理を０〜５℃にて１０分間行い、遠心分離処理して
無細胞抽出液を得た。
７．４ ）（’５ｍＭ ＭｇＣｌ２を含む）にて２回
洗浄したのち、同緩衝液１００ｒｒＬｌに懸濁して超音
波処理を０〜５℃にて１０分間行い、遠心分離処理して
無細胞抽出液を得た。
これを３０％硫安飽和して遠心分離処理して上清を得た
。
。
次に８０％硫安飽和にして沈澱区分を得た。これを上記
トリスー塩酸緩衝液で透析して蛋白含量４０〜５０１１
９７ｄｌの酵素液を調製した。
トリスー塩酸緩衝液で透析して蛋白含量４０〜５０１１
９７ｄｌの酵素液を調製した。
２．乾燥酵母の調製
市販パン酵母（サツカロマイセスセレビシエ）（オリエ
ンタル酵母工業■製）を五酸化リン結晶上で減圧下で更
に２４時間乾燥して乾燥酵母菌体を調製した。
ンタル酵母工業■製）を五酸化リン結晶上で減圧下で更
に２４時間乾燥して乾燥酵母菌体を調製した。
３，グルタチオン生成反応
下記の水溶液を調製し、これを３７℃に２時間保った。
その結果、水溶液中には、８，６０μｍｏｌｅｓのグル
タチオンが生成蓄積された。
タチオンが生成蓄積された。
上記水溶液より酵母菌体を除いた場合には、２．４５μ
ｍｏｌｅｓのグルタチオンしか生成蓄積されなかった。
ｍｏｌｅｓのグルタチオンしか生成蓄積されなかった。
４．グルタチオンの単離
上記水溶液を３７℃に４時間保ち、グルタチオン３．６
Ｓ’／Ｊ生成蓄積せしめた。
Ｓ’／Ｊ生成蓄積せしめた。
同様にして調製した反応液ＩＥに遠心分離して菌体を除
去して、ついで減圧濃縮した濃縮液をアンバーライトＩ
Ｒ−１２０（Ｈ型）カラムに通液してグルタチオンな吸
着させ、水洗し、ついで０． Ｉ Ｎ硫酸で溶出した。
去して、ついで減圧濃縮した濃縮液をアンバーライトＩ
Ｒ−１２０（Ｈ型）カラムに通液してグルタチオンな吸
着させ、水洗し、ついで０． Ｉ Ｎ硫酸で溶出した。
溶出液を濃縮し、エタノールを加えて結晶化し、次に更
にエタノールで再結晶して精製グルタチオン２．４２を
得た。
にエタノールで再結晶して精製グルタチオン２．４２を
得た。
実施例 ２
実施例１と同様の条件でプロテウス・プルガリスＦＥＲ
Ｍ−Ｐ ４ ７ ９ ５、プロテウス・ミラビリスＩ
ＦＯ３８４９、エルビニア・ヘルビコーラＡＴＣＣ２１
４３４、エンテロバクター・エロゲネスＡＴＣＣ ｌ
３ ０ ４ ８およびシュードモナス・エルギノサＡ
ＴＣＣ１０１４５を培養して菌体をそれぞれ２０１ずつ
得た。
Ｍ−Ｐ ４ ７ ９ ５、プロテウス・ミラビリスＩ
ＦＯ３８４９、エルビニア・ヘルビコーラＡＴＣＣ２１
４３４、エンテロバクター・エロゲネスＡＴＣＣ ｌ
３ ０ ４ ８およびシュードモナス・エルギノサＡ
ＴＣＣ１０１４５を培養して菌体をそれぞれ２０１ずつ
得た。
これらを実施例１と同様の条件にて超音波処理してそれ
ぞれ無細胞抽出液を得て、これをそのまま酵素液として
使用した。
ぞれ無細胞抽出液を得て、これをそのまま酵素液として
使用した。
実施例１と同様の水溶液を用いてグルタチオンを生成せ
しめた。
しめた。
結果は、第２表の通りであった。
実施例 ３
酵母エキス１０ｖ１ペプトン１０ｆ、グルコース２０５
’、リン酸第１カリ２グ、硫酸マグネシウム１グを水１
ｌに溶解し、ｐＨを６．０に調製した。
’、リン酸第１カリ２グ、硫酸マグネシウム１グを水１
ｌに溶解し、ｐＨを６．０に調製した。
この培地２０ＷＬｌを５００一容の肩付フラスコに入れ
、１２０℃にて１５分間殺菌した。
、１２０℃にて１５分間殺菌した。
これにあらかじめ培養したキャンデイダ・ウチリス
（ Ｃａｎｄｉｄａ ｕｔｉｌｉｓ ）ＡＴＣＣ
１ ５ ２ ３ ９、ハンゼヌラ０アノマーラ（ Ｈａ
ｎｓｅｎｕｌａ ａｎｏｍａｌａ ）ＩＦＯＯ９０５
、ピキア１１ハリノサ（ Ｐ ｉｃｌｉａｆａｒｉｎｏ
ｓａ ） ＩＦＯ Ｏ ４ ６ ５、サツカロマイ
セス−セレビシア（ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ）ＡＴＣＣ７７５２、トルロプ
シスファメーター（ Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｆａｍ
ａｔａ ）ＡＴＣＣ １ ２ ７ ９ ０、ロドトル
ラ・グルチニス（ Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｇｌｕｔｉ
ｎｉｓ ） ＩＦＯ ０ ７ ５ ４又はデバリオミ７
’／５Ｚ−クロイケラ（ Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｕｓ
ｋｌｏｅｃｋｅｒ ） ＩＦＯ００１７をそれぞれ接種
して２８℃で４０時間培養した。
１ ５ ２ ３ ９、ハンゼヌラ０アノマーラ（ Ｈａ
ｎｓｅｎｕｌａ ａｎｏｍａｌａ ）ＩＦＯＯ９０５
、ピキア１１ハリノサ（ Ｐ ｉｃｌｉａｆａｒｉｎｏ
ｓａ ） ＩＦＯ Ｏ ４ ６ ５、サツカロマイ
セス−セレビシア（ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ）ＡＴＣＣ７７５２、トルロプ
シスファメーター（ Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ ｆａｍ
ａｔａ ）ＡＴＣＣ １ ２ ７ ９ ０、ロドトル
ラ・グルチニス（ Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａｇｌｕｔｉ
ｎｉｓ ） ＩＦＯ ０ ７ ５ ４又はデバリオミ７
’／５Ｚ−クロイケラ（ Ｄｅｂａｒｙｏｍｙｕｓ
ｋｌｏｅｃｋｅｒ ） ＩＦＯ００１７をそれぞれ接種
して２８℃で４０時間培養した。
培養液を遠心分離処理して得られた菌体を水洗したのち
、一昼夜・風乾し、さらに五酸化リンを入れたデシケー
ターの中で減圧下にて乾燥した。
、一昼夜・風乾し、さらに五酸化リンを入れたデシケー
ターの中で減圧下にて乾燥した。
これらの酵母菌体を実施例１の乾燥菌体のかわりにそれ
ぞれ用いてグルタチオンを生成せしめた。
ぞれ用いてグルタチオンを生成せしめた。
Claims (1)
- １ エンテロハクターＬ ７”ロテウス属、シュードモ
ナス属、又はエルビニア属に属し、Ｌ−グルタミン酸、
Ｌ−システインおよびグリシンからグルタチオンを生成
する能力を有する微生物の菌体およびその処理物の作用
により、糖、酵母菌体、燐酸イオンおよびマグネシウム
イオンを含有する水溶液中にて、Ｌ−グルタミン酸、グ
リシンおよびＬ−システイン又はＬ−シスチンを反応せ
しめてグルタチオンを生成せしめることを特徴とするグ
ルタチオンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15991680A JPS5910196B2 (ja) | 1980-11-13 | 1980-11-13 | グルタチオンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15991680A JPS5910196B2 (ja) | 1980-11-13 | 1980-11-13 | グルタチオンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5783292A JPS5783292A (en) | 1982-05-25 |
| JPS5910196B2 true JPS5910196B2 (ja) | 1984-03-07 |
Family
ID=15703947
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15991680A Expired JPS5910196B2 (ja) | 1980-11-13 | 1980-11-13 | グルタチオンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5910196B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH035252U (ja) * | 1989-06-06 | 1991-01-18 |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPWO2016002884A1 (ja) * | 2014-07-02 | 2017-04-27 | 株式会社カネカ | 酸化型γ−グルタミルシステイン及び酸化型グルタチオンの製造方法 |
-
1980
- 1980-11-13 JP JP15991680A patent/JPS5910196B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH035252U (ja) * | 1989-06-06 | 1991-01-18 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5783292A (en) | 1982-05-25 |
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