JPH03180187A - Ｌ―リンゴ酸の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、Ｌ−リンゴ酸の製造法に関する。ＬＩＪンゴ
酸は天然型の有機酸で、医薬用、食用として広く利用さ
れている。

従来の技術 従来、発酵法により糖質から直接Ｌ−リンゴ酸を製造す
る方法としては、アスペルギルス属菌種を用いる方法（
特公昭３７−１５２９７、特公昭４Ｏ−６３９５）、オ
ーレオバシジウム属菌種を用いる方法（特開昭５ｌ−７
９７８３）　、シゾフィリューム・コミューンを用いる
方法（特公昭３９−７３９０）などが知られている。

発明が解決しようとする課題 安価な糖質を原料としてＬ−リンゴ酸を直接発酵生産す
る場合、従来の方法では、生産性が低く、また副生ずる
有機酸が多いためＬ−リンゴ酸の精製が困難であるなど
の欠点を有していた。

課題を解決するための手段 本発明者は、安価な糖質を原料としてＬ　−リンゴ酸を
直接発酵生産するために、Ｌ　−リンゴ酸生産能を有す
る菌株を種々検討した。その結果、Ｌ−リンゴ酸生産能
が高く、副生ずる有機酸が少ない菌株を得、該菌株を用
いたＬ　−Ｑンゴ酸の直接発酵生産方法を確立した。

本発明は、ウスティラゴ属またはトリボスポリウム属に
属し、Ｌ−リンゴ酸生産能を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にＬ−’Ｊンゴ酸を生成蓄積させ、該培養
物よりＬ　−リンゴ酸を採取することを特徴とするＬ−
リンゴ酸の製造法を提供する。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明に用いる微生物としては、ウスティラゴ属または
トリボスボリウム属に属し、Ｌ−リンゴ酸生産能を有す
る菌株であればいずれでもよい。

具体的には、ウスティラゴ・クリスーガリイ（Ｌｌｓｔ
ｉｌａｇｏ　ｃｒｕｓ−ｇａｌｌｉ）に３９０．　Ｋ３
９１．に３９２．に３９３゜Ｋ２１６．　　ウスティラ
ゴ・ホルダイ（Ｕ、ｈｏｒｄｅ　ｉ）　Ｎ（Ｌ　１１５
、ウスティラゴ・スファエロゲナ（Ｕ、　ｓｐｈａｅｒ
ｏｇｅｎａ）Ｋ２Ｏ２，に４０２、ウスティラゴ・コイ
シス　（Ｕ、ｃｏｉｃｉｓ）Ｋ３３１．　Ｋ３３２、ウ
スティラゴ・スキタミネア（Ｕ。

ｓｃｉｔａｍｉｎｅａ）　Ｋ３３５．　Ｋ３３６．　Ｋ
３３８．に３３９、ウスティラゴ・ニスキュＬ／ンタ（
Ｕ、ｅｓｃｕｌｅｎｔａ）　Ｋ２Ｏ２，Ｋ２Ｏ２、ウス
ティラゴ・シンセリスマエ（口、ｓｙｎｔｈｅｒｉｓｍ
ａｅ）Ｋ３８２．に３８３、トリポスポリウム・ブラタ
ム（Ｔｏｌｙｐｏｓｐｏｌｉｕｍ　ｂｕｌｌａｔｕｍ）
にＴ３０４．にＴ３２６．　ＫＴ３２７゜ＫＴ３２８な
どがあげられる。これらの菌類は、黒檀菌類に属する植
物病原菌である。

上記菌種の菌学的性質は、以下の文献にそれぞれ記載さ
れており、該文献に基づいて、各菌株の同定を行った。

Ｕ、ｃｒｕｓ−ｇａｌｌｉ：　　Ｂｕｌｌ、Ｔｏｒｒｅ
ｙ　Ｂａｔ、Ｃ１ｕｂ　２２　。

１７５　（１８９５） ＩＪ、ｈｏｒｄｅｉ　　：　Ｍｉｔｔ、Ｂａｄｉｓｃｈ
ｅｎ　Ｒｏｔ、Ｖｅｒ、、Ｐ、７０（１８８９）［１，
ｓｐｈａｅｒｏｇｅｎａ　：　５ｙｌｌ、Ｆｕｎｇ、　
　７．　４６８（１８８ｇ）Ｅｌ、　ｃｏｉｃｉｓ　：
　［Ｉｎｔｅｒｓ、　ＧｅｓａｍｌｌＩｔ、Ｍｙｋｏｌ
、　１２．１１０（１８９５）［１，ｓｃｉｔａｍｉｎ
ｅａ　：　＾ｎｎ、　　Ｍｙｃｏｌ、　　２２　、　２
８１（１９２４）［１，ｅｓｃｕｌｅｎｔａ　　：　　
）Ｉｅｄｗｉｇｉａ　３４　、１０（１８９５）Ｕ、ｓ
ｙｎｔｈｅｒｉｓｍａｅ　：　Ａｎｎ、Ｒｅｐｔ、Ｎ、
Ｙ、５ｔａｔｅ　！Ｊｕｓ、２７　。

１０３　（１８７５） Ｔ、ｂｕｌｌａｔｕｍ　：　Ｋｒｙｐｔ、　Ｆｌ、　５
ｃｈｌｅｓ、３．２７６（１８８７）本発明の微生物を
通常の培養方法によって培養することによって、Ｌ−リ
ンゴ酸を培養物中に生成蓄積させることができる。すな
わち、これらの微生物を適当な炭素源、窒素源、無機物
、アミノ酸、ビタミンなどを含有する通常の培地中にお
いて、好気的条件下で温度、ｐＨなどを調節しつつ培養
を行えばよい。

培養培地としては炭素源、窒素源、無機物などを程よく
含有する培地ならば天然培地、合成培地のいずれでも用
いることができる。

炭素源としてはブドウ糖、澱粉、グリセロール、マンノ
ース、フラクトース、シュークロース、糖蜜などを単独
または組み合わせて用いることができる。さらに菌の資
化能によっては炭化水素、アルコール類、有機酸などを
用いることができる。

窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
硝酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、尿素などの無機も
しくは有機の窒素含有化合物、またペプトン、肉エキス
、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、
大豆粉、力ずミノ酸などの天然物含有窒素源を単独また
は組み合わせて用いることができる。

無機物としては塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸第
一鉄、硫酸亜鉛、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カルシウ
ム、リン酸塩などの無機塩類を用いることができる。そ
のほか必要に応じてＬ−リンゴ酸の生産を促進する有機
物や無機物を適当に添加することができる。また、培養
中のｐＨの低下を抑える目的で、炭酸カルシウムを添加
することもできる。

培養法としては、好気的条件下、通常は液体培養法、と
くに深部攪拌培養法が用いられる。培養温度は１５〜３
５℃、特に２０〜３０℃が好適である。培地のｐＨは、
アンモニア水や炭酸アンモニウム溶液などを添加して、
ｐＨ４〜１０．特に５〜６に保ちながら培養を行うこと
が望ましい。

液体培養で通常５〜８日培養を行うと、Ｌ−リンゴ酸が
培養物中に生成蓄積する。培養物中のＬリンゴ酸生成量
が最大に達したときに培養を停止し、培養物中からＬ　
−リンゴ酸を単離精製する。

培養終了後、遠心分離により菌体を除去し、得られた上
澄液を、イオン交換樹脂法やエーテルなどの有機溶媒に
よる抽出法などの公知の方法を組み合わせることによっ
て、Ｌ　−リンゴ酸を分離し採取することができる。

以下に本発明の実施例を示す。

実施例１ グルコース１２０ｇ、塩化アンモニウム１１．６ｇ１リ
ン酸−カリウム０．５ｇ、硫酸マグネシウム７永和物０
．２ｇ、硫酸鉄７永和物０．０１ｇおよび酵母エキス１
ｇを水道水ＩＩｌに溶解した溶液３０−を、３００−容
三角フラスコに入れ、１２０℃、１、２　ｋｇ　／　ｃ
ｄで１０分間殺菌して得られた培地に、予めポテトデキ
ストロース寒天の斜面培地上で生育させた、ウスティラ
ゴ・クリスーガリイに３９１を一白金耳植菌した。同時
に別に殺菌した炭酸カルシウム１ｇを加えた。この培養
液をロータリーシェーカー上で２５℃、７時間振盪培養
した。培養終了後、培養液を分析した結果、培養液１１
当り５２ｇのＬ　−Ｕンゴ酸が生成していた。得られた
培養液１１を塩酸で酸性とし、遠心分離によって菌体を
除いた後、上澄液を陽イオン交換樹脂、ダイヤイオン５
ＫＩＢのＨ型（三菱化或社ＩＩ）に通し、脱カチオンし
た後、陰イオン交換樹脂ダイヤイオンＰＡ４１２のギ酸
型（三菱化成社製）に吸着させ、６Ｎギ酸により溶出し
た。この溶出液を活性炭で脱色後、減圧濃縮し、Ｌ　−
Ｑンゴ酸を析出させた。乾燥後、２９ｇのＬ−リンゴ酸
を回収した。結晶母液には未晶出のＬ−リンゴ酸２３ｇ
が含まれていた。

実施例２ 実施例１と同じ組成の培地３０ｒＩｉ！を３００−容三
角フラスコに入れ１２０℃、１．２ｋｇ／ｃＩ＋！で１
０分間殺菌して得られた培地に、予めポテトデキストロ
ース寒天の斜面培地上で生育させたトリポスポリウム・
ブラタムＴＫ３０４を一白金耳植菌した。

同時に別に殺菌した炭酸カルシウム１ｇを加えた。

この培養液をロータリーシェーカー上で２５℃、７日間
振盪培養した。培養終了後、培養液を分析した結果、培
養液１１当り５１ｇのＬ　−リンゴ酸が生成していた。

得られた培養液１ｊ！を遠心分離して菌体を除去し、上
澄液を硫酸で酸性とした後、減圧濃縮し、活性炭で脱色
後、エーテルで抽出した。エーテル抽出液を減圧乾固し
、Ｌ　−Ｕンゴ酸３５ｇを得た。

実施例３ ウスティラゴ・クリスーガリイに３９１に替えて下記第
１表に示した菌株を用いる以外は実施例１と同様に培養
して、培養液中に生成蓄積されるＬ−リンゴ酸の量を測
定した。

結果を第１表に示す。

菌株 ウスティラゴ・クリス〜カリイ　に３９０に３９２ に３９３ に２１６ ウスティラゴ・ネルダイ　　　Ｎ（１１１５ウステイラ
ゴ・スフ７エロゲナ　に４０１に４０２ ウスティラゴ・コイシス　　　　に３３１に３３２ ウスティラゴ・スキタミネ７　　Ｋ３３５に３３６ に３３８ に３３９ ウスティラゴ・エスキｌレンタ　Ｋ２Ｏ２に５０１ ウスティラゴ・シンセリスマエ　に３８２に３８３ トリボスボリウム・ブラタム にＴ３２６ ０ Ｔ３２７ ９ にＴ３２８ ６ 発 明 の効果 本発明によれば、安価な糖質を原料として、ＩＪンゴ酸
を収率よく直接発酵生産することかできる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ウスティラゴ属またはトリポスポリウス属に属し、Ｌ−
   リンゴ酸生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物
   中にＬ−リンゴ酸を生成蓄積させ、該培養物よりＬ−リ
   ンゴ酸を採取することを特徴とするＬ−リンゴ酸の製造
   法。