JPH03120257A - 骨形成促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 Ｃ産業上の利用分野］ 本発明は骨形成促進剤に関し、さらに詳しくはＬ−力ル
ノシン亜鉛塩を有効成分とする骨形成促進剤に関する。

［従来の技術］ 老令化に伴い骨量が減少し、若年においても先天的、特
発的に骨中カルシウムが血中へ異常吸収移行されて骨中
カルシウム減少、骨量減少を起し、骨代謝、骨形成が不
全となる。

骨代謝、骨形成に異常が生しると骨折、骨軟化症、骨Ｉ
ｆ１帖症、腰背痛を引き起す。近年、−老令化社会を向
え、骨形成不全疾患が増加し、また、若年層においても
食生活の偏重によりカルシウム不足から生しる同様の疾
患が増加しつつある。骨形成不全に伴う疾患の薬物療法
にカルシトニン、活性型ビタミンＤ３剤が汎用されてお
り、その他ホル壱ン剤、カルシウム製剤が用いられてい
る。

骨形成、石炭化の実験的マーカーとしては骨カルシウム
量、ア紀カリ性ホスファターゼ活性、　ＤＮＡ含量の測
定によってなされ、骨中のこれらの含量が高いほど骨形
成、代謝が盛んであるとされる。

また、亜鉛が骨形成の刺激及び石灰化の活性化因子とし
て重要な役割を果たしていることがインビボ（Ｍｅｔａ
ｂｏｌ　ｊｓｍ、　　３５　１０４４−１０４７、　１
９８６、　Ｂｌｏｃｈｅｍ、　　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、
、３５　７７３−７７７、　１９８６）及びインビトｏ
（Ｂｌｏｃｈｅｍ、　　Ｐｈａｒｍａｃｏｄ、、　ＬＪ
ＬＪ　４００７−４０１２．　１９８７、Ｉｂ１ｄ、、
ＬＬ　４０７５−４０８０．　１９８８）に示されてお
り、さらに亜鉛が骨タンパク合成を刺激することが示さ
れている（Ｂｌｏｃｈｅｍ、　　　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ
、　　　、３７　　　４０７５−４０８０　　（＋　　
９８８）。

Ｌ−カル７ノン亜鉛塩は、β−アラニンとＬ−ヒスチジ
ンから成るし一カルノシンの亜鉛塩であり、消化性潰瘍
治療作用（特開昭５９−３３２７０号）、肝障害の予防
、治療作用（特開昭６３−１４７２８号）について知ら
れており、抗潰瘍作用機序にフリーラジカル反応の抑制
（抗活性酸素作用）が関与することが示唆されている（
日本消化器病学会雑誌、８５＠：　　臨時増刊号、　６
４４頁。

１９８７年）。

しかし、Ｌ−カルノシン亜鉛塩の骨形成促進作用につい
ては知られていない。

［発明が解決しようとする課Ｂ］ 現在、骨形成不全に伴う疾患にはカルシトニン、活性型
ビタミンＤ３剤が主に使用されている。カルシトニンは
骨粗Ｕ症における疼痛に優れた効果を示すが、ペプチド
であるため経口投与で効果を示さず、注射剤としてのみ
使用されており、投与の不便さ、投与時の苦痛が問題で
ある。活性型ビタミンＬ）３剤は骨形成作用、疼痛改善
作用などの効果が十分でなく、また、高カル／ウム血症
を引き起すなどの短所を有する。一方、前述の文献によ
り、亜鉛に骨形成促進作用が示唆されているが薬剤とし
ての使用に至っておらず、亜鉛自体では吸収、代謝及び
毒性の点で問題があり、骨形成能においてより優れた物
質が望まれる。

［３Ｂを解決するための手段］ 本発明は上記の欠点を克服した骨形成促進剤を提供する
。本発明の骨形成促進剤はＬ−カルノシン亜鉛塩を有効
成分とするものであり、従来のカルシトニン、活性ヤビ
タミンＤ３剤と全（異なる新しいタイプの簀形成促進剤
である。

Ｌ−力ルノシン亜鉛塩は不定形または結晶性の２つのタ
イプが存在するが、骨形成促進作用に差はない。

結晶性り一カルノンン亜鉛塩は室温または加温下で無水
または含水極性有機溶媒中でＬ−力ルノシン１モルに対
して亜鉛塩及びアルカリ金属化合物をそれぞれ０，８〜
１．２モル及び１．６〜２４モル使用して反応を行うこ
とにより得られる。極性有機溶媒としては、　メタノー
ル、エタノール、フロパ／−ル等のアルコール類、アセ
トニトリル、ジメチルスル十ヰ／ド、Ｎ、　　Ｎ−ツメ
チルホルムアルデヒド、　テトラヒドロフラン、　アセ
トン等であり、約５０％まで水を含んだものでも使用可
能である。アルカリ金属化合物としては、水酸化リチウ
ム、水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、　カリウムア
ルコラード、　ナトリウムアルコラード等が用いられる
。不定形り一力ル／ンン亜鉛塩は無水または含水極性有
機溶媒中 ことにより！２造できる。

本発明の骨形成促進作用の薬理試験には結晶性のＬ−カ
ルノシン亜鉛塩を用いた。結晶性り一カルノ／ン亜鉛塩
の具体的な製造法を次の参考例に示　す。

参考例 メタノールｌｏＯｍｌに３５１ｇの水酸化ナトリウムを
溶解し、Ｌ−カルノン７９．９６ｇを加えて均一な溶媒
とした。これに、酢酸亜鉛二水和物９．６７ｇをメタノ
ール１４５ｍ１に溶解した溶液を、攪拌下３０分を要し
て滴下したところ次第に白色沈澱が生じた。滴下終了後
、２時間攪拌し一夜放置後、濾過し１４０ｍ１の水で洗
い８０”Ｃにて５時間風乾して白色粉末状結晶１２．４
ｇを得た。

ＩＲ（Ｋ［ｌｒ）ｃｍ−’：　　３２９２．　１６２６
゜１５６３、　１３８９．　１２６２．　１２３０．　
１１１７、　　　＋０６０．　　１０３０．　　９９９
．　　９８２．　　８８３．７８７ 元素分析値（Ｃ９１１１２Ｎ　４０３Ｚ　ｎとして）：
ＣＨＮ　　　　　　　　　Ｚｎ ［作　用］ Ｌ−カルノシン亜鉛塩の骨形成促進作用について、幼若
ラットを用い、大腿部骨幹におけるカルンウム含１、亜
鉛含量、アルカリ性ホスフ１ターゼ活性及びＤＮＡ含量
の上昇効果によって確認した。比較化合物として硫酸亜
鉛を用いた。

（Ｉ４Ｆ−′ｌ及び方法） 幼若な雄性ウィスター系ラット５匹を１群として用いた
。被験部はＬ−カルノシン亜鉛塩をＩＮ塩酸に溶解し、
ｌＮ水酸化ナトリウムでｐＨ７にｗ４ｇＩ！した溶液を
、対照化合物として硫酸亜鉛を精製水に溶解した溶液を
、それぞれ経口投与した。

フントロール群は溶媒のみ経口投与した。

被験部を亜鉛に換算して５．５ｍｇ／ｋｇに相当する量
を１８１回、３日間経口投与した。最終投与２４時間後
に層殺し、ラットをエーテル軽麻酔下にて大腿部をとり
出し、軟組織と骨髄を取り除き、骨幹と骨ｒ！（骨幹端
組織を含む）を分離して大腿部骨幹断片を作成した。

カル／ラム　　の 大腿部骨幹組織を６４０℃で２４時間灰化し、ｆｆ！ｆ
ｆｉを測り、その後６Ｎ塩酸に溶解してカルシウム量を
原子吸光光度法にて測定した。骨カルシウムはｍｇ／ｇ
骨灰として表わした。

アルカ　　ホスフ　　−ゼ　　の 大関部骨幹断片を水冷した６、５ｍＭパルビタール緩衝
１１１（１）Ｈ７，４）３ｒｎ重に浸し、小片に切りｆ
　７　Ｃ１ン乳棒のついたＰｏｔｔｅｒ−ＥｌｖｅｈＪ
ｃｍホモジナイザーにて均質とし超音波装置にて６０秒
間かけて１！壊した。６００回転回転化て５分間遠心分
離し、得られた上清を酵素活性の測定に使用した。アル
カリ性ホスファターゼ活性はＷｅｌｌｅｒと５ｃｈｕｔ
ｔの方法（Ｂ　ｅ　ｒ　ｇｍｅｙｅｒｌｌυ（ｅｄ）Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ　　ｏｆｅｎｚｙｍａｔｌｃ　　ａｎａｌ
ｙｓｉｓ、　　Ｖｏｌ、１−２．　　Ａ　ｃ　ａ　ｄ　
ｅ　ｍ　Ｉ　ｃ　　Ｐ　ｒ　ｅ　ｓ　ｓ、　　Ｎ　ｅ　
ｗＹ　ｏ　ｒ　ｋ、　　Ｐ　Ｐ　８５６−８６０．　１
９６５　）に準じて測定した。酵素活性は′ｉ！！離し
たｐ−二）ロフェノールのｇｍｏｌ／分／タンパク質（
ｍｇ）で表わした。タンパク質の濃度はｔ、ｏｗｒｙら
の方法（Ｊ、　　１ｌｌｏ１．　　Ｃｈｅｍ、　　、１
９３　２６５２７３、　１９５１）に準じて測定した。

デオキシリボ　　　ＤＮＡ　　　　の 大腿部骨幹小片を、骨組織ホモジネート後、氷？ｔ　Ｌ
　タｏ　、　Ｉ　Ｎ水酸化ナトリウム溶液４．０ｍｌに
て２４時ｒｍ振り混ぜた。アルカリ抽出後、試料をｔｏ
、ｏｏｏ口転で６分間遠心分離し、上清をｃｅｒｌｏｔ
ｔｌの方法（Ｊ、　　Ｂｌｏｔ、　　Ｃｈｅｍ。

２１４　３９−７７、　１９５５）に準じて測定した。

ＤＮＡ含量は、総ＤＮＡ量（ｍ　ｚ　）　／　ｌ骨湿ｆ
ｆｉ世として表わした。

の 大関部骨幹断片を硝酸で消化させ（Ｂｌｏｃｈｅｍ、　
　Ｉ’ｈａｒｍａｃｏ１．．３６　４００７−４０１２
、　１９８６）、亜鉛を原子吸光光度法にて測定した。

亜鉛含量はμｇ亜鉛７１１重量で表わした。　　結果を
表１に示した。

データは平均値上標準誤差として表わした。有意差は５
ｔｕｄｅｎｔのｔ−検定を用いて求め、Ｐ値がＯ，ＯＳ
以下てあれば統計学的に有意差ありとし　た。

（以下余白） 表１から明らかなように、硫酸亜鉛は大腿部骨幹の亜鉛
ｍ１　　カルシウム量、アルカリ性ホスファターゼ活性
を増加させるが、ＤＮＡｆｆ１ｌこ関しては有意な変動
をきたさなかった。一方、　Ｌ−カルノシン亜鉛塩は亜
鉛ｍ５　　カルシウム量、アルカリ性ホスファターゼ活
性の増加、さらにそれに加えてＤＮＡｍを増加させた。

このように、亜鉛として同ｈｔ　（ｓ　、　５ｍ　ｇ　
／　ｋ　ｇ　）の投与ｍにて、骨形成促進作用において
Ｌ−力ルノシン亜鉛塩は硫酸亜鉛より強いことが確認さ
れた。

（毒性試験） 体ｉｎ＋５０−２００ｇのＷ　Ｉ　ｓ　ｔ　ａ　ｒ系雌
雄ラットを冬目ｉ　１０匹として、結晶性り一力ルノシ
ン亜鉛塩を各１０ｇ／ｋｇずつ経口投与し、７日間観察
したがいずれも死亡例は認められなかった。

また、いずれのラットにおいても下痢の症状は認められ
なかった。一方、硫酸亜鉛のラットの経口投与によるＬ
Ｄｓｓ値は１３７４ｍｇ／Ｋｇ［化学物質の安全性評価
（Ｉ　１）、化学工業日報社、　（昭和５８年）］であ
り、また、硫硫酸鉛には嘔吐、悪心、下痢などの副作用
が知られている。従って、Ｌ−力ルノシン亜鉛塩の方が
硫酸亜鉛より安全性が高い。

Ｌ−カルノシン亜鉛塩は、製薬上許容される補助剤を配
合して、経口投与あるいは非経口投与用製剤とすること
ができるが、特に経口投与が好ましい。経口投与用の製
剤としては、上記化合物を適当な添加剤、たとえば乳糖
、マンニット、　トウモロコシデンプン、結晶セルロー
ス等のＲ形削、セルロース誘導体、アラビアゴム、ゼラ
チン等の結合剤、カルボキシメチルセルロースカルシウ
ム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム等の
滑沢剤等々と適当に組み合わせることにより錠剤、散剤
、顆粒剤、カプセル剤とすることができる。また、これ
らの固形製剤をヒドロキシプロピルメチルセルロースフ
タレート、　ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセ
テートサクシナート、セルロースアセテートフタレート
、メタアクリレートコーポリマーなどの被覆用基剤を用
いて腸溶性製剤とすることができる。さらに、中鎖脂肪
酸トリグリセライド、サフラワー油、大豆油あるいはポ
リエチレングリフール４００等に溶解し、軟カプセル剤
とすることもできる。非経口投与用の製剤としては、　
例えば水、　エタノール、　グリセリン、慣用な界面活
性剤等を組み合わせることにより注射用液剤とし、また
、串刺用基剤を用いて串刺とすることができる。

投与量は年齢、体賃、症状、治療効果、投与方法、投与
期間により異なるが、通常、経口投与の場合にはｌ−２
０００ｍｇ／日、好ましくは１０ｚｏｏｍｇ／日の投与
範囲で１日１〜３回の範囲で投与する。

製剤例１ 結晶性Ｌ−カルノシン亜鉛塩　　　　　５０ｇ乳紙　　
　　　　　　　　　　　　　３１５ｇトウモロコンデン
プン　　　　　　　１２５ｇ結晶セルロース　　　　　
　　　　　　２５ｇ上記成分を均一に混合し、　７．５
％ヒドロキシプロピルセルロース水溶液２００ｍ１を加
え、押出し造粒機により、直径０．５ｍｍスクリーンを
用いて顆粒とし、直ちにマルメライザーにより丸めた後
、乾燥し顆粒剤とした。

製剤例２ 結晶性り一力ルノシン亜鉛塩　　　　　２０ｇ乳糖　　
　　　　　　　　　　　　　　１００ｇトウモロコンデ
ンプン　　　　　　　　　３６ｇ結晶セルロース　　　
　　　　　　　　３０ｇカルボ亭シメチルセルロース力
ルンウム０ｇ ステアリン酸マグネシウム　　　　　　　４ｇ上記組成
の成分を均一に混合し、単発打鍵機にて直径７．５ｍｍ
の杵で１錠２００ｍｇの錠剤とした。

次いで、この錠剤に下記組成のコーテイング液をスプレ
ーコーティングし、　１錠当りｌ　Ｏｍｇの被覆を施し
、腸溶性フィルムコーティング錠剤とし　た。

コーティング液組成： ヒドロキノプロピルメチルセルロース フタレート ｓ、ｏ　　（ｗ／Ｗ）　　％ グリセリン脂肪酸エステル ０　．４　　（Ｗ／Ｗ）　　％ 塩化メチレン　　　　　５０．０　（Ｗ／Ｗ）％サラシ
ミツロウ　　　　　ｏ、１（Ｗ／Ｗ）％４Ｖプａパ／−
ル　　　４　Ｌ、Ｓ　（Ｗ／Ｗ）％Ｅ発明の効果］ Ｌ−力ルノシン亜鉛塩を有効成分とする本発明の骨形成
促進剤は、骨中のカルシウム濃度、亜鉛ｅ度、ＤＮＡｊ
ｇ１度、アルカリ性ホスフ１ターゼ活性の増加作用に優
れており、毒性、副作用が極めて低いので骨形成、骨代
真異常によって生じる骨折、骨軟化症、骨粗軸症、腰背
痛の治療薬として有用である。特に、経口投与にてこれ
らの効果を示すことも本発明の特徴である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. Ｌ−カルノシン亜鉛塩を有効成分とする骨形成促進剤