JPH0266456A - 疾病動物の一次診断方法、それに使用する診断試薬及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は畜産動物、愛玩動物或いは実験動物の疾病を早
期発見すると共に経過観察、健康管理等に有用な疾病動
物の一次診断方法、それに使用する診断試薬及びその製
造方法に関するものである。

［従来の技術］ 畜産動物としてはウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ニ
ワトす等が飼育され、愛玩動物としてはイヌ、ネコ等が
飼われ、実験動物としてはウサギ、モルモット、マウス
、イヌ、ネコ、ラット等が用いられるのが一般的である
。

［発明か解決しようとする課題］ 畜産動物の場合肉、乳、卵等の製品の品質を一定以上の
ものとするためには、疾病動物を生産ラインから外す必
要があるが、従来は疾病動物を判別する有効な手段がな
く、飼育管理者が経験により見出し、獣医の診断を受け
るようにしている。

しかしながら、このような経験による判断は病状がかな
り進行してからてないと分かり難く、手遅れになるケー
スが多い。

又、仔ブタや仔ウシの導入の際、何らかの疾病のため新
しい飼育環境に順応できずに急死してしまうケースが多
い。

更に、近年のペットブームで犬や猫が多くの家庭で飼わ
れるようになってきているが、これらの愛玩動物の健康
状態も相当な経験者てなけければ分からず、疾病か進行
して手遅れになるケースが多い。

又、実験動物は体重の推移により健康状態が判定され、
正常と思われるものが実験に供される。

しかしながら、実験開始後原因不明で死亡するケースや
、薬物に対する反応が異常に高いもの又は異常に低いも
の等かあり、実験動物が何等かの疾病を有していたので
はないかと疑われる場合が少なくない。

本発明は畜産動物、愛玩動物、実験動物の健康状態を一
次的に診断し、何らかの疾病を有するものを区別し得る
ようにすることを目的とする。

［課題を解決するための手段］ 本発明は、畜産動物、愛玩動物、実験動物の体液中のα
１−酸性糖蛋白を測定することを柘徴とする疾病動物の
一次診断方法、畜産動物、愛玩動物、実験動物のα１−
酸性糖蛋白に対する異種動物の特異抗体を含有する拡散
平板に、検体注入用の孔を設けてなることを特徴とする
疾病動物の一次診断試薬、及び畜産動物、愛玩動物、実
験動物の血清を硫安分画し、次いでイオン交換カラムク
ロマトグラフィーにより精製し、更にゲル）濾過により
精製したα１−酸性糖蛋白を異種動物に免疫し、得られ
た特異抗血清を拡散平板に含有せしめることを特徴とす
る疾病動物の一次診断試薬の製造方法にかかるものであ
る。

ここで、畜産動物としてはウシ、ブタ、ウマ、ヤギ、ヒ
ツジ、ニワトリ等が、愛玩動物としてはイヌ、ネコ等が
、実験動物としてはウサギ、モルモット、ラット、マウ
ス、イヌ、ネコ等が挙げられる。

試料として用いられる体液としては血液、血漿、血清、
尿、乳汁、髄液、関節液、腹水、胸水、涙液、胆汁、精
液、鼻汁、唾液等が挙げられる。

前記各種動物のα１−酸性糖蛋白は以下のようにして得
る。

■硫安分画による一次精製 動物血清に硫安を６０％飽和になるよう加え、室温で３
時間放置後、生じた沈殿を除く。更に上澄に硫安を９０
％飽和になるよう加え、４℃、１６時間放置後、α１−
酸性糖蛋白画分を沈殿として得る。

■ＤＥＡＥ−カラムクロマトグラフィーによる二次精製 硫安分画で得たα１−酸性糖蛋白画分を０．０２Ｍ、　
１）１１４．３の酢酸緩衝液で透析し、同緩衝液で平衡
化したＤＥＡＥ−セルロースカラムにかける。緩衝液濃
度を変え、段階的に溶出し、例えば０．１Ｍ、　　０．
５Ｍ、２．０Ｍの緩衝液で溶出した場合、０．５Ｍで溶
出される両分としてα１−酸性糖蛋白を得る。

■ＣＭ−カラムクロマトグラフィーによる三次精製 ＤＥＡＥ−セルロースカラムによって精製されたα１−
酸性糖蛋白画分を０．０２Ｍ５ｐＨ４，３の酢酸緩衝液
で透析し、同一緩衝液で平衡化したＣＭ−セルロースカ
ラムにかける。

吸着されずに溶出される両分としてα１−酸性糖蛋白を
得、精製水で透析後、凍結乾燥する。

■ゲル）濾過による四次精製 ＣＭ−セルロースカラムによって精製されたα１−酸性
糖蛋白画分をセファクリルゲル等のカラムで分子量の大
きさの違いにより分離する。α１−酸性糖蛋白画分は分
子量５万前後の位置に溶出され、精製水で透析後、凍結
乾燥し、白色粉末のα１−酸性糖蛋白を得る。

以上の精製操作により得られた各種動物血清中のα１−
酸性糖蛋白の理化学的性状は、５ＤＳ−ポリアクリルア
ミドゲル電気泳動法、アミノ酸分析機、ガスクロマトグ
ラフィー、平板等重点電気泳動法等を用いて解析した。

結果は下記第１表の通りである。

第１表　各種動物血清中のα１−酸性糖蛋白の理化学的
性状上記の精製した各種動物のα１−酸性糖蛋白にフロ
イト・コンプリート・アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ
　Ｃｏｔｎｐｌｅｔｅ　Ａｄｊｖａｎｄ：デイフコ社製
）を加えて乳化させ、これをヤギ、ウサギ、ヒツジ、ウ
マ、ウシ等（当該動物以外の動物）に皮下注射する。注
射は２週間間隔をもって繰返し行ない、抗体価の上昇を
確認してから採血する。

こうして得られた血液を遠心分離してその上澄を採取す
れば特異抗血清が得られる。

本特異抗血清を用い種々の免疫学的抗原抗体反応により
α１−酸性糖蛋白を検出、定量することができる。例え
ば、−光放射免疫拡散法、二重免疫拡散法、免疫電気泳
動法、抗原抗体交叉電気泳動法、対向免疫電気泳動法、
ロケット電気泳動法、感作赤血球凝集反応法、受身赤血
球凝集阻止反応法、感作ラテックス凝集反応法、免疫比
濁法、ラジオイムノアッセイ法、酸素免疫測定法等の方
法で試料中のα１−酸性糖蛋白と抗原−抗体反応を起こ
させ、血液或いは体液中のα１−酸性糖蛋白を測定する
。

（１〕−光放射免疫拡散法（ＳＲＩＤ法）抗α１−酸性
糖蛋白血清を含む寒天平板の小穴に、血清などの試料（
抗原）を５ｄ注入する。室温或いは３７℃で２４〜４８
時間反応させると試料中のα１−酸性糖蛋白が放射状に
拡散し、抗体と反応して沈降リングを形成する。

抗原濃度と沈降リングの面積は直線的に相関するので、
α１−酸性糖蛋白標準液の検量線から試料中のα１−酸
性糖蛋白量を算出できる。この方法は、簡便で高価な機
器類を必要とせず、再現性も高い。たたし判定までにや
や長時間を要する。最小感度は５■／１１で血清中のα
１−酸性糖蛋白の定量に適している。

（ｎ）受身赤血球凝集阻止反応法（ＰＨＡ−１法）マイ
クロプレート（Ｖ型）のウェルに緩衝液を２５ｄずつ分
注し、次に試料をダイリュータ−（２５ｄ）で２０希釈
系列を作る。一定力価の抗α１−酸性糖蛋白血清を２５
４加え、混合し、室温で３０分間静置して中和する。こ
れに感作＋ｆｎ球（ヒツジ赤血球にα１−酸性糖蛋白を
結合させたもの）を５０ｄ加え、混合後、２時間以上静
置して赤血球の凝集の有無で判定する。標桑α１−酸性
糖蛋白の凝集価と検体の希釈倍数からα１−酸性糖蛋白
濃度を算出する。微量のα１−酸性糖蛋白（１０ｎｇ／
ν！以下）の定量法として用いており、尿中α１−酸性
糖蛋白の測定などに簡便である。たたし、血清α１−酸
性糖蛋白の定量には２ｎ希釈を行なうため誤差が大きく
適さない。感度はＩＯｎｇ／　ｘｌである。

■酵素免疫測定法（ＥＩＡ法） これにはプレート法とビーズ法かある。

抗体をコーティングした器材に試料とアルカリホスファ
ターゼ標識α１−酸性糖蛋白を加え３７℃２時間の競合
法で反応させ、洗浄後ｐ−二トロフェニルホスフエイト
を加え３０分の後反応をとめ、吸光度を４５０ｎｍで測
定する。

同様にして得たα１−酸性糖蛋白標準曲線からα１−酸
性糖蛋白量を算出する。感度は１０ｎ（！、／１１であ
る。

■免疫比濁法（ＴＩＡ法） 一定力価に希釈した抗α１−酸性糖蛋白血清２　、　Ｏ
ｘｌに試料５０ｄを加えると、凝集反応を起こし濁りを
生ずる。この濁りは抗原量に応じて強まる。３７℃で３
０分反応させ分光光度計（吸光度３４０ｎｍ　）で濁度
を測定する。試料ブランクの値で補正してα１−酸性糖
蛋白画分線からα１−酸性糖蛋白量を算出する。自動分
析器（日立７０５）を用いた場合は抗体５００Ｊ　、試
料２０Ｊで３７℃、ｌ（）分の反応で測定できる。迅速
で再現性も良い。感度は５ｕｇ／ν！である。

［作　　　用］ 畜産動物、愛玩動物、実験動物の正常な動物中の血液中
に含まれその他の体液中にも存在するα１−酸性糖蛋白
は、各種疾病特に炎症、感染症、悪性腫瘍等の場合高値
を示すので、体液中のα１−酸性糖蛋白を免疫学的な手
法によって測定することにより必ずしも疾病を特定する
ことはできないが、何等かの疾病の存在を発見すること
ができ、二次的に精密検査等を行なえば診断を確定する
ことができる。

各種動物のα１−酸性糖蛋白を高度に精製することかで
きるので、特異性の高いしかも高力価の抗α１−酸性糖
蛋白血清が得られ、信頼性の高い診断試薬を容易に製造
することができる。

［実　施　例］ 実施例Ｉ Ａ：ウシα１−酸性糖蛋白の精製 ウシ血清に硫安を６０％飽和になるよう加え、室温で３
時間放置後、生じた沈殿を除き、更に上澄に硫安を９０
％飽和になるよう加え、４℃、１６時間放置後、α１−
酸性糖蛋白を沈殿として得る。

硫安分画で得たα１−酸性糖蛋白を０．０２Ｍ。

ｐＨ４，３の酢酸緩衝液で透析し、同緩衝液で平衡化し
たＤＥＡＥ−セルロースカラムにかけ、０．１Ｍの緩衝
液で洗浄した後０．５Ｍの緩衝液で溶出される両分とし
てα１−酸性糖蛋白を得る。

ＤＥＡＥ−セルロースカラムによって精製したα１−酸
性糖蛋白画分を０．０２Ｍ５ｐＨ４，３の酢酸緩衝液で
透析し、同一緩衝液で平衡化したＣＭ−セルロースカラ
ムにかけ、未吸着溶出画分としてα１−酸性糖蛋白を得
、精製水で透析後、凍結乾燥する。

ＣＭ−セルロースカラムによって精製したα１−酸性糖
蛋白画分をセファクリルゲル等のカラムで分子量の大き
さにより分画し、分子量５万前後の位置に溶出されるα
１−酸性糖蛋白画分を精製水で透析後、凍結乾燥し、高
度に精製された白色粉末のα１−酸性糖蛋白を得る。

Ｂ：ウシα１−酸性糖蛋白に対する特異抗血清の調製 α１−酸性糖蛋白を生理食塩水で４ｍｇ／ｉｙｆになる
ように調製し、この溶液０．５νｌに等量のフロイトの
コンプリードアシュバンドを混和乳化した液を、体重約
２Ｋｇのウサギ（家兎）の背中皮下に分割注射した。２
週間後に前記と同様の操作で作成したα１−酸性糖蛋白
１藪を追加免疫し、更にその２週間後にα１−酸性糖蛋
白乳化液Ｉ　ｍｌＦを再度追加免疫した。

最後の免疫より１０日後に血液を採取し、血清を分離し
、５６℃３０分間加暦して非動化後、防腐の目的で０．
０５％濃度になるように窒化ソーダを加えた。本抗血清
のα１−酸性糖蛋白抗体特異性はウシ血清を抗原とした
ラフタロ二−試験法及び免疫電気泳動法で測定した結果
α１−酸性糖蛋白以外の抗体は含まれていないことが証
明された。

Ｃ：ウシα１−酸性糖蛋白定性試験用試薬の調製及びウ
シａ１−酸性糖蛋白の検出 １／１５Ｍリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４）に精製寒天
１２％になるように加え、これを加温溶解し水平な容器
に厚さ約１．５ｏ＋ｍになるように注入し固化させる。

これに約３ｍ＋ｎの間隔で直径３ｆｆ１ｍの孔を穿設し
、その孔のそれぞれに本発明で得た、抗血清、被検血清
及びα１−酸性糖蛋白を含む標準血清を一杯になるまで
注入し、室温で２４時間反応させる。このようにして、
被検血清と抗血清との間の沈降線を調べその沈降線の認
められるものをα１−酸性糖蛋白陽性と判定した。

Ｄ：ウシα１−酸性糖蛋白定量用試薬の調製１／１５Ｍ
リン酸緩衝食塩水（ｐｌ＋７．４　＞に精製寒天を１．
２％になるように加え、加温溶解して５５℃の温度に保
持する。これに前ｇｃ！Ｂの抗血清を最終濃度が２〜１
５％になるように加えて混和し、水平な容器に厚さ約１
．５ｍｍになるように注入し固化させる。これに約１５
ｍｍの間隔で直径３ｆｆＩｆｆｌの孔をあけ、それぞれ
の孔にウシα１−酸性糖蛋白標準液の原液、４倍、１６
倍希釈液及び被検液をそれぞれ５Ｉずつ正確に注入する
。室温で２４時間反応させたところ、その沈降輪の直径
は一定の関数関係にあった。

Ｅ：正常ウシ血清中のα１−酸性糖蛋白の定量ホルスタ
イン、黒毛和種、日本雑用、ヘレフォード、シャーシー
等の健康なウシの品種毎の正常血清中ａ１−酸性糖蛋白
値を、前記りで調製した試薬を用いて一元放射免疫拡散
法により定量した。結果は下記第２表に示す通りである
。

第２表　品種毎の健康ウシ血清中のα１−酸性糖蛋白１
藪種による健康ウシ血清中のα１−酸性糖蛋白値の差は
認められなかった。

全１４３例中の最大値４５０ｕｇ／ｉ＋ｆを正常値の上
限とした。

Ｆ、各種疾病ウシの一次診断 正常、白血病、腸間膜脂肪壊死、腰痛、乳房炎、脱臼、
肺炎、産後起立不能、多発性関節炎と診断の確定したウ
シの血清中のα１−酸性糖蛋白を、前記りで調製した試
薬を用いて定量した、正常値の上限は４５０Ｊ１ｇ／ｙ
Ｊ’とした。結果は第１図に示す通りである。

正常ウシの異常率は０％であり、白血病８５，０％、腰
痛８３．３％、乳房炎８４，６％、脱臼７５．０％、肺
炎７２．２％、産後起立不能７９．３％、多発性関節炎
７６．９％と疾病ウシは高率て異常と一次診断された。

従って、本発明の診断方法はウシの健康管理、疾病の経
過観察及び予後の判定にを用な情報を提供するものであ
る。

実施例２ 前記実施例１のＢで得られた特異抗体を担体にコーティ
ングし、これに試料としてウシの乳汁を加えると共に、
前記実施例１のＡで得られた精製α１−酸性糖蛋白にア
ルカリフォスファターゼを標識した標識物を加え、３７
℃、２時間競合反応させ、洗浄後、Ｐ−ニトロフェニル
フォスフエイトを加え３０分の後反応を止め、吸光度を
４５０ｎｍて測定する。同様にして得たａｌ−酸性糖蛋
白の標準曲線からウシ乳汁中のα１酸性糖蛋白量を算定
した。その結果を下記第３表に示す。

の診断の確定したブタの血清中のα１−酸性糖蛋白を定
量した。結果は第４表に示す通りである。

（以下余白） 第３表　ウシ乳汁中のα１−酸性糖蛋白値実施例３ 実施例１のＡと同様の操作でブタのα１−酸性糖蛋白を
精製し、Ｂと同様の方法でヤギに免疫して特異抗血清を
得た。

Ｄと同様の操作でブタａ１−酸性糖蛋白定量用試薬を調
製し、健康なランドレース種及びホワイトヨーク種及び
下記第４表に示す各種疾患第４表 ブタ血清中のα１ −酸性糖蛋白値 一酸性糖蛋白値５０６■／ｘ１以上を異常とした。

健康なランドレース種及びホワイトヨーク種のブタのα
１−酸性糖蛋白値の最高値である５０５μｇ／’ＩＩを
正常値の限界とすると、例数は多くはないがブタ赤痢、
滲出性皮膚炎、多発性膿瘍、肺炎、骨膜炎のブタは１０
０％異常と判定され、大腸菌症でも８０％が異常と判定
された。

従って、ブタの疾病、特に炎症、感染症等の早期発見が
可能なことが判明した。

本実施例の方法で一次スクリーニングすることにより、
何等かの疾病を有するブタが判別され、更に臨床的検査
、細菌・ウィルス学的検査、病理組織学的検査、画像診
断等の精密検査を二次的に行なうことにより、総合的な
判定を下すことができる。

診断の結果疾病を有すると判明したブタは、疾病、症状
により隔離、消毒、予防注射、治療薬の投与、飼養管理
の改善等を行なうことができる。

このように、本発明の一次診断方法は、定期的検査によ
り疾病発生の予察ができ、疾病の汚染状況の把握に役立
ち、種豚の健康管理が行なえる。

実施例４ 実施例３と同様の操作で導入豚２０頭の血清中α１−酸
性糖蛋白量を一元放射免疫拡散法により測定し、−次ス
クリーニングしたところ、その内の４頭か異常高値を示
した。

これらのα１−酸性糖蛋白が異常高値を示したブタを精
密検査したところ多発性膿瘍、髄膜炎、肺炎、感染症と
診断された。各個体に適切な治療が行なわれ健康体とな
った。

従来、仔ブタ或は肉用ブタを導入する際、導入ブタ自身
が何らかの疾病にかかっている場合も少なくなく、新ら
しい飼育環境に順応できず急死してしまうケースが多い
。

導入ブタの単価も高くなっているため、導入ブタの死亡
はコスト高、収益の減少につながる大きな問題であるか
、本発明の一次診断方法により、導入ブタの健康をチエ
ツクすることができ、導入ブタの急死を未然に防止する
ことか可能となる。

実施例５ 実施例１のＡと同様の操作でウマのα１−酸性糖蛋白を
精製し、Ｂと同様の方法でウサギに免疫して特異抗血清
を得た。

Ｄと同様の操作でウマα１−酸性糖蛋白定量用試薬を調
製し、ウマ血清中のα１−酸性糖蛋白量を測定した。結
果を下記第５表に示す。

第５表　ウマ血清中のα１−酸性糖蛋白値α１−酸性糖
蛋白値４５１μｇ／１１以上を異常とした。

実施例６ 実施例１のＡと同様の操作でニワ］・りのα１−酸性糖
蛋白を精製し、Ｂと同様の方法でウサギに免疫して特異
抗血清を得た。

Ｄと同様の操作でニワトリα１−酸性糖蛋白定量用試薬
を調製し、ニワトリ血清中のα１−酸性糖蛋白量を測定
した。結果を下記第６表に示す。

実施例１のＡと同様の操作でイヌのα１−酸性糖蛋白を
精製し、Ｂと同様の方法でウサギに免疫して特異抗血清
を得た。

Ｄと同様の操作でイヌα１−酸性糖蛋白定量用試薬を調
製し、イヌ血清中のα１−酸性糖蛋白量を測定した。結
果を下記第７表に示す。

第６表　ニワトリの血清中のα１−酸性糖蛋白量第７表
　イヌ血清中のα１−酸性糖蛋白値α１−酸性糖蛋白値
４６１μｇ／１１以上を異常とした。

実施例７ α１−酸性糖蛋白値５０１ｕｇ／ｉ＋ｆ以上を異常とし
た。

実施例８ 実施例１のＡと同様の操作でネコのα１−酸性糖蛋白を
精製し、Ｂと同様の方法でウサギに免疫して特異抗血清
を得た。

Ｄと同様の操作でネコα１−酸性糖蛋白定量用試薬を調
製し、ネコ血清中のα１−酸性糖蛋白量を測定した。結
果を下記第８表に示す。

第８表　ネコ血清中のα１−酸性糖蛋白値α１−酸性糖
缶白値５８１■／ｘ１以上を異常とした。

実施例９ 実施例１のＡと同様の操作でマウスのα１−酸性糖蛋白
を精製し、Ｂと同様の方法でウサギに免疫して特異抗血
清を得た。

Ｄと同様の操作でマウスα１−酸性糖蛋白定量用試薬を
調製した。

マウス（ＢＡＬＢ／ｃ、８週、雄）５匹に結核菌（ＢＣ
Ｇ）１０５個を０　、　Ｉ　Ｉｆ静注した後、経時的に
、採血し、前記試薬により一元放射免疫拡散法で血清中
のα１−酸性糖蛋白を測定した。

結果は第２図に示す通りであり、ＢＣＧ投与後１日目よ
り血中α１−酸性糖蛋白は上昇し、３日目には最高値（
１３００μｇ／ν１）を示し、以後、下降して９日目に
は投与前の正常値（２４０±８０ｕｇ／１１１）に戻っ
た。

このように、ＢＣＧの感染によりα１−酸性糖蛋白の変
動が観察された。このことは、各種の薬効試験に供され
る化学物質や抽出物の生体に及ぼす作用を確認する一つ
の指標として有用であることを示すものである。

［発明の効果］ 以上述べたように本発明の疾病動物の一次診断方法の発
明によれば、畜産動物、愛玩動物、実験動物の体液中の
αｌ−酸性糖蛋白を測定することにより、何らかの疾病
特に炎症を伴う疾病を一次的に診断（スクリーニング）
することかでき、炎症、感染症、悪性腫瘍等の早期発見
に役立つ。

定期的検査により疾病発生の予察が可能となる。

又、疾病の汚染状況の把握や、種牛・豚等の健康管理、
導入動物の健康管理に役立つ。

更に、薬剤、手術等の治療後の効果判定及び予後判定の
マーカーになり得る。

本発明の診断試薬によれば、上述の効果に加え、測定法
が簡便で大量の検体を測定でき、検査に要する血清等の
体液はごく微量で測定でき、更に再現性に優れている。

更に本発明の診断試薬の製造方法によれば、特異性の高
い拭動物α１−酸性糖蛋白抗体を得ることができ、信頼
性の高いものを安価に大量生産することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の診断試薬による牛血清中のα１−酸性
糖蛋白測定値の範囲を示す図、第２図は本発明の診断試
薬によるＢＣＧ感染マウスにおける血清中α１−酸性糖
蛋白値の変動を示す図である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）畜産動物、愛玩動物、実験動物の体液中のα＿１−
   酸性糖蛋白を測定することを特徴とする疾病動物の一次
   診断方法。 ２）畜産動物がウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ニワトリの
   いずれか、愛玩動物がイヌ、ネコのいずれか、実験動物
   がウサギ、モルモット、ラット、マウスのいずれかであ
   る請求項１記載の疾病動物の一次診断方法。 ３）体液が血液、血漿、血清、尿、乳汁、髄液、関節液
   、腹水、胸水、涙液、胆汁、精液、鼻汁、唾液のいずれ
   かである請求項１記載の疾病動物の一次診断方法。 ４）免疫学的抗原抗体反応を利用して測定する請求項１
   記載の疾病動物の一次診断方法。５）免疫学的抗原抗体
   反応が一元放射免疫拡散法、二重免疫拡散法、免疫電気
   泳動法、抗原抗体交叉電気泳動法、対向免疫電気泳動法
   、ロケット電気泳動法、感作赤血球凝集反応法、受身赤
   血球凝集阻止反応法、感作ラテックス凝集反応法、免疫
   比濁法、ラジオイムノアッセイ法、酵素免疫測定法のい
   ずれかである請求項４記載の疾病動物の一次診断方法。 ６）正常な畜産動物群、愛玩動物群、実験動物群の各体
   液中のα＿１−酸性糖蛋白の上限値を診断基準とする請
   求項１記載の疾病動物の一次診断方法。 ７）畜産動物、愛玩動物、実験動物のα＿１−酸性糖蛋
   白に対する異種動物の特異抗体を含有する拡散平板に、
   検体注入用の孔を設けてなることを特徴とする疾病動物
   の一次診断試薬。 ８）畜産動物、愛玩動物、実験動物の血清を硫安分画し
   、次いでイオン交換カラムクロマトグラフィーにより精
   製し、更にゲル濾過により精製したα＿１−酸性糖蛋白
   を異種動物に免疫し、得られた特異抗血清を拡散平板に
   含有せしめることを特徴とする疾病動物の一次診断試薬
   の製造方法。