JPH02156155A - 特異的結合性物質の測定法及び試薬 - Google Patents
特異的結合性物質の測定法及び試薬Info
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- JPH02156155A JPH02156155A JP1264061A JP26406189A JPH02156155A JP H02156155 A JPH02156155 A JP H02156155A JP 1264061 A JP1264061 A JP 1264061A JP 26406189 A JP26406189 A JP 26406189A JP H02156155 A JPH02156155 A JP H02156155A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、試料溶液Ｙ、Ｒ３がＲ１及びＲ２並びに測定
すべき物質と特異的結合性であり、Ｒ２が固相への結合
を仲介しかつＲ３が標識乞担持する少なくとも３糧のレ
セプターＲよ、Ｒ２及びＲ３と一緒に恒温保持し、結合
し几標識と結合していない標識とを分離し、かつ両方の
相の一方における標識を測定することにより、特異的結
合性物質の測定法及び好適な試薬に関する。
すべき物質と特異的結合性であり、Ｒ２が固相への結合
を仲介しかつＲ３が標識乞担持する少なくとも３糧のレ
セプターＲよ、Ｒ２及びＲ３と一緒に恒温保持し、結合
し几標識と結合していない標識とを分離し、かつ両方の
相の一方における標識を測定することにより、特異的結
合性物質の測定法及び好適な試薬に関する。
従来の技術
体液及び組織中では、免疫学的に活性である、即ち特異
的な結合性パートナ−と結合性でありかつ人体の一定の
疾患又は健康状態のパラメタとして使われる物質が極め
て多数産生ずる。
的な結合性パートナ−と結合性でありかつ人体の一定の
疾患又は健康状態のパラメタとして使われる物質が極め
て多数産生ずる。
とりわけ、例えばホルモンのようなハプテン、腫瘍マー
カーのような蛋白質、蛋白質ホルモン及びウィルス性蛋
白質並びに抗体が挙げられる。
カーのような蛋白質、蛋白質ホルモン及びウィルス性蛋
白質並びに抗体が挙げられる。
薬物治療の管理にもしばしば血中医薬の測定が必要であ
る。この例μ抗てんかん剤、抗生物質、ジギタリス及び
オぎエートである。しばしばこれらの物質に非常に僅か
な量で産生するに過ぎないので、その検出にはイムノア
ッセイの原理による方法が使われる。これには多数の方
法がある。種々の免疫学的測定方法に均一（ｈｏｍｏｇ
ｅｎ）法及び不均一（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎ ）法に区分
することができる。不均一法では常に固相反応が関与し
、これにより標識し次成分の結合分乞非結合分から分離
する。均−法では、結合した標識と非結合の標識との分
離は行なわず、それ故結合した標識と非結合の標識との
区別化は他の方法により行なわなければならない。
る。この例μ抗てんかん剤、抗生物質、ジギタリス及び
オぎエートである。しばしばこれらの物質に非常に僅か
な量で産生するに過ぎないので、その検出にはイムノア
ッセイの原理による方法が使われる。これには多数の方
法がある。種々の免疫学的測定方法に均一（ｈｏｍｏｇ
ｅｎ）法及び不均一（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎ ）法に区分
することができる。不均一法では常に固相反応が関与し
、これにより標識し次成分の結合分乞非結合分から分離
する。均−法では、結合した標識と非結合の標識との分
離は行なわず、それ故結合した標識と非結合の標識との
区別化は他の方法により行なわなければならない。
不拘−イムノアツセイ乞実施するに当り、基本的に２つ
の方法があり、一方は測定すべき物質に対する抗体を固
定化しかつ他方は測定すべき物質自体を固定化する。最
初の方法では、測定すべき物質乞含有する試料溶液と、
測定すべき物質と標識とからの接合体とを固定化した抗
体と一緒に恒温保持する。その際に、測定すべき物質と
標識し九物質とが抗体への結合量めぐって競合する。溶
液中の測定すぺ＠物質の量が多ければ多いほど、標識し
几物質は少敬でしか結合し得ない。それ故、標識物質の
結合量が測定物質の量の間接的な尺度である。固相と液
相との分離後に、両相の一方における標識χ測定するこ
とができる。
の方法があり、一方は測定すべき物質に対する抗体を固
定化しかつ他方は測定すべき物質自体を固定化する。最
初の方法では、測定すべき物質乞含有する試料溶液と、
測定すべき物質と標識とからの接合体とを固定化した抗
体と一緒に恒温保持する。その際に、測定すべき物質と
標識し九物質とが抗体への結合量めぐって競合する。溶
液中の測定すぺ＠物質の量が多ければ多いほど、標識し
几物質は少敬でしか結合し得ない。それ故、標識物質の
結合量が測定物質の量の間接的な尺度である。固相と液
相との分離後に、両相の一方における標識χ測定するこ
とができる。
体並びに固定化した試料物ｉと恒温保持する。
て競合する。測定すべき物質の量が溶液中に多測定すべ
き物質の量の間接的尺度である。ここでも固相と液相と
の分離後に、結合し之標識の量を測定する。
き物質の量の間接的尺度である。ここでも固相と液相と
の分離後に、結合し之標識の量を測定する。
これらの方法の欠点は、変性した抗体をいつも使用°し
なげればならないことである。第１の方法では抗体固相
に結合させ、第２の方法では抗体を標識物質に結合させ
る。これらの変性に経費がかかり、抗体の性質の宅１し
くない変化、例えば特異性及び親和性の低下ンも九ら丁
ことがある。このために、しばしばポリクロナール抗体
を使用できないで、低い交叉反応性及び高い親和性にす
る之めに莫大な経費χかけて選択されたモノクロナール
抗体乞使用しなければならず、しかもこの抗体は多くの
場合経費のかかる方法で精製しなければならない。更に
、それぞれの測定の之めに丁べての試薬が特異的である
ように選択しなければならず、０れもまた望１しくない
。西ドイツ国特許公開第３１３８４８９号明細書から、
形成した標識複合体の固定化を抗体ケ使わずに行なうこ
とは既に公知であるが、この方法でも標識し之抗体、そ
れ故変性した抗体の使用が必要である。
なげればならないことである。第１の方法では抗体固相
に結合させ、第２の方法では抗体を標識物質に結合させ
る。これらの変性に経費がかかり、抗体の性質の宅１し
くない変化、例えば特異性及び親和性の低下ンも九ら丁
ことがある。このために、しばしばポリクロナール抗体
を使用できないで、低い交叉反応性及び高い親和性にす
る之めに莫大な経費χかけて選択されたモノクロナール
抗体乞使用しなければならず、しかもこの抗体は多くの
場合経費のかかる方法で精製しなければならない。更に
、それぞれの測定の之めに丁べての試薬が特異的である
ように選択しなければならず、０れもまた望１しくない
。西ドイツ国特許公開第３１３８４８９号明細書から、
形成した標識複合体の固定化を抗体ケ使わずに行なうこ
とは既に公知であるが、この方法でも標識し之抗体、そ
れ故変性した抗体の使用が必要である。
発明が解決しようとする課題
それ故、本発明の課題は、多方面で使用することができ
、抗体乞変性ゼずに使用することができかつ必ずしもモ
ノクロナール抗体を使用する必要のない、免疫学的に活
性な物質の測定法を開示することである。
、抗体乞変性ゼずに使用することができかつ必ずしもモ
ノクロナール抗体を使用する必要のない、免疫学的に活
性な物質の測定法を開示することである。
課題を解決するための手段
この課題は、Ｒ３がＲ１及びＲ２並びに測定すべき物質
と特異的結合性であり、Ｒ２が固相への結合χ仲介しか
つＲ３が標識を担持する少なくとも６種のレセプターＲ
１、Ｒ２及びＲ３と一緒に恒温保持し、結合し友標識と
結合していない標識とを分離し、かつ両方の相の一方に
おける標識乞測定することにより、特異的結合性物質の
測定法により解決され、この方法は、レセプターＲ１と
して、測定丁べき物質のエピトープと特異的に結°合す
る結合部位少なくとも２個を有するレセプター乞使用し
、Ｒ２として、特異的に結合するペアのパートナ−Ｐｌ
と、測定すべき物質に相当するか又はその誘導体であり
かつ測定すべき物質の工ぎトープ少なくとも１個を有す
る物質Ｓとからの接合体を使用し、その際にパートナ−
Ｐｌは固相に結合しているか又は固定化されており、か
つＲ３として、少なくとも物質Ｓと１種の標識馨含有す
る複合体Ｙ使用することχ特徴とする。
と特異的結合性であり、Ｒ２が固相への結合χ仲介しか
つＲ３が標識を担持する少なくとも６種のレセプターＲ
１、Ｒ２及びＲ３と一緒に恒温保持し、結合し友標識と
結合していない標識とを分離し、かつ両方の相の一方に
おける標識乞測定することにより、特異的結合性物質の
測定法により解決され、この方法は、レセプターＲ１と
して、測定丁べき物質のエピトープと特異的に結°合す
る結合部位少なくとも２個を有するレセプター乞使用し
、Ｒ２として、特異的に結合するペアのパートナ−Ｐｌ
と、測定すべき物質に相当するか又はその誘導体であり
かつ測定すべき物質の工ぎトープ少なくとも１個を有す
る物質Ｓとからの接合体を使用し、その際にパートナ−
Ｐｌは固相に結合しているか又は固定化されており、か
つＲ３として、少なくとも物質Ｓと１種の標識馨含有す
る複合体Ｙ使用することχ特徴とする。
本発明方法に、体液又は組織エキス中で検出される、特
異的結合能χ有する実質的にすべての物質の測定に好適
であり、その際に低濃度の物質も高濃度のものと同様に
良好に検出可能である。本方法の感度及び精度は従来公
知の方法に比べて改良されている。本発明により、簡単
な試薬で迅速かつ確実に測定することができる。
異的結合能χ有する実質的にすべての物質の測定に好適
であり、その際に低濃度の物質も高濃度のものと同様に
良好に検出可能である。本方法の感度及び精度は従来公
知の方法に比べて改良されている。本発明により、簡単
な試薬で迅速かつ確実に測定することができる。
特に、本方法はハプテン、即ち特異的結合性パートナ−
に対して結合部位１個だげ７有する物質の測定に好適で
ある。例としてホルモン並びに抗てんかん剤、抗生物質
、ジギタリス及びオピエートのような医薬が挙げられる
。
に対して結合部位１個だげ７有する物質の測定に好適で
ある。例としてホルモン並びに抗てんかん剤、抗生物質
、ジギタリス及びオピエートのような医薬が挙げられる
。
本発明方法乞実施すると公知方法とは異なり抗体の品質
に対する要求は高くなく、それ故直ちにポリクロナール
抗体乞使用することができることが判明し驚異的であつ
之。更に、得られた７値は極く僅かであり、それ故感度
は公知方法に比べて高いＣとが認められた。
に対する要求は高くなく、それ故直ちにポリクロナール
抗体乞使用することができることが判明し驚異的であつ
之。更に、得られた７値は極く僅かであり、それ故感度
は公知方法に比べて高いＣとが認められた。
本発明の明細書中でエピトープとは、他の物質との特異
的結合部成立てゼる結合部位である。
的結合部成立てゼる結合部位である。
エピトープの例は抗原及びハブテン上の抗原決定基又は
蛋白質上の特異結合部位である。
蛋白質上の特異結合部位である。
本発明方法を実施するに当り、試料溶液馨６種のレセプ
ターＲよ、Ｒ２及びＲ３と恒温保持する。その際、レセ
プターＲ３はレセプターＲ１及びＲ２並び創定丁ぺさ物
質と特異的結合性でありかつ標識乞有する。レセプター
Ｒ２は固相への結合χ仲介する。本発明方法により実施
することのできる種々の反応原理は第１図に図示した。
ターＲよ、Ｒ２及びＲ３と恒温保持する。その際、レセ
プターＲ３はレセプターＲ１及びＲ２並び創定丁ぺさ物
質と特異的結合性でありかつ標識乞有する。レセプター
Ｒ２は固相への結合χ仲介する。本発明方法により実施
することのできる種々の反応原理は第１図に図示した。
優れた方法は第１ａ図に図示した実施形である。その際
に、特異的に結合するペアの、Ｐｌに対して相補性のＲ
２が多数壁に結合している反応容器中に、物質Ｓと、特
異的に結合するペアのパートナ−Ｐｌとからの接合体で
あるレセプターＲ２ヲ加える。Ｃの接合体はパートナ−
Ｐ１χ介してパートナーＰ２に結合する。引続いて、測
定すべき物質のエピトープに対して少なくとも２個の結
合部位？有するレセプターＲ１及び、物質Ｓと標識とか
らの接合体であるレセプターＲ３ヲ反応容器中に加える
。溶液中でＲ２のＳ部分、Ｒ３のＳ部分及び測定すべき
物質がレセプターＲ１への結合部めぐって競合する。例
えば、Ｒ１が２価の抗体である場合、次の複合体： Ｒ１の両方のパラトープにそれぞれＳを介してＲ２が結
合している； Ｒ工の両方のパラトープに測定すべき物質が結合してい
る； Ｒ１の両方のパラトープにＳを介してＲ３が結合してい
る； 並びに混合複合体、即ち Ｒｏの一方のパラトープに測定すべき物質が及び他方の
パラトープにＳχ介してＲ３又ハＲ２が結合している； Ｒ工の一方のパラトープにＳ部分してＲ３が及び他方の
パラトープにＳχ介してＲ２が結合しているものが生成
する。
に、特異的に結合するペアの、Ｐｌに対して相補性のＲ
２が多数壁に結合している反応容器中に、物質Ｓと、特
異的に結合するペアのパートナ−Ｐｌとからの接合体で
あるレセプターＲ２ヲ加える。Ｃの接合体はパートナ−
Ｐ１χ介してパートナーＰ２に結合する。引続いて、測
定すべき物質のエピトープに対して少なくとも２個の結
合部位？有するレセプターＲ１及び、物質Ｓと標識とか
らの接合体であるレセプターＲ３ヲ反応容器中に加える
。溶液中でＲ２のＳ部分、Ｒ３のＳ部分及び測定すべき
物質がレセプターＲ１への結合部めぐって競合する。例
えば、Ｒ１が２価の抗体である場合、次の複合体： Ｒ１の両方のパラトープにそれぞれＳを介してＲ２が結
合している； Ｒ工の両方のパラトープに測定すべき物質が結合してい
る； Ｒ１の両方のパラトープにＳを介してＲ３が結合してい
る； 並びに混合複合体、即ち Ｒｏの一方のパラトープに測定すべき物質が及び他方の
パラトープにＳχ介してＲ３又ハＲ２が結合している； Ｒ工の一方のパラトープにＳ部分してＲ３が及び他方の
パラトープにＳχ介してＲ２が結合しているものが生成
する。
Ｂ２に結合している複合体だけが固定化され、かつレセ
プターＲ３が結合している複合体だけが結合標識の測定
χ介して評価することができる。溶液中に含１れている
測定物質の量が多い程、Ｒ１に結合するＲ２及びＲ３の
量は少なくなり、従って固定化される複合体の量は少な
くなりもしくは標識χ■する複合体の量は少なくなる。
プターＲ３が結合している複合体だけが結合標識の測定
χ介して評価することができる。溶液中に含１れている
測定物質の量が多い程、Ｒ１に結合するＲ２及びＲ３の
量は少なくなり、従って固定化される複合体の量は少な
くなりもしくは標識χ■する複合体の量は少なくなる。
それ故、結合し定標識の割合が測定すべき物質の間接的
尺度でありかつ検量曲線部分して評価することができる
。
尺度でありかつ検量曲線部分して評価することができる
。
実施法ｂ）は、試料溶液中に極く僅少濃度で存在する物
質の検出に有用である。この場合、第１工程では、特異
的に結合するベアのパートナ−Ｂ２に結合しているマト
リクス乞測定すべき物質とレセプターＲ１とを恒温保持
する。その際に、試料溶液中に存在する測定すべき物質
はレセプターＲ１と結合する。固相への結合は行なわれ
ない。第２工程で、レセプターＲ２及びＲ３を添加する
。添加したレセプターは、既に測定すべき物質が一部結
合しているレセプタＲ□への結合をめぐって競合する。
質の検出に有用である。この場合、第１工程では、特異
的に結合するベアのパートナ−Ｂ２に結合しているマト
リクス乞測定すべき物質とレセプターＲ１とを恒温保持
する。その際に、試料溶液中に存在する測定すべき物質
はレセプターＲ１と結合する。固相への結合は行なわれ
ない。第２工程で、レセプターＲ２及びＲ３を添加する
。添加したレセプターは、既に測定すべき物質が一部結
合しているレセプタＲ□への結合をめぐって競合する。
測定すべき物質の結合している量が多ければ多いほど、
レセプターＲ２及びＲ３の結合し得る量は少なくなる。
レセプターＲ２及びＲ３の結合し得る量は少なくなる。
更に、レセプターＲ２は、マトリクスのパートナーＰ２
と結合し得るパートナ−Ｐ１Ｙ含有するので、生成する
複合体の固定化がもたらされる。この場合にも結合相部
液相から分離し几後で、検量曲線部分して標搬乞評価す
る。
と結合し得るパートナ−Ｐ１Ｙ含有するので、生成する
複合体の固定化がもたらされる。この場合にも結合相部
液相から分離し几後で、検量曲線部分して標搬乞評価す
る。
別法Ｃ）は、固相ン形成するマトリクス及び標識接合体
はすべての測定に関して同じであってよい実施形である
。この場合も１を第１工程でに特異的に結合するベアの
パートナ−Ｐｌａ’担持するマトリクス乞測定すべき物
質及びレセタ ブ、ｊ’ Ｒ１と恒温保持し、そのときに測定すべき
物質がレセプターＲ１に結合し得る。第２工穆では、測
定すべき物質とパートナーＰ１とからの接合体Ｒ２と、
パートナ−Ｂ２と標識とからの接合体Ｒ３′ とを同時
に加える。測定すべき物質とパートナ−Ｐｌとからの接
合体Ｒ２と試料溶液からの測定すべき物質がレセプター
Ｒ１への結合χめぐって競合する。更に、マｌ−ＩＪク
スに結合し几パートナ−Ｐ２並びにパートナ−Ｂ２と標
識とからの接合体Ｒ３’ ｆｉスパーナ−Ｐｌへの結合
部めぐって競合する。この場合も、結合し几標識され之
複合体の評価馨検量曲線部分して行なう。
はすべての測定に関して同じであってよい実施形である
。この場合も１を第１工程でに特異的に結合するベアの
パートナ−Ｐｌａ’担持するマトリクス乞測定すべき物
質及びレセタ ブ、ｊ’ Ｒ１と恒温保持し、そのときに測定すべき
物質がレセプターＲ１に結合し得る。第２工穆では、測
定すべき物質とパートナーＰ１とからの接合体Ｒ２と、
パートナ−Ｂ２と標識とからの接合体Ｒ３′ とを同時
に加える。測定すべき物質とパートナ−Ｐｌとからの接
合体Ｒ２と試料溶液からの測定すべき物質がレセプター
Ｒ１への結合χめぐって競合する。更に、マｌ−ＩＪク
スに結合し几パートナ−Ｐ２並びにパートナ−Ｂ２と標
識とからの接合体Ｒ３’ ｆｉスパーナ−Ｐｌへの結合
部めぐって競合する。この場合も、結合し几標識され之
複合体の評価馨検量曲線部分して行なう。
この別法では、Ｒ１、つ１り特に抗体の濃度及びＲ２の
濃度は試験における試料濃度と一致する。その際に、パ
ートナーＰ２と標識とからの接合体部、測定すべき物質
とパートナ−Ｐｌとからの接合体Ｒ２のほぼ半分以下ケ
結合する量で使用すると有利であり、それにより接合体
Ｒ２が、過剰量で存在すべき、マトリクスに結合し九パ
ートナ−Ｐ２への結合に関して十分に存在する。Ｐ１Ｙ
含有する接合体Ｒ２の債は、測定すべき物質の量で、つ
１ｖ約１０−５モル／ｌ（例えばテオフィリン）〜１０
−１０モル／ｌ（例えばジゴキ／ン）で使用すると有利
である。
濃度は試験における試料濃度と一致する。その際に、パ
ートナーＰ２と標識とからの接合体部、測定すべき物質
とパートナ−Ｐｌとからの接合体Ｒ２のほぼ半分以下ケ
結合する量で使用すると有利であり、それにより接合体
Ｒ２が、過剰量で存在すべき、マトリクスに結合し九パ
ートナ−Ｐ２への結合に関して十分に存在する。Ｐ１Ｙ
含有する接合体Ｒ２の債は、測定すべき物質の量で、つ
１ｖ約１０−５モル／ｌ（例えばテオフィリン）〜１０
−１０モル／ｌ（例えばジゴキ／ン）で使用すると有利
である。
別法Ｃ）ではＲ２はＢ２（マ） ＩＪクス又は接合体に
おける）に対する結合部位だけ乞有していればよく、こ
れにより妨害的な架橋を回避する。
おける）に対する結合部位だけ乞有していればよく、こ
れにより妨害的な架橋を回避する。
Ｃのことは方法ａ）及びｂ）には該当しない。
この実施形は、一方で唯１種の接合体−８とＰｌとから
の接合体−だげン供給する必要がありかつ他方では免疫
反応が均一に進行するという大きな利点を有し、これに
より感度及び再現性は明らかに高する。
の接合体−だげン供給する必要がありかつ他方では免疫
反応が均一に進行するという大きな利点を有し、これに
より感度及び再現性は明らかに高する。
従って、本発明によジ定義し定方法原理には多数の種々
の実施形がある。それぞれ、少なくとも６種のレセプタ
ーが必要である。
の実施形がある。それぞれ、少なくとも６種のレセプタ
ーが必要である。
測定子ぺさ物質は特異的結合能χ有する物質であってよ
く、かつ待に前記のようなハブテンであってよい。
く、かつ待に前記のようなハブテンであってよい。
第ルセプターＲ１としては、測定すべき物質の工ざトー
プと特異的に結合する結合部位少なくとも２個を有する
レセプター奢使用する。
プと特異的に結合する結合部位少なくとも２個を有する
レセプター奢使用する。
このレセプターはその都度測定すべき物質に応じて選択
する。モノクロナール又はポリクロナール抗体もしくは
それらのＦａｂ２−フラグメント乞使用すると優れてい
る。
する。モノクロナール又はポリクロナール抗体もしくは
それらのＦａｂ２−フラグメント乞使用すると優れてい
る。
レセプターＲ２は特異的結合性ペアの一方のパートナ−
Ｐｌと、測定すべき物質に相当するか又はその誘導体で
ありかつ測定子ぺさ物質のエピトープ少なくとも１個を
有する物質Ｓとからの接合体である。特異的に相互に結
合するペアは公知である。好適な結合ペア（Ｐｌ−Ｒ２
）ハ、特にビオチン−ストレプトアビジンもしくはアビ
ジン；ハブテン−抗体；抗原−抗体；コンカナバリン−
抗体；塘−レクチン；ハプテン−結合蛋白質、例えばチ
ロキシン結合グロブリン及ヒテロキ７ン又はオリゴペプ
チド−抗体である。
Ｐｌと、測定すべき物質に相当するか又はその誘導体で
ありかつ測定子ぺさ物質のエピトープ少なくとも１個を
有する物質Ｓとからの接合体である。特異的に相互に結
合するペアは公知である。好適な結合ペア（Ｐｌ−Ｒ２
）ハ、特にビオチン−ストレプトアビジンもしくはアビ
ジン；ハブテン−抗体；抗原−抗体；コンカナバリン−
抗体；塘−レクチン；ハプテン−結合蛋白質、例えばチ
ロキシン結合グロブリン及ヒテロキ７ン又はオリゴペプ
チド−抗体である。
結合するペアとしてはビオチンとストレプトアビジンも
しくはアビジン馨使用すると特に優れており、それ酸レ
セプターＲ２はパートナ−Ｐｌとしてビオチン乞含有す
ると特に優れている。
しくはアビジン馨使用すると特に優れており、それ酸レ
セプターＲ２はパートナ−Ｐｌとしてビオチン乞含有す
ると特に優れている。
レセプターＲ２の部分Ｓはもとの１１の測定すべき物質
に相応すると優れている。それは測定すべき物質の誘導
体もしくは例えば蛋白質エピトープのような測定すべき
物質の一部乞使用してもよい。重要なことは、部分Ｓが
レセプターＲ１と結合性であることであり、その際にＳ
と測定すべき物質とが同じ結合強さでＲ１に結合してい
る必要は必ずしもない。
に相応すると優れている。それは測定すべき物質の誘導
体もしくは例えば蛋白質エピトープのような測定すべき
物質の一部乞使用してもよい。重要なことは、部分Ｓが
レセプターＲ１と結合性であることであり、その際にＳ
と測定すべき物質とが同じ結合強さでＲ１に結合してい
る必要は必ずしもない。
接合体の製造は公知方法で行なうし例えば” Ｅｕｒ、
Ｊ、 Ｂｉｏ−ｃｈｅｍ、 、 １３ ｉ巻、３
３３−６６８頁（１９８０年）と同じように〕。
Ｊ、 Ｂｉｏ−ｃｈｅｍ、 、 １３ ｉ巻、３
３３−６６８頁（１９８０年）と同じように〕。
レセプターＲ２は固相への結合部仲介する。
Ｒ２は別法においてはＰ１χ介して直接又はスペーサン
介して固相に結合していてもよい。他の別法では固相へ
の結合χ免疫反応の間に、固相に固定化されている特異
的に結合するペアのパートナーＰ２へＰ１ン結合させる
ことにより行なう。
介して固相に結合していてもよい。他の別法では固相へ
の結合χ免疫反応の間に、固相に固定化されている特異
的に結合するペアのパートナーＰ２へＰ１ン結合させる
ことにより行なう。
本方法の他の優れた実施形では、ＳとＰｌとからの接合
体であるレセプターＲ２を使用する。
体であるレセプターＲ２を使用する。
固相として、マトリクス乞使用し、この場合にも特異的
結合性ペアの多数のＰｌが固定化されている。免疫反応
に必要な成分の恒温保持後、Ｐｌに対する結合部位少な
くとも２個を有するパートナ−Ｐ２乞添加する。このよ
うにしてレセプターＲ２の固定化部付なう。
結合性ペアの多数のＰｌが固定化されている。免疫反応
に必要な成分の恒温保持後、Ｐｌに対する結合部位少な
くとも２個を有するパートナ−Ｐ２乞添加する。このよ
うにしてレセプターＲ２の固定化部付なう。
固相としては、ポリスチレン及び類縁のプラスチック裂
の試験管又は、微量滴定板が特に好適であり、その内面
はＰｌもしくはＲ２で吸着被覆されている。更に、粒状
物質、例えば分子篩材料、バール状ガラス、プラスチッ
クチューブ等も好適である。固相としては紙のような多
孔性層状担体も好適である。固相が例えばヨーロッパ公
開特許第０２４０７７０号明細書、米国特許第４１４１
６８７号明細書及び同第４１９７３３７号明細書に記載
されているように、磁気粒子から成る実施形も優れてい
る。殊に、磁気粒子は二酸化クロム又は酸化鉄から成る
。粒子へのパートナ−Ｒ２の結合は、例えばヨーロッパ
公開特許第０２４０７７０号明細書に記載されているよ
うに行なうことができる。
の試験管又は、微量滴定板が特に好適であり、その内面
はＰｌもしくはＲ２で吸着被覆されている。更に、粒状
物質、例えば分子篩材料、バール状ガラス、プラスチッ
クチューブ等も好適である。固相としては紙のような多
孔性層状担体も好適である。固相が例えばヨーロッパ公
開特許第０２４０７７０号明細書、米国特許第４１４１
６８７号明細書及び同第４１９７３３７号明細書に記載
されているように、磁気粒子から成る実施形も優れてい
る。殊に、磁気粒子は二酸化クロム又は酸化鉄から成る
。粒子へのパートナ−Ｒ２の結合は、例えばヨーロッパ
公開特許第０２４０７７０号明細書に記載されているよ
うに行なうことができる。
レセプターＲ３は、少な、くとも物質Ｓと標識とχ含有
する複合体である。その際に、標識としては酵素、けい
光−化学ルミネッセンス−又は放射性物質乞使用する。
する複合体である。その際に、標識としては酵素、けい
光−化学ルミネッセンス−又は放射性物質乞使用する。
標識法は例えば”’ Ｃ１１ｎ、 Ｃｈｉｍ、 Ａｃｔ
ａ 、 ８１巻、１〜４０頁（１９７７年）から当
業者に公知であり、これ以上の説明は必要ではない。標
識は公知方法で測定することができる。
ａ 、 ８１巻、１〜４０頁（１９７７年）から当
業者に公知であり、これ以上の説明は必要ではない。標
識は公知方法で測定することができる。
レセプターＲ３は、免疫反応の際に、物質Ｓと特異的結
合性ペアのパートナ−Ｐｌとχ含有する接合体及び特異
的結合性ペアのパートナＰ２と標識とからの接合体から
初めて形成することもできる。
合性ペアのパートナ−Ｐｌとχ含有する接合体及び特異
的結合性ペアのパートナＰ２と標識とからの接合体から
初めて形成することもできる。
本方法は１工惺又は数工程で実施することができる。評
価は公知方法で行なう。それぞれのレセプター及び測定
すべき物質はその都度それらにとって特定の反応成分と
だけ特異的に反応するので、丁ぺてのレセプター及び試
料ビー緒に恒温保持しかつ本方法を１工程で実施するこ
とができる。これは、本方法χ自動分析器中で実施する
ときに特に有利である。
価は公知方法で行なう。それぞれのレセプター及び測定
すべき物質はその都度それらにとって特定の反応成分と
だけ特異的に反応するので、丁ぺてのレセプター及び試
料ビー緒に恒温保持しかつ本方法を１工程で実施するこ
とができる。これは、本方法χ自動分析器中で実施する
ときに特に有利である。
非常に低濃度の物質又は非常に高濃度の物質の検出には
多工程法が優れている。
多工程法が優れている。
丁ぺての方法を緩衝層液中で実施すると有利である。本
方法用の緩衝剤系は公知である。このための特に好適な
のはグツド（Ｇｏｏｄ ）の緩衝剤及びリン酸塩緩衝剤
である。
方法用の緩衝剤系は公知である。このための特に好適な
のはグツド（Ｇｏｏｄ ）の緩衝剤及びリン酸塩緩衝剤
である。
本発明により、簡単かつ迅速に実施することができかつ
ポリクロナール抗体ケ使用する場合にも非常に敏、感で
ある方法が得られる。
ポリクロナール抗体ケ使用する場合にも非常に敏、感で
ある方法が得られる。
本発明の他の目的は、特異的結合性物質馨測定するため
の試薬であり、これは測定丁べき物質に対して特異的な
結合部位少なくとも２個を有するレセプターＲＩＮ特異
的に結合するペアの・９−トナーＰ１と、測定すべき物
質に相当するか又はその誘導体でありかつ測定すべき物
質のエピトープ少なくとも１個を有する物質Ｓとからの
接合体であるレセプターＲ２及び少なくとも１個の・ξ
−トナーＰ１と物質Ｓとを含有する複合体であるレセプ
ターＲ，／及びこれから物理的に相互に分けられた固相
を含有することを特徴とする。
の試薬であり、これは測定丁べき物質に対して特異的な
結合部位少なくとも２個を有するレセプターＲＩＮ特異
的に結合するペアの・９−トナーＰ１と、測定すべき物
質に相当するか又はその誘導体でありかつ測定すべき物
質のエピトープ少なくとも１個を有する物質Ｓとからの
接合体であるレセプターＲ２及び少なくとも１個の・ξ
−トナーＰ１と物質Ｓとを含有する複合体であるレセプ
ターＲ，／及びこれから物理的に相互に分けられた固相
を含有することを特徴とする。
他の実施形では、本発明による試薬は、特異的に結合す
るペアのパートナ−Ｒ２が多数結合している固相並びに
物理的にそれとは別個にレセプターＲ、Ｒ及びＲ又はＲ
５／を含有する。
るペアのパートナ−Ｒ２が多数結合している固相並びに
物理的にそれとは別個にレセプターＲ、Ｒ及びＲ又はＲ
５／を含有する。
他の実施形では、本発明による試薬は、・ξ−トナーＰ
Ｌが結合している固相及び物理的にそＲ，／を含有する
。
Ｌが結合している固相及び物理的にそＲ，／を含有する
。
他の優れた実施形では、試薬は、第１の層中に固相をツ
ートナーＰ２及びレセプターＲ３と共に、かつこの第１
の層から物理的に分けられたレセプターＲ及びＲ３を含
有する多層試薬担体を有する。
ートナーＰ２及びレセプターＲ３と共に、かつこの第１
の層から物理的に分けられたレセプターＲ及びＲ３を含
有する多層試薬担体を有する。
この試薬ハ体液及び組織エキス中の多数のパラメータの
測定に好適である。
測定に好適である。
優れた実施形では試薬は付加的に緩衝物質χ含有する。
リン酸塩緩衝剤又はグツド緩衝剤χ含有すると特に優れ
ている。
ている。
本発明を添付図面及び実施例により詳説する。
第１図は本発明方法の種々の優れ之実施形の反応原理乞
示す図である。図示され九丁べての方法においてレセプ
ターＲ１は抗体である。
示す図である。図示され九丁べての方法においてレセプ
ターＲ１は抗体である。
第１ａ図は、初めに、特異的に結合するペアのパートナ
ーＰ２が結合している固相部特異的に結合するペアのパ
ートナ−ｐ ｉ 乞ｉするレセプターＲ２と恒温保持し
、七の際にＰｌを介してレセプターＲ２が結合した固相
が生成する。
ーＰ２が結合している固相部特異的に結合するペアのパ
ートナ−ｐ ｉ 乞ｉするレセプターＲ２と恒温保持し
、七の際にＰｌを介してレセプターＲ２が結合した固相
が生成する。
第２工弓でＣの固相とレセプターＲ１及びＲ３＠２びに
試料溶液と馨恒湛保持する実施形馨示す。
試料溶液と馨恒湛保持する実施形馨示す。
第１ｂ図は、第１工程でパートナ−Ｒ２が結合している
固相馨レセプターＲよ及び試料溶液と恒温保持し、第２
工程でレセプターＲ２及びＲ３Ｙ加える実施形ン示す。
固相馨レセプターＲよ及び試料溶液と恒温保持し、第２
工程でレセプターＲ２及びＲ３Ｙ加える実施形ン示す。
第１ｃ図は、それぞれ測定すべき物質とは関係すく、パ
ートナーＰ２が結合している固相及び、標識とパートナ
−Ｒ２との接合体を使用し、固相及び標識接合体部レセ
プターＲよ、Ｒ２、Ｒ３′及び試料と恒温保持する実施
形を示す。
ートナーＰ２が結合している固相及び、標識とパートナ
−Ｒ２との接合体を使用し、固相及び標識接合体部レセ
プターＲよ、Ｒ２、Ｒ３′及び試料と恒温保持する実施
形を示す。
実施例
例１
Ｔ４の測定（反応図式第１ａ図により）緩衝液Ａ：
バルピッレー） １２０ｍｍｏｌ ／１リン
酸塩緩衝液、ｐＨ８，６ １８，２＝ｐｍｏｌ ／ ｌ！ ８−アニリノ−１−ナフタリンスル ホン酸 １．２７ ｍｍｏｌ ／ １！
牛血清アルブミン ０．２ ］（滑チ緩衝Ｑ
Ａ９８０μｌ及びＴ４とビオチンとの接合体（例４によ
り製造、最終濃度１もしくはＩ Ｑ ｍｍｏｌ ／ ｍ
ｅ ）の溶液２０μｅケ、ストレプトアビジンで覆った
ポリスチレン容器（ヨーロッパ公開特許第０２６９０９
２号明細書により製造）中に装入し、かつ６０分間２５
℃で恒温保持する。引続いて洗浄し、かつ試料（Ｔ４が
蓄積し九ヒト血清）５０μｌ、緩衝液Ａ９８０μ１１Ｔ
４に対するポリクロナール抗体０．１ｍ９／Ｉｆｆｔの
＠１２０μｌ及ＵＴ４−ペルオキシダーゼ−接合体（５
０ｍＵ／試験） ２．５ Ｕ ７ｍ１ｙ（加え、３０分
間２５°Ｃで恒温保持し、洗浄しかつ９．１ｍｍｏｌ
／ ｌのＡＢＴＳ’ ［２、２’−アジノージ−（３−
エチル−ベンゾテアゾリン−スルホン酸−（６）−ジア
ンモニウム塩〕のｍ 夜１ ａｔ乞添加する。３０分間
２５℃で更に恒温保持した後で、Ｔ４含量の尺度として
４”２２ｎｍの光学密度χ測定する。その結果は第２図
から明らかである。図中、曲縁１はＴ４−ビオチン１Ｑ
ｎｍｏｌ ／１ 、 曲１ｆＲ２’ＣＴ４−ビオチア
１ｎｍｏｌ ／ ｌである（試験中の最終濃度） 例２ Ｔ４の測定（反応式図第１ｂ図により）試料（Ｔ４が蓄
積したヒト血清）５０μｌ’ｌ緩衝ｌＡ４８０μｌ及び
Ｔ４に対するポリクロナル抗体（０，１ｍ９７ｍ１ ）
の溶液２０ ｐｌと２５°Ｃで３０分間ストレプトアビ
ジンで覆つにポリスチレン容器中で恒温保持する。引続
いて、緩衝液Ａ４８０μｌ、Ｔ、−ビオチン−接合体（
５ｘｉ Ｑ ” ｍｏｂ ／ ｌ、試験中の最終濃度１
ｎｍｏｌ ／ｌに相当）の浴液２０μｌ及びＴ４−
ＰＯＤ−接合体（２，５Ｕ ７ｆｎｔ、５ Ｑ ｍＵ
／試験）ン加えかつ２５℃で６０分間恒温保持する。洗
浄し、かつ引続いてＡＢＴ Ｓ■−溶液（９，１ｍｍｏ
ｌ ／ １３ ） Ｉ Ｍｌ乞添加しかつ２５°Ｃでろ
０分間恒温保持し、４２２ ｎｍで光学密度ＹＴ４含量
の尺度として測定する。結果は第３図から明らかである
。
酸塩緩衝液、ｐＨ８，６ １８，２＝ｐｍｏｌ ／ ｌ！ ８−アニリノ−１−ナフタリンスル ホン酸 １．２７ ｍｍｏｌ ／ １！
牛血清アルブミン ０．２ ］（滑チ緩衝Ｑ
Ａ９８０μｌ及びＴ４とビオチンとの接合体（例４によ
り製造、最終濃度１もしくはＩ Ｑ ｍｍｏｌ ／ ｍ
ｅ ）の溶液２０μｅケ、ストレプトアビジンで覆った
ポリスチレン容器（ヨーロッパ公開特許第０２６９０９
２号明細書により製造）中に装入し、かつ６０分間２５
℃で恒温保持する。引続いて洗浄し、かつ試料（Ｔ４が
蓄積し九ヒト血清）５０μｌ、緩衝液Ａ９８０μ１１Ｔ
４に対するポリクロナール抗体０．１ｍ９／Ｉｆｆｔの
＠１２０μｌ及ＵＴ４−ペルオキシダーゼ−接合体（５
０ｍＵ／試験） ２．５ Ｕ ７ｍ１ｙ（加え、３０分
間２５°Ｃで恒温保持し、洗浄しかつ９．１ｍｍｏｌ
／ ｌのＡＢＴＳ’ ［２、２’−アジノージ−（３−
エチル−ベンゾテアゾリン−スルホン酸−（６）−ジア
ンモニウム塩〕のｍ 夜１ ａｔ乞添加する。３０分間
２５℃で更に恒温保持した後で、Ｔ４含量の尺度として
４”２２ｎｍの光学密度χ測定する。その結果は第２図
から明らかである。図中、曲縁１はＴ４−ビオチン１Ｑ
ｎｍｏｌ ／１ 、 曲１ｆＲ２’ＣＴ４−ビオチア
１ｎｍｏｌ ／ ｌである（試験中の最終濃度） 例２ Ｔ４の測定（反応式図第１ｂ図により）試料（Ｔ４が蓄
積したヒト血清）５０μｌ’ｌ緩衝ｌＡ４８０μｌ及び
Ｔ４に対するポリクロナル抗体（０，１ｍ９７ｍ１ ）
の溶液２０ ｐｌと２５°Ｃで３０分間ストレプトアビ
ジンで覆つにポリスチレン容器中で恒温保持する。引続
いて、緩衝液Ａ４８０μｌ、Ｔ、−ビオチン−接合体（
５ｘｉ Ｑ ” ｍｏｂ ／ ｌ、試験中の最終濃度１
ｎｍｏｌ ／ｌに相当）の浴液２０μｌ及びＴ４−
ＰＯＤ−接合体（２，５Ｕ ７ｆｎｔ、５ Ｑ ｍＵ
／試験）ン加えかつ２５℃で６０分間恒温保持する。洗
浄し、かつ引続いてＡＢＴ Ｓ■−溶液（９，１ｍｍｏ
ｌ ／ １３ ） Ｉ Ｍｌ乞添加しかつ２５°Ｃでろ
０分間恒温保持し、４２２ ｎｍで光学密度ＹＴ４含量
の尺度として測定する。結果は第３図から明らかである
。
例６
Ｔ４の測定（反厄式図第１Ｃ図により）試料（Ｔ４が蓄
積したヒト血清）５０μｌを緩衝液Ａ４８０μ！及びＴ
４に対するポリクロナール抗体（０，１ｍ９／Ｋｌ ）
の溶液２０μ／Ｙ２５°Ｃで３０分間ストレプトアビジ
ンで覆つ几ポリスチレン容器中で恒温保持する。引続い
て、緩衝！４８０μＥ及びＴ４−ビオチンからの接合体
（５Ｘ１［］−７モル／ｌ、試験中の最終濃度１０ｎｍ
ｏｌ ／ ｌに相当）の芯液２０μｊ及びストレプトア
ビジン−ＰＯＤ−接合体２．５０／罰（５０ｍＵ／試験
）馨添加しかつ２５°Ｃで６０分間恒温保持する。洗浄
しかつＡＢＴ Ｓ■浴溶液９．１ｍｍｏｌ ／ ＩＪ
） １ ’１６ ｋ加え、２５°Ｃで３０分間恒温保持
し、かつ元学密度乞４２２ ｎｍでＴ４含肴の尺度とし
て測定する。結果は第４図から明らかである。
積したヒト血清）５０μｌを緩衝液Ａ４８０μ！及びＴ
４に対するポリクロナール抗体（０，１ｍ９／Ｋｌ ）
の溶液２０μ／Ｙ２５°Ｃで３０分間ストレプトアビジ
ンで覆つ几ポリスチレン容器中で恒温保持する。引続い
て、緩衝！４８０μＥ及びＴ４−ビオチンからの接合体
（５Ｘ１［］−７モル／ｌ、試験中の最終濃度１０ｎｍ
ｏｌ ／ ｌに相当）の芯液２０μｊ及びストレプトア
ビジン−ＰＯＤ−接合体２．５０／罰（５０ｍＵ／試験
）馨添加しかつ２５°Ｃで６０分間恒温保持する。洗浄
しかつＡＢＴ Ｓ■浴溶液９．１ｍｍｏｌ ／ ＩＪ
） １ ’１６ ｋ加え、２５°Ｃで３０分間恒温保持
し、かつ元学密度乞４２２ ｎｍでＴ４含肴の尺度とし
て測定する。結果は第４図から明らかである。
例４
Ｔ４−ビオチン−接合体の製造：
” Ｅｕｒ、 Ｊ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １３１巻
、３６′５〜６３８頁（１９８０年）に記載きれている
ように、Ｈ−ｔ−ブナルオキシ力ルポニルーテトラヨー
ドテロ二ノ乞ベンタメテレンジアミンン介してビオチン
と結合させる。
、３６′５〜６３８頁（１９８０年）に記載きれている
ように、Ｈ−ｔ−ブナルオキシ力ルポニルーテトラヨー
ドテロ二ノ乞ベンタメテレンジアミンン介してビオチン
と結合させる。
第１ａ図は本発明方法の１つの優れｆｃ実施形の反応原
理χ示す図、第１ｂ図は本発明方法の他の優れた実施形
の反応原理乞示す図、第１ｃ図は本発明方法の他の優れ
た実施形の反応原理乞示す図、第２図は第１ａ図の反応
式によりＴ４− ＰＯＤ−接合体を使用してＴ４測定す
るｔめの検量向＃Ｉを示す図、第６図は第１ｂ図の反応
式により Ｔ、 −ＰＯＤ−接合体を使用してｌｒ４測
定するための検量曲綴ケ示す図、第４図は第１Ｃ図の反
応式によ！７Ｔ４−ビオチンー接合体及びストレプトア
ビジン−ＰＯＤ−接合体部使用してＴ４測定するための
検量曲線馨示す図である。 第１ ０図 第１ ｂス 第１Ｃ図 吸光度［ｍＥｌ 入：ム２２ｎｍ Ｆｉｇ 、 ３ Ｔ、［μｇ／ｄＬ］ 吸光度１ｍＥ］ 入： ４２２ ｎｍ 吸光度［ｍＥｌ χ；ζ２２ ｎｍ Ｆｉｇ、２ ｒ４ ［μｇ／ｄｌｌ Ｆｉｇ、４ Ｔζ［μｇ／、、Ｌｌ］
理χ示す図、第１ｂ図は本発明方法の他の優れた実施形
の反応原理乞示す図、第１ｃ図は本発明方法の他の優れ
た実施形の反応原理乞示す図、第２図は第１ａ図の反応
式によりＴ４− ＰＯＤ−接合体を使用してＴ４測定す
るｔめの検量向＃Ｉを示す図、第６図は第１ｂ図の反応
式により Ｔ、 −ＰＯＤ−接合体を使用してｌｒ４測
定するための検量曲綴ケ示す図、第４図は第１Ｃ図の反
応式によ！７Ｔ４−ビオチンー接合体及びストレプトア
ビジン−ＰＯＤ−接合体部使用してＴ４測定するための
検量曲線馨示す図である。 第１ ０図 第１ ｂス 第１Ｃ図 吸光度［ｍＥｌ 入：ム２２ｎｍ Ｆｉｇ 、 ３ Ｔ、［μｇ／ｄＬ］ 吸光度１ｍＥ］ 入： ４２２ ｎｍ 吸光度［ｍＥｌ χ；ζ２２ ｎｍ Ｆｉｇ、２ ｒ４ ［μｇ／ｄｌｌ Ｆｉｇ、４ Ｔζ［μｇ／、、Ｌｌ］
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、試料溶液を、Ｒ＿１がＲ＿２及びＲ＿３並びに測定
すべき物質と特異的に結合性であり、Ｒ＿２が固相への
結合を仲介し、かつＲ＿３が標識を担持する少なくとも
３種のレセプターＲ＿１、Ｒ＿２及びＲ＿３と恒温保持
し、結合した標識と結合していない標識を分離し、かつ
両方の相の一方における標識を測定することにより、特
異的結合性物質を測定する方法において、レセプターＲ
＿１として、測定すべき物質のエピトープと特異的に結
合する結合部位少なくとも２個を有するレセプターを使
用し、Ｒ＿２として、特異的に結合するペアのパートナ
ーＰ１と、測定すべき物質に相当するか又はその誘導体
でありかつ測定すべき物質のエピトープ少なくとも１個
を有する物質Ｓとからの接合体を使用し、その際にパー
トナーＰ１は固相に結合しているか又は固定化されてお
り、かつＲ＿３として、少なくとも物質Ｓと標識を含有
する複合体を使用することを特徴とする、特異的結合性
物質の測定法。 ２、測定すべき物質に対して特異的な結合部位少なくと
も２個を有するレセプターＲ＿１、特異的に結合するペ
アのパートナーＰ１と、測定すべき物質に相当するか又
はその誘導体でありかつ測定すべき物質のエピトープ少
なくとも１個を有する物質Ｓとからの接合体であるレセ
プターＲ＿２及び少なくとも１個の標識と物質Ｓとを含
有する複合体であるレセプターＲ＿３及びこれから物理
的に分けられ、それにＰ２が固定化されている固相を含
有することを特徴とする、特異的結合性物質を測定する
ための試薬。 ３、測定すべき物質に対して特異的な結合部位少なくと
も２個を有するレセプターＲ＿１、特異的に結合するペ
アのパートナーＰ１と、測定すべき物質に相当するか又
はその誘導体でありかつ測定すべき物質のエピトープ少
なくとも１個を有する物質Ｓとからの接合体であるレセ
プターＲ＿２及び少なくとも１個の標識とパートナーＰ
２とを含有する複合体であるレセプターＲ＿３及びこれ
から物理的に分けられ、それにＰ２が固定化されている
固相を含有することを特徴とする、特異的結合性物質を
測定するための試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3834766A DE3834766A1 (de) | 1988-10-12 | 1988-10-12 | Verfahren zur bestimmung einer spezifisch bindefaehigen substanz |
| DE3834766.0 | 1988-10-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02156155A true JPH02156155A (ja) | 1990-06-15 |
| JPH0814579B2 JPH0814579B2 (ja) | 1996-02-14 |
Family
ID=6364963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1264061A Expired - Lifetime JPH0814579B2 (ja) | 1988-10-12 | 1989-10-12 | 特異的結合性物質の測定法及び試薬 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5126241A (ja) |
| EP (1) | EP0363942B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0814579B2 (ja) |
| KR (1) | KR920005963B1 (ja) |
| AT (1) | ATE101723T1 (ja) |
| AU (1) | AU612907B2 (ja) |
| CA (1) | CA2000545C (ja) |
| DE (2) | DE3834766A1 (ja) |
| ES (1) | ES2050200T3 (ja) |
| ZA (1) | ZA897689B (ja) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3836348A1 (de) * | 1988-10-25 | 1990-04-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur bestimmung von fuer ein antigen klassenspezifischen antikoerpern und dazu geeignetes reagenz |
| DE4006054A1 (de) * | 1990-02-26 | 1991-08-29 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur immunologischen bestimmung von liganden |
| US5437981A (en) * | 1990-02-26 | 1995-08-01 | Boehringer Mannheim Gmbh | Method for the immunological determination of ligands |
| US5792606A (en) * | 1990-02-26 | 1998-08-11 | Boehringer Mannheim Gmbh | Nucleic acid hybridization based assay for determining a substance of interest |
| US5556748A (en) * | 1991-07-30 | 1996-09-17 | Xenopore Corporation | Methods of sandwich hybridization for the quantitative analysis of oligonucleotides |
| DE4218257A1 (de) * | 1992-06-03 | 1993-12-09 | Behringwerke Ag | Verfahren zur immunchemischen Bestimmung eines Analyten |
| DE4328070C1 (de) * | 1993-08-20 | 1994-11-24 | Henning Berlin Gmbh | Verfahren zur Bestimmung eines Analyten in einem Volumen einer flüssigen Probe sowie seine Anwendung zur Bestimmung von anti-TSH-Rezeptor-Autoantikörpern in einem Patientenserum |
| US6991907B1 (en) | 1995-04-18 | 2006-01-31 | Biosite, Inc. | Methods for the assay of troponin I and T and complexes of troponin I and T and selection of antibodies for use in immunoassays |
| US6627404B1 (en) | 1995-04-18 | 2003-09-30 | Biosite, Inc. | Methods for improving the recovery of troponin I and T in membranes, filters and vessels |
| AU6720096A (en) | 1995-08-09 | 1997-03-05 | Quidel Corporation | Test strip and method for one step lateral flow assay |
| US5691152A (en) * | 1995-11-09 | 1997-11-25 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Stable avidin composition |
| DE19548375A1 (de) * | 1995-12-27 | 1997-07-03 | Behringwerke Ag | Immunologische Bestimmungsmethode |
| DE19548028A1 (de) * | 1995-12-21 | 1997-06-26 | Bayer Ag | Verfahren zur Herstellung eines synthetischen Kalibrators für den Einsatz in Sandwich-Immunoassays, bestehend aus einem Antikörper gegen einen der im Assay benutzten Antikörper und einer Sequenz des Analyten |
| US5798273A (en) * | 1996-09-25 | 1998-08-25 | Becton Dickinson And Company | Direct read lateral flow assay for small analytes |
| DE19808226C1 (de) * | 1998-02-27 | 2000-03-02 | Bruker Analytik Gmbh | Anordnung und Verfahren zur Untersuchung von hydrophilen Makromolekülen in wässriger Lösung |
| US6699722B2 (en) | 2000-04-14 | 2004-03-02 | A-Fem Medical Corporation | Positive detection lateral-flow apparatus and method for small and large analytes |
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| US8673644B2 (en) | 2008-05-13 | 2014-03-18 | Battelle Memorial Institute | Serum markers for type II diabetes mellitus |
| WO2010011860A1 (en) * | 2008-07-23 | 2010-01-28 | Diabetomics, Llc | Methods for detecting pre-diabetes and diabetes |
| WO2010132447A2 (en) | 2009-05-11 | 2010-11-18 | Diabetomics, Llc | Methods for detecting pre-diabetes and diabetes using differential protein glycosylation |
| US8945943B2 (en) | 2010-05-26 | 2015-02-03 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Personal glucose meters for detection and quantification of a broad range of analytes |
| CA2862499C (en) | 2012-01-24 | 2020-10-27 | Cd Diagnostics, Inc. | System for detecting infection in synovial fluid |
| US9383352B2 (en) | 2014-03-26 | 2016-07-05 | Diabetomics, Inc. | Salivary protein glycosylation test for diagnosis and monitoring of diabetes |
| EP3286216B1 (en) | 2015-04-23 | 2022-06-08 | Nevada Research & Innovation Corporation | Fungal detection using mannan epitope |
| EP3331572A4 (en) | 2015-08-04 | 2019-05-01 | CD Diagnostics, Inc. | METHOD FOR DETECTING UNWANTED LOCAL TISSUE ACTION NEKROSIS |
| US20200200735A9 (en) | 2016-02-22 | 2020-06-25 | Ursure, Inc. | System and method for detecting therapeutic agents to monitor adherence to a treatment regimen |
| ES2866880T3 (es) | 2016-04-13 | 2021-10-20 | Inst Nat Sante Rech Med | Métodos y kits para la detección rápida del clon O25B-ST131 de Escherichia Coli |
| US11300576B2 (en) | 2019-01-29 | 2022-04-12 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | DARPin reagents that distinguish Alzheimer's disease and Parkinson's disease samples |
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| GB2084317B (en) * | 1980-09-30 | 1984-01-18 | Erba Farmitalia | Antigen-linked competitive enzymeimmunoassay |
| US4737453A (en) * | 1984-12-12 | 1988-04-12 | Immunomedics, Inc. | Sandwich immunoassay utilizing a separation specific binding substance |
| US4772550A (en) * | 1986-02-10 | 1988-09-20 | Miles Inc. | Heterogeneous specific binding assay employing an aggregatable binding reagent |
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| DE3705686C2 (de) * | 1987-02-23 | 1995-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Bestimmung von Antikörpern |
-
1988
- 1988-10-12 DE DE3834766A patent/DE3834766A1/de not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-10-10 US US07/418,516 patent/US5126241A/en not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-11 DE DE89118917T patent/DE58906981D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-11 ES ES89118917T patent/ES2050200T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-11 ZA ZA897689A patent/ZA897689B/xx unknown
- 1989-10-11 EP EP89118917A patent/EP0363942B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-11 AT AT89118917T patent/ATE101723T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-10-12 AU AU42855/89A patent/AU612907B2/en not_active Ceased
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