JPH01250341A - 新規生理活性物質ＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−５０６ｈ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

産業上の利用分野 本発明はモルティエレーラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌ　ｌａ
）・属に属する微生物が生産するヒスタミン遊離抑制作
用を有する新規な生理活性物質及びその製造法に関する
。 従来の技術 微生物が生産するヒスタミン遊離抑制作用を有する化合
物としては、ノカルディオプシス（Ｎｏｃａｒｄｉｏｐ
ｓｉｓ）属に属する微生物が生産するに−２５２（特開
昭６０−４１４８９）およびＫＴ５５５６　（特開昭６
ｌ−１７６５３１）が知られている。 発明が解決しようとする課題 本発明は、抗アレルギー剤、抗炎症剤などの有用な医薬
品となる新規ヒスタミン遊離抑制剤を提供することにあ
る。 課題を解決するだめの手段 本発明台は、医薬品またはその中間体となりうる有用な
新規生理活性物質を提供するという目的のもとに、天然
界より人手した数多くの微生物の生産物について研究を
行った。その結果、新たに分離した微生物の培養物中に
ヒスタミン遊離抑制作用を示す生理活性物質が生産され
る事実を見い出した。該培養物から該物質を単離、精製
し、その理化学的性質を調べたところ新規物質であるこ
とが判明した。以下、該物質をＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ
−５０６ｈと称する。 以下に本発明の詳細な説明する。 本発明は、新規生理活性物質ＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−
５０６１及びその！３！ｌｉｉ法に関する。 ＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−５０６ｈの理化学的性質は以
下に示す通りである。 ＫＳ−５０６ｍ ■　性　状ニガラス状固体 ■　光外部吸収スペクトル（溶液法、Ｃ１１ｆＪ、中）
ｃｔｓ−’　：３６３０．３４００．１７１５．１６６
５．１６１５．１５８５゜１４６０、１３１３．１１７
０．１１０４■’Ｈ−ＮＭＲ７，ヘク）　ル（４００Ｒ
ＩＨｚ、ＣＤＣ１３中）δ（ｐｐｍ）　　：　１１．４
ｊ（ＩＨ，ｓ）、　５．４４（１ｔ１．ｂｒ　ｓ）、　
５．１７（Ｉｌｌ、ｂｒ　ｓ）、　３．０６（２ｆｔ、
ｂｒ　ｔ）、　２．５２（２ｆｔ、ｂｒ　ｔ）。 ２、５５　（３Ｈ，ｓ）、　２．２１（３ｆｔ、ｓ）、
　２．１９（３Ｈ，ｓ）、　２．１５４（３１１，ｓ）
、　２．１４６（３ｆｌ、ｓ）、　２．０４（３ｔｌ、
ｓ）、　１．９３（３Ｈ，ｓ）■”Ｃ−ＮＭＲスペクト
ル（１００ＲＩＨｚ、　ＣＤＣ１，中）δ（ｐｐｍ）　
：　２０６．２．１９４．７．１７０．４．１６１．１
゜１５７．９．１５３．９．１４３．４．１３８．４．
１３２Ｊ、　　１２６．４゜１２１．０．１１５．５．
１１４．９．１０７．７．１０４．９．４３．０゜２９
．４．２３．６．１９．２．１６．６．　＋２．１．１
１．９．９．９゜８．１ ■　マススペクトル（ＨＲＭＳ） 実測値：４６０．１５４０ 計算値：　Ｃ，、Ｈ，，０，Ｓとして４６０．１５５３
■　分子式：　Ｃ２４Ｈ２＠ＯｔＳ ■　溶解性：メタノール、アセトン、酢酸エチル。 アセトニトリル、ジメチルスルホキシドに可溶。 ヘキサン、水に不溶。 ■　呈色反応：ヨウ素、５０％硫酸、アニスアルデヒド
、ニトロプルシドの各反応に陽性、アニリン・フタル酸
、ニンヒドリン、ライダン・スミスの各反応に陰性。 ＫＳ−５０６ｈ （Ｏ性　状：無色扮末 ■　光外部吸収スペクトル（溶液法、ＣＨＣｌ１．中）
ｃｍ−’　：　３６３０．３４００．１７２３．１６５
４．１，６１８．１５８８゜１４６０、１４３３．１３
１’４．１２７Ｂ、　１１６８．１１１３．１０９４■
’Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＲＩＨｚ、　ＣＤＣｊ
！　、中）δ　（ｐｐｍ）　　　：　　１ｌＪ６（ＩＨ
，ｓ）、　　５．２８（ｌｔｌ、ｂｒ　　ｓ）、　　５
．０１（ＬＨ，ｂｒ　ｓ）、　３．６９（３Ｈ，ｓ＞、
　２．５５（３ｔ−１，ｓ）、　２．２８（３Ｈ。 ｓ）、　２．１９（６Ｈ，ｓ）、　２．１６（３ｔｌ、
ｓ）、　２．０６（３Ｈ，ｓ）■”Ｃ−ＮＭＲスペクト
ル（１００！ＪＨｚ、　ＣＤＣｌ　、中）δ（ｐｐｍ）
　　：　　１７０．５．　１６８．０．　１６０．８．
　１５７．７゜１５３．９．　１４５，０．　１３８Ｊ
、　　１３４．４．　１２０．８．　１２０．０゜１１
５．４．　１１４．７．　１０７，７．　１０５．１．
　５２．２．　１８．９゜１７．３．　１２．０（２）
、　　９．８．　８，１゜■　マススペクトル（ＨＲＭ
Ｓ） 実測値：３８８．１５１８ 計算値：　Ｃ１１Ｈａ４０ｔとして３８８．１５２０■
　分子式：　Ｃ＊１Ｈｚ−Ｏｉ ■　溶解性：メタノール、アセトン、酢酸エチル。 アセトニトリル、ジメチルスルホキシドに可溶、ヘキサ
ン、水に不溶。 ■　呈色反応：ヨウ素、５０％硫酸、アニスアルデヒド
の各反応に陽性、アニリン・フタル酸。 ニア　ｔ：　）’　ＩＪン、ライダン・スミス、ニトロ
プルシドの各反応に陰性。 以上の結果よりＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−５０６ｈは下
記の式で表わされる新規物質であることが判明した。 Ｏ ＫＳ−５０６ｍ　：　Ｒ＝　−５ｃｏ２ｃｏ２’ｅｃｎ
ａＫＳ−５０６ｈ　　：　　Ｒ＝　−０ＣＨ３次に各種
展開剤によるＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−５０６ｈの薄層
クロマトグラフィーのＲｒ値を第１表に示す。 検出は５０％硫酸を噴霧した後、ホットプレート玉で加
熱するか、または２５４ｎｍの紫外線を照射することに
よって行った。 第　　　　１　　　　表 薄層：■、■ニジリカゲル６叶２７．プレート　（メル
ク社、Ｎα５６２８） ■、■：　ｒ＜　Ｐ−８Ｆ、、、、プレート　（メルク
社、Ｎロ１３７２５） 展開：室温、」二昇法、１０〜３（）分ＫＳ−５０６ｍ
及びＫＳ−５０６ｈは、ヒスタミンＩｔｔ離抑制作用を
有する。 次にＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−５０６ｈの製造法につい
て説明する。 ＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−５０６ｈは、モルディエレー
ラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌ　ｌａ）属に属し、ＫＳ−５０
［ｉｍ及び／又はＫＳ−５０ｆｉｈ生産能を有する微生
物を培地に培養し、培養物中、主に菌体にＫＳ−５０６
ｍ及び／又はＫＳ−５０６ｈを生成蓄積させ、該培養物
からＫＳ−５０ｆｉｍ及び／又はＫＳ−５０６ｈを採取
することにより製凸される。 ＫＳ−５０６ｍ及び／又はＫＳ−’、＋０［ｉｂ生産性
微生物としては、モルティエレーラ（ＭｏｒＬｉｅｒｅ
ｌｌａｌ属に属し、ＫＳ−５０６＋＋＋及び／又はＫＳ
−５０６ｈ生産能を有するものであればいずれの微生物
でもよい。具体的に好適な一例として、本発明者らによ
り、長野県においてブナの落枝から分離されたモルティ
エレーラ・ビナセア（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ｖｉｎ
ａｃｅａ）ＫＡＣ−１４３６株（以下、ＫＡＣ−１４３
６と称する。）があげられる。 ＫＡ［ニー１４３６の菌学的性質は次のとおりである。 麦芽エキス寒天培地を用いて２５℃で培養した時、集落
の直径は培養７日目で３５〜４０ｍ、ｍに達する。集落
は初め灰色を呈するが、培養期間の経過に伴い赤色を帯
びてくる。光学顕微鏡観察の結果、本閑の菌糸は培地上
及び培地中に良好に伸長・分岐するが、その菌糸は子の
う菌類、担子菌類及び不完全菌類に見られるような明瞭
な隔壁形成を欠く。 胞子のう柄は、主に気中菌糸から形成され、長さ１００
μｍにおよび、幅は２．５〜４．５μｍである。 胞子のうは、球形あるいは亜球形で、平滑、直径１２〜
１３．５μｍ、柱軸を欠き、胞子のう内に非運動性の胞
子のう胞子を多数形成する。胞子のう胞子は不正多角形
を呈し、平滑で２〜４μｍである。 接合胞子は観察されない。 以上の観察の結果、本菌株は、モルティエレーラ・ビナ
セア（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　ｖｉｎａｃｅａ）と同
定された。モルティエレーラ・ビナセアについての菌学
的性質は、ｔｌ、　Ｚｙｃｈａらの著書ｒＭｕｃｏｒａ
ｌｅｓ　　（ムコラレス）　Ｊ　　（（：ｒａｍｅｒ社
、１９６９年）の１６３頁に詳しく記載されている。本
発明者らは、本菌株をモルテイエレーラ１ビナセア（Ｍ
ｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ　　ｖｉｎａｃｅａ）にＡＣ−１
４３６と命名した。本菌株は昭和６３年３月２日付で工
業技術院微生物工業技術研究所に微工研条寄第１７７６
号として寄託されている。 微生物の培養に際しては菌類の培養に用いられる通常の
培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化しつ
る炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培地で
あれば天然培地、合成培地いずれでも用いられる。 炭素源としてはグルコース、フラクトース、スタビロー
ス、サッカロース、ラクトース、Ｉｌ粉。 チーｔ−ストリン、マンノース、マルトース、糖蜜。 マツシュポテトの素などの炭水化物、クエン酸。 リンゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、グルタミン
酸などのアミノ酸あるいはグリセロール、綿実油などが
用いられる。 窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、
硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウムｌ工どのアンモ
ニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シスチン、ア
ラニンなどのアミノ酸、尿素、麦芽エキス、ペプトン、
肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチーブ・
リカー、大豆粉、綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、
ファーマメディア、ソルブル・ベジタブル・プロティン
、野菜・果実のジュースなどが用いられる。 無機物としてはリン酸二水素カリウム、リン酸水累ニナ
トリウｌ１．硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マン
ガン、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシウ
ム、モリブチ゛ン酸アンモニウム、硫酸アルミニウムカ
リウム、炭酸バリウム。 炭酸カルシウム、塩化コバルト、塩化ナトリウム。 リン酸マグネシウムなどが用いられる。 その他必要に応じて培地にサイアミンなどのビタミンな
ど菌体の増殖あるいはＫＳ−５０６ｍ及び／又はＫＳ−
５０６ｈの生産を促進する物質を加えることができる。 用いられる微生物が生育に特定の物質を要求する場合は
、生育に必要な物を加えることが必要である。 培養は振盪培養法、通気攪拌培養法などにより１５〜３
０℃の温度で中性付近のρＩで行われる。 ５〜１２日の培養によってＫＳ−５０６ｍ及び／又はＫ
Ｓ−５０６ｈの蓄積が最大に達し、培養は完了する。 蓄積したＫＳ−５０６ｍ及び／又はＫＳ−５０６ｈを菌
体から単離採取するに際しては、通常の生理活性物質を
菌体から採取する方法が適用される。 即ち、ρ過、遠心分離などによる菌体の取得、メタノー
ル、アセトンなどの有機溶剤による菌体からの抽出、水
または二種以上の有機溶剤による分配、吸着樹脂、シリ
カゲル、化学修飾シリカゲル、アルミニウム、セルロー
ス、珪藻上、珪酸マグネシウム、ゲル濾過剤などを用い
るカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラ
フィーによる活性物質の吸脱着処理などによってＫＳ−
５（１６ｍ及び／又はＫＳ−５０６ｈを単離することが
できる。 菌体からＫＳ−５０６ｍ及び／又はＫＳ−５０６ｈを単
離する１例は次の通りである。 培養液を濾過もしくは遠心分離することによって菌体を
塩１等する。得られた菌体にメタノールなどの有機溶剤
を添加し、充分攪拌した後、再度濾過もしくは遠心分離
によって菌体とｐ液もしくは上清液とを分離する。得ら
れた戸液もしくは上清液から溶剤を減圧下で蒸発させて
濃縮し、水溶液とする。ついで、この水溶液から酢酸エ
チルなどの水と混和しない適当な溶剤を用いて抽出する
。 抽出液を減圧ａ縮した後、り［１０ホルム−メタノール
または水−ア七トニ）　ＩＪルなどの混合溶媒を展開溶
媒として、シリカゲルカラムクロマトクラフィーを繰り
返し行う。 次に、ＫＳ−５０６ｍ及び／又は−ＫＳ−５０６ｈをそ
れぞれ車−に含む両分を減圧下で濃縮することにより、
ＫＳ−５０６ｍ及び／又はＫＳ−５０６ｈを得る。 Ｅ　記ｖ４製工程中（Ｄ　ＫＳ−５０６ｔｎ及Ｕ／又ハ
ＫＳ−５０６ｈの検出はシリカゲル薄層り９マドグラフ
イー、次いで５０％硫酸を噴霧後、加熱するか、または
２５４ｎｍの紫外線を照射することによって行った。 また、所望により、ＫＳ−５０６ｈはＫＳ−５０６ａ　
（参考例）を塩基性メタノール中で加熱することによっ
て５１ａすることができる。ＫＳ−５０６ｍは、所望に
よ１：）　ＫＳ−５０６ａをメチルビニルケトンの存在
下で加熱還流することによって、製造することができる
。 以下に実施例を示す。 実施例１ 種菌としてモルティエレーラ・ビナセγ（Ｍｏｒｔｉｅ
ｒｅｌｌａ　　ｖｉｎａｃｅａ）ＫＡＣ−１４３６を用
いる。該菌株をグルコース１．０ｇ、／ａ、ペプトン（
極東製薬工業社製）　０．５ｇ／ｄ１．乾燥酵母エビオ
ス（朝日麦酒社製）　０．５　ｇ／ｄｉ、　Ｖ−８’Ｅ
Ｍ’）ユース（＋＋：／ベル社製＞　０．２　ｄｌ／ｄ
１．炭酸カルシウム０．３ｇ／ａ。 ｐＨ６，０の組成の種培地３０ｍ１を含む３００ｍ１の
三角フラスコに一白金耳植菌した。ついで２５℃で菌が
充分生育するまで振盪培養した。この種培養液全量を上
記組成の種培地３００ｍ１を含む２１三角フラスコに植
菌し、ついで同様に培養した。この種培養液１８００ｍ
ｌを、グルコース０．５ｇ／ａ、、　フルドース４ｇ／
ｃ＋ｊ！、　　３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホ
ン酸１ｇ／ｄｉ、硫酸マグネシウｌ、・７水塩０．０５
ｇ／ａ。 ソイビーンミール１．５ｇ／ａ、、　ファーマメディア
１．５ｇ／ａ、炭酸ｈル’、ｔ’）ム０．５ｇ／ａ！、
　ｐＨ７，０の組成の発酵培地１８１を含む３０ｆジャ
ーファーメンタ−に植菌した。 培養は２５℃で、１８ｆ／分の通気下、３００「ρωの
回転数で攪拌しながらｌＯ日日間った。培養終了後、ｊ
Δ養液３０１を濾過助剤を用いて濾過し、菌体とｊΔ養
上清液上に分けた。菌体には２０Ｊのメタノールを添加
し、充分撹拌し、ＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−５０６ｈの
抽出を行った。菌体のメタノール抽出液は、減圧下で濃
縮しメタノールを除去した。得られた水溶液は、５％（
Ｖ／Ｖ）になるようにメタノールを加えた後、あらかじ
め水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０（三菱化成社
製）２１を充填したカラ！、に通塔した。水ついで５０
％メタノール水溶液各々６１でカラムを洗浄した後、メ
タノール１０ＩｌでＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−５０６ｈ
を溶出した。溶出液は減圧下で濃縮した後、シリカゲル
（ワコーゲルＣ−２００、和光紬薬工業社製）にまぶし
、あらかじめクロロホルム：メタノール−・！Ｉ　：　
Ｉ　（ｖ／ｖ）で充填したシリカゲル（ワ：Ｊ−ゲル［
：　２０＋＋　、和光純桑Ｉ−業社製）カラ！、　ｌ　
ｊ！　０）　ｉ：、端に供給した。ＫＳ　５ｆｌｆｉｍ
及びＫＳ　！１０１ｉｌ＋０）溶出は、クロτｊホルト
：メタノール−・！ｌ　：　ｌ　（ｖ／ｖ）５１で行っ
た。この溶出液を減圧ドで濃縮した後、１％メタノール
を含むりτＩｔ］ホルＡｌ［１ｍｌに溶解し、あらかじ
め１％メタノール−ク「ン

【２ホル）・で充Ｊハしたシ
リカゲル（ワコーゲル（：　２＋１１１　、和光純桑１
−゛業社製）カラｌ−Ｉ　Ｒ０）、ｉＪｉに供給した。 カラ１−ｔｑ、１％、２％、３％メタノールをそれぞれ
含むりｙ＋τ１ホル１、２　ｉで順次展開し、溶出され
ろＫＳ　５ｆＨｉｍ及びＫＳＦ＋０６１１を含む内分を
それぞれ集ｙ〕て減圧ドで濃縮した。これらの両分をそ
れぞれ、あらかじめ１０％酢酸エチル−［１−へ牛サン
で充填したシリカゲル（ワコーゲルｃ−２ｃ＋ｏ　、和
光補薬Ｉ゛業社製）カラ！、：１００ｍ１の一ヒ端に、
同じシリカゲルにまぶして供給した。１０％、２０％、
　：ｌｆ１％、４０％酢酸エチル−［１ヘキサン溶液を
用いて順次展開すると、ＫＳ　５ｉ１６ｔ＋が先に溶出
され、次いでＫＳ−５０６ｍが溶出される。 それぞれを屯−に含む両分を隻め、減圧下濃縮すると、
ガラス状固体のＫＳ　５ｔｌ（ｉｍを８０ｍｇ、無色粉
末Ｑ’）ＫＳ　’、＋Ｏｈを１２０ｍｇ得た。 １−２精製１′、程中、ＫＳ５−５０１ｉ及びＫＳ−５
０（ｉｂの検出はシリカゲルプレート（シリカゲル６０
Ｆ２．、メルク社３Ａ）を用いて薄層り【】マドグラフ
ィーを行った後、５０％硫酸を噴霧後ホットプレート」
二加熱ずろか、または２５４ｎｍの紫外線を照射するこ
とによって行−〕だ。 実施例２ 参考例によって得られたＫＳ５ｆｌ［ｉａ　２３０■を
メタ−ノル２：１０ｍ１に溶解し、ＩＮ水酸化ナトリウ
ノ、水溶液２：１ｍｌを加え、６０℃、３０分間加熱し
反応を行−１た。反応路−ｒ後、ＩＮ塩酸を用いて中和
した後、減圧下に３縮乾固した。Ｉ）られた固体をシリ
カゲル（ワコーゲルＣ−３００、和光紬薬り業社製）に
まぶし、あらかじめ１０％酢酸エチル−ｎ−ヘキサンで
充ｔｉしたシリカゲル（ワコーゲルｃ　ａｏｏ　、和光
紬薬工業社製）カラム５００ｍ１の１一端に供給し、１
０％。 ２０％、３０％、４０％酢酸エチル−ｎ−ヘキサン各２
１で順次溶出した。溶出液を！５ｍｊずつ分取し、ＫＳ
−５（ｌ　ｆｉ　ｔ＋を含む画分を集めて濃縮乾固する
と、；１１（色粉末のＫＳ　−５０６ｂがＧ　ｆｌ　ｍ
ｇ得られた。 実施例３ 参考例によって得られたＫＳ−５０６ａ　：Ｊ　ｍｇに
、メチルごニルケトン０．５ｍｌを加えた後、６（１℃
、１５時間加熱し反応を行った。反応終了後、濃縮乾１
＝’、Ｉ　Ｌ、シリカゲルプレート　（シリカゲル６叶
、□、メルク社）を用いて薄層クロマトグラフィー４、
夕＋＋　１１ホルト：メタノール−２０：ｌ（ｖ／ν）
を展開溶媒として行った。２５４ｎｍの紫外線４照射す
ることによってＫＳ−５０６ｍを検出し、ＫＳ−５０６
ｍが構出された部分のシリカゲルをかきとり、メタノー
ル２０ｍ１で溶出を行った。メタノール溶出液を減圧ド
で濃縮乾固・することにより、ＫＳ−５０６ｍ　　２ｔ
ｌｇ−’ｔｌ！）だ。 次いで、ＫＳ５−５ｆｌ（ｉ及びにり−５０ｉｉｂのヒ
ス９ミンＮ離抑制作用を実験例により説明する。 実験例 ラット腹腔浸出細ｌＩ包からのヒスタミン遊離に及ばず
影′！で １）ラット腹腔細ＲＣｌγ遊液の調製とヒスタミン遊離
に対する作用 体’Ｉ′ｊ　３５０−４５０ｇのラットを乾エーテル麻
酔下に放血致死せしめ、５ｕｌｌｉｖａｎらの方法〔ジ
ャナール・オブ・イムノロジー（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ
、）　１１４　＊１４７３、　　（１９７３）］に準じ
て作製した肥満細胞用培液く組成：１５０ｍＭ　ＮａＣ
Ｒ，：１．７ｍＭにＣＩｌ、　：１ｍＭ　Ｎａ２１１１
’０．、：１．５ｍＭ　Ｋ１１２Ｐ口１．１ｍＭ　Ｃａ
［’、ｉ’　２．５．６ｍＭグルコース、（１，１％生
血ｌｔ７アルブミン、１０１１／ｍｌヘパリン）１５■
１７匹を腹腔内に注入した。腹部を２分間マツサージし
た後、開腹し腹腔内反出液を採取した。集めた浸出液を
４℃、　　１１００Ｘで５分間遠心分離後、沈渣に適ｒ
、）の氷冷した上記の肥満細胞用培液を加えて３回洗浄
し、最終的に、肥満網ｌＩ包数が約２　Ｘ　ｌｏ’ｃｅ
ｌｌｓ／ｍｌとなるように細胞ｉ′Ｉ遊液を調製した。 なお、肥満細胞の同定はｆｌ、０５％トルイジンブルー
で細胞内組粒を染色ずろことで行った。 このようにして得た細胞浮遊液１ｍｌを３７℃。 ５分間プレインキコベートした後、種々の濃度の被験薬
１０，１ｍｌを加えて５分間インキコベートシ、フォス
ファチジルーＬ−セリンｌＯ■／ｍ１及びコンカナバリ
ンＡ　１００Ｍ、／ｍｌそれぞれ０．１ｍＭを加えてさ
らに１５分間インキュベートした。 この時にフォスファチジルーし一セリンとコンカナバリ
ンへの代わりに生理食塩水を用いて、同様にインキユベ
ートを行い、これを自発遊離とした。 氷冷した生理食塩水３ｍｌを加えて反応を停止後、４℃
、１ｌ１０Ｏｘで１０分間遠心分離して上ｌＩｉと沈渣
を得た。上清及び沈渣のヒスタミン量は、小松の方法〔
アレルギー２７．６７（１９７８）　］に従い蛍光法で
測定した。ヒスタミン遊離率は細胞の総ヒスタミン量に
対する上清のヒスタミン徹の百分率として表した。また
次式により被験薬液のヒスタミン遊離抑制率を算出した
。 ２）実験成績 第２表 参考例 実施例１と同様に培養を行って得た培養液３０１を濾過
助剤を用いて一過し、菌体と培養土清液とに分けた。菌
体には２０１のメタノールを添加し、充分攪拌し、ＫＳ
−５０６ａの抽出を行った。菌体のメタノール抽出液は
、減圧下で濃縮しメタノールを除去した。得られた水溶
液は、５％（Ｖ／Ｖ）になるようにメタノールを加えた
後、あらかじめ水で平衡化したダイヤイオンＨＰ−２０
（三菱化成社製）　２１を充填したカラムに通塔した。 水、次いで５０％メタノール水溶液各々６１でカラムを
洗浄した後、メタノール１０１でＫＳ−５０６ａを溶出
した。溶出液は減圧下で濃縮した後、シリカゲル（ワコ
ーゲルＣ−２００、和光補薬工業社製）にまぶし、あら
かじめクロロホルム：メタノール＝　９　：　１　（ｖ
／ｖ）で充填したシリカゲル（ワコーゲルＣ−２００、
和光補薬工業社製）カラム１１の上端に供給した。ＫＳ
−５０６ａの溶出は、クロロホルム：メタノール−９：
　ｌ　（ｖ／ｖ）５１で行った。この溶出液を減圧下で
濃縮した後、１１％メタノールを含むクロロホルム１０
ｍ１に溶解シ、あらかじめ１％メタノール−クロロホル
ムで充填シたシリカゲル（ワコーゲルＣ−２００、和光
補薬工業社製）カラム１１の上端に供給した。カラムを
１％。 ２％、３％メタノールをそれぞれ含むクロロホルム２１
で順次展開し、溶出液を２０■１ずつ分取するとフラク
ション番号１０１から１８１にＫＳ−５０６ａが溶出さ
れた。これらのフラクションを集めて減圧下で濃縮する
と、淡黄色あめ状物質が１．０ｇ得られた。 このあめ状物質を８０％ア七トニトリル水溶液２ｍｌに
溶解し、その半量をあらかじめ８０％アセトニトリル水
溶液で充填した逆相ローバーカラム（メルク社製、ＲＰ
−８、Ｂサイズ）に供給した。カラムを８０％アセトニ
）　ＩＪル水溶液を用いて溶出し、溶出液を５ｍｌずつ
分取すると、フラクション番号５６から８６にＭＳ−５
０６８が溶出された。残りの半量も同様に８０％アセト
ニトリル水溶液に溶解し、逆相ローパーカラムクロマト
グラフィーを行い、　ＫＳ−５０６ａを含む両分を集め
た。ＫＳ〜５０６８を含む両分を減圧下で濃縮した後、
メタノール１ｍｌに溶解し、あらかじめメタノールで充
填したセファデックスしｌ上２０〈ファルマシア社製）
カラム２００ｍ１の上端に供給し、メタノール１１を用
いて展開した。、溶出液を５ｍｌずつ分取すると、フラ
クション番号５１から６１にＫＳ−５０６ａが溶出され
た。ＫＳ−５０６ａを含む両分を集め、減圧下で濃縮し
た後、再度セファデックスＬｌｌ−２０カラムクロマト
グラフィーを繰り返すことにより、ＫＳ−５０６ａを含
む固体４５０ｍｇを得た。このうち４２ｍｇを６０％ア
セトニトリル水溶液１ｍｌに溶解し、あらかじめ６０％
アセトニトリル水溶液で充填した逆相ｒ１−バーカラ！
、（メルク社製、Ｉ櫂１’−１８、Ｉ３サイズ）に供給
した３、カラ！・をに（）％゛ｆセトニトリル水溶液２
１を用い一〇溶出し、溶出液を１１１ｍ１ず一〕分取す
るとワラクシ９ン番号Ｉ；１２から１５０１：ＫＳ−５
Ｏｆ＋　ａが弔−に溶出された。ＫＳ−５０ｆｉａを？
１１−に含む両分４集め、減圧下でに３縮すると、；！
Ｉ（色粉末のＫＳＪ　０１ｉ　ｎを７．ａｍｇ得た。 １、配積製１−程中のＫＳ　５０６ａの検出は、シリカ
ゲルｉ’ＩＪＭりτ１マドグラフィー、次いで５０％硫
酸を噴霧後、加熱することにより行−１た。なｊｉ、各
種展開剤によるＫＳ−５０６ａの薄層クロマトグラフィ
ーの１１ｒ値は′：Ｐ、：Ｊ表の通りである。 第　　　　：）　　　　表 ０）りＦｕｒ＋ネルム：メタノール・９：１（ν／ｖ）
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｆ）、ｌ　　
８■ｎヘキサン：酢酸エチル−Ｉ：ｌ（ｖ／ｖ）　　　
　０．５０■メタノール：水　−８：２（ｖ／ｖ）　　
　　　　　０．２１薄層：■、■ニジリカゲル６０Ｆ２
Ｓ４プレート　（メルク社、Ｎα５６２８） ■、■：ＲＰ　　８Ｆ２３．−プレート　（メルク社、
Ｎｏ、１３７２５） 展開：室温、上昇法、ｌＯ〜３０分 発明の効果 ＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ−５０６ｈはヒスタミンｉｌｔ
抑制作用を有する新規物質であり、抗アレルギー剤、抗
炎症剤等の医薬品として有用である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ ＫＳ−５０６ｍ：Ｒ＝▲数式、化学式、表等があります
   ▼ ＫＳ−５０６ｈ：Ｒ＝−ＯＣＨ＿３ で表わされる新規生理活性物質ＫＳ−５０６ｍ及びＫＳ
   −５０６ｈ。 （２）モルティエレーラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属
   に属し、ＫＳ−５０６ｍ及び／又はＫＳ−５０６ｈ生産
   能を有する微生物を培地に培養し、培養物中にＫＳ−５
   ０６ｍ及び／又はＫＳ−５０６ｈを生成蓄積させ、該培
   養物からＫＳ−５０６ｍ及び／又はＫＳ−５０６ｈを採
   取することを特徴とするＫＳ−５０６ｍ及び／又はＫＳ
   −５０６ｈの製造法。（３）該微生物がモルティエレー
   ラ・ビナセア（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａｖｉｎａｃｅａ
   ）に属する微生物であることを特徴とする請求項（２）
   記載の製造法。 （４）該微生物がモルティエレーラ・ビナセア（Ｍｏｒ
   ｔｉｅｒｅｌｌａｖｉｎａｃｅａ）ＫＡＣ−１４３６（
   微工研条寄第１７７６号）であることを特徴とする請求
   項（２）または（３）記載の製造法。