JPH09508371A - 対宿主移植片疾患を予防するためのインターロイキン−１２の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 対宿主移植片疾患の予防、改善、および治療を必要とする哺乳動物へのインターロイキン−１２の使用が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】 対宿主移植片疾患を予防するためのインターロイキン−１２の使用 発明の背景 本発明は、インターロイキン−１２を用いる対宿主移植片疾患の予防および治療 の分野に関する。 個々の哺乳動物の免疫系は、ある種の細胞表面蛋白の認識によって機能してお り、該蛋白のいくつかは主要組織適合複合体蛋白またはＭＨＣ蛋白と呼ばれてい る。さらに副組織適合性蛋白も存在し、免疫学的認識に貢献しうる。個々の哺乳 動物の免疫系は、それ自身のＭＨＣ蛋白、またはそれと同一の双子の蛋白を自己 として認識し、かくして、それ自身の細胞またはそれと同一の双子の細胞を破壊 しない。同じ種のメンバーは主要／副組織適合性抗原を共有しており、かくして 、１の個体はその種の中のもう１つのメンバーの細胞を、当該２つの個体のＭＨ Ｃ蛋白間の相違の程度によっては、非自己として認識することができない。個体 の免疫系が同じ種の中の他のメンバーの細胞を非自己と認識する場合、第１の個 体の免疫系は第２の細胞を破壊する可能性がある。ヒトにおいて、主要組織適合 性蛋白は「ＨＬＡ」抗原として知られている。 骨髄、血液細胞、または固形器官のごとき組織が１の個体からもう１つの個体 に移植される場合、通常には、受容者は提供者の細胞を非自己と認識し、上記の ごとく受容者の免疫系は提供者の細胞を破壊するであろう。このため、組織移植 に際して、通常は、受容者は免疫抑制剤および／または放射線を与えられる。し かしながら、移植患者は逆方向の免疫学的認識にもさらされる。すなわち、提供 者組織は、受容者の細胞の破壊、すなわち、「対宿主移植片疾患」または「ＧＶ ＨＤ」と呼ばれる症状を進行させる免疫学的適格細胞を含んでいる可能性がある 。 現在、多くの白血病およびリンパ腫患者が骨髄移植により治療されている。同 一の双子を用いることができる場合、提供者と受容者の遺伝学的特徴が同一であ ので、かかる移植は「同系」と呼ばれる。より頻繁には、骨髄移植は「同種」、 すなわち、移植される骨髄は、その遺伝学的特徴（個々の個体の細胞の表面上に 発現される特に、ＭＨＣおよび副組織適合性抗原に関して）が受容者とは異なる 個体により提供される。同種骨髄移植はますます頻繁に行われている。１９９０ 年には、４０００件をこえるかかる移植が行われた。潜在的な受容者に適合する 骨髄提供者に対する必要性の増大が認識され、関連のない提供者から表現型的に 合致した骨髄を提供するために、国際的な骨髄提供者登録システムが発足してい る。 同種骨髄移植の頻度増加とともに、対宿主移植片疾患のごとき潜在的に致命的 な合併症も増加している。免疫適格細胞を含んでいる骨髄、血液産物、または固 形器官が提供者から受容者へと移植される場合に、対宿主移植片疾患が起こりう る。よって、ＭＨＣ抗原の相違が提供者と受容者との間に存在する場合、受容者 は対宿主移植片疾患の発生の危険がある。副組織適合性抗原に関して提供者と受 容者との間に抗原的相違がある場合にも対宿主移植片疾患が起こりうる。よって 、対宿主移植片疾患はＭＨＣが合致した人の間にも起こりうる。そのうえ、例え ば、ＨＬＡホモ接合の子供からヘテロ接合の親への輸血のごとき輸血を受けた外 科処置された患者も対宿主移植片疾患を起こしうる。 現在、対宿主移植片疾患は、免疫適格の提供者細胞を除去することを試みるこ とにより、例えば、提供者の骨髄をインビトロ操作することにより抑制されてい る。例えば、レクチン凝集のごとき物理的分離により、あるいはＴ細胞に指向さ れたモノクローナル抗体で骨髄を処理することにより、免疫適格Ｔ細胞を提供者 の骨髄から除去することができる。しかしながら、Ｔ細胞枯渇骨髄の使用は高率 の移植の失敗に関連しており、しばしば、致命的である。Ｔ細胞枯渇骨髄移植片 の使用は、受容者、特に、慢性骨髄性白血病の患者における病気のぶり返しの機 会の増加にも関連している。 もう１つのアプローチにおいて、移植後、受容者に免疫抑制療法を受けさせる 。グルココルチコイド、シクロスポリン、メトトレキセート、またはかかる薬剤 の組み合わせによりかかる免疫抑制が起こりうる。しかしながら、免疫抑制は感 染 の機会を増大させ、免疫抑制剤を用いる場合であってもやはり対宿主移植片疾患 が生じるであろう。 インターロイキン−１２は、もともと、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０６３３２（参照 により本明細書に記載されているものとみなす）に示されたようにＴ細胞および 天然キラー細胞からγ−インターフェロンを誘導する因子として同定されたヘテ ロダイマーのサイトカインである。１９９２年４月２日に公開されたＰＣＴ／Ｕ Ｓ９１／０６３３２では、インターロイキン−１２は天然キラー細胞刺激因子ま たはＮＫＳＦと呼ばれている。１９９１年６月２６日に公開されたＥＰ４３３８ ２７には、インターロイキン１２が細胞毒性リンパ球成熟因子（ＣＬＭＦ）とし て開示されている。ヒト・インターロイキン−１２サブユニットのアミノ酸配列 を配列番号：１／配列番号：２（４０ｋＤサブユニト）および配列番号：３／配 列番号：４（３５ｋＤサブユニット）に示す。 またインターロイキン−１２は、よく知られた天然キラー細胞の細胞毒性活性 のアクチベーターであるインターフェロン−αおよびインターロイキン−２につ いて得られるものに匹敵するレベルの標的細胞溶解活性を上昇させることにより インビトロにおいて天然キラー細胞を刺激する。同定されているさらなるインタ ーロイキン−１２のインビトロ活性は、同時剌激因子としてのＴ細胞増殖の誘導 ;インターロイキン−２により誘導される天然キラー幼若細胞増殖の抑制；イン ターロイキン−２により誘導されるＴ細胞受容体−γδ−陽性細胞増殖の抑制； 前駆細胞からのＴｈ１ Ｔ細胞分化の促進；Ｔｈ１増殖の促進（しかしＴｈ２増 殖は促進しない）；Ｔ細胞細胞毒性活性の増大；細胞毒性リンパ球発生の促進； 天然キラーならびに天然キラー幼若細胞溶解活性の増大；インターロイキン−２ 処理された患者の末梢血単核細胞の天然キラー活性のイクスビボ（ex vivo）で の増大；天然キラー細胞上の付着分子の誘導；天然キラー幼若細胞におけるパー フォリンならびにグランザイムＢのｍＲＮＡの誘導；天然キラー細胞上のインタ ーロイキン−２受容体サブユニット（ｐ５５、ｐ７５）の誘導；低レベルの腫瘍 壊死因子−αの誘導；インターフェロン−γ−依存性の機構およびそれとは無関 係な機構によるＩｇＥ合成の抑制；胎児胸腺器官培養物におけるＴ細胞発生に対 する 変調；および骨髄細胞ならびにＢ細胞の前駆細胞の増殖を促進するキットリガン ド（kit ligand）との相乗作用を包含する。インターロイキン−１２の知られた インビボ活性は、インターフェロン−γの誘導；脾臓、肝臓、肺ならびに腹膜腔 における天然キラー細胞活性の増大；アロ−特異的（allo-specific）細胞毒性 リンパ球発生の促進；マウス・脾臓における髄外造血の誘導；骨髄における可逆 的造血抑制；マウスにおける貧血、リンパ球減少症ならびに好中球減少症の可逆 的誘導；抗ＩｇＤにより誘導されたＩｇＥ、ＩｇＧ１ならびにインターロイキン −４発現の抑制；トキソプラズマ・ゴンジイ（Toxoplasma gondii）処理された ＳＣＩＤマウスにおける生存率の上昇：マウス感受性株におけるリーシュマニア 症の治癒；クリプトコッカスのモデルにおけるバイオバーデン（bioburden）の 減少；腫瘍増殖の抑制；および腫瘍細胞に対する免疫性の促進を包含する。さら にインターロイキン−１２は、敗血症ショックのシュワルツマン反応モデルにお いてインビボで誘導される。 インターロイキン−１２の知られた活性から、同種骨髄移植における哺乳動物 の治療はより重大な対宿主移植片疾患を引き起こすであろうと考えられよう。イ ンターロイキン−１２処理により誘導されるインターフェロン−γおよび腫瘍壊 死因子−αはともに対宿主移植片疾患の生起に関与している。さらにそのうえ、 インターロイキン−１２によりその発生が促進される細胞毒性Ｔ−リンパ球も対 宿主移植片疾患の病理に関与している。ネズミでの研究により、インターロイキ ン−２での処理によるＴｈ１応答の抑制は対宿主移植片疾患の抑制に関連してい ることが示されている。それゆえ、インターロイキン−１２での処理によるＴｈ １応答の促進は対宿主移植片疾患の重さを増大させると考えられよう。 発明の概要 １の具体例において、本発明は、骨髄移植の際に、哺乳動物に治療上有効量の インターロイキン−１２を投与することからなる対宿主移植片疾患の予防方法よ りなる。 もう１つの具体例において、本発明は、骨髄移植の際に、哺乳動物に治療上有 効量のインターロイキン−１２を投与することからなる対宿主移植片疾患の改善 方法に関する。 さらのもう１つの具体例において、本発明は、対宿主移植片疾患にかかってい る哺乳動物に治療上有効量のインターロイキン−１２を投与することからなる対 宿主移植片疾患の治療方法に関する。 発明の詳細な説明 驚くべきことに、本発明者らは、同種骨髄移植を受けた哺乳動物に対する、Ｔ 細胞枯渇同系骨髄の同時投与を伴う、あるいは伴わない、インターロイキン−１ ２での治療は該哺乳動物の生存を延長し、その結果は、いくつかの場合における 対宿主移植片疾患の予防および他の場合における対宿主移植片疾患の改善にイン ターロイキン−１２が有用であること示すことを見いだした。特別には、下記実 施例１に示すように、致命的に放射線照射され十分にミスマッチの提供者マウス 由来の骨髄および脾臓細胞を注入されたマウスは、インターロイキン−１２での 予防コースにより生存期間が延長された。 それゆえ、本発明によれば、インターロイキン−１２は、１のサブユニットが 約４０ｋＤの分子量を有し配列番号：１／配列番号：２で示されるアミノ酸配列 により特徴づけられ、もう１つのサブユニットが約３５ｋＤの分子量を有し配列 番号：３／配列番号：４で示されるアミノ酸配列により特徴づけられる、２個の 共有結合したサブユニットからなるヘテロダイマー糖蛋白として定義される。イ ンターロイキン−１２の形態が対宿主移植片疾患の危険性のある哺乳動物におけ る該疾患の予防、改善または治療をすることができるものであるかぎり、いずれ の形態のインターロイキン−１２であっても本発明方法を実施するために用いら れる医薬組成物の成分として用いることができる。例えば、インターロイキン− １２が、３５ｋＤサブユニットにジスルフィド結合した４０ｋＤサブユニットか らなるヘテロダイマーの形態であってもよい。インターロイキン−１２がヘテロ ダイマーである場合、４０ｋＤサブユニットは配列番号：１／配列番号：２に示 すヒト・インターロイキン−１２の４０ｋＤサブユニットと実質的相同性があり 、 配列番号：３／配列番号：４に示すヒト・インターロイキン−１２の３５ｋＤサ ブユニットと実質的相同性がある３５ｋＤサブユニットにジスルフィド結合して いる。「実質的相同性」は、対宿主移植片疾患の危険性のある哺乳動物において 該疾患を予防、改善または治療する能力を保持しており、アミノ酸レベルで７５ ％より高い相同性を有すること意味する。本発明に使用することのできるもう１ つの形態のインターロイキン−１２は、対宿主移植片疾患の危険性のある哺乳動 物において該疾患を予防、改善または治療する能力のあるインターロイキン−１ ２サブユニットである。かかるインターロイキン−１２の４０ｋＤサブユニット は、配列番号：１／配列番号：２に示すヒト・インターロイキン−１２の４０ｋ Ｄサブユニットと実質的相同性があり、かかるインターロイキン−１２の３５ｋ Ｄサブユニットは、配列番号：３／配列番号：４に示すヒト・インターロイキン −１２の３５ｋＤサブユニットと実質的相同性がある。インターロイキン−１２ の生物学的活性を保持しているインターロイキン−１２サブユニットのフラグメ ントも、対宿主移植片疾患の危険性のある哺乳動物における本発明による該疾患 の予防または治療に有用である。 本発明における使用に関して、インターロイキン−１２のサブユニットの片方 または両方をコードするＤＮＡ配列の適当な形質転換細胞における発現により、 インターロイキン−１２を組み換え的に製造するのが好ましい。例えば、知られ た方法を用いて、配列番号：１（４０ｋＤサブユニット）および配列番号：３（ ３５ｋＤサブユニット）に示すヒト・インターロイキン−１２配列をコードする ＤＮＡ配列を、ｐＥＤ（カウフマン（Kaufman）ら、ヌクレイック・アシッズ・ リサーチ（Nucleic Acids Res.）第１９巻、４４８４〜４４９０頁（１９９１年 ））のごとき発現ベクターに結合することができる。かかる発現ベクターにおい て、ＣＣＡＣＣのごとき翻訳を最適化する配列（コザック,エム（Kozak,M.）、 ヌクレイック・アシッズ・リサーチ第１２巻、８５７〜８７１頁（１９８４年） ）を知られた方法を用いて開始コドンの５’側に付加してもよい。次いで、イン ターロイキン−１２サブユニットを含んでいる発現ベクターを宿主細胞中に形質 転換し、蛋白発現を誘導し最大としてヘテロダイマーのヒト・インターロイキン − １２を製造することができる。ヘテロダイマーのインターロイキン−１２の製造 について、インターロイキン−１２サブユニットをコードしているＤＮＡ配列が 別個の発現プラスミド上に存在していてもよく、単一の発現プラスミド上に並ん で存在していてもよい。 インターロイキン−１２のサブユニットまたはフラグメントを用いて本発明を 実施する場合に、知られた方法を用いて組み換え的にそれを製造してもよい。例 えば、配列番号：１に示すヒト・インターロイキン−１２の４０ｋＤサブユニッ トをコードするＤＮＡ配列を発現ベクターに結合し、宿主細胞中に形質転換し、 発現を誘導し最大にしてヒト・インターロイキン−１２を製造してもよい。同様 に、配列番号：３に示すヒト・インターロイキン−１２の３５ｋＤサブユニット をコードするＤＮＡ配列を発現ベクターに結合し、宿主細胞中に形質転換し、発 現を誘導し最大にして対応蛋白を製造してもよい。もちろん、インターロイキン −１２サブユニットをコードする縮重ＤＮＡ配列を用いて本発明において使用す るためのインターロイキン−１２を製造してもよく、同様に、インターロイキン −１２サブユニットの対立変異体をコードしているＤＮＡ配列を用いることもで きる。 いずれかの適当な発現ベクターを用いて本発明において使用するインターロイ キン−１２を製造することができる。哺乳動物での発現に関して、上記ｐＥＤベ クターのほかにも、ｐＥＦ−ＢＯＳ（ミズシマ（Mizushima）ら、ヌクレイック ・アシッズ・リサーチ第１８巻５３２２頁（１９９０年））；ｐＸＭ、ｐＪＬ３ ならびにｐＪＬ４（ゴウ（Gough）ら、ＥＭＢＯ Ｊ.第４巻、６４５〜６３５頁 （１９８５年））；およびｐＭＴ２（ｐＭＴ２−ＶＷＦ由来、Ａ.Ｔ.Ｔ.Ｃ.＃６ ７１２２，ＰＣＴ／ＵＳ８７／０００３３参照）のごとき多くの発現ベクターが 知られている。酵母、昆虫、および細菌細胞において用いるための適当な発現ベ クターも知られている。かかる発現ベクターの構築および使用は十分に当業者の 範囲内である。 本発明において有用なインターロイキン−１２の組み換え製造に適する細胞は 、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、サル・ＣＯＳ細胞、マ ウ ス・３Ｔ３細胞、マウス・Ｌ細胞、ＮＳＯのごときミエローマ細胞、胎児ハムス ター腎臓細胞等のごとき哺乳動物細胞を包含する。知られた方法を用いるインタ ーロイキン−１２サブユニットをコードするＤＮＡ配列での酵母、昆虫、および 細菌細胞の形質転換、蛋白発現の誘導および増幅によってもインターロイキン− １２を製造することができる。 慣用的な精製方法により、細胞培養物または細胞抽出物から組み換え製造され たインターロイキン−１２を精製することができる。インターロイキン−１２を 含有する細胞培養物または細胞抽出物を、市販の蛋白濃縮フィルター、例えば、 アミコン（Amicon）またはミリポア・ペリコン（Millipore Pellicon）限界濾過 ユニットを用いて濃縮してもよい。濃縮工程後、濃縮物をゲル濾過媒体のごとき 精製マトリックスに適用することができる。別法として、アニオン交換樹脂、例 えば、懸下したジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）基を有するマトリックスまた は基質を用いることができる。マトリックスはアクリルアミド、アガロース、デ キストラン、セルロースまたは蛋白精製において通常使用される他のタイプのも のであってよい。別法として、カチオン交換工程を用いることができる。適当な カチオン交換体は、スルホプロピルまたはカルボキシメチル基からなる種々の不 溶性マトリックスを包含する。培養上清からのインターロイキン−１２の精製は 、レクチン−アガロース、ヘパリン−トヨパール（登録商標）またはチバクロム ブル−３ＧＡセファロース（登録商標）のようなアフィニティー樹脂による；あ るいはフェニルエーテル、ブチルエーテルまたはプロピルエーテルのような樹脂 を用いる疎水性相互作用クロマトグラフィー；あるいは免疫アフィニティークロ マトグラフィーによる１またはそれ以上のカラム工程を包含してもよい。最後に 、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体、例えば、懸下したメチルまたは他の脂肪族基を有 するシリカゲルを用いる１またはそれ以上の逆相高品質液体クロマトグラフィー （ＲＰ−ＨＰＬＣ）工程を用いて、本発明方法および組成物に用いるためのイン ターロイキン−１２をさらに精製してもよい。上記精製工程のいくつかまたはす べてを種々組合わせて使用して実質的に均一な単離組み換え蛋白を得ることがで きる。本発明において使用するためのインターロイキン−１２サブユニットまた はフラ グメントの精製は、ヘテロダイマー蛋白の精製のための最適プロトコールとは異 なるかもしれない。 好ましくは、ヒト・インターロイキン−１２を上記のごとく組み換え製造する 場合、以下の方法によりそれを精製してもよい。ヒト・インターロイキン−１２ が生産されている細胞をならし培地から濾過により除去し、１０〜３０ｍＭＴｒ ｉｓ−ＨＣｌ,ｐＨ７.８〜８．３で平衡化したＱ−セファロース・ファストフロ ー（登録商標）（ファルマシア（Pharmacia）から市販されている）または等価 なアニオン交換媒体に該ならし培地を負荷する。次いで、カラムを、同じバッフ ァーで完全に洗浄し、次いで、３０〜４５ｍＭヒスチジン,ｐＨ５.１〜５.８、 次いで、もとの平衡化バッファーで洗浄する。２０〜５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣ ｌ,ｐＨ７.８〜８.５および０.１５ないし０.５０Ｍ ＮａＣｌを含有するバッ ファーで組み換えヒト・インターロイキン−１２をカラムから溶離する。２０〜 ５０ｍＭ ＭＥＳ,ｐＨ５.７〜６.４で平衡化したＣＭ−セファロース・ファス トフロー（登録商標）（ファルマシアから市販されている）または等価なカチオ ン交換媒体に該溶離物質を負荷し、次いで、同じバッファーで完全に洗浄する。 ２０〜４０ｍＭリン酸ナトリウム,ｐＨ６.８〜７.５および０.２〜０.５Ｍ Ｎ ａＣｌを含有するバッファーでカラムを洗浄する。ＣＭ−セファロース・ファス トフロー（登録商標）カラムにおいて用いた溶離バッファーで洗浄し平衡化した アミコン（登録商標）Ｓ１Ｙ３０または等価なスパイラルカートリッジ膜を用い て溶離した物質を濃縮する。Ｓ２００セファクリル（登録商標）（ファルマシア から市販されている）または等価なサイズ排除樹脂を用いるサイズ排除である最 終クロマトグラフィー工程のカラム体積の約５％にまで該物質を濃縮する。リン 酸緩衝化セイライン,ｐＨ７.２〜７でサイズ排除カラムを平衡化し溶離し、本発 明方法に使用するために組み換えヒト・インターロイキン−１２ピークを集めて 濾過する。蛋白精製の当業者は別の精製方法を用いて、本発明方法に使用するた めの組み換え製造されたヒト・インターロイキン−１２を得ることができる。 本来的にインターロイキン−１２を生産する細胞の培地または抽出物からイン ターロイキン−１２を精製し、本発明において使用してもよい。天然において生 産されるインターロイキン−１２の典型的な精製スキームはＰＣＴ／ＵＳ９１／ ０６３２２およびＥＰ４３３８２７に示されている。 本発明方法における使用に関し、対宿主移植片疾患の発生の危険性のある哺乳 動物に治療上有効量のインターロイキン−１２を投与する。本明細書の用語「治 療上有効量の」は、有意に患者に対して利益となるに十分な量の医薬組成物の各 活性成分の全量または方法を意味し、該利益とは、担当医師により決定される、 インターロイキン−１２を投与されていない比較患者群について予想される急性 または慢性の対宿主移植片疾患の発生または重さに対する該疾患の発生または重 さの減少である。単独で投与される個々の活性成分に用いる場合は、該用語は、 当該成分のみについていう。組み合わせて用いる場合には、該用語は、組み合わ せて、順次、または同時に投与される場合であっても、治療効果を生じる活性成 分の合計量をいう。 本発明方法の実施に際して、対宿主移植片疾患の発生の危険性のある哺乳動物 に治療上有効量のインターロイキン−１２を投与する。本発明方法に応じてイン ターロイキン−１２を単独で、またはＴ細胞枯渇自己由来または同系骨髄を用い るような他の療法、免疫抑制剤、サイトカイン、リンホカイン、もしくは他の造 血因子と組み合わせて投与してもよい。 Ｔ細胞枯渇自己由来または同系骨髄、１種またはそれ以上のサイトカイン、リ ンホカイン、もしくは他の造血因子とともに同時投与する場合、インターロイキ ン−１２をＴ細胞枯渇自己由来または同系骨髄、１種またはそれ以上のサイトカ イン、リンホカイン、もしくは他の造血因子と同時または順次投与してもよい。 順次投与する場合、担当医師は、Ｔ細胞枯渇自己由来または同系骨髄、１種また はそれ以上のサイトカイン、リンホカイン、もしくは他の造血因子と組み合わせ てインターロイキン−１２を投与する適切な順序を決定するであろう。 本発明方法の実施に用いるインターロイキン−１２の投与を、経口的摂取、吸 入、または皮内、皮下もしくは静脈注射のごとき種々の慣用的経路において行う ことができる。患者への静脈または皮下投与が好ましい。 治療上有効量のインターロイキン−１２を経口投与する場合、インターロイキ ン−１２は錠剤、カプセル、粉末、溶液またはエリキシルの形態であろう。錠剤 形態で投与する場合、本発明医薬組成物はさらにゼラチンのごとき固体担体また はアジュバントを含有していてもよい。錠剤、カプセルおよび粉末は、約５ない し９５％のインターロイキン−１２、好ましくは、２５〜９０％のインターロイ キン−１２を含有する。液体形態で投与する場合、水、石油、ピーナッツ油、鉱 油、大豆油もしくはゴマ油のごとき動植物の油、または合成油脂のごとき液体担 体を添加してもよい。液体形態の医薬組成物がさらに生理食塩水、デキストロー ス、または他のサッカリド溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコ ールもしくはポリエチレングリコールのごときグリコールを含有していてもよい 。液体形態で投与する場合、医薬組成物は約０.５ないし９０重量％のインター ロイキン−１２、好ましくは、約１ないし５０％のインターロイキン−１２を含 有する。 治療上有効量のインターロイキン−１２を、静脈、皮内または皮下注射により 投与する場合、インターロイキン−１２はパイロジェン不含の非経口的に許容さ れる水溶液の形態であろう。ｐＨ、等張性、安定性等に関してかかる非経口的に 許容される蛋白溶液は当業者の範囲内である。静脈、皮内または皮下注射のため の好ましい医薬組成物は、インターロイキン−１２のほかに、注射用塩化ナトリ ウム、注射よリンゲル、注射用デキストロース、注射用デキストロースならびに 塩化ナトリウム、注射用乳酸リンゲル、または当該分野で知られた他の担体を含 有すべきである。また、本発明方法において用いる医薬組成物は、安定化剤、保 存料、バッファー、抗酸化剤、または当業者に知られた他の添加物を含有してい てもよい。本発明方法の実施に用いる医薬組成物は、溶液１ｍｌあたり約０.１ ｐｇないし約１００ｍｇのインターロイキン−１２、好ましくは溶液１ｍｌあた り約０.１ｍｇのインターロイキン−１２を含有すべきであると考えられる。 本発明による対宿主移植片疾患の予防または改善方法を実施する場合、インタ ーロイキン−１２適用期間は、連続的または断続的な皮下または静脈投与であれ ば移植開始時から１２〜４８時間の範囲であろう。本発明の目的のために、「骨 髄移植時の際に」は、骨髄移植の１時間前までの期間または骨髄移植の１ないし ２４時間後までの期間であると定義される。対宿主移植片疾患の予防または改善 方法の一例として、好ましくは、１ｎｇ／ｋｇないし１００μｇ／ｋｇのインタ ーロイキン−１２を毎日哺乳動物に投与してもよく、より好ましくは、５ｎｇ／ ｋｇないし１０μｇ／ｋｇのインターロイキン−１２を毎日哺乳動物に投与して もよく、最も好ましくは、１０ｎｇ／ｋｇないし１μｇ／ｋｇのインターロイキ ン−１２を毎日哺乳動物に投与してもよい。１の好ましい用量規則において、１ 回目のインターロイキン−１２を骨髄移植１時間後に与え、移植後１日目および ２日目に２回ないしそれ以上の回数投与する。別の治療規則を個々の患者に適用 してもよく、治療すべき症状の性質ならびに重さ、および患者が以前受けていた 治療の性質を考慮して担当医師によって決定されるであろう。 進行中の急性または慢性対宿主移植片疾患の治療のために、対宿主移植片疾患 を予防または改善するための上記治療規則の変更を行ってもよい。本発明の目的 のために、「急性対宿主移植片疾患」は、ヒトにおいては移植後３ないし１００ 日の期間に、マウスにおいては移植後３ないし３０日の期間に起こるものと定義 され；「慢性対宿主移植片疾患」は、ヒトにおいては移植後１００日たってから のいずれかの時期に、マウスにおいては移植後３０日たってからのいずれかの時 期に起こるものと定義される。進行中の急性または慢性対宿主移植片疾患を治療 する方法の一例として、急性または慢性対宿主移植片疾患の改善または寛解が見 られるまで、１ｐｇ／ｋｇないし１００μｇ／ｋｇを急性または慢性対宿主移植 片疾患にかかっている哺乳動物に毎日投与してもよい。最終的に、本発明方法に おけるインターロイキン−１２の医薬組成物を用いる皮下または静脈からの治療 の適当な期間を担当医師が決定するであろう。 実施例１ マウスにおける対宿主移植片疾患（ＧＶＨＤ）の抑制のための組み換えネズミ・ ＩＬ−１２の使用 ３０匹のＣ５７Ｂ１／１０マウスを、１０.２５Ｇｙの全身照射により致命的 に放射線照射した。同じ日に、これらのマウスのうち２７匹に、十分にミスマッ チの（複数の副組織適合性抗原のミスマッチがある）Ａ／Ｊ提供者マウス由来の ９ｘ１０⁶個の骨髄細胞および１３ｘ１０⁶個の脾臓細胞（ＧＶＨＤを誘導するＴ リンパ球のさらなるソースとして）を静脈から接種した。さらに、これらのマウ スのうち１８匹には、同じ接種物中における５ｘ１０⁶個のＢ１０（すなわち、 宿主タイプ同系の、ネズミの自己由来骨髄のカウンターパート）Ｔ細胞枯渇（Ｔ ＣＤ）骨髄細胞を与えた。残りの３匹のマウスは非ＧＶＨＤ対照として役立ち、 Ｔ細胞枯渇Ｂ１０骨髄のみを与えられた。 Ａ／Ｊ骨髄および脾臓細胞ならびにＴＣＤ Ｂ１０を与えられた１８匹のマウ スのうち９匹を、０、１、および２日目（０日目は移植の日）に、１日１μｇ（ 約５０μｇ／ｋｇ）の用量で腹腔内投与されるインターロイキン−１２（シェー ンハウト（Schoenhaut）ら、ジャーナル・オブ・イミュノロジー（J.Immunol.） 第１４８巻、３４３３〜３４４０頁（１９９２年））で処理した。さらに、Ａ／ Ｊ骨髄および脾臓細胞のみを与えられた群にも同様のインターロイキン−１２予 防コースをたどらせた。 この実験の結果は、Ａ／Ｊ骨髄および脾臓細胞ならびにＴＣＤ Ｂ１０を与え られた大部分のマウスは１０日目までに死亡したというものであった。その死は ＧＶＨＤによるものであるが、ＴＣＤ同系骨髄のみを与えられた受容者はすべて 非常に健康で生存した。やはりＡ／Ｊ骨髄および脾臓細胞ならびにＴＣＤＢ１０ 骨髄細胞を与えられたインターロイキン−１２処理群においては、９匹の動物は １０日目までに死んだものはなく、すべてが２０日目まで生存していた。Ａ／Ｊ 骨髄および脾臓細胞を与えられたがＴＣＤ Ｂ１０を与えられなかった動物であ って、インターロイキン−１２を与えられた９匹の動物のうち５匹は９日目まで に死亡したので、このインターロイキン−１２の防御的効果はＴＣＤＢ１０骨髄 細胞の同時投与にいくぶん依存した。よって、インターロイキン−１２は急性Ｇ ＶＨＤ死亡に対する防御を行い、ＴＣＤ宿主タイプの骨髄細胞がさらに与えられ た場合にこの効果が最も顕著であった。第２の実験において、Ａ／Ｊ骨髄および 脾臓細胞により誘導される対宿主移植片疾患に対するインター ロイキン−１２予防を受けた動物は、Ｔ細胞枯渇宿主タイプ骨髄存在下および不 存在下にいずれにおいても同様の対宿主移植片疾患防御を示した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ウルフ，スタンリー・エフ アメリカ合衆国マサチューセッツ州02174、 アーリントン、グランドビュー・ロード52 番 (72)発明者 サイクス，メガン アメリカ合衆国マサチューセッツ州02129、 チャールズタウン、エイス・ストリート 197番、アパートメント301

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．骨髄移植の際に、治療上有効量のインターロイキン−１２を哺乳動物に投 与することからなる対宿主移植片疾患の予防方法。 ２．インターロイキン−１２の治療上有効量が１ないし１００μｇ／ｋｇ体重 からなる請求項１の方法。 ３．骨髄移植の日から始めて３日間インターロイキン−１２が投与される請求 項２の方法。 ４．骨髄移植の際に、治療上有効量のインターロイキン−１２を哺乳動物に投 与することからなる対宿主移植片疾患の改善方法。 ５．インターロイキン−１２の治療上有効量が１ｎｇないし１００μｇ／ｋｇ 体重からなる請求項４の方法。 ６．骨髄移植の日から始めて３日間インターロイキン−１２が投与される請求 項５の方法。 ７．治療上有効量のインターロイキン−１２を対宿主移植片疾患にかかってい る哺乳動物に投与することからなる対宿主移植片疾患の治療方法。 ８．インターロイキン−１２の治療上有効量が１ないし１００μｇ／ｋｇ体重 からなる請求項７の方法。 ９．急性対宿主移植片疾患の改善が見られるまでインターロイキン−１２が毎 日投与される請求項８の方法。 １０．対宿主移植片疾患の寛解が見られるまでインターロイキン−１２が毎日 投与される請求項８の方法。