JPH08512336A

JPH08512336A - 脂肪酸およびその誘導体のクロマトグラフィーによる分画方法

Info

Publication number: JPH08512336A
Application number: JP6524127A
Authority: JP
Inventors: ペル、ミッシェル; ニクー、ロジェ−マルク; ブレイヴィク、ハラルド
Original assignee: ノルスク・ヒドロ・アクシェセルスカープ
Priority date: 1993-04-29
Filing date: 1994-04-29
Publication date: 1996-12-24
Also published as: US5719302A; WO1994025552A1; ATE147776T1; EP0697034A1; ES2097047T3; AU676910B2; DE69401506D1; DE69401506T2; CA2159823A1; DK0697034T3; AU6691794A; EP0697034B1; CA2159823C

Abstract

(57)【要約】ポリ不飽和脂肪酸および望まれない物質を含む混合物から、精製されたポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体を回収するための方法において、供給物が、好適には溶離液として超臨界圧力での流体を使用した固定床クロマトグラフィーまたは溶剤が超臨界圧力での流体である多段階向流カラム分画を用いる前処理に施され、続いて前処理から回収された所望の脂肪酸の高められた濃度を含む１つ以上の画分が、溶離液として好ましくは超臨界圧力での流体を使用するシミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーを用いるさらなる分画に施され、場合によって前処理が省略される方法が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】脂肪酸およびその誘導体のクロマトグラフィーによる分画方法本発明は、ポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体を含む組成物のクロマトグラフィーによる分画方法に関するものである。脂肪酸またはその誘導体の分画は、近年幅広く試験されてきている。その興味のもたれる理由は、とくに長鎖のポリ不飽和脂肪酸のような幾つかの脂肪酸が血小板凝集、炎症、免疫応答のような生物学的機能の調節に重要な役割を果たす、プロスタサイクリンおよびプラスタグランジンを含むいわゆるプロスタノイド化合物の先駆物質であるという認識にある。本明細書において、ポリ不飽和脂肪酸は、末端のメチル基から数えるとき最初の二重結合の位置をオメガ−またはｎ−数とするシステムにより定められる。例えばオメガ−３またはｎ−３脂肪酸の場合、最初の二重結合は該酸の末端メチル基から３番目の炭素原子に存在する。また、例えばＣ１８：３と脂肪酸が定められたとき、これは鎖の中に１８個の炭素原子を有し、かつ３つの二重結合を有する脂肪酸について言及している。２つの重要なポリ不飽和オメガ−３脂肪酸、つまりＥＰＡ（エイコサペンタエン酸、Ｃ２０：５）およびＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸、Ｃ２２：６）は、魚油に見いだされている。これらの脂肪酸の生物学的性質は、数多くの刊行物および特許、例えば英国特許第２２２１８３号明細書に討論され、ＥＰＡおよびＤＨＡの濃縮混合物は、心臓血管の疾病の多くの危険因子の治療および予防に有効な生成物であることを教示している。同様に、リノレン酸またはアラキドン酸のようなオメガ−６系のポリ不飽和脂肪酸は、栄養学的および薬学的使用のために、亜麻仁油またはコーン油から製造することができる。毒性の存在することなく活性であるべきために、これらのポリ不飽和化合物は、天然に存在しているようにすべてｃｉｓ（Ｚ−Ｚ）形を示さなくてはならない。不幸なことに、ポリ不飽和脂肪酸は酸素の存在下で加熱されると極端に変質しやすい。なぜならば、これらはまず異性化し、過酸化し、オリゴマー化するからである。したがって、純粋な脂肪酸を調製するために、これらの生成物を分画・精製することは非常に困難である：蒸留（真空下でさえ）は、所望されない生成物の分解を導く；液−液抽出または結晶化は、とくに栄養学的または薬学的使用のために高純度の生成物が要求されないときでも有効ではない。ポリ不飽和脂肪酸は、魚油または植物油のような天然の材料に見いだされるべきである。このような油において、またこのような油から得られるポリ不飽和脂肪酸の濃縮物において、栄養学的および薬学的使用を目的とする製造物にとっては好ましくは除去すべきである、多くの種類の副生物／汚染物が存在する。このような望まれない副生物／汚染物の多くの種類のディスカッションは、H．Breiv ikおよびK.H．Dahlの“ｎ−３脂肪酸の製造および品質管理”に見られる。また、J.C．FrolichおよびC.von Schacky、Klinische Pharmakologie、さらにClinic al Pharmacology、５巻、魚類、魚油および人間の健康、1992年、W．Zuckschwer dt Verlag、ミュンヘン参照。脂肪酸は、容易に分離され得る単純な２成分の混合系としては天然に存在していない。天然油の分画により純粋なポリ不飽和脂肪酸を得ることの困難性を説明するために、以下の表１および２に、簡単なエタノールエステル交換（続いて分子蒸留による不飽和脂肪酸鎖の分画を行うかまたはせずに）による天然資源から得られた幾つかの典型的な脂肪酸エチルエステル混合物の組成を示す。明らかに、混合物中で回収される最も興味のある成分は、変質しやすいポリ不飽和脂肪酸であり、これは、食用、薬学的または化粧の用途の場合はできる限り高度に純化しなくてはならない。このような分画および精製に今日最も一般的に使用されているプロセスは、エステル交換の次に、以下のような１種以上のプロセスの組み合わせである：低温での分画結晶化、分子蒸留を行って鎖長に応じた分離の達成、尿素アダクト結晶化または金属塩溶液での抽出による飽和およびポリ不飽和脂肪酸の分離の達成、向流カラムでの超臨界流体分画、および液体または超臨界溶離液を用いる固定床クロマトグラフィー（M．PERRUT、ＬＣ−ＧＣ、International、１巻、６号、５８頁（1988年）の論文およびノルウエー国特許第１６３，１３９号参照）。当業者に知られているように、原料油はエステル交換の前にしばしば精製および前処理されている。しかしながら、上記で述べた問題点により、精製したポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体の分離および精製は、実施するには高価であり、また所望の物質の損失が多い。したがって、一般的な原料から純粋なポリ不飽和脂肪酸を回収するための改善された方法を見いだすことが、長い間の当業者の課題であった。ポリ不飽和脂肪酸およびそのトリグリセライド、エステル、アミドおよび塩類のような誘導体を含む複雑な混合物の分画は、特定の予備精製プロセスと組み合わせた、および／またはシステムにおける溶離液として超臨界圧力である流体を用いた、シミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーシステム（simulated continuous countercurrent moving bed chromatographic system）を用いることにより、簡単に達成可能であるという、驚くべきことが見いだされた。シミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーシステム（以下、簡潔にするためにしばしば“シミュレート移動床システム”という）の原理を討論する前に、一般的な固定床クロマトグラフィーシステムについて記載する。よく知られているように、従来の固定床クロマトグラフィーシステムは、次のような概念をベースとしている：分離されるべき成分を含む混合物は、一般的に円筒形で（カラムと呼ばれる）、流体に対して高い浸透性を示す多孔質材料のパッキングを含む（固定相と呼ばれる）容器を通じて浸透していく（通常は溶離液と共に浸透し、この場合、用語“分取溶離クロマトグラフィー”がしばしばこのシステムに適用される）。混合物の各成分の浸透速度は、各成分の物理的性質に依存するため、各成分は連続的且つ選択的にカラムから溶出される。幾つかの成分は固定相に強く固定される傾向があるので、遅れて出てくるが、その他は弱い固宅であり、短時間でカラムから出てくる（もし溶離液が使用されたならばそれとともに）。数多くの様々な固定床クロマトグラフィーシステムが提案されており、分析および工業的製造のために使用されている。大規模でのクロマトグラフィープロセスに関して、好適なシステムは言及され、最近のシンポジウムで比較されている（分取および工業クロマトグラフィーに関する第９回シンポジウム会報、 1992年4月、M．PERRUT編集、ISBN 2-905267.18.6、R.M．NICOUDおよびM．BAILLY 、205〜220頁の論文参照）。従来、大規模固定床クロマトグラフィーが、ＥＰＡおよびＤＨＡの精製画分を得るために用いられてきた（M．Perrut、1988年、分取高速液体クロマトグラフィーによるポリ不飽和脂肪酸（ＥＰＡおよびＤＨＡ）エチルエステルの精製。ＬＣ−ＧＣ６：914-20、JM Beebe、PR BrownおよびJG Turcotte（1988年）、魚油から誘導されたオメガ−３ポリ不飽和脂肪酸エステルの分取高速液体クロマトグラフィー。J．Chromatogr．459:369-78）、L．Doguet、D．Barth、M．Perrut 、分取超臨界クロマトグラフィーによるポリ不飽和脂肪酸エステルの分画、超臨界流体に関する対話、1991年10月16〜17日、パリ、M．Perrut編集）。しかしながら、低い生産性および製造物の高い希薄化により、この技術は市販製造には法外に高価であると考えられている。対照的に、シミュレート移動床システムは、吸着剤を含む数多くの個々のカラムからなり、これらは連続的に互いに連結され、且つシステムにおける混合物および溶離液の注入ポイントと分離された成分の収集ポイントとを周期的に移動させることにより操作される。この総体的な効果は、固体吸着剤の移動床を含む単一カラムの操作をシミュレートすることである。従来の固定床システムは、溶離液が通過する固体吸着剤の固定床を含むカラムからなるが、シミュレート移動床システムは、連続向流移動床をシミュレートするように操作される。シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムの基本的な操作原理は、添付の図面の図１を参照して、以下、本明細書によりさらに記載されるであろう。液体溶離液を採用するシミュレート移動床クロマトグラフィーは、すでに公知であり、とくに２つの非常に類似した成分の分離や、類似成分の混合物から、ある１つの成分を分離するために、２０年以上前から使用されている。シミュレート移動床の有利さは、従来の固定床クロマトグラフィープロセスと比較することにより明確となる： − バッチシステムではなく、連続的に操作される； − 溶離液のラフィネートおよび抽出成分の希釈が著しく低減される：好適なケースにおいて、この成分は供給時と同じかあるいは高濃度で回収されるが、固定床プロセスにおいて、画分の希釈倍率はしばしば１００〜１０００であり、このことは溶離液の取り扱いおよび溶離液／生成物分離に関して非常に高いコストをもたらす； − 得られる画分に必要となれる理論的プレート数が、従来の固定床プロセスに要求されるそれよりも著しく低減される。このことは固定相に関して、且つ低圧または中圧での作業を可能にする装置に関してコストが著しく低減する；このようなプロセスの概念は、単純な２成分系の混合物、例えばパラキシレンの精製、またはグルコース／フラクトースの分離を、非常に高い流量および低コストで行うために用いられてきた。シミュレート移動床クロマトグラフィーのプロセスおよび装置は、幾つかの特許に記載されており、例えば米国特許第2,985,589号明細書、同第3,696,107号明細書、同第3,706,812号明細書、同第3,761,533号明細書、仏国公開特許第A−210 3302号明細書、同第2651148号明細書および同第2651149号明細書が挙げられる。ここに記載されている趣旨は、“分取および製造規模のクロマトグラフィー”、 GenetsosおよびBarker編集、Marcel Dekker社、ニューヨーク、1933年に詳細に記載されている。しかしながら、現在まで、シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムは、複雑な混合物、とくにポリ不飽和脂肪酸を含む混合物からそれを精製するために分離・回収するためには実用上十分なものではなかった。すなわち、もしこのような混合物がシミュレート移動床システムに注入されると、２つのポリ不飽和脂肪酸（例えばＥＰＡおよびＤＨＡ）が互いに分離されることが見いだされる。しかしながら、供給した混合物のすべての他の成分は、この２つの画分に存在し、したがって精製した酸の総濃度はあまり高められない。例えば、ＥＰＡおよびＤＨＡの分離の場合、Ｃ₂₀未満の鎖長を有するほとんどすべての脂肪酸は、通常ＥＰＡ画分に存在するが、ＤＨＡ画分はこれよりも多い鎖長を有する脂肪酸との混合物となる。 Journal of Chromatography、108巻、（1975年）、285〜297頁の論文“連続液体クロマトグラフィー”において、Szepesyらは、シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムを記載し、この方法がｎ−ヘキサン中、ベンゼンおよびナフタレンの混合物の分離のために使用され、またその装置について詳細に述べている。この著者は、さらにこの装置を用いてＣ₁₆−Ｃ₂₂の飽和および不飽和脂肪酸メチルエステルの分離を達成したと概説している。なお、とくにこの後者の装置の場合、著者はその装置を改造し、もはや連続向流移動床プロセスとして操作されてはいない。本発明を完全に理解するために、クロマトグラフィーシステムにおける溶離液としての超臨界流体の使用をディスカッションする必要がある。純粋な化合物のある状態（すなわち固体、液体または気体）から、化合物の温度および／または圧力を変更することにより他の状態に変化可能であることはよく知られている。さらに、沸騰することなく連続的に液体状態から気体状態に変化し、また逆方向では凝縮することなく変化する温度および／または圧力の値、すなわち“臨界値”が存在することも知られている。超臨界状態における液体、すなわち純粋な化合物の場合、圧力・温度のそれぞれが臨界圧力および臨界温度よりも高いか、あるいは複数の成分の混合物の場合、ダイアグラム（圧力、温度）上に示される臨界点を囲む曲線を超えて位置する代表的なポイント（圧力、温度）により特徴付けられる状態における流体は、数多くの物質に対して高い溶解力を示す（圧縮された気体状態の同様の流体で見られるそれよりも著しく高い）。同じ挙動が、“臨界未満”液体、すなわち純粋な化合物の場合、臨界圧力を超える圧力且つ臨界温度未満の温度により特徴付けられる状態、あるいは複数の成分の混合物の場合、臨界圧力を超える圧力、且つ複数の成分の臨界温度未満の温度により特徴付けられる状態における液体においても見られる（雑誌“Informations Chimie”、３２１号、1991年10月、166〜177 頁、Michel PERRUTの論文、“超臨界流体の大規模生産”参照）。超臨界状態におけるこのような流体の溶解力の重要且つ制御可能な変化は、多くのプロセスに用いられている：抽出（固体／流体）、分画（液体／流体）、分析・分取溶離クロマトグラフィーおよび材料処理（セラミック、ポリマー等）；化学的または生物学的反応もまたこのような溶剤において行われる。超臨界圧力での流体を用いるプロセスにより提供される主要な有利さのうちの一つは、数多くの刊行物にも記載されているように、溶剤（流体）と抽出物および溶質との間の簡単な分離にある。このような流体の興味ある性質は、分析のためか（この技術は今日実験室において幅広く用いられている）、あるいは仏国特許第2527934号明細書に開示されたプロセスによる製造のために、溶離クロマトグラフィーにおいて長い間開発されてきた。これらの流体は、米国特許第4061556号明細書、同第4124528号明細書および同第4147624号明細書に記載されているように吸着剤に固定される化合物のための脱着として用いられている。近年の特許出願（仏国特許出願第9205304号、同第9209444号、PCT FR9300419 号）において、シミュレート移動床の様々なゾーンに、様々な溶離力を有する溶離液を用いる可能性がディスカッションされており、従来のプロセスに対して、溶離力の変化を許す優れたプロセスおよび装置を示す単純な２成分系の混合物を使用した幾つかの例と、一定の溶離力を有する装置とが示されている。とくに、これらの出願は、超臨界圧力での流体、すなわち超臨界流体または臨界未満の流体の使用を記載しており、その物理化学的性質は、たとえ工業的スケールの装置であっても、簡単な溶離力の変更を可能にしている。さらに、溶離液として非毒性の非引火性の二酸化炭素を使用することは、従来の有機溶剤に関係するいかなる危険を避けるものであり、潜在する危険な有機溶剤の痕跡量をも認められない精製された最終製品を得ることができる。上記の同時係属中の英国、仏国および国際特許出願の内容を、ここに参照として引用する。上記のように、シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムにおける溶離液として、超臨界圧力での流体を用いるという概念は、単純な２成分系の混合物の分離に適用されてきたが、この概念をポリ不飽和脂肪酸の精製に利用することは従来から提案されていない。なぜならば、いかなる場合でも最終分画／精製ステップの前に前処理が行われ、数多くの成分を含む複雑な混合物は、上記のように常に処理されているからである。とくに二酸化炭素またはプロパン、ヘキサンおよびアルコール類のような有機溶剤と混合された二酸化炭素の超臨界流体を用いる向流カラムにより、植物油または動物油を分画することが可能であることは、かなり前から知られている（例えばオーストリア特許第328597号明細書、同第347551号明細書、欧州特許第7414 51号明細書、ドイツ特許第2332038号明細書、Coenen H.およびKriegel E.、Chem .Ing.Tech.、５５巻、1983年、890頁；Zosel K.、Angew.Chem.、990巻、1978年、748頁；Brunner G.、Peter S.、Chem.Ing.Tech.53巻、1981年、529頁；Eisenb ach W.、Ber.Bunsenges.、Phys.Che、88巻、1984年、882頁参照）。しかしながら、ポリ不飽和脂肪酸およびその誘導体の複雑な混合物の精製にこの技術を適用することは、多くの用途にとって、満足のいかない精製度の画分の回収しか導かれない。したがって、従来技術の状態を考慮すると、ポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体を含む組成物の分画のための改善されたプロセスを提供し、しかもシミュレート移動床クロマトグラフィーシステムの有利さを利用できるプロセスを提供するという技術的および商業的進歩が必要であろう。驚くべきことに、本発明者らは、本発明に従えば従来の固定床クロマトグラフィープロセスを使用するか、あるいは多段階の向流カラムによる超臨界流体分画を使用して、ポリ不飽和脂肪酸を含む組成物の分離・精製を最初に行い、続いてシミュレート移動床システムを用いて精製を行うことにより、シミュレート移動床技術を利用して精製したポリ不飽和脂肪酸を回収することの困難性を実質上克服できることを見いだした。さらに本発明者らは、本発明に従えば幾つかの場合において、もしシミュレート移動床システムにおける溶離液として超臨界圧力で流体を用いる精製を行えば、この第１の精製ステップを完全に省略することができることを見いだした。したがって本発明は、現在行われている方法よりも、生産性およびコストの面で優れた、精製されたポリ不飽和脂肪酸の回収方法を提供することができるものである。以下、用語“ポリ不飽和脂肪酸”（しばしばＰＵＦＡと略される）とは、ポリ不飽和脂肪酸の遊離酸形、さらに該酸の誘導体をも含む。その誘導体は、グリセライド、エステル、リン脂質、アミド、ラクトン、塩類その他の誘導体であることができる。とくに興味のもたれるＰＵＦＡは、次のものを包含する：ＥＰＡ、ＤＨＡ、ＧＬＡ（ガンマリノレン酸）およびＤＧＬＡ（ジホモガンマーリノレン酸（Ｃ２０：３、ｎ−６））。さらに詳細には、本発明はその一つの見地において、前記のＰＵＦＡまたは複数のＰＵＦＡを含む供給組成物から、１種以上の精製されたＰＵＦＡまたはＰＵＦＡ混合物を回収する方法を提供するものであり、この方法は、（１）溶剤が超臨界圧力での流体である（ａ）固定床クロマトグラフィーか、あるいは（ｂ）多段階向流カラム分画により、前記組成物を処理し、１種以上のＰＵＦＡを多く含有する画分を回収し、および（２）前記のステップ（１）で回収された、ＰＵＦＡを多く含有する画分または複数の画分を、さらにシミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーによりさらに分画し、精製されたＰＵＦＡまたはＰＵＦＡ混合物を含む１つ以上の画分を回収するというものである。さらなる見地によれば、本発明は、前記のＰＵＦＡまたは複数のＰＵＦＡを含む供給組成物から、１種以上の精製されたＰＵＦＡまたはＰＵＦＡ混合物を回収する方法を提供するものであり、この方法は、溶離液として超臨界圧力での流体を使用する、シミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーによる分画に前記組成物を施し、精製されたＰＵＦＡまたはＰＵＦＡ混合物を含む１つ以上の画分を回収するというものである。本発明のこの後者の方法により、従来の操作でもってシミュレート移動床システムの様々なゾーンの溶離力を調節することが可能となり、精製操作が容易に制御可能となり、所望の組成の生成物を得ることができる。本発明のとくに好適な態様において、超臨界圧力での流体を使用する手段は、溶離液または溶剤が超臨界圧力の流体である固定床クロマトグラフィーか、あるいは多段階向流カラム分画を使用するＰＵＦＡ組成物の第１の精製と組み合わされて使用される。このように、好適な態様において本発明の方法は、（１）溶離液または溶剤が超臨界圧力での流体である（ａ）固定床クロマトグラフィーか、あるいは（ｂ）多段階向流カラム分画により、１種以上のＰＵＦＡを含む組成物を処理し、１種以上のＰＵＦＡを多く含有する画分を回収し、および（２）前記のステップ（１）で回収された、ＰＵＦＡを多く含有する画分またはその複数の画分を、さらに溶離液として超臨界圧力での流体を使用するシミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーによりさらに分画し、精製されたＰＵＦＡまたはＰＵＦＡ混合物を含む１つ以上の画分を回収するというものである。本明細書において下記に示される実施例に記載されているように、本発明の方法によれば、所望の成分を含む複雑な混合物から、純度の高い状態で所望のポリ不飽和脂肪酸を回収することができる。好適な態様において、純度は６０％を超えるものであり、さらに好ましくは９０％以上である。上記のように、本発明の一つの見地による方法は、固定床クロマトグラフィー分画か、あるいは多段階向流カラムでの超臨界流体分画からなる第１の分画ステップにより特徴付けられ、これにより供給混合物の選択的な分画が達成され、続いてシミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーステップが行われる。固定床クロマトグラフィーシステムを用いる第１の分画を行う場合において、従来の液体溶離液か、あるいは溶離液として超臨界圧力での流体を用いることができる。これとは別に、第１の精製ステップは、溶剤として超臨界圧力である流体を用い、１段階以上（例えば２段階）の多段階向流カラムによる分画を含む。本発明の第１の分画ステップにおいて溶離液または溶剤として上記の超臨界圧力で用いることのできる材料の例は、二酸化炭素、亜酸化窒素、ハロハイドロカーボン（例えばハロゲン化メタン、エタン、プロパン）および低級（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルカン類である。これらの内、二酸化炭素が幾つかの理由で本発明に好適である：その臨界温度が雰囲気温度に近いので、熱に分解しやすい分子でも温度を低くして処理することができる；非毒性で非引火性である；および高い純度で低いコストで幅広く入手可能である。当業者に知られているように、超臨界流体または臨界未満の液体には、有機の補助溶剤を含むのがしばしば有利となる。好適な補助溶剤は、メタノール、エタノール、アセトン、ヘキサンおよび酢酸エチルのような様々なエステル類を含む。複雑なＰＵＦＡ含有混合物を精製するために、１つ以上の多段階向流カラムに超臨界流体分画を使用しただけでは、たとえ精製される画分の頻繁な内部または外部還流をカラムのヘッドに適用しても、高い純度の精製物を満足に回収することができないであろう。逆に、もし高い純度の画分が必要である場合は、極端に低い生産性であることが分かっている。一方、第１の分画ステップとしてこの技術を使用することは、ＰＵＦＡ混合物から最も多くの不純物（重いおよび軽い画分）の除去を可能にし、これにより部分的に精製された画分が得られ、続くシミュレート移動床システムを使用する第２の分画段階にとくに好適となる。第１の分画ステップにおいて、望まれない副生物を多量に含む幾つかの画分は分離され排除され、続くステップにおいて、分離されるべきＰＵＦＡ成分を多量に含む画分が、シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムに導入され、さらなる精製および分離が行われる。この画分は、１つの注入ポイントか、あるいはしばしば有利には別の異なる複数の注入ポイントを有するシミュレート移動床システムに導入することができる。また本発明者らは、第１の分離で得られた画分がシミュレート移動床システムに異なる場所で注入されるとき、予期されない効果を観察した。それは、下記の実施例１ａおよび１ｂに示されており、この記載された実験において、画分の個別の注入は、単一場所での注入よりも良好な生産コストを可能するすることが示されている。したがって、個別に各画分を注入することがしばしば好ましいことになる。シミュレート移動床クロマトグラフィー分離ステップにおける溶離液として、超臨界流体が使用される場合において（このステップが単独で使用されるか、第１の分画ステージに続くかのいずれでも）、第１の分画ステップの超臨界流体溶離液として使用されるのに好適である上記の化合物または該化合物の混合物を、超臨界流体として使用することができる。繰り返すが、二酸化炭素が好適な溶離液である（必要に応じて有機補助溶剤を併用できる）。ポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体の共通の混合物源に見いだされる望まれない成分または不純物は、一般的に次の３つのカテゴリーのうちの１つまたはその他に属する：（１）天然油（例えば魚油また植物油）に存在するそれ由来の化合物。海洋の有機体または植物または種子から抽出される油に通常存在するすべての成分は、さらなる精製のための出発材料である濃縮物にある程度存在する。脂肪酸以外では、ステロール類（主にコレステロール）、ビタミン類、ポリクロロビフェニル（ＰＣＢ）、ポリ芳香族炭化水素（ＰＡＨ）殺虫剤、ダイオキシン、重金属のような環境汚染物質が含まれる。本発明の方法は、このような汚染物または望まれない成分を除去するのにとくに有効である。例えばＰＣＢ、ＰＡＨ、ダイオキシンおよび塩素化殺虫剤は、すべて極端に無極性成分であり、それ自体、第１の分画ステップで、極性の高いポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体から分離することができる。（２）貯蔵、精製、前以て行われる濃縮ステップで生じる副生物は、ポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体からのアイソマー、酸化物または分解物を含む。例えば脂肪酸またはその誘導体の自動酸化は、有害の可能性のあるポリマー物質を生じるかもしれない。このような成分は、最適には第１のステップで、本発明により除去され得る。（３）最初の濃縮また精製ステップのときに利用される溶剤または試薬からの汚染物。その例は、ポリ不飽和脂肪酸から飽和またはモノ不飽和脂肪酸を除去するためにしばしば添加される尿素である。この成分の除去は、本発明の方法の第１のステップのときに最も容易に達成される。典型的に、回収が最も望まれる天然油成分は、分解しやすいＰＵＦＡ類であり、しかも食用、薬学的また化粧用としてできる限り純度を高めて得られなければならない。例えば逆相オクタデシルシリカゲル（約２５μmの平均粒径）を充填した３０cmの直径のＨＰＬＣカラムおよび様々な溶離液（アセトニトリル／水またはメタノール水）を用いる従来の固定床クロマトグラフィープロセスにより、本発明者らは、約５０％ＥＰＡおよび約３０％ＤＨＡを得るために、分子蒸留および尿素分画によりあらかじめ濃縮された魚油のエチルエステルから、９８％を超える純度の亜麻仁油由来のα−リノレン酸エステル、９５％を超える純度のＥＰＡおよび９０％を超える純度のＤＨＡを得ることができた。しかしながら、このような分画は、溶離液混合物での純粋な生成物の高い希釈倍率（５００以上）を導き、大規模な蒸発／蒸留装置を必要とし、大規模生産（トン／年）であっても非常に高い精製コスト、精製生成物１kgあたり１０００ＵＳドル以上のコストを常に必要とする。本発明の方法により分画するための好適なＰＵＦＡ含有供給組成物は、様々な従来のステップ、例えばグリセライドエステル交換反応またはグリセライド加水分解、さらに続いて特定の場合では結晶化、分子蒸留、尿素分画、硝酸銀またはその他の金属塩溶液による抽出、ヨードラクトン化（iodolactonisation）または超臨界流体分画のような方法を選択することにより、天然材料（植物油、動物油および脂肪を含む）から得ることができる。本発明の方法の特定の態様において、得られた供給混合物は、続いてシミュレート連続向流クロマトグラフィー装置と組み合わせて、従来の固定床クロマトグラフィーカラムか、あるいは多段階超臨界流体分画のための１つ以上のカラムを有する装置による分画および精製に施され、所望のＰＵＦＡまたはＰＵＦＡを混合物を回収することができる。この装置は、複数の画分を回収する第１ステップと、前記第１ステップにおいて回収された画分の僅かな幾つかをシミュレート移動床クロマトグラフィー分画に施す第２ステップを組み合わせるように操作される。これらのステップの組み合わせの有利さの一つは、所望されない成分が拒否され、且つ所望成分が混合物として得られる条件で第１ステップが操作され、この条件は、例えば固定床システムが高い純度の単一のポリ不飽和脂肪酸を回収するために採用されるときよりも顕著に高い生産性および顕著に低い希釈倍率となるという事実である。本発明の方法における第１の分画を行うコストは、高度に選択性のある分画を行うときの固定床クロマトグラフィーシステムの従来の操作よりも著しく低い。また第１の分画は、供給混合物から所望されない成分のほとんどを排除するという有利さも存在する。シミュレート移動床システムに供給される得られた画分は、他の成分をほんの僅かな量だけ含むが、所望の脂肪酸の一つを豊富に含む、２成分または３成分系の混合物として考慮され得る。シミュレート連続向流移動床システムを用いる分画の第２ステップは、所望の一つまたは複数のＰＵＦＡ成分の回収を非常に効率的にするので、すべてのプロセスを操作すれば、複雑な混合物から非常に純度の高いＰＵＦＡ成分を、最も効率的且つ経済的に回収することができる。上記のように、第２ステップの分画の有利さを最もよく利用するために、回収された画分は、シミュレート向流クロマトグラフィーステップの処理の前に再混合されず、その代わりに様々な異なる場所でシステム中に個別に注入される。本発明の好適な方法は、高度に精製されたポリ不飽和脂肪酸の成分ｐを回収するために、ポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体を含む組成物の分画方法として記載され得、これは次のステップの組み合わせにより特徴付けられる：１ａ）溶離液が好ましくは超臨界圧力での流体である固定床カラムを用いる溶離クロマトグラフィーステップであり、供給混合物がｎ個の画分に分画され、ｎ個の画分のうちのｑ個が第２ステップに導入される。（ｎ−ｑ）個の画分は、溶離液の回収の後に廃棄されるか、および／またはリサイクルされるか、および／またはさらなる分画のために第１ステップの供給混合物に戻される；あるいは１ｂ）従来の充填材（例えばRaschig、Pall、Intralox等）でパックされた、好ましくは２つ以上の多段階向流カラムを用いる超臨界流体分画ステップ。これは、カラムに沿って段階的に温度勾配させることによる内部還流、あるいは各カラムのヘッドで流体に溶解された抽出物の補助ポンプ再注入手段によりもたらされる外部還流により操作される。供給混合物は、ｎ個の画分に分画され（好ましくは４つの画分）、このｎ個の画分のうちのｑ個（好ましくは２つの画分）が、第２ステップ導入されるが、ｎ−ｑ個の画分（好ましくは２つの画分）は、溶剤の回収の後に廃棄されるか、および／またはリサイクルされるか、および／またはさらなる分画のために第１ステップの供給混合物に戻される；および２）溶離液が好ましくは超臨界圧力での流体であるシミュレート連続向流クロマトグラフィーステップ。ステップ１（ａ）または１（ｂ）で回収された画分のｑ個が、シミュレート向流クロマトグラフィーシステムに、ｒ個のポイントで注入され、前記システムはｍ個の画分を集めるように操作され、ここで、ｒはｑ以下であり、ｍはｐ以上であり、画分（ｍ−ｐ）の残部は（もしあるなら）、必要に応じてさらなる加工のために第１または第２ステップに戻されるか、あるいは廃棄される。供給混合物は、ポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体を含む動物または植物起源の組成物であることができる。とくに供給混合物は、魚油または公知技術により得られた魚油の濃縮物のような、天然に存在する油であることができる。さらに、供給混合物は、脂肪酸またはその誘導体のほかに、とくに環境汚染物質のような原料由来の化合物の他のグループを含む組成物であることができる。ＥＰＡおよび／またはＤＨＡ、あるいはそれらの誘導体を高純度で調製するための供給混合物として、魚油を使用することが、とくに本発明の好適な実施態様の一つである。添付の図面を参照しながら、本発明をさらに説明する。図１は、シミュレート連続向流クロマトグラフィーシステムの原理を概略的に説明している；図２は、シミュレート連続向流クロマトグラフィーシステムの実用的な操作を概略的に示している；図３は、本発明の一つの見地に従い、シミュレート連続向流クロマトグラフィーシステムが溶離液として超臨界圧力での液体を用い、システムの様々なゾーンで溶離力を変化させて操作される方法を概略的に説明している；図４は、溶離液として超臨界圧力での流体を用いるシミュレート連続向流クロマトグラフィーシステムの実用的な操作を概略的に説明している；図５は、本発明の一つの見地に従い、第１ステップの分画が、溶離液として従来の溶剤を用いる固定床システムを使用して行われ、第２ステップの分画が、これも従来の溶離液（すなわち超臨界圧力での流体ではない）を用いるシミュレート連続向流システムを用いて行われる２段階の精製プロセスを概略的に示している；図６は、実施例６で用いられたシミュレート移動床システムを概略的に示している；図７は、多段階向流カラムによる超臨界流体分画による第１ステップの分画の操作を概略的に示している；図８は、実施例７で使用されたシミュレート移動床システムを概略的に示している。図１を参照すると、シミュレート連続向流クロマトグラフィープロセスの概念は、複数部分、さらに正確には、カラムの底部から頂部に向かって、４つの重ねられたゾーンＩ、II、IIIおよびIVに分割された固定相Ｓを含む鉛直方向のクロマトグラフィーカラムにより説明される。溶離液は、ポンプＰによりＩＥで底部から導入されるが、分離されるべき成分ＡおよびＢの混合物は、ゾーンIIとゾーンIIIとの間のＩＡ＋Ｂで導入される。主にＢを含む抽出液は、ゾーンＩとゾーンIIとの間のＳＢで収集され、主にＡを含むラフィネートは、ゾーンIIIとゾーンIVとの間のＳＡで回収される。図１において、溶離液は、上方に向かって流れている。以下に詳細に記載するように、固定相Ｓのシミュレートされる下方への動作は、固体相に対する導入および収集ポイントの動作によりもたらされる。実用上の観点から、導入および収集ポイントに対して固定相を動かさず、むしろ溶離液の循環の観点において、１つのゾーンから他のゾーンに、すなわち図１の場合は上方に周期的にこれを移動させることにより、固定相を動かさずに維持し、且つ導入および収集ポイントを動かすことが好ましい。図１を参照すると、溶離液は上方に流れ、混合物Ａ＋ＢはゾーンIIおよびゾーンIIIとの間に注入され、これらの成分は固定相とのクロマトグラフィー的相互作用、例えば多孔質媒体との吸着により移動するであろう：固定相に対して強い親和性を示す成分Ｂは、溶離液とともにゆっくりと流れ、成分Ａよりも遅れて移動するであろう。固定相に対して弱い親和性を示す成分Ａは、溶離液とともに容易に流れるであろう。もしパラメーター、とくに各ゾーンにおける流量の正しい設定が推測され且つ制御されれば、固定相に対して弱い親和性を示す成分Ａは、ゾーンIIIおよびゾーンIV 間で収集され、固定相に対して強い親和性を示す成分Ｂは、ゾーンＩおよびゾーンII間で収集されるであろう。図１で概略的に示された移動床システムは、２成分系の分画に制限されるが、本発明の実用において、このシミュレート移動床分画ステップを通常通り操作して２つ以上の画分を得ることができる。操作の原理は当業者によく知られている；これは図２に示される。実用において、シミュレート連続向流移動床プロセスは、固定相を形成する多孔質媒体でパックされたクロマトグラフィーカラムの特定数ｎ（通常は４〜２４）を含む装置を用いて行われる。このような装置は、図２に概略的に示されている。示されているように、ｎ本のクロマトグラフィーカラム（Ｃｋ）は、連続的に連結されており、液体の溶離液Ｅにより浸透され、その循環は矢印の方向に、厳密に制御された一定の流量でもってポンプＰによりもたらされる。ポンプは、任意で２本のカラム間にセットされている。分画されるべき混合物および溶離液は、特定のカラム（Ｃｋ）および（Ｃｋ＋１）間のＩＭおよびＩＥでそれぞれ導入され、これによりカラムは４つのゾーンに分割される。もし溶離液のポンプの流量と、導入および収集の流量とが適切に設定され、且つ４つの導入／収集ポイントが一定間隔の時間Ｄｔでカラム（Ｃｋ）および（Ｃｋ＋１）間の場所から、カラム（Ｃｋ＋１）およびカラム（Ｃｋ＋２）間の場所に移動された場合、高い選択率で、ラフィネートと抽出物の２つの画分に混合物を分画することができる（当然のことながら良好な固定相および溶剤の選択は推定される）。図２において、ＩＥ'、ＳＥ'、ＩＭ'およびＳＲ'は、間隔Ｄｔに相当する移動の後の位置ＩＥ、ＳＥ、ＩＭおよびＳＲにそれぞれ対応する。従来の液体が溶離液として用いられるとき、ポンプＰの位置は、２つのカラム間に固定されることに注意するべきである；液体が圧力のかけられていない流体であるとき、その溶離力は圧力に依存せず、どんなポンプＰの相対的位置でもすべてのゾーンで一定となる。さらにまた、異なるゾーンでのカラムの数も変更できる。この基本概念のさらに複雑な場合において、２つのカラム（Ｃｋ）および（Ｃｋ＋１）間の特定の場所で１種を超える混合物を注入しおよび／または２種を超える画分を収集することができ、溶離液および分画されるべき混合物の導入用のこれらの場所は、上記のように一定の時間で移動する。しかしながら、以下の記載は単純化のためにｐおよびｑが両方とも２であるとき、すなわち混合物が２つの画分に分画される場合について記載する（上記の好適な本発明の態様を参照）。これによりｚ個の溶離液注入ポイント、ｚ個の組成物注入ポイント（合計２ｚの注入ポイント）、ｚ個の抽出物収集ポイントおよびｚ個のラフィネート収集ポイント（合計２ｚの収集ポイント）が導かれる。さらに単純化する場合、ｚが１であり、順次および連続的に溶離液注入ポイント、抽出液収集ポイント、組成物注入ポイントおよびラフィネート収集ポイントを含む回路を導く場合も考慮される。２つの連続的な導入または収集ポイントの間に、１つまたは複数のカラムまたはカラム部を設定することができる。以下、すべてのカラムが連続的に連結され、同様の設計および寸法である個別のカラムであることが、理解を容易にするために考慮されている。また、個別のカラムではなく、カラムの部分により定義されるものとして各ゾーンを考慮することができ、これはその範囲内で、２つの末端間で溶離液のループを備えた独特のカラムを用いることができる。実際、これは固定相のパッキングを容易にし、必要に応じて複数の部位に分割されたカラムの複数を使用するという手順を避けることができる。図１を再度参照すると、次の条件での操作がしばしば好適となろう： − ゾーンＩにおいて、関係するパッキングの変更のときに強い親和性を有する成分Ｂがカラムの底部に向かって下方に移動することを避けるために、強い溶離液、すなわち強い溶離力を有するものが好適であろう； − ゾーンIIにおいて、弱い親和性の成分Ａは、Ｂとともに下方に移動しないように、溶離液とともに移動しなければならないが、成分Ｂは下方に向かって移動し、且つ関係するパッキングの変更の後にゾーンＩおよびゾーンII間で収集されるように、固体相上に残らなければならない；このことは、ゾーンＩよりも低い溶離力を要求する； − ゾーンIIIにおいて、弱い親和性の成分Ａは、ゾーンIIIおよびゾーンIV間で収集されるために、溶離液とともに上方に移動しなければならないが、成分Ｂは固定相上に固定して残り、関係するパッキングの変更で、ゾーンIIに向かって下方に移動する；これは、ゾーンIIの溶離力以下の溶離力を必要とする； − ゾーンIVにおいて、弱い親和性の成分Ａは、溶離液とともに移動してはならず、これはゾーンIIIよりも低い溶離力を必要とする。単純化として、１つのゾーンから次のゾーンへ流れるとき、当然に溶離液の循環のためのゾーンIVからゾーンＩへの流れを除き、溶離力は減少させるか、あるいは少なくとも一定で維持されなければならず、増加すべきではない。本発明の１つの見地にしたがって、シミュレート移動床クロマトグラフィー分離ステップにおける超臨界圧力での流体の使用は、溶離力を容易に変更させることを許し、これにより各ゾーンで理論的要求に極めて近く一致させることができる。さらに、ほとんどの下方ゾーンが抑制される上記のとくに仏国特許第９２０９４４４号に記載されているように、さらなる変更もまた好適に用いられる；さらに、このプロセスから２つを超える画分が得られる。本発明者らは図３を参照する。ここには、システムの異なるゾーンの溶離力の変化と、溶離液として超臨界流体を用いるシミュレート連続向流移動床プロセスの操作原理とが説明されている。図３は幾分図１と類似しており、図１と同じく概略的且つ簡略的であるが、図３は、シミュレート移動床の概念を説明しており、またどの程度本発明の効果、すなわち溶離液として超臨界流体を用いることにより、どの程度の効果が奏されるのかを説明している。クロマトグラフシステムの数は、実施される分画に応じて３つ（図３ａ）ないし４つ（図３ｂおよび３ｃ）ないし５つ（図３ｄ）に変化している。２成分系の混合物の分画の場合、３つのゾーンのみを用いる簡単な態様が好ましく、ここでは溶剤の循環の前の減圧により、ほとんど吸着されていない化合物が溶剤から回収される；この減圧は、例えば図３ａに示されているようにバルブＤ、エンタルピー供給のための熱交換器Ｒおよび分離容器Ｓを通じて達成される。３成分系の混合物の分画の場合、４つのゾーンまたは５つのゾーンの２つの態様を使用することができる：図３ｂに示されている場合において、ほとんど吸着されていない化合物は、ゾーンIIから溶離液とともに進み、その後、これらは溶離液の循環の前の減圧により、溶離液から分離される；この態様は、主要生成物の２成分計（Ａ，Ｂ）が、固定相と低い親和性を示す軽質成分（Ｄ）により汚染されるとき、且つ先の場合（図３ａ）のように簡単に分離される溶離液により容易に移動を伴うときに好ましい；一方、図３ｃに示される場合において、ほとんどの吸着された化合物（Ｃ）は、高い溶離力によりゾーン０から引き出され、そのときに化合物ＢおよびＡの分画は、低い溶離力ゾーンの溶離液で最適化され、ここで高い選択性が達成される。さらに複雑な混合物の場合、とくに軽質および重質化合物により汚染された２つの主要成分ＡおよびＢからなるものの場合、図３ｄに示された態様が好ましい：重質汚染物質（Ｃ）は、高い溶離力の流体により固定相から引き出され、ＡおよびＢの分画は、ゾーンＩ、II、IIIおよびIVの適合化された溶離力の条件下でさらに選択的に操作され、一方軽質または汚染物（Ｄ）は、ゾーンIVの出口で溶離液により移動され、先の場合（例えば図３ｄ）で記載したよう溶離液循環の前の減圧により、溶離液から分離される。このような装置およびプロセスは、予備精製した供給物から非常に高度に精製された化合物を得るための最終精製ステップにおいて、あるいは上記の表１および２に示されているような複雑な混合物から精製された化合物を得るための精製ステップの中間で、脂肪酸またはその誘導体の混合物の分画に好適に採用されることが明らかである。これらの脂肪酸またはその誘導体は、非極性化合物であるので、超臨界圧力（７．３８ＭＰａ超）での二酸化炭素は有効な溶離液である。なぜならば、その溶離力は、以下の実施例で示されているように、シリカゲルか、あるいは逆相（アルキル結合）シリカゲルからなる従来の固定相に対して、その溶質に応じて溶離力をより十分に変化させることができるからである。さらに、ほとんどの有機溶剤は毒性であるが、二酸化炭素は非毒性であるので、食品または薬学的製造物の製造において重要な有利さとなる。図４は、溶離液として超臨界流体を用いて、どのようにして連続シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムが操作されるのかを詳細に説明したものである。図示されたシステムは、複雑な混合物を４つの画分に分画していることを示している。この装置は、ｎ個のクロマトグラフィーカラムからなり（ｎは好ましくは５〜２５の範囲で選択される）、１カ所の供給物注入部（ＩＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ）および４つの画分収集ポイント（ＳＡ、ＳＢ、ＳＣ、ＳＤ）を有して（その内のひとつは分離容器Ｓ上におかれている）連続的に連結されている。溶離液の減圧は、溶離液の調製手段ＩＥおよびコンプレッサまたはポンプＫに連続的に連結されているＳを経て、熱交換器Ｒ（雰囲気に応じて加熱または冷却するが、液体の溶離液が現れまた水滴の形成を避けるために必要なエンタルピーを供給するために、通常は加熱される）に連結されるバルブＤを通じて操作される（概略的には図３ｄおよび４に示される）。異なるクロマトグラフィーのゾーン間での圧力変化、供給物の注入、溶離液調製、ゾーン間での画分の収集を行うために、図４に示される次に示される複雑なバルブの配列を使用することができる：・２つの連続するカラム（Ｃ_k−Ｃ_k+1）間で、１つの停止バルブ（Ｖ_k）および１つの調節バルブ（Ｕ_k）；・カラム（Ｃ_k）の出口は、停止バルブ（Ｖ'_k）を通じて減圧ステップ（バルブＤ、熱交換器Ｒおよび分離容器Ｓ）に連結されている；・カラム（Ｃ_k）の入口は、停止バルブ（Ｖ''_k）を通じて溶離液注入ラインＩＲに連結され、停止バルブ（Ｗ'''_k-1）を通じて注入ラインＩＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄに連結され、さらに停止バルブ（Ｗ''_k-1）、（Ｗ'_k-1）および（Ｗ_k-1）を通じてそれぞれ画分収集ラインＳＡ、ＳＢおよびＳＣに連結されている。本発明のプロセスを実施するために、このようなバルブを操作することは容易である：・ゾーン０がカラム（Ｃ_j）で始まると仮定すると：＊バルブ（Ｗ_j-1）、（Ｗ'_j-1）、（Ｗ''^j-1）、（Ｗ'''_j-1）が閉じられる。＊バルブ（Ｖ_j-1）が閉じられ、（Ｖ'_j-1）が開かれ、これによりカラム（Ｃ_j-1）からの流体が、ＳＤの収集および循環ＳＲのための減圧ステップに向けられる。＊バルブ（Ｖ''_k-1）が開かれ、溶離液ＩＲが供給される。・ゾーンＩがカラムＣ_jで始まると仮定すると：＊バルブ（Ｗ_j-1）、（Ｗ'_j-1）、（Ｗ''_j-1）、（Ｗ'''_j-1）が閉じられ、（Ｗ_j-1）が開かれ、画分ＳＣが収集される。＊バルブ（Ｖ_j-1）および（Ｖ_j）が開かれ、バルブ（Ｕ_j-1）が、ゾーン０およびＩ間でオペレーターにより設定された圧力の変更に応じて制御される（もし圧力の減少が予期されないならば、完全に開かれる）。＊バルブ（Ｖ''_j-1）および（Ｖ'_j）が閉じられる。・ゾーンIIがカラム（Ｃ_l）で始まると仮定すると：画分ＳＢの収集以外は、前記とほとんどのバルブが同じ位置であり、バルブ（Ｗ_l-1）、（Ｗ''_l-1）、（Ｗ'''_l-1）が閉じられ、（Ｗ'_l-1）が開かれる。・ゾーンIIIがカラム（Ｃ_m）で始まると仮定すると：供給物注入部ＩＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ以外は、前記とほとんどのバルブが同じ位置であり、（Ｗ'''_m-1）が開かれ、（Ｗ_m-1）、（Ｗ'_m-1）、（Ｗ''_m-1）が閉じられる。・ゾーンIVがカラム（Ｃ_p）で始まると仮定すると：画分ＳＡの収集以外は、前記とほとんどのバルブが同じ位置であり、バルブ（Ｗ''_p-1）が開かれ、バルブ（Ｗ_p-1）、（Ｗ'_p-1）および（Ｗ'''_p-1）が閉じられる。図５を参照すると、本発明の精製プロセスが記載されている。これは、従来の溶離液を使用する固定床クロマトグラフィーシステムを用いる第１ステップ分画、続いて従来の溶離液で操作される、シミュレート連続向流クロマトグラフィーシステムを用いる第２ステップ分画が存在する。図５ａを参照すると、供給混合物の第１の分画を行うための固定床クロマトグラフィーカラムが概略的に示されている（ステップ１）。この第１の分画は、ｎ個の画分（好ましくは４または５）を導き、この画分のうちのｑ個は、第２の分画ステップでさらに処理され、且つ（ｎ−ｑ）個の画分は、溶離液リサイクルのための蒸発に施され、生成物は、廃棄されるために運ばれるか、別の用途に適用される。第２ステップで採取されたｑ個の画分は、対象となる成分ｐの濃度が高められる（ｐは一般的にはｑ以下である）。図５ｂを参照すると、ｑ個の画分が、ステップ２においてｑポイントでシミュレート連続向流クロマトグラフィー装置に注入され、ｍ個の画分が収集されるように操作される（ｍは一般的にはｐ以上である）。ｍ個の画分のうちのｐ個の画分は高度に精製されたｐ成分からなる。図５ｂは、ｑが３であり、ｍが４である場合を提示していることが分かる。これらの数は理解を容易にするために選択されたものであり、本発明を限定するものとして考慮してはならない。カラムを通過する流体は、流体の混合物（その成分は分離されるべきもの）または溶離液と呼ばれる溶剤の流体に溶解された混合物であることができる。シミュレート連続向流クロマトグラフィーシステムおよび第１の固定床クロマトグラフィープロセスの両方に利用可能である溶離液は、当業者に知られる従来の溶剤または溶剤の混合物であることができる。通常これらの溶剤は、短鎖アルコール類、例えばメタノール、エタノール、メトキシエタノール等；短鎖エーテル類、例えばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ＭＴＢＥ等；エステル類、例えばメチルアセテートまたはエチルアセテート；ケトン類、例えばアセトン、メチルエチルケトン、ＭＩＢＫ等；ニトリル類、例えばアセトニトリル；または水からなる群から選択される。これらの溶剤の混合物もまた使用可能である。同様に、当業者に知られているように、固定床カラムおよびシミュレート向流クロマトグラフィーシステムのための従来の固定相は、本発明のこの見地に従ったプロセスに使用可能である。このような一般的に使用される材料の例は、アルミナ；ポリマービーズ、好ましくはＤＶＢで網状となったポリスチレン；シリカゲル、好ましくはＣ８またはＣ１８、とくにＣ１８のアルカンとの逆相結合シリカゲルが挙げられる。固定相材料の形状は、例えば５〜２００ミクロン、好ましくは１０〜２０ミクロンの球状または非球状のビーズであることができる。約１０ミクロンの単分散の球状ビーズが最も好ましい。すべての分離において、溶離液および／または固定相は、プロセスの固定床およびシミュレート移動床クロマトグラフィーステップの両方において同じものが好ましいが、これらはクロマトグラフィーの当業者により理解されるように、異なっていてもよい。本発明のプロセスのこの見地においては、Ｃ１８結合シリカゲルからなる固定床および短鎖アルコール類、エーテル類、エステル類またはケトン類あるいはこれらの混合物、もしくは水との混合物から選択される溶離液を使用することがとくに好ましい態様である。通常、クロマトグラフィープロセスは室温で行われるが、上昇した温度で良好に行われる分離であってもよい。図７を参照すると、１つの好適な態様が概略的に示されており、多段階の向流カラムによる超臨界流体分画による第１の精製ステップが行われ続いて、本発明にしたがって、図７には示されていないが、シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムにより第２の精製ステップが行われる。図７を参照すると、示されたシステムは不純物を含む出発混合物を、主に４つの画分に分画するのに採用されている。第１の向流カラム（Ｃ１）において、超臨界ＣＯ₂が供給物の主要部分を溶解し、ＣＯ₂放出の後は除去される重質成分のみが残される（画分４）。抽出画分の大部分は、ＣＯ₂放出の後に分離器Ｈにおいて回収され、向流カラム（Ｃ３）に送られ、抽出画分の軽質部分が第２の向流カラム（Ｃ２）に送られる。カラム（Ｃ３）は、この接触器に送られたこの混合物からほとんどの軽質画分を引き取るために使用され、そのヘッドは、（Ｃ３）にリサイクルされるあまりＣＯ₂に溶解しない成分の回収且つ軽質画分（画分１）の除去のために、カラム（Ｃ２）につながれている；（Ｃ３）の底部は、分離器においてＣＯ₂の存在しないものであり、次に２つの主要画分（２および３）を導く、高度に選択性のある向流カラム（Ｃｈ）からなる、最終分画ステップにつながれている；カラム（Ｃ４）の選択性は、カラムジャケットに沿った熱勾配によりもたらされる内部還流、あるいはカラムヘッドで画分２のポンプ再注入部によりもたらされる外部還流により高まる。以下、本発明を実施例により説明する。実施例１ａこの実施例は、α−リノレン酸（Ｃ１８：３ｎ−３）およびリノレン酸（Ｃ１８：２ｎ−６）の純粋なエステル類を回収するために、亜麻仁油から得られた脂肪酸エステルの混合物の精製を示すものである。使用された方法は、固定床によるクロマトグラフィー分画による精製の第１ステップ、続いてシミュレート連続向流移動床を用いるクロマトグラフィー分画の第２ステップを包含する。亜麻仁油は、従来の方法によるエタノールでのエステル交換反応に施され、以下の表３に示される組成を有するエチルエステル類の混合物が導かれた。第１ステップ：固定相として逆相オクタデシルシリカゲル（１２〜４５μm）を備えた固定床クロマトグラフィー。溶離液としてアセトニトリル、室温。軸方向圧縮カラム（直径３０cm、固定相パッキング長３０cm）に、溶離液を３００リットル／時で浸透させる；供給混合物の０.８４kgを１２分間毎に注入する。１２分の各サイクル毎に、次の画分が収集される：画分１：脂肪酸エステルの２０g／リットルを含む４.２リットル（Ｃ１８：３＝５２.５％−Ｃ１６：０＝４７.５％）。画分２：９９％の純粋なＣ１８：３の５７g／リットル含む３.７２リットル。画分３：脂肪酸エステルの３２.９g／リットルを含む８.５リットル（Ｃ１８：２＝１３.３％−Ｃ１８：３＝８６.７％）。画分４：脂肪酸エステルの１１.７５g／リットルを含む７.０３リットル（Ｃ１８：２＝７７％−Ｃ１８：３＝２３％）。画分５：脂肪酸エステルの５.１６g／リットルを含む３５.７リットル（Ｃ１８：２＝２１.７％−Ｃ１８：１＝６６.４％−Ｃ１８：０＝１１.８％）。画分３および４を第２の分画ステップに使用するために収集した。分画１および５を廃棄したが、画分２を、さらなる精製を行わずに収集した。第２ステップ：第１ステップと同様の固定相および溶離液によるシミュレート連続向流クロマトグラフィー；１２のカラム（直径２０cm、長さ１０cm）を２つの混合物注入ポイント、１つの溶離液導入ポイントおよび２つの収集ポイントを備えた、連続且つ閉ループで連結する（ループは２つのカラムの５つの連続するゾーンＩ〜Ｖに分割される）。操作した流量および回収を以下に示す： − シフト期間：４.７分 − 溶離液リサイクル流量：３８０リットル／時 − 溶離液導入（ゾーンＶおよびＩ間）９９リットル／時 − 画分４注入（ゾーンIIおよびIII間）３５リットル／時 − 画分３注入（ゾーンIIIおよびIV間）４２.５リットル／時 − 精製したＣ１８：２（Ｃ１８：２＝９８％、Ｃ１８：３＝２.０％）の５g ／リットルを含む画分Ａ収集（ゾーンＩおよびII間）１００リットル／時 − 精製したＣ１８：３（Ｃ１８：２＝０．６％、Ｃ１８：３＝９９．４％）の１７.２g／リットルを含む画分Ｂ収集（ゾーンIVおよびV間）１００リットル／時実施例１ｂ次の結果は、実施例１ａと同様の第１ステップの分画（ＨＰＬＣ）に続き、４つのゾーンのシミュレート移動床分画を行って得られたものであり、第１ステップで得られた画分３および４は混合され、シミュレート移動床システムにのみ、１つのポイントで供給された。操作の詳細を以下に示す： − 溶離液リサイクル４１９リットル／時 − 溶離液導入（ゾーンIVおよびＩ間）１０９リットル／時 − 供給流量３５＋４２.５７７.５リットル／時 − 精製したＣ１８：２（Ｃ１８：２＝９８％、Ｃ１８：３＝２％）の４.６g ／リットルを含む画分Ｂ収集（ゾーンＩおよびII間）１０９リットル／時 − 精製したＣ１８：３（Ｃ１８：２＝０.６％、Ｃ１８：３＝９９.４％）の１６.８５g／リットルを含む画分Ａ収集（ゾーンIIIおよびIV間）７７.５／時溶離液の消費は、実施例１ａで使用された同じサイズの５つのゾーンＳＭＭと比較して、実施例１ｂで使用した４つのゾーンＳＭＢの場合、１０％多かった。これは、第２ステップの２つの注入ポイントを有する手順（実施例１ａ）が、１つの注入ポイントのみを使用するとき（実施例１ｂ）よりも少ない希釈を導くことを示している。実施例２この実施例は、同様に固定床分画に続きシミュレート移動床分画を用いて精製されたＥＰＡおよびＤＨＡを回収するために、魚油から得られる脂肪酸エステルの混合物の精製を示すものである。魚油は、従来法によるエタノールとのエステル交換反応に施され、エチルエステルの混合物を導く、その組成は、下記表４で重量％で提示されている。第１ステップ：室温で、溶離液としてメタノール／水（９０−１０）を用いる逆相オクタデシルシリカゲル（１２〜４５μm）を使用した固定床クロマトグラフィー。軸方向圧縮カラム（直径３０cm、固定相パッキング長３０cm）に、溶離液を２００リットル／時で浸透させる；供給混合物の０.０８５kgを１９分間毎に注入する。次の画分が収集される。画分１：脂肪酸エステルの１.８３g／リットルを含む２７リットル。画分２：脂肪酸エステルの１.２１g／リットルを含む１３リットル。画分３：脂肪酸エステルの１.３g／リットルを含む１１リットル。画分４：脂肪酸エステルの０.４６g／リットルを含む１２リットル。これらの画分の組成を表４で重量％として示す。画分１および４は除外される。画分２および３が第２ステップの分画に施される。第２ステップ：ステップ１と同じ固定相および溶離液を用いるシミュレート連続向流移動床クロマトグラフィー；１２のカラム（直径３０cm、長さ１０cm）を２つの混合物注入ポイント、１つの溶離液導入ポイントおよび２つの収集ポイントを備えた、連続且つ閉ループで連結する（ループは２つのカラムの５つの連続するゾーンＩ〜Ｖに分割される）。操作した流量および回収を以下に示す： − シフト期間：３.３分 − 溶離液リサイクル流量：５６５リットル／時 − 溶離液導入（ゾーンＶおよびＩ間）８０リットル／時 − 画分３注入（ゾーンIIおよびIII間）３５リットル／時 − 画分２注入（ゾーンIIIおよびIV間）４１リットル／時 − 精製したＤＨＡ（Ｃ１８：４＝２.１％；Ｃ２０：５＝２.２％；Ｃ２１：５＝２.１％；Ｃ２２：１＝１２.２％；Ｃ２２：５＝１２.９％；Ｃ２２：６＝６６％；その他＝２.５％）の０.５５g／リットルを含む画分Ｂ収集（ゾーンＩおよびII間）８３リットル／時 − 精製したＥＰＡ（Ｃ１８：４＝１.９％；Ｃ２０：１＝２.０％；Ｃ２０：４＝６.１％；Ｃ２０：５＝８０.２５％；Ｃ２２：５＝０.９％；Ｃ２２：６＝６.９％；その他＝２.０％）の０.６５g／リットルを含む画分Ａ収集（ゾーンIV およびV間）７３リットル／時実施例３この実施例は、同様に固定床分画に続きシミュレート移動床分画を用いて精製されたＥＰＡおよびＤＨＡを回収するために、魚油から得られる脂肪酸エステルの混合物の精製を示すものである。魚油は、従来法によるエタノールとのエステル交換反応に施され、エチルエステルの混合物を導く。その組成は、下記表４で重量％で提示されている。次に、混合物は分子蒸留に施される。以下の表５で提示された組成の混合物が得られる。第１ステップ：室温で、溶離液としてメタノール／水（９０−１０）を用いる逆相オクタデシルシリカゲル（１２〜４５μm）。軸方向圧縮カラム（直径３０cm、固定相パッキング長３０cm）に、溶離液を２００リットル／時で浸透させる；供給混合物の０．１３６kgを１９分間毎に注入する。次の画分が収集される。画分１：脂肪酸エステルの１.７１g／リットルを含む２７リットル。画分２：脂肪酸エステルの３.２９g／リットルを含む１３リットル。画分３：脂肪酸エステルの３.１５g／リットルを含む１１リットル。画分４：脂肪酸エステルの０.９５４g／リットルを含む１２リットル。これらの画分の組成を表６に示す。画分１および４は除外される。画分２および３が第２ステップに施される。第２ステップ：ステップ１と同じ固定相および溶離液を用いるシミュレート連続向流移動床クロマトグラフィー；１２のカラム（直径３０cm、長さ１０cm）を２つの混合物注入ポイント、１つの溶離液導入ポイントおよび２つの収集ポイントを備えた、連続且つ閉ループで連結する（ループは２つのカラムの５つの連続するゾーンＩ〜Ｖに分割される）。操作した流量および回収を以下に示す： − シフト期間：２.８７分 − 溶離液リサイクル流量：６５０リットル／時 − 溶離液導入（ゾーンＶおよびＩ間）９６リットル／時 − 画分３注入（ゾーンIIおよびIII間）３５リットル／時 − 画分２注入（ゾーンIIIおよびIV間）４１リットル／時 − 精製したＤＨＡ（Ｃ１８：４＝２.１％；Ｃ２０：５＝１.０％；Ｃ２１：５＝１.９％；Ｃ２２：５＝１１.２％；Ｃ２２：６＝８３.１％；その他＝０.７％）の１.２９g／リットルを含む画分Ｂ収集（ゾーンＩおよびII間）９５リットル／時 − 精製したＥＰＡ（Ｃ１８：４＝０.８％；Ｃ２０：１＝４.０％；Ｃ２０：４＝４.９％；Ｃ２０：５＝８８.０％；Ｃ２２：５＝１.１％；Ｃ２２：６＝０. ８％；その他＝０.４％）の１.９６g／リットルを含む画分Ａ収集（ゾーンIVおよびV間）７７リットル／時他の出発組成物であっても、純粋なＤＨＡおよびＥＰＡ画分が得られる。比較例１魚油から得られた脂肪酸エステルの混合物の精製。供給物は、実施例３で使用したものと同じにし、実施例３の第２ステップに記載されたシミュレート向流クロマトグラフィー中に直接導入した（但し、２、３、３および２つのカラムの４つのゾーン（Ｉ−IV）とし、１つの注入ポイントおよび２つの収集ポイントとした）。操作した流量および回収を以下に示す： − シフト期間：２.８７分 − 溶離液リサイクル流量：６５０リットル／時 − 溶離液導入（ゾーンIVおよびＩ間）９８リットル／時 − 供給物の３.５g／リットルを含む供給物注入（ゾーンIIおよびIII間）７６リットル／時 − 富ＤＨＡ（Ｃ１６：０＝１５.５％；Ｃ１６：４＝８.６％；Ｃ１８：０＝６.９％；Ｃ１８：４＝１.７％；Ｃ２２：５＝６.１％；Ｃ２２：６＝４７.１％その他＝１４.１％）の１.２２g／リットルを含む画分Ｂ収集（ゾーンＩおよびI I間）９５リットル／時 − 富ＥＰＡ（Ｃ１６：０＝４.１％；Ｃ１６：４＝４.０％；Ｃ１８：０＝２ .１％；Ｃ１８：４＝４.９％；Ｃ２０：１＝７.３％；Ｃ２０：４＝６％；Ｃ２０：５＝５６％；Ｃ２２：６＝０.７％：その他＝１４.９％）の１.９g／リットルを含む画分Ａ収集（ゾーンIIIおよびIV間）７９リットル／時収集した２つの画分は、低いＤＨＡおよびＥＰＡ濃度を有し、これは上記で提示した実施例で得られたものと比較すると、貧弱な画分であったことを示している。実施例４この実施例は、α−リノレン酸（Ｃ１８：３ｎ−３）の純粋なエステル類を回収するために、亜麻仁油から得られた脂肪酸エステルの混合物の精製を示すものである。使用された方法は、固定床によるクロマトグラフィー分画による精製の第１ステップ、続いてシミュレート連続向流移動床を用いるクロマトグラフィー分画の第２ステップであり、溶離液は、調節された溶離力の超臨界流体である。亜麻仁油は、従来の方法によるエタノールでのエステル交換反応に施され、上記の表１に示される組成を有するエチルエステル類の混合物が導かれた。固定層としてシリカゲル、溶離液として超臨界ＣＯ₂を用い、図４ａに概略的に示されるシステムに従って、３つのゾーン（Ｉ、II、III）によって、２つの画分（ＳＢ、ＳＡ）への分画を行うシミュレート連続向流移動床クロマトグラフィー：６つのカラム（直径１２．８cm、パッキングの長さ１０cm）連続且つ閉ループで連結し、１つの注入ポイント（ＩＡ＋Ｂ）、１つの溶離液導入（ＩＥ）、１つの収集ポイント（ＳＢ）および抽出物収集ポイント（ＳＡ）を備えた前記の分離装置を設けた；各ゾーン（Ｉ、II、III）は、２つの連続カラムからなる。操作パラメーター、流量、回収は、有効性の比較に応じて次の２つの場合に分けられる：実施例４ａ定圧２００バール。温度５０℃。分離器（Ｓ）：圧力５０バール。温度５０ ℃。 − シフト期間：３.７分 − 溶離液リサイクル流量（ＩＲ）：１４１kg／時（ＣＯ₂）； − 溶離液導入（ＩＥ）：５２.９０kg／時（ＣＯ₂）； − 注入（ＩＡ＋Ｂ）：４.７５kg／時（油０.０９５kg／時（表１）および４ .６５５kg／時（ＣＯ₂）からなる）； − 画分（ＳＢ）：５７.５５kg／時（油０.０５７kg／時（Ｃ１８：３＝９９％）および５７.４９kg／時（ＣＯ₂）からなる）； − 画分（ＳＡ）：０.０９８kg／時（油０.０３８kg／時（Ｃ１８：３＝３％）および０.０６０kg／時（ＣＯ₂）からなる）。実施例４ｂ圧力変化。温度５０℃。 − ゾーンＩ：２８０バール − ゾーンII：２５０バール − ゾーンIII：１５０バール − 分離器（Ｓ）：５０バール − シフト期間：２.６分 − 溶離液リサイクル流量（ＩＲ）：１４１kg／時（ＣＯ₂）； − 溶離液導入（ＩＦ）：４１.５９kg／時（ＣＯ₂）； − 注入（ＩＡ＋Ｂ）：７.９６kg／時（油０.１６kg／時（組成は表１）および７.８０kg／時（ＣＯ₂）からなる）； − 画分（ＳＢ）：４９.４kg／時（油０.０９５kg／時（Ｃ１８：３＝９９％）および４９.３０５kg／時（ＣＯ₂）からなる）； − 画分（ＳＡ）：０.１５０kg／時（油０.０６５kg／時（Ｃ１８：３＝３％）および０.０８５kg／時（ＣＯ₂）からなる）。圧力の変更を実施するまたは実施しないで得られた有効性を比較すると、同じ装置の場合、精製された脂肪酸エステルの製造が６０％超まで増加したので（０ .０５７kg／時から０．０９５kg／時）、このような圧力の変更は有利であることを示している。実施例５この実施例は、精製したＥＰＡおよびＤＨＡを回収するために、魚油から得られた脂肪酸エステルの混合物の精製を示すものである。使用された方法は、シミュレート移動床を用いるクロマトグラフィー分画の単一のステージであり、溶離液は、調節された超臨界流体である。魚油は、従来の方法によるエタノールでのエステル交換反応、続いて分子蒸留に施され、上記の表２ｂに示される組成（重量％）を有するエチルエステル類の混合物が導かれた。この混合物の分画を実行した。固定層として結合したオクタデシルシリカゲル（１２〜４５μm）、溶離液として超臨界ＣＯ₂を用い、図４ｂに概略的に示されるシステムに従って、４つのゾーン（Ｉ、II、III、IV）および分離器によって、３つの画分（ＳＡ、ＳＢ、ＳＣ）への分画を行う：８つのカラム（直径８cm、パッキングの長さ１０cm）を、連続且つ閉ループで連結し、１つの注入ポイント（ＩＡ＋Ｂ＋Ｃ）、１つの溶離液導入（ＩＥ）、２つの収集ポイント（ＳＣ、ＳＢ）および抽出物収集ポイント（ＳＡ）を備えた前記の分離装置を設けた；各ゾーン（Ｉ、II、III、IV）は、２つの連続カラムからなる。操作パラメーター、流量、回収は、有効性の比較のために次の２つの場合に分けられる：実施例５Ａ：定圧１３０バール。温度５０℃。分離器（Ｓ）：圧力５０バール。温度５０ ℃。 − シフト期間：１.６５分； − 溶離液リサイクル流量（ＩＲ）：５５kg／時（ＣＯ₂）； − 溶離液導入（ＩＥ）：１２.０１kg／時（ＣＯ₂）； − 注入（ＩＡ＋Ｂ＋Ｃ）：５.４１kg／時（油０.０５４kg／時（表２ｂの組成）および５.３５６kg／時（ＣＯ₂）からなる）； − 画分（ＳＣ）：１０.２８０kg／時（油０.０１３kg／時（Ｃ２０：５ｎ −３＝０.６％、Ｃ２２：６ｎ−３＝８７％）および１０.２６７kg／時（ＣＯ₂ ）からなる）； − 画分（ＳＢ）：７.０９kg／時（油０.０３４kg／時（Ｃ２０：５ｎ−３＝５２％、Ｃ２２：６ｎ−３＝１.５％）および７.０５６kg／時（ＣＯ₂）からなる）； − 画分（ＳＡ）：０.０４７g／時（油０.００７kg／時（Ｃ２０：５ｎ− ３＝１.２％、Ｃ２２：６ｎ−３＝０.５％）および０.０４０kg／時（ＣＯ₂）からなる）。実施例５ｂ圧力変化。温度５０℃。圧力 − ゾーンＩ：１５０バール − ゾーンII：１３５バール − ゾーンIII：１１５バール − ゾーンIV：１１５バール − 分離器（Ｓ）：５０バール − シフト期間：１.４５分 − 溶離液リサイクル流量（ＳＲ）：５５kg／時（ＣＯ₂）； − 注入（ＩＡ＋Ｂ＋Ｃ）：１４.１kg／時（油０.１４kg／時（組成は表２ｂ）および１３.９６kg／時（ＣＯ₂）からなる）； − 画分（ＳＣ）：５.２kg／時（油０.０３３kg／時（Ｃ２０：５ｎ−３＝０.４％、Ｃ２２：６ｎ−３＝８７.５％）および５．１６７kg／時（ＣＯ₂）からなる）； − 画分（ＳＢ）：４.０kg／時（油０.０８１kg／時（Ｃ２０：５ｎ−３＝５６％、Ｃ２２：６ｎ−３＝０.４％）および３.９１９kg／時（ＣＯ₂）からなる）； − 画分（ＳＡ）：０.０８２kg／時（油０.０２６kg／時（Ｃ２０：５ｎ− ３＝０.９％、Ｃ２２：６ｎ−３＝０.１％）および０.０５６kg／時（ＣＯ₂）からなる）。驚くべきことに、このプロセスは供給物（ＩＡ＋Ｂ＋Ｃ）よりも画分（ＳＢ）のほうが油濃度が高い結果となった。さらに、溶離液（４.８kg／時）で供給物（ＩＡ＋Ｂ＋Ｃ）を希釈しており、ゾーンＩにリサイクルしていないので、溶離液の調製は必要ではない。したがって、ＩＥは溶離液の調製が必要ないので設けられない。このことは、１２kgのＣＯ₂／時を添加しなければならない実施例５Ａ（定圧）と対比される。実施例５ａおよび５ｂで得られた結果を比較すると、圧力の変更により精製される画分の生産性が非常に顕著に増加することから、非常に有利であることが明らかである。これとは別に、生産性を増加させるための圧力変更を用いる変わりに、より高度に精製された画分を製造するための圧力変更もまた行えることは、当業者に理解されるであろう。対象となる化合物（Ｃ２０：５およびＣ２２：６）の両方の純度の高い画分を得るために、公知の技術を用いてあらかじめ濃縮された供給物を使用することができる。これとは別に、連続的に稼働する２つのシミュレート移動床システムを使用するか、あるいはこれに溶離液として超臨界での流体を使用する分取クロマトグラフィーの第１ステップを組み合わせて、２つの脂肪酸エステルの濃縮された供給物を導き、続いてシミュレート移動床クロマトグラフィー装置を利用する第２ステップを行ってもよい。実施例６この実施例は、精製されたＥＰＡおよびＤＨＡを回収するために、魚油から得られた脂肪酸エステル類の混合物の精製を示すものである。使用された供給組成物は、実施例５と同様である（表２ｂ参照）。この分画は、分取超臨界流体クロマトグラフィー（ＰＳＦＣ）と、これもまた溶離液として超臨界流体を用いるシミュレート向流移動床クロマトグラフィーとの組み合わせにより実施された。第１ステップは、固定相として結合オクタデシルシリカゲル（１２〜４５μm ）でパックされた６０mmの直径のクロマトグラフィーカラム、溶離液として５０℃ での超臨界ＣＯ₂、圧力はカラムの入口で１６０バール、カラムの出口で１５４バール、ＣＯ₂の流量４０kg／時によって操作される。循環時間は１２分；供給物の１２gはインジェクションによって注入される（６０g／時）。減圧による溶剤の分離の後に、４つの画分が収集される：Ｆ１およびＦ４は廃棄され、Ｆ２（富ＥＰＡ）およびＦ３（富ＤＨＡ）は第２ステップにおけるさらなる精製に施される（シミュレート移動床）：供給物およびＦ１〜Ｆ４の画分の重量の組成を表７に示す。使用されたシミュレート移動床装置は、実施例５で使用したものと同じ特徴を有する（同じサイズ、同じ固定相、８つのカラム、２つのカラム／ゾーン）。しかしながら、図６に概略的に示されるように、画分Ｆ２およびＦ３に対応する２つの注入ポイント、１つの収集ポイント（ＳＢ）および抽出物収集ポイントＳＡが存在する。有効性の比較のために行われた２つのケースの操作パラメーター、流量および回収を以下に示す。実施例６（ａ）定圧１３０バール。温度５０℃。分離器：圧力５０バール。温度５０℃。 − シフト期間：１.５２分； − 溶離液リサイクル流量（ＩＲ）：５５kg／時（ＣＯ₂）； − 溶離液導入（ＩＥ）：４.６３５kg／時（ＣＯ₂）； − 第１の注入ＩＦ２（画分Ｆ２に対応）：２.９７kg／時（油０.０３５kg／時（Ｃ２０：５が０.０２２５kg／時、Ｃ２２：６が０.００４６kg／時）を含む） − 第２の注入ＩＦ３（画分Ｆ３に対応）：２.９７kg／時（油０.０２８９kg ／時（Ｃ２０：５が０.０１０２kg／時、Ｃ２２：６が０.０１６３kg／時）を含む）； − 画分（ＳＢ）：１０.６kg／時（油０.０２４４kg／時（Ｃ２２：６が０. ０２０８％、純度＞８５％）を含む）； − 画分（ＳＡ）：０.０７５kg／時（油０.０３５kg／時（Ｃ２０：５が０. ０３２４％、純度＞９２％）およびＣＯ₂０.０４０kg／時を含む）。実施例６ｂ温度５０℃。圧力勾配ゾーンＩの圧力：１５０バールゾーンIIの圧力：１３５バールゾーンIIIの圧力：１１５バールゾーンIVの圧力：１１５バール分離器：圧力５０バール、温度５０℃ − シフト期間：１.５２分 − 溶離液リサイクル流量（ＩＲ）：５５kg／時（ＣＯ₂）； − 第１の注入ＩＦ２（画分Ｆ２に対応）：油５.５kg／時（Ｃ２０：５が０. ０４１７kg／時、Ｃ２２：６が０.００８５kg／時）； − 第２の注入ＩＦ３（画分Ｆ３に対応）：５.５kg／時（油０.０５３５kg／時（Ｃ２０：５が０.０１８８kg／時、Ｃ２２：６が０.０３０２kg／時）を含む）； − 画分（ＳＢ）：８.０kg／時（油０.０４５２kg／時（Ｃ２２：６が０.０３８５、純度＞８５％）を含む）； − 画分（ＳＡ）：０.１２７kg／時（油０.０６４７kg／時（Ｃ２０：５が０ .０６０３、純度＞９３％）およびＣＯ₂０.０６２kg／時を含む）。実施例２ｂと同様に、リサイクルする溶離液ＳＲの１部分（２.９４kg／時）を、供給物を希釈するために使用する。これらの２つの実施例において、このプロセスは両方の画分に非常に高い純度をもたらす：ＥＰＡは純度９２％で９９％回収され、ＤＨＡは純度８５％で９９％回収される。実施例６ａおよび６ｂで得られた製造の結果を比較すると、圧力を変更するシステムは非常に有効である。同じ装置および同じ純度の要求では、圧力勾配を用いる生産性は１.８５まで増加する。実施例７この実施例は、精製されたＥＰＡおよびＤＨＡを回収するために、魚油から得られた脂肪酸エステル類の混合物の精製を示すものである。使用された供給組成物は、先の実施例と同様である（表２参照）。この精製は、超臨界流体分画およびシミュレート移動床クロマトグラフィーの組み合わせにより実施した。プロセスは図７に記載されたものと同様である。操作条件は以下の通りである。１０mmのステンレス鋼ポールリングでパックされる４つのカラム。カラムＣ３は２つの異なるジャケット部を有し、カラムＣ４は４つの異なるジャケット部を有する。これにより増加する温度勾配が使用され、抽出物の内部還流がもたらされる。分離器ＢおよびＨは、油の分離および次なるステップへの循環、および従来技術のようなＣＯ₂リサイクルもたらされる圧力で維持された。４つの画分の組成を表８に報告する。シミュレート移動床装置は、先に記載されたものと同様の一般的な特性（例えば同じカラム、２つのカラム／ゾーン、同じ固定相）を有する。しかしながら、図８に示されるように、Ｆ₂およびＦ₃の画分に対応する２つの注入ポイント、２つの収集ポイントＳＢ、ＣＦおよび抽出物収集ポイントＳＡが存在する。有効性の比較のために行われた２つのケースの操作パラメーター、流量および回収を以下に示す。実施例７（ａ）定圧１３０バール。温度５０℃。分離器：圧力５０バール。温度５０℃。 − シフト期間：２.２３分； − 溶離液リサイクル流量（ＩＲ）：５５kg／時（ＣＯ₂）； − 溶離液導入：１２.２kg／時（ＣＯ₂）； − 第１の注入ＩＦ２（画分Ｆ２に対応）：３.２４kg／時（画分Ｆ２（表８の組成）の０.０３２kg／時およびＣＯ₂の３.２１kg／時からなる）； − 第２の注入ＩＦ３（画分Ｆ３に対応）：１.９３kg／時（画分Ｆ３（表８の組成）の０.０１９３kg／時およびＣＯ₂の１.９１kg／時からなる）； − 画分（ＳＡ）：０.０１kg／時（油０.０１７kg／時およびＣＯ₂０.００８ kg／時からなる）。 − 画分（ＳＢ）：６.４７kg／時（油０.０３１kg／時（Ｃ２０：５、純度：７７.８％、Ｃ２２：６＝１％）およびＣＯ₂６.４４kg／時からなる）。 − 画分（ＳＣ）：１０.９２kg／時（油０.０１９kg／時（Ｃ２２：６、純度＝８４％、Ｃ２０：５＜１％）およびＣＯ₂１０.９kg／時からなる）。実施例７ｂ圧力勾配。ゾーン１の圧力：１５０バールゾーン２の圧力：１３５バールゾーン３の圧力：１１５バールゾーン４の圧力：１１５バールゾーン５の圧力：１１５バール温度：５０℃、分離器：圧力５０バール、温度５０℃ − シフト期間：１.６０分 − 溶離液リサイクル流量（ＩＲ）：５５kg／時（ＣＯ₂）； − 第１の注入ＩＦ２（画分Ｆ２に対応）：６.４０kg／時（画分Ｆ２の０.０６４kg／時およびＣＯ₂の６.３４kg／時からなる）； − 第２の注入ＩＦ３（画分Ｆ３に対応）：３.８１kg／時（画分Ｆ３の０.０３８kg／時およびＣＯ₂の３.７７kg／時からなる）； − 画分（ＳＡ）：０.０１５kg／時（油０.０１kg／時およびＣＯ₂０.０１kg ／時からなる）。 − 画分（ＳＢ）：２.０３kg／時（油０.０６kg／時（Ｃ２０：５、純度：７８.５％、Ｃ２２：６＝０.５％）およびＣＯ₂１.９７kg／時からなる）。 − 画分（ＳＣ）：４.５１kg／時（油０.０３７kg／時（Ｃ２２：６、純度＝８４％、Ｃ２０：５＜１％）およびＣＯ₂４.４７kg／時からなる）。実施例５ｂおよび６のように、リサイクル溶離液ＳＲの１部を、供給物の希釈のために使用する（ＣＯ₂の３.６７kg／時）。これらの２つの実施例において、ＥＰＡおよびＤＨＡは、９９％で回収された。純度は実施例６よりも僅かに低いものであった（ＥＰＡが＞７７％、ＤＨＡが＞８４％）。なぜならば、超臨界流体分画（実施例７）により得られたＥＰＡおよびＤＨＡの供給組成物は、超臨界流体クロマトグラフィー（実施例６）で得られたものよりも低いからである。実施例７ａおよび実施例７ｂの結果を比較すると、同じ装置および同じ純度の要求で、圧力の変更システムが劇的にその生産性を増加させていることが分かる（圧力勾配を使用する生産性は１.９７まで増加した）。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年４月２７日【補正内容】補正された請求の範囲１．１種以上のポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を含む供給組成物から、１種以上の精製されたポリ不飽和脂肪酸または該ポリ不飽和脂肪酸の混合物を回収するための方法において、該方法は：（ｉ）該組成物を、溶剤が超臨界圧力での流体である（ａ）固定床クロマトグラフィーまたは（ｂ）多段階向流カラム分画により処理し、１種以上のＰＵＦＡを多く含有する画分を回収し、および（ii）前記のステップ（ｉ）で回収されたＰＵＦＡを多く含む１つ以上の画分を、シミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーによるさらなる分画に施し、精製されたＰＵＦＡまたはＰＵＦＡ混合物を含む１つ以上の画分を回収するか、あるいは（iii）前記の１種以上のＰＵＦＡを含む供給組成物を、溶離液として超臨界圧力での流体を用いるシミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーによる分画に施し、精製されたＰＵＦＡまたはＰＵＦＡ混合物を含む１つ以上の画分を回収することを特徴とする方法。２．ステップ（ｉ）で固定床クロマトグラフィーに使用される溶離液が、超臨界圧力での流体である請求の範囲第１項に記載の方法。３．ステップ（ｉ）で多段階向流カラム分画が、２つ以上の多段階向流カラムにおいて行われる請求の範囲第１項に記載の方法。４．ステップ（ｉ）で回収された１つ以上のＰＵＦＡの少ない画分が廃棄され、溶離液また溶剤の回収のための蒸発に施され、および／またはリサイクルされ、および／または供給組成物に戻される請求の範囲第１項ないし第３項のいずれか１項に記載の方法。５．ステップ（ｉ）で回収された２つ以上の画分が、ステップ（ii）に導入される請求の範囲第１項ないし第４項のいずれか１項に記載の方法。６．２つ以上の画分が、シミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーシステムに、異なる注入ポイントで導入される請求の範囲第５項に記載の方法。７．超臨界圧力での流体が、ステップ（ii）における溶離液として使用される請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか１項に記載の方法。８．ステップ（ii）で回収された１つ以上のＰＵＦＡの少ない画分が廃棄され、および／またはステップ（ｉ）または（ii）にリサイクルされる請求の範囲第１項ないし第７項のいずれか１項に記載の方法。９．ステップ（ｉ）（ａ）および／またはステップ（ii）において使用されるクロマトグラフィーシステムの固定相として、Ｃ１８結合シリカゲルが使用される請求の範囲第１項ないし第８項のいずれか１項に記載の方法。１０．１種以上のポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を含む供給組成物から、１種以上の精製されたポリ不飽和脂肪酸または該ポリ不飽和脂肪酸の混合物を回収するための方法において、該方法は、ステップ（iii）を含むものである請求の範囲第１項に記載の方法。１１．流体がＣＯ₂である請求の範囲第１項、第２項、第７項および／または第１０項に記載の方法。１２．供給組成物が、動物または植物由来の組成物であり、該組成物が、必要に応じてＰＵＦＡ濃度を高めるためにおよび／または汚染物質を除去するために、１種以上の前処理に施される請求の範囲第１項ないし第１１項のいずれか１項に記載の方法。１３．動物由来の組成物が魚油である請求の範囲第１２項に記載の方法。１４．魚油がエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）および／またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含有し、精製されたＥＰＡおよび／またはＤＨＡが回収されるように方法が実施される請求の範囲第１３項に記載の方法。明細書脂肪酸およびその誘導体のクロマトグラフィーによる分画方法本発明は、ポリ不飽和脂肪酸またはその誘導体を含む組成物のクロマトグラフィーによる分画方法に関するものである。脂肪酸またはその誘導体の分画は、近年幅広く試験されてきている。その興味のもたれる理由は、とくに長鎖のポリ不飽和脂肪酸のような幾つかの脂肪酸が血小板凝集、炎症、免疫応答のような生物学的機能の調節に重要な役割を果たす、プロスタサイクリンおよびプラスタグランジンを含むいわゆるプロスタノイド化合物の先駆物質であるという認識にある。本明細書において、ポリ不飽和脂肪酸は、末端のメチル基から数えるとき最初の二重結合の位置をオメガ−またはｎ−数とするシステムにより定められる。例えばオメガ−３またはｎ−３脂肪酸の場合、最初の二重結合は該酸の末端メチル基から３番目の炭素原子に存在する。また、例えばＣ１８：３と脂肪酸が定められたとき、これは鎖の中に１８個の炭素原子を有し、かつ３つの二重結合を有する脂肪酸について言及している。２つの重要なポリ不飽和オメガ−３脂肪酸、つまりＥＰＡ（エイコサペンタエン酸、Ｃ２０：５）およびＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸、Ｃ２２：６）は、魚油に見いだされている。これらの脂肪酸の生物学的性質は、数多くの刊行物および特許、例えば英国特許第２２２１８３号明細書に討論され、ＥＰＡおよびＤＨＡの濃縮混合物は、心臓血管の疾病の多くの危険因子の治療および予防に有効な生成物であることを教示している。同様に、ガンマ−リノレン酸またはアラキドン酸のようなオメガ−６系のポリ不飽和脂肪酸は、栄養学的および薬学的使用のために、亜麻仁油またはコーン油から製造することができる。毒性の存在することなく活性であるべきために、これらのポリ不飽和化合物は、天然に存在しているようにすべてｃｉｓ（Ｚ−Ｚ）形を示さなくてはならない。不幸なことに、ポリ不飽和脂肪酸は酸素の存在下で加熱されると極端に変質しやすい。なぜならば、これらはまず異性化し、過酸化し、オリゴマー化するからで分析および工業的製造のために使用されている。大規模でのクロマトグラフィープロセスに関して、好適なシステムは言及され、最近のシンポジウムで比較されている（分取および工業クロマトグラフィーに関する第9回シンポジウム会報、1 992年4月、M．PERRUT編集、ISBN 2-905267.18.6、R.M．NICOUDおよびM．BAILLY 、205〜220頁の論文参照）。従来、大規模固定床クロマトグラフィーが、ＥＰＡおよびＤＨＡの精製画分を得るために用いられてきた（M．Perrut、1988年、分取高速液体クロマトグラフィーによるポリ不飽和脂肪酸（ＥＰＡおよびＤＨＡ）エチルエステルの精製。ＬＣ−ＧＣ６：914-20、JM Beebe、PR BrownおよびJG Turcotte（1988年）、魚油から誘導されたオメガ−３ポリ不飽和脂肪酸エステルの分取高速液体クロマトグラフィー。J．Chromatogr．459:369-78）、L．Doguet、D．Barth、M．Perrut 、分取超臨界クロマトグラフィーによるポリ不飽和脂肪酸エステルの分画、超臨界流体に関する対話、1991年10月16〜17日、パリ、M．Perrut編集）。液体クロマトグラフィーによる分画を含む個々のポリ不飽和脂肪酸の精製のための方法は、Derwent,WPI,Dilog accession no 008344449,Abstract of ZA Patent no.9004 25に開示されている。しかしながら、低い生産性および製造物の高い希薄化により、この技術は、たとえポリ不飽和脂肪酸の濃度の第１ステップが、上記のDerw entの要約書、accession no 008344449に記載されているように、抽出プロセスを行ったとしても、市販製造には法外に高価であると考えられている。対照的に、シミュレート移動床システムは、吸着剤を含む数多くの個々のカラムからなり、これらは連続的に互いに連結され、且つシステムにおける混合物および溶離液の注入ポイントと分離された成分の収集ポイントとを周期的に移動させることにより操作される。この総体的な効果は、固体吸着剤の移動床を含む単一カラムの操作をシミュレートすることである。従来の固定床システムは、溶離液が通過する固体吸着剤の固定床を含むカラムからなるが、シミュレート移動床システムは、連続向流移動床をシミュレートするように操作される。シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムの基本的な操作原理は、添付の図面の図１を参照して、以下、本明細書によりさらに記載されるであろう。液体溶離液を採用するシミュレート移動床クロマトグラフィーは、すでに公知であり、とくに２つの非常に類似した成分の分離や、類似成分の混合物から、ある１つの成分を分離するために、２０年以上前から使用されている。シミュレート移動床の有利さは、従来の固定床クロマトグラフィープロセスと比較することにより明確となる：一つは、数多くの刊行物にも記載されているように、溶剤（流体）と抽出物および溶質との間の簡単な分離にある。このような流体の興味ある性質は、分析のためか（この技術は今日実験室において幅広く用いられている）、あるいは仏国特許第2527934号明細書に開示されたプロセスによる製造のために、溶離クロマトグラフィーにおいて長い間開発されてきた。これらの流体は、米国特許第4061556号明細書、同第4124528号明細書および同第4147624号明細書に記載されているように吸着剤に固定される化合物のための脱着として用いられている。近年の特許出願（仏国特許出願第9205304号、同第9209444号、PCT FR9300419 号）において、シミュレート移動床の様々なゾーンに、様々な溶離力を有する溶離液を用いる可能性がディスカッションされており、従来のプロセスに対して、溶離力の変化を許す優れたプロセスおよび装置を示す単純な２成分系の混合物を使用した幾つかの例と、一定の溶離力を有する装置とが示されている。とくに、これらの出願は、超臨界圧力での流体、すなわち超臨界流体または臨界未満の流体の使用を記載しており、その物理化学的性質は、たとえ工業的スケールの装置であっても、簡単な溶離力の変更を可能にしている。さらに、溶離液として非毒性の非引火性の二酸化炭素を使用することは、従来の有機溶剤に関係するいかなる危険を避けるものであり、潜在する危険な有機溶剤の痕跡量をも認められない精製された最終製品を得ることができる。上記のように、シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムにおける溶離液として、超臨界圧力での流体を用いるという概念は、単純な２成分系の混合物の分離に適用されてきたが、この概念をポリ不飽和脂肪酸の精製に利用することは従来から提案されていない。なぜならば、いかなる場合でも最終分画／精製ステップの前に前処理が行われ、数多くの成分を含む複雑な混合物は、上記のように常に処理されているからである。とくに二酸化炭素またはプロパン、ヘキサンおよびアルコール類のような有機溶剤と混合された二酸化炭素の超臨界流体を用いる向流カラムにより、植物油または動物油を分画することが可能であることは、かなり前から知られている（例機溶剤は毒性であるが、二酸化炭素は非毒性であるので、食品または薬学的製造物の製造において重要な有利さとなる。図４は、溶離液として超臨界流体を用いて、どのようにして連続シミュレート移動床クロマトグラフィーシステムが操作されるのかを詳細に説明したものである。図示されたシステムは、複雑な混合物を４つの画分に分画していることを示している。この装置は、ｎ個のクロマトグラフィーカラムからなり（ｎは好ましくは５〜２５の範囲で選択される）、１カ所の供給物注入部（ＩＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄ）および４つの画分収集ポイント（ＳＡ、ＳＢ、ＳＣ、ＳＤ）を有して（その内のひとつは分離容器Ｓ上におかれている）連続的に連結されている。溶離液の減圧は、溶離液の調製手段ＩＥおよびコンプレッサまたはポンプＫに連続的に連結されているＳを経て、熱交換器Ｒ（雰囲気に応じて加熱または冷却するが、液体の溶離液が現れまた水滴の形成を避けるために必要なエンタルピーを供給するために、通常は加熱される）に連結されるバルブＤを通じて操作される（概略的には図３ｄおよび４に示される）。異なるクロマトグラフィーのゾーン間での圧力変化、供給物の注入、溶離液調製、ゾーン間での画分の収集を行うために、図４に示される次に示される複雑なバルブの配列を使用することができる：・２つの連続するカラム（Ｃ_k−Ｃ_k+1）間で、１つの停止バルブ（Ｖ_k）および１つの調節バルブ（Ｕ_k）；・カラム（Ｃ_k）の出口は、停止バルブ（Ｖ'_k）を通じて減圧ステップ（バルブＤ、熱交換器Ｒおよび分離容器Ｓ）に連結されている；・カラム（Ｃ_k）の入口は、停止バルブ（Ｖ''_k）を通じて溶離液注入ラインＩＲに連結され、停止バルブ（Ｗ'''_k-1）を通じて注入ラインＩＡ＋Ｂ＋Ｃ＋Ｄに連結され、さらに停止バルブ（Ｗ''_k-1）、（Ｗ'_k-1）および（Ｗ_k-1）を通じてそれぞれ画分収集ラインＳＡ、ＳＢおよびＳＣに連結されている。本発明のプロセスを実施するために、このようなバルブを操作することは容易である：・ゾーン０がカラム（Ｃ_j）で始まると仮定すると：＊バルブ（Ｗ_j-1）、（Ｗ'_j-1）、（Ｗ''_j-1）、（Ｗ'''_j-1）が閉じられ

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．１種以上のポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を含む供給組成物から、１種以上の精製されたポリ不飽和脂肪酸または該ポリ不飽和脂肪酸の混合物を回収するための方法において、該方法は：（ｉ）該組成物を、溶剤が超臨界圧力での流体である（ａ）固定床クロマトグラフィーまたは（ｂ）多段階向流カラム分画により処理し、１種以上のＰＵＦＡを多く含有する画分を回収し、および（ii）前記のステップ（ｉ）で回収されたＰＵＦＡを多く含む１つ以上の画分を、シミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーによるさらなる分画に施し、精製されたＰＵＦＡまたはＰＵＦＡ混合物を含む１つ以上の画分を回収することを特徴とする方法。２．組成物が、固定床クロマトグラフィーによりステップ（ｉ）で処理される請求の範囲第１項に記載の方法。３．固定床クロマトグラフィーに使用される溶離液が、超臨界圧力での流体である請求の範囲第２項に記載の方法。４．組成物が、溶離液が超臨界圧力での流体である多段階向流カラム分画によりステップ（ｉ）で処理される請求の範囲第１項に記載の方法。５．多段階向流カラム分画で使用される溶媒が、超臨界圧力での流体である請求の範囲第４項に記載の方法。６．２つ以上の多段階向流カラムにおいて分画が行われる請求の範囲第４項または第５項に記載の方法。７．ステップ（ｉ）で回収された１つ以上のＰＵＦＡの少ない画分が廃棄され、溶離液また溶剤の回収のための蒸発に施され、および／またはリサイクルされ、および／または供給組成物に戻される請求の範囲第１項ないし第６項のいずれか１項に記載の方法。８．ステップ（ｉ）で回収された２つ以上の画分が、ステップ（ii）に導入される請求の範囲第１項ないし第７項のいずれか１項に記載の方法。９．２つ以上の画分が、シミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーシステムに、異なる注入ポイントで導入される請求の範囲第８項に記載の方法。１０．超臨界圧力での流体が、ステップ（ii）における溶離液として使用される請求の範囲第８項に記載の方法。１１．ステップ（ii）で回収された１つ以上のＰＵＦＡの少ない画分が廃棄され、および／またはステップ（ｉ）または（ii）にリサイクルされる請求の範囲第１項ないし第１０項のいずれか１項に記載の方法。１２．ステップ（ｉ）（ａ）および／またはステップ（ii）において使用されるクロマトグラフィーシステムの固定相として、Ｃ１８結合シリカゲルが使用される請求の範囲第１項ないし第１１項のいずれか１項に記載の方法。１３．１種以上のポリ不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を含む供給組成物から、１種以上の精製されたポリ不飽和脂肪酸または該ポリ不飽和脂肪酸の混合物を回収するための方法でにおいて、該方法は、該組成物を、溶離液として超臨界圧力での流体を用いるシミュレート連続向流移動床クロマトグラフィーによる分画に施し、精製されたＰＵＦＡまたはＰＵＦＡ混合物を含む１つ以上の画分を回収することを特徴とする方法。１４．流体がＣＯ₂である請求の範囲第３項、第５項および／または第１３項に記載の方法。１５．供給組成物が、動物または植物由来の組成物であり、該組成物が、必要に応じてＰＵＦＡ濃度を高めるためにおよび／または汚染物質を除去するために、１種以上の前処理に施される請求の範囲第１項ないし第１４項のいずれか１項に記載の方法。１６．動物由来の組成物が魚油である請求の範囲第１５項に記載の方法。１７．魚油がＥＰＡおよび／またはＤＨＡを含有し、精製されたＥＰＡおよび／またはＤＨＡが回収されるように方法が実施される請求の範囲第１６項に記載の方法。１８．請求の範囲第１項ないし第１７項のいずれか１項に記載の方法により得られた、精製されたポリ不飽和脂肪酸またはポリ不飽和脂肪酸の混合物。