JPH07500191A - 検定システム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 検定システム 本発明は、化学的および生化学的検定に関し、さらに詳しくは蛍光分析のための 改善された光学的装置および方法に関する。

試験下のサンプルおよび１種以上の試薬のアリコートを高い特異的反応で様々に 反応させてリガンド／結合複合体たとえば抗原／抗体または類似の複合体を形成 し、次いでサンプルからの予め決められた部分の力価についてサンプルを調べる ために観察するという検定がよ（知られている。代表的なものとしては、抗体を 用いてこの抗体と特異的な抗原の存在について検定するが、しかしこのような検 定はハブテンたとえばホルモン、アルカロイド、ステロイド、抗原、抗体、核酸 およびそのフラグメントの量を決めることにまで広げられ、ここで使用される用 語“リガンド／結合“は広い意味に理解されるべきである。

感受性免疫検定は、一般には複合体の標識化成分をたとえば試薬中に混入し、非 複合化標識試薬を次いで複合化試薬から分離するトレーサー技術を使用する。

複合化物はその後標識物からのシグナルを観察することにより定量することがで きる。放射性同位元素、蛍光および化学ルミネッセント分子、比色標識物および 他のマーカーを用いて複合体の成分または一部を標識化しそして適当な装置を使 用して標識物からの輻射線を検定しそして測定する。

結合複合体の少な（とも−の成分を複合体の形成に先立って最初に固体支持体へ 結合するような検定では、支持体にこの成分を結合するために必要とされる時間 が一般に長いため基本的問題が生じる。蛍光分析、たとえば普通の９６凹部微量 滴定板において実施されるようなものは固相に成分を結合するために何時間とい う程度の時間を必要とし、これにもかかわらず加熱、振盪等のような手段も講じ る。リガンドと結合または被覆するために利用可能に作られた固相の表面積が増 加すると、結合の遅れはかなり減るということはわかるであろう。したがって、 このような固相分析（たとえば微量滴定凹部分析、ディツプスティック分析等） に関連する先行技術もまた固相として小さな粒子またはビーズを使用することを 示している。

充填された粒子ベッドを通してサンプルを流すと、検定されるサンプルリガンド と粒子の表面に固定化された結合体との間の反応を促進する。たぶん幾つかの要 因がこの強化された反応性：低下する拡散距離、乱流のためのサンプルの定期的 攪拌および暴露される表面積が高いための反応容量における結合部位の高密度に 寄与するであろう。

公知の粒子分析は、機械的フィルターを介して通過させることにより凝集したビ ーズを非凝集したビーズから分離する定量的または半定量的スライド凝集および 技術を含むよく知られたビーズ凝集試験を含む。別の公知の粒子分析は米国特許 第４．７８０．４２３号に開示されており、これはその上に固定化されたリガン ドを有する調節された多孔度の粒子を懸濁液中でインキュベートして洗浄するも のである。洗浄は粒子の沈降および再懸濁を含むことができる。得られた蛍光度 を濃縮または懸濁粒子からのいずれかから読み取ることができる。さらに別の公 知分析で、粒子を膜またはフィルターに結合させ次いでサンプルをこれに通して 注入する。この技術は酵素比色検出に制限されると考えられる。粒子を水性懸濁 液中でインキュベートする場合、サンプルにおける遊離リガンドが横断しなけれ ばならない平均拡散距離および複合体の形成が完了するまでに必要な時間が非常 に大きくなるという傾向がある。

それ故、本発明の原則的目的は、固相の表面積の増加、拡散距離の低下、および 固相間の励起光源に対する光学的結合ならびに固相と検出物との結合の強化によ り反応速度および感度が向上した改善された光学的分析システムを提供するもの である。本発明の別の目的は、サンプルと検出物との間の望ましい強化をもた− 　らす新規フローセルを提供するものである。さらに本発明の別の目的は、少量 のサンプルを必要としそして特に全血の分析に適するような検定システムを提供 すること：リガンド／結合反応を、フローセルの光学的システムから容易に挿入 および取り外し可能である使い捨てアイテム内に制限するような分析システムを 提供すること；および分析されるサンプル部分以外の所望の複合体の成分の全て を前もって準備するような分析システムを提供することである。

本発明の他の目的は、一部は明らかであり一部は以後明らかになるであろう。

一般に、本発明の前述のそして別の目的は励起すると電磁線を放出する予定の標 識物（ｔａｇまたは１ａｂｅｌ）を用いて、液体サンプルを検出するためのシス テムにより達成され、該システムは液体流れを通すのに適する中空の光透過性導 管手段と、該導管手段に設けられた光透過性物質の一つ以上の分かれた多孔性塊 状物とを含み、光透過性物質の塊状物の多孔度はサンプルの液体流れがその中を 流れることを許すように選択され、それぞれのリガンド／結合複合体、たとえば 特異的結合リガンドの少なくとも一部は各塊状物の表面に予備被覆する等のよう にして固定化されてなるものである。

一実施態様において、塊状物は、好ましくは実質的に光透過性の、特に形成され た複合体が蛍光標識物を含む場合、蛍光を励起するのに必要な輻射線および励起 された蛍光の両方とも透過する複数の粒子を含む。粒子は一般に特定の範囲内の 直径の寸法のビーズであり、焼結等により予備形成される。これに代わり、導管 手段に設けられた流動性多孔質バリヤ一手段に対し付着することにより塊状物を 形成することができる。後者の場合、バリヤ一手段を導管手段内に設けこれによ り室の少なくとも一つの壁を画成し、該バリヤ一手段の多孔度は前記範囲より十 分小さくこれにより導管手段を通る液体流れに混入している粒子がバリヤ一手段 により捕捉されそして付着して室に多孔性塊状物を形成する。

本発明の好ましい実施態様は、これを通る導管手段がレンズ手段の光学軸を横断 して伸びそしてその焦点領域を通過する中空の管状通路を形成する集束光学レン ズ手段を含む。一般的には、レンズ手段は複数のレンズを含み、そして導管手段 はこれらレンズの一つを通って伸びる。励起すると電磁線を放出する予定の標識 物またはラベルを用いてシステムを使用する場合、レンズ手段は励起および放出 輻射線の両方ともを集めることができるに違いない。

したがって、本発明は、構成品、要素の組み合わせおよび部品の配置を有する装 置、および幾つかの工程とこのような工程の一つ以上とその他のものそれぞれと の関係を含む方法を含むものであり、全ては以下の詳細な記載に例示したものお よび請求の範囲に示される出願の範囲である。

本発明の性質および目的をさらに十分理解するために、添付の図面と関連する以 下の詳細な説明を参照すべきであり、幾つかの図面中同じ数字は同じ部分を示す ために用いられている。

第１図は、本発明の原理を具体化する分析装置の横断面模式図であり；第２図は 、本発明のフローセルの一実施態様の概略横断面図であり：第３図は、第２図の フローセルの横断面図であり；第４図は、第２図の変形フローセルの概略的横断 面図であり；第５図は、本発明の別の変形フローセルの概略的横断面図であり； 第６図は、第５図の変形フローセルの概略的横断面図であり；第７図は、第５図 の別の変形フローセルの概略的横断面図であり；第８図は、本発明のさらに別の フローセルの実施態様の概略的な横断面図である。

第１図では、液体サンプルを分析するための例示的装置２０を示し、これは励起 線を提供するための光源２２、励起線により刺激された光を検知するための光検 知器２４、たとえば二色性ミラーまたは半透明ミラーのようなビームスプリッタ 一手段２６およびコリメータ一手段２８を含む光学システムを使用する。第１図 、第２図および第３図の実施態様は、説明の容易性のために、蛍光免疫検定法の 関係で特に使用することについて記載しているがしかしこれに限定されるべきで はないことは理解されるべきである。ここで使用する用語“光”とは、可視スペ クトルならびに赤外線および紫外線付近の波長も含むものと理解されるであろう 。同様に、用語“励起”とは、蛍光の励起、照射によるような偏光されるかたま たはされない化学薬品による化学ルミネッセンスの励起、クロモゲンからの光の 反射による放出等を含むものと理解されるであろう。

光学システムの前述の要素は一般に相互に固定された光学的関係でフレーム（図 示せず）に設けられており、これは後にさらに十分に記載される。さらに、本発 明は特に第２図および第３図で拡大形で示されているフローセル３０を含み、こ の実施態様では、一般にガラス、高分子量ポリマーまたは類似物で作られる固体 集束レンズ３３を含む複合レンズシステムとして示される集束光学レンズ手段３ ２から形成される。レンズ３３は、レンズ３２の光学軸を横断する方向に向かう 細長い中空チャンネルまたは液体流れを案内する導管３４を有しそしてレンズ３ ３を通る一般に円形断面の管状通路からなることを特徴とする。このような円筒 形導管状の反応室３６の少なくとも一部はレンズ手段３２の焦点領域に設けられ ている。

すなわち、たとえばそれ自体でまたは適切な標識物を介して励起したたとえば蛍 光を発光することができるリガンドを含む液体が室３４を横断しそしてレンズ手 段３２により室３４上へ集められた励起輻射線によりここで適切に励起されて発 光すると仮定する。この蛍光発光を次いでレンズ手段により検出器２４へ向かわ せ、ここでたとえば検出器が電気的な場合、適当な電気信号が起きて蛍光を調べ るために評価することができる。

より良い信号−リガント比を提供するために、第４図で示す実施態様は寸法が決 められそしてレンズ手段３２の焦点領域に隣接する導管３４に設けられた機械的 流動性多孔質バリヤーまたはスクリーン３８を含み、これにより導管を通る流れ 中にある予め決められたサイズの粒子またはビーズ４０の輸送を阻止する。この ようなビーズは励起輻射線および励起した蛍光の両方に対し実質的に透過性であ り、そのためにはポリメチルメタクリレート、スチレン−ジビニルベンゼンコポ リマー等で形成されている。ビーズ４０は、ビーズの表面の少なくとも一部に設 けられた抗原／抗体複合体たとえば特異的結合リガンドたとえば抗原とこれに対 する抗体の少なくとも一部で被覆されている。

スクリーン３８のメツシュまたは多孔度は、サンプル液体とその構成成分を自由 に流すが被覆ビーズの流れを阻止するように選択され、これによりビーズ４０の 塊状物をスクリーンに対しそしてレンズ手段３２の焦点領域において付着させる 。ビーズの粒径は最小であるように選択されるが、しかしながらビーズの塊状物 がスクリーン３８に対し付着する場合サンプル構成成分は付着塊状物を未だに自 由に通過させるようにする。一般に、サンプルとして全血に十分に作用するビー ズ径は５０−２５０μ国の範囲、好ましくは約９８μｍである。もちろん、ビー ズ径はある程度サンプルの性質による（たとえば、血液、食物、尿、プロセス流 れ等）。

もちろん、メツシュ径はシステムで使用されるべきビーズの直径範囲によるが、 しかし一般には、直径約９８μｍのビーズに対してメッシュ径約５０μｌが適当 である。すなわち、サンプル液体が導管３４を流れるとこれは被覆されたビーズ ４０の付着した塊状物を通らなければならないので、その結果、検定部分がビー ズ上の皮膜と複合化するために通らなければならない拡散距離が非常に小さくな る。

この小さな拡散距離は、付着した塊状物を通るサンプルの長く湾曲した通路およ びビーズの高い表面／容量比と組み合わせてサンプルからの検定部分の非常に有 効な捕捉を可能にする。本発明のこの特性は、拡散時間が拡散距離の二乗により 減少するので重要である。また完全な固相が付着した塊状物中に非常に少量（た とえば、直径０．１８ｃｍの代表的導管に対し約０．０２ｃｍ”）含まれ、そし てレンズ３２中に“浸漬”されすなわち励起および検出システムの間に高い開口 数の光学的結合を提供する。蛍光シグナルは四番目の力である開口数により増加 されるので、高い開口数の光学的結合が非常に重要である。

第４図に示す本発明の操作において、多数のビーズ４ｏは好ましくは吸着または 他の公知の固定化技術によりビーズ表面に固定化された適当なリガンドとともに 予め添加され、そして懸濁する液体中に懸濁される。ビーズが普通は懸濁する液 体中に安定な懸濁液を容易には形成しない場合、これらをボルテクサ−（図示せ ず）または同様のミキサーに入れ、懸濁液中のビーズを攪拌により水性に維持す るようにしてもよい。ビーズ懸濁液の所望の部分をポンプ（図示せず）によりボ ルテクサーから吸い出し、導管３４へ注入し、ここでビーズの流れをスクリーン ３８により阻止し、反応室３６内にビーズ４０の付着物または塊状物を作る。検 定されるサンプル溶液のアリコートを次いで導管３４に通して流し、そして反応 室３６中のビーズ４０の塊状物はビーズの表面上にリガンド／結合複合体を形成 する効果がある。

よく知られているように、競合型分析については、サンプル溶液をフローセルに 流す前に、一般にサンプル溶液を最初に標識試薬で処理し、インキュベートする 。

検定がサンドイッチ型検定の場合、サンプル溶液をフローセルに通し、次いで標 識化抗体をセルへ通し、そしてビーズ塊状物に洗浄工程を行う。当該技術でよ（ 知られているように、標識化された一般に蛍光の成分は、競合型またはサンドイ ッチ型検定のいずれが実施されるかにより、固定化リガンドに対する補体もしく は結合体またはその類似物のいずれかでよい。標識物（Ｔａｇまたは１ａｂｅｌ ）は一般に蛍光染料たとえばフルオレスセイン染料、アクリジン染料等であり、 すべて当該技術でよく知られている。いずれのケースにおいても、得られたリガ ンド／結合複合体は複合体に対し結合する所望の染料部分を含む。ビーズ塊状物 に洗浄用緩衝液を通して洗浄後、いずれの未反応物質および特にいずれの遊離染 料成分も洗い出して、ビーズ上に固定化されているような染料部分のみを残す。

次いで、光源２２を活性化して励起光ビーム２３（破線で示す）を発生させ、次 いでこれをコリメーターレンズ２８により鏡２６へ向けさせ、コリメートされた ビームをレンズ手段３２へ反射させる。後者の焦点を合わせて、反応室３６にお けるビーズ４０の塊状物を位置させている焦点領域へ励起ビームを集め、そして 励起輻射線がビーズ４０の上の蛍光運搬体を励起して蛍光にする。この蛍光をレ ンズ３２を通して伝達し、ビームスプリッタ−ミラー２６を介して容易に検出す ることができる。測定を行ったのち、ビーズ４０の塊状物を導管３４を通って簡 単にフラッシュ−バックすることにより反応室３６から直ちに除くことができる 。

こうして記載したように、予め添加されたビーズの懸濁液またはプールから反応 室を充填する技術は明らかに自動化を受け入れることができ、その際、特異的検 定に対する成分、たとえば予め添加されたビーズ、サンプル溶液、標識試薬等は 、それぞれの貯蔵容器から物質の流れを調節する適当なバルブにより選択可能で ある。しかしながら、本発明はまたビーズ塊状物および試薬を直ちに使い捨て可 能にする持ち運び自由のシステムにも簡単に適用可能である。

たとえば、導管３４を第３図に示し、ここではレンズの光学軸を横断するレンズ 手段３２の焦点領域を通って簡単に通路とするが、一方、第５図に示す実施態様 において、導管３４は同様にレンズ３３を通るように設けられた均一直径の細長 い孔３４＾および孔３４＾よりやや小さい均一直径を有する細長い光透過性管４ ２とからなり、管４２は孔に挿入したり取り外したりすることができる。スクリ ーン３８は管４２内に設けられているので、後者はレンズの焦点領域に隣接して 孔３４＾内に位置するこ第６図に示すように、本発明のフローセルのさらに別の 実施態様において、導管３４は同様にレンズ３３を通る均一直径の細長い孔３４ Ａおよび孔３４＾のものよりやや小さい均一直径を有する細長い光透過性管４２ Ａとからなり、これにより管４２は孔へ挿入したり取り外したりすることができ る。スクリーン３８Ａおよび３８Ｂは相互に間隔をあけて管４２内に設けられ、 これにより管内部に反応室４４を画成するすることができる。第５図の実施態様 におけるように、反応室４４はレンズの焦点領域に隣接する孔３４＾内に位置す ることができる。室４４の中には特定範囲の直径に寸法が決められた複数のビー ズ４０が含まれ、スクリーンのメツシュがビーズ直径の範囲より十分少さいので 後者は室４４においてスクリーンにより捕捉され実質的にレンズ焦点領域に配置 可能に多孔性塊状物を形成する。第６図の実施態様におけるビーズは室４４に設 ける前に所望の特定の結合リガンドを予め塗布しておくのが好ましい。

第５図および第６図の実施態様の両方において、管４２は孔３４または３４Ａに 直ちに挿入したり取り外し可能であり、それゆえこのケースは“使い捨て可能” であると考えられることがわかるであろう。特に、第６図に示す“使い捨て可能 “は、密封容器に検査により予め添加され充填されるのに適し配布および使用に 便利である。第５図および第６図の実施態様の両方において、レンズ３２および 管４２Ａの両方を形成する物質は、そのそれぞれの屈折率が実質的に適合するよ うに選択される。管４２Ａおよびレンズ３２の間の最適光学結合をもたらすため に、屈折率−適合液体を管の周囲で管と孔３４Ａの内壁の間の間隔に設けること が好ましい。

第６図の実施態様のビーズ塊状物４０を、たとえば第５図のビーズ塊状物を作り だすめに使用したのと同じ技術、すなわち導管４２にビーズ懸濁液を流したとえ ば３８Ｂのようなスクリーンに対向して付着させ、次いで別のスクリーンをビー ズ塊状物を捕らえるために据えつけることにより形成される。これに代わり、多 孔性ビーズ塊状物はまた焼結または接着剤により相互に軽（接着した複数のビー ズから形成されてもよい。たとえば、ビーズ塊状物は、自立しているかまたは多 孔性支持体を塗布するかもしくは一対の多孔性支持体の間にサンドイッチを形成 することによりビーズの厚い層をもたらすことにより形成することができ、この 厚い層は、得られる塊状物の多孔度を実質的に減らさないであろう少量の接着剤 を含む。硬化後、皮膜を適当な特異的反応性リガンドで予め塗布し、皮膜の小さ い円形を打ち抜き、そして適当な寸法の管４２へ挿入する。これに代わり、所望 の多孔度の高分子量ポリマー物質のシートが市販されており、多孔性構造体内に 必要なリガンドを固定化するための処理後、これを打ち抜き、管４２へ挿入する ための所望の円形を作ることができる。すなわち、複数個のビーズ塊状物を準備 し、各々を異なったりガントで塗布する。得られた複数個のビーズ塊状物を、第 ７図に示すように一本の管４２に置き、これにより幾つかの異なったりガントに ついて別々にしかしほぼ同時に管を通るサンプル流れを検定する。

第８図に示すように、導管３４を浅く細長いチャンネル３４Ｂまたは断面半円形 カットの半管状部分として部分的に形成するかまたはレンズの光学軸に垂直にそ してレンズ手段３２の焦点領域を通過して伸びるレンズ３３の平面４８へ型作り を行う。導管３４の残りは、プレート５０に設けられた半円形断面の別の半管状 の細長いチャンネル３４Ｃにより形成される。後者は一般にヒンジ５２により表 面４８に隣接するレンズ３２に接続し、これによりプレート５０を回転して同軸 関係にチャンネル３４Ｃおよび３４Ｂを適合させ、実質的に円形断面の組合せ導 管を形成することができる。好ましい実施態様において、チャンネル３４Ｃの内 側表面は高度に反射性の皮膜５４が設けられている。

ここに含まれる本発明の範囲から逸脱することな（上記方法および装置において 一定の変化を行うことができるので、上記記載に含まれるかまたは添付の図面に 含まれる全ての事柄は説明におけるもので限定するものではないと解釈されるべ きである。

Claims (30)

【特許請求の範囲】
1. １．液体サンプルを検定するための装置であって、その中を流れる液体流れに適 する中空の光透過性導管手段；および前記導管手段に設けられた光透過性物質の 多孔性塊状物であって、前記光透過性物質の塊状物の多孔度は前記サンプルの液 体流れを許すように選択され、前記塊状物はリガンド／結合複合体の少なくとも 一部をその表面上に固定しているもの； とを、組み合わせて含むことからなる前記装置に使用するためのフローセル。
2. ２．前記導管手段内に設けられこれにより前記導管手段における室の少なくとも 一つの壁を画成する流動性多孔質バリヤー手段を含み、その際、前記多孔性塊状 物が特定範囲の直径に寸法が決められた複数の粒子を含み、前記バリヤー手段の 多孔度が前記範囲より十分小さく前記粒子が前記室における前記バリヤー手段に より捕捉され前記多孔性塊状物を形成することからなる請求項１記載のフローセ ル。
3. ３．前記バリヤー手段が相互に間隔を空けて離れた少なくとも一対のスクリーン を含み、前記スクリーンのメッシュが前記範囲の直径より十分小さく前記粒子が 前記室における前記スクリーンにより捕捉され前記多孔性塊状物を形成し、前記 粒子が前記リガンド／結合複合体の少なくとも各々の部分をその表面上に固定し ている請求項２記載の装置。
4. ４．前記バリヤー手段が一対のスクリーンを複数個含み、各々の前記一対のスク リーンが相互に間隔を空けて離れておりこれにより前記導管手段内にそれぞれの 反応室を画成し； 各々の前記室は特定範囲の直径に寸法が決められた複数の粒子を含み、前記スク リーンのメッシュが前記範囲の直径より十分小さく前記粒子が各々の前記室にお ける前記スクリーンにより捕捉されそれぞれの多孔性塊状物を形成し、各々の前 記塊状物の粒子が前記それぞれのリガンド／結合複合体の少なくともそれぞれの 部分をその表面上に固定している請求項２記載の装置。
5. ５．液体サンプルを検定するための装置であって、集束光学レンズ手段； 液体流れを通すのに適しそして前記レンズ手段の焦点領域を通過し前記レンズ手 段の光軸を横断して伸びる前記レンズ手段を通る中空の円筒状通路とを、組み合 わせて含むことからなる前記装置に使用するためのフローセル。
6. ６．前記レンズ手段が複数のレンズを含みそして前記通路が前記レンズの一つを 通って伸びる導管手段を含む請求項５記載の装置。
7. ７．前記導管手段に設けられた光透過性物の多孔性塊状物を含み、前記透過性物 の塊状物の多孔度を前記液体サンプルの流れを許すよう選択し、前記塊状物はリ ガンド／結合複合体の少なくとも一部をその表面上に固定している請求項６記載 の装置。
8. ８．前記導管手段を通る予め決められた大きさの粒子の流れを遮断するように寸 法を決められそして前記焦点領域に隣接して設けられた機械的、流動性多孔質バ リヤー手段を含む請求項５記載のフローセル。
9. ９．前記レンズの前記一つにおける第一の細長い半一管状チャンネルおよび第二 の細長い半一管状チャンネルであって、前記チャンネルが互いに合わさって前記 導管手段を面成するものを含む請求項６記載の装置。
10. １０．前記第二の半一管状チャンネルがその凹面部において光反射性表面を有す る請求項９記載の装置。
11. １１．前記第一のチャンネルの前記一つの伸長端部が前記第二のチャンネルの伸 長端部と蝶番式に接続している請求項９記載の装置。
12. １２．前記中空導管手段が前記円筒状通路に位置する光透過性管を含み、前記バ リヤー手段が前記管に設けられている請求項８記載の装置。
13. １３．前記バリヤー手段が相互に間隔を空けた一対のスクリーンを含み、これに より前記管内に反応室を画成し；そして特定範囲の直径に寸法が決められた複数 の粒子を含み、前記スクリーンのメッシュは前記範囲より十分小さくこれにより 前記粒子が前記室の前記スクリーンにより捕捉され実質的に前記焦点領域に位置 可能な多孔性塊状物を形成する請求項１２記載の装置。
14. １４．前記レンズ手段および前記管の屈折率が実質的に適合する請求項１２記載 の装置。
15. １５．前記管の周囲にそして前記管と前記通路の中間に設けられた屈折率適合性 液体を含む請求項１４記載の装置。
16. １６．前記通路の一部が前記レンズ手段における細長い半管状の第一のチャンネ ルとして形成され、そして前記通路の残りの部分が前記第一のチャンネルと適合 する細長い半管状の第二のチャンネルとして形成される請求項７記載の装置。
17. １７．前記第二のチャンネルが前記通路の内側表面の少なくとも一部を形成する 反射性表面を有する請求項１６記載の装置。
18. １８．特定範囲の直径に寸法が決められた複数の粒子を含み、前記流動性多孔質 手段が前記範囲より小さな直径の孔を有しこれにより前記粒子が前記バリヤー手 段に対向して前記導管手段に付着して実質的に前記焦点領域に設けられた多孔性 塊状物を形成する請求項８記載の装置。
19. １９．前記粒子が実質的に光透過性である請求項１８記載の装置。
20. ２０．前記粒子がその表面の少なくとも一部にリガンド／結合複合体の少なくと も一部で被覆された請求項１９記載の装置。
21. ２１．励起したとき輻射線を放出しうる標識物を用いた液体サンプルを検定する ための装置であって、 前記輻射線を集束することができそしてその中で前記レンズ手段の焦点領域を通 り前記レンズ手段の光学軸を横断して伸びるレンズ手段であって、前記導管手段 は液体流れに適するものであり； 粒子径の関数としての前記多孔性手段を通る粒子の通路を制限するために前記導 管手段において前記焦点領域に隣接して設けられた流動性多孔質バリヤーとを含 む前記装置。
22. ２２．前記輻射線の放出を励起するための手段を含む請求項２１の装置。
23. ２３．前記放出を励起するための前記手段が励起輻射線の供給源および前記励起 輻射線を前記焦点領域で前記導管手段に向けさせる手段とを含む請求項２２記載 の装置。
24. ２４．前記放出が蛍光である請求項２３記載の装置。
25. ２５．特定範囲の直径に寸法が決められた複数の粒子を含み、前記流動性多孔質 手段が前記範囲より小さな直径の孔を有し、これにより前記粒子を前記多孔性バ リヤーに対向して前記導管手段に付着して実質的に前記焦点領域に設けられた多 孔性塊状物を形成することからなる請求項２３記載の装置。
26. ２６．前記粒子が前記励起輻射線と前記蛍光線の両方ともに対し透過性であり、 そして固定した特異的結合リガンドで被覆された請求項２５記載の装置。
27. ２７．前記リガンドがリガンド／結合反応で複合体を形成し、前記複合体が適当 な励起輻射線により励起された場合蛍光を発光しうる分子で標識化される請求項 ２６記載の装置。
28. ２８．リガンド／結合複合体から放出される輻射線の検出により液体サンプルを 検定する方法であって、該方法が次の工程；特定範囲の直径に寸法が決められた 複数の粒子を準備し；前記粒子の懸濁液を後者の焦点領域を通りレンズ手段の光 軸を横断して伸びる導管手段に流し； 前記範囲より小さい直径の孔を有する多孔性手段により前記導管を通る前記粒子 の流れを阻止し、これにより前記粒子が実質的に前記焦点領域で付着し；少なく とも前記液体サンプルを流すことを含む粒子の前記付着を処理し、これにより前 記粒子の表面上に前記リガンド／結合複合体を作りだし；前記複合体を刺激して これにより特徴的輻射線をここから起こさせ；そして前記レンズ手段により伝達 される前記特徴的輻射線の放出を検出することからなる前記方法。
29. ２９．前記処理が、前記複合体の少なくとも一部でその表面の少なくとも一部分 において前記粒子を被覆し； 前記複合体を蛍光標識物で標識化し； 前記導管手段に通して前記粒子を付着し洗液を流して標識化複合体から未反応お よび蛍光標識物を分離する； ことからなる請求項２８記載の検定方法。
30. ３０．前記刺激が前記標識化複合体上へ励起輻射線を向かわせ；前記特徴的輻射 線は励起した標識化複合体から生じそして前記レンズ手段を通過する蛍光からな る請求項２８記載の検定方法。