JPH07508042A - 新規２’−０−アルキルヌクレオシドおよびホスホロアミダイトの製造法およびその使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 新規２−０−アルキルウリノンドおよびホスホロアミダイトの製造法およびその 使用 関連特許出願 本特許出願は、１９９２年１０月２７［］提出の米国特許出願箱’１６７、２６ ７号の一部継続出願であり、その特許出願は１９９２年７月２３日提出の米国特 許出願箱９１８．３６２号および１９９１年１月１１日提出の特許出願１１Ｓ９ １１００２４３号の一部継続出願であり、特許出願ｔｌｓ９１１００２４３号は 、１９９０年１月１１日提出の特許出願第６４３．３５８号および１９９０年８ 月１３日提出の特許出願第５６６、９７７号の一部継続出願である。これらの出 願は本出願の譲受人に譲渡されており、これらの特許文献をすべて参照文献とし てここに引用する。

発明分野 大発明は２′−Ｏ−アルキルウリノンおよびンチジンホスホロアミダイトの製造 方法に関する。本発明はまた、２−０−アルキル、３−０−アルキルおよび２° 、３′−ジーＯ−アルキル　２．６−シアミツプリンリボシド、２’−０−アル キルグアノシンおよび２−０−アルキルグアノノン類似体、これらの化合物のホ スホロアミダイトの製造方法およびこれらの使用法に関する。

背景技術 数多くのオリゴヌクレオチド類似体が製造されている。これまで合成されたオリ ゴヌクレオチドの一つの群は２゛−〇−置換オリゴヌクレオチドである。そのよ うなオリゴヌクレオチドはある種の独特かつ有用な性質を有している。ギャップ を持つ２゛修飾ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドと題され１９９１年１２ 月２４日に提出された米国特許出願箱８１４．９６１号（本出願の譲受人に譲渡 されており、全内容が参照文献としてここに引用されている）においては、２゛ 置換ヌクレオチドがオリゴヌクレオチドに導入され、徊補標的鎖へのオリゴヌク レオチドの結合が増強される一方、標的鎖を破壊するＲＮアーゼＨの発現を可能 にしている。

最近の論文（Ｓｐｒｏａｔ、　Ｂ、Ｓ、、　Ｂｅ１ｊｃｒ、　Ｂ、　ａｎｄ　Ｉ ｒ１ｂａｒｒｅｎ、＾、、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓよびスブライセオソー ムの構造研究のための有用なアンチセンスプローブとしての２°−０−メチル置 換オリゴヌクレオチドの更なる使用を示している。

２−０−メチルおよびエチルヌクレオチドならびにこれらの製造方法は、多くの 著者により報告されている。

Ｒｏｂｉｎｓ、　Ｍ、Ｊ、、　Ｎａ１ｋ、　Ｓ、Ｒ，ａｎｄ　Ｌｅｅ、＾、Ｓ、 に、、　Ｊ、　Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、　３９：１８９１　（P９７４） はジアゾメタンによる塩化第一スズ触媒モノメチル化を経る２′−〇−および３ ′−０−メチルグアノシンの低収員合成を報告している。その後、Ｒｏｂｉｎｓ 、　Ｍ、Ｊ、、　ｌ１ａｎｓｓｋｃ。

Ｆ、　ａｎｄ　［１ｅｒｎｉｃｒ、　Ｓ、Ｅ、、　Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｃｈｃｍ、 、　５９：３３６０　（１９８１）により報告されているごとく、”アデノシン 、シチジンおよびウリジンの２°−０−および３゛−ローメチルエーテル合成の ための簡便で高収量の方法が考案された。、、、Ｌ、かじながら、グアノシンで は著しく困難である゛。前述の論文において、著者らは２°−０−および３′− 〇−メチルグアノシンの改良合成法を報告している。グアノシンの代わりに２， ６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（２−アミノアデノシン ）の塩化第一スズ触媒ジアゾメタンメチル化を達成することにより合成法が改良 された。ジアミノプリン部分は次にアデノノンデアミナーゼにより対応するグア ノシン部分に還元された。Ｓｉｎｇｅｒ　ａｎｄ　ＫｕｓＩＩｌｉｅｒｅｋ、　 Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１５：　５０５２　（１９７６）による別のジアゾ 化反応においては、グアノシンのジアゾエタン処理の結果、２′および３’　− ０−エチルグアノシンの混合物が得られたことが報告されている。このアルキル 化では複素環式塩基もアルキル化されている。アルキル化生成物は塩基で処理し て複素環式塩基からエチル基が除去された。得られた生成物はグアノシンと同一 のＵＶスペクトルを持つが、グアノシンのＲｆとは異なったＲｆを持つことから 同定された。

２゛−〇−メチルヌクレオシドの別の改良合成がＩｎｏｕｅ、　Ｉｌ、　、　１ ｌａｙａｓｅ、　Ｙ、　Ｉｍｕｒａ、＾、漁ｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅ ａｒｃｈ、　１５：６１３１（１９８７）により報告されている。この合成法は Ａｇ２Ｏ存在下にＣＨ，Ｉを使用している。この方法はグアノシンを除いたすべ ての通常のヌクレオチドに対して有用であることが証明されている。これらの著 者により報告されているごとく、グアノシンはこの合成法では処理できない。従 つて、これらの著者は、ここでもジアゾメタンを用いてグアノシンの２°−０− メチル化を行わなければならなかった。グアニン塩基部分のアミノ官能性のメチ ル化を避けるため、グアニン塩基部分はイソブチリル基で保護された。さらに、 糖部分の３′−〇官能性のメチルエステル化を避けるため、糖部分の３°および ５′　ヒドロキシル両方の保護にＴＩＰＤＳ（テトライソプロピルジシロキサン ）が使用された。

５ｐｒｏａｔ　ｅｔ　ａｌ、　（上記文献）および５ｐｒｏａｔ、　Ｂ、Ｓ、、 　Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎ、　ＡｌＭ、、　Ｇａｒｃｉａ。

Ｒ，Ｇ、　ａｎｄ　Ｂｅ１ｊｃｒ、　Ｂ、、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒ ｅ５ｅａｒｃｈ、　１９ニア３３　（１９９１）は２゛−メ`ルグ アノシン（および２−０−アリルグアノシン）の合成を提出している。５ｐｒｏ ａｔ　ｅｔａｌ、のこれら両方の論文においては、２−０−メチルグアノシンお よび２°−Ｏ−アリルグアノシンの別の合成経路が示されている。彼らは従来知 られていた合成法に対してこの別の合成法を”非常に毒性でありかつ爆発する可 能性のある試薬ジアゾメタンの使用を避け“また、”酸化銀／ヨウ化メチルを使 用するより優れている”と特徴付けている。５ｐｒｏａｔ　ｅｔ　ａｌ、の合成 法と同じ方法がＢ、Ｓ、　５ｐｒｏａｔ　ａｎｄ＾、■、メチルリボヌクレオシ ド−３°−０−ホスホロアミダイトの合成が記載されている。ここに記載されて いるウリジンホスホロアミダイト合成ではアルキル化に先だって出発ヌクレオシ ドの塩基および糖の両方の保護を必要としている。塩基および糖の保護基がウリ ジンの適所に導入された後にのみアルキル化される。アルキル化後、塩基保護基 が除去され、続いて５°−〇−ジメトキシトリチル化およびホスファイト化（ｐ ｈｏｓｐｈｉｔｙｌａｔｉｏｎ）される。５ｐｒｏａｔおよび１．ａｍｏｎｄに より記載されているウリジンホスホロアミダイト合成は、塩基および糖が保護さ れた２゛−０−メチルウリジン類似体を利用している（すなわち必要としている ）。この類似体は次に保護シチジン類似体に変換され、糖から保護基が除去され 、類似体はジメトキシトリチル化され最後にホスファイト化される。５ｐｒｏａ ｔおよびＬａｌ１ｌｏｎｄの教示によるグアノシンホスホロアミダイト合成は、 ３°および５°糖ヒドロキシル基が保護された２−アミノ−６−クロロヌクレオ シドから出発している。このヌクレオシドは２．６−ジクロロ誘導体に変換され る。ジクロロ化合物は次に２°−０−アルキル化される。〇−アルキル化後、ジ クロロ化合物はジアジド中間体に変換される。ジアジド中間体は次にジアミノ中 間体に変換される。このジアミノ中間体は次に脱アミノ化されてグアノシン類似 体となる。グアノシン類似体の２−アミノ基は保護された後ジメトキシトリチル 化され最後にホスファイト化される。このグアノシン法はまた５ｐｒｏａｔ、ｅ ｔ、ａｌ、、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、１９９１１９ニ ア３３により報告されている。

上記の合成法は複数の工程および多くの試薬による処理を含んでいる（ウリジン に対して９の異なった試薬処理、シチジンに対しては１０およびグアノシンに対 しては１２）。シチジンおよびグアノシン化合物に対して必要とされる少なくと も一つの試薬は入手が容易ではな（従って非常に高価な試薬である。

別のグループは他の２゛−０−アルキル化ヌクレオシドの製造を教示している。

２゛−〇−メチルチオメチルグアノシンが■ａｎｓｓｋｅ、　Ｆ、　、　Ｍａｄ ｅｊ、　Ｄ、　ａｎｄ　Ｒｏｂｉｎｓ、　Ｍ、　Ｊ、　、　Ｔｅｔ窒≠■ ｅｄｒｏｎ、４０：１２５　（１９８７）により報告されている。それはグアノ シンの９−β−Ｄ−アラビノフラノノルグアニン（すなわちグアノシンのアラビ ノ類似体）への変換の際の酸化工程の小副成物として産生された。２°−０−メ チルチオメチル部分の付加は酸化工程で使用したＤＭＳＯ溶媒からのアルチファ クトである。２，６−シアミノブリンリボンドの２°−〇−メチルチオメチル誘 導体もｌ１ａｎｓｓｋｅ　ｅｔ　ａｔ、の論文に報告されている。それもまたＤ ＭＳＯ溶媒からのアルチファクトとして得られている。

さらに、Ｇｌａｄｋａｙａ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｋｈｉｍ、　Ｐｒ１ｒ、　５ｏ ｃｄｉｎ、、１９８９．４．５６ｇ、は、Ｎ１−メチル−２°−０−（テトラヒ ドロピラン−２−イル）および２′−〇−メチルシアノソンを開示する。５ｐｏ ｒｔ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、１ ９９１．　１９．７３３．は、２“−０−アリルグアノシンの製造を教示する。

グアノシンのアリル化はさらに別の合成経路を必要とした。Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎ 、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　１９９ ０，８７．７７４７．もまた２−０−アリルオリゴリボヌクレオチドについて研 究している。Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎ、　Ｃｔ　ａｌは、オリゴリボヌクレオチドに ２−〇−メチルー１２°−０−アリル−および２°−０−ジメチルアリル−置換 ヌクレオチドを取り込まぜ、これらのＲＮＡ類似体のアンチセンス分析における 影響を研究した。Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎは、２°−０−アリル含有オリゴリボヌク レオチドはＲＮＡおよびＤＮＡ特異的ヌクレアーゼのいずれによる消化に対して も耐性であり、ＲＮＡ／ＤＮＡに二重の特異性を持つヌクレアーゼに対しては２ °−０−メチルオリゴリボヌクレオチドよりわずかに強い耐性を示すことを見い だした。しかし１．、Ｊ・ら、Ｉｒ１ｂａｒｒｃｎは、２’−０−ジメチルアリ ル含有オリゴリボヌクレオチドは２゛−〇−メチルオリゴリボヌクレオチドと比 べて相補ＲＮＡ配列へのハイブリッド形成が劣っていることを見いだした。従っ て、Ｉｒ１ｂａｒｒｅｎは、アルキル化ＲＮＡプローブ（特に、２−０−アリル シチジン含有オリゴリボヌクレオチドより優れたもの）を製造するためのさらな る試みにおいては、５未満の炭素原子を含む２°−０−アルキル基に限られるべ きであることを示唆している。

２′−〇−アルキル置換ヌクレオチドを含むある種のオリゴヌクレオチドは、ヒ トの医薬として使用するための有力な候補である。長鎖アルキル基を持つもの（ すなわち４またはそれ以上の炭素原子）は特に有用である。例えば、長鎖アルキ ル基は鎖ハイブリッド形成により反対側の鎖に対して官能基を適当な配位に適応 させるであろう。従って、場合によっては、２°−〇−長鎖アルキルグアノシン ヌクレオチド等の２°−０−長鎖アルキルヌクレオチドが非常に望ましい。大規 模な治療試験での使用および最終的にヒト医薬として使用するには、大量のこれ らのオリゴヌクレオチドが合成されなければならない。大量のオリゴヌクレオチ ドのためには、オリゴヌクレオチドの合成に使用される大皿の２゛−〇−アルキ ルヌクレオシドボスホロアミダイトが必要とされる。従って、そのようなオリゴ ヌクレオチドの合成に使用される出発ホスホロアミダイトの価格および純度の両 方を考慮に入れなくてはならない。一般的前提として、合成工程の数が増加する と製造費用が増加する。さらに、工程の数が増加すると品質管理の問題が増大す る。この観点から、ヌクレオシドおよびヌクレオシドボスホロアミダイトを合成 するだめの新規かつ改良された方法に対する強い要望が存在することは明らかで ある。

発明の目的 ２−０−アルキル化ヌクレオシドおよびヌクレオシド類似体の合成法を提供する のが本発明の目的である。

２′−〇−および３°−０−アルキル化２，６−シアミツブリンリボシド化合物 の合成法を提供するのが本発明の目的である。

２°−０−アルキルヌクレオシドホスホロアミダイトの新規かつ改良された合成 法を提供するのが本発明の目的である。

２゛−０−アルキルグアノノンホスホロアミダイトの新規かつ改良された合成法 を提供するのが本発明の目的である。

２−０−アルキルウリジンホスホロアミダイトの新規かつ改良された合成法を提 供するのが本発明の目的である。

２゛−０−アルキルウリジンホスホロアミダイトの新規かつ改良された合成法を 提供するのが本発明の目的である。

２．６−ジアミツー９−　（２’−０−アルキル−β−〇−リボフラノシル）プ リンホスホロアミダイトの新規カリ改良された合成法を提供するのが本発明の目 的である。

本発明の改良されたホスホロアミダイト合成を利用する新規かつ改良されたオリ ゴヌクレオチド合成を提供するのが本発明の目的である。

本明細書および付随する請求の範囲から、当業者にはこれらおよびその他の目的 が明らかになるであろう。

発明の要約 本発明は構造： ■ （式中ＸはＲ１（Ｒ２）。であり。

Ｒ１はＣ３ｃｚｏアルキル、Ｃ４Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２゜アルキニ ルであり。

Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、二１・口、ニ トロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、０−アルキル 、Ｓ−アルキル、Ｎ）［−アルキル、Ｎ−ジアルキル、０−アリール、Ｓ−アリ ール、Ｎｌｌ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル 、アミノ、Ｎ−フタルイミド、イミダゾール、アンド、ヒドラジノ、ヒドロキシ ルアミノ、イソノアネート、スルホキノド、スルホン、スルフィド、ジスルフィ ド、シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターノコレータ−、レポータ ー分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール 、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、また はオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するだめの基であり：およびｎ はＯから約６までの整数である） を有する化合物を含む。

本発明の別の実施態様においては、構造：■ （式中ＸはＲ１（Ｒ２）−であり； Ｒ３はＣ１−Ｃ２゜アルキルであり： Ｒ２はＮＨ，、Ｈ−イミダゾール、Ｎ−フタルイミドであり；Ｙはヒドロキシル 保護基であり； Ｚはリン酸または活性化されたリン酸基であり；ＱｌおよびＱ２は独立してＨま たはグアノシン保護基であり：およびｎはＯから約６までの整数である） を有する化合物も提供される。

本発明のさらに別の実施態様においては、構造：■ （式中ＸはＲ１（Ｒ２）。であり： Ｒ２はＣ３Ｃ２゜アルキル、Ｃ４Ｃ２゜アルケニルまたはＣｍ　Ｃｍ。アルキニ ルであり： Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニト ロン、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、０−アルキル、 Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、０−アリール、Ｓ−アリール 、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、Ｎｌｌ−アラルキル、ア ミ八イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アンド、ヒドラジ人ヒドロキシルアミノ 、イソノアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリ ル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、コ ンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエー テル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴヌ クレオチドの薬物動態学的特性を改良するだめの基であり、およびｎはＯから約 ６までの整数である） を有する化合物が提供される。

本発明には式Ｉ、■および■の化合物のような、２°−０および３°−０−モノ アルキルまたは２’　、　３’−ジー０−アルキル置換グアノシン保護基の製造 のための簡便な方法もまた含まれる。これまでジアゾメタンによる製造法を除い てグアノシンの直接アルキル化は難しいことが示されている。本発明は２．６− シアミへ９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（すなわち２．６−シアミツプ リンリボシドまたは２−アミノアデノシンンの直接２′および３−０−アルキル 化を提供し、それは次に２゛−０−アルキル化２．６−シアミツプリンリボシド を脱アミノ化して対応する２°−〇−アルキル化シアノンンとすることにより達 成される。所望ならば、このアルキル化はヌクレオシドのへテロ環式または糖部 分のいずれにも保護基を使用することな（実施できる。

さらにメチルアルキル化生成物のみを得るであろうジアゾメタンの使用と異なり 、本発明で実施されるアルキル化はメチルアルキル化のみに制限されるわけでは なく、多くのアルキル置換グアノシンおよび２，４−ジアミノプリンリボシド化 合物を得るために使用できる。式Ｒ−Ｌ　（式中、Ｒはアルキル基であり、Ｌは 脱離基である）を有し本発明において使用される必要な化合物は、市販品として 入手可能であるか、文献に既知であるか、または、既知の文献化合物と類似の方 法により製造できる。

本発明の２工程アルキル化法は５ｐｒｏａｔ　ｅｔ　ａｌ、の６エ程法とさらに 区別される。

前に参照したＮｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　１８：４１（ １９９０）およびＮｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａ品±、　１９ニア３ ３（１９９１）の論文を参照されたい。これらの方法においては、２−アミノ− ６−クロロプリンリボシドは最初に３゛および５゛位の両方が保護されなければ ならず、２．６−ジクロロ誘導体へ変換され、６プリン位が保護され、２−０− メチルまたは２°−０−アリル誘導体に誘導され、２．６−ジアミノ誘導体へ変 換され、３′および５゛位の両方が脱保護され、そして最終的に脱アミノ化して ２°−０−メチルまたは２°−０−アリルグアノノン生成物が得られる。

本発明の方法に従うと、２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プ リンのりボフラノソル糖部分の２′または３′（または２′および３°の両方） ヒドロキシルからプロトンの除去を達成するのに十分に強い塩基の存在下、式Ｒ −Ｌ　（式中、Ｒはアルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する適当な化合 物により、２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン上で直接 アルキル化を行う。Ｒ−Ｌ基または塩基の量を化学量論量（または当量）に制限 することによりアルキル化をモノアルキル化に制限できる。もしくは過剰のＲ− Ｌ基および塩基を使用して２゛および３゛位の両方を同時にアルキル化すること により、ジアルキル化（２°および３゛位の両方に）が実施できる。

理論に束縛されることを望むものではないが、アルキル化は３゛位に比べて２′ 位で優先することが観察されている。一般的に２゛と３°アルキル化生成物は約 ７：３から約８：２の比であることが得られている（ＴＬＣにより決定された） 。ＴＬＣならびに分取的規模のクロマトグラフィーにおいて、一般的に２゛生成 物は３゛生成物より速いＲｆを有する。２−０−および３′−〇−生成物をお互 いにまたは２°−０−１３′−〇−ジアルキル化生成物から分離するためにこの Ｒｆの相違を利用することができる。従って、２°および３°アルキル化生成物 は、所望ならばシリカゲルクロマトグラフィー等の方法により分離できる。

一般的にプロピルより長いアルキル基に対しては、２′生成物に対する３°生成 物の脱アミノ化の速度を２′−〇−および３゛−〇−生成物の分離にさらに利用 できる。すなわち、２′−〇−および３−０−アルキル化２．６−ジアミツー９ −（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの混合物をアデノシンデアミナーゼで脱ア ミノ化させる。２゛−ｏ−生成物の酵素的脱アミノ化は３′−〇−生成物の脱ア ミノ化より容易に起こる。この脱アミノ化の速度の相違を利用し、より遅いまた は脱アミノ化されていない３°生成物〔すなわち、２．６−ジアミツー９−（３ −０−アルキル化−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン〕がら脱アミノ化された２ ′生成物（すなわち、２゛−ｏ−アルキル化グアノシン）を分離することができ る。さらに、結晶化等の方法を用いて２′−〇−アルキル化シアミノプリンリボ ンド生成物を対応する３−０−アルキル化ジアミノプリンリボシド生成物から分 離することにより、２°生成物を対応する３′生成物から分離した。

アルキル化に使用される好適な塩基は水素化ナトリウムである。別の適当な塩基 を使用してもよいが、そのような塩基は２．６−シアミツプリンリボシド出発物 質の２゛（または３′）ヒドロキシル部分からプロトンを除去するのに十分な塩 基強度を持っていなくてはならない。理論に束縛されることを望むものではない が、一般的には２，６−シアミツブリンリボシド出発物質の２′ヒドロキシル部 分のプロトンのｐＫ、よりも約１０ｐＫ、大きなｐＫ、値を持つ塩基が使用され るであろう。特に、水素化ナトリウムのｐＫｂよりも大きなｐＫｂを持つ塩基が 便宜上選択されるであろう。そのような塩基はＭａｒｃｈ、Ｊ、　Ａｄｖａｎｃ ｅｄ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１ｌｉｌｅｙ−Ｉｎｔｃｒｓｃ ｉｅｎｃｅ、　Ｊｈｏｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　 １９８５．の２２０ページ、表１に与えられているような塩基の群から選択でき る。

本発明のアルキル化反応は典型的にはＤＭＦを溶媒として実施される。池の適し た溶媒としては、ＤＭＳＯ，Ｎ−メチルピロリドンおよびスルホロンが挙げられ る。

好適には脱アミノ化はデアミナーゼ酵素を使用して達成される。特に好適である ものはアデノシンデアミナーゼである。特に使用に適したものは、Ｓｉｇｍａ　 Ｃｈｅｗｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｓｔ、　Ｌｏｕｔｓ、　ＭＯ，から入手 可能なアデノシンデアミナーゼ　タイプ■である。別の脱アミノ試薬を用いても よい。本発明の脱アミノ反応は、典型的には有機溶媒および水性緩衝液を含む混 合溶媒中で実施される。有機溶媒として使用するのに適しているものは、ＤＭＳ Ｏ，Ｎ−メチルピロリドンおよびスルホロンである。本発明の好適な実施態様で は、脱アミノ化はＤＭＳＯを有機溶媒として使用して達成される。水性緩衝液と しての使用に適したものは、デアミナーゼ酵素を使用するｐ　Ｉ−１範囲に適合 するｐ　Ｉ−１を持つ緩衝液である。好適であるものはリン酸ナトリウムおよび トリス緩ｌＩｉ液等のリン酸緩衝液である。

３゛生成物をな（すことにより３°生成物に対する２′生成物の割合を高めるた め、２．６−シアミツプリンリポシドの糖部分の３°および５′ヒドロキシルの 保護にＴＩＰＤＳ（テトライソプロピルシロキサン）保護基を使用する。同様に 、塩基安定性の非移動性２°−〇−保護基の使用により、排他的３゛生成物を得 ることができる。そのような塩基安定性の非移動性２−０−保護基には、テトラ ヒドロピラニル（ＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロビラン−４−イル（Ｍｔ ｈｐ）、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル−４−メトキシピペリジン −４−イル（ＣＬｍｐ）、トリフェニルメチル（トリチル）、モノ−、ジーおよ び１・１ルメトキソトリチルおよびその他の類似の保護基が含まれるが、それら に限られるわけではない。

本発明に従うと、２°−０−アルキル化グアノシン、シチジン、およびウリジン ホスボロアミダイトを含む２°−０−アルキル化ヌクレオシドホスホロアミダイ トを製造するための改良された方法も提供される。

本発明の方法に従うと、２゛−０−アルキル化グアノシン３°−０−ホスホロア ミダイトの製造は、２．６−ジアミツー９−（リボフラノシル）プリンをアルキ ル化して２．６−ジアミツー９−（２−〇−アルキル化すボフラノシル）プリン を生成させ；該２．６−ジアミツー９−（２°−〇−アルキル化リボフラノシル ）プリンを脱アミノ化して２′−〇−アルキル化グアノシンを形成し：該２゛− 〇−アルキル化シアノンンの５゛−ヒドロキシル部分を保護し；および該５′− 保護２′−〇−アルキル化グアノシンの３′−位をホスファイト化する工程を含 む。

さらに本発明に従うと、非保護シチジンをアルキル化して２′−〇−アルキル化 シチジンを形成し；該２゛−０−アルキル化シチジンの５°−ヒドロキシル部分 を保護し；および該５゛−保護２′−〇−アルキル化ンチジンの３−位をホスフ ァイト化する工程により、２−０−アルキル化シチジン３゛−〇−ホスホロアミ ダイトを製造することができる。

２′−〇−アルキル化ウリジン３°−０−ホスホロアミダイトは、ウリジンを酸 化ジアルキルスズで処理してウリジンの２’　、　３’−０−ジアルキルスタニ レン誘導体を生成させ；該ウリジンのスタニレン誘導体をアルギル化して２’− ０−アルキル化ウリジンを生成させ；該２°−０−アルキル化ウリジンの５′− ヒドロキシル部分を保護し；および該５−保護２°−０−アルキル化ウリジンの ３′−位をホスファイト化する工程を含む方法により製造することができる。

２°−０−アルキル化グアノシンの３−０−ホスホロアミダイトおよび２．６− ジアミツー９−（２’−〇−アルキルーβ−Ｄ−リボフラノシル）プリンは、２ −ＮＩ！２．　５’　−０１（保護２′−〇−アルキルグアノシンまたは２−　 Ｎ　Ｉ−Ｉ　、、６−ＮＨ２および５°−ＯＨ保護２゜６−ジアミツー９−（２ °−０−アルキル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンを、２−シアノエチルＮ、 　Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホスフィン等の当業者には既知の市販品とし て入手可能な試薬とを反応させることにより、本発明のいくつかの実施態様で提 供されるであろう。

ＮＨ２部分（おのおの２−または２−および６−　Ｎ　Ｈ２）および５’　−Ｏ Ｈ部分を保護し、続いてシアノエチルＮ、　Ｎ−ジイソプロピルアミノクロロホ スフィンと反応させる等の、本分野では既知の方法により、２−酸アルキル化グ アノシンおよび２°−０−アルキル−２，６−シアミツプリンリポシドをその３ ’−００位でホスファイト化してホスホロアミダイトを得ることができる。

ここで提供されるような本発明の化合物は、当業者には既知の方法によりオリゴ マー内に取り込ませることができる。

本発明の方法に従うと、２．６−ジアミツー９−（リボフラノシル）プリンをア ルキル化して２，６−ジアミツー９−（２°−０−アルキル化リボフラノシル） プリンを生成させ；該２．６−ジアミツー９−（２−〇−アルキル化すボフラノ シル）プリンを脱アミノ化して２′−〇−アルキル化グアノシンを生成させ；該 ２′−〇−アルキル化グアノシンの５゛一ヒドロキシル部分を保護い該５°−保 護２′−〇−アルキル化グアノシンの３゛−位をホスファイト化して２°−〇− アルキル化グアノシン３゛−ｏ−ホスホロアミダイトを生成させ：およびホスホ ロアミダイトカップリング条件を使用して該２′−〇−アルギル化グアノシン３ −０−ホスホロアミダイトをオリゴヌクレオチドの５°−ヒドロキシル部分とカ ップリングさせる工程を含む方法により、オリゴヌクレオチド内に少な（とも一 つの２′−〇−アルキル化シアノンンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを 製造することができる。

さらに本発明に従うと、オリゴヌクレオチドの配列内に少なくとも一つの２’　 −０−アルキル化シチジンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造法が提 供され、該方法は、シチジンをアルキル化して２°−〇−アルキル化シチジンを 提供い該２°−０−アルキル化ンチジンの５°−ヒドロキシル部分を保護し；該 ５゛−保護２゛−ｏ−アルキル化シチジンの３゛−位をホスファイト化して２’ −０−アルキル化ンチジン３°−０−ホスホロアミダイトを生成させ；およびホ スホロアミダイトカップリング条件を使用して該２°−〇−アルキル化シチジン 　３゛−ｏ−ホスホロアミダイトをオリゴヌクレオチドの５゛　−ヒドロキシル 部分とカップリングさせる工程を含む。

さらに本発明に従うと、オリゴヌクレオチドの配列内に少なくとも一つの２’　 −０−アルキル化ウリジンヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造法が提 供され、該方法は、ウリジンを酸化ジアルキルスズで処理してウリジンの２°、 ３°−〇−シアルキルスタニレン誘導体を生成させ；該スタニレン誘導体をアル キル化して２゜−０−アルキル化ウリジンを生成させ；該２′−〇−アルキル化 ウリジンの５゛−ヒドロキシル部分を保護い該５゛−保護　２′−０−アルキル 化ウリジンの３°−位をボスファイト化して２°−０−アルキル化ウリジン３゛ −〇−ホスホロアミダイトを生成させ；およびホスホロアミダイト化学を使用し て該２°−〇−アルキル化ウリジン　３−０−ホスボロアミダイトをオリゴヌク レオチドの５°−ヒドロキシル部分とカップリングさせる工程を含む。

さらに本発明に従うと、オリゴヌクレオチドの配列内に少なくとも一つの２゛− ０−アルキル化　２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンヌ クレオチドを含むオリゴヌクレオチドの製造法がｌＪ２供され、該方法は、２８ ６−ジアミツー９−（β−ｐ−リボフラノシル）プリンをアルキル化して２°− ０−アルキル化　２，６−シアミツー〇−（β−ｐ−リボフラノシル）プリンを 提供し；該２′−０−アルキル化　２．６−ジアミツー９−（β−ｐ−リボフラ ノシル）プリンの５′−ヒドロキシル部分を保護し、該５′−保護２′−〇−ア ルキル化　２．６−ジアミツー９−（β−ｐ−リボフラノシル）プリンの３°− 位をホスファイト化して２′−〇−アルキル化　２，６−ジアミツー９−（β− ｐ−リボフラノシル）プリン３′−〇−ホスホロアミダイトを生成させ；および ホスホロアミダイト化学を使用して該２゛−０−アルキル化　２．６−ジアミツ ー９−（β−ｐ−リボフラノシル）プリン３゜−０−ホスホロアミダイトをオリ ゴヌクレオチドの５゛−ヒドロキシル部分とカップリングさせる工程を含む。

本発明のオリゴマーは、少なくとも一つの構造・（式中ＸはＲ１（Ｒ２）−であ り： Ｒ１はＣｘ　Ｃｔ。アルキル、Ｃ４−Ｃ２゜アルケニルまたはＣ２ＣＯＧアルキ ニルであり； Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニト ロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、０−アルキル、 Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、０−アリール、Ｓ−アリール 、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ ノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミ ノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シ リル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、 コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエ ーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、また（まオリ ゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり：Ｔ３およびＴ、 は独立してＯＨまたは該構造に連結されている該オリゴヌクレオチドまたはオリ ゴヌクレオシドのさらなるヌクレオチドまたはヌクレオノドであり、および ｎはＯから約６までの整数である） を有するサブユニットを含んでいてもよい。

本発明のさらに別の実施態様においては、本発明のオリゴマーは少なくとも一つ の構造： （式中ＸはＲ１（Ｒ４）、であり； Ｒ，はＣ，−Ｃ２゜アルキル、Ｃ２−Ｃ２゜アルケニルまたはＣＩ　Ｃ２０アル キニルであり： Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニト ロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、０−アルキル、 Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール 、Ｎ　Ｉ（−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、 アミノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アンド、ヒドラジ人ヒドロキシルア ミノ、イソノアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、 シリル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子 、フンシュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリ エーテル、オリゴヌクレオチドの薬ノコ学的特性を改良するための基、またはオ リゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ 、は独立してＯＨまたは該構造に連結されている該オリゴヌクレオチドまたはオ リゴヌクレオシドのさらなるヌクレオチドまたはヌクレオシドであり；および ｎは０から約６までの整数である） を有するサブユニットを含んでいてもよい。

そのようなオリゴマーおよびオリゴヌクレオチドは、固相合成または当業者には 既知の他の手段により製造されるであろう。

本発明の文脈において、術語”ヌクレオシド”は互いに連結されている（標準的 には部上の“アノマー”炭素で）糖および塩基を示す。αおよびβ糖の両方とも 本発明に包含されている。本発明の好適な実施態様において、ヌクレオシド糖は ペントフラノシル糖であるが、炭素環式または４゛−デオキシ−４°−チオ糖類 似体等のその他の糖も使用されるであろう。

本発明の文脈において、術語“オリゴヌクレオチド”または“オリゴマー”とは 、天然のホスホジエステル結合により連結された天然に存在する塩基およびフラ ノシル基から形成されるポリヌクレオチドを示している。もちろん、本発明のオ リゴヌクレオチドは少なくとも一つの２゛−〇−アルキルグアノシンまたはその 誘導体を含んでいるであろう。従って、この術語は実際上、天然に存在するサブ ユニットまたはそれらに近い同族体から形成された天然に存在する化学種または 合成種を意味している。術語”オリゴヌクレオチド”または”オリゴマー”はま た、天然に存在するオリゴヌクレオチドと類似の部分を有するが、天然に存在し ない部分も有する部分も表している。従って、オリゴヌクレオチドは変形された 糖、変形された塩基部分または変形された糖量結合を有していてもよい。これら の例としては、ホスホロチオエートおよび当該分野での使用が知られているその 他の硫黄含有化学種がある。いくつかの好適な実施態様に従うと、オリゴヌクレ オチドの少なくともいくつかのホスホンエステル結合は、オリゴヌクレオチドの 安定性、またはメツセンジャーＲＮΔが位置している細胞の領域内へ浸透するオ リゴヌクレオチドの能力を増強させるように機能する構造により置換されている 。そのような置換は、好ましくはホスホロチオエート結合、ホスホトリエステル 、メチルホス小ネート結合、短鎖アルキルまたはシクロアルキル構造または短鎖 複素原子または複素環式構造を含む。その他の好適な置換は、ＣＨ，−ＮＨ−０ −ＣＨ２、Ｃ）［ｚ−Ｎ　（ＣＩ（ａ）−０−ＣＨ２、ＣＨ，−０−Ｎ　（ＣＨ ：１）−ＣＨ２、ＣＨ。

Ｎ　（ＣＨ３）　Ｎ　（ＣＨｓ）　ＣＨ２およびＯ−Ｎ　（ＣＨｓ）−ＣＨＩ− ＣＨ！構造（ホスポジエステル糖量結合がこれらの構造で置き換えられている） である。モルホリノ構造もまた好適である。Ｓｕｍｍｅｒｔｏｎ、　１．　Ｅお よび１ｆｅｌｌｅｒ、　［１，Ｄ、　、　１９９１年７月２３日に発行された米 国特許第５．０３４．５０６号。蛋白質−核酸（ＰＮＡ）主鎖等の他の好適な実 施態様においては、オリゴヌクレオチドのホスホジエステル主鎖はポリアミド主 鎖に置き換えられており、塩基は直接的にまたは間接的にポリアミド主鎖のアザ 窒素原子に結合されている。Ｐ、　Ｅ、　Ｎ１ｅｌｓｅｎ、　ｅｔ　ａｔ、　、 　５ｃｉｅｎｃｅ　１９９１２５４１４９７゜別の好適な実施態様に従うと、ホ スホジエステル結合は同時に実質的に非イオン性および非キラルであるその池の 構造または、キラルおよび鏡像異性体に特異的である構造で置換されている。当 業者は本発明の実施に使用するための他の結合を選択することができるであろう 。

オリゴヌクレオチドはまた、少なくともいくつかの修飾された塩基形を含む化学 種を含むことができる。従って、天然で通常観察される以外のプリンおよびピリ ミジンを用いてもよい。適した塩基は米国特許第３．６８７．８０８号に記載さ れているが、それらに制限されるわけではない。同様に、本発明の本質的教義か ら離れない限り、本発明の２′−０−アルキル修飾に加えて、ヌクレオチドサブ ユニットのフラノシル部上での修飾もまた有効であろう。そのような修飾の例は ２゛−ハロゲン−置換ヌクレオチドである。本発明において有用である糖部分の ２゛位での修飾のいくつかの特定の例は、ＯＨ，５ｌ−（、ＳＣＨ３、Ｆ、ＯＣ Ｎ、Ｏ（ＣＨＩ）。

ＮＨ２、Ｃ１１Ｂｒ、ＣＮ、ＣＦｚ、ＯＣＦ、、Ｓ−または、Ｎ−アルキル；Ｓ −または、Ｎ−アルケニル：５ＯＣＨ３，５ＯｚＣＨｓ；０ＮＯ２：ＮＯ２：Ｎ ｓ；ＮＨ２，ヘテロシクロアルキル：へテロシクロアルカリール；アミノアルキ ルアミノ：ポリアルキルアミノ；置換シリル、ＲＮＡ切断基；コンジュゲート； レポーター基：インターカレークー；オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良 するための基：またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための 基、および同様な特性を持つその他の置換基である。ンクロブチル等の糖模倣体 もまたペントフラノシル基の代わりに使用できる。オリゴヌクレオチドは本発明 の精神に矛盾しないかぎりその他の修飾を含んでいてもよい。そのようなオリゴ ヌクレオチドは天然のオリゴヌクレオチドとは構造的には異なっているにもかか わらず、機能的には交換できるものとして最もよ（表現される。オリゴヌクレオ チド中のサブユニットとして有効に機能する限り、全てのそのようなオリゴヌク レオチドは本発明に包含される。

好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチドは約６から約５０ヌクレオチドの長さ である。本発明のより好適な実施態様においては、オリゴヌクレオチドは約１２ から約２０ヌクレオチドの長さである。

さらに本発明で使用される限り、術語”アルキル化”とは本発明のヌクレオシド ホスホロアミダイトの前駆体へのアルキル、アルケニルまたはアルキニル部分、 好ましくはアルキル部分の付加を意味している。ヌクレオシド糖の２゛位のアル キル化は、エーテル結合を介して糖の２“位ヘアルキル部分を連結する。

好適なアルキル部分には、非置換および置換直鎖ＣＩ　Ｃ２０アルキルおよび非 置換および置換分岐鎖ＣＩ　Ｃ２０アルキルが含まれる。好適なアルケニル基に は非置換および置換直鎖Ｃ２Ｃ２ｆｌアルケニルおよび非置換および置換分岐鎖 Ｃ２−Ｃ２゜アルケニルが含まれる。好適なアルキニル基には非置換および置換 直鎖Ｃ２Ｃ２０アルキニルおよび非置換および置換分岐鎖Ｃ２−Ｃ２゜アルキニ ルが含まれる。従って、好適なアルキル化基には、Ｃ１からＣ２゜の直鎖または 分岐鎖低級アルキルまたは置換低級アルキル、Ｃ２からＣ２゜の直鎖または分岐 鎖低級アルケニルまたは置換低級アルケニル、Ｃ２からＣ２０の直鎖または分岐 鎖低級アルキニルまたは置換低級アルキニルが含まれるが、それらに制限される わけではない。

本発明のアルキル基には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキ シル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデノル、ドデシル、トリデシ ル、テトラゾール、ペンタデシル、ヘキサデシル、オクタデシル、ノナデシルお よびエイコシル、イソプロピル、２−ブチル、イソブチル、２−メチルブチル、 イソペンチル、２−メチル−ペンチル、３−メチルペンチル、２−エチルヘキシ ルおよび２−プロピルペンチル等のＣ，−Ｃ２゜直鎖および分岐鎖アルキルが含 まれるがそれらに制限されるわけではない。アルケニル基にはビニル、アリル、 およびクロチルを含む（しかしそれらに制限されるわけではない）、上記アルキ ル基から誘導される不飽和基が含まれるが、それらに制限されるわけではない。

アルキニル基にはエチニルおよびプロパルギルを含む（しかしそれらに制限はさ れるわけではない）、上記アルキル基から誘導される少なくとも一つの三重結合 を含む不飽和基が含まれる。

上記の置換基にはハロゲン（ＣＩ、Ｂｒ、Ｆ）　、ヒドロキシル（ＯＨ）　、チ オール（ＳＨ）、ケト（Ｃ−Ｏ）、カルボキシル（ｃｏｏＩ−■）、ニトレート （ＯＮ０２）、ニトロ（ＮＯ２）、ニトロソ（ＮＯ）、ニトリル（ｃＮ）、トリ フルオロメチル（ＣＦ、）、トリフルオロメトキシ（ＯＣＦ３）　、Ｏ−アルキ ル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アラルキル、Ｓ−ア ラルキル、Ｎト■−アラルキル、アミノ（ＮＨ２）、アジド（Ｎｓ）　、ヒドラ ジノ（Ｎ　ＨＮ　Ｈｚ）、ヒドロキシルアミノ（ＯＮＨ２）　、イソシアネート （ＯＣＮ）　、スルホキシド（ＳＯ）、スルホン（ＳＯ２）、スルフィド（Ｓ− ）、ジスルフィド（Ｓ−３）、メシル、複素環式、脂環式、炭素環式、インター カレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリ エチレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良 するための基、およびオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための 基が含まれるが、必然的にそれらに制限されるわけではない。そのような化合物 には、３−ペンテン−２−オン、３−メチル−２−ブタノール、２−シアノオク チル、３−メ！・キシ−４−ヘプタナール、３−ニトロブチル、４−イソプロポ キシドデシル、４−アジド−２−ニトロデシル、５−メルカプトノニル、４−ア ミノ−１−ペンテニルならびにその他の置換基が含まれる。これらの置換基はブ ロックまたは保護された形で導入し、後に脱保護して元の置換化合物にすること ができる。例えば、アミノ置換の保護形としてのフタルイミド基の使用が以下に 例示されている。

その池の適した置換基には、コレステロール、リン脂質、ビオチン、フェナント ロリン、フェナジン、フェナントロリン、アントラキノン、アクリドン、ピレン 、スチルベン、オキサゾロ−ピリドカルバゾール、アントラキノン、ツェナトリ ジン、フェナジン、アジドベンゼン、ソラーレン、ポルフィリン、コール酸、葉 酸、フルオレセイン、ローダミン、クマリンおよび色素類を含むインターカレー ター、レポーター基、レポーター酵素およびコンジュゲート：ステロイド、親油 性分子、ペプチド、蛋白質、ビタミン、ＲＮＡ切断複合体、金属キレータ−、ア ルキル化剤および架橋剤が含まれる。

一つの特に好適である置換基はＣＦ３である。さらに特に好適な置換基はフタル イミドおよびイミダゾールである。先に指摘したごとく、フタルイミド基の使用 は保護されたアミノ官能性をアルキル基上に導入することを可能にする。オリゴ ヌクレオチド合成の中間体として本発明に従って製造されたグアノシン類似体を 利用すると、オリゴヌクレオチド合成完了後、フタルイミド基を除去して、オリ ゴヌクレオチド配列内のグアノシンヌクレオチドにつなぎ留められたアミノ官能 性を得ることができる。アルキル官能性上の置換基としてのイミダゾール部の使 用は、オリゴヌクレオチド配列内のグアノシンヌクレオチド上に示唆された核酸 切断官能性（イミダゾール）を導入することになる。

アリール基にはフェニル、トリル、ベンジル、ナフチル、アントラシル、フェナ ントリル、ピレニルおよびキシリルが含まれるが、それらに制限されるわけでは ない。ハロゲンにはフッ素、塩素および臭素が含まれる。好適な複素環式基には イミダゾール、テトラゾール、トリアゾール、ピロリジン、ピペリジン、ピペラ ジンおよびモルホリンが含まれるが、それらに制限されるわけではない。アミン には一級および二級アミンおよびフタルイミドのような”マスクされたアミン” を含む、上記すべてのアルキル、アルケニル、アルキニル、およびアリール基の アミンが含まれる。アミンにはまた、ポリアルキルアミノ化合物およびアミノプ ロピルアミンのようなアミノアルキルアミン、およびさらにイミダゾール−１゜ ２　または４−イル−プロピルアミンのような複素環−アルキルアミンを含むこ とも意味するつもりである。ＲＮＡ切断複合体とは、例えば、インターカレータ ーまたはＲＮＡの小ＦＥ　（ｍｉｎｏｒ　ｇｒｏｏｖｅ）に結合する基であろう 。インターカレーターとは、オリゴヌクレオチドの近（の塩基間にそれ自身を挿 入する分子である。

レポーター分子とは、全体の分子の同定を視覚的にまたはその他の方法で助ける 分子である。架橋剤は効果的に二つの基を連結する。

本発明に適した脱離基には塩素、臭素およびヨウ素等のハライド、トシル、ブロ ンル、メシル、メシルおよびトリフイル等のスルホネ−１・およびオキソニウム イオンが含まれる。本発明の好適な実施例において、脱離基はハライドである。

さらにその他の適した脱離基が当業者にはよく知られている。

本発明の方法に従うと、アルキル化は塩基、好ましくは水素化ナトリウム等の水 素化金属の存在下で好適に実施される。ウリジンの２’　、　３’　−０−ジア ルキルスタニレン誘導体のアルキル化は、金属ハライド等の塩の存在下で好適に 実施される。

本発明のいくつかの実施態様においてはフッ化セシウムおよびヨウ化ナトリウム が好適である。さらに、５′ヒドロキシル保護基として好適であるのはジメトキ シトリチル基である。ホスファイト化試薬は好適にはビスーＮ、Ｎ−ジイソプロ ピルアミノシアノエチルポスファイトであり、ホスファイト化反応は好適にはＮ 、Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾリド（ｈｙｄｒｏｔｅｔｒａｚｏ ｌｉｄｃ）の存在下で実施される。

ウリジンのアルキル化を達成するには、２’３’−０−（ジブチルスタニレン） ウリジンがアルキル化される。ジブチルスタニレン誘導体はＷａｇｎｅｒ、Ｄ、 、　Ｖｅｒｈｅｙｄｅｎ、Ｊ。

Ｐ、１１．　ａｎｄ　Ｍｏｆｆａｔ、Ｊ、Ｇ、、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｃｍ、 　１９７４．３９＋２４の方法を使用して酸化ジブチルスズとの反応によりウリ ジンから一工程で製造された。これらの著者により指摘されているごと＜、２’ ３°−ジー０−（ジブチルスタニレン）ヌクレオシドはアルキル化に、対して活 性化されている。ジブチルスタニレン誘導体を用いることにより、ウラシル塩基 を同時にアルキル化する事なく糖ヒドロキシルのアルキル化が達成される。従っ て、ジブチルスクニレン基は保護基としてではな（活性化基として働いている。

Ｎ４−ベンゾイル−５−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２ °−０−メチルシチジン　３−０−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピル アミノホスホロアミダイトの合成には、中間体Ｎ４−ベンゾイル−２°−〇−メ チルシチジンの製造に二つの方法が比較された。方法ＡではＴ　Ｉ　ＰＳ−ＣＩ 試薬で３°−５゛部位を保護して２゛位上でのみメチル化を可能とする。方法Ｂ （本発明の好適な方法）ではシチジンを直接メチル化し、続いて得られた２′お よび３′異性体の混合物を分離する。全収率は同程度である。方法Ｂを用いると 、２°−〇−異性体は混合物から結晶化可能であり、濾過し、残った母液は２゛ および３′異性体の分離に先だってジメトキシトリチル化工程に供するか、もし くは、アルキル化シチジンの全部をジメトキシトリチル化工程に供し、２゛異性 の分離はこの工程後にのみ行うことができる。

グアノノンのアルキル化の達成には、２′、６−シアミツプリンが例えば１９９ ２年１０月２７日に出願された代理人摘要録番号ｒｓＩｓ−７１０に記載されて いる方法によりアルキル化される。

本発明のホスホロアミダイ）・のアミノ部分は、そのようなホスホロアミダイト に対して現在使用されている種々のアミンから選択できる。そのようなアミンに は種々の米国特許（主にＭ、　Ｃａｒｕｔｈｃｒｓおよびその共同研究者）に記 載されているように脂肪族およびヘテロアリールアミンの両方が含まれる。これ らの特許には１９８７年５月２６日に発行された米国特許第４．６６８．７７７ す、１９８４年７月３０に発行された第４．４５８．０６６号、１９８３年１１ 月１５０に発行された第４．４１．５．７３２号、１９８５年２月１９日に発行 された第４．５００．７０７号（これらは全てここに参照文献として引用されて いる）が含まれる。一つの好適なアミノ基はジイソプロピルアミノである。

ホスホロアミダイトのアミノ部分に加え、ホスホジエステルおよびホスホロチオ エート結合に対して追加のリン保護基が使用される。一つの好適な保護基はシア ノエヂル基である。その他のリン保護基としてはメトキシおよび２−（メチルス ルホニル）エチルが挙げられる。さらに、通常ホスホロアミダイトカップリング 化学に対して活性化剤が使用される。一つの好適な活性化剤はＮ、Ｎ−ジイソプ ロピルアミノヒドロテトラゾリドである。これらの機能を果たすその他の適切な 基は先に示した特許ならびに１９８８年２月１６日に発行された米国特許第４． ７２５．６７７号およびＢｃｒｎｅｒ、Ｓ、、　Ｍｕｈｌｃｇｇｅｒ、に、、ａ ｎｄ　Ｓｃｌｉｇｃｒ、　Ｉｌ、、　Ｎｕｃｌｃｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｃｓｃａ ｒモ■@１９８９゜ １７：８５３；　Ｄａｈｌ、口」、、Ｎ１ｅｌｓｃｎ、Ｊ、ａｎｄ　Ｄｈａｌ、 Ｏ，、Ｎｕｃｌｃｉｃ　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１X８７゜ １５：１７２９；およびＮ１ｅｌｓｏｎ、Ｊ、　Ｍａｒｕｇｇ、Ｊ、Ｅ、、　Ｖ ａｎ　Ｂｏｏｍ、Ｊ、１１．、　ｌ１ｏｎｎｃｎｓ、Ｊ、、@Ｔａａｇａ ａｒｄ、Ｍ、　ａｎｄ　Ｄａｈｌ、０．、　Ｊ、　Ｃｈｃｍ、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ 　刊８６．２６　（これらは全てここに参照文献として引用されている）に記載 されている。

ホスホロチオエート結合での使用に対してはボウケージ試薬がＢｃａｕｃａｇｃ 、　Ｓ、　Ｌ。

ａｎｄ　Ｃａｒｕｔｈｅｒｓ、Ｍ、Ｈ，、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅ ｒｓ　１９ｇ１．２２：１８５９ならびにＺｏｎ、Ｇ、　ａ獅■ ＳＬｅｃ、Ｊ、、Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ　ｏｌ’ｉｇｏｎｕｃｌｃ ｏｔｉｄｅｓ：　Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｃｏｔｉｄｃｓ　ａｎп@Ａｎａｌｏｇｓ ＾Ｐｒａｃｔｉｃａｌ＾ｐｐｒｏａｃｈ；　Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、Ｆ、　Ｅｄ、　 ；　ＩＲＬ　Ｐｒｅｓｓ、　０ｘｆｏｒｄ、　１９９１　（■f状硫 黄による硫化もまた記載されている）に記載されている。

アンチセンス療法では標的ＲＮＡまたはＤＮＡと特異的にハイブリッド形成可能 なオリゴヌクレオチドが使用される。本発明のオリゴヌクレオチドは好適には標 的領域に特異的にハイブリッド形成可能である。ここで”特異的にハイブリッド 形成可能”とは標的ＤＮＡまたはＲＮＡと安定なデユーブレックスを形成するこ とができることを意味している。標的ＤＮＡまたはＲＮＡとの結合、または安定 なデユーブレックス形成により、アンチセンスオリゴヌクレオチドはこれらの核 酸の遺伝的発現を選択的に阻害でき、または標的ＤＮＡまたはＲＮＡの破壊また は遺伝子発現の活性化等のいくつかの他の出来事を誘導することができる。標的 とされたＲＮＡの破壊はＲＮアーゼＴ−１活性化またはオリゴヌクレオチドへの 鎖切断基の連結により達成することができる。アンチセンス療法は本分野では既 知である。例えば、”乳頭腫ウィルスのアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害剤 ”と題され１９９１年１２月３日に出願されたＰＣＴ／１Ｊｓ９１／Ｑ５７２０ および”ヘルペスウィルスの影響を調節するためのオリゴヌクレオチド療法”と 題され１９９１年２月２５日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ９１１０１３２７を参照 されたい。

本発明のいくつかの実施態様では、本発明の化合物のオリゴヌクレオチド部分は 標的配列と少な（とも６０％は相補的である。本発明の好適な実施態様では、本 発明の化合物のオリゴヌクレオチド部分は標的配列と少な（とも８０％は相補的 である。標的配列に対し本発明の化合物のオリゴヌクレオチド部分が１００％相 補的であるのが最も好適である。本発明の好適な実施態様においては、オリゴヌ クレオチド部分はカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）　、乳頭腫ウィルス、エプスタイ ン　バーウィルス、ライノウィルス、肝炎ウィルス、ヒト免疫不全ウィルス、単 純ヘルペスウィルス、インフルエンザウィルスおよびサイトメガロウィルスから のＤＮＡまたはＲＮＡと特異的にハイブリッド形成することができる。

選択された蛋白質をコードしている選択されたＲＮＡまたはＤＮＡ配列と、該蛋 白質をコードしている該選択されたＲＮＡまたはＤＮＡ配列に特異的にハイブリ ッド形成可能なヌクレオチド塩基配列を有する本発明の２′−〇−アルキルグア ノシンまたは２，６−シアミツプリン含有オリゴヌクレオチドとを接触させるこ とにより、本発明の２゛−０−アルキルグアノシン含有オリゴヌクレオチドおよ び２，６−シアミツプリン含有オリゴヌクレオチドを蛋白質の産生の調節に使用 することができ本発明のオリゴヌクレオチドは診断、治療および研究試薬として 使用できる。

治療に使用するためには、望ましくない蛋白質の産生により特徴づけられる疾患 を持つ動物と、該蛋白質をコードしている選択されたＲＮＡまたはＤＮＡ配列に 特異的にハイブリッド形成可能なヌクレオチド塩基配列を有する本発明のオリゴ ヌクレオチドとを接触させる。

実施例 以下の実施例は本発明を例示しているが、本発明を制限するものではない。種々 の実施例において、命名４，４−ジメトキントリフェニルメチルおよびジメトキ シトリチルは本発明の種々のヌクレオシドおよびヌクレオチドの５゛−ヒドロキ シル部分上に位置するＤＭＴ保護基を参照するために同じ意味で使用される。

ＮＭＲスペクトルは下記の装置で測定された：　’Ｉ−ｌ−１−Ｎ　：　Ｖａｒ ｉａｎ　Ｇｅｍ１ｎｉ−２００（１９９，９７５Ｍｌｌｚ）、　”　Ｃ−ＮＭＲ ：　ｖａｒｉａｎ　Ｇｅｍ１ｎｉ−２００（５０，２８９Ｍｌｌｚ）。ＮＭＲス ペクトルは重水素化クロロホルム（テトラメチルシランを内部標準として）また はジメチルスルホキシド−ｄ６を溶媒として用いて記録した。以下の略号が個々 のシグナルの多重度を示している：ｓ＝シングレット、ｄ−ダブレット、ｔ＝ニ トリブレットｑ＝カルチット、Ａ１３ｑ＝ａｂカルテント、ｍ＝マルチプレット 、ｄｄ＝ダブルダブレット、ｂｒ　ｓ＝ニブロードシングレット。マススペクト ルは、ファブイオン化（７ｋＶ　ＸＱ原子）を用いＶＧ　７Ｏ−３ＥＱ装ｊｉ　 （’／Ｇ　ａｎａｌｙｔｉｃａｌ、Ｆｉｓｏｎｓ）により得られた。カラムクロ マトグラフィーのための溶媒比は容量／容量により与えられている。特に指定し ない限り、溶媒の留去は汽空下（６ｏトール）３０℃で実施された。融点は未補 正のまま報告されている。

実施例１ ２．６−シアミノー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンＲｏｂｉｎｓ、　Ｍ 、　Ｊ、　、　１ｌａｎｓｋｅ、　ＦおよびＢｃｒｉｎｅｒ、Ｓ、Ｅ、、　Ｃａ ｎ、　Ｊ、　Ｃｈｃｍ、、５９：３３６O（１９８１）に より記載されている方法の改良法に従９て、グアノシン水和物（４９ｇ１Ａｌｄ ｒｉｃｈ　Ｃｈｅ＋＊１ｃａｌ　Ｃｏ、　）、トルエン（２００ｍｌ）　、　ヘ キサメチルジシラザン（Ｉ（ｉ０＋ａＬ　４．３当量）およびトリフルオロメタ ンスルホン酸（３，７ｍ１）をステンレス鋼パールボンベに入れる。ボンベを密 封し、１７０℃の油浴に約１／３沈めて５日間加熱する。ボンベはドライアイス −アセトン中で冷却して開いた。内容物はメタノール（ＭｅＯ■４）を用いて２ リツトルの丸底フラスコに移し、溶媒はＢｕｃｈｉｉエバポレーターで蒸発させ た。残渣に１　：　Ｉ　Ｈ２０／ＭｅＯＨ（６００ｍｌ）を加え生じる褐色の懸 濁液は４−５時間還流した。得られた懸濁液はＢｕｃｈｉｉエバポレーターで蒸 発させてメタノールを除去した（約１／２の容量まで）。追加のｎｚｏ（約３０ ０ｍ１）を加え、混合物を加熱して活性炭処理し、セライト濾過パッドを通して 濾過した。冷却により結晶が生成した。濾過して固形物を単離し、■１□０で洗 浄して真空下９０℃で乾燥すると生成物を黄褐色固形物として１９た（４３．７ ｇ、収率８９％）。この化合物のＵＶおよびＮＭＲスペクトルを文献値と比較し た。

Ｒｏｂｉｎｓ、　ａｔ　ａｌ　（上記文献）の方法のこの変法は、シラザン試薬 および出発物質のグアノシン水和物に水和されている水から反応系中でアンモニ ア分子が発生されるので反応混合物に液体アンモニアを使用する必要がない。さ らに、クロロトリメチルシランの使用（反応を無水条件下で実施し、予備的エバ ポレーションまたは、バールボンベの開放および再密封を乾燥窒素雰囲気下で行 う必要がある）が必要とされない。

実施例２ ２．６−ジアミツー９−（２°−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリ ンおよび２．６−ジアミツー９−　（３−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシ ル）プリン乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）　（１５０ｍｌ）に溶解した２ 、６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１０，５ｇ）に水素 化ナトリウム（Ｎ　ａ　１４）　（２，１ｇ）を加えた。１０分間撹拌後、ヨー ドプロパン（６ｍｌ）を加えた。この溶液を４５分間室温で撹拌した後さらにＮ 　ａ　１−１　（６００ｍｇ）を添加した。反応混合物は一夜撹拌し、エタノー ル（Ｅ　ｔ　ＯＨ）　（５ｍｌ）の添加により反応を停止させた。反応混合物は 真空上蒸発させ、残渣を１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ□Ｃ１，に懸濁し、５→１０％Ｍ ｅＯＨ／ＣＨ２ＣＩ２を溶出液として用いるシリカゲルクロマトグラフィーによ り精製した。２’　、　３’−ジー０−プロピル生成物が最初に溶出し、続いて ２’−０−プロピル生成物および次ぎに３゛−０−プロピル生成物が溶出した。

２°−０−プロピル生成物を含む分画を集め、溶媒を留去すると粗発泡体を得た 。この発泡体をＨｚＯ（４ｈｌ）から結晶化させ、冷Ｈ，Ｏで洗浄して乾燥させ ると２．９ｇの２′−０−プロピル化合物が得られた。母液を蒸発させて再クロ マトグラフィーを行い、結晶化させるとさらに２．４ｇの２′−０−プロピル化 合物が得られた。第二の母液を蒸発させると、４ｇの２゜および３°−０−プロ ピル化合物の混合物が油状物として得られた。主生成物として３°−０−プロピ ル生成物を含む分画を蒸発させ、残渣を水から結晶化させた。（２°。

３゛−ンー〇−プロピル化合物の単離および同定は下記実施例１７を参照された い。）２．６−ジアミツー９−（２−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル） プリンＣ，４６，９１；）七　６．２；Ｎ、２５．２５、実測値：Ｃ，４７，０ ９；Ｈ。

６．３７；Ｎ、２５．３３゜ ２．６−ジアミツー９−（３°−〇−プロピルーβ−Ｄ−リボフラノシル）プリ ン実施例３ ２′−〇−プロピルグアノシン ２．６−ジアミツー９−　（２’−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プ リンおよび２，６−ジアミツー９−（３’−０−プロピル−β−Ｄ−リポフラノ シルメシリンの混合物（４，６ｇ）およびアデノシンデアミナーゼ（２００ｍｇ 、　Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓタイプ■）を０．１Ｍ　トリス緩衝液（１ ５０ｍｌ、ｐＨ７，４）　、ＤＭＳＯ（１００ｍｌ）および０．１Ｍリン酸ナト リウム緩衝液（１０ｍｌ）中で一夜室温で撹拌した。さらに０．１Ｍリン酸ナト リウム緩衝液（３ｈｌ）およびＤＭＳＯ（２０ｍｌ）に溶解したアデノシンデア ミナーゼ（１４０ｍｇ）を加え、反応液をさらに２４時間撹拌した。真空下溶媒 を蒸発させ、残渣を５→２０％ＭｅＯ）Ｉ／ＣＨ，ＣＩ２を用いるシリカゲルフ ラッシュクロマトグラフィーを行った。

生成物含有分画を真空下蒸発させ、■］２０から結晶化すると２．６ｇの生成物 を得た、５°、　０−ＣＨ２）　、３．　８５　（ｍ、１）　、４．　２　（ｍ 、１）　、４．　２３　（ｍ。

ＨＩ　９　Ｎ　６０　Ｂとして、計算値：Ｃ，４７，９９；Ｉ七　５．　８９； Ｎ、２１．　５３実測値：Ｃ，４７，９０，Ｈ，５，８５：Ｎ、２１．　４４゜ 実施例４ Ｎ２−イソブチリル−２゛−〇−プロピルグアノシンビリジン（５０ｍｌ）に溶 解した２゛−０−プロピルグアノシン（３，６ｇ）を水浴で冷却し、塩化トリメ チルシリル（８，４ｍｌ、　５当量）を加えた。反応混合物を３０分間撹拌し塩 化イソブチリル（５，８ｍｌ、　５当Ｍ）を加えた。反応液を４時間撹拌しその 間に室温まで暖めた。溶液を冷却し、Ｈｔｏ　（１０ｍｌ）を加えさらに３０分 間撹拌した。１ＮＨｓＯＨ（１０ｍｌ）を加え、溶液は真空下蒸発させた。残渣 は生成物の溶出に１０％Ｍ　ｅ　Ｏ＋−１／　ＣＨ２ＣＩ　２を用いるシリカゲ ルクロマトグラフィーにより精製した。生成物含有分画を蒸発させ、２．５ｇの 生成物を発泡体として得た。

分析用試料はＣＨｔ　Ｃｌ　２”　６％Ｍ　ｅ　Ｏ）Ｉ　／　ＣＨ２Ｃｌ　ｔで 溶出するシリカでの再りＣ旦ｚ）　、　２．７５　［ｍ、　１．　ＣＨ（ＣＨ３ ）　２］　、　３．５２　（ｍ、　６．０ＣＨｚ）　。

Ｈ，６，４８；Ｎ、１７．３２　実測値：Ｃ，５０，８１；Ｈ，６，６２；Ｎ。

１７０４゜ 実施例５ Ｎ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２°−０−プロピルグアノシ ンＮ２−イソブチリル−２−０−プロピルグアノシン（２，６４ｇ）をピリジン と共沸させた後ピリジン（１８０ｍｌ）に可溶化した。室温で撹拌しながら塩化 ジメトキシトリチル（２，４ｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン （５０ｍｇ）を加えた。反応混合物は一夜撹拌した後真空下蒸発させた。残渣を ＣＩ、ＣＬ／２ｘ希Ｎａ、ＣＯ，に分配させた。有機相を乾燥しくＭｇ５０４） 、蒸発させた。残渣はシリカゲルクロマトグラフィー　（１：　Ｉ　ＥｔＯＡｃ ／Ｈｅｘ−＋５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ。

１％ＴＥＡ）により精製し、４．１ｇの生成物を得た。ＩＩ−Ｉ　ＮＭＲ（ＤＭ ＳＯ（ｍ、１）、４．　３（ｍ、１）、４．　４（ｍ、１）、５．　１８（ｄ、 １．　３゜０として、計算値：Ｃ，６３，８３；Ｉ−Ｌ　６．　２０．Ｎ、　９ ．　８０　実測値・Ｃ１６４，２２；Ｈ，６，３５；Ｎ、９．５５゜実施例６ Ｎ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２′−〇−プロピルグアノシ ン　３°−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイトＮ２ −イソブチリル−５゛−ジメトキシトリデル−２゛−０−プロピルグアノシン（ ４，１ｇ）、ビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホス ファイト（３，７ｍｌ、　２当量）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウム テトラゾリド（０，５ｇ、　０．５当量）のＣＨｚＣ１ｔ溶液を室温で一夜撹拌 した。溶液を希Ｎａ、ＣＯ３続いて希Ｎａ２ＣＯ３／ＮａＣｌと分配させ、Ｍ　 ｇ　Ｓ　Ｏ４で乾燥した。真空下溶媒を蒸発させ、残渣はシリカゲルクロマトグ ラフィー（１２０ｇ、　１％ＴＥＡを含むＥｔＯＡｃ）により精製し、５．２ｇ の生成物を発泡体として得た。”　Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　ｓ）δ　１５０、　 ５．　１５０．　８゜ 実施例７ ２．６−ジアミツー９−（２’−０−ペンチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリ ンおよび２，６−ジアミツー９−　（３’−０−ペンチル−β−Ｄ−リボフラノ シル）プリン実施例２の方法により、２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフ ラノシル）プリン（１０ｇ）が水素化ナトリウム（１，７ｇ、　１．２当量）お よびブロモペンタン（５，３ｍｌ、　１．２当量）のＤＭＦ　（９０ｍｌ）溶液 で処理された。シリカゲルクロマトグラフィーにより以下の化合物が得られた。

最初に溶出する成分（同定はされていないが２．３−ジー（０−ペンチル）化合 物と信じられる）は油状物として単離された（７００ｍｇ）。発泡体として単離 された次の成分（３，３ｇ）がＭ　ｅ　ＯＨから結晶化され２．８ｇの２．６− ジアミツー９−（２−０−ベンチルーβ−ローリボフラノシル）プリンを得た。

固形物として単離された第三の成分（２００ｍｇ）はＭｅＯＨから結晶化され８ ０ｍｇの２．６−ジアミツー９−（３′−〇−ペンチルーβ−Ｄ−リポフラノツ ル）プリンを得た。第一および第二の成分の混合物を含む分画を蒸発させ、残渣 をＭｅＯＨから結晶化させてさらに９００ｍｇの２゛−〇−化合物を得た。別の 分画から２−〇−ペンチルおよび３°−０−ペンチル化合物の混合物を１．２ｇ 得た。

２．６−ジアミツー９−（２’−０−ペンチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリ ン３３および３．　６　（ＡＢＸ、２．１１−５°）、３．９３　（ｂｒ　ｓ、 １）、４゜（ｃＪ、１．旦−１’　）、６．８　（＋）ｒ　ｓ、２．　２−ＮＨ ２）および７．９３（ｓ、１．ｌ−１−８）。

２．６−シアミノー９−（３°−０−ペンチル−β−Ｄ−リボフラノシルメシリ ン’ＩＩ　Ｎ〜ｉＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）　δ０．８７　（１３，ＣＨ３）　、　 １．３　（ｍ。

４、　ＣＨ２）　、　１．５５　（ｍ、　２．　ＣＨ２）　、　３．５　（ｍ、 　２．０−ＣＨ２）、３゜５°　−０）、１）　、５．　７０　（ｃｌ、１．　 １１−１°）、５．　７５　（ｂｒ　ｓ、２．　６−ＮＨｚ）、６．　７６　（ ｂｒ　ｓ、　２．　２−ＮＨ２）および７．９３　（ｓ、１．旦−８）。

実施例８ ２゛−０−ペンチルグアノシン 実施例３の方法に従い０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（５０ｍ１．　ｐＨ６、 ０）およびＤＭＳｏ　（２５ｍｌ）中、３５℃にて２．６−ジアミツー９−（２ °−〇−ペンチルーβ−Ｄ−リボフラメシル）プリン（１，９ｇ）をアデノシン デアミナーゼ（２０に分けて添加−最初に５０ｍｇ、２回目に８０ｍｇ）で処理 すると１．４ｇの生成物を得た。’ＩＩ　ＮＭＲ（Ｄ実施例９ Ｎ２−イソブチリル−２゛−０−ペンチルグアノシン実施例４の方法に従いピリ ジン（３５ｍｌ）に溶解した２−０−ペンチルグアノシン（２，３ｇ）を塩化ト リメチルシリル（４，１５ｍ１，５当量）および塩化イソブチリル（３゜４ｍｌ 、　５当ＩＩ）で処理し生成物を発泡体として得た（２．３ｇ）。分析用試料は ＥｔＯＡｃ　／　Ｈｅ　ｘから結晶化させた。ｍ、ｐ、１７８−１８０℃。’Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄａ）　δ　０．　７５　（ｔ、３．　（、ｌ−１３）、１． 　１　［ｍ、１０．　２ｘＣＨ２，ＣＨ（ＣＨ３）２］　、１．　４　（ｍ、２ ．　ＣＨ２）　、２．’７４　［ｍ、１．　ＣＨ（ＣＬ！、３）　２コ　、３． 　５６　（ｍ、４．　ＱＣ）［２，Ｈ−５’　）、３．　９３　（ｍ、１　、其 −４’）、４．２５（ｍ、１）、４．３４（ｍ、１）、５．０５（ｔ、１゜５° 　−〇旦）　、５．　１７　（ｄ、１．、　３’−０其）、５゜８８　（ｄ、１ ．其−１゛）。

８、　２７　（ｓ、ｉ、　Ｈ−８）、１１．６５　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）お よび１２゜０５　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）。元素分析　Ｃ＋ａｌ１２ｏＮｓＯ ａとして、計算値、Ｃ１５３、８９；Ｈ，６，９０、Ｎ、１６．　５４　実測値 ：Ｃ，５３，７５；Ｈ，６゜９２：Ｎ、１６．４０゜ 実施例１Ｏ Ｎ２−イソブチリル−５′−ジメトキシトリチル−２′−〇−ペンチルグアノシ ン実施例５の方法に従いピリノン（５０ｍｌ）中でＮ２−イソブチリル−２−０ −ペンチルグアノシン（２，３ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１，７ｇ、　１ ．１当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として１００ｍｇ）で処理する と、発泡体として生成物が得られた（２．９ｇ）。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ一旦。

）６０．８３　（ｔ、　ａ、　ＣＨ，）。

１、　２　［ｍ、１０．　２ｘＣ旦２＋　ｃ旦（ＣＨ３）　ｚ］　、１．　４８ 　（ｍ、２．　ＣＨ，）。

２、７８　［ｍ、　１．　Ｃ）−１（Ｃ旦ｓ）２］　、　３．４．３．６　（ｍ 、　４．　ＱＣＣＨ２旦−５°）、３．　７５（ｓ、６．０Ｃ１１３）、４．　 ０７（ｍ、１）、４．　２７（ｍ。

１）、４．　４２（ｍ、１）、５．　２（ｂｒ　ｄ、１．　３’　−０Ｈ）、５ ．　９５（ｄ、］、、　Ｈ−１°）、６．　８５．　７．　２５．　７．　３８ 　（ｍ、１３．　ＤＭＴｒ）。

８、　１５　（ｓ、１．旦−８）、１１．　６７　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）お よび１２゜１　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）。元素分析　Ｃ４ｏＨ４ｔＮｓＯａ　 ・１／２Ｈ２０として、計算値・Ｃ，６５，３８；Ｈ，６，５８；Ｎ、９．　５ ３　実測値：Ｃ，６５，３７；Ｈ，６，５９、Ｎ、９．　３９゜ 実施例１１ Ｎ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２′−〇−ペンチルグアノシ ン　３°−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト実施 例６の方法に従いＮ２−イソブチリル−５゛−ジフトキントリチル−２′−〇− ペンチルグアノシン（１，７ｇ）をビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）− ２−シアノエチルホスファイト（１，４８ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルア ンモニウムテトラゾリド（２００ｍｇ）で処理して生成物を得た（１．４ｇ）ｏ ”ＰＮＭＲ（ＣＤＣＩａ）　６　１５０゜５．１５０．８５゜ 実施例１２ ２．６−ジアミツー９−（２’−０−ノニル−β−Ｄ−リポフラノシルメシリン 実施例２の方法に従いＤＭＦ　（７００ｍｌ）中で２．６−ジアミツー９−（β −Ｄ−リボフラノシル）プリン（５０ｇ、　１８０ミリモル）を水素化ナトリウ ム（８’、　８ｇ、　２２０ミリモル）およびブロモノナン（５９ｇ、　５４． ４ｍｌ、　２８５ミリモル）で処理すると（Ｎａｌ−１添加の間、ＤＭＦ中のジ アミノ化合物は水浴で冷却された）８３ｇの粗生成物を得た。５０ｇの粗生成物 がシリカゲルクロマトグラフィーで精製された。２°−０−ノニルおよび３゛− ０−ノニル生成物を含む分画が合併され、２°および３゛生成物の７７　：　２ ３混合物が得られた（２９ｇ）。純粋な２°−０−ノニル生成物はクロマトグラ フィーにより＝６Ｈｚ）　、５．　７６　（ｓ、２．　２−ＮＨ２）　、５．　 ８３　（ｄ、１．　Ｈ−１°。

Ｊ＝６Ｈｚ）、６．８１　（ｓ、　２．　６−ＮＨ２）および７．　９６　（ｓ 、１．旦−８）。

実施例１３ ２′−〇−ノニルグアノシン 実施例３の方法に従い０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（５０鎮１．　ｐＨ７， ４）　、０．１Ｍ　トリス緩衝液（１８００ｍｌ、　ｐＨ７、４）およびＤＭＳ Ｏ（１０８０ｍｌ）中、２，６−ジアミツー９−（２’−０−ノニル−β−Ｄ− リボフラノシル）プリンおよび２．６−ジアミツー９−（３’−０−ノニル−β −Ｄ−リボフラノシル）プリンの混合物（約８０：２０の混合物、２９ｇ）をア デノシンデアミナーゼ（１，６ｇ）で処理すると６０ｇの生成物を油状物として 得た。分析用生成物はシリカゲルクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃからの再 結晶によ２　［ｍ、２．　ＯＧＨｚ　ＣＨ２（ＣＨｚ）　ｓ］　、３．　２７　 ３．　６１　［ｍ、４゜旦−５’　、Ｏ−ＣＨ２（ＣＨｚ）　？］　、３．　９ ５　（ｍ、１、旦−４’　）、４．　１０−４．１３　（ｍ、　２．旦−２°、 　Ｈ−３’　）　、　５．１３−６．０６　（ｍ、　２゜３′−〇旦　５゛−０ 旦）、　５．８０　（ｄ、　１．旦−１’　、　Ｊ＝６．４Ｈｚ）。

６、　４７　（Ｓ、２．　２−ＮＨｚ）、７．９８　（ｓ、１．８一旦）および １０．６４　（ｓ、１．　Ｎ＋アミド）。元素分析　Ｃ＋　ｓ　Ｈｓ　＋　Ｎ　 ｓ　Ｏ３として、計算値：Ｃ１５５、７３；Ｈ，７，６３；Ｎ、１７．　１０　 実測値：Ｃ，５５，６７；Ｈ，７゜６６；Ｎ：　１７．０２゜ 実施例１４ Ｎ２−イソブチリル−２°−０−ノニルグアノシン実施例４の方法に従いピリジ ン（３６０＋ｎｌ）に溶解した２゛−〇−ノニルグアノシン（１４，７ｇ）を塩 化トリメチルシリル（２３，４＋ｎｌ）および塩化イソブチリル（３０，軸ｌ） で処理し、粗生成物を得た（３７ｇ）。組物質はシリカゲルクロマトグラフィー （９０／１０　ＣＨＣＩｓ／ＭｅＯＨで溶出）により精製され、ＥｔＯＡｃから 再結晶して１４．６ｇの生成物が得られた。ｍ、ｐ、１６８−１６９℃。Ｉ）（ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　δ　０．　８５　［ｔ、ａ、ＣＨ、（ノニル）］、 １゜１４　［ｍ、　１８．０　ＣＨ２ＣＨ２（ＣＨｚ）　ａ、　ＣＨ（Ｃ旦ｓ） 　２］　、　１．４０（ＣＨｓ）　！］　、　３．３１−３．６３　［ｍ、　４ ．　Ｈ５’　、　ＯＣＨｔ　（ＣＨｔ）　？］。

３’　）、５．　１０　（ｔ、１．　５°−〇旦、Ｊ＝５Ｈｚ）、５．１８　（ ｄ、１゜３’　−ＯＨ、Ｊ＝４Ｈｚ）、　５．９１　（ｄ、　１．旦−１°、Ｊ ＝６．６Ｈｚ）。

８、　３１　（ｓ、１．　８一旦）、１１．　７３　（ｓ、１．　Ｃ鵞アミド） および１２゜１１　（ｓ、１．　Ｎ！７ミＦ）　。元素分析　ＣｔｓＨｓｔＮ＊ Ｏｓとして、計算値：ｃ。

５７．６０：Ｈ，７，７８；Ｎ、１４．６０　実測値二Ｃ，５７，６３；Ｈ，７ ゜９２：Ｎ、１４．６２゜ 実施例１５ Ｎ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２′−０−ノニルグアノシン 実施例５の方法に従いピリジン（２００ｉ＋１）中でＮ２−イソブチリル−２° −〇−ノニルグアノシン（１４，６ｇ、　３０．４ミリモル））を塩化ジメトキ シトリチル（１２，１ｇ、　１．１当量）で処理するとクロマトグラフ前は１６ ｇの、クロマトグラフ後は１１．５ｇの紫色ノ発泡体ヲ得り。’ＨＮＭＲ（ＤＭ ＳＯｄｓ）　６　０．８４　［ｔ、３゜ＣＨ，（ノニル）、Ｊ＝７Ｈｚ］　、１ ．１６　［ｍ、１８，０−ＣＨｌ　ＣＨｌ−（ＣＨｌ）　ｓ、　ＣＨ（ＣＨｓ） 　ｚ］　、　１．４３　［ｍ、　２．　ＯＣＨｔ　ＣＨ，−（ＣＨｚ）　ｓ］　 、　２．７７　［ｍ、　１．　ＣＨ（ＣＨｓ）　Ｊ　、３．１８　３．６３　［ ｍ。

４、旦−５°、Ｏ−ＣＨ２（ＣＨ４）　７］　、３．　７４　（ｓ、６．　ＤＭ Ｔｒ　Ｏ−ＣＨ３）　、　４．０６　（ｍ、　１、旦−４’　）　、　４．２７ 　（ｍ、　１．旦−３°）、４゜４２　（ｍ、　１．旦−２’　）　、　５．１ ９　（ｄ、　１．３’−０旦、Ｊ＝５Ｈｚ）、５゜９４　（ｄ、１．旦−１’　 、Ｊ＝５．　７Ｈｚ）、６．　８３−７．　３８　（ｍ、１３゜ＤＭＴｒ芳香族 ）、８．　１４　（ｓ、１．８−８）、１１．　６５（ｓ、１．　Ｃ，アミド） および１２．　１１　（ｓ、１．　Ｎ＋アミド）。元素分析Ｃａ　４　Ｈｓ　ｓ 　Ｎ　ｓ　Ｏａとして、計算値：Ｃ，６７、５９：Ｈ，７，２７；Ｎ、８．　９ ６実測値：Ｃ，６７，５９：Ｈ，７，１１；Ｎ、８．８０゜実施例１６ Ｎ２−イソブチリル−５−ジメトキシトリチル−２−〇−ノニルグアノシン　３ ゛−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト実施例６の 方法に従いＮ２−イソブチリル−５°−ジメトキシトリチル−２゛−０−ノニル グアノシン（２，１ｇ）をビス−（Ｎ、　Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シ アノエチルホスファイト（１，５ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウ ムテトラゾリド（０，２ｇ）で処理して生成物を得た（２．０ｇ）。”Ｐ　ＮＭ Ｒ（ＣＤＣＩｓ）　６１５０．７および１５０．４（シアステレオマー）。

実施例１７ ２．６−ジアミツー９−（２°、３°−ジー０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノ シル）プリンＤＭＦ中、２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プ リン（１０ｇ）　、ＮａＨ（３ｇ）および１−ブロモプロパン（１０ｍｌ）を使 用して実施例２の方法を繰り返した。

反応溶媒を蒸発後、反応生成物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製した。よ り遅く移動する４、３ｇの２′−〇−プロピル生成物が発泡体として得られた。

この発泡体を水から結晶化させると３．６ｇの生成物が得られた。ｍ、ｐ、１６ ５−１６７℃。１且　ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄａ）δ　０．８０および０．９２　（ ｔ、　６゜ＣＨ３）、１．６および１．４５　（ｍ、　４．　ＣＨ１）、　３． ７　３．４５　（ｂｒｍ、６）、４．０７（ｍ、２）、４．５（ｄｄ、１）、５ ．５５（ｂｒ　ｔ、１゜５°−０旦）、　５．８　（ｂｒ　ｓ、　２．６−ＮＨ ｚ）　、５．８５　（ｄ、　１．旦−１°）、６．　８４　（ｂｒ　ｓ、　２． 　２　ＮＨｚ）および８．０　（Ｓ、１．旦二８）。

元素分析Ｃ＋５ＨｚｓＮｓＯ４として計算値：Ｃ，５２，４５；Ｈ，７，１５； Ｎ、２２．９４　実測値：Ｃ，５２，１８；Ｈ，７，１９；Ｎ、２２．７５゜実 施例１８ Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−　（２’−０−プロピ ル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン 実施例４の方法に従い、ピリジン（３６ｍｌ）中、２．６−ジアミツー９−（２ °−０−プロピル−β−Ｄ−リポフラノシルメシリン（２，０ｇ）を塩化トリメ チルシリル（３，９■１．５当量）および塩化イソブチリル（３，２ｍｌ、　５ 当量）で処理すると、シリカゲルクロマトグラフィー後に発泡体を得た。発泡体 をＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから結晶化させて２．２ｇの生成物を得た。ｍ、ｐ、１４ ０−１４２℃。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−山）δ　０．７７　（ｔ、　３．　ＣＨ ３）、　１．０７．１．１６　Ｃｄ、　１２．２ｘＣＨ（ＣＨ３）　ｇ］　、　 １．５　（ｍ、　２．　ＣＨ２）　、　２．９．３．０３　［ｍ、　２．２ｘＣ Ｈ（ＣＨｓ）　２］　、　３．４　（ｍ、１．旦−５”　）、　３．５８　（ｍ 、　３．　ＱＣＣＨ２旦−５’　）　、　３．９５　（ｍ、１．旦−４’　）、 　４．３　（ｍ、　１）、　４．５（ｍ、１）、　５．０２　（ｔ、１．５’　 −０旦）、　５．　２　（ｄ、１．３’　−０旦）。

６、０３　（ｄ、　１．旦−１’　）　、　８．５８　（ｓ、　１．旦−８）、 　１０．３９　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）および１０．５７　（ｂｒ　ｓ、１． 　ＮＨ）。

実施例１９ Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−（５°−〇−ジメトキ シトリチルー２′−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン実施例５の 方法に従いピリジン（５０ａ＋１）中でＮ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６ −ジアミツー９−（２’−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１ ，９ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１，５ｇ、　１．１当量）およびジメチル アミノピリジン（触媒として２０ｍｇ）で処理すると、発泡体として生成物が得 られた（２．８ｇ）。

ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ、）δ　０．７９　（ｔ、　３．　ＣＨｓ）、　１． ０７．　１゜１６　［ｄ、１２，２ｘＣＨ（ＣＨ３）２］　、　１．５　（ｍ、 　２．　ＣＨｌ）、　２．９゜３、０３　［ｍ、　２．２ｘＣＨ（ＣＨｓ）　ｘ ］、　３．５８　（ｍ、　３．　ＱＣＣＨ７旦−５’　）　、　４．　１５　（ ｍ、１．其−４’　）、　４．４　（ｍ、　４）、　４．６　（ｍ、１）。

５、　１５　（ｄ、１．　３’　−０旦）、６．　１５　（ｄ、１．旦二１°） 、　６．　８−７゜実施例２Ｏ Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−（５−０−ジメトキシ トリチル−２°−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノンノリプリン　３′−β− ／アノエチルーＮ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−（５°−０−ジメトキ シトリチル−２゛−０−プロピル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（２，６ｇ ）をビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト （１，７ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（３０ｈ ｇ）で室温で一夜処理した。反応混合物は希ＮａＩＣＯｓ／ＣＨＣｌ２続いてＮ 　ａ　２　ＣＯｓ／　Ｎ　ａ　ＣＩと分配させ、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層 を蒸発させると発泡体を得た。発泡体をＣＨｚＣＩ　２　（約８１１）に溶解し てゆっ（リヘキサン（５００ａ＋１）に加えた。固形物を濾過し、乾燥させると 生成物が粉末として得られた（３．　Ｉｇ）。”Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣＩｓ）δ　 １５０．８および１５１．３゜ 実施例２１ ２．６−ジアミツー９−　［２’　−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３− イル］−β−Ｄ−リボフラノシル］プリンおよび２．６−ジアミツー９−　［３ ’−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］−β−Ｄ−リボフラノシル ］プリンＤＭＦ　（２０ｇ）中、２，６−ジアミツー９−（β−トリボフラノシ ル）プリン（１４，２ｇ）を水素化ナトリウム（３ｇ、　１．５当量）およびト （３−ブロモプロピル）フタルイミド（５，３ｍｌ　１．５当量）にて−夜７０ ℃で処理した。反応混合物をＨ，Ｏおよびヘキサン（ＩＸ）間に分配し、次に水 層をＣＨ，ＣＩ２で４回抽出した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、蒸発させて残 渣を得た。この残渣はＭ　ｅ　ＯＨ／　ＣＨ！　ＣＩ　！で溶出するシリカゲル クロマトグラフィーにより精製された。最初に２’−０−（Ｎ−フタルイミド） プロピル生成物、続いて混合分画および次に３’−０−（Ｎ−フタルイミド）プ ロピル生成物が溶出された。各分画を蒸発させると全て発泡体として３．４ｇの ２゜−０−（Ｎ−フタルイミド）プロピル生成物、３．０ｇの２°および３″生 成物の混合物および１４ｇの３’−０−（Ｎ−フタルイミド）プロピル生成物が 得られた。３°−０−（Ｎ−フタルイミド）プロピル生成物はＥｔＯＡｃ／Ｍｅ ＯＨから結晶化されて２７０ｍｇの固形物が得られた。

２．６−ジアミツー９−　［２−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル ］−β−Ｄ−リポフラメシル］プリン ’　ＨＮ　Ｍ　Ｒ（Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ一旦、ｌ）δ　１．８　（ｔｑ、　２．−Ｃ Ｈｌ）、３．４−３、　５８　（ｍ、６．　２ＸＣＨ２，Ｈ５°）、３．　９　 （ｍ、１）、４．　２６　（ｍ。

１）、４．３７（ｍ、１）、５．０５（ｂｒ　ｄ、１．３’−０Ｈ）、５．４２ ．６−ジアミツー９−　［３−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］ −β−Ｄ−リボフラノシル］プリン ｍ、ｐ、２２０−２２２°Ｃ，’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｏ）　６　１．　８５　 （ｔｑ。

２、−ＣＨ−Ｎ）　、　３．６−３．６７　（ｍ、　４．−０−ＣＨｓ、Ｈ５° ）、３゜８５（ｍ、１）、３．９２（ｍ、１）、４．６（ｍ、１）、５．３３（ ｄ、１゜２゛−〇旦）、　５．４５　（ｂｒ　ｔ、１．５°−０Ｈ）　、　５． ６５　（ｄ、１．旦−１’　）、　５．７３　（ｂｒ　ｓ、　２、ＮＨ，）、６ ．７５　（ｂｒ　ｄ、　２゜Ｎ旦ｚ）　、　７．８−７．　８５　（ｍ、４．　 Ａｒ）および７．８５　（ｓ、１．旦−８）。

元素分析　Ｃ２１Ｉ−＋　２　ｓ　Ｎ　ｔ　０６として、計算値：Ｃ，５３，７ ３；Ｈ，４，９４、Ｎ。

２０．８８　実測値　Ｃ，５３，５９；Ｉ−１，４，８９；Ｎ、２０．　６３゜ 実施例２２ ２°−０−（（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］シアノンン実施例３の方 法に従いＯ，１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（３＋ｎｌ、　ｐＨ７、４）　、０． ０５Ｍ　）リス緩衝液（６５ｍｌ、　ｐＨ７，４）およびＤＭＳＯ（４５ｍｌ） 中、２．６−ジアミツー９−　［２’−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３ −イル〕−β−Ｄ−リボフラノシル］プリン（３，１ｇ）をアデノシンデアミナ ーゼ（２００ｍｇ）にて、５日間室温で処理した。シリカゲルクロマトグラフィ ーからの生成物含有分画を蒸発させると、濃縮に伴い白色結晶が生成した。結晶 を濾過し、Ｍ　ｅ　Ｏ）（で洗浄すると１．１ｇの生成物が得られた。

分析用試料はＭ　ｅ　ＯＨから再結晶された。ｍ、ｐ、１９２−１９４℃。ＩＨ ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄＪδ　１．．８２　（ｍ、２．　ＣＨｓ）、３．　４５　３ ．　６７（ｍ、６．８−５’　、　ＱＣＣＨ２ＮＣＣＨｓ、３．　９　（ｍ、１ ）、４．　３　（ｍ、２゜其−２°、旦−３’　）、５．　１　（ｍ、２．５’ および３°−０Ｈ）　、５．８　（ｄ。

■、其−１°）、６．　５　（ｂｒ　ｓ、２．　ＮＨ２）　、７．　８３　（ｓ 、４．フタル）。

Ｃ２１Ｈ２２Ｎ６０□・１／２Ｈ１０として、計算値：Ｃ，５２，６１；Ｈ，４ ，８３’、Ｎ。

１７．５３　実測値：Ｃ，５２，５２；比　４．　７８；Ｎ、１７．３８゜実施 例２３ Ｎ２−イソブチリル−２’−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグ アノシン実施例４の方法に従い、ピリジン（３５＋ｎｌ）中、２°−０−［（Ｎ −フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン（７，２ｇ、粗生成物）を塩化 トリメチルシリル（１１，６吐５当量）および塩化イソブチリル（８ｍｌ、　５ 当量）で処理すると発泡体として生成物を得た。分析用試料はＥｔＯＡｃからの 結晶化により得られた。ｍ、ｐ、１６６−１６８°Ｃｏ１１−Ｉ　ＮＭＲ（ＤＭ ＳＯ−ｄｓ）６１．　１５　［ｄ、６．−ＣＨ（ＣＨｓ）　２］　、　１．８５ 　（ｍ、　２．　ＣＨｓ）　、　２．８　［ｍ、　１．　ＣＨ（Ｃｔｌｓ）　ｉ ］　。

３、４５−３．７　（ｍ、　６．旦−５’　、ＱＣ旦、、ＮＣＣＨｓ　、　３． ９５　（ｍ、　１）。

：Ｃ，５４，０４；Ｈ，５，３２：Ｎ、１５．２９　実測値：Ｃ，５４，４６； １’Ｌ　５．　３９；Ｎ、１４．　９８゜実施例２４ Ｎ２−イソブチリル−５°−ジメトキシトリチル−２’　−０−［（Ｎ−フタル イミド）プロパー３−イルコグアノシン 実施例５の方法に従いピリジン（５０ｍｌ）中でＮ２−イソブチリル−２°−０ −［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン（１，２ｇ）を塩化ジ メトキシトリチル（８２０ｍｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン （触媒として２０ｍｇ）で処理され、溶出液として１：Ｉ　Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ 、次にＥｔＯＡｃ続いて５％ＭｅＯＨ／１％ＴＥＡ含有ＥｔＯＡｃが用いられた 。生成物含有分画を蒸発させると生成物が発泡体として得られた（１．７ｇ）。

’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−共。）６１．１［ｄ、、　６．−ＣＩ−１（ＣＨｓ）　 ２］　、　１．８５　（ｍ、　２．　ＣＨ２）　、　２．７５　［ｍ。

１、　ＣＨ（ＣＨｓ）　２］　、　３．４５　３．７　（ｍ、　６．旦−５’　 、ＱＣ旦、、ＮＣＣＨｓ　、　３．７５　（ｓ、　６．　ＱＣＣＨｓ、　４．０ 　（ｍ、　１）、　４．３２　（ｍ、　１）。

４．４　（ｍ、１）、５．２　（ｄ、１，３°−０Ｈ）、５．９３　（ｄ、１． Ｈ−１°　）、６．８３，７．２．７．３５　（ｍ、１３．ＤＭＴｒ）、７．７ ８　（ｓ。

４、フタル）、８．　１５　（ｓ、１．旦−８）、１１．　６　（ｂｒ　ｓ、１ ．　ＮＨ）および１２．　０５　（ｂｒ　ｓ、１．　ＮＨ）　、元素分析　Ｃ４ ａＨ４ａＮａｏ＋ｏとして、計算値：Ｃ，６４，１８；比　５．　６２；Ｎ、　 ９．　７６　実測値：Ｃ，６４，４２；Ｈ，５，７８；Ｎ、９．５３゜ 実施例２５ Ｎ２−イソブチリル−５′−ジメトキシトリチル−２°−０−［（Ｎ−フタルイ ミド）プロパー３−イルコグアノシン　３゛−β−シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイ ソプロピルホスホロアミダイト 実施例６の方法に従いＮ２−イソブチリル−５°−ジメトキシトリチル−２’− ０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン（１，６ｇ）をビス −（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（１，４ ８ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（２０ｈｇ）で 処理し生成物を得た（２．０ｇ）。３１ｐＮＭＲ（ＣＤＣＩ＋）δ　１５０．９ ゜実施例２６ Ｎ２−ジメチルアミノメチリデン−５゛−ジメトキシトリチル−２’　−０−［ （Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］シアノシン ＤＭＦ中、２’　−０−［（Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン （９００ｍｇ）をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド　ジメチルアセクール（２ｍｌ ）で処理した。反応混合物は２時間撹拌し、５２℃で高真空上蒸発させた。残渣 を一度ビリジンと共沸させた後にピリジン溶液とした。塩化ジメトキシトリチル （７１３ｍｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として２０ ｍｇ）を加えた。反応混合物は一夜撹拌し、Ｎａ２ＣＯ３／ＣｌＩ２Ｃ１２に分 配し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、実施例５に従ってシリカゲルクロマトグラフィー により精製すると１．７ｇの生成物が灰色がかった白色の固形物として得られた 。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）δ　１，８８　（ｍ、　２．　ＣＨ２）　、　 ３．１　［ｄ、　６．　Ｎ＝ＣＨＮ　（ＣＨ３）　！］　、　３．３　（ｍ。

２、旦−５’　）　、　３．６７　（ｍ、　４．　ＱＣＣＨ＋　ＮＣｚ）　、３ ．７８　（Ｓ、　６．２８５、　７．　２５．　７．　３９　（ｍ、１３．　Ｄ ＭＴｒ）　、７．　８５　（ｓ、４．フタル）　、７．　９５　（ｓ、１．旦− ８）　、８．　５　［Ｓ、１．　Ｎ＝ＣＨＮ　（ＣＨｓ）　ｔ］および１１．３ ９　（ｓ、１．　ＮＨ２）。元素分析　Ｃ＜５Ｈ４ｓＮｔＯｏ’　１／２ＨａＯ とシア計算値：Ｃ，６４，５８；Ｈ，５，５４；Ｎ、１１゜７１　実測１ｉａ： Ｃ。

６４゜１０；Ｈ，５，６５；Ｎ、１１．４７゜実施例２７ Ｎ２−ジメチルアミノメチリデン−５゛−ジメトキシトリチル−２°−０−（（ Ｎ−フタルイミド）プロパー３−イル］シアノンン　３゛−β−シアノエチル− Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト Ｎ２−ジメチルアミノメチリデン−５゛−ジメトキシトリチル−２−〇−［（Ｎ −フタルイミド）プロパー３−イルコグアノシン（１，７ｇ）　、ビス＝（Ｎ、 　Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（１，４ｍ１） およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（１７０ｍｇ）を室温 で一夜撹拌した。反応混合物はＣＨｔＣＩ　ｚおよびＮａｘＣＯｓ　（２ｘ）間 に分配させた。有機層はＭｇ５Ｏａで乾燥し、蒸発させると油状物を得た。油状 物を最小量のＣＩ（ＩＣＩ２に溶解してヘキサン（約９０ｈｌ）に滴加すると生 成物が沈澱した。固形物を分離し、乾燥させると２．１ｇの生成物が得られた。

３１Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣＩ、）δ　１５０．４．１５０．６゜実施例２８ ２．６−ジアミツー９−［２°−０−Ｃ（Ｎ−フタルイミド）ベンター５−イル ］−β−Ｄ−リボフラノノル］プリン ＤＭＦ　（６０ｍｌ）中、２，６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル） プリン（６゜７ｇ）を水素化ナトリウム（１，３ｇ）およびＮ−（５−ブロモペ ンチル）フタルイミド（７，８ｇ、　１．１当量）で３日間室温で処理した。反 応混合物をＨ，ＯおよびＣＨ２Ｃｌ。

間に分配し、次にＣＨＩＣｌ、で４回抽出した。合併した有機層をＭｇ５Ｏ，で 乾燥し、蒸発させた。この残漬は５％→１０％Ｍ　ｅ　ＯＨ／　ＣＨｘ　ＣＩ　 ｔで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製された。２’−０−（Ｎ −フタルイミド）ペンチル含有分画を集め、蒸発させると２．２ｇの生成物が黄 色発泡体として得られＮ　７０　ｓとして計算値：Ｃ，５５，５０；比　５．　 ４７；Ｎ、１９．　７１　実測値：Ｃ，５５，４４；Ｈ，５，５１；Ｎ、１９． ３０゜実施例２９ ２’　−０−［（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イルコグアノシン実施例３の 方法に従い０．１Ｍ　トリス緩１ｊｆ＆（６０吐ｐＨ７，４）　、０．１ＭＮａ ＰＯ４緩衝液（２吐ｐＨ７，４）およびＤＭＳＯ（４ｈｌ）中、２．６−ジアミ ツー９−　［２’−０−［（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イル］−β−Ｄ− リボフラノシル］プリンおよび２．６−ジアミツー９−　［３−０−［（Ｎ−フ タルイミド）ペンタ−５−イル］−β−Ｄ−リボフラノシル］プリン異性体の混 合物（２，２ｇ）がアデノシンデアミナーゼ（６０■ｇ）により５日間室温にて 処理された。シリカゲルクロマトグラフィーからの生成物含有分画を蒸発させる と、生成物（１，０ｇ）が粗白色固形物として得られた。分析用試料はＭｅＯＨ を加えることにより結晶化させて調製された。ｍ、ｐ、１７８−１８０℃。１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄｏ）δ　１．　２４　（ｍ、２．　Ｃ旦ｚ）　、１．　５　 （ｍ、４゜２ｘＣ旦２）　、　３．５　３．６　（ｍ、　６．旦−５’　、ＱＣ 旦、、ＮＣ旦ｚ）、３゜８７（ｍ、１、旦−４’　）　、　４．２５　（ｍ、　 ２．旦−２゛、旦−３’）、５．１（ｍ、２．５’および３′−０旦）、５．　 ７８　（ｄ、１．旦−１’）、６．５（ｂｒ　ｓ、２．　Ｎ旦２）　、７．　８ ４　（ｍ、４．　フタール）　、７．　９８　（ｓ、１゜１／２Ｈ２０として計 算値ＩＣ，５４，４３；Ｈ，５，３６；Ｎ、１６．５６　実測値：Ｃ，５４，７ ９；Ｈ，５，２４；Ｎ、　１６．６１゜実施例３Ｏ Ｎ２−イソブチリル−２°−〇−［（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イルコグ アノシン実施例４の方法に従い、ピリジン（３５ｍｌ）中、２°−０−［（Ｎ− フタルイミド）ペンタ−５−イルコグアノシン（１，６ｇ、粗生成物）を塩化ト リメチルシリル（２，０■１．５当量）および塩化イソブチリル（１，６８Ｉｌ ｌ、　５当量）で処理すると発泡体として生成物を得た。この発泡体はＥｔＯＡ ｃと２回共沸させ、続いてＥｔＯＡｃを加え加熱することにより白色結晶が得ら れた（９５ｈｇ）、ｍ、ｐ、２０２−２０４℃Ｏ’Ｈ３、９（ｍ、１）　、４． 　２５　（ｍ、１）　、４．　３　（ｍ、１）　、５．　０７　（ｔ、１゜Ｎａ ｐｓ’１／２Ｈ２０として、計算値：Ｃ，５６，１４；Ｈ，５，７６；Ｎ、１４ ゜５５　実測値：Ｃ，５６，４５；Ｈ，５，７４；Ｎ、１４．　４１゜実施例３ １ Ｎ２−イソブチリル−５′−ジメトキントリチル−２’−０−［（Ｎ−フタルイ ミド）ペンタ−５−イル］シアノンン 実施例５の方法に従いピリジン（５ｈｌ）中でＮ２−イソブチリル−２°−０− （（Ｎ−フタルイミド）ペンタ−５−イルコグアノシン（０，９５ｇ）を塩化ジ メトキシトリチル（６２０＋ｎｇ、　１．１当量）およびジメチルアミノピリジ ン（触媒として２ｈｇ）で処理され、溶出液として１％ＴＥＡ含有ＥｔＯＡｃ続 いて５％ＭｅＯＨＥｔＯＡｃ／１％ＴＥＡ含有ＣＨｚＣＩｚが用いられた。生成 物含有分画を蒸発させると生成物（ｍ、１）　、４．　３３　（ｍ、１）　、４ ．　４　（ｍ、１）　、５．　１８　（ｄ、１．　３゜分析　Ｃ４８Ｈ５゜Ｎ、 Ｏ，。・１／２Ｈ，Ｏとして計算値：Ｃ，６５，５２；Ｈ，５，８４；Ｎ、９． 　５５　実測値：Ｃ，６５，５５；Ｈ，５，９４；Ｎ、９．２０゜実施例３２ ２．６−ジアミツー９−　［３’、５’　−０−（テトライソプロピルジシロキ サン−１，３−ジイル）−β−Ｄ−リボフラノンメシプリン ２．６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１０，５ｇ）のピ リジン（１００園１）ＷＩ！、ＩＩｌ液に１．３−ジクロロテトライソプロピル ジシロキサン（Ｔ　Ｉ　Ｐ　Ｄ　Ｓ、　１２．６ｇ）を加えた。反応液は室温で ３時間撹拌し、さらに１．３ｇの１．３−ジクロロテトライソプロピルジシロキ サンを加えて一夜撹拌した。反応混合物を氷水に注ぎ、不溶性生成物を濾過して 集めた。分析用試料はＥｔＯＡｃ／ヘキサンから再結晶した、ｍ、ｐ、１７０− １７２℃。元素分析　Ｃｚ２Ｈ＜ｏＮｓｏｓｓｉ２　・１／２ＨｚＯとして、計 算値：Ｃ，４９，５；Ｈ，７，７４，Ｎ、１５．　７実測値：Ｃ，４９゜５７＋ Ｈ，７，８２；Ｎ、１５．５９゜実施例３３ ２．６−シアミノー９−　［３’、５°−０−（テトライソプロピルジシロキサ ン−１，３−ジイル）−２−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］プリン２． ６−シアミノー９−　［３”、５’−０−（テトライソプロピルジシロキサン− １，３−ジイル］−β−Ｄ−リボフラメシル］プリン（８，８ｇ）のＤＭＦ　（ １２０ｍｌ）溶液およびヨウ化メチル（３ｍ１．３当量）の混合物を水浴で冷却 し、ＮａＨ（油中６０％、　１．０ｇ、１．５当量）を加えた。２０分後、反応 をＭｅＯＨで停止させて飽和ＮＨ４Ｃ］およびＣＨ２Ｃｌ２間に分配させた。有 機層を１回ＮＨ，ＣＩで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥して蒸発させた。残渣は熱Ｅ ｔＯＨ／Ｈ２０から結晶化させて生成物を結晶として実施例３４ ２．６−ジアミツー９−（２°−〇−メチルーβ−Ｄ−リボフラノシル）プリン ２．６−ジアミツー９−　［３’、５’−０−（テトライソプロピルジシロキサ ン−１，３−ジイル］−２’−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル］プリン（ ８，５ｇ）のＴＨＦ（５０■ｌ）溶液にフッ化テトラブチルアンモニウムのＬＭ 　Ｔｌ−ＩＦ溶液（＾１ｄｒｉｃｈ、　２０ＩＩｌ）を加えた。

反応混合物は２時間撹拌して濾過した。フィルターケーキを２回ＥｔＯＡｃで洗 浄して風乾すると４．０ｇの粗生成物が得られた。分析用試料は熱ＭｅＯＨから ／２Ｈ，０として、計算値：Ｃ，４３，２８；Ｈ，５，６１；Ｎ、２７．　５２ 　実測値：Ｃ，４３，５１：Ｈ，５，６２；Ｎ、２７．　２６゜実施例３５ ２′−〇−メチルグアノンン ０．１Ｍリン酸ナトリウム緩１ｉｆ＆、（２０１）ｎｌ、　ｐＨ７、４）および ＤＭＳＯ（２５ｍｌ）中、室温で４日間にて２．６−ジアミツー９−（２’−０ −メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（９，５ｇ）をアデノシンデアミナ ーゼ（タイプ■、Ｓｉｇｍａ）で処理した。得られた懸濁液を冷却して濾過し、 得られるフィルターケーキを）Ｉ！Ｏで洗浄し乾燥すると白色固形物が得られた （４．０ｇ）。固形物を熱Ｈ２０から再結晶すると２．９ｇの生成物が得られた 。ｍ、ｐ、２３６−２３８℃。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ一旦６）６３．３　（ｓ、 　３．０ＣＨ３）　、　３．５３および３．６　（ＡＢＸ、　２゜旦−５’　） 、３．　８７　（ｍ、ｌ、其−４°）、４．　１５　（ｍ、１．旦−２°）４゜ ２５　（ｍ、１．旦−３’　）　、５．　１３　（ｔ、１．　５°　−〇其）、 ５．　２３　（ｄ。

１．３°　−０Ｈ）、５．　８（ｄ、１．１１−１’　）、６．　４８（ｂｒ　 ｓ、２．　Ｎ１４２）　、　７．９６　（ｓ、１．１−１　８）および１０．６ ８　（ｂｒ　ｓ、１．　Ｎ旦）。

元素分析　Ｃ目Ｈ＋５ＮｓＯｓ・ｌ／２１（２０として、計算値：Ｃ，４３，１ ４；Ｈ，５゜２６；Ｎ、２２．８６　実測値・Ｃ，４３，５９；Ｉ−１，５，３ ４；Ｎ、２３．　０４゜ 実施例３６ Ｎ２−イソブチリル−２−０−メチルグアノシンピリジン（１０００１１）に溶 解した２°−０−メチルグアノシン（３，５ｇ）を塩化トリメチルシリル（９ｍ ｌ、６当量）および塩化イソブチリル（６，２ｍ１）により室温で４日間処理し た。反応混合物を水浴で冷却しｌ−１ｚｏ　（２０ｍｌ）を加えさらに２０分間 撹拌を続けた。Ｎ　Ｈ４０Ｈ（２０ｍｌ）を加え３０分間撹拌した後反応混合物 を蒸発させた。

残渣を■（２０中で摩砕して濾過し、濾液を実施例４の方法に従って７リカゲル クロマトグラフイーにより精製すると生成物を灰色がかった白色の固形物として 得る（１．５ｇ）。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−亘、）δ　１．　ｉ　［ｄ、　（３ ，ＣＨ（Ｃ１（３）２］、　２．７７　［ｍ、　１．　ＣＨ（ＣＨｓ）　ｚ］、 　３．３３　３．６　（ｍ、　５゜Ｏ旦）、　５．９　（ｄ、１．其−１’　） 　、　８．２８　（ｓ、１．　Ｈ−８）および１１゜実施例３７ Ｎ２−イソブチリル−５°−ジメトキシトリチル−２′−〇−メチルグアノシン 実施例５の方法に従いピリジン（５０ｍｌ）中でＮ２−イソブチリル−２′−０ −メチルグアノシン（１，５ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１，５ｇ、　１． １当量）およびジメチルアミノピリジン（触媒として１００ｍｇ）で処理すると 、発泡体として生成物が得られた（２．６ｇ）。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−見、） ６１．１４　［ｄ、　６．　ＣＨ（ＣＨ３）　！］　、　２．７５　［ｍ、１． 　Ｃ旦（ＣＨｓ）　ｔ］　、　３．５　（ｍ、　２．旦−５’）、３．７４（ｓ 、６，０ＣＨｓ）、４．０５（ｍ、１）、４．３３（ｍ。

実施例３８ Ｎ２−イソブチリル−５′−ジメトキシトリチル−２−〇−メチルシアノンン　 ３′−β−シシアエヂルーＮ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト実施例６ の方法に従いＮ２−イソブチリル−５゛−ジメトキシトリチル−２゛−０−メチ ルグアノシン（２０ｇ）をビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シア ノエチルホスファイト（１０，８ｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウ ムテトラゾリド（１，６ｇ）で処理して生成物を得た（１５．７ｇ）　。”　Ｐ 　ＮＭＲ（ＣＤ　ＣＩ　ｇ）　δ　１４８゜９７および１４７．９６゜ 実施例３９ Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−（２’−０−メチル− β−Ｄ−リボフラノシル）プリン 実施例４の方法に従い、ピリジン（２０ｍ　ｌ　）中、２，６−ジアミツー９− 　（２’−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（７００ｍｇ）を塩化 トリメチルシリル（２，１ｍｌ、　７当ｆｉ＆）および塩化イソブチリル（１， ２５ｍ１．５当ＩＩＬ）で処理すると、シリカゲルクロマトグラフィー後に発泡 体を得た（９００ｍｇ）。

実施例４Ｏ Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２，６−ジアミツー９−（５’−０−ジメトキ トリチルー２゛−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン 実施例５の方法に従いピリジン（３０ｍｌ）中でＮ２．　Ｎ６−ジイツブチリル ー２，６−ジアミツー９−（２’−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリ ン（９００ｍｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１，０ｇ）およびジメチルアミノ ピリジン（触媒として２０ｍｇ）で処理すると、反応生成物が発泡体として得ら れた（７００ｍｇ）。ＩＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ一旦６）６０．　９６−１．　１６ 　［ｍ、１２．　２ｘＣＨ（ＣＨｓ）！］、２．９および３．０５　［ｍ、　２ ．２ｘＣＨ（ＣＩ、Ｉ）　ｔ］−３，１８および３．３７　（ＡＢＸ。

２、旦−５’　）　、３．　３８　（ｓ、３．　ＱＣＣＨ３，３，７（ｓ、６， ０ＣＴ（ｓ）　。

４、　０５　（ｍ、１．■−４°）　、４．　４４　（ｍ、２．旦−２′、旦− ３’）、５゜２４　（ｄ、１．３’　−０旦）、　６．０６　（ｄ、１．旦二１ °）、　６．７８．７、実施例４１ Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２．６−ジアミツー９−　（５’−０−ジメト キトリチルー２°−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン　３゛−β− シアノエチル−Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト Ｎ２．　Ｎ６−ジイツブチリルー２，６−ジアミツー９−　（５−０−ジメトキ トリチルー２′−〇−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（６００ｍｇ） をビス−（Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエチルホスファイト（ ５００７ｚｇ）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（８０ ＩＩ１ｇ）で室温にて一夜処理した。反応混合物は希Ｎａ２ＣＯ３／ＣＨＣＬ続 いてＮａ２ＣＯｘ／ＮａＣｌに分配させ、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を蒸発 させると発泡体を得た（５００ｍｇ）　。”　Ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　ｓ）δ　 １５１．１（ダブレット）。

実施例４２ ２．６−ジアミツー９−（２’−０−オクタデシル−β−Ｄ−リボフラノシル） プリンＤＭＦ　（１１）に２，６−ジアミツー９−（β−Ｄ−リボフラノシル） プリン（５０ｇ、　１８０ミリモル）および水素化ナトリウム（７ｇ）を加えて ２時間沸騰させた。１５０℃でヨードオクタデカン（１００ｇ）を加え、反応混 合物は放置してＲＴまで冷却した。

反応混合物はＲＴで１１日間撹拌した。溶媒を留去し、残渣は５％ＭｅＯＨ／Ｃ ＨｚＣ１ｚで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーで精製された。生成物を含 む分画を蒸発させると生成物が得られた（ｌ１ｇ）。’ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄａ ）δ　０．８４　（ｔ、　３．　ＣＨｓ）　、　１．２２　［ｍ、　３２．０− ＣＨ２−ＣＨｚ　−（ＣＩ＋２）　ｔｅｌ　、１．　８６　（ｍ、２．　ＯＣＩ Ｉ＊　ＣＨｔ　）　、３．　２５　（ｍ、２゜Ｏ−ＣＨ１）、３．　９３　（ｄ 、１．　４’旦）、４．　２５　（ｍ、１．　３’　Ｈ）。

４、　３８　（ｔ、１．　２°ＩＩ）、５．　０８　（ｄ、１．　３’　−〇旦 ）、５．　４８　（ｔ。

１、５’　−０旦）、　５．７５　（ｓ、　２．６−ＮＨｚ）　、　５．８４　 （ｄ、１．　１゜一旦）　、　６．８　（ｓ、２．　２　ＮＨｚ）および７．９ ５　（ｓ、１．８−Ｈ）。

実施例４３ ２−０−オクタデシルグアノシン 実施例３の方法に従いＯ，１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（５０ｉ１．　ｐＨ７、 ４）　、０．１Ｍ　トリス緩衝液（１０００ｍｌ、　ｐＨ７、４）およびＤＭＳ Ｏ（１００ｈｌ）中、２．６−ジアミツー９−（２’−０−オクタチンルーβ− ｐ−リボフラノシル）プリン（１０ｇ）がアデノシンデアミナーゼ（１，５ｇ） で処理された。３日目、５日目および７日目に追加のアデノシンデアミナーゼ（ 各々、５００ｍｇ、　８８０ｍｇおよび２００ｍｇ）を加えた。反応液は総計で ９日間撹拌され、シリカゲルクロマトグラフィーによる精製により生成物が得ら れた（２ｇ）ｏ分析用試料はＭｅＯＨから再結晶された。’Ｉ−Ｉ　ＮＭＲ（Ｄ ＭＳＯｄｓ）δ　０．　８４　（ｔ、３．　ＣＨ３）　、１．　２２　［：ｓ、 ３２．０−ＣＨ２−ＣＨｔ　−（ＣＨ２）　ｔｅｌ　、５．　０７　（ｍ、２． ３’　ＯＨ５’　ＯＨ）、５．　７８　（ｄ。

１、１’　−Ｈ）　、　６．４３　（ｓ、　２．　ＮＨｚ）　、　７．９７　（ ｓ、　１．８　Ｈ）および１０．　６４　（ｓ、１．　Ｎ旦２）。元素分析　Ｃ ２ａ　Ｉ（４ｏ　Ｎ　ｓ　Ｏｓとして、計算値：Ｃ，６２，８０，Ｉ−［、９， １６；Ｎ、１２．９５　実測値：Ｃ，６２，５４；Ｉ七　９．１８；Ｎ、１２． ９５゜ 実施例４４ Ｎ２−イソブチリル−２°−〇−オクタデシルグアノノン実施例４の方法に従い ピリジン（１５０ｍｌ）に溶解した２°−０−オクタデシルシアノンン（１，９ ｇ）が塩化トリメチルシリル（２ｇ、　５当量）および塩化イソブチリル（２ｇ 。

５当量）で処理された。粗生成物はシリカゲルクロマトグラフィー（３％ＭｅＯ ＋−（／ＥｔＯＡｃで溶出）により精製され１２ｇの生成物が得られた。’ＩＩ 　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄａ）　６　０．８５　（ｔ、３．’　ＣＨ３）　、１． 　１５　［ｍ、３８．０　ＣＨ２Ｃ）−１２（ＣＨ２）１６．ＣＨ（ＣＨ３）　 ２］　、２．　７７　［ｍ、１゜ＣＨ（ＣＨ３）　２］　、４．　２５　（ｍ、 ２．　２’旦、３°　Ｈ）　、５．　０８　（ｔ、１゜（ｓ、１．　Ｎ旦、）。

元素分析　Ｃ３□ｌ−１ｓｓＮｓＯａとして、５゛１算値ＩＣ，６３，４７；Ｈ ，９，０９；Ｎ、１１．、　５７　実測値：Ｃ，６３，５３；Ｉ七　９．２０゜ Ｎ、１１．５２゜ 実施例４５ ２．６−ジアミツー９−　［２−０−（イミダゾ−ルートイル）ブチル−β−Ｄ −リボフラノシル］プリン ２、６−シ７　ミ／　−９−（β−Ｄ−ＩＪボフラノシル）ブメシ／　（５，０ ｇ）　（７）ＤＭＦ　（４００ｍｌ）溶液を水素化す）　ＩＪ　Ｉ’／ム（０， ７８ｇ）で処理した。さらに３０分撹拌後追加の水素化ナトリウム（２，６ｇ） を加え、続いて直ちにプロモブヂルーイミダゾール（９，９ｇ）のＤＭＦ　（２ ５ｍｌ）溶液を加えた。反応混合物は一夜撹拌した後１−１２０で反応を停止さ せた。反応混合物はセライトを通して濾過し、蒸発させると曲状の生成物を得た 。Ｔ　Ｌ　Ｃは異性体の混合物であることを示した。

実施例４６ ２’−０−（イミダゾール−１−イル）ブチルグアノシン実施例３の方法に従イ Ｏ，ＩＭ　ト！Ｊ　７．緩衝液（ｐＨ７、４）　、０．１ＭＮ　ａ　Ｐ　ＯＪ！ ？ｉｊＨ（ｐｉｆ７．４）およびＤＭＳＯ中、２．６−ジアミツー９−　［２’ −０−（イミダゾール−１−イル）ブチル−β−Ｄ−リボフラノシル］プリンお よび２，６−ジアミツー９−　［３’−０−（イミダゾール−１−イル）ブチル −β−Ｄ−リボフラノンメシプリンのＮ９物がアデノノンデアミナーゼにより９ 日間ＲＴにて処理された。生成物含有分画がシリカゲルクロマトグラフィーによ り精製され、生成物含有分画を蒸発させることにより生成物が得られた。

実施例４７ Ｎ２−イソブチリル−２°−０−（イミダゾール−１−イル）ブチルグアノシン 実施例４の方法に従い、ピリジン中、２’−０−（イミダゾール−１−イル）ブ チルグアノシンを塩化トリメチルシリル（５当１１）および塩化イソブチリル（ ５当量）で処理すると生成物が得られた。

実施例４８ Ｎ２−イソブチリル−５′−ンメトキシトリチル−２°−０−（イミダゾール− １−イル）ブチルグアノノン 実施例５の方法に従いピリジン中でＮ２−イソブチリル−２’−０−（イミダゾ ール−１−イル）ブチルグアノシンを塩化ジメトキシトリチル（１，１当量）お よびジメチルアミノピリジン（触媒として）で処理された。シリカゲルクロマト ゲラフィー後、生成物含有分画を蒸発させることにより生成物が得らるであろう 。

実施例４９ ２°、３−０−ジブチルスタニレンウリジン１１１ａｇｎｅｒ、　ｅｔ　ａｌ、 、　Ｊ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　１９７４．３９．２４．のプロトコールを使 用し、無水メタノール中、ウリジン（４５ｇ、　０．１８４モル）を酸化ジ−ｎ −ブチルスズ（４５ｇ、　０゜１８１モル）と加熱還流した。溶媒を濾過し、得 られた２゛、３°−０−ジブチルスタニレンーウリジンを真空下１００℃で４時 間乾燥させると８１ｇの収態であった（９３％）。

実施例５０ ２°−０−［ペンチルーω−（Ｎ−フタルイミド）］ウリジンた。この化合物（ ２０ｇ、　４２．１ミリモル）の無水ＤＭＦ　（５００ｍｌ）溶液に、２５ｇ　 Ｃ８４，２ミＩＪモ／ｌ／）　＋７）Ｎ　（５−ブロモヘンチル）フタルイミド （Ｔｒａｎｓ　Ｗｏｒｌｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ。

Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、　Ｍａｒｙｌａｎｄ）および１２．７５ｇ　（８５ミリモ ル）のフッ化セシウム（Ｃｓ　Ｆ）を加えた。混合物は室温で７２時間撹拌した 。反応混合物を蒸発させ、続いて両度トルエンと共沸させて残渣をＥｔＯＡｃお よび水（各々４００ｍ１）間に分配させた。ＥｔＯＡｃ層を濃縮し、シリカゲル カラム（７００ｇ）に加えた。ＣＨ２Ｃｌ　２−ＣＩ（＋ＯＨ（２０：　１、ｖ 　／　ｖ　）で溶出すると、０−ペンチル−ω−Ｎ−フタルイミドウリジンの２ °−および３゛−異性体の混合物を含む分画が得られた（５０％の収量）。

実施例５１ ５゛−０−ジメトキシトリチル−２’−０−［ペンチルーω−（Ｎ−フタルイミ ド）］ウリジン２°−０−［ペンチル−ω−（Ｎ−フタルイミド）］ウリジンの 異性体混合物を乾燥ピリジン中、室温で塩化ＤＭＴと６時間反応させた。Ｃ１（ ａ　ＯＨを過剰のＤＭＴ−Ｃ１のの分解に使用し、０．５％Ｅｔ、Ｎ含有ＣＩｈ Ｃ１，および水に分配させた。

有機層を乾燥しくＩｖ１ｇｓｏ４）、残渣はシリカカラムに加えた。カラムをＣ Ｈ，ＣＩ２：　ＣＨ３０Ｈ（２０：　１、ｖ　／　ｖ　）で溶出すると、生成物 の２゛および３゛異性が分離された。

実施例５２ ５′−〇−ジメトキントリチルー２’−０−［ペンチル−ω−（Ｎ−フタルイミ ド）］］ウリジンー３−０−β−シアノエチルＮＮ−ジイソプロピルホスホロア ミダイト５゛−０−ノメトキントリヂルー２−０−［ペンチル−ω−（Ｎ−フタ ルイミド）］ウリジンをテフロン撹拌子を含む乾燥丸底フラスコに加えた。フラ スコはアルゴンでバーンした。ヌクレオシドを溶解するのに十分員の無水メチレ ンクロリドをフラスコに加えた。前もって真空乾燥したＮ、Ｎ−ジイソプロピル アミノヒドロテトラゾリド（６０ｆ）＋ｎｇ、　０．０１４モル）をアルゴン下 で加えた。ビスーＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノ−シアノエチルホスファイトは シリンジから加えられた。反応液はアルゴン雰囲気下、２５℃で１６時間撹拌さ れた。反応完了により反応液を分岐ロートに移した。反応フラスコはメチレンク ロリドで洗い出した（２ｘ５０ｍｌ）。合併させた有機層は２回飽和炭酸水素ナ トリウム水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた 後１％トリエチルアミンを含むトルエンを加えた。得られたホスホロアミダイト は３：１→に１　ヘキサン／１％トリエチルアミン含有酢酸エチルで溶出するシ リカゲルフラッシュクロマトグラフィーにより精製された。選択された分画を合 併し、減圧上濃縮して乾燥すると白色発泡体が得られた。”Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣ Ｉ、、Ｔ（３Ｐ　Ｏ４標準）は正しいジアステレオマーであることを示した。

実施例５３ ２゛−０−ペンチルウリジン 実施例５０および５１の方法を使用し、ＤＭＦ　（９００１１）中で２゛、３° −０−ジブチルスタニレンーウリジン（１９，１ｇ）をブロモペンクン（１７ｍ ｌ、　１．３当量）およびヨウ化ナトリウム（４，５ｇ）で処理した。ＣＨ３０ Ｈ／ＣＨ２Ｃ１２５％→１０％を使用するシリカゲルカラムでの精製により、生 成物の２°および３°異性体の混合物が黒ずんだ油状物として得られた（９．８ ｇ）。

実施例５４ ５′−０−ジメトキシトリチル−２゛一種ペンチルウリジン実施例５１の方法に 従い、２’−０−ペンチルウリジンおよび３゛−０−ペンチルウリジンの混合物 （９，８ｇ）を塩化ジメトキシトリチル（１０，５ｇ）と反応させた。粗生成物 はシリカゲルカラム（１０１００Ｏで精製された。Ｈｅｘ、−ＥｔＯＡｃ　（３ ：　１→１：１）による溶出により５５ｇの２−〇−ペンチル異性体および３ｇ の３’　−０−ペンチル異性体が得られた。Ｃｓ５Ｈ３ｔＮｚＯ８’１／２Ｈ２ ０として、計算値：Ｃ１６７，５１；Ｉ七　６．　５５；Ｎ、４．　５　実測値 ：Ｃ，（３７・４８；Ｈ，６，５５；Ｎ、４．　５゜ 実施例５５ ５°−０−ジメトキシトリチル−２゛−０−ペンチルウリジン−３’−０−（β −シシアエチルＮ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダイト）保護５゛−０−ジ メトキシトリチル−２′−〇−ペンチルウリジン（４，６ｇ、　０．００７モル ）をテフロン撹拌子を含む乾燥丸底フラスコに加えた。フラスコはアルゴンでパ ージした。ヌクレオシドを溶解するのに十分量の無水メチレンクロリドをフラス コに加えた。前もって真空乾燥したＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラ ゾリド（６００ｍｇ、　０．０１４モル）をアルゴン下で加えた。ビス−（Ｎ、 Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−シアノエチルホスファイト（４，５ｇ、　４．７ ｍｌ、　２当量）はンリンジから加えられた。

反応液はアルゴン雰囲気下、２５°Ｃで１６時間撹拌された。反応完了をＴＬＣ により確認後反応液を分岐ロートに移し、反応フラスコはメチレンクロリドで洗 い出した（２ｘ５０＋ａｌ）。合併させた有機層は２回飽和炭酸水素ナトリウム 水溶液で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、蒸発させた後１％ト リエチルアミンを含むトルエンを加えた。得られたホスホロアミダイトは３：１ →１：１ヘキサン／酢酸エチル（１％トリエチルアミン含有）で溶出するシリカ ゲルフラノツユクロマトグラフィー（３００ｇ）により精製された。選択された 分画を合併し、減圧下１縮して乾燥すると２．６７ｇの生成物を白色発泡体とし て得た。３１Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ　ｓ、Ｈ、Ｐ　Ｏ４標準）は正しいジアステ レオマーであることを示した。

実施例５６ ２−０−メチルウリジン 実施例４９の方法に従い、ウリジン（８，５ｇ）が酸化ジブチルスズ（８，２ｇ 、　１当量）で処理された。得られた２’　、　３’−０−ジブチルスタニレン ウリジンが実施例５０に従ってヨードメタン（１６ｍｌ）により４２℃で処理さ れ、２°および３′アルキル化生成物の混合物が発泡体として得られた（３．５ ｇ）。

実施例５７ ５’　−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−メチル ウリジン２−０−メチルウリジン（８，０ｇ、　０．０３１モル）をピリジン（ １００ａ＋１）と減圧上蒸発させて油状物とした。この残渣に４．４゛−ジメト キシトリフェニルメチルクロリド（ＤＭＴ−ＣＩ、　１１．５ｇ、０．３４モル ）およびピリジン（１００ｍｌ）を加えた。混合物は２５℃で１．５時間撹拌し 、続いてメタノール（１０ｎ＋１）を添加して３０分で反応を停止させる。混合 物は減圧上濃縮し、残渣をシリカゲル（２５０ｇ）のクロマトグラフィーにかけ る。ヘキサン−酢酸エチル−トリエチルアミン（８０：２０：１）、続いて酢酸 エチル−トリエチルアミン（９９：１）で溶出させた。適当な分画を合わせ減圧 上蒸発させ乾燥すると（２５°Ｃ１０，２ｍｍＨｇで１時間）１７、　４　ｇ　 （１００％）　＋７）黄褐色の発泡体が得られた。ＴＬＣ純度９８％（Ｒｆ　０ ゜２３、ヘキサン−酢酸エチル　４　：　１）：　ＰＭＲ，（ＤＭＳＯ）δ１１ ．　４　（Ｈ−Ｎ３）、７．　７８　（１−［−６）、７．　６−６、　８　（ Ｂｚ）、５．　８　（Ｈ−１°）。

５．３（Ｈ５’）、５．２５（１−１０３’）、３．７（ＣＨｓＯＢｚ）、３゜ ４　（ＣＨｓＯ２°）。

実施例５８ ５°−０−（１１，４−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−メチルウ リジン−３’−０−（β−シシアエチルＮ、Ｎ−ノイソブロピルホスホロアミダ イト）生成物は５’　−０−（４，４−ジメトキシトリフェニルメチル）−２° −０−メチルウリジンから実施例５４に従って製造された。クロマトグラフィー 溶出液として酢酸エチル−ヘキサン−トリエチルアミン（５９：４０：１）が使 用され生成物を発泡体として６０％の収率で与えた。均質なジアステレオマー、 ＲｆＯ，５８；０．４４［酢酸エヂルーヘキサンートリエチルアミン（５９：４ ０：１）］。！＋ｐ　ＮＭＲ（ＣＤＣＩ、、Ｈ３ＰＯ４標準）δ１４８．１１； １４８．６１　（ジアステレオマー）。

実施例５９ ２゛−０−プロピルウリジン 実施例４９の方法に従い、ウリジン（１０ｇ）が酸化ジブチルスズ（１０，２ｇ 、　１当量）で処理された。得られた２”　、　３’−０−ジブチルスタニレン ウリジンが実施例５０に従ってヨードメタン（８ｍ１２当量）により１１０℃で 処理され、２′および３゛異性の混合物を発泡体として与えた（５．５ｇ）。

実施例６０ ５−０−　（４，４−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−プロピルウ リジン２−０−プロピルウリジンおよび３°−０−プロピルウリジンの混合物（ ３，６ｇ）を実施例５１に従って塩化ジメトキシトリチル（４，２ｇ、　１．０ 当Ｊりと反応させた。残漬はＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ　（１：　１．１％トリエチル アミン）で溶出するシリカゲルでクロマトグラフを行なった。適当な分画を合わ せ、減圧上蒸発させて乾燥すると４、　２ｇ（７）白色発泡体を得る。元素分析 Ｃ３ｓＨｓ６ＮｚＯｓ　・ｌ／２ＨｚＯとシテ、計算値：Ｃ，６７、３３；Ｈ， ６，１６：Ｎ、４．　７６　実測値：Ｃ＋　６７．１５；１−１．　６．　２４ 　；Ｎ、４．　４４゜実施例６１ ５°−０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−２−〇−プロピルウ リジンー３°−０−（β−ンシアエチルＮ、Ｎ−９イソプロピルホスホロアミダ イト）生成物は中間体５’　−０−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’− ０−プロピルウリジン（４７０ｍｇ）から実施例５４に従って製造され、発泡体 として得られた（４７７ｍｇ）。

実施例６２ ２゛−０−ノニルウリジン 実施例４９の方法に従い、ウリジン（２２，５ｇ）が酸化ジブチルスズ（２２， ５ｇ、　１当量）で処理された。得られた２゛、３°−０−ジブチルスタニレン ウリジンが実施例５０に従ってヨードノナン（１１ｍＬ１．３当量）により１３ ０−１４０℃で処理され、２゛および３゛異性を油状物として与えた（１１．２ ｇ）。

実施例６３ ５’　−０−（４，４−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−ノニルウ リジン２′−０−ノニルウリジンおよび３′−〇−ノニルウリジンの混合物（１ １，２ｇ）を実施例５１に従って塩化ジメトキシトリチル（１０，５ｇ）と反応 させた。残渣はＨｅｘ／ＥｔＯＡｃ（３：１→１：１．１％トリエチルアミン） で溶出するシリカゲルでクロマトグラフを行なった。適当な分画を合わせ、減圧 上蒸発させて乾燥すると５．２ｇの白色発泡体を得る。分析用試料はトルエン／ Ｅ　ｔ　ＯＡｃ　（３：　１．１％トリエチルアミン）を用いて再クロマトグラ フされた。元素分析Ｃ３・Ｈ４＠Ｎ２０ｇとして、計）Ｅｒｔｉ：Ｃ，６９，６ ２；ＩＩ、７．　１９；Ｎ、４．　１６　実測値：Ｃ，６９，６６：Ｈ，７，１ ８；Ｎ、４．０６゜実施例６４ ５’　−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−ノニル ウリジン−３°−０−（β−ンシアエチルＮ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミ ダイト）生成物は中間体５’　−０−（４，４°−ジメトキシトリチル）−２’ −０−ノニルウリジン（３゜１ｇ）から実施例５４に従って製造され、発泡体と して得られた（２．４９ｇ）。

実施例６５ ２′−０−へキセニルウリジン 実施例４９の方法に従い、ウリジン（１０，５ｇ）が酸化ジブチルスズ（１０， ５ｇ、　１当量）で処理された。得られた２゛、３°−０−ジブチルスタニレン ウリジンが実施例５０に従って６−ブロモヘキセン（３，５ｍｌ、ｌ、　２当量 ）およびヨウ化ナトリウム（３，３ｇ５１当量）により１１５℃で処理され、２ ゛および３゛異性を発泡体として与えた（３゜３ｇ）。

実施例６６ ５−０−　（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２°−０−へキモニ ルウリジン２゛−０−ヘキセニルウリジンおよび３°−０−へキセニルウリジン の混合物（３，１ｇ）を実施例５１に従って塩化ジメトキシトリチル（３，５ｇ 、　１．１当量）と反応させた。残ｔｌｉはＨｃｘ／ＥｔＯＡｃ　（３：　１→ １　：　１．１％トリエチルアミン）で溶出するシリカゲルでクロマトグラフを 行なった。適当な分画を合わせ、減圧上蒸発させて乾燥すると２．３ｇの白色発 泡体を得る。元素分析　Ｃｓ　ｓ　Ｈ４０Ｎ　ｘ　Ｏｍ・Ｉ／２Ｈ２○として、 計算値　Ｃ，６７、８０；Ｈ，６，４８；Ｎ、４．　３４）　実測値：Ｃ１６８ ，７７；Ｉ七　６．４１　：Ｎ、／１．４５゜実施例６７ ５’　−０−（４，４°−ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−へキセ ニルウリジン−３’　−０−（β−シシアエチルＮ、Ｎ−ノイソプロピルホスホ ロアミダイト）生成物は中間体５’　−０−（４，４’−ジメトキシトリチル） −２’−０−へキセニルウリジンから実施例５４に従って製造された。

実施例６８ ５°−０−ジメトキシトリチル−２’−０−［ヘキシル−ω−（Ｎ−フタルイミ ド）］］ウリジンー３−０−β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホ ロアミダイト）実施例５０から５２と類似の方法により、Ｎ−（６−プロモヘキ シル）フタルイミド（Ｎ−フタルイミド置換へキシル基）がウリジンの２′−位 に導入され続いてのンメトキントリチル化およびホスファイト化により表記ヌク レオチドを与える。

実施例６９ ５°−０−ジメトキシトリチル−２’−０−［デシル−ω−（Ｎ−フタルイミド ）］］ウリジンー３′−０−β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホ ロアミダイト）実施例５０から５２と類似の方法により、Ｎ−（１０−プロモデ ンル）フタルイミド（Ｎ−フタルイミド置換デシル基）がウリノンの２°−位に 導入され続いてのジメトキシトリチル化およびホスファイト化により表記ヌクレ オチドを与える。

実施例７Ｏ Ｎ４−ベンゾイル−２°−０−メチルノチジン、方法Δ工程１．３゛、５’−０ −［（１，１，３，３−テトライソプロピル）−１，３−ジシロキサンジイル］ ンチジン シチジン（４０ｇ、　０．１６５モル）および１．３＝ジクロロ−１，１，３， ３−テトライソプロピルノンロキサン（Ｔ　Ｉ　ＰＳ−ＣＩ、　５０ｇ、０．１ ５９モル）を乾燥ピリジノ（２５０ｍｌ）に撹拌しながら加えた。２５℃で１６ 時間撹拌後、反応液を減圧上濃縮して油状物とした。油状物をメチレンクロリド （８００ｍｌ）に溶解し飽和炭酸水素ナト戸ンム（２ｘ３００ｍｌ）で洗浄した 。有機層はシリカゲル（２００ｇ）洗浄カラムを通過させる。生成物はメチレン クロリド−メタノール（９７：３）による溶出により回収された。

適当な分画を合わせ、減圧上蒸発させ２５°Ｃ１０，２ｍｍＨｇで１時間乾燥さ せると５９．３ｇ　（７７％）の油状物が得られた。ＴＬＣ純度９５％（Ｒｆ　 Ｏ。

５９、酢酸エチル−メタノール　９：１）。生成物は酢酸エチルから白色結晶と して結晶化されるであろう、ｍｐ２４２−２４４℃。４１　ＰＭＲ（ＤＭＳＯ） ｄ　７．　７　（ｌ（−６）、５．　６８　（Ｈ−５）、５．　６１　（ＨＯ− ２’　）、５．　５５　（Ｈ−１”Ｉ。

工程２．Ｎ４−ベンゾイル−３’　、　５’　−０−［（１，１，３，３−テト ライソプロピル）−１，３−ジシロキサンジイル］シチジン ３’　、　５−０−　［（１，１，３，３−テトライソプロピル）−１，３−ジ シロキサンジイルコシチジン（５８ｇ、　０．１２モル）およびトリエチルアミ ン（１５，６ｇ、　０．１６モル）のジメチルアセトアミド（４００ｍｌ）溶液 を撹拌しながら５℃にて塩化ベンゾイル（１８，５ｇ、　０．１３モル）を３０ 分以上かけて加えた。混合物は１６時間放置して室温まで暖めた後、撹拌しなが ら氷水（３，５Ｌ）に注いだ。生じた固形物を集め、氷水で洗浄しく３ｘ５０ｈ ｌ）、４５℃１０．２ｍｍＨｇで５時間乾燥させると７７ｇ（１００％）の固形 物が得られた。ＴＬＣ純度　約９０％（Ｒｆ　０．６３、クロロホルム−メタノ ール９　：　１）　；　ＰＭＲ（ＣＤＣＩｓ）　ｄ　８．３２　（Ｈ−６）　； ｍｐｌｏｏ−１０１℃。

工程３．Ｎ４−ベンゾイル−２−０−メチル−３’　、　５’　−０−［（１， １，３，３−テトライソプロピル）−１，３−ジシロキサンジイルコシチジンＮ ４−ベンゾイル−３′、　５’　−０−［（１，１，３，３−テトライソプロピ ル）−１，３−ジシロキサンジイルコシチジン（１６６ｇ、　０．２５モル、純 度９０％）、酸化銀（１５０ｇ、　０．６５モル）およびトルエン（３００ｍｌ ）の混合物を減圧上蒸発させた。さらにトルエン（５０ｈｌ）を加え、１００ｍ １をさらに蒸発させた。窒素雰囲気下、ヨウ化メチルを一度に加え反応液は４０ ℃で１６時間撹拌した。銀塩を集め酢酸エチルで洗浄した（３ｘ１５０ｍｌ）。

合併した濾液は減圧上濃縮した。残渣を最小量のメチレンクロリドに溶解し、ン リガゲル（１ｋｇ）に加えてヘキサン−酢酸エチル（３：２→１：１）で溶出し た。適当な分画を合わせ、減圧上濃縮し、４５℃１０．２ｍｍＨｇで１時間乾燥 させるとｌｌ１ｇ（６６％）の油状物が得られた。ＴＬＣ純度　約９０％（Ｒｆ Ｏ，５９、ヘキサン−酢酸エチル　３：２）。ＰＭＲ（ＣＤＣｌ　ｓ）　ｄ８、 　８　（ｂｒ　ｓ、１．　ｔＩ−Ｎ’）　、８．　４０　（ｄ、１．　ｌ−１− ６）、８．　０−７゜４（ｍ、６．Ｈ−５およびＢｚ）　、５．８６　（ｓ、１ ．　ｌ−１−１’　）　、　３．　７４（ｓ、３．　ＣＨｓｏ　２°）。

工程４．Ｎ４−ベンゾイル−２゛−０−メチルンヂジンＮ４−ベンゾイル−２′ −〇−メチルー３°、　５’　−０−［（１，１，３，３−テトライソプロピル ）−１，３−ジンロキサンノイル］ンチジン（ｌｌ１ｇ、　０．１８モル）のメ タノール（１６０ｍｌ）およびテトラヒドロフラン（６４０ｍｌ）溶液をフッ化 テトラブチルアンモニウム（３６８ｍｌ。

１Ｍテトラヒドロフラン溶液）で処理した。反応液は２５℃で１６時間撹拌した 。

アンバーライトＩＲＣ−５０樹脂でｐＨを７に調節した。混合物を濾過し、樹脂 は熱メタノール（２ｘ２００ｍｌ）で洗浄した。合わせた濾液を減圧上濃縮し、 シリカゲル（１７５ｇ）に吸着させ、シリカゲルでクロマトグラフを行った（５ ００ｇ。

酢酸エチル−メタノール　１９：１→４；１）。適当な分画を合わせ、減圧上濃 縮し、４０℃１０．２ｍｍＨｇで２時間乾燥させると２８ｇ（４２，４％、シチ ジンから２１５％）の固形物が得られた。ＴＬＣ均質ＣＲｆ　Ｏ，３７、酢酸エ チル）。

ｍｐ　１７８−１８０℃（エタノールから再結晶）　。））ＭＲ（ＣＤＣＩ　、 ）　ｄｌｌ、２２（ｂｒ　ｓ、１．Ｈ−Ｎ’）、８．５５（ｄ、１．Ｈ−６）、 ８．１−７．　２　（ｍ、　６．　Ｈ−５およびＢｚ）、　５．８９　（ｄ、１ ．　Ｈ−１°）、５゜２　（ｍ、２．　ｌｏ−３’　、５’　）　、３．　４８ 　（ｓ、３．　ＣＨ３０−２’　）。

実施例７１ Ｎ４−ベンゾイル−２゛−〇−メチルシチジン、方法　Ｂ工程１．２−０−メチ ルンチジン シチジン（１００ｇ、　０．４１モル）は暖かいジメチルホルムアミド（６５℃ 、　１１２５ｍ１）に溶解された。撹拌しながらこの溶液を０℃まで冷却した。

ゆっくりし、安定した窒素ガスの流れを反応を通して確保する。水素化ナトリウ ム（油中に６０％、３回へキサンで洗浄、　１８ｇ、０．４５モル）を加え混合 物は０℃で４５分間撹拌した。ヨウ化メチル（９２，２５ｇ、　４０．５ｍｌ、 　０．６５モル）のジメチルホルムアミド（４００ｍｌ）溶液を０℃で４時間以 上かけて少しずつ添加した。混合物は２５℃で７時間撹拌したｉ＆濾過した。濾 液を減圧上濃縮して乾固させ続いてメタノール（２ｘ２０ｈｌ）と共沸させた。

残渣はメタノール（３５０ｍｌ）に溶解した。溶液はシリカゲル（１７５ｇ）に 吸着させ蒸発乾固させた。この混合物はジクロロメタン（５００ｍｌ）とスラリ ー状としシリカゲルカラム（１ｋｇ）の上端にのせた。カラムはジクロロメタン −メタノールの濃度勾配で溶出させた（１０：１→２：１）。より極性の低い２ ’　、　３’　−ジメチル副産物を除き、同時に溶出される２°および３゛−０ −メチル生成物含有分画を合わせ減圧上蒸発させるとシロップ状が得られた。シ ロップは最小量の熱エタノール（約１５０ｍ１）に溶解し、放置して２５℃まで 冷却させた。生じた沈澱物（２′より不溶性）を集めエタノール（２ｘ２５ｍｌ ）で洗浄し乾燥すると１５．２ｇの純粋な２゛−０−メチルンチジンを得る；ｍ ｐ２５２−２５４°Ｃ；　ＴＬＣ均質（Ｒｆｏ　５０、ジクロロメタン−メタノ ール　３．１．３′異性体のＲｆｏ、５０およびジメチル生成物はり　８０）。

濾液を蒸発させると１８ｇの異性体およびヨウ化ナトリウムの混合物が得られる 。

工程２．Ｎ４−ベンゾイル−２゛−０−メチルシチジン純粋な２゛−０−メチル ンチジン（１５，２ｇ、　０．０６０モル）を安息香酸無水物（１４，７ｇ、　 ０゜１２モル）のジメチルホルムアミド（２００ｍｌ）溶液に溶解した。溶液は ２５℃で４８時間撹拌した後減圧下蒸発乾固させた。残渣はメタノール（２ｘ２ ００ｍｌ）と摩砕して集め、その後１０分間暖かいエーテル（３００＋ｎｌ）と 摩砕した。固形物を集め熱２−プロパツール（５０ｍｌ）で摩砕し４℃で１６時 間放置した。固形物を集め乾燥すると１７ｇの生成物が得られた。２゛−０−メ チルンチジン粗濾液残渣（１８ｇ）が上記のごとくジメチルホルムアミド（２５ ０ｍｌ）中で安息香酸無水物（１７，３ｇ、　０．０７６モル）で処理され同様 に摩砕されるとさらに６．７ｇの純粋な生成物が得られ総計で２３．７ｇ（メチ レンから１６％）の固形物が得られた。：ＴＬＣ均質（Ｒｆｏ　２５、クロロホ ルム−メタノール　５：１、方法Ａを使用して作製された物質と同時にスポット ）。

実施例７２ Ｎ４−ベンゾイル−５°−０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）− ２’−０−メチルシチジン Ｎ４−ペンソイル−２°−０−メチルシチジン（２８ｇ、　０．０７７モ／ｌ／ ）をピリジン（４０ｈｌ）と−緒に減圧上蒸発させて油状物とした。この残渣に ４，４−ジメトキシトリフェニルメチルクｏ＋）　ｌ’　（ＤＭＴ−Ｃ１，２８ ，８ｇ、０．０８５モル）およびビリジ：／　（４００＋ａｌ）を加えた。混合 物は２５℃で２時間撹拌した後メタノール（ｌｈｌ）を加えて３０分で反応を停 止させた。この混合物は減圧下濃縮し、残渣はシリカゲルでクロマトグラフを行 った（５００ｇ、ヘキサン−酢酸エチル−トリエチルアミン　６ｏ：４０・１、 続いて酢酸エチル−トリエチルアミン　９９：１）。適当な分画を合ゎ也減圧下 濃縮し、４０°Ｃ／領　２ｍｍＨｇで２時間乾燥させると２６ｇ（７４％）の発 泡体が得られた：ＴＬＣ均質（ＲｆＯ，４５、酢酸エチル）；ＰＭＲ（ＤＭＳＯ ）　ｄ　１１．　３　（Ｈ−Ｎ４）、８．　４−６．　９　（１−１−６，Ｈ− ５゜Ｂｚ）　、５．　９５　（＋−１−１°）　、５．　２　（Ｉ（Ｏ−３°） 、３．　７　（ｓ、６゜Ｃ１１３０−ｔ　ｒ　ｉ　Ｌ、　）　、３．　５　（Ｓ 、３、Ｃｌ−１ｓＯ２’　）。

実施例７３ Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）− ２’−０−メチルシチジン−３’−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプ ロピルホスホロアミダイト）この生成物は中間体化合物Ｎ４−ベンゾイル−５’ −０−（４，４’−ジメトキシトリフェニルメチル）−２°−０−メチルシチジ ン（２２，０ｇ、　０．０３３３モル）から出発する実施例３８の方法に従って 合成され、クロマトグラフィー溶出液として酢酸エチル−ヘキサン−トリエチル アミン（５９：４０：１）を用いると生成物が８３％の収率で固形発泡体として 得られた（２３．６ｇ）　：ＴＬＣ均質ジアステレオマー（Ｒｆ　Ｏ。

４６：０．３３、酢酸エチル−ヘキサン−トリエチルアミン　５９：４０：１） ；”Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ、）Ｈ３ＰＯ４標準）ｄ１５０．３４　：１５１． ０２（ジアステレオマー）。

実施例７４ シチジ：／　（１０，１ｇ、　０．０４１５モル）　、水素化ナト’Ｊウム（２ ，Ｏｇ、１．２当量）　、ヨー）’ノナン（９，８ｍｌ、　１．２当ｊｌ）をＤ ＭＦ　（１００ｍｌ）中で実施例７１、工程１の方法に従って反応させ、２°お よび３′異性体が付着性の発泡体として得られた（１１．６ｇ）。

実施例７５ Ｎ４−ベンゾイル−２゛−０−ノニルシチジン２−０−ノニルシチジンおよび３ °−０−ノニルシチジンの混合物（１１，５ｇ）が実施例７１、工程２の方法に よりＮ４−ベンゾイル−２′−〇−ノニルシチジンに変換された。

実施例７６ Ｎ４−ベンゾイル−５°−０−（ジメトキシトリチル）−２’−０−ノニルシチ ジンＮ４−／＜　ン”／イルー２’　−０−／　ニルシｆ　’）　ン（２，６７ ｇ、　０．００５６モル）が実施例７２の方法に従って塩化ジメトキシトリチル （２，０ｇ、　１．１当量）で処理されて、４．２ｇの純粋な生成物を与えた。

元素分析　Ｃ４６１−Ｉ　Ｓ　！　Ｎ　ｓ　Ｏａ・１／２Ｈ２０として、計算値 ：Ｃ，７０，３９；ＩＩ、（３，９３：Ｎ、５．　’３５　実測値：Ｃ，７１， ２０；Ｈ。

（３，８８：Ｎ、５．４１゜ 実施例７７ Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（ジメトキシトリチル）−２°−０−ノニルシチ ジン−３’−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミダ イト）本生成物は中間体化合物Ｎ４−ベンゾイル−５°−０−（４，４°−ジメ トキシトリフェニルメチル）−２°−０−ノニルシチジン（４，１ｇ、　０．０ ０５３モル）がら出発し、実施例３８の方法に従ってビスーＮ、Ｎ−ジイソプロ ピノげミノ−シアノエチルホスファイト（３，３１１）およびＮ、Ｎ−ジイソプ ロピルアミノヒドロテトラゾリド（４５０ｍｇ）で処理して製造された。本生成 物はシリカゲルカラムからクロマトグラフィー溶出液としてヘキサン−ＥｔＯＡ ｃ　（３：　１→１：１．１％トリエチルアミン）を用いて溶出され、生成物が 固形発泡体とＩ、テｌうｔｔり（４，２１ｇ）　。”Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ。

Ｈ３Ｐ０．標準）はジアステレオマーを示した。

実施例７８ ２′−ローペンチルシチジン シチジン（１０ｇ、　０．０４１モル）、水素化ナトリウム（２，４ｇ、　１． ５当量）、ブロモペンタン（７，６ｍｌ、　１．５当量）をＤＭＳＯ（９０ｍｌ ）中で実施例７１、工程１の方法に従って反応させ、２°および３゛異性を発泡 体として得た（７．６ｇ）。

実施例７９ Ｎ４−ベンゾイル−２°−０−ペンチルシチジン２−０−ペンチルシチジンおよ び３−ローペンチルシチジンの混合物（７，５ｇ）が実施例７１、工程２の方法 によりＮ４−ベンゾイル−２′−ローペンチルシチジンに変換され実施例８Ｏ Ｎ４−ベンゾイル−５−〇−（ジメトキシトリチル）−２’−０−ペンデルシチ ジンＮ４−ベンゾイル−２゛−ローペンチルシチジン（３，０ｇ、　０．００７ モル）が実施例７２の方法に従って塩化ジメトキシトリチル（２，７ｇ、　１． １当Ｉｔ）で処理されて、３．５ｇの純粋な生成物を与えた。元素分析　Ｃ４□ Ｈ４、Ｎユ０８・１．／２１１．０として、計算値：Ｃ，６９，２１；Ｈ，６， ３６；Ｎ、５．　７６　実測値：Ｃ，６９，５１、Ｈ。

６．３０：Ｎ、５．７１゜ 実施例８１ Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（ジメトキシトリチル）−２’−０−ペンチルシ チジン−３°−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピルホスホロアミ ダイト）本生成物は中間体化合物Ｎ４−ベンゾイル−５’　−０−（４，４’− ジメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−ペンチルシチジン（３，５ｇ、　 ０．００４８モル）から出発し、実施例３８の方法に従ってビスーＮ、Ｎ−ジイ ソプロピルアミノーンアノエチルホスファイト（２゜９ｇ、　３．１ｍｌ、　２ 当量）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（４００ｍｇ。

０．５当量）で処理して製造された。本生成物はシリカゲルカラムからクロマト グラフィー溶出液としてヘキサン−ＥｔＯＡｃ（３：１→１：１．１％トリエチ ルアミン）を用いて溶出され、生成物が固形発泡体として得られた（３．２４ｇ ）。３ＩＰ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＮ、Ｈ３ＰＯ４標準）はジアステレオマーを示し た。

実施例８２ ２′−〇−プロピルシチジン ＤＭＦ　（１５０ｍｌ）中、シチジン（１６，５ｇ、　０．０６８モル）を水素 化ナトリウム（４，５ｇ）およびブロモプロパン（１５ｍｌ）で室温にて３日間 処理した。得られた反応混合物は直接次の工程に使用した〈実施例８３参照）。

実施例８３ Ｎ４−ベンゾイル−２′−０−プロピルシチジン水浴中の実施例８２の２−〇− プロピルシチジン反応混合物にピリジン（６ｈｌ）および塩化トリメチルシリル （６０ｍｌ）を加えた。反応液は３０分間撹拌し、続いて塩化ベンゾイル（５５ ｍｌ）を加えた。生じた反応混合物は２．５時間撹拌した後、水浴で冷却した。

ＨｚＯ（１００ｍｌ）およびａＮＨ４０Ｈ（１００ｍ１）が加えられた。３０分 間撹拌後、反応混合物を蒸発させて残渣をＨ，ＯおよびＣｌ−１２ＣＬ間に分配 させた。有機層は両度希Ｎａ、ＣＯ，で、一度希１１ＣＩで洗浄し、Ｍ　ｇ　Ｓ 　Ｏ＜で乾燥して蒸発させた。得られた残渣はシリカゲルカラム（１５０ｇ）に 加え、最初にＣｌ−１２Ｃ１２Ｔ、次１．−５　カラ１０　％ノＭ　ｅ　ＯＨを 含むＣＨｚＣ］ｚを溶出溶媒として溶出した。生成物を含有する分画を蒸発させ ると発泡体となった。発泡体をＥｔＯＡｃ／ヘキサンから結晶化させると反応生 成物の結晶がいくつかのバッチで得られた（総計で６．５ｇ）。

実施例８４ Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（ジメトキシトリチル）−２’−０−プロピルシ チジンＮ４−ベンゾイル−２゛−０−プロピルシチジン（３，０ｇ、　０．００ ７モル）が実施例７２の方法に従って塩化ジメトキシトリデル（１，５ｇ）で処 理されて、１．５ｇの純粋な生酸物を与えた。元素分析　ＣｌｏｔｌｕＮｊＯｓ 　・Ｉ／２１１２０として、ｔ１算値：Ｃ，（３８゜４５．Ｉ七　６．　１８； Ｎ、５．　９９　実測値＋Ｃ，６８，３９；Ｉ−１，５，９９；Ｎ、５．　９５ ゜ 実施例８５ Ｎ４−ベンゾイル−５’−０−（ジメトキシトリチル）−２’−０−プロピルシ チジン−３’　−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ノイソプロピルホスホロア ミダイト）本生成物は中間体化合物Ｎ４−ベンゾイル−５’　−０−（４，４’ −ノメトキシトリフェニルメチル）−２’−０−プロピルシチジン（３，８ｇ、 　０．００５５モル）から出発し、実施例３８の方法に従ってビスーＮ、Ｎ−ジ イソプロピルアミノーンアノエチルホスファイト（３゜５ｍｌ、　２当量）およ びＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド（５００ｍｇ、　０．５当 量）で処理して製造された。本生成物はシリカゲルカラムからクロマトグラフィ ー溶出液としてヘキサン−ＥｔＯＡｃ　（１：　１．１％トリエチルアミン）を 用いて溶出され、生成物が固形発泡体として得られた（４．７２ｇ）。３１Ｐ− ＮＭＲ（ＣＤ　ｓ　ＣＮ　、Ｈｓ　Ｐ　Ｏ＜標準）はジアステレオマーを示した 。

実施例８６ Ｎ２．　Ｎａ−ジイツブチリルアミノー９−　（２−０−メチル−β−Ｄ−リボ フラノシルメシリンＮ２．　Ｎａ−ジアミツー９−（２’−０−メチル−β−Ｄ −リボフラノシル）プリン（１，６ｇ、　５．３９ミリモル、実施例３４参照） をピリジン（２５＋ｎｌ）と共沸した。残渣をピリジン（４０ｍｌ）に懸濁して 水浴で冷却し、塩化トリメチルシリル（４，８ｍ１）を加えた。

反応混合物を３０分撹拌した後塩化ブチリル（２，８ｍｌ、　５当ＩＮ）を添加 した。得られた反応混合物は室温で４時間撹拌した。撹拌しなからＮ２０　（１ ０ｍｌ）および濃ＮＨ４ＯＨ（］００ｍ１を加えて反応を停止さぜた。３０分後 、反応混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムで精製した（生成物の溶出に ＣＩ−ｈｃｌ、→１０％Ｍｅ　ＯＨ／（ｊ（、ＣＩ　２を用いて）。適当な分画 を蒸発させると生成物が油状物として得られた（２．４ｇ）。

実施例８７ Ｎ２．　Ｎａ−ジイツブチリルアミノー９−（５”Ｏ−ジフトキントリチル−２ ゛−ｏ−メチル−β−〇−リボフラノシル）プリン Ｎ２．　Ｎａ−ジイツブヂリルアミ／−９−（２°−０−メチル−β−〇−リボ フラノシル）プリン（２，４ｇ）をピリジン（２５ｍｌ）と共沸し、ピリジンに 再溶解した。塩化ジメトキシトリデル（１，８ｇ、　１当量）およびジメヂルア ミノビリジン（５ｍｇ）を加え、得られた溶液は一夜室温で撹拌した。一部溶媒 を留去して残渣をＣＨｚＣｌ　２および希Ｎａ２ＣＯ３間に分配させた。有機層 を希Ｎａ、Ｃｏ、で洗浄し、Ｍｇ５Ｏ，で乾燥して蒸発させた。残渣は１％トリ エチルアミンを含むヘキサン／ＥｔＯＡｃ　（１：１）で溶出するシリカゲルカ ラムで精製した。適当な分画を蒸発させると生成物が発泡体として得られた（２ ．４ｇ）。

実施例８８ Ｎ２．　Ｎａ−シイツブチリルアミノー９〜［５’−０−ジメトキシトリチル− ２°−０−メチル−３’　−０−（β−シアノエチル　Ｎ、Ｎ−ジイソプロピル ホスホロアミド）−β−Ｄ−リボフラノシル］プリン Ｎ２．　Ｎａ−ジイツブチリルアミノー９−（５−０−ジメトキシトリチル−２ °−０−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリン（１，７ｇ、　０．００２３ モル）をビスーＮ。Ｎ−ジイソプロピルアミノ−シアノエチルホスファイト（１ ，４８ｍ１．２当量）およびＮ、Ｎ−ジイソプロピルアミノヒドロテトラゾリド （２００ｍｇ）で−夜室温にて処理した。反応混合物は希Ｎａ２ＣＯ３／　ＣＨ ２ＣＩ　２間に分配させ、有機層をＭｇ５Ｏ，で乾燥して蒸発させた。残渣はシ リカゲルカラムに加え、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ　（３：　１→１：１，１％トリ エチルアミンを含む）で溶出すると生成物が固形発泡物として得られた（１．７ ３ｇ）。”　Ｐ　Ｎ　Ｍ　Ｒ（ＣＤ　ｓ　ＣＮ　、　Ｉ（ｓ　Ｐ　Ｏ＜標準）は ジアステレオマーを示した。

実施例８９ オリゴヌクレオチド合成 本発明のヌクレオシドホスホロアミダイトが一度合成されたら、それらは次にＡ ｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ　Ｉｎｃ、　３８０ＢまたはＭｉｌｌｉＧ ｅｎ／Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ　７５００または８８００のような標準固相自動化核 酸合成機により合成されたオリゴヌクレオチド内へ取り込ませることができる。

所望のオリゴヌクレオチドを提供するためこれらの合成機は標準ホスホロアミダ イトカップリングの化学を使用している（例えば、Ｍ、　Ｃａｒｕ２４、　Ｊ、 Ｓ、Ｃｏｈｅｎ、　ｅｄ、、　ＣＲＣＰｒｅｓｓ、Ｉｎｃ、　Ｂｏｃａ　Ｒａｔ ｏｎ、　ＦＬ、　１９８９を参照されたい）。

ボーケージ試薬（例えば、Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　１９９０，１ １２．１２５３を参照されたい）または元素状硫黄（例えば、Ｔｅｔｒａｈｃｄ ｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　１９８１．２２．１８５９を参照されたい）も同様に ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの提供に使用できる。

実施例９０ Ａ、　２−修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションの熱力学の評価本 発明の２°−修飾オリゴヌクレオチドが、これらに相補的なＲＮＡまたはＤＮＡ 配列にハイブリダイズする能力は、熱溶融分析により決定することができる。

ＲＮＡ相補鎖は、Ｔ７　ＲＮＡポリメラーゼにおよび、Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂｉｏ ｓｙｓｔｅｍｓ、　Ｉｎｃ。

３８０Ｂにより合成されたテンプレート・プロモータＤＮＡから合成する。ＲＮ Ａ種は、Ｆ　Ｐ　Ｌ　Ｃ（ＬＫＢ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ、　Ｉｎｃ）を用いてイ オン交換により精製する。天然アンチセンス・オリゴヌクレオチドまたは特定の 位置に２゛−ｏ−アルキルグアノシンを含むものを化学量論的濃度でＲＮＡまた はＤＮＡ相補鎖に加え、２本鎖からランダムコイルへの転移における吸収（２６ ０Ｂｍ）深色性をＧ１１ｆｏｒｄ　Ｒｅ５ｐｏｎｓｅｌ１分光光度計を用いてモ ニターする。これらの測定は、０．１Ｍまたは１．ＯＮｌのイオン強度を得るた め１０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ７，４）　、Ｏ，１ｍＭ　ＥＤＴＡ、および ＮａＣｌの緩衝液中で実施する。データは、１／Ｔｍ対１ｎ［ｃｔ］（ここでＣ ｔは全オリゴヌクレオチド濃度）を表わすグラフにより分析することができる。

この分析から熱ノＪ学パラメータを決定する。形成されたヘテロ２本鎖の２本鎖 の安定性に関して得られた情報に基づき、オリゴヌクレオチド類似体中への２− ０−アルキルグアノシンの配置を、そのヘリックス安定性に対する効果について 評価する。ハイブリッドの安定性を著しく変化させる修飾は、自由エネルギー（ デルタＧ）の減少を示し、これらの修飾のアンチセンス　オリゴヌクレオチドと しての有用性に関する決定を行う。

Ｂ、２゛−修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションの正確性２′−〇 −アルキルグアノシン修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドの、絶対的特異性を もって標的ｍＲＮＡとハイブリダイズする能力は、全細胞ＲＮＡの存在下におけ る精製標的ｍＲＮＡのノーザンプロット分析により示すことができる。標的ｍＲ ＮＡは、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼプロモーターの下流に配置された標的ｍＲＮＡ のｃＤＮＡを含むベクターから合成する。合成したｍＲＮＡをアガロースゲル中 で電気泳動し、適当な支持膜にトロセルロース等）に転移させる。この支持膜を ブロッキングして、３２Ｐ−標識したアンチセンスオリゴヌクレオチドをプロー ブとして用いる。ストリンジエンシーは、プロットを繰り返し、より高い温度に おいて、またはより低いイオン強度の洗浄緩衝液により洗浄することにより決定 する。ヘテロ２本鎖の形成の存在を評価するためにオートラジオグラフィーを行 い、オートラジオダラムをレーザー密度計（ＬＫＢ　Ｐｈａｒｍａｃｉａ、　Ｉ ｎｃ、）により定量化する。全細胞ＲＮＡを標準的方法により単離し、アガロー ス電気泳動、膜転移、および標識した２°−修飾オリゴヌクレオチドをプローブ として用いて分析することにより、ハイブリッド形成の特異性を決定する。スト リンジエンシーは修飾していないアンチセンス・オリゴヌクレオチドについてあ らかじめ決定し、特異的に標的とするｍＲＮＡのみが２゛−修飾オリゴヌクレオ チドとへテロ２本鎖を形成しうる条件を用いた。

実施例９１−ヌクレアーゼ耐性 Ａ、血清および細胞質ヌクレアーゼに対する２−修飾オリゴヌクレオチドの耐性 の評価 血清ヌクレアーゼに対する天然のホスホロチオエートおよび２−修飾オリゴヌク レオチドの耐性は、このオリゴヌクレオチドを種々の濃度のウシ胎児血清または ヒト成人血清を含む培養液中でインキュベートすることにより評価された。標識 したオリゴヌクレオチドを種々の時間インキュベートし、プロテアーゼにで処理 し、次に２０％ポリアクリルアミド尿素変性ゲルにおける電気泳動、およびそれ に続くオートラジオグラフィーによって分析する。オートラジオダラムをレーザ ー密度計で定量化する。修飾の位置および既知のオリゴヌクレオチドの長さに基 づいて、特定の２′−修飾がヌクレアーゼ分解に及ぼす影響を決定することがで きる。細胞質ヌクレアーゼについては、ＨＬ６０細胞株が使用された。ポスト・ ミトコンドリア上清を密度差遠心分離により調製し、標識したオリゴヌクレオチ ドをこの上清中で種々の時間インキュベートした。インキュベートの後、血清核 酸溶解分解について上述したように、分解についてオリゴヌクレオチド類似体を 評価する。オートラジオグラフィーの結果を、未修飾ホスホロチオエートと２′ −修飾オリゴヌクレオチドとの比較のために定量化した。

Ｂ、特定のエンドヌクレアーゼおよびエキソヌクレアーゼに対する２−修飾オリ ゴヌクレオチドの耐性の評価 天然のおよび２−修飾オリゴヌクレオチドの、特定のヌクレアーゼ（エンドヌク レアーゼ、３’、５’−エキソヌクレアーゼおよび５゛、３°−エキソヌクレア ーゼ）に対する耐性の評圃を行い、修飾結合の分解に対する実際の効果を決定し た。

修飾オリゴヌクレオチドを、種々の選択されたヌクレアーゼに特異的な限定され た反応緩衝液中でインキュベートした。生成物をプロテアーゼにで処理した後、 尿素を加え、尿素を含む２０％ポリアクリルアミドゲルによる分析を実施した。

ゲル生成物はステインズオール試薬（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、　 ）で染色して可視化した。レーザー密度計を用いて分解の程度を定量化した。特 定のヌクレアーゼについて、２゛−修飾の効果を決定し、血清および細胞質系か ら得られた結果と比較した。

手　続　補　正　書

Claims (69)

【特許請求の範囲】
1. １．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり； Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキル、Ｃ４−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アル キニルであり； Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニト ロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、 Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール 、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ ノ、Ｎ−フタルイミド、イミダゾール、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミ ノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シ リル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、 コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエ ーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴ ヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；およびｎは０から 約６までの整数である） を有する化合物。
2. ２．Ｒ１がＣ４−Ｃ２０アルキルである請求項１に記載の化合物。
3. ３．Ｒ１がＣ５−Ｃ２０アルキルである請求項１に記載の化合物。
4. ４．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり； Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキルであり； Ｒ２はＮＨ２、イミダゾールまたはＮ−フタルイミドであり；Ｙはヒドロキシル 保護基であり； Ｚはリン酸または活性化されたリン酸基であり；Ｑ１およびＱ２は独立してＨま たはグアノシン保護基であり；およびｎは０から約６までの整数である） を有する化合物。
5. ５．Ｙがトリチル、メトキシトリチル、ジメトキシトリチルまたはトリメトキシ トリチルである請求項４に記載の化合物。
6. ６．Ｚがβ−シアノエチル−Ｎ，Ｎ−イソプロピルホスホロアミデートである請 求項４に記載の化合物。
7. ７．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり； Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキル、Ｃ４−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アル キニルであり； Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニト ロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、 Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール 、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ ノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミ ノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シ リル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、 コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエ ーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴ ヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；およびｎは０から 約６までの整数である） を有する化合物。
8. ８．２′−Ｏ−プロピルグアノシン、２′−Ｏ−ペンチルグアノシン、２′−Ｏ −ノニルグアノシン、２′−Ｏ−オクタデシルグアノシン、２′−Ｏ−（Ｎ−フ タルイミド）−ペンチルグアノシン、または２′−Ｏ−（イミダゾール−１−イ ル）ブチルグアノシンである化合物。
9. ９．２′−Ｏ−アルキル化グアノシン３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方法 であって： ２，６−ジアミノ−９−（リボフラノシル）プリンをアルキル化して２，６−ジ アミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル化リボフラノシル）プリンを生成させ；該２ ，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル化リボフラノシル）プリンを脱アミ ノ化して２′−Ｏ−アルキル化グアノシンを生成させ；該２′−Ｏ−アルキル化 グアノシンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；そして該５′−保護２′−Ｏ− アルキル化グアノシンの３′−位をホスファイト化する；の各工程を含む方法。
10. １０．該アルキル化が塩基の存在下で行われる請求項９に記載の方法。
11. １１．該塩基が水素化金属である請求項１０に記載の方法。
12. １２．該保護工程がジメトキシトリチル甚を付加する請求項９に記載の方法。
13. １３．該ホスファイト化工程がビス−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノシアノエチ ルホスファイトで実施される請求項９に記載の方法。
14. １４．該ホスファイト化工程がＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾ リド存在下で実施される請求項１３に記載の方法。
15. １５．さらに該５′−ヒドロキシル部分の保護に先だって、該２′−Ｏ−アルキ ル化グアノシンのＮ２−アミノ部分を保護することを含む請求項９に記載の方法 。
16. １６．該脱アミノ化工程がアデノシンデアミナーゼを用いて実施される請求項９ に記載の方法。
17. １７．２′−Ｏ−アルキルグアノシンの製造方法であって：２，６−ジアミノプ リンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離 基である）を有する化合物で処理して２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプ リンリボシドおよび３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドを生 成させ；および 該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドを脱アミノ化して２′ −Ｏ−アルキルグアノシンを得る； ことを含む方法。
18. １８．さらに該３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドから該２ ′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドを分離することを含む請求 項１７に記載の方法。
19. １９．該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの脱アミノ化の 速度が該３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノブリンリボシドの脱アミノ化の 速度に比べて加速される条件下で該脱アミノ化を実施することにより、該３′− Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドから該２′−Ｏ−アルキル−２ ，６−ジアミノプリンリボシドが分離される請求項１８に記載の方法。
20. ２０．該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドがアデノシンデ アミナーゼにより脱アミノ化される請求項１７に記載の方法。
21. ２１．該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの脱アミノ化の 該加速された速度が酵素アデノシンデアミナーゼの使用により達成される請求項 １９に記載の方法。
22. ２２．該塩基が水素化ナトリウムである請求項１７に記載の方法。
23. ２３．該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドが結晶化または クロマトグラフィーにより該３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボ シドから物理的に分離される請求項１７に記載の方法。
24. ２４．該アルキル基がＣ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和アル キル、Ｃ１−Ｃ２０の脂環式、Ｃ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不 飽和の置換アルキルまたはＣ１−Ｃ２０の置換脂環式である請求項１７に記載の 方法。
25. ２５．該Ｃ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和の置換アルキルま たはＣ１−Ｃ２０置換脂環式の置換基が、ハロゲン、ヒドロキシル、チオール、 ケト、カルボキシル、ニトレート、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロ メチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル 、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ ノ、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド 、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シリル、複素環式、脂環式、炭素環式 、インターカレーター、レポーター分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリア ミド、ポリエチレングリコール、ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的 特性を改良するための基、またはオリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良 するための基である請求項２４に記載の方法。
26. ２６．２′−Ｏ−アルキルグアノシンの製造方法であって：２．６−ジアミノプ リンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離 基である）を有する化合物で処理して２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプ リンリボシドを生成させ；および該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリ ンリボシドをアデノシンデアミナーゼで処理する； ことを含む方法。
27. ２７．該アルキル基がＣ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和アル キルまたはＣ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和の置換アルキル である請求項２６に記載の方法。
28. ２８．該Ｃ１−Ｃ２０の直鎖または分岐鎖の飽和または不飽和の置換アルキルの 置換基がハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトレート 、ニトロ、ニトロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、 Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アラルキ ル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミノ、アジド、ヒドラジノ、ヒドロ キシルアミノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスル フィド、シリル、複素環式、脂環式、炭素環式、インターカレーター、レポータ ー分子、コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、 ポリエーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、または オリゴヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基である請求項２７に 記載の方法。
29. ２９．該塩基が水素化ナトリウムである請求項２６に記載の方法。
30. ３０．さらに、該２，６−ジアミノプリンリボシドの該塩基および式Ｒ−Ｌ（式 中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する該化合物による処理 により生じたさらにアルキル化された生成物から該２′−Ｏ−アルキル−２，６ −ジアミノプリンリボシドを分離することを含む請求項２６に記載の方法。
31. ３１．該アルキル基がＣ１−Ｃ２０の飽和の直鎖アルキルまたはＣ１−Ｃ２０の 飽和の直鎖置換アルキルである請求項２７に記載の方法。
32. ３２．２′−Ｏ−アルキルグアノシンの３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方 法であって： ２，６−ジアミノプリンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル 基であり、Ｌは脱離基である）を有する化合物で処理して２′−Ｏ−アルキル− ２，６−ジアミノプリンリボシドを生成させ；該２′−Ｏ−アルキル−２，６− ジアミノプリンリボシドをアデノシンデアミナーゼで処理して２′−Ｏ−アルキ ルグアノシンを生成させ；該２′−Ｏ−アルキルグアノシンの２−ＮＨ２部分を 保護基で保護し；該２′−Ｏ−アルキルグアノシンの５′−ＯＨ部分を別の保護 基で保護し；および 該保護２′−Ｏ−アルキルグアノシンの３′−ＯＨ部分をホスファイト化する； ことを含む方法。
33. ３３．該保護２′−Ｏ−アルキルグアノシンが２−シアノエチルＮ，Ｎ−ジイソ プロピルアミノクロロホスフィンでホスファイト化される請求項３２に記載の方 法。
34. ３４．該塩基が水素化ナトリウムである請求項３２に記載の方法。
35. ３５．２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アル キル−２，６−ジアミノプリンリボシドおよび２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル− ２，６−ジアミノプリンリボシドの製造方法であって： ２，６−ジアミノプリンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル 基であり、Ｌは脱離基である）を有する化合物で処理して、２′−Ｏ−アルキル −２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプ リンリボシドまたは２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリ ボシドの少なくとも一つを生成させ；および 該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル −２，６−ジアミノプリンリボシドまたは２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２， ６−ジアミノプリンリボシドの一つを単離する； ことを含む方法。
36. ３６．さらに、該２，６−ジアミノプリンリボシドに十分な式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒ は該アルキル基であり、Ｌは脱離基である）を有する化合物および塩基を加えて 、該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキ ル−２，６−ジアミノプリンリボシドおよび２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２ ，６−ジアミノプリンリボシドの少なくとも二つの混合物を生成させ；および 該混合物から該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシド、３′− Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドおよび２′，３′−ジ−Ｏ−ア ルキル−２，６−ジアミノブリンリボシドの少なくとも一つを分離する；ことを 含む請求項３５に記載の方法。
37. ３７．さらに、該混合物から結晶化により該２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジア ミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドま たは２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボシドの少なく とも一つを分離することを含む請求項３６に記載の方法。
38. ３８．さらに、該混合物からクロマトグラフィーにより該２′−Ｏ−アルキル− ２，６−ジアミノプリンリボシド、３′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリ ンリボシドまたは２′，３′−ジ−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミノプリンリボ シドの少なくとも一つを分離することを含む請求項３６に記載の方法。
39. ３９．２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル−β−Ｄ−リボフラノシル ）プリンの３′−０−ホスホロアミダイトの製造方法であって：２，６−ジアミ ノプリンリボシドを塩基および式Ｒ−Ｌ（式中、Ｒは該アルキル基であり、Ｌは 脱離基である）を有する化合物で処理して２′−Ｏ−アルキル−２，６−ジアミ ノプリンリボシドを生成させ；該２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル −β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの２および６−ＮＨ２部分を保護基で保護し ；該２，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル−β−Ｄ−リボフラノシル） プリンの５′−ＯＨ部分を別の保護基で保護し；および該保護２，６−ジアミノ −９−（２′−Ｏ−アルキル−β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの３′−ＯＨ部 分をホスファイト化する；ことを含む方法。
40. ４０．２，６−ジアミノプリンリボシドの改良製造方法であって：液体アンモニ アを除外し、無水条件（ｎｏｎ−ａｎｈｙｄｒｏｕｓ）にした密封容器中、グア ノシン水和物をヘキサメチルジシラザンおよびトリフルオロメタンスルホン酸で 処理し；および 結晶化により該２，６−ジアミノプリンリボシドを単離する；ことを含む方法。
41. ４１．２′−Ｏ−アルキル化シチジン３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方法 であって： 非保護シチジンをアルキル化して２′−Ｏ−アルキル化シチジンを生成させ該２ ′−Ｏ−アルキル化シチジンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；および該５′ −保護２′−Ｏ−アルキル化シチジンをホスファイト化する；の各工程を含む方 法。
42. ４２．該アルキル化が塩基の存在下で行われる請求項４１に記載の方法。
43. ４３．該塩基が水素化金属である請求項４２に記載の方法。
44. ４４．該保護工程がジメトキシトリチル基を付加する請求項４１に記載の方法。
45. ４５．該ホスファイト化工程がビス−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノシアノエチ ルホスファイトで実施される請求項４１に記載の方法。
46. ４６．該ホスファイト化工程がＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾ リドの存在下で実施される請求項４５に記載の方法。
47. ４７．さらに該５′−ヒドロキシル部分の保護に先だって、該２′−Ｏ−アルキ ル化シチジンのＮ４−アミノ部分を保護することを含む請求項４１に記載の方法 。
48. ４８．２′−Ｏ−アルキル化ウリジン３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方法 であって： ウリジンを酸化ジアルキルスズで処理してウリジンの２′，３′−Ｏ−ジアルキ ルスタニレン誘導体を生成させ； 該ウリジンのスタニレン誘導体をアルキル化して２′−Ｏ−アルキル化ウリジン を生成させ； 該２′−Ｏ−アルキル化ウリジンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；および該 ５′−保護２′−Ｏ−アルキル化ウリジンをホスファイト化する；の各工程を含 む方法。
49. ４９．該アルキル化が塩の存在下で行われる請求項４８に記載の方法。
50. ５０．該塩が金属ハライドである請求項４８に記載の方法。
51. ５１．該保護工程がジメトキシトリチル基を付加する請求項４８に記載の方法。
52. ５２．該ホスファイト化工程がビス−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノシアノエチ ルホスファイトで実施される請求項４８に記載の方法。
53. ５３．該ホスファイト化工程がＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾ リドの存在下で実施される請求項５２に記載の方法。
54. ５４．該酸化ジアルキルスズが酸化ジブチルスズである請求項４８に記載の方法 。
55. ５５．２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル ）プリン３′−Ｏ−ホスホロアミダイトの製造方法であって：２，６−ジアミノ −９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンをアルキル化して２′−０−アルキル 化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンを提供し；該２′ −Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンの ５′−ヒドロキシル部分を保護し；および該５′−保護２′−Ｏ−アルキル化２ ，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンをホスファイト化する ； の各工程を含む方法。
56. ５６．該アルキル化が塩基の存在下で行われる請求項５５に記載の方法。
57. ５７．該塩基が水素化金属である請求項５６に記載の方法。
58. ５８．該保護工程がジメトキシトリチル基を付加する請求項５５に記載の方法。
59. ５９．該ホスファイト化工程がビス−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノシアノエチ ルホスファイトで実施される請求項５５に記載の方法。
60. ６０．該ホスファイト化工程がＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ−ヒドロテトラゾ リドの存在下で実施される請求項５９に記載の方法。
61. ６１．さらに該５′−ヒドロキシル部分の保護に先だって、該２′−Ｏ−アルキ ル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンのＮ２およびＮ ６−アミノ部分を保護することを含む請求項５５に記載の方法。
62. ６２．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり； Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキル、Ｃ４−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アル キニルであり； Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニト ロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、 Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール 、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ ノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミ ノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シ リル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、 コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエ ーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴ ヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ５は 独立してＯＨまたは該構造に連結された該オリゴマーのさらなるサブユニットで あり；および ｎは０から約６までの整数である） を有するサブユニットを少なくとも一つ含むオリゴマー。
63. ６３．構造： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり； Ｒ１はＣ１−Ｃ２０アルキル、Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アル キニルであり； Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニト ロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、 Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール 、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ ノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミ ノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シ リル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、 コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエ ーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴ ヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ５は 独立してＯＨまたは該構造に連結された該オリゴマーのさらなるサブユニットで あり；および ｎは０から約６までの整数である） を有するサブユニットを少なくとも一つ含むオリゴマー。
64. ６４．少なくとも一つの２′−Ｏ−アルキル化グアノシンヌクレオチドを含むオ リゴヌクレオチドの製造方法であって： ２，６−ジアミノ−９−（リボフラノシル）プリンをアルキル化して２，６−ジ アミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル化リボフラノシル）プリンを生成させ；該２ ，６−ジアミノ−９−（２′−Ｏ−アルキル化リボフラノシル）プリンを脱アミ ノ化して２′−Ｏ−アルキル化グアノシンを生成させ；該２′−Ｏ−アルキル化 グアノシンの５′−ヒドロキシル部分を保護し；該５′−保護２′−Ｏ−アルキ ル化グアノシンの３′−位をホスファイト化して２′−Ｏ−アルキル化グアノシ ン３′−ホスホロアミダイトを生成させ；およびホスホロアミダイトカップリン グ条件を用いて該２′−Ｏ−アルキル化グアノシン３′−ホスホロアミダイトと オリゴヌクレオチド上の５′−ヒドロキシル部分をカップリングさせる； ことを含む方法。
65. ６５．オリゴヌクレオチド配列内に少なくとも一つの２′−Ｏ−アルキル化２， ６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンヌクレオチドを含むオリ ゴヌクレオチドの製造方法であって： ２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリンをアルキル化して２ ′−０−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン を提供し；該２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラ ノシル）プリンの５′−ヒドロキシル部分を保護し； 該５′−保護２′−Ｏ−アルキル化２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラ ノシル）プリンの３′−位をホスファイト化して２′−Ｏ−アルキル化２，６− ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン３′−Ｏ−ホスホロアミダイ トを生成させ；およびホスホロアミダイト化学を用いて該２′−Ｏ−アルキル化 ２，６−ジアミノ−９−（β−Ｄ−リボフラノシル）プリン３′−ホスホロアミ ダイトとオリゴヌクレオチド上の５′−ヒドロキシル部分をカップリングさせる ；ことを含む方法。
66. ６６．蛋白質の合成を調節する方法であって、構造：▲数式、化学式、表等があ ります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり； Ｒ１はＣ３−Ｃ２０アルキル、Ｃ４−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アル キニルであり； Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニト ロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、 Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール 、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ ノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミ ノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シ リル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、 コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエ ーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴ ヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ５は 独立してＯＨまたは該構造に連結された該オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌク レオシドのさらなるヌクレオチドまたはヌクレオシドであり；および ｎは０から約６までの整数である） を有するサブユニットを少なくとも一つ含むオリゴマーを、該蛋白質をコードし ているｍＲＮＡと特異的にハイブリッド形成させることを含む方法。
67. ６７．該オリゴヌクレオチドが医薬として受容可能な担体中に存在する請求項６ ６に記載の方法。
68. ６８．蛋白質の合成を調節する方法であって、構造：▲数式、化学式、表等があ ります▼ （式中ＸはＲ１−（Ｒ２）ｎであり； Ｒ１はＣ１−Ｃ２０アルキル、Ｃ２−Ｃ２０アルケニルまたはＣ２−Ｃ２０アル キニルであり； Ｒ２はハロゲン、ヒドロキシル、チオール、ケト、カルボキシル、ニトロ、ニト ロソ、ニトリル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｏ−アルキル、 Ｓ−アルキル、ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アリール、Ｓ−アリール 、ＮＨ−アリール、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−アラルキル、アミ ノ、イミダゾール、Ｎ−フタルイミド、アジド、ヒドラジノ、ヒドロキシルアミ ノ、イソシアネート、スルホキシド、スルホン、スルフィド、ジスルフィド、シ リル、アリール、複素環式、炭素環式、インターカレーター、レポーター分子、 コンジュゲート、ポリアミン、ポリアミド、ポリアルキレングリコール、ポリエ ーテル、オリゴヌクレオチドの薬力学的特性を改良するための基、またはオリゴ ヌクレオチドの薬物動態学的特性を改良するための基であり；Ｔ３およびＴ５は 独立してＯＨまたは該構造に連結された該オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌク レオシドのさらなるヌクレオチドまたはヌクレオシドであり；および ｎは０から約６までの整数である） を有するサブユニットを少なくとも一つ含むオリゴマーを、該蛋白質をコードし ているｍＲＮＡと特異的にハイブリッド形成させることを含む方法。
69. ６９．該オリゴヌクレオチドが医薬として受容可能な担体中に存在する請求項６ ８に記載の方法。