JPH06339394A - ヒトインターロイキン−１αに対するモノクローナル抗体 - Google Patents
ヒトインターロイキン−１αに対するモノクローナル抗体Info
- Publication number
- JPH06339394A JPH06339394A JP6086564A JP8656494A JPH06339394A JP H06339394 A JPH06339394 A JP H06339394A JP 6086564 A JP6086564 A JP 6086564A JP 8656494 A JP8656494 A JP 8656494A JP H06339394 A JPH06339394 A JP H06339394A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- human
- antibody
- 1alpha
- monoclonal antibody
- antibody against
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】本発明は、通産省工業技術院微生物工業研究所
にＫＯＣＯ３０１（微工研条寄第１５５４号、ＦＥＲＭ
ＢＰ−１５５４）なる表示で寄託された抗体産生細胞
により産生されるヒトインターロイキン−１αに対する
モノクローナル抗体を提供する。 【効果】本発明抗体はヒトＩＬ−１αに特異的であり、
その利用によれば、例えばヒトＩＬ−１αをヒトＩＬ−
１βとは区別して高感度、高精度でしかも簡便に測定可
能な新しい免疫検定法が提供される。
にＫＯＣＯ３０１（微工研条寄第１５５４号、ＦＥＲＭ
ＢＰ−１５５４）なる表示で寄託された抗体産生細胞
により産生されるヒトインターロイキン−１αに対する
モノクローナル抗体を提供する。 【効果】本発明抗体はヒトＩＬ−１αに特異的であり、
その利用によれば、例えばヒトＩＬ−１αをヒトＩＬ−
１βとは区別して高感度、高精度でしかも簡便に測定可
能な新しい免疫検定法が提供される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、インターロイキン−１
（ＩＬ−１）に対する抗体、詳しくはＩＬ−１の免疫学
的精製、測定等を可能とする新しいヒトＩＬ−１に対す
る抗体に関する。
（ＩＬ−１）に対する抗体、詳しくはＩＬ−１の免疫学
的精製、測定等を可能とする新しいヒトＩＬ−１に対す
る抗体に関する。
【０００２】
【従来の技術】ヒトＩＬ−１は、マクロファージ・単球
のみならず、多くの細胞から産生され、多様な分子形態
と生物活性とを示すことが知られている。現在、該ヒト
ＩＬ−１には等電点が異なる２種のもの、即ちＩＬ−１
α及びＩＬ−１βが知られており、それらはそれぞれ一
次構造も明らかにされている〔Ｎature,３１５，ｐ６４
１（1985）；Ｊ．Ｅxp．Ｍed.,１６４，ｐ２３７（198
6）等〕。
のみならず、多くの細胞から産生され、多様な分子形態
と生物活性とを示すことが知られている。現在、該ヒト
ＩＬ−１には等電点が異なる２種のもの、即ちＩＬ−１
α及びＩＬ−１βが知られており、それらはそれぞれ一
次構造も明らかにされている〔Ｎature,３１５，ｐ６４
１（1985）；Ｊ．Ｅxp．Ｍed.,１６４，ｐ２３７（198
6）等〕。
【０００３】上記ＩＬ−１は、医薬品としての応用が種
々研究されていると共に、例えば各種の免疫欠損病や異
常免疫応答の研究並びに之等の臨床上の診断のために、
殊に臨床サンプルにおけるその測定が着目されている。
々研究されていると共に、例えば各種の免疫欠損病や異
常免疫応答の研究並びに之等の臨床上の診断のために、
殊に臨床サンプルにおけるその測定が着目されている。
【０００４】しかして、現在該ＩＬ−１の測定技術とし
ては、バイオアッセイ（生物学的検定法）が知られてお
り、この方法においてＩＬ−１は被検サンプルの活性量
として測定されている。しかしながらこの方法は、操作
性及び精度に劣り、常に測定値を干渉する成分の存在を
考慮する必要がある。しかも上記方法では、ＩＬ−１α
及びＩＬ−１βが同一活性を示すことから、之等を区別
して測定できないという大きな欠点があった。
ては、バイオアッセイ（生物学的検定法）が知られてお
り、この方法においてＩＬ−１は被検サンプルの活性量
として測定されている。しかしながらこの方法は、操作
性及び精度に劣り、常に測定値を干渉する成分の存在を
考慮する必要がある。しかも上記方法では、ＩＬ−１α
及びＩＬ−１βが同一活性を示すことから、之等を区別
して測定できないという大きな欠点があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、上記
ヒトＩＬ−１αに対する抗体を提供することにある。
ヒトＩＬ−１αに対する抗体を提供することにある。
【０００６】また、本発明の目的はヒトＩＬ−１αをヒ
トＩＬ−１βと区別して測定できる新しい免疫学的測定
手法に利用できるヒトＩＬ−１に対する抗体を提供する
ことにある。
トＩＬ−１βと区別して測定できる新しい免疫学的測定
手法に利用できるヒトＩＬ−１に対する抗体を提供する
ことにある。
【０００７】更に、本発明の目的は、ＩＬ−１の異常産
生を伴う各種疾患において、上記ＩＬ−１の作用の抑制
（中和）に利用できるヒトＩＬ−１に対する抗体を提供
することにある。
生を伴う各種疾患において、上記ＩＬ−１の作用の抑制
（中和）に利用できるヒトＩＬ−１に対する抗体を提供
することにある。
【０００８】本発明の他の目的は、上記抗体の製造技術
を提供することにある。
を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、ヒトＩ
Ｌ−１αに特異反応性を有するモノクローナル抗体、殊
に通産省工業技術院微生物工業研究所にＫＯＣＯ３０１
（微工研条寄第１５５４号、ＦＥＲＭ ＢＰ−１５５
４）なる表示で寄託された抗体産生細胞により産生され
るヒトインターロイキン−１αに対するモノクローナル
抗体及びその製造法が提供される。
Ｌ−１αに特異反応性を有するモノクローナル抗体、殊
に通産省工業技術院微生物工業研究所にＫＯＣＯ３０１
（微工研条寄第１５５４号、ＦＥＲＭ ＢＰ−１５５
４）なる表示で寄託された抗体産生細胞により産生され
るヒトインターロイキン−１αに対するモノクローナル
抗体及びその製造法が提供される。
【００１０】本発明抗体の利用によれば、ヒトＩＬ−１
αをヒトＩＬ−１βとは区別して高感度、高精度でしか
も簡便に測定可能な新しい免疫検定法（イムノアッセイ
法）が提供される。
αをヒトＩＬ−１βとは区別して高感度、高精度でしか
も簡便に測定可能な新しい免疫検定法（イムノアッセイ
法）が提供される。
【００１１】また、本発明抗体はヒトＩＬ−１αに特異
的であるため、その利用によれば、例えばアフィニティ
ークロマトグラフィー等の手法による、それらの特異的
精製手段も提供される。
的であるため、その利用によれば、例えばアフィニティ
ークロマトグラフィー等の手法による、それらの特異的
精製手段も提供される。
【００１２】更に本発明抗体には、ヒトＩＬ−１の生物
活性に対して中和活性を有するタイプの抗体が包含さ
れ、かかる抗体は、ＩＬ−１の異常産生を伴う各種の疾
患、例えば慢性関節リウマチ、甲状腺炎、肝炎、腎炎等
の慢性炎症性疾患、動脈硬化、川崎病等の血管炎、汎発
性血管内凝固症候群、血液ガン等において、その異常産
生に基づく亢進されたＩＬ−１の生物活性を、抑制乃至
中和するために有用であり、かかる各種疾患の治療上極
めて価値ある医薬が提供される。
活性に対して中和活性を有するタイプの抗体が包含さ
れ、かかる抗体は、ＩＬ−１の異常産生を伴う各種の疾
患、例えば慢性関節リウマチ、甲状腺炎、肝炎、腎炎等
の慢性炎症性疾患、動脈硬化、川崎病等の血管炎、汎発
性血管内凝固症候群、血液ガン等において、その異常産
生に基づく亢進されたＩＬ−１の生物活性を、抑制乃至
中和するために有用であり、かかる各種疾患の治療上極
めて価値ある医薬が提供される。
【００１３】本発明抗体は、ヒトＩＬ−１αを免疫抗原
として利用して製造することができる。より具体的に
は、例えば上記免疫抗原で免疫した哺乳動物の形質細胞
（免疫細胞）と哺乳動物の形質細胞腫細胞との融合細胞
（hybridoma ）を作成し、これよりヒトＩＬ−１αを認
識する所望抗体を産生するクローンを選択し、該クロー
ンの培養により製造できる。
として利用して製造することができる。より具体的に
は、例えば上記免疫抗原で免疫した哺乳動物の形質細胞
（免疫細胞）と哺乳動物の形質細胞腫細胞との融合細胞
（hybridoma ）を作成し、これよりヒトＩＬ−１αを認
識する所望抗体を産生するクローンを選択し、該クロー
ンの培養により製造できる。
【００１４】上記方法において用いられる免疫抗原とし
てのヒトＩＬ−１αとしては、特に限定はなく、既に公
知のインビトロで誘導されたヒトＩＬ−１αを含有する
培養上清乃至その精製標品、遺伝子組換え技術に従い製
造されたヒトＩＬ−１α及びその一部のアミノ酸配列を
有する合成ペプチド等のいずれでもよい。
てのヒトＩＬ−１αとしては、特に限定はなく、既に公
知のインビトロで誘導されたヒトＩＬ−１αを含有する
培養上清乃至その精製標品、遺伝子組換え技術に従い製
造されたヒトＩＬ−１α及びその一部のアミノ酸配列を
有する合成ペプチド等のいずれでもよい。
【００１５】また、上記方法において免疫抗原で免疫さ
れる哺乳動物としては、特に制限はないが、細胞融合に
使用する形質細胞腫細胞との適合性を考慮して選択する
のが好ましく、一般にはマウス、ラツト等が有利に用い
られる。
れる哺乳動物としては、特に制限はないが、細胞融合に
使用する形質細胞腫細胞との適合性を考慮して選択する
のが好ましく、一般にはマウス、ラツト等が有利に用い
られる。
【００１６】免疫は一般的方法により、例えば上記免疫
抗原を哺乳動物に静脈内、皮内、皮下、腹腔内注射等に
より投与することにより実施できる。より具体的には、
免疫抗原を、所望により通常のアジュバントと併用し
て、供試動物に２〜１４日毎に数回投与し、総投与量が
約１００〜５００μｇ／マウス程度になるようにするの
が好ましい。免疫抗原としては、上記最終投与の約３日
後に摘出した脾臓細胞を使用するのが好ましい。
抗原を哺乳動物に静脈内、皮内、皮下、腹腔内注射等に
より投与することにより実施できる。より具体的には、
免疫抗原を、所望により通常のアジュバントと併用し
て、供試動物に２〜１４日毎に数回投与し、総投与量が
約１００〜５００μｇ／マウス程度になるようにするの
が好ましい。免疫抗原としては、上記最終投与の約３日
後に摘出した脾臓細胞を使用するのが好ましい。
【００１７】更に、上記免疫細胞と融合される他方の親
細胞としての哺乳動物の形質細胞腫細胞としては、既に
公知の種々のもの、例えばｐ３（ｐ３／×６３−Ａｇ
８）〔Ｎature ，２５６，４９５−４９７（1975）〕、
ｐ３−Ｕ１〔Ｃurrent Ｔopics inＭicrobiology and
Ｉmmunology ，８１，１−７（1978）〕、ＮＳ−１〔Ｅ
ur. Ｊ．Ｉmmunol.,６，５１１−５１９（1976）〕、Ｍ
ＰＣ−１１〔Ｃell ，８，４０５−４１５（1976）〕、
ＳＰ２／０〔Ｎature ，２７６，２６９−２７０（197
8）〕、ＦＯ〔Ｊ．Ｉmmunol. Ｍeth., ３５，１−２１
（1980）〕、×６３．６．５．３．〔Ｊ．Ｉmmunol.,１
２３，１５４８−１５５０（1979）〕Ｓ１９４〔Ｊ．Ｅ
xp. Ｍed.,１４８，３１３−３２３（1978）〕等や、ラ
ツトにおけるＲ２１０〔Ｎature,２７７，１３１−１３
３（1979）〕等の骨髄腫細胞等を使用できる。
細胞としての哺乳動物の形質細胞腫細胞としては、既に
公知の種々のもの、例えばｐ３（ｐ３／×６３−Ａｇ
８）〔Ｎature ，２５６，４９５−４９７（1975）〕、
ｐ３−Ｕ１〔Ｃurrent Ｔopics inＭicrobiology and
Ｉmmunology ，８１，１−７（1978）〕、ＮＳ−１〔Ｅ
ur. Ｊ．Ｉmmunol.,６，５１１−５１９（1976）〕、Ｍ
ＰＣ−１１〔Ｃell ，８，４０５−４１５（1976）〕、
ＳＰ２／０〔Ｎature ，２７６，２６９−２７０（197
8）〕、ＦＯ〔Ｊ．Ｉmmunol. Ｍeth., ３５，１−２１
（1980）〕、×６３．６．５．３．〔Ｊ．Ｉmmunol.,１
２３，１５４８−１５５０（1979）〕Ｓ１９４〔Ｊ．Ｅ
xp. Ｍed.,１４８，３１３−３２３（1978）〕等や、ラ
ツトにおけるＲ２１０〔Ｎature,２７７，１３１−１３
３（1979）〕等の骨髄腫細胞等を使用できる。
【００１８】上記免疫細胞と形質細胞腫細胞との融合反
応は、公知の方法、例えばＭilstein らの方法〔Ｍetho
d in Ｅnzymology,Ｖol．７３，pp３（1981）〕等に準
じて行なうことができる。より具体的には、上記融合反
応は、通常の融合促進剤、例えばポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）、センダイウイルス（ＨＶＪ）等の存在下
に、通常の培地中で実施され、培地には更に融合効率を
高めるためにジメチルスルホキシド等の補助剤を必要に
応じて添加することもできる。免疫細胞と形質細胞腫細
胞との使用比は、通常の方法と変りはなく、例えば形質
細胞腫細胞に対して免疫細胞を約１〜１０倍程度用いる
のが普通である。融合反応時の培地としては、形質細胞
腫細胞の増殖に通常使用される各種のもの、例えばＲＰ
ＭＩ−１６４０培地、ＭＥＭ培地、その他のこの種細胞
培養に一般に利用されるものを例示でき、通常之等培地
は牛胎児血清（ＦＣＳ）等の血清補液を抜いておくのが
よい。融合は上記免疫細胞と形質細胞腫細胞との所定量
を、上記培地内でよく混合し、予め３７℃程度に加温し
たＰＥＧ溶液、例えば平均分子量１０００〜６０００程
度のものを、通常培地に約３０〜６０ｗ／ｖ％の濃度で
加えて混ぜ合せることにより行なわれる。以後、適当な
培地を逐次添加して遠心し、上清を除去する操作を繰返
すことにより所望のハイブリドーマが形成される。
応は、公知の方法、例えばＭilstein らの方法〔Ｍetho
d in Ｅnzymology,Ｖol．７３，pp３（1981）〕等に準
じて行なうことができる。より具体的には、上記融合反
応は、通常の融合促進剤、例えばポリエチレングリコー
ル（ＰＥＧ）、センダイウイルス（ＨＶＪ）等の存在下
に、通常の培地中で実施され、培地には更に融合効率を
高めるためにジメチルスルホキシド等の補助剤を必要に
応じて添加することもできる。免疫細胞と形質細胞腫細
胞との使用比は、通常の方法と変りはなく、例えば形質
細胞腫細胞に対して免疫細胞を約１〜１０倍程度用いる
のが普通である。融合反応時の培地としては、形質細胞
腫細胞の増殖に通常使用される各種のもの、例えばＲＰ
ＭＩ−１６４０培地、ＭＥＭ培地、その他のこの種細胞
培養に一般に利用されるものを例示でき、通常之等培地
は牛胎児血清（ＦＣＳ）等の血清補液を抜いておくのが
よい。融合は上記免疫細胞と形質細胞腫細胞との所定量
を、上記培地内でよく混合し、予め３７℃程度に加温し
たＰＥＧ溶液、例えば平均分子量１０００〜６０００程
度のものを、通常培地に約３０〜６０ｗ／ｖ％の濃度で
加えて混ぜ合せることにより行なわれる。以後、適当な
培地を逐次添加して遠心し、上清を除去する操作を繰返
すことにより所望のハイブリドーマが形成される。
【００１９】得られる所望のハイブリドーマの分離は、
通常の選別用培地、例えばＨＡＴ培地（ヒポキサンチ
ン、アミノプテリン及びチミジンを含む培地）で培養す
ることにより行なわれる。該ＨＡＴ培地での培養は、目
的とするハイブリドーマ以外の細胞（未融合細胞等）が
死滅するのに充分な時間、通常数日〜数週間行なえばよ
い。かくして得られるハイブリドーマは、通常の限界希
釈法により目的とする抗体の検索及び単一クローン化に
供される。
通常の選別用培地、例えばＨＡＴ培地（ヒポキサンチ
ン、アミノプテリン及びチミジンを含む培地）で培養す
ることにより行なわれる。該ＨＡＴ培地での培養は、目
的とするハイブリドーマ以外の細胞（未融合細胞等）が
死滅するのに充分な時間、通常数日〜数週間行なえばよ
い。かくして得られるハイブリドーマは、通常の限界希
釈法により目的とする抗体の検索及び単一クローン化に
供される。
【００２０】目的抗体産生株の検索は、例えばＥＬＩＳ
Ａ法〔Ｅngvall, Ｅ.,Ｍeth.Ｅnzymol.,７０，４１９−
４３９（1980）〕、プラーク法、スポツト法、凝集反応
法、オクテロニー（Ｏuchterlony）法、ラジオイムノア
ツセイ（ＲＩＡ）法等の一般に抗体の検出に用いられて
いる種々の方法〔「ハイブリドーマ法とモノクローナル
抗体」、株式会社Ｒ＆Ｄプラニング発行、第３０−５３
頁、昭和５７年３月５日〕に従い実施することができ、
この検索には前記免疫抗原が利用できる。
Ａ法〔Ｅngvall, Ｅ.,Ｍeth.Ｅnzymol.,７０，４１９−
４３９（1980）〕、プラーク法、スポツト法、凝集反応
法、オクテロニー（Ｏuchterlony）法、ラジオイムノア
ツセイ（ＲＩＡ）法等の一般に抗体の検出に用いられて
いる種々の方法〔「ハイブリドーマ法とモノクローナル
抗体」、株式会社Ｒ＆Ｄプラニング発行、第３０−５３
頁、昭和５７年３月５日〕に従い実施することができ、
この検索には前記免疫抗原が利用できる。
【００２１】かくして得られるヒトＩＬ−１αを認識す
る所望のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ
は、通常の培地で継代培養することができ、また液体窒
素中で長期間保存することができる。
る所望のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ
は、通常の培地で継代培養することができ、また液体窒
素中で長期間保存することができる。
【００２２】上記ハイブリドーマからの所望抗体の採取
は、該ハイブリドーマを、常法に従って培養してその培
養上清として得る方法やハイブリドーマをこれと適合性
のある哺乳動物に投与して増殖させ、その腹水として得
る方法等が採用される。前者の方法は、高純度の抗体を
得るのに適しており、後者の方法は、抗体の大量生産に
適している。
は、該ハイブリドーマを、常法に従って培養してその培
養上清として得る方法やハイブリドーマをこれと適合性
のある哺乳動物に投与して増殖させ、その腹水として得
る方法等が採用される。前者の方法は、高純度の抗体を
得るのに適しており、後者の方法は、抗体の大量生産に
適している。
【００２３】また上記のごとくして得られる抗体は、更
に塩析、ゲル濾過法、アフイニテイクロマトグラフイー
等の通常の手段により精製することができる。
に塩析、ゲル濾過法、アフイニテイクロマトグラフイー
等の通常の手段により精製することができる。
【００２４】かくして得られる本発明のモノクローナル
抗体は、ヒトＩＬ−１αに特異反応性を有するものであ
る。
抗体は、ヒトＩＬ−１αに特異反応性を有するものであ
る。
【００２５】また本発明抗体中には、ヒトＩＬ−１の生
物活性に対して、中和活性を有するタイプの抗体が包含
される。かかる抗体は生物活性のあるヒトＩＬ−１を特
異的に測定するのに好適である。またかかる中和活性を
有するタイプの抗体、殊にＩＬ−１分子上のＩＬ−１受
容体との結合に関与する部位を認識するタイプの抗体
は、前記したＩＬ−１の異常産生を伴う各種疾患への適
用に好適である。
物活性に対して、中和活性を有するタイプの抗体が包含
される。かかる抗体は生物活性のあるヒトＩＬ−１を特
異的に測定するのに好適である。またかかる中和活性を
有するタイプの抗体、殊にＩＬ−１分子上のＩＬ−１受
容体との結合に関与する部位を認識するタイプの抗体
は、前記したＩＬ−１の異常産生を伴う各種疾患への適
用に好適である。
【００２６】更に本発明抗体中には、ヒトＩＬ−１分子
の異なる部位を認識し、抗体相互の立体障害がなく、同
時にヒトＩＬ−１分子に結合することができるタイプの
抗体も包含されており、かかる抗体は、例えばサンドイ
ッチ法等による免疫検定に利用するのに極めて有用であ
る。
の異なる部位を認識し、抗体相互の立体障害がなく、同
時にヒトＩＬ−１分子に結合することができるタイプの
抗体も包含されており、かかる抗体は、例えばサンドイ
ッチ法等による免疫検定に利用するのに極めて有用であ
る。
【００２７】更に加えて、本発明抗体中には、液相系又
は固相系での反応性が特に優れたタイプの抗体が包含さ
れている。それらは液相系及び固相系免疫検定法に適用
するのに極めて好ましい。
は固相系での反応性が特に優れたタイプの抗体が包含さ
れている。それらは液相系及び固相系免疫検定法に適用
するのに極めて好ましい。
【００２８】
【発明の効果】本発明によれば、ヒトＩＬ−１αに特異
的なモノクロ−ナル抗体が提供され、この本発明抗体の
採用によれば、測定感度が極めて高く、特異性に優れ、
従って、例えば臨床サンプル等の極めて低濃度のヒトＩ
Ｌ−１αを含有する検体中の該ヒトＩＬ−１αを正確に
測定可能な免疫検定法による測定手法が提供される。
的なモノクロ−ナル抗体が提供され、この本発明抗体の
採用によれば、測定感度が極めて高く、特異性に優れ、
従って、例えば臨床サンプル等の極めて低濃度のヒトＩ
Ｌ−１αを含有する検体中の該ヒトＩＬ−１αを正確に
測定可能な免疫検定法による測定手法が提供される。
【００２９】
【実施例】以下、本発明をより詳しく説明するため実施
例を挙げるが、本発明は之等に限定されない。
例を挙げるが、本発明は之等に限定されない。
【００３０】実施例１ ヒトＩＬ−１αに対する抗体の
製造 ヒトＩＬ−１α〔Ｎature,３１５，ｐ６４１（１９８
５）〕の１０μｇを、ＢＡＬＢ／Ｃマウスに、完全フロ
インドアジュバントと共に腹腔内投与した。３〜４週間
おきに同量を不完全アジュバントと共に２回追加投与し
て免疫した。３〜４週間後に最終免疫として３０μｇの
ヒトＩＬ−１βの生食溶液を静脈内投与した。最終免疫
の３〜４日後に、常法に準じて、細胞融合を行なった
〔Method inEnzymology, ７３，pp３(1981)等参照〕。
即ち、該細胞融合は、上記免疫された脾細胞と骨髄腫細
胞〔Ｐ３Ｕ１、Current Topics in Microbiology and I
mmunology,８１，１−７（1978）〕とを１０：１の割合
で用い、ポリエチレングリコール（PEG-4000）を用いて
行なった。
製造 ヒトＩＬ−１α〔Ｎature,３１５，ｐ６４１（１９８
５）〕の１０μｇを、ＢＡＬＢ／Ｃマウスに、完全フロ
インドアジュバントと共に腹腔内投与した。３〜４週間
おきに同量を不完全アジュバントと共に２回追加投与し
て免疫した。３〜４週間後に最終免疫として３０μｇの
ヒトＩＬ−１βの生食溶液を静脈内投与した。最終免疫
の３〜４日後に、常法に準じて、細胞融合を行なった
〔Method inEnzymology, ７３，pp３(1981)等参照〕。
即ち、該細胞融合は、上記免疫された脾細胞と骨髄腫細
胞〔Ｐ３Ｕ１、Current Topics in Microbiology and I
mmunology,８１，１−７（1978）〕とを１０：１の割合
で用い、ポリエチレングリコール（PEG-4000）を用いて
行なった。
【００３１】ハイブリドーマを、ＨＡＴ培地で選別後、
その上清を上記ヒトＩＬ−１βをコートした９６穴マイ
クロプレート及びパーオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスグ
ロブリン抗体〔イー．ワイ．ラブ（Ｅ．Ｙ．Ｌab．）社
製〕を用いた酵素免疫測定法により試験して、目的のヒ
トＩＬ−１βに対する抗体産生株を検出した。
その上清を上記ヒトＩＬ−１βをコートした９６穴マイ
クロプレート及びパーオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスグ
ロブリン抗体〔イー．ワイ．ラブ（Ｅ．Ｙ．Ｌab．）社
製〕を用いた酵素免疫測定法により試験して、目的のヒ
トＩＬ−１βに対する抗体産生株を検出した。
【００３２】限界希釈法によりクローニングを繰返し
て、所望のヒトＩＬ−１αに対する抗体産生クローンを
得、これより本発明のヒトＩＬ−１αに対する抗体ＡＮ
ＯＣ３０１を得た。このものの特性を以下の方法に従い
求めた。
て、所望のヒトＩＬ−１αに対する抗体産生クローンを
得、これより本発明のヒトＩＬ−１αに対する抗体ＡＮ
ＯＣ３０１を得た。このものの特性を以下の方法に従い
求めた。
【００３３】 抗体のサブクラス マウス抗体サブクラス検出キット（バイオ・ラッド（Ｂ
io−Ｒad）社製）を用いて決定した。
io−Ｒad）社製）を用いて決定した。
【００３４】抗体産生レベル ハイブリド−マが最大細胞密度になった時の培養上清中
のＩｇＧ量（μｇ／ｍｌ）により示した。
のＩｇＧ量（μｇ／ｍｌ）により示した。
【００３５】 力 価 下記に従い、それぞれ求めた。
【００３６】ＲＩＡ：ヨ−ドゲン法〔Ｂ．Ｂ．Ｒ．Ｃ.,
８０，８４９−８５７（１９７８）〕に従い 125Ｉで標
識したヒトＩＬ−１αの１００μｌ（約１００００cp
m)、ハイブリド−マの培養上清の希釈液１００μｌ並び
に０．０１％ＮａＮ3 、５ｍＭＥＤＴＡ及び０．１％Ｂ
ＳＡを含むＰＢＳの１００μｌを混合して反応（４℃）
させ、これにキャリヤ−蛋白として正常ヤギ血清５０μ
ｌを加え、更に２０％ＰＥＧのＰＢＳ溶液６００μｌを
加えて混合し、氷浴中で２０分放置した後、遠心分離し
て沈渣の放射能をγ−カウンタ−で測定した。 125Ｉ標
識ＩＬ−１αが１５％沈渣にくる培養上清の希釈率をＲ
ＩＡ力価とした。
８０，８４９−８５７（１９７８）〕に従い 125Ｉで標
識したヒトＩＬ−１αの１００μｌ（約１００００cp
m)、ハイブリド−マの培養上清の希釈液１００μｌ並び
に０．０１％ＮａＮ3 、５ｍＭＥＤＴＡ及び０．１％Ｂ
ＳＡを含むＰＢＳの１００μｌを混合して反応（４℃）
させ、これにキャリヤ−蛋白として正常ヤギ血清５０μ
ｌを加え、更に２０％ＰＥＧのＰＢＳ溶液６００μｌを
加えて混合し、氷浴中で２０分放置した後、遠心分離し
て沈渣の放射能をγ−カウンタ−で測定した。 125Ｉ標
識ＩＬ−１αが１５％沈渣にくる培養上清の希釈率をＲ
ＩＡ力価とした。
【００３７】ＥＩＡ：９６穴マイクロプレ−トに２０μ
ｇ／ｍｌに調製したヒトＩＬ−１αを分注（１００μｌ
／ウエル）し、１時間室温で放置した。ＰＢＳで洗浄
後、非特異吸着を防ぐためにＢＳＡでブロックし、ＰＢ
Ｓ−トウィ−ン２０で洗浄した。希釈したハイブリド−
マの培養上清を分注（１００μｌ／ウエル）し、３７℃
で２時間反応させた後、洗浄し、更にパ−オキシダ−ゼ
標識抗マウス免疫グロブリン（カペル社製、Ｘ５００
０）を１００μｌ／ウエル加えて、同様に反応させた。
洗浄後、結合した酵素活性を比色分析し、ＯＤ492 ＝
１．０をとる培養上清の希釈倍率をもつてＥＩＡ力価と
した。
ｇ／ｍｌに調製したヒトＩＬ−１αを分注（１００μｌ
／ウエル）し、１時間室温で放置した。ＰＢＳで洗浄
後、非特異吸着を防ぐためにＢＳＡでブロックし、ＰＢ
Ｓ−トウィ−ン２０で洗浄した。希釈したハイブリド−
マの培養上清を分注（１００μｌ／ウエル）し、３７℃
で２時間反応させた後、洗浄し、更にパ−オキシダ−ゼ
標識抗マウス免疫グロブリン（カペル社製、Ｘ５００
０）を１００μｌ／ウエル加えて、同様に反応させた。
洗浄後、結合した酵素活性を比色分析し、ＯＤ492 ＝
１．０をとる培養上清の希釈倍率をもつてＥＩＡ力価と
した。
【００３８】 交叉反応性 遺伝子組換え技術により製造された被検蛋白（いずれも
ヒト）を用い、ウエスタン・ブロッティング〔Ｗestern
blotting;Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.,ＵＳＡ，７６，４
３５０（１９７９）；Ａnal.Ｂiochem.,１１２，１９５
（１９８１）〕により求めた。
ヒト）を用い、ウエスタン・ブロッティング〔Ｗestern
blotting;Ｐroc.Ｎatl.Ａcad.Ｓci.,ＵＳＡ，７６，４
３５０（１９７９）；Ａnal.Ｂiochem.,１１２，１９５
（１９８１）〕により求めた。
【００３９】 結合定数（kd） スキャチャード・プロット・アナリシス（Ｓcatchard p
lot analysys）により求めた。
lot analysys）により求めた。
【００４０】 中和活性 ＬＡＦ活性〔Ｊ．Ｉmmunol.,１１６，１４６６（１９７
６）〕により求めた。
６）〕により求めた。
【００４１】上記各特性を求めた結果は次の通りであっ
た。
た。
【００４２】サブクラス：ＩｇＧ2a 抗体産生レベル：７５μｇ／ｍｌ 力 価：ＲＩＡ ×３２００、ＥＩＡ ×２０００ 交叉反応性：ＩＬ−２、ＩＬ−１β、ＧＭ−ＣＳＦ及び
ＴＮＦとは交叉反応を示さない。
ＴＮＦとは交叉反応を示さない。
【００４３】結合定数（kd）：３．６×１０-8Ｍ／Ｌ 中和活性：あり。
【００４４】尚、上記実施例で得られたハイブリドーマ
（抗体ＡＮＯＣ３０１産生ハイブリドーマ）は、通産省
工業技術院微生物工業研究所（微工研）に、ＫＯＣＯ３
０１なる表示で、微工研条寄第１５５４号(FERM BP-155
4)として寄託されている。
（抗体ＡＮＯＣ３０１産生ハイブリドーマ）は、通産省
工業技術院微生物工業研究所（微工研）に、ＫＯＣＯ３
０１なる表示で、微工研条寄第１５５４号(FERM BP-155
4)として寄託されている。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ１２Ｎ 15/06 (Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｒ 1:91）
Claims (1)
- 【請求項１】 通産省工業技術院微生物工業研究所にＫ
ＯＣＯ３０１（微工研条寄第１５５４号、ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−１５５４）なる表示で寄託された抗体産生細胞によ
り産生されるヒトインターロイキン−１αに対するモノ
クローナル抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6086564A JPH06339394A (ja) | 1986-11-13 | 1994-04-25 | ヒトインターロイキン−１αに対するモノクローナル抗体 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27099286 | 1986-11-13 | ||
| JP61-270992 | 1986-11-13 | ||
| JP6086564A JPH06339394A (ja) | 1986-11-13 | 1994-04-25 | ヒトインターロイキン−１αに対するモノクローナル抗体 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62283481A Division JPH0720438B2 (ja) | 1986-11-13 | 1987-11-10 | インターロイキン−１に対する抗体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06339394A true JPH06339394A (ja) | 1994-12-13 |
Family
ID=26427673
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6086564A Pending JPH06339394A (ja) | 1986-11-13 | 1994-04-25 | ヒトインターロイキン−１αに対するモノクローナル抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06339394A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009537628A (ja) * | 2006-05-22 | 2009-10-29 | エクスバイオテク インコーポレーティッド | 抗ＩＬ−１α抗体による癌の処置方法 |
-
1994
- 1994-04-25 JP JP6086564A patent/JPH06339394A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JOURNAL OF LEUKOCYTE BIOLOGY=1986 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009537628A (ja) * | 2006-05-22 | 2009-10-29 | エクスバイオテク インコーポレーティッド | 抗ＩＬ−１α抗体による癌の処置方法 |
| JP2013126990A (ja) * | 2006-05-22 | 2013-06-27 | Xbiotech Inc | 抗ＩＬ−１α抗体による癌の処置方法 |
| JP2015166401A (ja) * | 2006-05-22 | 2015-09-24 | エクスバイオテク インコーポレーティッド | 抗ＩＬ−１α抗体による癌の処置方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0267611B1 (en) | Antibody against interleukin-1 | |
| US5360716A (en) | Human tumor necrosis factor αspecific monoclonal antibody and method for detecting human tumor necrosis factor α | |
| EP0366043B1 (en) | Monoclonal antibody | |
| EP0288088B1 (en) | Detection of tumor necrosis factor; monoclonal antibody and kit | |
| US5348858A (en) | Monoclonal antibody specific for human interleukin-1β and method for detection of biologically active human interleukin-1β | |
| JP2598666B2 (ja) | 抗ヒトｂｃｄｆモノクローナル抗体 | |
| JPH04503600A (ja) | 抗インターロイキン―１α及び―１βのモノクローナル抗体、その製法、ならびに前記抗体類の、インターロイキン―１α及び―１βの検出と治療への応用 | |
| US5034316A (en) | In vitro human monoclonal IgG rheumatoid factor autoantibody | |
| JP3018110B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| JPH0597A (ja) | 新規抗ｔｃｆ−ｉｉモノクローナル抗体及びそれを用いるｔｃｆ−ｉｉの測定方法 | |
| JPH0720438B2 (ja) | インターロイキン−１に対する抗体 | |
| JPH06339394A (ja) | ヒトインターロイキン−１αに対するモノクローナル抗体 | |
| EP0345811B1 (en) | Monoclonal abtibodies specific for human fibrinopeptide A | |
| JPH02227095A (ja) | モノクローナル抗体 | |
| JPH0767689A (ja) | 抗ｌｄ７８ポリペプチドモノクローン抗体 | |
| JP4215462B2 (ja) | 非グリコシル化ヘモグロビン、グリコシル化ヘモグロビンに特異的に結合するモノクローナル抗体の製造方法 | |
| JPH0226959B2 (ja) | ||
| JP2900039B2 (ja) | マウスインターロイキン５レセプターに対する抗体 | |
| JPH03139292A (ja) | ヒトインタ―ロイキン―６に対するモノクロ―ナル抗体 | |
| JPH0681599B2 (ja) | インターロイキン―１βに対する抗体 | |
| JP4028925B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| JPH0746996A (ja) | 合成ペプチドを免疫原とするモノクローナル抗体 | |
| JPH0595794A (ja) | ヒトｍ−ｃｓｆ抗体及びヒトｍ−ｃｓｆの測定法 | |
| JPH05215749A (ja) | ヒトインタ−ロイキン−８の免疫学的測定法 | |
| JPH0560359B2 (ja) |