JPH0456258B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、凝集試験用水性溶媒に関するもので
ある。抗原抗体反応や、ある種の動植物菌体、又
はウイルス由来の凝集物質と生体蛋白質や赤血球
との免疫反応に基づく凝集反応を追跡することに
より、それらの一方か又は両者を定量的に測定す
る方法は、赤血球凝集反応（PHA法）、逆受身赤
血球凝集反応（RPHA法）、細菌の凝集反応、又
はラテツクス凝集反応などとして広く臨床検査の
分野で利用されている。例えばPHA法について
説明するば、精製したHBs抗原を凝集試験用担
体としてヒツジ赤血球に感作せしめHBs抗原感
作ヒツジ赤血球を得、このものと血液検体とを混
合させた時に水性溶媒中で凝集反応がみられるか
否かによつて検体中にHBs抗体が存在していた
か否かを判定できる。 また凝集反応がみられた場合は、その検体を更
に段階的に希釈して凝集反応が観察できなくなる
までの希釈倍数を求めることによりその検体中の
HBs抗体を定量的に測定することができる。 またRPHA法では、精製したHBs抗体を凝集
試験用担体として哺乳動物の赤血球に感作して
HBs抗体感作赤血球を製し、このものと検体と
を混合した時に水性溶媒中で凝集反応がみられる
か否かによつて、検体中にHBs抗原が含まれて
いるか否かを検知することができる。 更にある種のウイルスと鳥類の赤血球とはウイ
ルスの有する凝集素の作用により赤血球を水性溶
媒中で凝集する。この水性溶媒中での凝集反応の
有無、強弱によつてウイルスの濃度を定量的に測
定することができる。これら多くの水性媒体中で
の凝集反応を利用した分析方法は、簡便でかつ測
定感度も高いので各種抗原や抗体の検査に広く利
用されていることは周知の通りである。 しかし、これら水性溶媒中での凝集反応は、感
作する抗原あるいは抗体の種類によつては、凝集
用担体に十分感作されているにもかかわらず、明
瞭な凝集反応がみられなかつたり、定量試験にお
いては低い希釈倍数（対応する抗原あるいは抗体
の高濃度のところ）で却つて凝集反応が弱くなり
凝集反応がみられないと誤判する（プロゾーン現
象）こともある。 水性溶媒中での凝集反応をより明瞭化したり、
プロゾーン現象を解決する方法としては、測定に
用いる水性溶媒のイオン強度を下げる方法が知ら
れている。しかし、尚十分でなく、更に優れた方
法の出現が待望されている。 本発明の目的は、弱い凝集反応を増強せしめ凝
集反応をより明瞭に判別せしめると共にプロゾー
ン現象を解決し、極めて検出感度の優れた凝集試
験用水性溶媒を提供せんとするにある。 発明者等は、永年この凝集反応における弱い凝
集反応およびプロゾーン現象を改良するため測定
方法の改良研究を続け、特定分子量のデキストラ
ンの特定量を測定系に存在させることにより、弱
い凝集反応およびプロゾーン現象が顕著に改善さ
れ、測定感度が良くなることを見出し、本発明を
完成させた。 即ち本発明は、平均分子量30000〜100000のデ
キストランを、１重量％〜３重量％程度の濃度に
おいて含むことを特徴とする免疫反応に基づく凝
集試験用水性溶媒を提供するものである。 この水性溶媒を各種凝集反応試験用試薬の調整
に用いることにより上記測定感度の改善を達成す
ることができる。 本発明で使用されるデキストランの平均分子量
は30000〜100000である。その添加量は、１〜３
重量％程度である。当該添加量の下限は検出感度
及びプロゾーン現象抑制効果の限界値であり、上
限は陰性値の増大による検出感度の低下の限界値
である。 水性溶媒としては、従来既知のあらゆる凝集試
験用水性溶媒が利用でき、例えば水、生理食塩
水、各種緩衝液（リン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝
液、ホウ酸緩衝液、グリシン緩衝液）、アルブミ
ン溶液、正常ヒト及び動物血清溶液、合成高分子
物質の溶液、界面活性剤含有水溶液、およびこれ
らの組み合わせからなる溶液が例示される。本発
明水性溶媒のPHは、約6.5〜9.0が好ましく、その
調整は緩衝液でおこなわれることが好ましい。本
発明水性溶媒中に含まれる塩の濃度は、比較的低
濃度であることが好ましく、より好ましくは、体
液と等張な溶液である。 本発明からなる水性溶媒において利用される凝
集試験用担体としては、自体公知のものを用いれ
ばよく、たとえばラテツクス樹脂類、ゴム類、無
機吸着剤及び特に好ましい担体として動物（例え
ばヒツジ、モルモツト、Ｏ型の人、ニワトリな
ど）の赤血球をホルマリン、グルタルアルデヒド
などで固定したものを用いてもよい。このような
担体は役20μ以下、特に５〜15μ程度の粒状のも
のを使用するのが有利である。このような粒状担
体に抗体又は抗原を感作させる処理は自体公知の
方法に準じて行うことができる。 かくして提供される本発明からなる水性溶媒を
使用した凝集試験における効果を証明するための
実験を行つた。 HBe抗原陽性の人血清を硫安分画とアフイニ
イテイークロマトグラフイー法とで処理し精製
HBe抗原を得、この精製HBe抗原をグルタルア
ルデヒドにより固定されたヒツジ赤血球に感作し
てHBe抗原感作ヒツジ赤血球を得た。 他方、本発明からなる水性溶媒として０。1M
リン酸緩衝液（PH7.5）に正常動物血清およびヒ
ツジ赤血球膜成分とを加えたPHA法用の既知溶
媒を調整した。この溶媒にデキストラン（平均分
子量50000〜70000）を第１表に示した量にて加え
たものを用意し、コントロールとして無添加のも
のを用意した。オクタロニー法（二元免疫拡散
法）で測定しHBe抗体陽性であつたクエン酸塩
加人血漿の３検体（表中１，２及び３）を、
PHA法に従いこの３種類の溶媒を用いてマイク
ロプレート上でそれぞれ２倍希釈を行い、この希
釈列へ上記で得たHBe抗原感作ヒツジ赤血球を
混合した。別にHBe抗原が陰性の検体(4)につき
同様に処理、試験した。なお混合液量は検体希釈
液25μ、HBe抗体感作ヒツジ赤血球25μであ
り、室温で２時間後の凝集の強さ（凝集度）を
４，３，２，１の評価とし、非凝集を評価０とし
て表現した時第１表の成績を得た。

【表】 第１表から明らかなように、デキストランを１
重量％添加することにより、凝集度１〜２程度の
弱い凝集が凝集度３〜４の強い凝集となつてお
り、血漿検体No.１および３で認められるプロゾー
ン現象もほぼ完全に改善されている。さらに感度
も著しく上昇している。また陰性検体では、いず
れの添加量の場合も無添加と同じ１：４以下であ
り、陰性検体への影響はないことが判る。 かくして本発明からなる凝集試験用水性溶媒
は、著しく凝集反応を増強せしめると共に感度を
上昇させるものであつて、すぐれた凝集試験法の
提供を可能とするものである。 以下に本発明を実施例によつて具体的に示す。 実施例 １ デキストラン（平均分子量50000〜70000）2.0g
および20w／ｖ％ウシアルブミン溶液10mlに対し
て、PH7.6、0.1Mリン酸緩衝液を加えて200mlに
する。本溶媒を使つて上記と同様の実験を行つた
がプロゾーン現象はなく、検出感度は良好であつ
た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 平均分子量30000〜100000程度のデキストラ
   ンを、１重量％〜３重量％程度の濃度において含
   むことを特徴とする免疫反応に基づく凝集試験用
   水性溶媒。