【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
〔イ〕 発明の目的
本発明は、動物（家畜類、家禽類）の血液か
ら、血清蛋白部分（上清液）と、血餅（沈澱液）
に区分された、その血餅部分、すなわち、赤血球
を主体となすヘモグロビンを出発原料となし、こ
れよりヘムを主体となす血色素部分と、グロビン
を主体となす蛋白部分に分解（分離）し、そのグ
ロビン蛋白部分を用いることに特定した、新規な
化粧料及び外用医薬品に関するものである。
「産業上の利用分野」
本発明は、グロビンの新規な応用に当り、これ
を化粧料、又は、外用塗擦料として用いることを
可能となしたことにより、化粧品類、及び、外用
医薬品（医薬部外品を含む）分野をはじめ、畜産
業界、特に、ハム、ソーセージ等々の食肉加工に
おいて、その副産物として大量に放出される血餅
や、又は、血粉の有効利用を拡大することが出来
る。
「従来の技術」
これまで、化粧品類にグロビンを応用した例は
見あたらない。
本発明者らは、動物由来の血色素を主体に、す
でに、ヘモグロビンから分離したヘムをもとに、
その特有のポルフイリン構造に着目して、毛髪料
等への開発に成功してきた（特公昭56−4532号、
特公昭59−14003号）。
本発明は、さらに、その一環として、ヘモグロ
ビンを分解し、一方の蛋白質であるグロビンの有
効利用をはかるために研究を続けた結果、完成し
たものである。
これまでに、動物由来の蛋白を化粧料等に応用
された例は、ゼラチンをはじめ、コラーゲン、エ
ラスチン、あるいはケラチンなどの加水分解物が
知られている。
又、血液中の血清由来の蛋白であるアルブミン
やグロブリンなどは、すでに医薬品などに用いら
れている。
アルブミン、あるいはプラスマ（血漿）など
は、化粧品分野においても利用されているが、こ
れらは、非常にコスト高であり、極く限られた製
品にしか使用されてきたにすぎない。
「発明が解決しようとする問題点」
ヘモグロビンを構成するヘム等の血色素成分の
利用は、上記した公報中に示すごとくであるが、
その際、分解（分離）されたグロビンの方につい
ては、現在までのところ、一部は食料源としての
応用が食肉加工メーカーを中心に進められてきて
いるものの、化粧品類に用いたとする例は見あた
らない。
そこで、本発明者らは、グロビン蛋白の化粧料
への応用にあたり、その有する物性等々の検索と
共に、安全性、さらに、これがもたらす効果（作
用）等に関し、研究を続けてきた結果、ここにそ
の優れた特徴を見出すと共に、本発明を完成する
ことができたのである。
以下に、本発明に係るグロビン蛋白の化粧料や
外用医薬品への応用について、本発明者らが実施
した研究の成果をもとに、その利用上の特長（特
性）及び作用（効果）について示す。
〔ロ〕 発明の構成
本発明は、グロビン蛋白を化粧料や外用医薬品
に用いることにある。
「問題点を解決するための手段」
本発明は、動物の血液を構成する血餅部分を、
酵素、あるいは、酸、アルカリなどを使用して、
ヘムを主体とする、いわゆる血色素部分と、グロ
ビンを主体とする蛋白部分に分解（分離）させ、
その蛋白部分を、化粧品類や外用医薬品類の処方
中に用いることにある。
血液をもとに、これを血清と血餅に分離したの
ち、ヘモグロビンを得て、更に、このヘモグロビ
ンより血色素であるヘムと、グロビン（蛋白質）
とに分解（分離）する方法は公知である。
したがつて、本発明の目的は、如何にグロビン
を化粧品類に利用するかにかかつていた。
そのためには、様々の公知なグロビンの製法を
もとに、それぞれで得られる物質の特性を確認す
ることから研究を開始した。
まず、そのステツプの第１番目は、グロビン蛋
白の製造法の検討から入つた。すなわち、製法の
違いによつて、物性に差異が生じないか、否か、
この点を確認するために、本発明者らは、公知な
方法及びそれに改良を加えた方法などにより、各
種の条件下で目的物の製造を行つた。
以下に示す方法は、従来法をもとに、２〜３の
改良を加え、本発明者らが実施例したその代表的
な例である。
「製造法」
(1) 酵素による加水分解法
市販のヘモグロビンパウダー（80ｇ）を、PH
8.0〜9.0に調整した水（1L）に分散させ、温度を
55℃付近に保ち、撹拌下で蛋白分解酵素（例え
ば、アクチナーゼAS：科研製薬製25万単位を
0.32ｇ）を加え、３時間程度の酵素分解を行つた
後、系のPHを4.0付近に調整し、更に、温度を80
℃付近まで昇温し、30分間撹拌して酵素を失活さ
せる。
その後、遠心分離などの方法を用い、上清液を
分取する。ここで不溶の血色素部分、すなわち、
ヘムは除去される。
そして、上清液に活性炭（10ｇ程度）を加え、
脱色処理を行い、濾過などの処理を加え、活性炭
を除去し、濾液をスプレードライヤー、又は、凍
結乾燥などの方法を用いて乾燥し、白色粉末を得
る。その収量は、約60ｇ前後である。
尚、上記工程中において用いたプロテアーゼは
アクチナーゼASに限定する必要はなく、公知な
蛋白分解酵素の何れを用いても良いが、その際、
用いる酵素によつて、反応時間、及び、温度につ
いては、それぞれ対応した条件が必要である。
又、用いる酵素として、アルカラーゼを使用し
た場合は、特にヘムの切断に優れており、操作性
も良い。
(2) 酸による加水分解法
ヘモグロビンパウダー（50ｇ）を、1N−塩酸
溶液（1L）に分散させ、密閉容器中で、温度50
℃にて48時間撹拌し分解する。
その後、苛性ソーダを用いて、系のPHを５付近
に移行させ遠心分離機を用いて不溶物を除き、上
清液を分取し、これに１％量の活性炭を加え、50
℃付近の温度で30分間処理を行い、濾過によつて
活性炭を取り除き、濾液をスプレードライヤー又
は、凍結乾燥を行い、白色の粉末を25〜30ｇを得
た。
(3) アルカリによる加水分解法
ヘモグロビンパウダー（50ｇ）を、苛性ソーダ
によつてPH10に調整した溶液（1L）中に溶解し、
温度50℃にて５時間程度分解処理を行い、次いで
塩酸を用いてPH4.0まで移行させた後、遠心分離
機を用いて不溶物を除き、上清液に対して１％量
の活性炭を加え、温度50℃付近で30分程度処理を
行つた後、濾過によつて活性炭を除去する。以
降、濾液は凍結乾燥又はスプレードライヤー法に
より、白色の粉末を約25ｇ得ることが出来る。
この他、本発明で用いる目的物質：グロビン蛋
白の製造法としては、例えば、次表（第１表）に
示すごとくの公知刊行物にも記載されており、そ
の何れの方法を参考としても得ることが出来る。
尚、上記の製造法(1)〜(3)では、ヘモグロビンを
スタート原料として示したが、血液から上清を除
去して、これをもとに製造することは容易であ
る。
[B] Purpose of the invention The present invention aims to extract serum protein portions (supernatant liquid) and blood clots (precipitate liquid) from the blood of animals (livestock and poultry).
The starting material is the hemoglobin, which is mainly composed of red blood cells, and is decomposed (separated) into the hemoglobin, which is mainly composed of heme, and the protein part, which is mainly composed of globin. The present invention relates to novel cosmetics and external medicines that specifically use globin protein moieties. "Industrial Application Field" The present invention is a new application of globin, and by making it possible to use it as a cosmetic or external lubricant, the present invention is applicable to cosmetics and external pharmaceuticals (Pharmaceutical Department). It is possible to expand the effective use of blood clots and blood meal, which are released in large quantities as by-products in the livestock industry, especially in the meat processing of hams, sausages, etc. ``Conventional technology'' Until now, there have been no examples of globin being applied to cosmetics. The present inventors have already developed a method based on heme separated from hemoglobin, mainly animal-derived hemoglobin.
Focusing on its unique porphyrin structure, we have succeeded in developing it into hair products, etc. (Special Publication No. 56-4532,
Special Publication No. 59-14003). The present invention was completed as a result of continued research into decomposing hemoglobin and effectively utilizing globin, one of the proteins. So far, examples of animal-derived proteins applied to cosmetics and the like include hydrolysates of gelatin, collagen, elastin, and keratin. In addition, proteins such as albumin and globulin derived from serum in blood are already used in pharmaceuticals and the like. Albumin, plasma, and the like are also used in the cosmetic field, but these are extremely expensive and have only been used in extremely limited products. "Problems to be Solved by the Invention" The use of hemoglobin components such as heme, which constitutes hemoglobin, is as shown in the above-mentioned publication.
At this time, some of the decomposed (separated) globin has been used as a food source, mainly by meat processing manufacturers, but there are no examples of it being used in cosmetics. I can't find it. Therefore, in applying globin protein to cosmetics, the present inventors have continued to research its physical properties, as well as its safety, and the effects (actions) it brings. By discovering these excellent features, we were able to complete the present invention. Below, the features (characteristics) and actions (effects) of the application of the globin protein according to the present invention to cosmetics and external medicines will be described based on the results of research conducted by the present inventors. . [B] Structure of the Invention The present invention is to use globin protein in cosmetics and external medicines. "Means for Solving the Problems" The present invention provides a method for removing blood clots constituting animal blood.
using enzymes, acids, alkalis, etc.
It is broken down (separated) into the so-called hemoglobin part, which is mainly composed of heme, and the protein part, which is mainly composed of globin.
The protein part is used in the formulation of cosmetics and external medicines. After separating blood into serum and blood clots, hemoglobin is obtained, and from this hemoglobin, heme, a blood pigment, and globin (protein) are obtained.
Methods for decomposing (separating) into these are known. Therefore, the object of the present invention was how to utilize globin in cosmetics. To this end, we began our research by confirming the characteristics of the substances obtained using various known globin production methods. The first step was to examine a method for producing globin protein. In other words, whether or not there are differences in physical properties due to differences in manufacturing methods.
In order to confirm this point, the present inventors manufactured the target product under various conditions using known methods and methods with improvements thereto. The method shown below is a typical example carried out by the present inventors based on a conventional method with a few improvements. “Manufacturing method” (1) Enzymatic hydrolysis method Commercially available hemoglobin powder (80g) is
Disperse in water (1L) adjusted to 8.0-9.0 and adjust the temperature.
Maintain at around 55℃ and add proteolytic enzyme (e.g. actinase AS: 250,000 units manufactured by Kaken Pharmaceutical Co., Ltd.) under stirring.
After adding 0.32g) and performing enzymatic decomposition for about 3 hours, the pH of the system was adjusted to around 4.0, and the temperature was further increased to 80℃.
Raise the temperature to around ℃ and stir for 30 minutes to inactivate the enzyme. Thereafter, the supernatant liquid is fractionated using a method such as centrifugation. Here, the insoluble hemoglobin part, i.e.
Heme is removed. Then, add activated carbon (about 10g) to the supernatant liquid,
Decolorization treatment is carried out, treatment such as filtration is added to remove activated carbon, and the filtrate is dried using a method such as a spray dryer or freeze drying to obtain a white powder. The yield is around 60g. Note that the protease used in the above step is not limited to actinase AS, and any known protease may be used, but in that case,
Depending on the enzyme used, corresponding conditions for reaction time and temperature are required. Furthermore, when alcalase is used as the enzyme, it is particularly excellent in cleaving heme and has good operability. (2) Hydrolysis method using acid Disperse hemoglobin powder (50g) in 1N hydrochloric acid solution (1L) and store in a closed container at a temperature of 50°C.
Stir and decompose at ℃ for 48 hours. After that, use caustic soda to shift the pH of the system to around 5, remove insoluble matter using a centrifuge, separate the supernatant liquid, add 1% amount of activated carbon to it, and
Treatment was carried out for 30 minutes at a temperature around .degree. C., activated carbon was removed by filtration, and the filtrate was subjected to spray drying or freeze drying to obtain 25 to 30 g of white powder. (3) Hydrolysis method with alkali Dissolve hemoglobin powder (50g) in a solution (1L) adjusted to pH 10 with caustic soda,
Decomposition treatment was performed at a temperature of 50°C for about 5 hours, then the pH was brought to 4.0 using hydrochloric acid, and insoluble matter was removed using a centrifuge, and activated carbon was added in an amount of 1% of the supernatant. In addition, after processing for about 30 minutes at a temperature of around 50°C, activated carbon is removed by filtration. Thereafter, the filtrate can be freeze-dried or spray-dried to obtain about 25 g of white powder. In addition, methods for producing the target substance used in the present invention: globin protein are also described in known publications as shown in the following table (Table 1), and any of these methods can be used as a reference. I can do it. In addition, although hemoglobin is shown as a starting material in the above production methods (1) to (3), it is easy to remove the supernatant from blood and produce based on this.
【表】
さて、本発明に用いるグロビン蛋白は、後記の
特性又は作用からみて、その製造法については、
基本的に、何れかの加水分解によつて得られたも
のでも良く、したがつて、用いるグロビン蛋白
を、その製造法から特定する必要はなく、グロビ
ン蛋白であれば、何れを用いることも可能であつ
た。これに関して、さらに具体的に示す。
まず、以下に、２〜３の実施例（処方）を示し
てみる。尚、ここに示す処方は、これらの形態又
は処方中における他の原料素材にこだわる必要は
なく、周知の外用剤又は化粧品に用いられる原料
素材と任意に組み合わせて用いることができる。
したがつて、特に処方上から、特別の条件を限
定する必要もない。
「実施例」
(1) 化粧水
グリセリン ……5.0％
クエン酸 ……0.8％
本物質…（粉末換算にして） ……0.1〜10.0％
グロビン蛋白を用いるが、特にその製造法は限
定するものではない。また、その形態は、粉末で
ある必要はなく、水溶液となしたものでも良い）
アラントイン ……0.1％
紫外線吸収剤又はオリザノール ……0.3％
色 素 ……適量
エタノール（95％） ……10.0％
POE（15モル）オレイルアルコール
……1.0〜2.0％
香 料 ……適量
防腐剤 ……0.1％
精製水をもつて全量100とする
(2) Ｏ／Ｗ型クリーム
グリセリン又はプロピレングリコール
……0.5％
PEG（400） ……2.0％
グリチルレチンモノアンモニウム塩 ……0.1％
アラントイン ……0.1％
本物質…（粉末換算にして） ……0.1〜5.0％
（製造法１で得られた粉末又は、その工程中で
得られた乾燥前の液体を濃縮した液、又は、製造
例１〜３に準拠して得られた粉末を、水とプロピ
レングリコール或はブチレングリコールの混液中
に溶解させたリキツドタイプの溶液を用いる）
セタノール ……4.0％
スクワラン ……5.0％
ステアリン酸 ……1.0％
ビーズワツクス ……1.0％
ワセリン ……1.0％
POE（25モル）セチルアルコールエーテル
……2.0％
グリセリンモノステアレート ……1.5％
防腐剤、香料 ……適量
イオン交換水をもつて、全量100とする
(3) クリームシヤンプー
エチレングリコールモノステアレート
……2.0％
ヤシ油脂肪酸モノエタノールアミド ……5.0％
防腐剤、色素、香料 ……適量
ラウリル硫酸トリエタノールアミン ……20.0％
本物質…（粉末換算にして） ……0.1〜3.0％
（グロビン蛋白を用いるが、特にその製造法は
限定するものではない。また、その形態は、粉末
である必要はなく、水溶液となしたものでも良
い）
精製水をもつて全量100とする
(4) スキンローシヨン
カカオ脂 ……2.0％
シア脂（セデルマ社製） ……3.0％
ステアリン酸 ……4.0％
防腐剤（パラベン類混合） ……0.3％
水酸化カリウム ……0.4％
グリセリン ……7.0％
本物質…（粉末換算にして） ……2.0％
（グロビン蛋白を用いるが、特にその製造法は
限定するものではない。また、その形態は、粉末
である必要はなく、水溶液となしたものでも良
い）
精製水をもつて全量100とする
尚、本物質はあらかじめ精製水中に溶解してお
き、油相中に添加する。
(5) エモリエントクリーム
ビーズワツクス ……6.0％
セタノール ……5.0％
還元ラノリン ……8.0％
シア脂（セデルマ社製） ……37.5％
脂肪酸グリセリン ……4.0％
モノステアリン酸グリセリン ……2.0％
POE（20モル）ソルビタンモノラウリン酸エス
テル ……2.0％
プロピレングリコール ……5.0％
香料、防腐剤、酸化防止剤 ……適量
本物質…（粉末換算にして） ……0.5〜3.0％
（グロビン蛋白を用いるが、特にその製造法は
限定するものではない。また、その形態は、粉末
である必要はなく、水溶液となしたものでも良
い）
精製水をもつて全量100とする
(6) ヘアーリンス
POE（２モル）オレイルエーテル ……7.0％
POE（10モル）ラノリン ……1.0％
ラウロイルサルコシンナトリウム（30％液）
……2.0％
防腐剤（パラベン類複合） ……0.2％
本物質（10〜30％を含有する水溶液）
……5.0〜10.0％
精製水をもつて全量100とする
次に、本発明の目的物質であるグロビン蛋白に
関する物性及び作用等について示す。
「物 性」
(1) アミノ酸組成比について
本物質のアミノ酸組成比について、例えば、製
造法１によつて得られたものをさらに、酸を用い
て加水分解処理をし分析してみると、（第２表）
に示す如くの結果が得られた。
その組成率は、公知の如何なる方法によつて得
られたものとも、ほぼ類似しており、又、牛、豚
など由来の家畜の種属差は、特に認められないよ
うに思われた。
さらに、アミノ酸組成比率からみると、血清由
来のアルブミン蛋白の加水分解物の組成比とも類
似している。[Table] Now, in view of the properties and effects of the globin protein used in the present invention, the method for producing it is as follows:
Basically, it may be obtained by any kind of hydrolysis; therefore, there is no need to specify the globin protein to be used based on its production method, and any globin protein can be used. It was hot. This will be explained in more detail. First, two to three examples (prescriptions) will be shown below. Note that the formulation shown here does not need to be particular about these forms or other raw materials in the formulation, and can be used in arbitrary combination with raw materials used for well-known external preparations or cosmetics. Therefore, there is no need to limit any special conditions especially from the viewpoint of prescription. "Example" (1) Glycerin lotion...5.0% Citric acid...0.8% This substance...(in terms of powder)...0.1-10.0% Globin protein is used, but there are no particular limitations on its manufacturing method. do not have. Also, its form does not need to be in powder form, and may be in the form of an aqueous solution) Allantoin...0.1% Ultraviolet absorber or oryzanol...0.3% Pigment...Appropriate amount of ethanol (95%)...10.0% POE (15 mol) oleyl alcohol
...1.0-2.0% Fragrance ...Appropriate amount of preservative ...0.1% Make the total volume 100 with purified water (2) O/W type cream glycerin or propylene glycol
...0.5% PEG (400) ...2.0% Glycyrrhetin monoammonium salt ...0.1% Allantoin ...0.1% This substance... (in terms of powder) ...0.1-5.0% (Powder obtained by manufacturing method 1 or A liquid type in which a concentrated liquid obtained in the process before drying or a powder obtained according to Production Examples 1 to 3 is dissolved in a mixture of water and propylene glycol or butylene glycol. ) Setanol...4.0% Squalane...5.0% Stearic acid...1.0% Bees wax...1.0% Vaseline...1.0% POE (25 mol) Cetyl alcohol ether
...2.0% Glycerin monostearate ...1.5% Preservatives, fragrances ...Appropriate amount Add ion exchange water to make total volume 100 (3) Cream shampoo ethylene glycol monostearate
...2.0% Coconut oil fatty acid monoethanolamide ...5.0% Preservatives, pigments, fragrances ...Appropriate amount of triethanolamine lauryl sulfate ...20.0% This substance... (in terms of powder) ...0.1-3.0% (Globin protein (However, there are no particular restrictions on the manufacturing method. Also, the form does not need to be in powder form, but may be in the form of an aqueous solution.) Make the total volume 100 with purified water. (4) Skin lotion Cocoa butter...2.0% Shea butter (manufactured by Cederma)...3.0% Stearic acid...4.0% Preservatives (mixed with parabens)...0.3% Potassium hydroxide...0.4% Glycerin...7.0% This substance... (In terms of powder) ...2.0% (Globin protein is used, but the manufacturing method is not particularly limited. Also, its form does not need to be powder, and may be in the form of an aqueous solution.) Purification Add water to make the total volume 100. This substance is dissolved in purified water in advance and added to the oil phase. (5) Emollient cream bead wax...6.0% Setanol...5.0% Reduced lanolin...8.0% Shea butter (manufactured by Cederma)...37.5% Fatty acid glycerin...4.0% Glycerin monostearate...2.0% POE ( 20 mol) Sorbitan monolaurate...2.0% Propylene glycol...5.0% Flavoring, preservatives, antioxidants...Appropriate amount of this substance...(in terms of powder)...0.5-3.0% (Globin protein is used, but The manufacturing method is not particularly limited. Also, its form does not need to be powder, but may be an aqueous solution.) Add purified water to make the total amount 100. (6) Hair rinse POE (2 mol) ) Oleyl ether...7.0% POE (10 mol) Lanolin...1.0% Sodium lauroyl sarcosine (30% liquid)
...2.0% Preservative (paraben compound) ...0.2% This substance (aqueous solution containing 10-30%)
...5.0-10.0% The total amount is made up to 100% with purified water.Next, the physical properties and effects of globin protein, which is the target substance of the present invention, will be described. "Physical Properties" (1) Amino Acid Composition Ratio Regarding the amino acid composition ratio of this substance, for example, when the one obtained by production method 1 is further hydrolyzed using acid and analyzed, ( Table 2)
The results shown are obtained. The composition ratio was almost similar to that obtained by any known method, and no particular differences between species of domestic animals such as cattle and pigs were observed. Furthermore, in terms of amino acid composition ratio, it is similar to the composition ratio of serum-derived albumin protein hydrolyzate.
【表】
(2) 粘度特性について
皮膚外用剤に用いられる、従来の公知な臓器由
来の成分として、その粘度の高いものは、皮膚の
乾燥防止を目的とし、あるいは、その粘度を利用
して、湖料又は医薬、食料などの加工における結
着剤（バインダー）として応用されてきている。
例えば、卵アルブミン、牛血清アルブミン、あ
るいは、ゼラチン等はその有する高粘度、吸水性
効果を有し、保湿剤として化粧品等々に利用され
てきている。
ところが、グロビン蛋白は、アルブミンやゼラ
チンが有するような粘性はなく、さらつとした感
触を有し、その溶解液についても全く湖料的特性
はない。
(3) 分子量分布特性
GPC（ゲルバミエーシヨンクロマトグラフイ
ー）により、その分子量分布についてみると、第
１図に示す如くのチヤートが得られた。これは、
製造法１に準拠して得られたもののパターンを示
すが、製造法の違いは、そのチヤート上にそれぞ
れの異なつたピークを示す。
しかし、本発明が目的となす化粧品類等々の外
用剤への処方中に添加すること自体には、特別の
影響はなく、又、ピークによつて、その粘度が特
別に増加又は低下するといつたことも少ない。
(3) 紫外部吸収特性について
製造法１で得られた、グロビン蛋白の水溶液を
もとに、その紫外部吸収を測定すると第２図に示
す如くであつた。
すなわち、280nm付近に高いピークを有する特
徴がある。又、他の製造法によつて得られたグロ
ビン蛋白についても、その吸収ピークは類似して
おり、特別に他の波長域に特有の吸収を示すこと
はなかつた。
〔ハ〕 発明の効果
本発明の特有の効果は、前項で示した物性（特
性）からして、比較的に高分子な水溶性蛋白質で
構成されている。しかし、粘性はない。
又、皮膚に対する安全性は、例えば、製造法１
によつて得られた粉末をもとに、マウス、家兎に
塗布（貼付）試験を実施したが、特に異常は認め
られず、又、ヒト（健康な成人男女20名）による
パツチテストを実施し、その最終的な判定につい
ても確認したが、発疹、紅斑等々、本物質による
と思われる異状は認められなかつた。
「作用（効果）」
(1) 保湿作用
第３図は、製造法１に準拠した方法により得ら
れた、グロビン蛋白の５％を含有する水溶液を用
い、その保湿性能について測定した成績結果を示
すものである。
その結果からわかるように、最も化粧品等に繁
用される公知な保湿剤であるプロピレングリコー
ルの等量含有水溶液に比べ、明らかに保湿性能は
高い。しかも、粘性はプロピレングリコールより
も少ないため、さつぱりとした肌ざわりを与え、
したがつて、べとつき感も少なく、化粧水などの
液体製品に対する保湿剤としては、特に望ましい
ものであることがわかつた。
(2) チロジナーゼ活性抑制作用
チロジナーゼ活性抑制作用を示す成分は、化粧
品類など皮膚外用剤への利用に当たつて、その優
劣の評価における一つの手段となる。
つまり、皮膚の保護を目的となすとき、保湿作
用を有するものを、まず第一条件とすれば、その
次に望まれるものは、色素沈着を防御してくれる
ような物質となる。そして、その効果を期待する
ものとして、酵素チロジナーゼの活性を抑制して
くれるような物質は、皮膚の色素沈着を防ぐのに
役立つものとされている。
ところが、保湿作用と共にチロジナーゼ活性抑
制作用を有する物質は少なく、従来、その一方を
目的とする物質はあつても、しかし、皮膚に対し
て安全性の高い成分となれば、極めて少ない。
これまでに、保湿作用及びチロジナーゼ活性抑
制作用を有するものは、動物性の成分としては、
プラセンターエキス、シルクプロテイン又はその
加水分解物（エキス）、エラスチン又はコラーゲ
ンなどの加水分解物（エキス）などが知られてい
る。一方、植物性の成分では、大豆由来（納豆）
エキス、クズ根エキス、アロエ水性エキス、ある
いは、ヨクイニン（ハトムギ）の水性エキスなど
が知られている。
しかし、次の試験で示すＡ法及びＢ法により試
験するとき、両方のチロジナーゼ活性に対して、
共に抑制するような物質となると、さらに少なく
なる。また、少なくとも、両法において、その効
果を強力に示すものはあつても、皮膚の安全性試
験の評価は不適となるか、あるいは、使用上又は
配合上に限定条件（例えば、特定された抽出法、
製造法、安定化法など）を強いられる場合がでて
くる。
その代表的な物質を上げれば、例えば、ビタミ
ンＣなどがそうである。
これらの欠点をカバーし、チロジナーゼ活性抑
制作用（Ａ法〜Ｂ法）をパスしたもので、しかも
保湿作用を有するものとなると、現在、臨床治験
的にも確認されたものとしては、プラセンターエ
キス（プラセナンドＶ）が知られているが、他に
は極めて少ないのが現状であつた。
本発明者らは、グロビン蛋白をもとに、その第
１関門である、インビトロにおける作用確認にあ
たつた。
その結果は、（第３表）に示す如くであつた。
すなわち、Ａ法及びＢ法の両試験に対して、どち
らも強い抑制作用を有していることがわかる。
今後の臨床試験結果を待たなければ、これが、
色素沈着症に対して有効であるかどうかは、未だ
不明であるも、しかし、少なくとも、第２図で示
される紫外線吸収能とともに、一つの考察を加え
るならば、化粧品類などの外用剤として用いると
き、日光からの紫外線によつて形成される紅斑を
防ぎ、シミの発生を防止するために役立つもので
あると推定できる。
本発明者らは、これまでに数多くの物質（成
分）をもとに、メラニン色素生成抑制能につい
て、インビトロによる試験と共に、これにインビ
ボにおける試験を加え、これをもとに評価してき
たが、インビトロ試験における、その信頼性につ
いて考察を加えてみると、少なくとも、皮膚の色
素沈着について、これを紫外線照射による紅斑形
成の抑制作用との関連からみるとき、明かに、Ａ
法とＢ法共に抑制作用を示す物質は、インビボに
おいても、紅斑形成を抑制するものが多い。
したがつて、グロビン蛋白の化粧品類など、皮
膚外用剤への応用は、皮膚保湿剤として、あるい
は、日光紅斑防止（抑制）剤として有利なもので
あると言える。
そして、また、コスト的な面からみても、その
収量は多く、安価で製造できることから、大変望
ましいものであると言える。[Table] (2) Regarding viscosity characteristics Conventionally known components derived from organs used in external preparations for the skin, those with high viscosity are used for the purpose of preventing dryness of the skin, or by utilizing their viscosity. It has been used as a binder in the processing of raw materials, medicines, foods, etc. For example, egg albumin, bovine serum albumin, gelatin, and the like have high viscosity and water-absorbing properties, and have been used as moisturizing agents in cosmetics and the like. However, globin protein does not have the same viscosity as albumin or gelatin, but has a smooth feel, and its solution does not have any lake-like properties. (3) Molecular Weight Distribution Characteristics When the molecular weight distribution was examined by GPC (Gelvammation Chromatography), a chart as shown in Figure 1 was obtained. this is,
The pattern obtained according to Production Method 1 is shown, but different production methods show different peaks on the chart. However, adding it to the formulation of external preparations such as cosmetics, which is the object of the present invention, does not have any particular effect, and the viscosity may particularly increase or decrease depending on the peak. Not often. (3) Regarding ultraviolet absorption characteristics When the ultraviolet absorption was measured based on the aqueous solution of globin protein obtained in Production Method 1, the results were as shown in FIG. That is, it has a characteristic of having a high peak around 280 nm. In addition, the absorption peaks of globin proteins obtained by other production methods were similar, and no specific absorption in other wavelength ranges was exhibited. [C] Effects of the Invention A unique effect of the present invention is that it is composed of a water-soluble protein with a relatively high molecular weight, considering the physical properties (characteristics) shown in the previous section. However, it is not viscous. In addition, safety for the skin is determined, for example, by manufacturing method 1.
Based on the powder obtained by The final judgment was also confirmed, but no abnormalities such as rash, erythema, etc. that were thought to be caused by this substance were observed. "Action (Effect)" (1) Moisturizing effect Figure 3 shows the results of measuring the moisturizing performance of an aqueous solution containing 5% of globin protein obtained by a method based on Production Method 1. It is something. As can be seen from the results, the moisturizing performance is clearly higher than that of an aqueous solution containing an equal amount of propylene glycol, which is a well-known moisturizer most frequently used in cosmetics and the like. Moreover, it has less viscosity than propylene glycol, giving it a refreshing texture.
Therefore, it was found that it has less sticky feeling and is particularly desirable as a moisturizing agent for liquid products such as lotions. (2) Inhibitory effect on tyrosinase activity Ingredients that exhibit an inhibitory effect on tyrosinase activity serve as a means of evaluating their superiority or inferiority when used in external skin preparations such as cosmetics. In other words, when the purpose is to protect the skin, the first requirement is a substance that has a moisturizing effect, and the next desired substance is a substance that protects against pigmentation. As a promising candidate for this effect, substances that suppress the activity of the enzyme tyrosinase are said to be useful in preventing skin pigmentation. However, there are few substances that have both a moisturizing effect and an inhibitory effect on tyrosinase activity, and although there have been substances that have one of these functions, there are very few ingredients that are highly safe for the skin. So far, the animal ingredients that have moisturizing and tyrosinase activity inhibiting effects are:
Known examples include placenta extract, silk protein or its hydrolyzate (extract), and hydrolyzate (extract) of elastin or collagen. On the other hand, vegetable ingredients are derived from soybeans (natto).
Known examples include kudzu root extract, aqueous aloe extract, and aqueous coix extract. However, when testing by methods A and B shown in the following test, for both tyrosinase activities,
When it comes to substances that suppress both, the amount decreases even more. In addition, at least in both methods, even if there are products that strongly demonstrate their effectiveness, skin safety test evaluations may be inappropriate, or there may be limited conditions in use or formulation (e.g., specific extraction law,
There will be cases where you will be forced to change the manufacturing method, stabilization method, etc. A typical example of such substances is vitamin C, for example. Placenta extract is a product that overcomes these drawbacks, passes the tyrosinase activity inhibitory effect (methods A to B), and has a moisturizing effect that has been confirmed in clinical trials. (Prasenand V) is known, but at present there are very few others. The present inventors conducted an in vitro activity confirmation based on globin protein, which is the first barrier. The results were as shown in (Table 3).
That is, it can be seen that both method A and method B have a strong inhibitory effect on both tests. Waiting for the results of future clinical trials, this
It is still unclear whether it is effective against hyperpigmentation, but at least one consideration can be made in addition to the ultraviolet absorption ability shown in Figure 2. It can be assumed that it is useful for preventing erythema formed by ultraviolet rays from sunlight and preventing the appearance of age spots. The present inventors have so far evaluated the ability to inhibit melanin pigment production based on a large number of substances (components), using in vitro tests as well as in vivo tests. When we consider its reliability in in vitro tests, it is clear that A.
Many of the substances that exhibit inhibitory effects in both Methods and Methods inhibit erythema formation in vivo. Therefore, it can be said that the application of globin protein to external skin preparations such as cosmetics is advantageous as a skin moisturizer or an agent for preventing (suppressing) solar erythema. Moreover, from a cost perspective, it can be said to be very desirable because its yield is large and it can be produced at low cost.
【表】【table】
【表】
「第３表にかかる試験法注解」
（Ａ法の反応系組成）
Ｌ−チロジン（0.3mg／mL） ……1.0mL
マツクルバインバツフアー（PH6.5）
……1.0mL
蒸留水または検液 ……0.9mL
マツシユルーム由来チロジナーゼ（１mg／
mL） ……0.1mL
上記の組成により、赤色のドーパ・キノンが生
じる。これを分光光度計を用い、475nmの吸光度
を測定することにより、ドーパ・キノンの生成量
を算出し、検液のチロジナーゼ活性阻害率を求め
た。
（Ｂ法の反応組成）
Ｌ−チロジン（0.1mg／mL） ……0.5mL
リン酸バツフアー（PH6.8） ……2.0mL
蒸留水または検液 ……2.0mL
CuSO4水溶液（１％） ……0.05mL
ジヤガイモ由来チロジナーゼ（１mg／mL）
……1.0mL
上記の組成により、生成する黒色メラニンの量
を、分光光度計を用いて640nmでの吸光度を測定
することによつて算出し、検体のチロジナーゼ活
性阻害率を求めた。
(3) 外用および処方上の特性（作用）
グロビン蛋白は、水に対する溶解性が良好であ
り、化粧品類には任意に配合することが可能であ
る。
例えば、市販中のクリームリンスに粉末を加え
てよく撹拌したものは、次表（第４表）に示す如
く、髪の風合いを良好となし、髪に光沢性を与え
る。その効果は、粉末換算にして0.3〜２％程度
を処方中に添加したものが、特に良好な成績が得
られるようになる。対照として、公知な動物性蛋
白成分であるエラスチンやコラーゲンの加水分解
物の等量配合したものと比較してみると、グロビ
ン蛋白を用いた方が、風合い、光沢性、共に優れ
ていた。
一方、肌や顔面に塗布するクリームや乳液の公
知な処方中に加えると、クリームや乳液のきめが
非常に細かくなり、光沢のある伸びの良い状態が
保持されるようになる。
その状態は、処方中に、粉末換算にして0.1％
以上加えることにより見受けられ、１〜３％で最
も良好となることがわかつた。
また、この状態は、動物性蛋白由来成分である
プラセンターエキスで、同様の効果が得られるこ
とが知られているが、その場合、例えば、エキス
の出発原料である胎盤の基原が、牛や豚では認め
られず、ヒトの正常分娩後の胎盤から、低温抽出
されたものに著明な効果が認められていた。
しかしながら、グロビン蛋白では、そのスター
ト原料が、ヒト採血由来のものに限らず、牛、
豚、ヤギ、ヒツジ、鶏由来のグロビン蛋白をもと
に追試しても、その種属差にはほとんど影響され
ず、共に同様な効果が得られた。但し、鶏の場合
では、収量の点で若干劣り、又、その分子量分布
も、他のものとは若干異なつた傾向を示した。
したがつて、実用的なグロビン蛋白としては、
牛や豚由来のものが最適であると考えられた。[Table] "Test method notes according to Table 3" (Reaction system composition of method A) L-tyrosine (0.3 mg/mL) ......1.0 mL Matsukulbaine buffer (PH6.5)
…1.0mL Distilled water or test solution …0.9mL Tyrodinase from pine tree room (1mg/
mL) ...0.1mL The above composition produces red dopa quinone. By measuring the absorbance at 475 nm using a spectrophotometer, the amount of dopa quinone produced was calculated, and the tyrosinase activity inhibition rate of the test solution was determined. (Reaction composition of method B) L-tyrosine (0.1mg/mL) ...0.5mL Phosphate buffer (PH6.8) ...2.0mL Distilled water or test solution ...2.0mL CuSO 4 aqueous solution (1%) ... 0.05mL Tyrodinase from potato (1mg/mL)
...1.0 mL Based on the above composition, the amount of black melanin produced was calculated by measuring the absorbance at 640 nm using a spectrophotometer, and the tyrosinase activity inhibition rate of the sample was determined. (3) External use and prescription characteristics (effects) Globin protein has good solubility in water and can be incorporated into cosmetics as desired. For example, when powder is added to a commercially available cream rinse and thoroughly stirred, it gives the hair a good texture and shine, as shown in the following table (Table 4). As for the effect, especially good results can be obtained when about 0.3 to 2% of the powder is added to the formulation. As a control, when compared with a product containing equal amounts of hydrolysates of elastin and collagen, which are known animal protein components, the product using globin protein was superior in both texture and gloss. On the other hand, when added to known formulations of creams and emulsions to be applied to the skin and face, the texture of the creams and emulsions becomes very fine and the glossy and spreadable state is maintained. The condition is 0.1% in terms of powder during prescription.
It was found that the addition of 1 to 3% gives the best results. In addition, it is known that a similar effect can be obtained with placenta extract, which is a component derived from animal protein, in this case, for example, if the origin of the placenta, which is the starting material for the extract, is from a cow. It was not observed in humans and pigs, but a remarkable effect was observed in low-temperature extracts from human placentas after normal delivery. However, the starting materials for globin protein are not limited to those derived from human blood, but also cow,
Additional tests using globin proteins derived from pigs, goats, sheep, and chickens yielded similar effects, with little effect on species differences. However, in the case of chicken, the yield was slightly inferior, and the molecular weight distribution also showed a tendency that was slightly different from that of the others. Therefore, as a practical globin protein,
Those derived from cows and pigs were thought to be optimal.
【表】
（第４表の注解）
クリームリンスは市販中のものを用い、これに
さらに、それぞれの抽出物（分解物）を加え、撹
拌乳化により製したもので実施した。
試験は、18〜42歳の女性を対象に、10名のボラ
ンテイアにより、１〜２回／週の割合で、入浴時
の洗髪後に使用してもらい、１検体について３回
の使用により評価を求めたもので、表中の数値
は、それぞれの項目に対しての回答者の人数を示
したものである。
尚、洗髪に当たつて、その際に用いるシヤンプ
ーについては、特に限定することなく、日常使用
中のものを使用することとした。
一方、クリームの仕上がり状態の評価は、伸
び、乳化状態、光沢性について、共に優れている
プラセナンドＶ（プラセンターエキス）を最良
（優：対称）となし、普通（良）の２段階で判定
した。[Table] (Commentary to Table 4) Commercially available cream rinses were used, and the respective extracts (decomposition products) were added thereto and prepared by stirring and emulsification. The test was conducted by 10 volunteers who used the product once or twice a week after washing their hair when taking a bath, and evaluated each sample by using it three times on women aged 18 to 42. The numbers in the table indicate the number of respondents for each item. The shampoo used for hair washing was not particularly limited, and the shampoo used on a daily basis was used. On the other hand, the finished state of the cream was evaluated on a two-level scale: Placenand V (Placenter Extract), which is excellent in spreadability, emulsification state, and gloss, was ranked as the best (excellent: symmetrical), and fair (good). .
【図面の簡単な説明】[Brief explanation of drawings]
第１図は、グロビン蛋白のGPCによるチヤー
トである。尚、Ａは、トランスフエリン、Ｂは、
チトクロームＣを表す。測定条件、カラム：SIL
AF102、溶離液：Elut 0.01M−NaCl、流速：
1.0mL／min、検出波長：UV210nm、第２図は、
グロビン蛋白の紫外部吸収スペクトルである。第
３図は、グロビン蛋白の有する保湿作用を示すグ
ラフである。
図中、イは、５％グロビン蛋白水溶液、ロは、
５％プロピレングリコール水溶液、ハは、精製
水。
Figure 1 is a GPC chart of globin protein. In addition, A is transferrin, B is
Represents cytochrome C. Measurement conditions, column: SIL
AF102, eluent: Elut 0.01M−NaCl, flow rate:
1.0mL/min, detection wavelength: UV210nm, Figure 2 shows:
This is an ultraviolet absorption spectrum of globin protein. FIG. 3 is a graph showing the moisturizing effect of globin protein. In the figure, A is 5% globin protein aqueous solution, B is
5% propylene glycol aqueous solution, C: purified water.