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JP7585203B2 - 免疫原性多重ヘテロ抗原多糖－タンパク質コンジュゲートおよびその使用 - Google Patents

免疫原性多重ヘテロ抗原多糖－タンパク質コンジュゲートおよびその使用 Download PDF

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本発明は、新しい免疫原性多重ヘテロ抗原多糖－タンパク質（ｉＭＨＡＰＰ）コンジュゲート（糖コンジュゲート）および前記糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物ならびにその使用に関する。本発明の糖コンジュゲートは、典型的には、担体タンパク質にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型に由来する糖を含むであろう。本発明はまた、前記新規糖コンジュゲートおよび免疫原性組成物を使用する、肺炎球菌感染に対する、ヒト対象、特に、乳児および高齢者のワクチン接種に関する。
肺炎球菌によって引き起こされる感染は、世界中で、疾患罹患と死亡の主な原因である。肺炎、熱性菌血症および髄膜炎は侵襲性肺炎球菌疾患の最も一般的な症状であるが、気道内での細菌拡散は、中耳感染、副鼻腔炎または反復性気管支炎をもたらし得る。侵襲性疾患と比較して、非侵襲性症状は通常、あまり重篤ではないが、かなりより一般的である。
欧州および米国では、肺炎球菌性肺炎は、最も一般的な市中細菌性肺炎であり、毎年、成人１００，０００人あたり約１００人が罹患すると見積もられている。熱性菌血症および髄膜炎に関する、対応する統計は、それぞれ、１００，０００人あたり１５～１９人および１００，０００人あたり１～２人である。１つまたは複数のこれらの症状のリスクは、乳児および高齢者ならびに全ての年齢の免疫障害を有する人々においてはるかにより高い。経済的に発達した地域であっても、侵襲性肺炎球菌疾患は死亡率が高い；肺炎球菌性肺炎を有する成人については、死亡率は平均で１０％～２０％であるが、高リスク群では、それは５０％を超える可能性がある。肺炎は、世界全体で、肺炎球菌による死亡の圧倒的に最も一般的な原因である。
肺炎球菌疾患の原因菌である肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌）は、多糖莢膜によって取り囲まれたグラム陽性被包性球菌である。この莢膜の組成における差異は、約９１種の莢膜型間の血清学的区別を可能にし、その一部は肺炎球菌疾患と関連することが多いが、他は稀である。侵襲性肺炎球菌感染は、肺炎、髄膜炎および熱性菌血症を含む；中でも、一般的な非侵襲性症状は、中耳炎、副鼻腔炎および気管支炎である。
肺炎球菌コンジュゲートワクチン（ＰＣＶ）は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（肺炎球菌）によって引き起こされる疾患に対し防御をもたらすために使用される肺炎球菌ワクチンである。現在、世界市場で利用可能な以下の３種のＰＣＶワクチンがある：ＰＲＥＶＮＡＲ（登録商標）（一部の国ではＰｒｅｖｅｎａｒと呼ばれる）（７価ワクチン）、ＳＹＮＦＬＯＲＩＸ（登録商標）（１０価ワクチン）およびＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）（１３価ワクチン）。
必須の抗生物質に対する幅広い微生物耐性の最近の発生および免疫障害を有する人々の数の増加は、さらにより広い防御を示す肺炎球菌ワクチンの必要性を強調する。
特に、ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）には見出されない血清型に起因する肺炎球菌疾患の範囲に関する残っている満たされない医学的必要性および長期的な血清型置換の可能性に対処する必要がある。ＰＲＥＶＮＡＲ１３（登録商標）における１３を超える疾患を引き起こす特定の血清型は、地域、集団によって変化し、抗生物質耐性の獲得、肺線球菌ワクチン導入および未知の起源の長期的傾向に起因して時間と共に変化し得る。ヒト、特に、２歳未満の小児においてさらなる肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型に対する免疫応答を誘導するために使用することができる免疫原性組成物が必要である。
いくつかの多重抗原肺炎球菌コンジュゲートは、「選択的糖化学反応性」に基づく注意深いプール化戦略の使用に従って、様々な血清型に由来する多糖から生成された。初期の開発試験および活性化された多糖を含む構造研究に基づいて、異なる化学反応性を有する多糖を、異なる群にプールした。
本発明は、製造ステップおよび個々のコンジュゲートの数を、ライセンス付与された市販のコンジュゲートワクチンについて現在広く使用されている反復的手法によって必要とされる複数の個々の１価コンジュゲーションステップの代わりに、より少ないコンジュゲーションへと減少させる、多価組成物を生産するための手法を考案することを含む。
本発明の多血清型コンジュゲートは、必要とされる製剤原料が少ないため、多価肺炎球菌ワクチンの生産を潜在的に単純化することができる。生産はまた、より少ないステップを必要とするであろう。本発明の多血清型コンジュゲートはまた、限定数のコンジュゲートのみを用いたいくつかの血清型に対する防御を提供することによって、多価肺炎球菌ワクチンをより容易にカスタマイズするのに役立つであろう。
多糖反復単位中の妨害された構造位置に配置された二次アルデヒドと比較して有意に反応性が高い、一次アルデヒド（矢印参照）を生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型２２Ｆ肺炎球菌多糖の構造を示す。 多糖反復単位中の妨害された構造位置に配置された二次アルデヒドと比較して有意に反応性が高い、一次アルデヒド（矢印参照）を生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型３３Ｆ肺炎球菌多糖の構造を示す。 多糖反復単位中の妨害された構造位置に配置された二次アルデヒドと比較して有意に反応性が高い、一次アルデヒド（矢印参照）を生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型３５Ｂ肺炎球菌多糖の構造を示す。 多糖反復単位中の妨害された構造位置に配置された二次アルデヒドと比較して有意に反応性が高い、一次アルデヒド（矢印参照）を生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型１０Ａ肺炎球菌多糖の構造を示す。 実施例１および実施例５に記載される個々に活性化された多糖を使用する多血清型１ポットコンジュゲーションプロセスのフローダイアグラムを示す。 比濁法によって試験されたコンジュゲートの抗原性（Ｎｅｐｈ、右のバー）およびＡｎｔｈｒｏｎｅアッセイによって測定された総糖含量（それぞれの血清型については左のバーおよび３５Ｂについてはバーのみ）。 アルデヒドを生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型８の肺炎球菌多糖の構造を示す（矢印参照）。 アルデヒドを生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型１５Ａの肺炎球菌多糖の構造を示す（矢印参照）。 アルデヒドを生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型１５Ｂの肺炎球菌多糖の構造を示す（矢印参照）。 アルデヒドを生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型２３Ａの肺炎球菌多糖の構造を示す（矢印参照）。 一次アルデヒドを生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型２３Ｂの肺炎球菌多糖の構造を示す（矢印参照）。 実施例７に記載される個々に活性化された多糖を使用する多血清型１ポットコンジュゲーションプロセスのフローダイアグラムを示す。 比濁法によって試験されたコンジュゲートの抗原性（Ｎｅｐｈ、１５Ｂについては右のバー）およびＡｎｔｈｒｏｎｅアッセイによって測定された総糖含量（１５Ｂについては左のバーおよび１５Ａについてはバーのみ）。 多糖反復単位中の妨害された構造位置に配置された二次アルデヒドと比較して有意に反応性が高い、一次アルデヒド（矢印参照）を生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型１１Ａ肺炎球菌多糖の構造を示す。 アルデヒドを生成するように独自に配置された近接ヒドロキシルを有する血清型１２Ｆの肺炎球菌多糖の構造を示す（矢印参照）。 比濁法によって試験された多重コンジュゲート１１Ａ／２３Ｂの抗原性（Ｎｅｐｈ、１１Ａについては右のバー）およびＡｎｔｈｒｏｎｅアッセイによって測定された総糖含量（１１Ａについては左のバーおよび２３Ｂについてはバーのみ）。 比濁法によって試験された多重コンジュゲート８／１２Ｆの抗原性（Ｎｅｐｈ、右のバー）およびＡｎｔｈｒｏｎｅアッセイによって測定された総糖含量（それぞれの血清型の左のバー）。
１ 本発明の糖コンジュゲート
本発明は、新しい糖コンジュゲート（タンパク質担体にコンジュゲートされた莢膜糖）に関する。
本発明の目的のために、用語「糖コンジュゲート」は、担体タンパク質に共有結合により連結された莢膜糖を示す。一実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質に直接連結される。第２の実施形態では、細菌糖は、スペーサー／リンカーを介して担体タンパク質に連結される。
特に、本発明は、２つ以上の糖抗原が、タンパク質担体の同じ分子にコンジュゲートされている（すなわち、担体分子が、それらにコンジュゲートされた２つ以上の異なる莢膜糖を有する）、糖コンジュゲートに関する。
ある実施形態では、本発明は、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む糖コンジュゲートに関する。
ある実施形態では、本発明は、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む糖コンジュゲートに関する。
ある実施形態では、本発明は、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む糖コンジュゲートに関する。
１．１ 本発明の莢膜糖
本明細書を通して、用語「糖」は、多糖またはオリゴ糖を示してもよく、その両方を含む。よくある実施形態では、糖は、多糖、特に、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖である。
莢膜多糖は、当業者には公知の標準的な技術によって調製される。
本発明では、莢膜多糖を、例えば、血清型８、１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａおよび２３Ｂの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）から、血清型８、１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａおよび２３Ｂの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）から、または血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）から調製することができる。典型的には、莢膜多糖を、それぞれの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型を培地（例えば、大豆ベースの培地）中で増殖させることによって産生させた後、細菌培養物から多糖を調製する。本発明の糖コンジュゲートにおいて使用されるそれぞれの多糖を作製するために使用される肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の細菌株を、確立された菌株保存機関または臨床標本から取得することができる。
生物（それぞれの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型）の集団は、種バイアルから種ボトルへとスケールアップされることが多く、生産規模の発酵容量に達するまで、大容量の１または複数の種発酵器を介して継代される。増殖サイクルの終わりに、細胞を溶解した後、溶解物ブロスを下流の（精製）処理のために回収する（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／１１８７５２、ならびに米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００８／０１０２４９８号および第２００８／０２８６８３８号を参照されたい）。
個々の多糖を、典型的には、遠心分離、沈降、限外濾過、および／またはカラムクロマトグラフィーによって精製する（例えば、ＷＯ２００６／１１０３５２およびＷＯ２００８／１１８７５２を参照されたい）。
精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）莢膜多糖は、最大で８個の糖残基を含有してもよい反復オリゴ糖単位を含む。
ある実施形態では、本発明の莢膜糖は、１つのオリゴ糖単位、または反復オリゴ糖単位の天然の長さよりも短い糖鎖であってもよい。ある実施形態では、本発明の莢膜糖は、関連する血清型の１つの反復オリゴ糖単位である。
ある実施形態では、本発明の莢膜糖は、オリゴ糖であってもよい。オリゴ糖は、少数の反復単位（典型的には、５～１５の反復単位）を有し、典型的には、合成的に、または多糖の加水分解によって誘導される。
しかし好ましくは、本発明の莢膜糖は、多糖である。高分子量の莢膜多糖は、抗原性表面上に存在するエピトープのため、ある特定の抗体免疫応答を誘導することができる。高分子量の莢膜多糖の単離および精製は、好ましくは、本発明のコンジュゲート、組成物および方法における使用のために企図される。
多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。機械的または化学的サイジングを用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。機械的サイジングを、高圧ホモジェナイゼーション剪断を使用して行うことができる。
好ましい実施形態では、精製された多糖は、血清型８、１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａまたは２３Ｂの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する莢膜多糖である。別の好ましい実施形態では、精製された多糖は、血清型８、１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａまたは２３Ｂの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する莢膜多糖である。さらに別の好ましい実施形態では、精製された多糖は、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆまたは３５Ｂの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する莢膜多糖である。
本明細書で使用される場合、多糖または担体タンパク質－多糖コンジュゲートの用語「分子量」とは、多角度レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）と組み合わせた、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって算出される分子量を指す。
一部の実施形態では、本発明の血清型１５Ａおよび１５Ｂに由来する肺炎球菌糖は、Ｏ－アセチル化される。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび／または３５Ｂに由来する肺炎球菌糖は、Ｏ－アセチル化される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１１Ａに由来する肺炎球菌糖は、Ｏ－アセチル化される。
本明細書に記載の精製された多糖を化学的に活性化して、担体タンパク質と反応することができる糖にすることができる。一実施形態では、本明細書に記載の精製された多糖を化学的に酸化して、担体タンパク質と反応することができる糖にすることができる。
血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、１５Ｂ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、３３Ｆまたは３５Ｂ糖を、当業者には公知の単離手順を使用して細菌から直接取得することができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。
血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１５Ａ、１５Ｂ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、３３Ｆまたは３５Ｂの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から取得することができる。
１．１．１ 肺炎球菌糖血清型８
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する精製された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。上記の分子量範囲は、最終的なサイジングステップ後、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された糖を指す。
１．１．２ 肺炎球菌糖血清型１５Ａ
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型１５Ａ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型１５Ａ莢膜糖を、例えば、分子量（ＭＷ）、前記血清型１５Ａ莢膜糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭおよび前記血清型１５Ａ莢膜糖１ｍＭあたりのグリセロールのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。有利には、精製された血清型１５Ａ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型１５Ａ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
好ましい実施形態では、精製された血清型１５Ａ多糖のサイズを、高圧ホモジェナイゼーションによって減少させる。高圧ホモジェナイゼーションは、十分に小さい寸法の流路を介してプロセス流をポンプすることによって高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きい印加されるホモジェナイゼーション圧力を使用することによって増加し、ホモジェナイザーを介して供給流を再循環させることによって曝露時間を増加させることができる。
高圧ホモジェナイゼーションプロセスは、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造的特徴を保存しながら、精製された血清型１５Ａ多糖のサイズを減少させるのに特に適切である。
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する精製された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
好ましい実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する単離された糖は、５ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～４５０ｋＤａ、１００ｋＤａ～４００ｋＤａ、および１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
血清型１５Ａ多糖は、Ｏ－アセチル化されており、Ｏ－アセチル化の総量は、多糖反復単位あたり約０．８～０．９個のＯ－アセチル基である。多糖のＯ－アセチル化の程度を、当業界で公知の任意の方法により、例えば、プロトンＮＭＲ
により決定することができる（例えば、Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（１９９６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２９６：８３～９６；Ｊｏｎｅｓら（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ３０：１２３３～１２４７；ＷＯ２００５／０３３１４８およびＷＯ００／５６３５７を参照されたい）。別の一般的に使用される方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ，Ｓ．（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１に記載されている。好ましくは、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
精製、単離もしくは活性化された血清型１５Ａ莢膜多糖または血清型１５Ａ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
グリセロリン酸側鎖の存在は、糖のフッ化水素酸（ＨＦ）を用いた処理によるその放出後の、パルスアンペロメトリック検出を用いた高速陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）を使用するグリセロールの測定によって決定される。精製、単離または活性化された血清型１５Ａ糖中のグリセロールの存在は、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたりのグリセロールのｍＭ数として表される。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ａ糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
１．１．３ 肺炎球菌糖血清型１５Ｂ
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型１５Ｂ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型１５Ｂ莢膜糖を、例えば、分子量（ＭＷ）、前記血清型１５Ｂ莢膜糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭおよび前記血清型１５Ｂ莢膜糖１ｍＭあたりのグリセロールのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．２．６、１７～２１頁を参照されたい）。有利には、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
好ましい実施形態では、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを、高圧ホモジェナイゼーションによって減少させる。高圧ホモジェナイゼーションは、十分に小さい寸法の流路を介してプロセス流をポンプすることによって高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きい印加されるホモジェナイゼーション圧力を使用することによって増加し、ホモジェナイザーを介して供給流を再循環させることによって曝露時間を増加させることができる。
高圧ホモジェナイゼーションプロセスは、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造的特徴を保存しながら、精製された血清型１５Ｂ多糖のサイズを減少させるのに特に適切である。
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する精製された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
好ましい実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する単離された糖は、５ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～４５０ｋＤａ、１００ｋＤａ～４００ｋＤａ、および１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
血清型１５Ｂ多糖は、Ｏ－アセチル化されており、Ｏ－アセチル化の総量は、多糖反復単位あたり約０．８～０．９個のＯ－アセチル基である。多糖のＯ－アセチル化の程度を、当業界で公知の任意の方法により、例えば、プロトンＮＭＲにより決定することができる（例えば、Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（１９９６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２９６：８３～９６；Ｊｏｎｅｓら（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ３０：１２３３～１２４７；ＷＯ２００５／０３３１４８およびＷＯ００／５６３５７を参照されたい）。別の一般的に使用される方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ，Ｓ．（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１に記載されている。好ましくは、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
精製、単離もしくは活性化された血清型１５Ｂ莢膜多糖または血清型１５Ｂ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
グリセロリン酸側鎖の存在は、糖のフッ化水素酸（ＨＦ）を用いた処理によるその放出後の、パルスアンペロメトリック検出を用いた高速陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）を使用するグリセロールの測定によって決定される。精製、単離または活性化された血清型１５Ｂ糖中のグリセロールの存在は、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたりのグリセロールのｍＭ数として表される。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１５Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有し、前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートおよび前記血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。
１．１．４ 肺炎球菌糖血清型２３Ａ
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する精製された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖は、１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。上記の分子量範囲は、最終的なサイジングステップ後、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された糖を指す。
１．１．５ 肺炎球菌糖血清型２３Ｂ
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する精製された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖は、１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。上記の分子量範囲は、最終的なサイジングステップ後、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された糖を指す。
１．１．６ 肺炎球菌糖血清型１１Ａ
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型１１Ａ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型１１Ａ莢膜糖を、例えば、分子量（ＭＷ）、前記血清型１１Ａ莢膜糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．２．4、１４～１６頁を参照されたい）。有利には、精製された血清型１１Ａ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型１１Ａ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
好ましい実施形態では、精製された血清型１１Ａ多糖のサイズを、高圧ホモジェナイゼーションによって減少させる。高圧ホモジェナイゼーションは、十分に小さい寸法の流路を介してプロセス流をポンプすることによって高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きい印加されるホモジェナイゼーション圧力を使用することによって増加し、ホモジェナイザーを介して供給流を再循環させることによって曝露時間を増加させることができる。
高圧ホモジェナイゼーションプロセスは、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造的特徴を保存しながら、精製された血清型１１Ａ多糖のサイズを減少させるのに特に適切である。
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する精製された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
好ましい実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する単離された糖は、５ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～４５０ｋＤａ、１００ｋＤａ～４００ｋＤａ、および１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
血清型１１Ａの多糖反復単位は、線状の４糖骨格（２個のガラクトピラノース（Ｇａｌｐ）および２個のグルコピラノース（Ｇｌｃｐ））と、側鎖の（ｐｅｎｄｅｎｔ）ホスホグリセロールとからなる（Ｒｉｃｈａｒｄｓら（１９８８）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２２８：５９５～５９７）。多糖は、複数の位置でＯ－アセチル化されており、文献（Ｃａｌｉｘら（２０１１）Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１９３（１９）：５２７１～５２７８）中の報告されたデータに基づくものである。
多糖のＯ－アセチル化の程度を、当業界で公知の任意の方法により、例えば、プロトンＮＭＲにより決定することができる（例えば、Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（１９９６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２９６：８３～９６；Ｊｏｎｅｓら（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ３０：１２３３～１２４７；ＷＯ２００５／０３３１４８およびＷＯ００／５６３５７を参照されたい）。別の一般的に使用される方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ，Ｓ．（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１に記載されている。好ましくは、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
精製、単離もしくは活性化された血清型１１Ａ莢膜多糖または血清型１１Ａ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。
ある実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．３、０．５、０．６、１．０、１．４、１．８、２．２、２．６、３．０、３．４、３．８、４．２、４．６または５ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６、１、１．４、１．８、２．２、２．６、３、３．４、３．８、４．２または４．６ｍＭのアセテートかつ前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり約５ｍＭ未満のアセテートを含む。ある実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６、１．０、１．４、１．８、２．２、２．６または３．０ｍＭのアセテートかつ前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり約３．４ｍＭ未満のアセテートを含む。ある実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６、１、１．４、１．８、２．２、２．６、または約３．０ｍＭのアセテートかつ前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり約３．３ｍＭ未満のアセテートを含む。
好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５または２．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５または２．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも２．４、２．５または２．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも２．５ｍＭのアセテートを含む。
グリセロリン酸側鎖の存在は、糖のフッ化水素酸（ＨＦ）を用いた処理によるその放出後の、パルスアンペロメトリック検出を用いた高速陰イオン交換クロマトグラフィー（ＨＰＡＥＣ－ＰＡＤ）を使用するグリセロールの測定によって決定される。精製、単離または活性化された血清型１１Ａ糖中のグリセロールの存在は、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたりのグリセロールのｍＭ数として表される。
好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９または１ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８または０．９ｍＭのグリセロールかつ前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり約１．０ｍＭ未満のグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６、０．７、０．８または０．９ｍＭのグリセロールかつ前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり約１．０ｍＭ未満のグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールかつ前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり約０．８ｍＭ未満のグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、単離された血清型１１Ａ糖は、前記血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。上記の分子量範囲は、最終的なサイジングステップ後、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された糖を指す。
１．１．７ 肺炎球菌糖血清型１２Ｆ
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型１２Ｆ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型１２Ｆ莢膜糖を、例えば、前記血清型１２Ｆ莢膜糖の分子量（ＭＷ）などの異なるパラメーターによって特徴付けることができる（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．２．５、１６～１７頁を参照されたい）。有利には、精製された血清型１２Ｆ多糖のサイズを、多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型１２Ｆ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
好ましい実施形態では、精製された血清型１２Ｆ多糖のサイズを、高圧ホモジェナイゼーションによって減少させる。高圧ホモジェナイゼーションは、十分に小さい寸法の流路を介してプロセス流をポンプすることによって高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きい印加されるホモジェナイゼーション圧力を使用することによって増加し、ホモジェナイザーを介して供給流を再循環させることによって曝露時間を増加させることができる。
高圧ホモジェナイゼーションプロセスは、多糖の構造的特徴を保存しながら、精製された血清型１２Ｆ多糖のサイズを減少させるのに特に適切である。
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する精製された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
好ましい実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する単離された糖は、５ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～５００ｋＤａ、５０ｋＤａ～４５０ｋＤａ、１００ｋＤａ～４００ｋＤａ、および１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１２Ｆ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１２Ｆ莢膜多糖は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１２Ｆ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、単離された血清型１２Ｆ莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａの分子量；および同様の望ましい分子量範囲を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。上記の分子量範囲は、最終的なサイジングステップ後、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された糖を指す。
１．１．８ 肺炎球菌糖血清型１０Ａ
血清型１０Ａの多糖反復単位は、２個のガラクトフラノース（Ｇａｌｆ）、３個のガラクトピラノース（Ｇａｌｐ）、１個のＮ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌｐＮＡｃ）および骨格ホスホリビトールを有する分枝状６糖反復単位からなる（Ｊｏｎｅｓ，Ｃ．（２００５）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２６９（１）：１７５～１８１）。β－ＧａｌｐＮＡｃ部分に２個の分枝状単糖（β－３－Ｇａｌｐおよびβ－６－Ｇａｌｆ）が存在する。
血清型１０Ａ糖を、当業者には公知の単離手順を使用して細菌から直接取得することができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。
血清型１０Ａの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から取得することができる。
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する精製された多糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。上記の分子量範囲は、最終的なサイジングステップ後、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された多糖を指す。
１．１．９ 肺炎球菌糖血清型２２Ｆ
血清型２２Ｆの多糖反復単位は、βＲｈａｐのＣ３ヒドロキシル基にαＧｌｃｐ分枝が連結された、分枝状の５糖骨格（１個のグルクロン酸（ＧｌｃｐＡ）、１個のグルコピラノース（Ｇｌｃｐ）、１個のガラクトフラノース（Ｇａｌｆ）および２個のラムノピラノース（Ｒｈａｐ））からなる（Ｒｉｃｈａｒｄｓら（１９８９）Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６７（６）：１０３８～１０５０）。多糖反復単位中のβＲｈａｐ残基のＣ２ヒドロキシル基の約８０％が、Ｏ－アセチル化されている。
血清型２２Ｆ多糖を、当業者には公知の単離手順を使用して細菌から直接取得することができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。
血清型２２Ｆの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から取得することができる。
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型２２Ｆ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型２２Ｆ莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型２２Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。
好ましくは、有利な濾過特性および／または収率を示す血清型２２Ｆコンジュゲートを生成するために、担体タンパク質へのコンジュゲーションの前に、標的分子量範囲への多糖のサイジングを実施する。有利には、精製された血清型２２Ｆ多糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。好ましくは、精製された血清型２２Ｆ多糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
好ましい実施形態では、精製された多糖のサイズを、高圧ホモジェナイゼーションによって減少させる。高圧ホモジェナイゼーションは、十分に小さい寸法の流路を介してプロセス流をポンプすることによって高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きい印加されるホモジェナイゼーション圧力を使用することによって増加し、ホモジェナイザーを介して供給流を再循環させることによって曝露時間を増加させることができる。
高圧ホモジェナイゼーションプロセスは、Ｏ－アセチル基の存在などの多糖の構造的特徴を保存しながら、精製された血清型２２Ｆ多糖のサイズを減少させるのに特に適切である。
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する精製された多糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、上記のように、２２Ｆ多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。上記の分子量範囲は、最終的なサイジングステップ後、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された多糖を指す。
多糖のＯ－アセチル化の程度を、当業界で公知の任意の方法により、例えば、プロトンＮＭＲにより決定することができる（Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（１９９６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２９６：８３～９６；Ｊｏｎｅｓら（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ３０：１２３３～１２４７；ＷＯ２００５／０３３１４８およびＷＯ００／５６３５７）。別の一般的に使用される方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ，Ｓ．（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１に記載されている。好ましくは、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
精製、単離もしくは活性化された血清型２２Ｆ莢膜多糖中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。
好ましい実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する精製された多糖は、前記血清型２２Ｆ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。
１．１．１０ 肺炎球菌多糖血清型３３Ｆ
血清型３３Ｆの多糖反復単位は、分枝状の５糖骨格（末端αＧａｌｐが、骨格内のαＧａｌｐ残基のＣ２ヒドロキシル基に連結された、２個のガラクトピラノース（Ｇａｌｐ）、２個のガラクトフラノース（Ｇａｌｆ）および１個のグルコピラノース（Ｇｌｃｐ））からなる（Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（２００６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３４１（１）：６８～７４）。骨格３－β－Ｇａｌｆ残基のＣ２ヒドロキシル基はＯ－アセチル化されていることが文献中で報告されている。
血清型３３Ｆ多糖を、当業者には公知の単離手順を使用して細菌から直接取得することができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。
血清型３３Ｆの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から取得することができる。
血清型３３Ｆに由来する精製された多糖を活性化して（例えば、化学的に活性化して）、それらが反応することができるようにした後、本明細書にさらに記載されるように、本発明の糖コンジュゲートに組み込むことができる。
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型３３Ｆ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型３３Ｆ莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する精製された多糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。さらに、本明細書に記載のように、多糖を、コンジュゲーションの前にサイジング技術にかけることができる。上記の分子量範囲は、最終的なサイジングステップ後、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された多糖を指す。
精製、単離もしくは活性化された血清型３３Ｆ莢膜多糖または血清型３３Ｆ多糖－担体タンパク質コンジュゲート中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される（Ｓｐｅｎｃｅｒら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．８５（７）、１３２、２０１７）。
ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する精製された多糖は、前記血清型３３Ｆ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する精製された多糖は、前記血清型３３Ｆ莢膜多糖１μｍｏｌあたり約０．２、０．４、０．６、０．８、１．０、１．２、１．４または１．６μｍｏｌのアセテートを有する。好ましい実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する精製された多糖は、前記血清型３３Ｆ莢膜多糖１μｍｏｌあたり０．２～１．６、０．４～１．６、０．６～１．６、０．８～１．６、１．０～１．６、１．２～１．６、１．４～１．６または１．６～１．８μｍｏｌのアセテートを有する。
１．１．１１ 肺炎球菌糖血清型３５Ｂ
血清型３５Ｂの多糖反復単位は、Ｄ－ガラクトース、Ｄ－グルコース、２－アセトアミド－２－デオキシ－ｏ－ガラクトース、およびリビトールからなる（Ｂｅｙｎｏｎら（１９９５）Ｃａｎａｄｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ７３、４１～４８）。リビトール単位にグリコシド結合したβ－Ｄ－Ｇａｌｆ残基の約７０％が、Ｏ－アセチル置換基を有する。
血清型３５Ｂ多糖を、当業者には公知の単離手順を使用して細菌から直接取得することができる（例えば、米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００７／０１８４０７１号、第２００７／０１８４０７２号、第２００７／０２３１３４０号、および第２００８／０１０２４９８号ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号に開示された方法を参照されたい）。さらに、それらを、合成プロトコールを使用して生産することができる。
血清型３５Ｂの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）株を、確立された菌株保存機関（例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ、Ａｔｌａｎｔａ、ＧＡ）など）または臨床標本から取得することができる。
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型３５Ｂ多糖の精製および必要に応じて、精製された多糖のサイジングによって得られる単離された血清型３５Ｂ莢膜多糖を、例えば、分子量（ＭＷ）および前記血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭなどの異なるパラメーターによって特徴付けることができる。
一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する精製された多糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、コンジュゲーション前の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する精製された多糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、莢膜多糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、莢膜多糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
多糖は、通常の精製手順の間にサイズがわずかに減少し得る。上記の分子量範囲は、コンジュゲーション前（例えば、活性化前）の精製された多糖を指す。
多糖のＯ－アセチル化の程度を、当業界で公知の任意の方法により、例えば、プロトンＮＭＲにより決定することができる（Ｌｅｍｅｒｃｉｎｉｅｒら（１９９６）Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２９６：８３～９６；Ｊｏｎｅｓら（２００２）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ ３０：１２３３～１２４７；ＷＯ２００５／０３３１４８およびＷＯ００／５６３５７）。別の一般的に使用される方法は、Ｈｅｓｔｒｉｎ，Ｓ．（１９４９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１８０：２４９～２６１に記載されている。好ましくは、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
精製、単離もしくは活性化された血清型３５Ｂ莢膜多糖中のＯ－アセチルの存在は、前記多糖１ｍＭあたりのアセテートのｍＭ数として、または多糖反復単位あたりのＯ－アセチル基の数として表される。
ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する精製された多糖は、前記血清型３５Ｂ莢膜多糖１μｍｏｌあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６または０．７μｍｏｌのアセテートを有する。ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する精製された多糖は、前記血清型３５Ｂ莢膜多糖１μｍｏｌあたり約０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６または０．７μｍｏｌのアセテートを有する。好ましい実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する精製された多糖は、前記血清型３５Ｂ莢膜多糖１μｍｏｌあたり０．１～０．７、０．２～０．７、０．３～０．７、０．４～０．７、０．５～０．７、０．６～０．７または０．７～０．８μｍｏｌのアセテートを有する。
１．２ 本発明の担体タンパク質
本発明の糖コンジュゲートの成分は、糖がコンジュゲートされている担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書では互換的に使用することができる。担体タンパク質は、標準的なコンジュゲーション手順に適しているべきである。
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリア毒素）、ＴＴ（破傷風トキソイド）またはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性的であるが、抗原的に同一のバリアント）、他のＤＴ変異体（ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８～３８４４）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３またはＣＲＭ１０７；ならびにＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｅｄ：Ｆｒａｎｋｅｌ、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．（１９９２）により記載された他の突然変異；Ｇｌｕ－１４８からＡｓｐ、ＧｌｎもしくはＳｅｒおよび／またはＡｌａ１５８からＧｌｙへの欠失または突然変異ならびに米国特許第４，７０９，０１７号および第４，９５０，７４０号に開示された他の突然変異；Ｌｙｓ５１６、Ｌｙｓ５２６、Ｐｈｅ５３０および／またはＬｙｓ５３４の少なくとも１つまたは複数の残基の突然変異ならびに米国特許第５，９１７，０１７号および第６，４５５，６７３号に開示された他の突然変異；または米国特許第５，８４３，７１１号に開示された断片、一部の様式で解毒されたｐｌｙ、例えば、ｄＰＬＹ－ＧＭＢＳ（ＷＯ２００４／０８１５１５、ＷＯ２００６／０３２４９９）またはｄＰＬＹ－ホルモル、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥを含むＰｈｔＸ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤまたはＰｈｔＥの配列は、ＷＯ００／３７１０５およびＷＯ００／３９２９９に開示されている）およびＰｈｔタンパク質の融合物、例えば、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、ＰｈｔＡ－Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４、ＷＯ０３／０５４００７、ＷＯ２００９／０００８２６）を含む、肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）（Ｋｕｏら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ６３：２７０６～２７１３）、通常、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｂから抽出されるＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質）（ＥＰ０３７２５０１）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ；例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）、またはその免疫学的機能等価物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１、ＥＰ０４２７３４７）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２、ＷＯ９４／０３２０８）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８、ＥＰ０４７１１７７）、サイトカイン、リンホカイン、増殖因子またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６）、様々な病原体由来抗原に由来する複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら（２００１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３１：３８１６～３８２４）、例えば、Ｎ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ ７２：４８８４～４８８７）、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８）、鉄取込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１）、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、組換え緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（特に、その非毒性変異体（グルタミン酸５５３に置換を有する外毒素Ａなど（Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． １６９（１１）：４９６７～４９７１））からなる群から選択される。オブアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはツベルクリンの精製されたタンパク質誘導体（ＰＰＤ）などの他のタンパク質も、担体タンパク質として使用することができる。他の好適な担体タンパク質としては、コレラトキソイド（例えば、ＷＯ２００４／０８３２５１に記載されている）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に由来する外毒素Ａなどの不活化細菌毒素が挙げられる。
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ変異体（ＣＲＭ１９７など）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物（特に、ＷＯ０１／９８３３４およびＷＯ０３／０５４００７に記載のもの）、解毒されたニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢおよびＰｓａＡからなる群から独立に選択される。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）である。別の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＴＴ（破傷風トキソイド）である。
別の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの担体タンパク質は、ＰＤ（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ；例えば、ＥＰ０５９４６１０Ｂを参照されたい）である。
別の実施形態では、本発明の糖コンジュゲートの担体タンパク質は、解毒されたニューモリシン（例えば、Ｈｅｒｍａｎら、Ｈｕｍ Ｖａｃｃｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２０１７ Ｊａｎ；１３（１）：２２０～２２８を参照されたい）またはニューモリシンの突然変異非毒性形態（例えば、Ｋｉｒｋｈａｍ Ｌら、Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００６ Ｊａｎ；７４（１）：５８６～５９３を参照されたい）。
好ましい実施形態では、本発明の莢膜糖は、ＣＲＭ１９７タンパク質にコンジュゲートされる。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素の非毒性形態であるが、ジフテリア毒素と免疫学的に識別不可能である。ＣＲＭ１９７は、毒素原性コリネファージベータのニトロソグアニジン突然変異誘発によって創出された非毒素原性ファージβ１９７ｔｏｘ－により感染したコリネバクテリウム・ジフテリア（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）によって産生される（Ｕｃｈｉｄａら（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２３３：８～１１）。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素と同じ分子量を有するが、構造遺伝子中の単一の塩基変化（グアニンからアデニンへの）によってそれと異なる。この単一の塩基変化は、成熟タンパク質中のアミノ酸置換（グルタミン酸からグリシンへの）を引き起こし、ジフテリア毒素の有毒性を除去する。ＣＲＭ１９７タンパク質は、糖のための安全かつ有効なＴ細胞依存的担体である。ＣＲＭ１９７およびその産生に関するさらなる詳細は、例えば、米国特許第５，６１４，３８２号に見出すことができる。
ある実施形態では、本発明の莢膜糖を、ＣＲＭ１９７タンパク質またはＣＲＭ１９７のＡ鎖にコンジュゲートする（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。ある実施形態では、本発明の莢膜糖を、遺伝子組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による発現を介して得られるＣＲＭ１９７のＡ鎖にコンジュゲートする（ＣＮ１０３４９５１６１を参照されたい）。ある実施形態では、本発明の莢膜糖を、全てＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。ある実施形態では、本発明の莢膜糖を、全てＣＲＭ１９７のＡ鎖にコンジュゲートする。
したがって、よくある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、莢膜多糖がＣＲＭ１９７に共有結合している、担体タンパク質としてＣＲＭ１９７を含む。
１．３ ２つ以上の糖を含む本発明の糖コンジュゲート
１．３．１ 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む本発明の糖コンジュゲート
本発明は、２つ以上の糖抗原が、タンパク質担体の同じ分子にコンジュゲートされている（すなわち、担体分子が、それらにコンジュゲートされた２つ以上の異なる莢膜糖を有する）、糖コンジュゲートに関する。
ある実施形態では、本発明は、担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む糖コンジュゲートに関する。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた５つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、５価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ａ、１５Ｂおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ａ、１５Ｂおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ａ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ｂ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ａおよび１５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ａおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ｂおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１５Ｂおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ａ、１５Ｂおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ａ、１５Ｂおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ａ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ｂ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ａ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８および１５Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１５Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８および１５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８および２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８および２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ａおよび１５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ａおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ｂおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１５Ｂおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａまたは８／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型８糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型８糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型８糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型８糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型８糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型８糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１５Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１５Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ａ糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ａ糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ａ糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ａ糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ａ糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ａ糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ａ糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ａ糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ａ糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ａ糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ａ糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ａ糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１５Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型１５Ａ糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型１５Ａ糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ｂ／２３Ａまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１５Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型１５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ａまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２３Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２３Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ａ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型８糖の血清型１５Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型８糖の血清型１５Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ａ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ａ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂまたは８／１５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型８糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型８糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂまたは８／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂまたは８／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１５Ａ糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１５Ａ糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型１５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型１５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１５Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１５Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１５Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１５Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、または８／１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型１５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型１５Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000001
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型１５Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、または８／１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型１５Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１５Ａ糖および約４個の１５Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型１５Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000002
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１５Ａ糖および約４個の２３Ａ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ａ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000003
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１５Ａ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000004
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１５Ｂ糖および約４個の２３Ａ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000005
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１５Ｂ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000006
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２３Ａ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000007
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１５Ｂ糖および約４個の２３Ａ糖に対して約１個の１５Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000008
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１５Ｂ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の１５Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000009
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２３Ａ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の１５Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000010
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２３Ａ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の１５Ｂ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型１５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000011
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１５Ａ糖、約１個の１５Ｂおよび約１個の２３Ａ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000012
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１５Ａ糖、約１個の１５Ｂおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８、血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000013
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１５Ａ糖、約１個の２３Ａおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000014
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１５Ｂ糖、約１個の２３Ａおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000015
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１５Ｂ糖、約１個の２３Ａおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000016
Figure 0007585203000017
Figure 0007585203000018
Figure 0007585203000019
上記の表のそれぞれの列ａ～ｈｃは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１５Ａ糖、約１個の１５Ｂ糖、約１個の２３Ａおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
ある実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ｂ／２３Ａまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
ある実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ｂ／２３Ａまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ａ、または２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。遊離糖とは、糖コンジュゲートを構成する血清型のうちの遊離糖の量を意味する（例えば、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートについては、それは遊離血清型８、１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａおよび２３Ｂ糖であることを意味し、血清型８／１５Ａ糖コンジュゲートについては、それは遊離血清型８および１５Ａ糖であることを意味する）。それを、糖コンジュゲートを構成する血清型の糖の総量と比較する（例えば、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートについては、それは血清型８、１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａおよび２３Ｂ糖の総量であることを意味し、血清型８／１５Ａ糖コンジュゲートについては、それは血清型８および１５Ａ糖の総量であることを意味する）。
好ましい実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型８、１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａおよび／または２３Ｂ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型８、１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａおよび／または２３Ｂ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型８、１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａおよび／または２３Ｂ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって、酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって、酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）
Figure 0007585203000020
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000021
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物と、ペルヨーデートとを反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって、酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を精製する。活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、前記糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の凍結乾燥混合物を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との混合物を同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、前記糖はスクロースである。次いで、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との同時凍結乾燥混合物を、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、
（ｃ）活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との混合物を混合するステップ；および
（ｄ）活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との混合物を、還元剤と反応させて、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒、好ましくは緩衝化水性溶媒中で実行される。ある実施形態では、還元反応は、アミン基を含有しない緩衝剤中で実行される。ある実施形態では、緩衝剤は、酢酸の塩（アセテート）、炭酸水素ナトリウム（重炭酸塩）、ホウ酸、ジメチルアルシン酸（カコジレート）、炭酸ナトリウム（炭酸塩）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、リン酸の塩（リン酸塩）およびコハク酸の塩（コハク酸塩）からなる群から選択される。ある実施形態では、緩衝剤は、酢酸の塩（アセテート）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、リン酸の塩（リン酸塩）およびコハク酸の塩（コハク酸塩）からなる群から選択される。ある実施形態では、緩衝剤は、リン酸の塩（リン酸塩）である。ある実施形態では、緩衝剤は、リン酸ナトリウムである。
好ましくは、前記緩衝剤は、１～１００ｍＭ、１～５０ｍＭ、１～２５ｍＭ、１～１０ｍＭ、５～５０ｍＭ、５～１５ｍＭ、５～１０ｍＭ、８～１２ｍＭまたは９～１１ｍＭの濃度を有する。ある実施形態では、前記緩衝剤は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｍＭの濃度を有する。
水性溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との混合物を復元することができる。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下での水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
担体タンパク質への血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖のコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．２ 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む本発明の糖コンジュゲート
本発明は、２つ以上の糖抗原が、タンパク質担体の同じ分子にコンジュゲートされている（すなわち、担体分子が、それらにコンジュゲートされた２つ以上の異なる莢膜糖を有する）、糖コンジュゲートに関する。
ある実施形態では、本発明は、担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む糖コンジュゲートに関する。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた５つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、５価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１１Ａ、１２Ｆおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１１Ａ、１２Ｆおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１１Ａ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１２Ｆ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１１Ａおよび１２Ｆを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１１Ａおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１１Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１２Ｆおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、１２Ｆおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１１Ａ、１２Ｆおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１１Ａ、１２Ｆおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１１Ａ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１２Ｆ、２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１１Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１１Ａ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８および１１Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／１２Ｆ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／１２Ｆ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８および１２Ｆを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８および２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型８および２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１１Ａおよび１２Ｆを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１１Ａおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１１Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１２Ｆおよび２３Ａを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１２Ｆおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それは、担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型２３Ａおよび２３Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａまたは８／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型８糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型８糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型８糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型８糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型８糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型８糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型８糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型８糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１１Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１１Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１１Ａ糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１１Ａ糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１１Ａ糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１１Ａ糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１１Ａ糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１１Ａ糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１１Ａ糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１１Ａ糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１１Ａ糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１１Ａ糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１１Ａ糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１１Ａ糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１１Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型１１Ａ糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型１１Ａ糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ、１１Ａ／１２Ｆ、１２Ｆ／２３Ａまたは１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１２Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型１２Ｆ糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ａまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２３Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ａ糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型２３Ａ糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２３Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
さらなる実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなるそのような実施形態では、血清型２３Ｂ糖は、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７００ｋＤａ；１００ｋＤａ～６００ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～９００ｋＤａ；２００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～９００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～９００ｋＤａ；３００ｋＤａ～８００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７００ｋＤａ；３００ｋＤａ～６００ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～９００ｋＤａ；４００ｋＤａ～８００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７００ｋＤａ；４００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは５００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１，００００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを特徴付けるための別の方法は、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１１Ａ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１１Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型８糖の血清型１１Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型８糖の血清型１１Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１１Ａ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１１Ａ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂまたは８／１２Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型８糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型８糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１２Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１２Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂまたは８／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂまたは８／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１１Ａ糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１１Ａ糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型１２Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型１２Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１１Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１１Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１１Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１１Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ａ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、または８／１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型１２Ｆ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型１２Ｆ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000022
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型１２Ｆ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、または８／１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型１２Ｆ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１１Ａ糖および約４個の１２Ｆ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型１２Ｆ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000023
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１１Ａ糖および約４個の２３Ａ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ａ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000024
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１１Ａ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000025
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１２Ｆ糖および約４個の２３Ａ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000026
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１２Ｆ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000027
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２３Ａ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000028
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１２Ｆ糖および約４個の２３Ａ糖に対して約１個の１１Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000029
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の１２Ｆ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の１１Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000030
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２３Ａ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の１１Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000031
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２３Ａ糖および約４個の２３Ｂ糖に対して約１個の１２Ｆ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000032
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１１Ａ糖、約１個の１２Ｆおよび約１個の２３Ａ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000033
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１１Ａ糖、約１個の１２Ｆおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８、血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000034
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１１Ａ糖、約１個の２３Ａおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000035
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１２Ｆ糖、約１個の２３Ａおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000036
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１２Ｆ糖、約１個の２３Ａおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000037
Figure 0007585203000038
Figure 0007585203000039
Figure 0007585203000040
上記の表のそれぞれの列ａ～ｈｃは、糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の１１Ａ糖、約１個の１２Ｆ糖、約１個の２３Ａおよび約１個の２３Ｂ糖に対して約１個の８糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．３、０．５、０．６、１．０、１．４、１．８、２．２、２．６、３．０、３．４、３．８、４．２、４．６または５ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり０．３～５ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６、１、１．４、１．８、２．２、２．６、３、３．４、３．８、４．２または４．６ｍＭのアセテートかつ血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり約５ｍＭ未満のアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６、１．０、１．４、１．８、２．２、２．６、または３．０ｍＭのアセテートかつ血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり約３．４ｍＭ未満のアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、イオン－ＨＰＬＣ分析によって決定される。
ある実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８または０．９ｍＭのグリセロールかつ血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり約１．０ｍＭ未満のグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．３、０．４、０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ａ、または２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
一部の実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのグリセロールを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのグリセロールを含む。
血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。遊離糖とは、糖コンジュゲートを構成する血清型のうちの遊離糖の量を意味する（例えば、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートについては、それは遊離血清型８、１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａおよび２３Ｂ糖であることを意味し、血清型８／１１Ａ糖コンジュゲートについては、それは遊離血清型８および１１Ａ糖であることを意味する）。それを、糖コンジュゲートを構成する血清型の糖の総量と比較する（例えば、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートについては、それは血清型８、１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａおよび２３Ｂ糖の総量であることを意味し、血清型８／１１Ａ糖コンジュゲートについては、それは血清型８および１１Ａ糖の総量であることを意味する）。
好ましい実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して、約４０％未満の遊離糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離糖を含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、糖の総量と比較して、約１５％未満の遊離糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型８、１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａおよび／または２３Ｂ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型８、１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａおよび／または２３Ｂ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型８、１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａおよび／または２３Ｂ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって、酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって、酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）
Figure 0007585203000041
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000042
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物と、ペルヨーデートとを反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって、酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を精製する。活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、前記糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の凍結乾燥混合物を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との混合物を同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、前記糖はスクロースである。次いで、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との同時凍結乾燥混合物を、溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物を、
（ｃ）活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との混合物を混合するステップ；および
（ｄ）活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との混合物を、還元剤と反応させて、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートすることができる。
ある実施形態では、還元的アミノ化反応は、水性溶媒、好ましくは緩衝化水性溶媒中で実行される。ある実施形態では、還元反応は、アミン基を含有しない緩衝剤中で実行される。ある実施形態では、緩衝剤は、酢酸の塩（アセテート）、炭酸水素ナトリウム（重炭酸塩）、ホウ酸、ジメチルアルシン酸（カコジレート）、炭酸ナトリウム（炭酸塩）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、ギ酸の塩（ギ酸塩）、リンゴ酸の塩（リンゴ酸塩）、マレイン酸の塩（マレイン酸塩）、リン酸の塩（リン酸塩）およびコハク酸の塩（コハク酸塩）からなる群から選択される。ある実施形態では、緩衝剤は、酢酸の塩（アセテート）、クエン酸の塩（クエン酸塩）、リン酸の塩（リン酸塩）およびコハク酸の塩（コハク酸塩）からなる群から選択される。ある実施形態では、緩衝剤は、リン酸の塩（リン酸塩）である。ある実施形態では、緩衝剤は、リン酸ナトリウムである。
好ましくは、前記緩衝剤は、１～１００ｍＭ、１～５０ｍＭ、１～２５ｍＭ、１～１０ｍＭ、５～５０ｍＭ、５～１５ｍＭ、５～１０ｍＭ、８～１２ｍＭまたは９～１１ｍＭの濃度を有する。ある実施形態では、前記緩衝剤は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５または５０ｍＭの濃度を有する。
水性溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２F、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、担体タンパク質との混合物を復元することができる。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下での水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
担体タンパク質への血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２F、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖のコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３ 担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む本発明の糖コンジュゲート
本発明は、２つ以上の糖抗原が、タンパク質担体の同じ分子にコンジュゲートされている（すなわち、担体分子が、それらにコンジュゲートされた２つ以上の異なる莢膜糖を有する）、糖コンジュゲートに関する。
ある実施形態では、本発明は、担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む糖コンジュゲートに関する。
１．３．３．１ 担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた４つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．１）の糖コンジュゲートはしたがって、４価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１０Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２２Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３３Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３５Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ/２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000043
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２２Ｆ糖および約４個の３３Ｆ糖に対して約１個の１０Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000044
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２２Ｆ糖および約４個の３５Ｂ糖に対して約１個の１０Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000045
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の３３Ｆ糖および約４個の３５Ｂ糖に対して約１個の１０Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000046
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の３３Ｆ糖および約４個の３５Ｂ糖に対して約１個の２２Ｆ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ、血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000047
上記の表のそれぞれの列ａ～ｂｍは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約１：約１（約１個の２２Ｆ糖、約１個の３３Ｆおよび約１個の３５Ｂ糖に対して約１個の１０Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、ＮＭＲ分析によって決定される。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、ＮＭＲ分析によって決定される。
血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000048
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000049
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を精製する。活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ｃ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下での水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．２ 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖を含み、担体タンパク質にコンジュゲートされた糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．２）の糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１０Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２２Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３３Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000050
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２２Ｆ糖および約４個の３３Ｆ糖に対して約１個の１０Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、ＮＭＲ分析によって決定される。
血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび／または３３Ｆ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび／または３３Ｆ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび／または３３Ｆ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000051
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000052
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を精製する。活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ｃ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．３ 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含み、担体タンパク質にコンジュゲートされた糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．３）の糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１０Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２２Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３５Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１，００００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１，００００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000053
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の２２Ｆ糖および約４個の３５Ｂ糖に対して約１個の１０Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、ＮＭＲ分析によって決定される。
血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび／または３５Ｂ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000054
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000055
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を精製する。活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ｃ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．４ 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含み、担体タンパク質にコンジュゲートされた糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．４）の糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１０Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３３Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３５Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000056
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の３３Ｆ糖および約４個の３５Ｂ糖に対して約１個の１０Ａ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、ＮＭＲ分析によって決定される。
血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000057
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000058
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を精製する。活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ｃ）活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．５ 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含み、担体タンパク質にコンジュゲートされた糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた３つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．５）の糖コンジュゲートはしたがって、３価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２２Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３３Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３５Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）は、以下の表内のいずれか１つによる。
Figure 0007585203000059
上記の表のそれぞれの列ａ～ｓは、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合を提供し、例えば、ａ列は、ある実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合が、それぞれ、約１：約１：約４（約１個の３３Ｆ糖および約４個の３５Ｂ糖に対して約１個の２２Ｆ糖（ｗ／ｗ））である、と読むべきである。好ましくは、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の質量は、それぞれの糖についてほぼ同じである（約１：１：１の比（ｗ／ｗ））。
一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、Ｏ－アセチル基の存在は、ＮＭＲ分析によって決定される。
血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000060
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000061
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を精製する。活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ｃ）活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．６ 担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖を含む糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．６）の糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１０Ａおよび２２Ｆを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１０Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２２Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型１０Ａおよび／または２２Ｆ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型１０Ａおよび／または２２Ｆ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型１０Ａおよび／または２２Ｆ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000062
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000063
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を精製する。活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を、
（ｃ）活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．７ 担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖を含む糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．７）の糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１０Ａおよび３３Ｆを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１０Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３３Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型１０Ａおよび／または３３Ｆ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型１０Ａおよび／または３３Ｆ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型１０Ａおよび／または３３Ｆ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000064
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000065
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を精製する。活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を、
（ｃ）活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．８ 担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．８）の糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型１０Ａおよび３５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１０Ａ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型１０Ａ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３５Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型１０Ａおよび／または３５Ｂ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型１０Ａおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型１０Ａおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000066
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000067
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を精製する。活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を、
（ｃ）活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．９ 担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖を含む糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．９）の糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型２２Ｆおよび３３Ｆを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２２Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３３Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型２２Ｆおよび／または３３Ｆ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型２２Ｆおよび／または３３Ｆ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型２２Ｆおよび／または３３Ｆ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000068
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000069
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を精製する。活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を、
（ｃ）活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下での水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．１０ 担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．１０）の糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型２２Ｆおよび３５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２２Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型２２Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３５Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型２２Ｆおよび／または３５Ｂ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型２２Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型２２Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000070
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000071
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）
の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を精製する。活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ｃ）活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下での水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
１．３．３．１１ 担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む糖コンジュゲート
ある実施形態では、本発明の糖コンジュゲートは、同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む（本明細書では以後、「血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート」）。前記実施形態では、担体分子は、それらにコンジュゲートされた２つの異なる莢膜糖を有する。好ましくは、本セクション（１．３．３．１１）の糖コンジュゲートはしたがって、２価糖コンジュゲートである（すなわち、それらは担体タンパク質にコンジュゲートされた血清型３３Ｆおよび３５Ｂを有し、担体タンパク質に共有結合した他の多糖抗原を有しない）。
一部の実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３３Ｆ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３３Ｆ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型３５Ｂ糖を含む。他のそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。一部の実施形態では、糖は、１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。他のそのような実施形態では、糖は、２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、７０ｋＤａ～９００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、１００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。別の実施形態では、糖は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
さらなるそのような実施形態では、血清型３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
一部の実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａ；または３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの分子量を有する。他の実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの分子量を有する。さらに他の実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａまたは３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの分子量を有する。さらなる実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、２００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；または２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、３，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａ；または４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する。
さらなる実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、５，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａ；５，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～２０，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１２，５００ｋＤａ；６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａまたは６，０００ｋＤａ～７，５００ｋＤａの分子量を有する。
糖コンジュゲートの分子量は、ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによって測定される。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを特徴付ける別の方法は、コンジュゲート化リシンの範囲（コンジュゲーション度）として特徴付けることができる、糖にコンジュゲートされる担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）中のリシン残基の数による。糖への共有結合に起因する、担体タンパク質のリシン改変に関する証拠を、当業者には公知の日常的な方法を使用するアミノ酸分析によって取得することができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を生成するために使用される担体タンパク質出発材料（例えば、ＣＲＭ１９７）と比較して、回収されるリシン残基数の減少をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、２～１５、２～１３、２～１０、２～８、２～６、２～５、２～４、３～１５、３～１３、３～１０、３～８、３～６、３～５、３～４、５～１５、５～１０、８～１５、８～１２、１０～１５または１０～１２である。ある実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートのコンジュゲーション度は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０（例えば、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０）である。他の実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の担体タンパク質に対する比は、０．９～１．１である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）によって特徴付けることもできる。一部の実施形態では、糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．２５～４．０（例えば、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０）である。他の実施形態では、血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０、０．５～１．５、０．８～１．２、０．５～１．０、１．０～１．５または１．０～２．０である。さらなる実施形態では、血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、０．９～１．１であり、さらにより好ましくは、コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比は、約１．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＤＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＴＴである。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＰＤである。
ある実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
ある実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．５、０．６または０．７ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．６ｍＭのアセテートを含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３５Ｂ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．７ｍＭのアセテートを含む。
血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを、その分子サイズ分布（Ｋｄ）によって特徴付けることもできる。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対分子サイズ分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、コンジュゲートの分子サイズ分布をプロファイリングするために重力送りのカラム中で使用される。媒体中の小孔から排除される大きい分子は、低分子よりも迅速に溶出する。画分収集装置を使用して、カラム溶出液を収集する。画分を、糖アッセイによる比色分析で試験する。Ｋｄの決定のために、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を示す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立するために、カラムを較正する。特定の試料特性に達する画分（Ｖｅ）を、式Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によってＫｄと関連させる。
好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で、０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する。
本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、担体タンパク質に共有結合によりコンジュゲートされていないが、それにも拘わらず、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート組成物中に存在する遊離糖を含有してもよい。遊離糖は、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートと非共有結合していてもよい（すなわち、非共有結合する、吸着する、またはその中に、もしくはそれと共に捕捉される）。
好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２５％未満の遊離血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約２０％未満の遊離血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む。
好ましい実施形態では、本発明の血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートは、還元的アミノ化を使用して調製される。
還元的アミノ化は、２つのステップ、（１）糖の酸化（活性化）、（２）コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７、ＤＴ、ＴＴまたはＰＤ）の還元を含む。
酸化の前に、血清型３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖の、標的分子量（ＭＷ）範囲へのサイジングを実施することができる。機械的または化学的加水分解を用いることができる。化学的加水分解を、酢酸を使用して行うことができる。有利には、精製された血清型３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、例えば、Ｏ－アセチル基の存在などの糖の構造の重要な特徴を保存しながら、減少させる。したがって、好ましくは、精製された血清型３３Ｆおよび／または３５Ｂ糖のサイズを、機械的ホモジェナイゼーションによって減少させる。
ある実施形態では、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、酸化剤と反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
これらの実施形態では、したがって、糖は混合物として一緒に活性化される。
別の実施形態では、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を別々に活性化（酸化）した後、活性化された糖を混合する。
前記実施形態では、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
前記プロセスは、クエンチングステップをさらに含んでもよい。
したがって、ある実施形態では、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、酸化剤と個別に反応させるステップ；
（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を得るステップ；
（ｃ）活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップ
を含むプロセスによって活性化（酸化）する。
酸化ステップは、ペルヨーデートとの反応を含んでもよい。本発明の目的のために、用語「ペルヨーデート」は、過ヨウ素酸塩と過ヨウ素酸の両方を含む；この用語はまた、メタ過ヨウ素酸イオン（ＩＯ４ －）とオルト過ヨウ素酸イオン（ＩＯ６ ５－）の両方およびペルヨーデートの様々な塩（例えば、過ヨウ素酸ナトリウムおよび過ヨウ素酸カリウム）も含む。
好ましい実施形態では、酸化剤は、過ヨウ素酸ナトリウムである。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタペルヨーデートである。好ましい実施形態では、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化のために使用されるペルヨーデートは、メタ過ヨウ素酸ナトリウムである。
一実施形態では、クエンチング剤は、隣接ジオール、１，２－アミノアルコール、アミノ酸、グルタチオン、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、式（Ｉ）：
Figure 0007585203000072
 （式中、Ｒ１は、Ｈ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）の１，２－アミノアルコールである。
一実施形態では、クエンチング剤は、亜硫酸塩、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩、亜リン酸塩、次亜リン酸塩または亜リン酸のナトリウムおよびカリウム塩から選択される。
一実施形態では、クエンチング剤は、アミノ酸である。そのような実施形態では、前記アミノ酸を、セリン、トレオニン、システイン、シスチン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、トリプトファン、チロシン、およびヒスチジンから選択することができる。
一実施形態では、クエンチング剤は、重硫酸塩、亜ジチオン酸塩、メタ重亜硫酸塩、チオ硫酸塩などの亜硫酸塩である。
一実施形態では、クエンチング剤は、２つの隣接ヒドロキシル基（隣接ジオール）、すなわち、２個の隣接する炭素原子に共有結合により連結された２個のヒドロキシル基を含む化合物である。
好ましくは、クエンチング剤は、式（ＩＩ）：
Figure 0007585203000073
 （式中、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立にＨ、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピルから選択される）の化合物である。
好ましい実施形態では、クエンチング剤は、グリセロール、エチレングリコール、プロパン－１，２－ジオール、ブタン－１，２－ジオールまたはブタン－２，３－ジオール、またはアスコルビン酸である。好ましい実施形態では、クエンチング剤は、ブタン－２，３－ジオールである。
好ましい実施形態では、単離された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ａ）単離された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を、ペルヨーデートと反応させるステップ；
（ｂ）ブタン－２，３－ジオールの添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物を得るステップ
を含むプロセスによって活性化する。
糖の酸化ステップの後、糖は活性化されていると言われ、本明細書の以下で「活性化された糖」と称される。
好ましい実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を精製する。活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、透析または限外濾過／透析濾過などの当業者には公知の方法に従って精製する。例えば、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、限外濾過デバイスを使用する濃縮および透析濾過によって精製する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の酸化度は、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である。好ましい実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ多糖の酸化度は、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である。
好ましい実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
ある実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、２５ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、１００ｋＤａ～３，０００ｋＤａ、２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～８００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～７００ｋＤａ、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａ、３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは３００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
ある実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、３００ｋＤａ～８００ｋＤａの分子量を有する。ある実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する。
好ましい実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２５、１０～２０、１２～２０または１４～１８の酸化度を有する。好ましい実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量および１０～２０の酸化度を有する。
活性化された多糖および／または担体タンパク質を、独立に（個別凍結乾燥）または一緒に（同時凍結乾燥）、凍結乾燥（凍結－乾燥）することができる。
ある実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。一実施形態では、次いで、凍結乾燥された活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質を含む溶液と混合する。
別の実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを同時凍結乾燥する。そのような実施形態では、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、担体タンパク質と混合し、場合により、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥する。好ましい実施形態では、糖はスクロースである。次いで、同時凍結乾燥された活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、担体タンパク質とを溶液中に再懸濁し、還元剤と反応させることができる。
コンジュゲーションプロセスの第２のステップは、還元剤を使用した、コンジュゲートを形成させるための活性化された糖および担体タンパク質の還元（還元的アミノ化）である。
活性化された血清３３Ｆおよび３５Ｂ糖を、
（ｃ）活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を担体タンパク質と混合するステップ；ならびに
（ｄ）混合された活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを、還元剤と反応させて、血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲートを形成させるステップ
を含むプロセスによって担体タンパク質にコンジュゲートさせることができる。
ある実施形態では、還元反応は、水性溶媒中で実行される。しかし好ましくは、反応は、非プロトン溶媒中で実行される。好ましい実施形態では、還元反応は、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される。ＤＭＳＯまたはＤＭＦ溶媒を使用して、凍結乾燥された、活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖と担体タンパク質とを復元することができる。
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中での還元的アミノ化による活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、タンパク質担体とのコンジュゲーションは、例えば、糖のＯ－アセチル化のレベルが有意に低い可能性がある水相中での還元的アミノ化と比較して、糖のＯ－アセチル含量を保持するのに好適である。したがって、好ましい実施形態では、ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）は、ＤＭＳＯ中で実行される。
ある実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下での水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランである。好ましい実施形態では、還元剤は、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである。
還元反応の終わりに、コンジュゲート中に残存する未反応のアルデヒド基があってもよく、これらのものを、好適なキャッピング剤を使用してキャップすることができる。一実施形態では、このキャッピング剤は、水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）である。
血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の、担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートを、当業者には公知の様々な技術によって精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技術としては、透析、濃縮／透析濾過操作、接線流濾過沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、および深層濾過が挙げられる。
２ 本発明の免疫原性組成物
２．１ 上のセクション１に開示された少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物
本発明の免疫原性組成物は、典型的には、上のセクション１に開示された少なくとも１つの糖コンジュゲートを含むであろう。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、上のセクション１に開示された１つの糖コンジュゲートを含む。別の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、上のセクション１に開示された２つの糖コンジュゲートを含む。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、上のセクション１に開示された３つ以上の糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１５Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１５Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ａまたは１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ａ、８／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ｂ、８／２３Ｂまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ｂ、８／２３Ａまたは１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ａ、８／２３Ｂまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ａ、８／２３Ａまたは１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ａ、８／１５Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートおよび１つの血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１１Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１１Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／１２Ｆ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ａまたは１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ａ、８／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１２Ｆ、８／２３Ｂまたは１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１２Ｆ、８／２３Ａまたは１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１１Ａ、８／２３Ｂまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１１Ａ、８／２３Ａまたは１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１１Ａ、８／１２Ｆまたは１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１０Ａ／２２Ｆ糖コンジュゲート（上のセクション１．３．３．６に開示されたものなど）および１つの血清型３３Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート（上のセクション１．３．３．１１に開示されたものなど）を含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１０Ａ／３３Ｆ糖コンジュゲート（上のセクション１．３．３．７に開示されたものなど）および１つの血清型２２Ｆ／３５Ｂ糖コンジュゲート（上のセクション１．３．３．１０に開示されたものなど）を含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１つの血清型１０Ａ／３５Ｂ糖コンジュゲート（上のセクション１．３．３．８に開示されたものなど）および１つの血清型２２Ｆ／３３Ｆ糖コンジュゲート（上のセクション１．３．３．９に開示されたものなど）を含む。
２．２ 糖コンジュゲートをさらに含む本発明の免疫原性組成物
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物、特に、セクション２．１の免疫原性組成物は、さらなる糖コンジュゲートを含んでもよい。ある実施形態では、セクション２．１の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する糖コンジュゲートからなる群から選択される少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む。好ましくは、前記さらなる糖コンジュゲートは、個別にコンジュゲートされた糖コンジュゲートである（すなわち、莢膜糖が担体タンパク質に別々にコンジュゲートされ、タンパク質担体のそれぞれの分子が、それにコンジュゲートされた１つの型の糖だけを有する）。前記実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされていると言われる。
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する莢膜多糖は、当業者には公知の標準的な技術によって調製される（例えば、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／１１８７５２、ＷＯ２００６／１１０３５２、ＷＯ２０１５／１１０９４１ならびに米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００６／０２２８３８１号、第２００８／０１０２４９８号および第２００８／０２８６８３８号を参照されたい）。
ある実施形態では、多糖を、１－シアノ－４－ジメチルアミノピリジニウムテトラフルオロホウ酸（ＣＤＡＰ）を用いて活性化して、シアン酸エステルを形成させる。次いで、活性化された多糖を、担体タンパク質（セクション１．２の１つなど、好ましくはＣＲＭ１９７）上のアミノ基に、直接的に、またはスペーサー（リンカー）基を介してカップリングさせる。例えば、スペーサーは、マレイミド活性化された担体タンパク質（例えば、Ｎ－［γ－マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）を使用する）またはハロアセチル化された担体タンパク質（例えば、ヨードアセトイミド、Ｎ－スクシンイミジルブロモ酢酸（ＳＢＡ；ＳＩＢ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸（ＳＩＡＢ）、スルホスクシンイミジル（４－ヨードアセチル）アミノ安息香酸（スルホ－ＳＩＡＢ）、Ｎ－スクシンイミジルヨード酢酸（ＳＩＡ）、もしくはスクシンイミジル３－［ブロモアセトアミド］プロピオン酸（ＳＢＡＰ）を使用する）との反応後に得られるチオエーテル結合によって担体にカップリングすることができるチオール化された多糖を得るためのシスタミンまたはシステアミンであってよい。好ましくは、シアン酸エステル（ＣＤＡＰ化学によって作製してもよい）を、ヘキサンジアミンまたはアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）とカップリングし、アミノ誘導体化された糖を、タンパク質担体上のカルボキシル基を介してカルボジイミド（例えば、ＥＤＡＣまたはＥＤＣ）化学を使用して担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）にコンジュゲートする。そのようなコンジュゲートは、例えば、ＷＯ９３／１５７６０、ＷＯ９５／０８３４８およびＷＯ９６／１２９０９４に記載されている。
コンジュゲーションのための他の好適な技術は、カルボジイミド、ヒドラジド、活性エステル、ノルボラン、ｐ－ニトロ安息香酸、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、Ｓ－ＮＨＳ、ＥＤＣ、ＴＳＴＵを使用する。多くは、国際特許出願公開番号ＷＯ９８／４２７２１に記載されている。コンジュゲーションは、糖の遊離ヒドロキシル基と、１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）との反応（Ｂｅｔｈｅｌｌら（１９７９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５４：２５７２～２５７４；Ｈｅａｒｎら（１９８１）Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．２１８：５０９～５１８を参照されたい）、次いで、タンパク質と反応させてカルバメート結合を形成させることによって形成させることができるカルボニルリンカーを含んでもよい。これは、一次ヒドロキシル基へのアノマー末端の還元、一次ヒドロキシル基の任意選択の保護／脱保護、ＣＤＩカルバメート中間体を形成する一次ヒドロキシル基とＣＤＩとの反応およびタンパク質上でのＣＤＩカルバメート中間体と、アミノ基とのカップリングを含んでもよい。
好ましい実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する少なくとも１つの莢膜多糖を、還元的アミノ化によって担体タンパク質（セクション１．２の１つなど、好ましくはＣＲＭ１９７）にコンジュゲートさせる（米国特許出願公開第２００６／０２２８３８０号、第２００７／０２３１３４０号、第２００７／０１８４０７１号および第２００７／０１８４０７２号、ＷＯ２００６／１１０３８１、ＷＯ２００８／０７９６５３、およびＷＯ２００８／１４３７０９などに記載されている）。好ましい実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆおよび２３Ｆに由来する莢膜多糖を、還元的アミノ化によって担体タンパク質（セクション１．２の１つなど、好ましくはＣＲＭ１９７）にコンジュゲートさせる。ある実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する莢膜多糖を、還元的アミノ化によって担体タンパク質（セクション１．２の１つなど、好ましくはＣＲＭ１９７）にコンジュゲートさせる。
ある実施形態では、セクション２．１の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．１の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．１の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．１の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．１の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．２の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．３の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．５の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．６の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．７の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．８の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、２２Ｆおよび３３Ｆ、２２Ｆおよび１２Ｆ、２２Ｆおよび１０Ａ、２２Ｆおよび１１Ａ、３３Ｆおよび１２Ｆ、３３Ｆおよび１０Ａ、３３Ｆおよび１１Ａ、１２Ｆおよび１０Ａ、１２Ｆおよび１１Ａならびに１０Ａおよび１１Ａからなる群から選択される２つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、以下の３つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型：
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、または
１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ
のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、以下の４つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型：
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、または
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ
のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、以下の５つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型：
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ
のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．８の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
ある実施形態では、上の免疫原性組成物のいずれかは、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖コンジュゲート（ＷＯ２０１５／１１０９４１のセクション１．３．４の糖コンジュゲートなど）をさらに含む。
好ましくは、上記免疫原性組成物の全てのさらなる糖コンジュゲート（セクション２．２．１に記載の）は、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされる。
上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａに由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。上記免疫原性組成物のいずれかの実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する糖コンジュゲートを、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。
ある実施形態では、本セクションの上記免疫原性組成物のいずれかのさらなる糖コンジュゲートを、全て個別にＣＲＭ１９７にコンジュゲートする。
ある実施形態では、本セクションの上記免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および／または２３Ｆに由来するさらなる糖コンジュゲートを、ＰＤに個別にコンジュゲートする。
ある実施形態では、本セクションの上記免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来するさらなる糖コンジュゲートを、ＴＴにコンジュゲートする。
ある実施形態では、本セクションの上記免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来するさらなる糖コンジュゲートを、ＤＴにコンジュゲートする。
ある実施形態では、本セクションの上記免疫原性組成物のいずれかの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および／または２３Ｆに由来するさらなる糖コンジュゲートを、ＰＤに個別にコンジュゲートし、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来するさらなる糖コンジュゲートを、ＴＴにコンジュゲートし、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来するさらなる糖コンジュゲートを、ＤＴにコンジュゲートする。
ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の２～２０種の異なる血清型を含む。一実施形態では、上記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０種の異なる血清型に由来する糖を含む。
ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である（価数は、組成物中に含有される肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の異なる血清型の数によって定義され、１価糖コンジュゲートは１種に値し、２価糖コンジュゲートは２種に値する、など）。ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、２、３、４または５価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、または２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、１８価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。ある実施形態では、上記免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌コンジュゲート組成物である。
莢膜多糖の担体タンパク質へのコンジュゲーション後、糖コンジュゲートは、様々な技術によって精製される（多糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化される）。これらの技術は、濃縮／透析濾過操作、沈降／溶出、カラムクロマトグラフィー、および深層濾過を含む（例えば、米国特許出願公開第２００７／０１８４０７２号またはＷＯ２００８／０７９６５３を参照されたい）。個々の糖コンジュゲートを精製した後、それらを混合して、本発明の免疫原性組成物を製剤化する。
３ 免疫原性組成物の投与量
各用量中の糖コンジュゲートの量は、典型的なワクチン被接種者において有意で有害な副作用なしに免疫防御応答を誘導する量として選択される。そのような量は、どの特定の免疫原が用いられ、およびそれがどのように提供されるかに応じて変化するであろう。
３．１ 糖コンジュゲートの量
免疫原性組成物中の特定の糖コンジュゲートの量を、そのコンジュゲート（コンジュゲート化および非コンジュゲート化）に関する全糖に基づいて算出することができる。例えば、２０％の遊離糖を含む糖コンジュゲートは、１００μｇの糖用量中に約８０μｇのコンジュゲート化糖および約２０μｇの非コンジュゲート化糖を有するであろう。糖コンジュゲートの量は、肺炎球菌血清型に応じて変化してもよい。糖濃度は、ウロン酸アッセイによって決定することができる。
免疫原性組成物中の異なる糖成分の「免疫原性量」は、異なってもよく、それぞれ、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、または約１００μｇの任意の特定の糖抗原を含んでもよい。
一般に、それぞれの用量は、所与の血清型について、０．１μｇ～１００μｇの糖、具体的には、０．５μｇ～２０μｇ、より具体的には１．０μｇ～１０μｇ、さらにより具体的には２．０μｇ～５．０μｇの糖を含むであろう。上記の範囲のいずれかの中の任意の全整数が、本開示の実施形態として企図される。
３．２ 担体の量
一般に、それぞれの用量は、１０μｇ～１５０μｇの担体タンパク質、具体的には１５μｇ～１００μｇの担体タンパク質、より具体的には２５μｇ～７５μｇの担体タンパク質、さらにより具体的には、４０μｇ～６０μｇの担体タンパク質を含むであろう。一実施形態では、前記担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
ある実施形態では、それぞれの用量は、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇ、約５０μｇ、約５１μｇ、約５２μｇ、約５３μｇ、約５４μｇ、約５５μｇ、約５６μｇ、約５７μｇ、約５８μｇ、約５９μｇ、約６０μｇ、約６１μｇ、約６２μｇ、約６３μｇ、約６４μｇ、約６５μｇ、約６６μｇ、約６７μｇ、約６８μｇ、約６９μｇ、約７０μｇ、約７１μｇ、約７２μｇ、約７３μｇ、約７４μｇまたは約７５μｇの担体タンパク質を含むであろう。ある実施形態では、前記担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７である。
４ さらなる抗原
本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲート化肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖抗原（糖コンジュゲート）を含む。それらはまた、他の病原体、特に、細菌および／またはウイルスに由来する抗原をさらに含んでもよい。好ましいさらなる抗原は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、典型的には、無細胞性（Ｐａ）である百日咳抗原（Ｐ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲート化ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型莢膜糖（Ｈｉｂ）、不活化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）から選択される。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａを含む。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－Ｈｉｂ、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＩＰＶまたはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇを含む。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶまたはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－Ｈｉｂを含む。ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶ－Ｈｉｂを含む。
百日咳抗原：百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）は、百日咳を引き起こす。ワクチン中の百日咳抗原は、細胞性（不活化百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）細胞の形態の、全細胞）または無細胞性のいずれかである。細胞性百日咳抗原の調製は、文書で十分に立証されている（例えば、それを、百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の第Ｉ相培養物の熱不活化によって取得することができる）。しかしながら、好ましくは、本発明は無細胞性抗原を使用する。無細胞性抗原を使用する場合、以下の抗原：（１）解毒された百日咳毒素（百日咳トキソイド、またはＰＴ）；（２）繊維性ヘマグルチニン（ＦＨＡ）；（３）ペルタクチン（６９キロダルトン外膜タンパク質としても知られる）のうちの１、２または（好ましくは）３つを使用することが好ましい。ＦＨＡおよびペルタクチンを、本発明による使用の前にホルムアルデヒドで処理してもよい。ＰＴを、好ましくは、ホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドを用いる処理によって解毒する。無細胞性百日咳抗原を、好ましくは、１つまたは複数のアルミニウム塩アジュバント上に吸着させる。代替手段として、それらを非吸着状態で添加してもよい。ペルタクチンを添加する場合、それは水酸化アルミニウムアジュバント上に既に吸着されていることが好ましい。ＰＴおよびＦＨＡを、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウム上に吸着させてもよい。ＰＴ、ＦＨＡおよびペルタクチンの全部の水酸化アルミニウムへの吸着が最も好ましい。
不活化ポリオウイルスワクチン：ポリオウイルスは、急性灰白髄炎を引き起こす。経口ポリオウイルスワクチンを使用するよりもむしろ、本発明の好ましい実施形態は、ＩＰＶを使用する。患者への投与の前に、ポリオウイルスを不活化しなければならず、これを、ホルムアルデヒドを用いる処理によって達成することができる。急性灰白髄炎は、３つの型のポリオウイルスのうちの１つによって引き起こされ得る。３つの型は類似しており、同一の症状を引き起こすが、それらは抗原的には異なるものであり、１つの型による感染は他の型による感染に対し防御をもたらさない。したがって、本発明では、３つのポリオウイルス抗原：ポリオウイルス１型（例えば、Ｍａｈｏｎｅｙ株）、ポリオウイルス２型（例えば、ＭＥＦ－１株）、およびポリオウイルス３型（例えば、Ｓａｕｋｅｔｔ株）を使用することが好ましい。ウイルスを、好ましくは、個別に増殖させ、精製し、不活化した後、混合して、本発明と共に使用するためのバルク３価混合物を得る。
ジフテリアトキソイド：ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）は、ジフテリアを引き起こす。ジフテリア毒素を、注射後に特異的抗毒素抗体を誘導する能力を保持しながら、毒性を除去するために処理する（例えば、ホルマリンまたはホルムアルデヒドを使用する）ことができる。これらのジフテリアトキソイドを、ジフテリアワクチンにおいて使用する。好ましいジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されるものである。増殖培地中でジフテリア菌（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）を増殖させた後、ホルムアルデヒド処理、限外濾過および沈降化を行うことによって、ジフテリアトキソイドを取得することができる。次いで、トキソイド化された材料を、滅菌濾過および／または透析濾過を含むプロセスによって処理することができる。ジフテリアトキソイドを、好ましくは、水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着させる。
破傷風トキソイド：破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）は、破傷風を引き起こす。破傷風毒素を処理して、防御トキソイドを得ることができる。トキソイドを、破傷風ワクチンにおいて使用する。好ましい破傷風トキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されるものである。増殖培地中で破傷風菌（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）を増殖させた後、ホルムアルデヒド処理、限外濾過および沈降化を行うことによって、破傷風トキソイドを取得することができる。次いで、材料を、滅菌濾過および／または透析濾過を含むプロセスによって処理することができる。
Ａ型肝炎ウイルス抗原：Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす既知の因子の１つである。好ましいＨＡＶ成分は、不活化ウイルスに基づくものであり、不活化を、ホルマリン処理によって達成することができる。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす既知の因子の１つである。キャプシドの主要成分は、ＨＢＶ表面抗原、またはより一般的には、ＨＢｓＡｇとして知られるタンパク質であり、典型的には、２２６アミノ酸のポリペプチドであり、約２４ｋＤａの分子量を有する。全ての現行のＢ型肝炎ワクチンはＨＢｓＡｇを含有し、この抗原を正常なワクチン被接種者に投与した場合、それはＨＢＶ感染に対し防御をもたらす抗ＨＢｓＡｇ抗体の産生を刺激する。
ワクチン製造のために、ＨＢｓＡｇは２つの方法：慢性Ｂ型肝炎キャリアの血漿からの粒子状形態の抗原の精製または組換えＤＮＡ法によるタンパク質の発現（例えば、酵母細胞中での組換え発現）で作製されてきた。天然のＨＢｓＡｇ（すなわち、血漿精製生成物中のような）と違って、酵母により発現されるＨＢｓＡｇは一般に、非グリコシル化されており、これは本発明と共に使用するための最も好ましい形態のＨＢｓＡｇである。
コンジュゲート化ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型抗原：ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型（Ｈｉｂ）は、細菌性髄膜炎を引き起こす。Ｈｉｂワクチンは、典型的には、莢膜糖抗原に基づくものであり、その調製は文書で十分に立証されている。Ｈｉｂ糖を担体タンパク質にコンジュゲートして、特に小児において、その免疫原性を増強することができる。典型的な担体タンパク質は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、および血清群Ｂの髄膜炎菌に由来する外膜タンパク質複合体である。コンジュゲートの糖部分は、Ｈｉｂ細菌から調製される完全長ポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）、および／または完全長ＰＲＰの断片を含んでもよい。Ｈｉｂコンジュゲートは、アルミニウム塩アジュバントに吸着させても、または吸着させなくてもよい。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲート化髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清群Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
４ アジュバント
一部の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、少なくとも１、２または３つのアジュバントをさらに含んでもよい。用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫応答を増強する化合物または混合物を指す。抗原は、主に送達系として、主に免疫モジュレーターとして作用するか、または両方の強力な特徴を有してもよい。好適なアジュバントとしては、ヒトを含む哺乳動物中での使用にとって好適なものが挙げられる。
ヒトにおいて使用することができる公知の好適な送達系型アジュバントの例としては、限定されるものではないが、ミョウバン（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、ＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．５％ｗ／ｖポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）、０．５％ｗ／ｖソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ８５））などの水中油エマルジョン、モンタニドなどの油中水エマルジョン、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧ）マイクロ粒子またはナノ粒子が挙げられる。
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとしてアルミニウム塩（ミョウバン）（例えば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）を含む。好ましい実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとしてリン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムを含む。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムの形態で、０．１ｍｇ／ｍＬ～１ｍｇ／ｍＬまたは０．２ｍｇ／ｍＬ～０．３ｍｇ／ｍＬのアルミニウム元素を含む。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムの形態で約０．２５ｍｇ／ｍＬのアルミニウム元素を含む。
ヒトにおいて使用することができる公知の好適な免疫調節型アジュバントの例としては、限定されるものではないが、アクイラ（Ａｑｕｉｌｌａ）樹皮からのサポニン抽出物（ＱＳ２１、ＱｕｉｌＡ）、ＭＰＬ（モノホスホリルリピドＡ）、３ＤＭＰＬ（３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ）またはＧＬＡ－ＡＱなどのＴＬＲ４アゴニスト、ＬＴ／ＣＴ突然変異体、種々のインターロイキン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１２）またはＧＭ－ＣＳＦなどのサイトカインなどが挙げられる。
ヒトにおいて使用することができる送達特性と免疫調節特性との両方を示す公知の好適な免疫調節型アジュバントの例としては、限定されるものではないが、ＩＳＣＯＭＳ（例えば、Ｓｊｏｌａｎｄｅｒら（１９９８）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．６４：７１３；ＷＯ９０／０３１８４、ＷＯ９６／１１７１１、ＷＯ００／４８６３０、ＷＯ９８／３６７７２、ＷＯ００／４１７２０、ＷＯ２００６／１３４４２３およびＷＯ２００７／０２６１９０を参照されたい）またはＴＬＲ４アゴニストと水中油エマルジョンとの組合せであるＧＬＡ－ＥＭが挙げられる。
限定されるものではないが、動物実験などの獣医学的適用のために、当業者であれば、Ｆｒｅｕｎｄの完全アジュバント（ＣＦＡ）、Ｆｒｅｕｎｄの不完全アジュバント（ＩＦＡ）、Ｅｍｕｌｓｉｇｅｎ、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－トレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチル－ノル－ムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ＣＧＰ １１６３７、ノル－ＭＤＰと称される）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン（ＣＧＰ１９８３５Ａ、ＭＴＰ－ＰＥと称される）、および２％スクアレン／Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０エマルジョン中に細菌から抽出される３つの成分、モノホスホリルリピドＡ、トレハロースジミコレートおよび細胞壁骨格（ＭＰＬ＋ＴＤＭ＋ＣＷＳ）を含有する、ＲＩＢＩを使用することができる。
本明細書に開示される肺炎球菌ワクチンの有効性を増強するためのさらなる例示的なアジュバントとしては、限定されるものではないが、（１）例えば、（ａ）１０％スクアラン、０．４％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、５％プルロニック（登録商標）遮断ポリマーＬ１２１、およびマイクロメートル以下のエマルジョンにマイクロ流体化された、またはより大きい粒径のエマルジョンを生成するためにボルテックスされたｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ、ならびに（ｂ）２％スクアレン、０．２％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０、およびモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくは、ＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））などの１つまたは複数の細菌細胞壁成分を含有するＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、Ｈａｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）などの、水中油エマルジョン製剤（ムラミルペプチド（以下を参照されたい）または細菌細胞壁成分などの他の特定の免疫刺激剤を含む、または含まない）；（２）ＱＳ２１、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ、ＭＡ）、ＡＢＩＳＣＯ（登録商標）（Ｉｓｃｏｎｏｖａ、Ｓｗｅｄｅｎ）、または使用することができるＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（登録商標）（Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｓｅｒｕｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）もしくはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）などの、それから生成される粒子（ＩＳＣＯＭはさらなる洗剤を含まなくてもよい（例えば、ＷＯ００／０７６２１を参照されたい））などのサポニンアジュバント；（３）完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバント（ＣＦＡ）および不完全Ｆｒｅｕｎｄアジュバント（ＩＦＡ）；（４）インターロイキン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２（例えば、ＷＯ９９／４４６３６を参照されたい））、インターフェロン（例えば、ガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカイン；（５）必要に応じて、肺炎球菌糖類（例えば、ＷＯ００／５６３５８を参照されたい）と共に使用した場合、ミョウバンの実質的な非存在下にある、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（例えば、ＧＢ－２２２０２２１、ＥＰ０６８９４５４を参照されたい）；（６）３ｄＭＰＬと、例えば、ＱＳ２１および／または水中油エマルジョンとの組合せ（例えば、ＥＰ０８３５３１８、ＥＰ０７３５８９８、ＥＰ０７６１２３１を参照されたい）；（７）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（例えば、ＷＯ９９／５２５４９を参照されたい）；（８）オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（例えば、ＷＯ０１／２１２０７）またはオクトキシノールなどの少なくとも１つのさらなる非イオン性界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤（例えば、ＷＯ０１／２１１５２）；（９）サポニンおよび免疫刺激オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴヌクレオチド）（例えば、ＷＯ００／６２８００）；（１０）免疫刺激剤および金属塩の粒子（例えば、ＷＯ００／２３１０５を参照されたい）；（１１）サポニンおよび水中油エマルジョン（例えば、ＷＯ９９／１１２４１）；（１２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（必要に応じて、＋ステロール）（例えば、ＷＯ９８／５７６５９）；（１３）組成物の効能を増強するための免疫刺激剤として作用する他の物質が挙げられる。ムラミルペプチドとしては、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－トレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－２５アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ノル－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン（ＭＴＰ－ＰＥ）などが挙げられる。
本発明の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、アジュバントとしてＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。本明細書で使用される場合、ＣｐＧオリゴヌクレオチドとは、免疫刺激ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）を指し、したがって、これらの用語は、別途指摘しない限り、互換的に使用される。免疫刺激ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、必要に応じて、ある特定の好ましい塩基の文脈内で、非メチル化シトシン－グアニンジヌクレオチドである、１つまたは複数の免疫刺激ＣｐＧモチーフを含有する。ＣｐＧ免疫刺激モチーフのメチル化状態は一般に、ジヌクレオチド中のシトシン残基を指す。少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する免疫刺激オリゴヌクレオチドは、３’グアニンにリン酸結合によって連結された５’非メチル化シトシンを含有し、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ－９）への結合によって免疫系を活性化するオリゴヌクレオチドである。別の実施形態では、免疫刺激オリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ９を介して免疫系を活性化するが、あたかもＣｐＧモチーフが非メチル化されたかのように強力ではない、１つまたは複数のメチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有してもよい。ＣｐＧ免疫刺激オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のパリンドロームを含んでもよく、次いで、ＣｐＧジヌクレオチドを包含してもよい。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、米国特許第６，１９４，３８８号；第６，２０７，６４６号；第６，２１４，８０６号；第６，２１８，３７１号；第６，２３９，１１６号；および第６，３３９，０６８号を含む、いくつかの発行された特許、公開特許出願、および他の刊行物に記載されている。
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の３頁、２２行目～１２頁、３６行目またはＷＯ２０１５／１１０９４１の１０７頁、２９行目～１１３頁、２行目に記載されたＣｐＧオリゴヌクレオチドのいずれかを含む。
本発明の一部の実施形態では、ＣｐＧ含有核酸を、当業者には公知の方法に従って、免疫原性担体と簡単に混合することができる（例えば、ＷＯ０３／０２４４８０を参照されたい）。
本発明の特定の実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物はいずれも、２μｇ～１００ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．１ｍｇ～５０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．２ｍｇ～１０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．３ｍｇ～５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．３ｍｇ～５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、さらに好ましくは、０．５～２ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、さらに好ましくは０．７５～１．５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。好ましい実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物はいずれも、約１ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。
５ 製剤
本発明の免疫原性組成物を、液体形態（すなわち、溶液もしくは懸濁液）または凍結乾燥形態で製剤化することができる。有利には、液体製剤を、その包装形態から直接投与することができ、かくして、それらは、そうでなければ凍結乾燥された本発明の組成物にとって必要とされる水性媒体中での復元を必要とすることがなく、注射にとって理想的である。
本発明の免疫原性組成物の製剤化を、当業界で認識された方法を使用して達成することができる。例えば、個々の肺炎球菌コンジュゲートを、生理的に許容できるビヒクルと共に製剤化して、組成物を調製することができる。そのようなビヒクルの例としては、限定されるものではないが、水、緩衝塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）およびデキストロース溶液が挙げられる。
本開示は、本明細書に開示される糖コンジュゲートの組合せのいずれかと、薬学的に許容できる賦形剤、担体、または希釈剤とを含む免疫原性組成物を提供する。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、液体形態、好ましくは、水性液体形態にある。
本開示の免疫原性組成物は、緩衝剤、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、糖などの凍結防止剤、およびフリーラジカルスカベンジャーもしくはキレート剤などの酸化防止剤のうちの１つもしくは複数、またはそれらの任意の複数の組合せを含んでもよい。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、緩衝剤を含む。ある実施形態では、前記緩衝剤は、約３．５～約７．５のｐＫａを有する。一部の実施形態では、緩衝剤は、リン酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、ヒスチジン緩衝剤またはクエン酸緩衝剤である。ある特定の実施形態では、緩衝剤は、１ｍＭ～１０ｍＭの最終濃度のコハク酸緩衝剤である。１つの特定の実施形態では、コハク酸緩衝剤の最終濃度は、約５ｍＭである。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、塩を含む。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウムおよびその組合せからなる群から選択される。１つの特定の実施形態では、塩は、塩化ナトリウムである。１つの特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、１５０ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、界面活性剤を含む。ある実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６０）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（登録商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０）、ポリソルベート８５（ＴＷＥＥＮ（登録商標）８５）、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｎ－１０１、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）Ｘ－１００、オクトキシノール４０、ノノキシノール－９、トリエタノールアミン、トリエタノールアミンポリペプチドオレエート、ポリオキシエチレン－６６０ヒドロキシステアレート（ＰＥＧ－１５、Ｓｏｌｕｔｏｌ Ｈ１５）、ポリオキシエチレン－３５－リシノレエート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ）、大豆レシチンおよびポロキサマーからなる群から選択される。
１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベートである。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％～１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、少なくとも０．００１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、少なくとも０．０１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。他の実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。別の実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。
１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０またはポリソルベート８５である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％～１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、少なくとも０．００１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、少なくとも０．０１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。他の実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。別の実施形態では、製剤中のポリソルベートの最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベートである。
１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％～１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．００１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート２０の最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート２０である。
１つの特定の実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０００１重量％～１０重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．００１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０１重量％～１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。他の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１重量％、０．０２重量％、０．０３重量％、０．０４重量％、０．０５重量％、０．０６重量％、０．０７重量％、０．０８重量％、０．０９重量％または０．１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。別の実施形態では、製剤中のポリソルベート８０の最終濃度は、１重量％（ｗ／ｗ）ポリソルベート８０である。
ある特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、５．５～７．５のｐＨ、より好ましくは、５．６～７．０のｐＨ、さらにより好ましくは、５．８～６．０のｐＨを有する。
一実施形態では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性組成物のいずれかを充填した容器を提供する。一実施形態では、容器は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵器、バイオリアクター、バッグ、ジャー、アンプル、カートリッジおよび使い捨てペンからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、容器はシリコン処理される。
ある実施形態では、本発明の容器は、ガラス、金属（例えば、スチール、ステンレススチール、アルミニウムなど）および／またはポリマー（例えば、熱可塑性物質、エラストマー、熱可塑性物質－エラストマー）製である。ある実施形態では、本発明の容器は、ガラス製である。
一実施形態では、本発明は、本明細書に開示される免疫原性組成物のいずれかを充填したシリンジを提供する。ある特定の実施形態では、シリンジは、シリコン処理される、および／またはガラス製である。
注射のための本発明の免疫原性組成物の典型的な用量は、０．１ｍＬ～２ｍＬ、より好ましくは、０．２ｍＬ～１ｍＬ、さらにより好ましくは、約０．５ｍＬの容量を有する。
したがって、上記で定義された容器またはシリンジは、０．１ｍＬ～２ｍＬ、より好ましくは０．２ｍＬ～１ｍＬ、さらにより好ましくは約０．５ｍＬの容量の本明細書に定義される免疫原性組成物のいずれかを充填される。
６ 本発明の免疫原性組成物の使用
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、薬剤としての使用のためのものである。
本明細書に記載の免疫原性組成物を、対象における細菌感染、疾患または状態を防止する、処置する、または改善するための様々な治療または予防方法において使用することができる。特に、本明細書に記載の免疫原性組成物を使用して、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染、疾患または状態を防止、処置または改善することができる。
かくして、一態様では、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）と関連する感染、疾患または状態を防止、処置または改善する方法であって、対象に、免疫学的に有効量の本発明の免疫原性組成物を投与することを含む方法を提供する。
一部のそのような実施形態では、感染、疾患または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟部組織感染症および脳膿瘍からなる群から選択される。
一態様では、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫応答を誘導する方法であって、対象に、免疫学的に有効量の本発明の免疫原性組成物を投与することを含む方法を提供する。
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ワクチンとしての使用のためのものである。そのような実施形態では、本明細書に記載の免疫原性組成物を使用して、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染を防止することができる。かくして、一態様では、本発明は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染を防止する方法であって、対象に、免疫学的に有効量の本発明の免疫原性組成物を投与することを含む方法を提供する。一部のそのような実施形態では、感染は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟部組織感染症および脳膿瘍からなる群から選択される。一態様では、ワクチン接種される対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシまたはイヌなどの哺乳動物である。
一態様では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）と関連する感染、疾患または状態を防止、処置または改善する方法における使用のためのものである。一部のそのような実施形態では、感染、疾患または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟部組織感染症および脳膿瘍からなる群から選択される。
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ワクチンとしての使用のためのものである。そのような実施形態では、本明細書に記載の免疫原性組成物を使用して、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染を防止することができる。かくして、一態様では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染を防止する方法における使用のためのものである。一部のそのような実施形態では、感染は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、膿胸、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂巣炎、軟部組織感染症および脳膿瘍からなる群から選択される。一態様では、ワクチン接種される対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシまたはイヌなどの哺乳動物である。
本発明の免疫原性組成物を使用して、全身または粘膜経路により免疫原性組成物を投与する手段によって、肺炎球菌感染に罹りやすいヒトを保護または処置することができる。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物を、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下経路によって投与する。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物を、筋肉内、腹腔内、皮内または皮下注射によって投与する。ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物を、筋肉内または皮下注射によって投与する。
７ 本発明の免疫原性組成物で処置される対象
本明細書に開示されるように、本明細書に記載の免疫原性組成物を、対象における細菌感染、疾患または状態を防止する、処置する、または改善するための様々な治療または予防方法において使用することができる。
好ましい実施形態では、前記対象は、ヒトである。最も好ましい実施形態では、前記対象は、新生児（すなわち、３ヶ月齢より下）、乳児（すなわち、３ヶ月齢から１歳まで）または幼児（すなわち、１歳から４歳まで）である。
ある実施形態では、本明細書に開示される免疫原性組成物は、ワクチンとしての使用のためのものである。
そのような実施形態では、ワクチン接種される対象は、１歳未満であってよい。例えば、ワクチン接種される対象は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１または約１２ヶ月齢であってもよい。ある実施形態では、ワクチン接種される対象は、約２、約４または約６ヶ月齢である。別の実施形態では、ワクチン接種される対象は、２歳未満である。例えば、ワクチン接種される対象は、約１２～約１５ヶ月齢であってもよい。一部の場合、わずか１用量の本発明による免疫原性組成物が必要とされるが、一部の環境下では、第２、第３または第４の用量を投与してもよい（以下のセクション８を参照されたい）。
本発明のある実施形態では、ワクチン接種される対象は、５０歳以上の成人、より好ましくは５５歳以上の成人である。ある実施形態では、ワクチン接種される対象は、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上または８０歳以上の成人である。
ある実施形態では、ワクチン接種される対象は、免疫障害のある個体、特に、ヒトである。免疫障害のある個体は一般に、感染性因子によるチャレンジに対して正常な体液性または細胞性防御を上昇させる能力の減弱または低減を示す人と定義される。
本発明のある実施形態では、ワクチン接種される免疫障害のある対象は、免疫系を害し、肺炎球菌疾患に対して保護する、またはそれを処置するには不十分な抗体応答をもたらす疾患または状態に罹患している。
ある実施形態では、前記疾患は、原発性免疫不全障害である。好ましくは、前記原発性免疫不全障害は、複合ＴおよびＢ細胞免疫不全、抗体不全、明確に定義された症候群、免疫脱調節疾患、食細胞障害、先天性免疫不全、自己炎症障害、および補体欠損症からなる群から選択される。ある実施形態では、前記原発性免疫不全障害は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の２４頁、１１行目～２５頁、１９行目に開示されたものから選択される。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫障害のある対象は、:ＨＩＶ感染、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、がん、慢性心臓または肺障害、鬱血性心不全、糖尿病、慢性肝疾患、アルコール依存症、肝硬変、髄液漏、心筋症、慢性気管支炎、肺気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、脾臓機能障害（鎌状赤血球病など）、脾臓機能の欠如（無脾症）、血液悪性腫瘍、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、リンパ腫、腎不全、ネフローゼ症候群および喘息からなる群から選択される疾患に罹患している。
本発明のある実施形態では、ワクチン接種される免疫障害のある対象は、栄養不良に罹患している。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫障害のある対象は、感染に対する身体の抵抗性を低下させる薬物または処置をとっている。ある実施形態では、前記薬物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０の２６頁、３３行目～２６頁、４行目に開示されたものから選択される。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫障害のある対象は、喫煙者である。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫障害のある対象は、１リットルあたり５×１０９細胞未満、または１リットルあたり４×１０９細胞未満、または１リットルあたり３×１０９細胞未満、または１リットルあたり２×１０９細胞未満、または１リットルあたり１×１０９細胞未満、または１リットルあたり０．５×１０９細胞未満、または１リットルあたり０．３×１０９細胞未満、または１リットルあたり０．１×１０９細胞未満の白血球数（ロイコサイト数）を有する。
白血球数（ロイコサイト数）：血液中の白血球（ＷＢＣ）の数。ＷＢＣは通常、ＣＢＣ（完全血球算定）の一部として測定される。白血球は、血液中で感染と闘う細胞であり、赤血球として知られる赤血球（酸素を運搬する血球）とは異なる。好中球（多形核ロイコサイト；ＰＭＮ）、バンド細胞（わずかに未熟な好中球）、Ｔ型リンパ球（Ｔ細胞）、Ｂ型リンパ球（Ｂ細胞）、単球、好酸球、および好塩基球を含む、様々な型の白血球が存在する。全ての型の白血球が、白血球数に反映される。白血球数の正常範囲は通常、血液１立方ミリメートルあたり４，３００～１０，８００細胞である。これもロイコサイト数と呼ばれ、１リットルあたり４．３～１０．８×１０９細胞として国際単位で表すことができる。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫障害のある対象は、好中球減少症に罹患している。本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される対象は、１リットルあたり２×１０９細胞未満、または１リットルあたり１×１０９細胞未満、または１リットルあたり０．５×１０９細胞未満、または１リットルあたり０．１×１０９細胞未満、または１リットルあたり０．０５×１０９細胞未満の好中球数を有する。
低い白血球数または「好中球減少症」は、循環血液中の異常に低レベルの好中球を特徴とする状態である。好中球は、感染を防止し、感染と闘うのを助ける特定の種類の白血球である。がん患者が好中球減少症を経験する最も一般的な理由は、化学療法の副作用としてである。化学療法誘導性好中球減少症は、患者の感染リスクを増大させ、がん処置を中断させる。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種される免疫障害のある対象は、５００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または３００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または２００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、１００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、７５／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数、または５０／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞数を有する。
ＣＤ４細胞試験は、通常、１ｍｍ３中の細胞数として報告される。正常なＣＤ４数は、５００～１，６００であり、ＣＤ８数は、３７５～１，１００である。ＣＤ４数は、ＨＩＶを有する人々においては劇的に低下する。
本発明のある実施形態では、本明細書に開示される任意の免疫障害のある対象のいずれかは、ヒト男性またはヒト女性である。
８ レジメン
一部の場合、本発明による免疫原性組成物のわずか１用量が必要とされるが、より高い免疫欠損の状態などの一部の環境下では、第２、第３または第４の用量を与えてもよい。初回ワクチン接種の後、対象は、十分に間隔を空けた１回または数回の追加免疫を受けてもよい。
ある実施形態では、本発明による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは、単回用量である。特定の実施形態では、前記単回用量スケジュールは、少なくとも２歳の健康な人のためのものである。
ある実施形態では、本発明による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは、複数回用量スケジュールである。特定の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１ヶ月から約２ヶ月の間隔で隔てられた一連の２用量からなる。特定の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１ヶ月の間隔で隔てられた一連の２用量、または約２ヶ月の間隔で隔てられた一連の２用量からなる。
別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１ヶ月から約２ヶ月の間隔で隔てられた一連の３用量からなる。別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１ヶ月の間隔で隔てられた一連の３用量、または約２ヶ月の間隔で隔てられた一連の３用量からなる。
別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１ヶ月から約２ヶ月の間隔で隔てられた一連の３用量、次いで、第１の用量の約１０ヶ月から約１３ヶ月後の第４の用量からなる。別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、約１ヶ月の間隔で隔てられた一連の３用量、次いで、第１の用量の約１０ヶ月から約１３ヶ月後の第４の用量、または約２ヶ月の間隔で隔てられた一連の３用量、次いで、第１の用量の約１０ヶ月から約１３ヶ月後の第４の用量からなる。
ある実施形態では、複数回用量スケジュールは、第１の年齢での少なくとも１用量（例えば、１、２または３用量）、次いで、少なくとも１回の幼児用量からなる。
ある実施形態では、複数回用量スケジュールは、２ヶ月齢で開始する、約１ヶ月から約２ヶ月の間隔で隔てられた一連の２または３用量（例えば、用量間は２８～５６日）、次いで、１２～１８ヶ月齢での幼児用量からなる。ある実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、２ヶ月齢で開始する、約１ヶ月から約２ヶ月の間隔で隔てられた一連の３用量（例えば、用量間は２８～５６日）、次いで、１２～１５ヶ月齢での幼児用量からなる。別の実施形態では、前記複数回用量スケジュールは、２ヶ月齢で開始する、約２ヶ月の間隔で隔てられた一連の２用量、次いで、１２～１８ヶ月齢での幼児用量からなる。
ある実施形態では、複数回用量スケジュールは、２、４、６、および１２～１５ヶ月齢での４用量連続のワクチンからなる。
ある実施形態では、初回用量は、０日目に与えられ、１回または複数回の追加用量は、約２～約２４週の範囲の間隔で、好ましくは４～８週の投薬間隔で与えられる。
ある実施形態では、初回用量は０日目に与えられ、追加用量は約３ヶ月後に与えられる。
本発明の特定の実施形態を、以下の番号付き段落に記載する：
１．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む糖コンジュゲート。
２．２、３、４または５価糖コンジュゲートである、段落１に記載の糖コンジュゲート。
３．血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートからなる群から選択される、段落１または２に記載の糖コンジュゲート。
４．血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａまたは８／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型８糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
５．血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１５Ａ糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
６．血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ｂ／２３Ａまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１５Ｂ糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
７．血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ａまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２３Ａ糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
８．血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２３Ｂ糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
９．４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａの分子量を有する、段落１から８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１０．２～１５のコンジュゲーション度を有する、段落１から９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１１．糖コンジュゲート中の糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）が０．５～３．０である、段落１から１０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１２．糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ糖コンジュゲートである、段落１から１１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１３．糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂまたは８／１５Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から１２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１４．糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂまたは８／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から１３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１５．糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂまたは８／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から１４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１６．糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型１５Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から１５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１７．糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から１６のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１８．糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から１７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１９．糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から１８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２０．糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から１９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２１．糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２２．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型１５Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、または８／１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000074
２３．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から２２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000075
２４．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000076
２５．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から２４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000077
２６．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000078
２７．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２６のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000079
２８．糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から２７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000080
２９．糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000081
３０．糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000082
３１．糖コンジュゲート中の血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、または１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000083
３２．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から３１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000084
３３．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000085
３４．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000086
３５．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000087
３６．糖コンジュゲート中の血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000088
３７．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１５Ａ糖、血清型１５Ｂ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３６のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000089
Figure 0007585203000090
Figure 0007585203000091
Figure 0007585203000092
３８．血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのアセテートを含む、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３９．血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのアセテートを含む、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ｂ／２３Ａまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４０．血清型１５Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４１．血清型１５Ｂ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ｂ／２３Ａまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から４０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４２．血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ａ、または２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から４１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４３．血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から４２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４４．糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する、段落１から４３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４５．糖の総量と比較して約５０％未満の遊離糖を含む、段落１から４４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４６．担体タンパク質が、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ変異体（ＣＲＭ１９７など）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物、解毒されたニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢおよびＰｓａＡからなる群において選択される、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４７．担体タンパク質がＤＴ（ジフテリアトキソイド）である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４８．担体タンパク質がＴＴ（破傷風トキソイド）である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４９．担体タンパク質がＰＤ（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ）である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５０．担体タンパク質が解毒されたニューモリシンまたはニューモリシンの突然変異非毒性形態である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５１．担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５２．担体タンパク質がＣＲＭ１９７のＡ鎖である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５３．段落１から５２のいずれか１つに記載の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５４．段落１から５２のいずれか１つで定義された１、２または３つの糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５５．１つの血清型８／１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５６．１つの血清型８／１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５７．１つの血清型８／１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５８．１つの血清型８／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５９．１つの血清型８／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６０．１つの血清型８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６１．１つの血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６２．１つの血清型１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６３．１つの血清型１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６４．１つの血清型１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６５．１つの血清型８／１５Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６６．１つの血清型８／１５Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６７．１つの血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６８．１つの血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１５Ａ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ａまたは１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６９．１つの血清型１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ａ、８／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７０．１つの血清型１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ｂ、８／２３Ｂまたは１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７１．１つの血清型１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ｂ、８／２３Ａまたは１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７２．１つの血清型１５Ｂ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ａ、８／２３Ｂまたは１５Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７３．１つの血清型１５Ｂ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ａ、８／２３Ａまたは１５Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７４．１つの血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１５Ａ、８／１５Ｂまたは１５Ａ／１５Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する糖コンジュゲートからなる群から選択される少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
７６．前記さらなる糖コンジュゲートが、個別にコンジュゲートされた糖コンジュゲートである、段落７５に記載の免疫原性組成物。
７７．前記さらなる糖コンジュゲートが、還元的アミノ化によって担体タンパク質にコンジュゲートされている、段落７５から７６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
７８．前記さらなる糖コンジュゲートの担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、段落７５から７７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
７９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８０．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８０のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８１のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８４のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８６．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８７．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８８．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８８のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９０．２２Ｆおよび３３Ｆ、２２Ｆおよび１２Ｆ、２２Ｆおよび１０Ａ、２２Ｆおよび１１Ａ、３３Ｆおよび１２Ｆ、３３Ｆおよび１０Ａ、３３Ｆおよび１１Ａ、１２Ｆおよび１０Ａ、１２Ｆおよび１１Ａならびに１０Ａおよび１１Ａからなる群から選択される２つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９１．以下の３つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型：
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、または
１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ
のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９２．以下の４つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型：
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、または
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ
のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９３．以下の５つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型：
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ
のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４、７９から８２または９４のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９６．前記さらなる糖コンジュゲートが、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされている、段落７５から９５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９７．前記さらなる糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落７５から９６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９８．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落７９から９６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆに由来する糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落８０から９６または９８のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１００．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａに由来する糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落８０から９６または９８から９９のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落８０から９６または９８から１００のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖コンジュゲートがＰＤに個別にコンジュゲートされている、段落７９から９６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来する糖コンジュゲートがＴＴにコンジュゲートされている、段落７９から９６または１０２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来する糖コンジュゲートがＤＴにコンジュゲートされている、段落７９から９６または１０２から１０３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖コンジュゲートがＰＤに個別にコンジュゲートされ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来する糖コンジュゲートがＴＴに個別にコンジュゲートされ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来する糖コンジュゲートがＤＴに個別にコンジュゲートされている、段落７９から９６または１０２から１０３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０６．２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３価肺炎球菌コンジュゲート組成物である、段落５３から１０５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０７．少なくとも１つ、２つまたは３つのアジュバントをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０８．本文献のセクション４に記載のアジュバントのいずれかをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０９．ミョウバン、リン酸カルシウム、リポソーム、水中油エマルジョン、油中水エマルジョン、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）マイクロ粒子またはナノ粒子からなる群から選択されるアジュバントをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１０．アジュバントとしてリン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１１．アジュバントとしてリン酸アルミニウムをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１２．液体形態、好ましくは、水性液体形態で製剤化されている、段落５３から１１１のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１３．凍結乾燥形態で製剤化されている、段落５３から１１１のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１４．生理的に許容できるビヒクルと共に製剤化されている、段落５３から１１３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１５．薬学的に許容できる賦形剤、担体、または希釈剤中で製剤化されている、段落５３から１１３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１６．緩衝剤、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、糖などの凍結防止剤、およびフリーラジカルスカベンジャーもしくはキレート剤などの酸化防止剤のうちの１つもしくは複数、またはそれらの任意の複数の組合せを含む、段落５３から１１３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１７．薬剤としての使用のための、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１８．ワクチンとしての使用のための、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１９．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染、疾患または状態を防止、処置または改善する方法における使用のための、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１２０．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）と関連する感染、疾患または状態を防止、処置または改善する方法であって、対象に、免疫学的に有効量の段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは免疫学的に有効量の段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物を投与することを含む方法。
１２１．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫応答を誘導する方法であって、対象に、免疫学的に有効量の段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは免疫学的に有効量の段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物を投与することを含む方法。
１２２．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染を防止する方法における使用のための、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１２３．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染を防止する方法であって、対象に、免疫学的に有効量の段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは免疫学的に有効量の段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物を投与することを含む方法。
１２４．還元的アミノ化を使用して調製される、血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート。
１２５．前記糖コンジュゲートが還元的アミノ化を使用して調製される、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１２６．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
１２７．（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された糖を得るステップをさらに含む、段落１２６に記載のプロセス。
１２８．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂの生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップおよび（ｂ）活性化された血清型８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ／１５Ｂ、８／１５Ａ／２３Ａ、８／１５Ａ／２３Ｂ、８／１５Ｂ／２３Ａ、８／１５Ｂ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ａ、１５Ａ／１５Ｂ／２３Ｂ、１５Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１５Ａ、８／１５Ｂ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１５Ａ／１５Ｂ、１５Ａ／２３Ａ、１５Ａ／２３Ｂ、１５Ｂ／２３Ａ、１５Ｂ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を混合するステップを含むプロセス。
１２９．クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングするステップをさらに含む、段落１２８に記載のプロセス。
１３０．前記酸化剤がペルヨーデートである、段落１２６から１２９のいずれか１つに記載のプロセス。
１３１．前記酸化剤がメタペルヨーデートまたはオルトペルヨーデートである、段落１２６から１２９のいずれか１つに記載のプロセス。
１３２．前記酸化剤が過ヨウ素酸ナトリウムまたは過ヨウ素酸カリウムである、段落１２６から１２９のいずれか１つに記載のプロセス。
１３３．存在する場合、クエンチング剤が本明細書に開示されるもののいずれかである、段落１２６から１３２のいずれか１つに記載のプロセス。
１３４．活性化された糖が精製される、段落１２６から１３３のいずれか１つに記載のプロセス。
１３５．活性化された糖が、本明細書に開示される方法のいずれか１つに従って精製される、段落１２６から１３４のいずれか１つに記載のプロセス。
１３６．活性化された糖の酸化度が、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である、段落１２６から１３５のいずれか１つに記載のプロセス。
１３７．活性化された糖の酸化度が、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である、段落１２６から１３５のいずれか１つに記載のプロセス。
１３８．活性化された糖の酸化度が、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である、段落１２６から１３５のいずれか１つに記載のプロセス。
１３９．活性化された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する、段落１２６から１３８のいずれか１つに記載のプロセス。
１４０．活性化された糖が、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する、段落１２６から１３８のいずれか１つに記載のプロセス。
１４１．糖の混合物が、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する、段落１２６から１３８のいずれか１つに記載のプロセス。
１４２．糖の混合物が、３００ｋＤａ～８００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する、段落１２６から１３８のいずれか１つに記載のプロセス。
１４３．活性化された糖が凍結乾燥される、段落１２６から１４２のいずれか１つに記載のプロセス。
１４４．活性化された糖が、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥される、段落１２６から１４２のいずれか１つに記載のプロセス。
１４５．段落１２６から１４４のいずれか１つに従って糖を活性化することを含むコンジュゲーションプロセス。
１４６．段落１２６から１４４のいずれか１つに従って糖を活性化することを含むコンジュゲーションプロセスであって、（ｃ）前記活性化された糖と、担体タンパク質とを混合するステップならびに（ｄ）混合された活性化された糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、糖コンジュゲートを形成させるステップを含むコンジュゲーションプロセス。
１４７．活性化された糖と、担体タンパク質との前記混合が、同時凍結乾燥を使用して行われる、段落１４６に記載のコンジュゲーションプロセス。
１４８．活性化された糖と、担体タンパク質との前記混合が、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で同時凍結乾燥を使用して行われる、段落１４６に記載のコンジュゲーションプロセス。
１４９．還元反応が水性溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５０．還元反応が非プロトン溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５１．還元反応が、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５２．ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）が、非プロトン溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５３．ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）が、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５４．ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）が、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５５．還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランからなる群から選択される、段落１４５から１５４のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５６．還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである、段落１４５から１５４のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５７．未反応のアルデヒド基が、キャップを付けられる、段落１４５から１５６のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５８．未反応のアルデヒド基が、キャッピング剤を使用してキャップを付けられる、段落１４５から１５６のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５９．未反応のアルデヒド基が、ホウ化水素ナトリウム（ＮａＢＨ４）を使用するキャッピング剤を使用してキャップを付けられる、段落１４５から１５６のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１６０．糖コンジュゲートが精製される、段落１４５から１５６のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１６１．段落１２６から１４４のいずれか１つに記載のプロセスに従って得られた、または得られる活性化された糖の混合物。
１６２．段落１４５から１６０のいずれか１つに記載のプロセスに従って得られた、または得られる糖コンジュゲート。
本発明の特定の実施形態を、以下の番号付き段落に記載する：
１．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む糖コンジュゲート。
２．２、３、４または５価糖コンジュゲートである、段落１に記載の糖コンジュゲート。
３．血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートからなる群から選択される、段落１または２に記載の糖コンジュゲート。
４．血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａまたは８／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型８糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
５．血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１１Ａ糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
６．血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ、１１Ａ／１２Ｆ、１２Ｆ／２３Ａまたは１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型１２Ｆ糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
７．血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ａまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２３Ａ糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
８．血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートであり、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する血清型２３Ｂ糖を含む、段落２または３に記載の糖コンジュゲート。
９．４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａの分子量を有する、段落１から８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１０．２～１５のコンジュゲーション度を有する、段落１から９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１１．糖コンジュゲート中の糖の担体タンパク質に対する比（ｗ／ｗ）が０．５～３．０である、段落１から１０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１２．糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１１Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ糖コンジュゲートである、段落１から１１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１３．糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂまたは８／１２Ｆ糖コンジュゲートである、段落１から１２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１４．糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂまたは８／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から１３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１５．糖コンジュゲート中の血清型８糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂまたは８／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から１４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１６．糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型１２Ｆ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートである、段落１から１５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１７．糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から１６のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１８．糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から１７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１９．糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ａ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から１８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２０．糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から１９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２１．糖コンジュゲート中の血清型２３Ａ糖の血清型２３Ｂ糖に対する比（ｗ／ｗ）が０．２５～４．０である、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２２．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型１２Ｆ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、または８／１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートである、段落１から２１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000093
２３．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から２２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000094
２４．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000095
２５．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から２４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000096
２６．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、または８／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000097
２７．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２６のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000098
２８．糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から２７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000099
２９．糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000100
３０．糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から２９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000101
３１．糖コンジュゲート中の血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000102
３２．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ａ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートである、段落１から３１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000103
３３．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000104
３４．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000105
３５．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000106
３６．糖コンジュゲート中の血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000107
３７．糖コンジュゲート中の血清型８糖、血清型１１Ａ糖、血清型１２Ｆ糖、血清型２３Ａ糖および血清型２３Ｂ糖の相対割合（ｗ／ｗ）が、以下の表のいずれか１つに記載のものである、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３６のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000108
Figure 0007585203000109
Figure 0007585203000110
Figure 0007585203000111
３８．血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり０．１～５．０ｍＭのアセテートを含む、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３９．血清型１２Ｆ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのアセテートを含む、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ、１１Ａ／１２Ｆ、１２Ｆ／２３Ａまたは１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４０．血清型１１Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から３９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４１．血清型１２Ｆ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ、１１Ａ／１２Ｆ、１２Ｆ／２３Ａまたは１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から４０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４２．血清型２３Ａ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ａ、１１Ａ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ａ、または２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から４１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４３．血清型２３Ｂ糖１ｍＭあたり０．１～１．０ｍＭのグリセロールを含む、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートである、段落１から４２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４４．糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する、段落１から４３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４５．糖の総量と比較して約５０％未満の遊離糖を含む、段落１から４４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４６．担体タンパク質が、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ変異体（ＣＲＭ１９７など）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物、解毒されたニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢおよびＰｓａＡからなる群において選択される、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４７．担体タンパク質がＤＴ（ジフテリアトキソイド）である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４８．担体タンパク質がＴＴ（破傷風トキソイド）である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４９．担体タンパク質がＰＤ（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ）である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５０．担体タンパク質が解毒されたニューモリシンまたはニューモリシンの突然変異非毒性形態である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５１．担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５２．担体タンパク質がＣＲＭ１９７のＡ鎖である、段落１から４５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５３．段落１から５２のいずれか１つに記載の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５４．段落１から５２のいずれか１つで定義された１、２または３つの糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５５．１つの血清型８／１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートおよび１つの血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５６．１つの血清型８／１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５７．１つの血清型８／１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５８．１つの血清型８／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
５９．１つの血清型８／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６０．１つの血清型８／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６１．１つの血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６２．１つの血清型１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６３．１つの血清型１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６４．１つの血清型１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１１Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６５．１つの血清型８／１１Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６６．１つの血清型８／１２Ｆ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６７．１つの血清型８／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ｂまたは１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６８．１つの血清型８／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型１１Ａ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ａまたは１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
６９．１つの血清型１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／２３Ａ、８／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７０．１つの血清型１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１２Ｆ、８／２３Ｂまたは１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７１．１つの血清型１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１２Ｆ、８／２３Ａまたは１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７２．１つの血清型１２Ｆ／２３Ａ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１１Ａ、８／２３Ｂまたは１１Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７３．１つの血清型１２Ｆ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１１Ａ、８／２３Ａまたは１１Ａ／２３Ａ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７４．１つの血清型２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲートおよび１つの血清型８／１１Ａ、８／１２Ｆまたは１１Ａ／１２Ｆ糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
７５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆおよび３３Ｆに由来する糖コンジュゲートからなる群から選択される少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
７６．前記さらなる糖コンジュゲートが、個別にコンジュゲートされた糖コンジュゲートである、段落７５に記載の免疫原性組成物。
７７．前記さらなる糖コンジュゲートが、還元的アミノ化によって担体タンパク質にコンジュゲートされている、段落７５から７６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
７８．前記さらなる糖コンジュゲートの担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、段落７５から７７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
７９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８０．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８０のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８１のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８４のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８６．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８７．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８８．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８７のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
８９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８８のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９０．２２Ｆおよび３３Ｆ、２２Ｆおよび１２Ｆ、２２Ｆおよび１０Ａ、２２Ｆおよび１１Ａ、３３Ｆおよび１２Ｆ、３３Ｆおよび１０Ａ、３３Ｆおよび１１Ａ、１２Ｆおよび１０Ａ、１２Ｆおよび１１Ａならびに１０Ａおよび１１Ａからなる群から選択される２つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９１．以下の３つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型：
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、または
１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ
のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９２．以下の４つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型：
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、
２２Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ、または
３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ
のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９３．以下の５つの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型：
２２Ｆおよび３３Ｆおよび１２Ｆおよび１０Ａおよび１１Ａ
のそれぞれの少なくとも１つの糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４または７９から８２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する糖コンジュゲートをさらに含む、段落５３から７４、７９から８２または９４のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９６．前記さらなる糖コンジュゲートが、担体タンパク質に個別にコンジュゲートされている、段落７５から９５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９７．前記さらなる糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落７５から９６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９８．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに由来する糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落７９から９６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
９９．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５および７Ｆに由来する糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落８０から９６または９８のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１００．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａおよび１９Ａに由来する糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落８０から９６または９８から９９のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に由来する糖コンジュゲートがＣＲＭ１９７にコンジュゲートされている、段落８０から９６または９８から１００のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖コンジュゲートがＰＤに個別にコンジュゲートされている、段落７９から９６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来する糖コンジュゲートがＴＴにコンジュゲートされている、段落７９から９６または１０２のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来する糖コンジュゲートがＤＴにコンジュゲートされている、段落７９から９６または１０２から１０３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆに由来する糖コンジュゲートがＰＤに個別にコンジュゲートされ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃに由来する糖コンジュゲートがＴＴに個別にコンジュゲートされ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆに由来する糖コンジュゲートがＤＴに個別にコンジュゲートされている、段落７９から９６または１０２から１０３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０６．２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２または２３価肺炎球菌コンジュゲート組成物である、段落５３から１０５のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０７．少なくとも１つ、２つまたは３つのアジュバントをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０８．本文献のセクション４に記載のアジュバントのいずれかをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１０９．ミョウバン、リン酸カルシウム、リポソーム、水中油エマルジョン、油中水エマルジョン、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－ｃｏ－グリコリド）マイクロ粒子またはナノ粒子からなる群から選択されるアジュバントをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１０．アジュバントとしてリン酸アルミニウム、硫酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１１．アジュバントとしてリン酸アルミニウムをさらに含む、段落５３から１０６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１２．液体形態、好ましくは、水性液体形態で製剤化されている、段落５３から１１１のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１３．凍結乾燥形態で製剤化されている、段落５３から１１１のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１４．生理的に許容できるビヒクルと共に製剤化されている、段落５３から１１３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１５．薬学的に許容できる賦形剤、担体、または希釈剤中で製剤化されている、段落５３から１１３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１６．緩衝剤、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、糖などの凍結防止剤、およびフリーラジカルスカベンジャーもしくはキレート剤などの酸化防止剤のうちの１つもしくは複数、またはそれらの任意の複数の組合せを含む、段落５３から１１３のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１７．薬剤としての使用のための、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１８．ワクチンとしての使用のための、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１１９．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染、疾患または状態を防止、処置または改善する方法における使用のための、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１２０．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）と関連する感染、疾患または状態を防止、処置または改善する方法であって、対象に、免疫学的に有効量の段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは免疫学的に有効量の段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物を投与することを含む方法。
１２１．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する免疫応答を誘導する方法であって、対象に、免疫学的に有効量の段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは免疫学的に有効量の段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物を投与することを含む方法。
１２２．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染を防止する方法における使用のための、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物。
１２３．対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染を防止する方法であって、対象に、免疫学的に有効量の段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲートまたは免疫学的に有効量の段落５３から１１６のいずれか１つに記載の免疫原性組成物を投与することを含む方法。
１２４．還元的アミノ化を使用して調製される、血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖コンジュゲート。
１２５．前記糖コンジュゲートが還元的アミノ化を使用して調製される、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１２６．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
１２７．（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された糖を得るステップをさらに含む、段落１２６に記載のプロセス。
１２８．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂの生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、８／１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、８／１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ／１２Ｆ、８／１１Ａ／２３Ａ、８／１１Ａ／２３Ｂ、８／１２Ｆ／２３Ａ、８／１２Ｆ／２３Ｂ、８／２３Ａ／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ａ、１１Ａ／１２Ｆ／２３Ｂ、１１Ａ／２３Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ／２３Ｂ、８／１１Ａ、８／１２Ｆ、８／２３Ａ、８／２３Ｂ、１１Ａ／１２Ｆ、１１Ａ／２３Ａ、１１Ａ／２３Ｂ、１２Ｆ／２３Ａ、１２Ｆ／２３Ｂまたは２３Ａ／２３Ｂ糖を個別に反応させるステップを含むプロセス。
１２９．クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングするステップをさらに含む、段落１２８に記載のプロセス。
１３０．前記酸化剤がペルヨーデートである、段落１２６から１２９のいずれか１つに記載のプロセス。
１３１．前記酸化剤がメタペルヨーデートまたはオルトペルヨーデートである、段落１２６から１２９のいずれか１つに記載のプロセス。
１３２．前記酸化剤が過ヨウ素酸ナトリウムまたは過ヨウ素酸カリウムである、段落１２６から１２９のいずれか１つに記載のプロセス。
１３３．存在する場合、クエンチング剤が本明細書に開示されるもののいずれかである、段落１２６から１３２のいずれか１つに記載のプロセス。
１３４．活性化された糖が精製される、段落１２６から１３３のいずれか１つに記載のプロセス。
１３５．活性化された糖が、本明細書に開示される方法のいずれか１つに従って精製される、段落１２６から１３４のいずれか１つに記載のプロセス。
１３６．活性化された糖の酸化度が、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である、段落１２６から１３５のいずれか１つに記載のプロセス。
１３７．活性化された糖の酸化度が、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である、段落１２６から１３５のいずれか１つに記載のプロセス。
１３８．活性化された糖の酸化度が、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である、段落１２６から１３５のいずれか１つに記載のプロセス。
１３９．活性化された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する、段落１２６から１３８のいずれか１つに記載のプロセス。
１４０．活性化された糖が、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する、段落１２６から１３８のいずれか１つに記載のプロセス。
１４１．糖の混合物が、２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、３００ｋＤａ～８００ｋＤａ、３００ｋＤａ～７００ｋＤａ、３００ｋＤａ～６００ｋＤａ、４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ、４００ｋＤａ～８００ｋＤａ、４００ｋＤａ～７００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する、段落１２６から１３８のいずれか１つに記載のプロセス。
１４２．糖の混合物が、３００ｋＤａ～８００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～６００ｋＤａの分子量を有する、段落１２６から１３８のいずれか１つに記載のプロセス。
１４３．活性化された糖が凍結乾燥される、段落１２６から１４２のいずれか１つに記載のプロセス。
１４４．活性化された糖が、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥される、段落１２６から１４２のいずれか１つに記載のプロセス。
１４５．段落１２６から１４４のいずれか１つに従って糖を活性化することを含むコンジュゲーションプロセス。
１４６．段落１２６から１４４のいずれか１つに従って糖を活性化することを含むコンジュゲーションプロセスであって、（ｃ）前記活性化された糖と、担体タンパク質とを混合するステップならびに（ｄ）混合された活性化された糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、糖コンジュゲートを形成させるステップを含むコンジュゲーションプロセス。
１４７．活性化された糖と、担体タンパク質との前記混合が、同時凍結乾燥を使用して行われる、段落１４６に記載のコンジュゲーションプロセス。
１４８．活性化された糖と、担体タンパク質との前記混合が、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で同時凍結乾燥を使用して行われる、段落１４６に記載のコンジュゲーションプロセス。
１４９．還元反応が水性溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５０．還元反応が非プロトン溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５１．還元反応が、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５２．ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）が、非プロトン溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５３．ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）が、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５４．ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）が、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中で実行される、段落１４５から１４８のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５５．還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランからなる群から選択される、段落１４５から１５４のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５６．還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである、段落１４５から１５４のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５７．未反応のアルデヒド基が、キャップを付けられる、段落１４５から１５６のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５８．未反応のアルデヒド基が、キャッピング剤を使用してキャップを付けられる、段落１４５から１５６のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１５９．未反応のアルデヒド基が、ホウ化水素ナトリウム（ＮａＢＨ４）を使用するキャッピング剤を使用してキャップを付けられる、段落１４５から１５６のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１６０．糖コンジュゲートが精製される、段落１４５から１５６のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１６１．段落１２６から１４４のいずれか１つに記載のプロセスに従って得られた、または得られる活性化された糖の混合物。
１６２．段落１４５から１６０のいずれか１つに記載のプロセスに従って得られた、または得られる糖コンジュゲート。
本発明の特定の実施形態を、以下の番号付き段落に記載する：
１．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖からなる群から選択される少なくとも２つの糖を含む糖コンジュゲート。
２．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
３．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
４．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
５．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
６．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
７．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
８．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
９．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
１０．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
１１．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
１２．同じ担体タンパク質にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する糖を含む、段落１に記載の糖コンジュゲート。
１３．４価糖コンジュゲートである、段落１から１２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１４．３価糖コンジュゲートである、段落３から１２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１５．２価糖コンジュゲートである、段落７から１２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１６．存在する場合、前記血清型１０Ａ糖が、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する、段落１から１５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１７．存在する場合、前記血清型１０Ａ糖が、本明細書に開示される範囲のいずれかの分子量を有する、段落１から１５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１８．存在する場合、前記血清型２２Ｆ糖が、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する、段落１から１７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
１９．存在する場合、前記血清型２２Ｆ糖が、本明細書に開示される範囲のいずれかの分子量を有する、段落１から１７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２０．存在する場合、前記血清型３３Ｆ糖が、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する、段落１から１９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２１．存在する場合、前記血清型３３Ｆ糖が、本明細書に開示される範囲のいずれかの分子量を有する、段落１から１９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２２．存在する場合、前記血清型３５Ｂ糖が、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの分子量を有する、段落１から２１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２３．存在する場合、前記血清型３５Ｂ糖が、本明細書に開示される範囲のいずれかの分子量を有する、段落１から２１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２４．前記糖コンジュゲートが、４００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａの分子量を有する、段落１から２３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２５．前記糖コンジュゲートが、本明細書に開示される範囲のいずれかの分子量を有する、段落１から２３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２６．前記コンジュゲートのコンジュゲーション度が、２～１５である、段落１から２５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２７．前記コンジュゲートのコンジュゲーション度が、本明細書に開示される範囲のいずれかにある、段落１から２５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２８．前記コンジュゲートのコンジュゲーション度が、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４または約１５である、段落１～２５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
２９．糖コンジュゲート中の糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）が、０．５～３．０である、段落１から２８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３０．糖コンジュゲート中の糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）が、本明細書に開示される範囲のいずれかにある、段落１から２８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３１．糖コンジュゲート中の糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）が、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、または約３．０である、段落１から２８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３２．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、０．２５～４．０である、段落１から３１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３３．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、本明細書に開示される範囲のいずれかにある、段落１から３１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３４．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型２２Ｆ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０である、段落１から３１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３５．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、０．２５～４．０である、段落１から３４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３６．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、本明細書に開示される範囲のいずれかにある、段落１から３４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３７．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０である、段落１から３４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３８．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、０．２５～４．０である、段落１から３８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
３９．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、本明細書に開示される範囲のいずれかにある、段落１から３８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４０．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０である、段落１から３８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４１．糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、０．２５～４．０である、段落１から４０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４２．糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、本明細書に開示される範囲のいずれかにある、段落１から４０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４３．糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３３Ｆ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０である、段落１から４０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４４．糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、０．２５～４．０である、段落１から４３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４５．糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、本明細書に開示される範囲のいずれかにある、段落１から４３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４６．糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０である、段落１から４３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４７．糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、０．２５～４．０である、段落１から４４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４８．糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、本明細書に開示される範囲のいずれかにある、段落１から４４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
４９．糖コンジュゲート中の血清型３３Ｆ糖の血清型３５Ｂ糖に対する比（重量／重量）が、両方とも存在する場合、約０．２５、約０．３、約０．４、約０．５、約０．６、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１、約１．２、約１．３、約１．４、約１．５、約１．６、約１．７、約１．８、約１．９、約２．０、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３．０、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９または約４．０である、段落１から４４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５０．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３３Ｆ糖の相対割合（重量／重量）が、存在する場合、以下の表のいずれか１つに記載のものである、段落１から４９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000112
５１．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）が、存在する場合、以下の表のいずれか１つに記載のものである、段落１から５０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000113
５２．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）が、存在する場合、以下の表のいずれか１つに記載のものである、段落１から５１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000114
５３．糖コンジュゲート中の血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）が、存在する場合、以下の表のいずれか１つに記載のものである、段落１から５２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000115
５４．糖コンジュゲート中の血清型１０Ａ糖、血清型２２Ｆ糖、血清型３３Ｆ糖および血清型３５Ｂ糖の相対割合（重量／重量）が、存在する場合、以下の表のいずれか１つに記載のものである、段落１から５３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
Figure 0007585203000116
５５．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型２２Ｆ多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６もしくは０．７または約０．８ｍＭのアセテートを含む、段落１から５４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５６．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型３３Ｆ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む、段落１から５５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５７．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型３５Ｂ莢膜多糖１ｍＭあたり少なくとも０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７または０．８ｍＭのアセテートを含む、段落１から５６のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５８．前記糖コンジュゲートの少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する、段落１から５７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
５９．前記糖コンジュゲートの少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する、段落１から５７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６０．前記糖コンジュゲートの５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する、段落１から５７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６１．前記糖コンジュゲートの６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中で０．３より下の、または０．３に等しいＫｄを有する、段落１から５７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６２．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を含む、段落１から６１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６３．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を含む、段落１から６２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６４．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を含む、段落１から６３のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６５．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む、段落１から６４のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６６．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む、段落１から６５のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６７．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む、段落１から６６のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６８．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆの総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を含む、段落１から６７のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
６９．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を含む、段落１から６８のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７０．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む、段落１から６９のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７１．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む、段落１から７０のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７２．前記糖コンジュゲートが、存在する場合、血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の総量と比較して、約５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％または１５％未満の遊離血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を含む、段落１から７１のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７３．前記担体タンパク質が、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）、ＴＴ（破傷風トキソイド）またはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７、他のＤＴ変異体、ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３、ＣＲＭ１０７、肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）、解毒されたニューモリシン、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥ、Ｐｈｔタンパク質の融合物、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、ＰｈｔＡ－Ｅ、ＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ）、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、組換え緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ、コレラトキソイド、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に由来する外毒素Ａからなる群において選択される、段落１から７２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７４．前記担体タンパク質が、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ変異体（ＣＲＭ１９７など）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物、解毒されたニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢおよびＰｓａＡからなる群において選択される、段落１から７２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７５．前記担体タンパク質がＤＴ（ジフテリアトキソイド）である、段落１から７２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７６．前記担体タンパク質がＴＴ（破傷風トキソイド）である、段落１から７２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７７．前記担体タンパク質がＰＤ（ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ）である、段落１から７２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７８．前記担体タンパク質が解毒されたニューモリシンまたはニューモリシンの突然変異非毒性形態である、段落１から７２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
７９．前記担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、段落１から７２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
８０．前記担体タンパク質がＣＲＭ１９７のＡ鎖である、段落１から７２のいずれか１つに記載の糖コンジュゲート。
８１．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
８２．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
８３．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
８４．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
８５．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
８６．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
８７．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
８８．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
８９．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
９０．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
９１．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の混合物と、酸化剤とを反応させるステップを含むプロセス。
９２．（ｂ）クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングして、活性化された糖を得るステップをさらに含む、段落８１から９２のいずれか１つに記載のプロセス。
９３．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂの生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップを含むプロセス。
９４．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３３Ｆ糖を混合するステップを含むプロセス。
９５．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型１０Ａ、２２Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップを含むプロセス。
９６．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型１０Ａ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップを含むプロセス。
９７．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂの生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップを含むプロセス。
９８．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型１０Ａおよび２２Ｆ糖を混合するステップを含むプロセス。
９９．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型１０Ａおよび３３Ｆ糖を混合するステップを含むプロセス。
１００．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型１０Ａおよび３５Ｂ糖を混合するステップを含むプロセス。
１０１．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型２２Ｆおよび３３Ｆ糖を混合するステップを含むプロセス。
１０２．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型２２Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップを含むプロセス。
１０３．活性化された肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖の生産のためのプロセスであって、（ａ）単離された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖と、酸化剤とを個別に反応させるステップならびに（ｂ）活性化された血清型３３Ｆおよび３５Ｂ糖を混合するステップを含むプロセス。
１０４．クエンチング剤の添加によって酸化反応をクエンチングするステップをさらに含む、段落９３から１０４のいずれか１つに記載のプロセス。
１０５．前記酸化剤がペルヨーデートである、段落８１から１０４のいずれか１つに記載のプロセス。
１０６．前記酸化剤がメタペルヨーデートまたはオルトペルヨーデートである、段落８１から１０４のいずれか１つに記載のプロセス。
１０７．前記酸化剤が過ヨウ素酸ナトリウムまたは過ヨウ素酸カリウムである、段落８１から１０４のいずれか１つに記載のプロセス。
１０８．存在する場合、クエンチング剤が本明細書に開示されるもののいずれかである、段落８１から１０７のいずれか１つに記載のプロセス。
１０９．活性化された糖が精製される、段落８１から１０８のいずれか１つに記載のプロセス。
１１０．活性化された糖が、本明細書に開示される方法のいずれか１つに従って精製される、段落８１から１０８のいずれか１つに記載のプロセス。
１１１．活性化された糖の酸化度が、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である、段落８１から１１０のいずれか１つに記載のプロセス。
１１２．活性化された糖の酸化度が、２～３０、２～２５、２～２０、２～１５、２～１０、２～５、５～３０、５～２５、５～２０、５～１５、５～１０、１０～３０、１０～２５、１０～２０、１０～１５、１５～３０、１５～２５、１５～２０、２０～３０、または２０～２５である、段落８１から１１０のいずれか１つに記載のプロセス。
１１３．活性化された糖の酸化度が、２～１０、４～８、４～６、６～８、６～１２、８～１４、９～１１、１０～１６、１２～１６、１４～１８、１６～２０、１６～１８、１８～２２、または１８～２０である、段落８１から１１０のいずれか１つに記載のプロセス。
１１４．活性化された糖は、１０ｋＤａ～５，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～４，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；７０ｋＤａ～９００ｋＤａ；１００ｋＤａ～８００ｋＤａ；２００ｋＤａ～６００ｋＤａまたは４００ｋＤａ～７００ｋＤａの分子量を有する、段落８１から１１３のいずれか１つに記載のプロセス。
１１５．活性化された糖が、５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５０ｋＤａ～７５０ｋＤａ；５０ｋＤａ～５００ｋＤａ；５０ｋＤａ～４００ｋＤａ；５０ｋＤａ～３００ｋＤａ；５０ｋＤａ～２００ｋＤａ；５０ｋＤａ～１００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；１００ｋＤａ～５００ｋＤａ；１００ｋＤａ～４００ｋＤａ；１００ｋＤａ～３００ｋＤａ；１００ｋＤａ～２００ｋＤａ；２００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；２００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；２００ｋＤａ～５００ｋＤａ；２００ｋＤａ～４００ｋＤａ；２００ｋＤａ～３００ｋＤａ；３００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；３００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；３００ｋＤａ～５００ｋＤａ；３００ｋＤａ～４００ｋＤａ；４００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；４００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；４００ｋＤａ～５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；５００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；６００ｋＤａ～７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，０００ｋＤａ～１，２５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，７５０ｋＤａ；１，２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａ；１，５００ｋＤａ～１，７５０ｋＤａまたは１，７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する、段落８１から１１３のいずれか１つに記載のプロセス。
１１６．活性化された糖が凍結乾燥される、段落８１から１１５のいずれか１つに記載のプロセス。
１１７．活性化された糖が、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールまたはパラチニットなどの糖の存在下で凍結乾燥される、段落８１から１１５のいずれか１つに記載のプロセス。
１１８．段落８１から１１７のいずれか１つに従って糖を活性化することを含むコンジュゲーションプロセス。
１１９．段落８１から１１７のいずれか１つに従って糖を活性化することを含むコンジュゲーションプロセスであって、（ｃ）前記活性化された糖と、担体タンパク質とを混合するステップならびに（ｄ）混合された活性化された糖および担体タンパク質と、還元剤とを反応させて、糖コンジュゲートを形成させるステップを含むコンジュゲーションプロセス。
１２０．活性化された糖と、担体タンパク質との前記混合が、同時凍結乾燥を使用して行われる、段落１１９に記載のコンジュゲーションプロセス。
１２１．活性化された糖と、担体タンパク質との前記混合が、スクロース、トレハロース、ラフィノース、スタキオース、メレジトース、デキストラン、マンニトール、ラクチトールおよびパラチニットなどの糖の存在下で同時凍結乾燥を使用して行われる、段落１１９に記載のコンジュゲーションプロセス。
１２２．還元反応が水性溶媒中で実行される、段落１１８から１２１のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１２３．還元反応が非プロトン溶媒中で実行される、段落１１８から１２１のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１２４．還元反応が、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される、段落１１８から１２１のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１２５．ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）が、非プロトン溶媒中で実行される、段落１１８から１２１のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１２６．ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）が、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）またはＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）溶媒中で実行される、段落１１８から１２１のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１２７．ステップ（ｃ）およびステップ（ｄ）が、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中で実行される、段落１１８から１２１のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１２８．還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム、ＢｒｏｎｓｔｅｄまたはＬｅｗｉｓ酸の存在下の水素化ホウ素ナトリウムまたは亜鉛、ピリジンボラン、２－ピコリンボラン、２，６－ジボラン－メタノール、ジメチルアミン－ボラン、ｔ－ＢｕＭｅｉＰｒＮ－ＢＨ３、ベンジルアミン－ＢＨ３または５－エチル－２－メチルピリジンボラン（ＰＥＭＢ）などのアミンボランからなる群から選択される、段落１１８から１２７のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１２９．還元剤が、シアノ水素化ホウ素ナトリウムである、段落１１８から１２７のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１３０．未反応のアルデヒド基が、キャップを付けられる、段落１１８から１２９のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１３１．未反応のアルデヒド基が、キャッピング剤を使用してキャップを付けられる、段落１１８から１２９のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１３２．未反応のアルデヒド基が、ホウ化水素ナトリウム（ＮａＢＨ４）を使用するキャッピング剤を使用してキャップを付けられる、段落１１８から１２９のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１３３．糖コンジュゲートが精製される、段落１１８から１３３のいずれか１つに記載のコンジュゲーションプロセス。
１３４．段落８１から１１７のいずれか１つに記載のプロセスに従って得られた、または得られる活性化された糖の混合物。
１３５．段落１１８から１３３のいずれか１つに記載のプロセスに従って得られた、または得られる糖コンジュゲート。
本明細書で使用される場合、用語「約」は、記述された濃度範囲、時間枠、分子量、温度またはｐＨなどの、統計的に意味のある値の範囲内にあることを意味する。そのような範囲は、所与の値または範囲の１桁分以内、典型的には、２０％以内、より典型的には、１０％以内、さらにより典型的には、５％以内または１％以内であってもよい。時には、そのような範囲は、所与の値または範囲の測定および／または決定のために使用される標準的な方法に典型的な実験誤差以内であってもよい。用語「約」によって包含される許容可能な変動は、試験下の特定の系に依存し、当業者であれば容易に理解できる。本出願内である範囲が記載される場合はいつでも、その範囲内の全整数も、本開示の実施形態として企図される。
本明細書における用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、全ての例において、それぞれ、用語「本質的にからなる（Ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「本質的にからなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏｆ）」と置換可能であってもよいことが本発明者らによって意図される。
本特許明細書内で引用される全ての参考文献または特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、添付の実施例に例示される。以下の実施例は、そうでなければ詳細に説明される場合を除いて、当業者には周知であり、日常的である標準的な技術を使用して実行される。実施例は、例示的であるが、本発明を限定するものではない。
（実施例１）
個別に活性化された多糖を使用する多血清型１ポットコンジュゲーションプロセス
１ポットコンジュゲーションフェーズは、以下のステップ：
１．個別に活性化された多糖の混合
２．活性化された多糖と、スクロースとの混合
３．シェル凍結および凍結乾燥
４．凍結保存された多糖およびＣＲＭ１９７の復元
５．活性化された多糖のＣＲＭ１９７へのコンジュゲーション
６．コンジュゲーションの精製および希釈
からなる。
１ 個別に活性化された多糖の混合、スクロースとの混合、シェル凍結および凍結乾燥
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂの個別に活性化（酸化）された多糖を、酸化剤として過ヨウ素酸ナトリウムを使用して取得した。
前記活性化された多糖の特徴を、表１にまとめる。
Figure 0007585203000117
個別に活性化された多糖を、等量（ｍｇ）で混合した後、活性化された多糖１グラムあたり２５グラムのスクロースの比で、スクロースと混合した（注射用水（ＷＦＩ）中で５０％ｗ／ｖ）。成分を、１００±１０ｒｐｍで５～１５分間混合した。活性化された多糖およびスクロースを含有するフィルボトルの温度を、シェル凍結前に２～８℃に維持した。混合した混合物のシェル凍結されたボトルを、ＮＬＴ６時間にわたって－６５℃以下で保存した後、凍結乾燥した。凍結乾燥後、活性化された多糖を含有するボトルを、充填日から６０日以下にわたって－２０±５℃で保存したか、またはコンジュゲーションのためにすぐに使用した。計算された量のＣＲＭ１９７タンパク質をシェル凍結し、別々に凍結乾燥した。
２ 凍結乾燥された活性化された多糖およびＣＲＭ１９７タンパク質の復元
凍結乾燥された活性化された多糖および凍結乾燥されたＣＲＭ１９７を、周囲温度にした（４５～３６０分間）。凍結乾燥された活性化された多糖を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で復元した。活性化された多糖の復元の完了時に、ＤＭＳＯを、凍結乾燥されたＣＭＲ１９７に添加した。典型的には、活性化された多糖と、ＤＭＳＯ中のＣＲＭ１９７との両方の復元後、透明な溶液が得られる（外見による）。
３ 活性化された多糖のＣＲＭ１９７へのコンジュゲーション
コンジュゲーション反応容器に、最初に復元された活性化された多糖を入れた後、復元されたＣＲＭ１９７を添加した。ＣＲＭ１９７と多糖とを、６０～１８０分間混合した後、コンジュゲーションを開始した。反応溶液中の最終多糖濃度は、１ｇ／Ｌである。１．５ＭＥｑのＮａＣＮＢＨ３を反応混合物に添加することによってコンジュゲーション反応を開始させ、２３±２℃で２４±４時間にわたってインキュベートした（表２のコンジュゲーションプロセスを参照されたい）。
Figure 0007585203000118
コンジュゲーション反応が完了した後、２ＭＥｑのＮａＢＨ４（水素化ホウ素ナトリウム、１００ｍｇ／ｍＬ溶液）を添加して、反応を終結させた。キャッピング反応を、１３０±１０ｒｐｍで連続的に混合しながら、２３±２℃で３～４時間の期間にわたって進行させた。
４ コンジュゲートの希釈および精製
１００Ｋ ＭＷＣＯの再生セルロース膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ）を使用する接線流濾過による精製に備えて、コンジュゲート溶液を４倍容量の冷やした５ｍＭコハク酸塩－０．９％ＮａＣｌ（ｐＨ６．０）で希釈した。次いで、コンジュゲート溶液を、１ｇ／Ｌまで濃縮し、媒体として５ｍＭコハク酸塩－０．９％ＮａＣｌ（ｐＨ６．０）を使用して透析濾過を実施した。
透析濾過が完了した後、精製されたコンジュゲートを５ｍＭコハク酸塩－０．９％ＮａＣｌ（ｐＨ６．０）で希釈した後、０．２２μｍのＰＶＤＦフィルターを通して収集タンクに濾過した。コンジュゲートを、５±３℃で３０日以下にわたって保存することができる。
個別に活性化された多糖を使用する上記の多血清型１ポットコンジュゲーションプロセスのフローダイアグラムを、図５に提供する。
（実施例２）
比濁法による抗原性
４つ全ての血清型が担体タンパク質中に組み込まれたことを確保するために、コンジュゲートを、比濁法によって抗原性について試験した。抗原性データは、多くの反応性血清型２２Ｆの活性化された多糖が、血清型１０Ａおよび３３Ｆと比較して、より高い割合で組み込まれることを示していた（図６を参照されたい）。血清型３５Ｂは、比濁法によって分析しなかった（好適な抗体試薬の欠如のため）。
（実施例３）
個別に活性化された多糖を使用する多血清型１ポットコンジュゲーションプロセス
いくつかの多血清型（２、３または４価コンジュゲート）を、実施例１に記載のプロセスを使用して製造した。
１ポットコンジュゲーションフェーズは、同じステップからなる（図５も参照されたい）。
得られた異なる多血清型コンジュゲートおよびその特徴を、表３にまとめる。
Figure 0007585203000119
（実施例４）
肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）多血清型のオプソニン貪食作用免疫応答の評価
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する宿主防御は、主に抗莢膜抗体依存的オプソニン貪食作用によって媒介される。機能的抗体および補体の存在下での食作用エフェクター細胞による肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細胞の殺傷を測定する肺炎球菌オプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）は、肺炎球菌ワクチンの有効性を評価するための重要な代用物であると考えられる。
多血清型コンジュゲートの免疫原性（実施例３を参照されたい）を、血清型特異的ＯＰＡを使用してマウスにおいて評価した。
２５匹のＳｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒマウス（６～８週齢）の８つの異なる群を、０週で異なる用量のコンジュゲートまたはコンジュゲートの混合物で皮下的に免疫した（８つの群に関する表４の試験設計を参照されたい、第１群は対照群であり、コンジュゲートを受けなかった）。３週で同じ用量の同じコンジュゲートをマウスに追加接種した後、４週で採血した。血清型特異的ＯＰＡを、４週の血清試料に対して実施した。
オプソニン貪食活性（ＯＰＡ）アッセイを使用して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに特異的なマウス血清中の機能的抗体を測定する。試験血清は、莢膜多糖特異的免疫グロブリンが、細菌をオプソニン化し、補体沈着を誘発することによって、食細胞による細菌の貪食および殺傷を容易にする能力を測定するアッセイ反応において設定される。ＯＰＡ力価は、試験血清を含まない対照ウェルと比較して細菌数の５０％の減少をもたらす希釈率の逆数と定義される。ＯＰＡ力価は、この５０％殺傷カットオフを包含する２つの希釈率から内挿される。
ＯＰＡ手順は、以下の改変と共に、Ｈｕら（２００５）Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ １２（２）：２８７～２９５に記載の方法に基づくものであった。試験血清を、２．５倍に段階希釈し、マイクロタイターアッセイプレートに添加した。生きた標的細菌株をウェルに添加し、プレートを２５℃または３７℃で３０分間振とうした。分化したＨＬ－６０細胞（食細胞）および子ウサギ血清（３～４週齢、ＰＥＬ－ＦＲＥＥＺ（登録商標）、１２．５％最終濃度）をウェルに添加し、プレートを３７℃で４５または６０分間振とうした。反応を終結させるために、８０μＬの０．９％ＮａＣｌを全てのウェルに添加し、混合し、１０μＬアリコートを、２００μＬの水を含有するＭＵＬＴＩＳＣＲＥＥＮ（登録商標）ＨＴＳ ＨＶフィルタープレート（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ（登録商標））のウェルに移した。液体を減圧下でプレートを通して濾過し、１５０μＬのＨＹＳＯＹ（登録商標）培地を各ウェルに添加し、濾過した。次いで、フィルタープレートを３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした後、Ｄｅｓｔａｉｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）で固定した。次いで、プレートをクマシーブルーで染色し、１回脱色した。コロニーを画像化し、Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ（ＣＴＬ）（Ｓｈａｋｅｒ Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＯＨ）ＩＭＭＵＮＯＳＰＯＴ（登録商標）Ａｎａｌｙｚｅｒ上で計数した。生のコロニー数を使用して、殺傷曲線をプロットし、ＯＰＡ力価を算出した。
Figure 0007585203000120
結果－１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆ、および３５ＢにおけるＯＰＡ応答
異なるコンジュゲートで免疫したマウス血清の応答を、それぞれのオプソニン貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）において評価した。
表５に示されるように、ＯＰＡ力価は、ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来する糖を含む多血清型コンジュゲートと、対応する対照（ＣＲＭ１９７に独立にコンジュゲートされた４つのコンジュゲートの混合物）との間で有意差を示さなかった。
表５、異なる血清型に関するＯＰＡ力価。異なる肺炎球菌コンジュゲートをワクチン接種されたマウスに由来する血清（表４の試験設計を参照）を、各血清型に対する機能的抗体の存在についてＯＰＡにおいて評価した。
Figure 0007585203000121
結論
ＣＲＭ１９７にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂに由来する糖を含む多血清型コンジュゲートは、ＣＲＭ１９７に独立にコンジュゲートされた４つのコンジュゲートの混合物と同等の血清群１０Ａ、２２Ｆ、３３Ｆおよび３５Ｂの機能的殺傷を誘導した。これらのデータに基づくと、単一の多血清型コンジュゲートは、担体に独立にコンジュゲートされた４つのコンジュゲートの混合物と同レベルの４つの血清型１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂに対するカバレッジを提供する可能性が高い。これは、多価設定においてより低用量の担体が必要である可能性を意味する。これはさらに、より少ない製剤原料およびより少ないステップが必要であるため、多価肺炎球菌ワクチンの生産を単純にする可能性を意味する。多血清型肺炎球菌コンジュゲートはまた、限られた数のコンジュゲートのみを用いていくつかの血清型に対する防御を提供することによって、多価ワクチンをより容易にカスタマイズするのに役立つ。
４価多血清型コンジュゲート（１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ）の結果を考慮すると、３価（１０Ａ／２２Ｆ／３３Ｆ、１０Ａ／２２Ｆ／３５Ｂ、１０Ａ／３３Ｆ／３５Ｂもしくは２２Ｆ／３３Ｆ／３５Ｂ）または２価（１０Ａ／２２Ｆ、１０Ａ／３３Ｆ、１０Ａ／３５Ｂ、２２Ｆ／３３Ｆ、２２Ｆ／３５Ｂもしくは３３Ｆ／３５Ｂ）多血清型コンジュゲートは、同様の利益を提供する可能性が高い。
（実施例５）
個別に活性化された多糖を使用する多血清型１ポットコンジュゲーションプロセス
１ポットコンジュゲーション水性相プロセスは、以下のステップ：
１．活性化された多糖とＣＲＭ１９７タンパク質とのシェル凍結および同時凍結乾燥
２．ＤＭＳＯ中での活性化された多糖およびＣＲＭ１９７の復元
３．コンジュゲーションおよびキャッピング
４．コンジュゲートの精製
からなる。
１ 個別に活性化された多糖と、ＣＲＭ１９７との混合、シェル凍結および凍結乾燥
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型８、１５Ａ、１５Ｂ、２３Ａおよび／または２３Ｂの個別に活性化（酸化）された多糖を、酸化剤として過ヨウ素酸ナトリウムを使用して取得する。
個別に活性化された多糖を、ＣＲＭ１９７タンパク質と混合する。次いで、混合物をシェル凍結し、凍結乾燥する。
２ 凍結乾燥された活性化された多糖およびＣＲＭ１９７タンパク質の復元
異なる血清型の凍結乾燥された活性化された多糖とＣＲＭ１９７との混合物を、そのｐＨ適合性に基づいて選択し、組み合わせる。リン酸緩衝剤を添加して、混合物を均一な溶液中で復元する。
３ 活性化された多糖のＣＲＭ１９７へのコンジュゲーション
ＮａＣＮＢＨ３（シアノ水素化ホウ素ナトリウム）を反応混合物に添加することによって、コンジュゲーション反応を開始させる。
コンジュゲーション反応が完了した後、ＮａＢＨ４（水素化ホウ素ナトリウム）を添加して、反応を終結させる。
４ コンジュゲートの精製
コンジュゲート溶液を、５ｍＭコハク酸塩－０．９％ＮａＣｌ緩衝剤で希釈した後、１００Ｋ ＭＷＣＯを使用する接線流濾過によって精製する。その結果を以下の表にまとめる。
個別に活性化された多糖を使用する上記の多血清型１ポットコンジュゲーションプロセスのフローダイアグラムを、図５に提供する。
（実施例６）
比濁法による抗原性
全ての血清型が担体タンパク質中に組み込まれたことを確保するために、コンジュゲートを、比濁法によって抗原性について試験する。
例えば、血清型１５Ａおよび１５Ｂを含む二価コンジュゲートを、比濁法によって抗原性について試験し、総糖含量をアントロンアッセイによって測定した（図１３を参照されたい）。血清型１５Ａは、比濁法によって分析しなかった。
（実施例７）
個別に活性化された多糖を使用する多血清型１ポットコンジュゲーションプロセス
１ポットコンジュゲーション水性相プロセスは、以下のステップ：
１．活性化された多糖とＣＲＭ１９７タンパク質とのシェル凍結および同時凍結乾燥
２．水性緩衝剤中での活性化された多糖およびＣＲＭ１９７の復元
３．コンジュゲーションおよびキャッピング
４．コンジュゲートの精製
からなる。
１ 個別に活性化された多糖と、ＣＲＭ１９７との混合、シェル凍結および凍結乾燥
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型８、１１Ａ、１２Ｆ、２３Ａおよび／または２３Ｂの個別に活性化（酸化）された多糖を、酸化剤として過ヨウ素酸ナトリウムを使用して取得する。
個別に活性化された多糖を、ＣＲＭ１９７タンパク質と混合する。次いで、混合物をシェル凍結し、凍結乾燥する。
２ 凍結乾燥された活性化された多糖およびＣＲＭ１９７タンパク質の復元
異なる血清型の凍結乾燥された活性化された多糖とＣＲＭ１９７との混合物を、そのｐＨ適合性に基づいて選択し、組み合わせる。リン酸緩衝剤を添加して、混合物を均一な溶液中で復元する。
３ 活性化された多糖のＣＲＭ１９７へのコンジュゲーション
ＮａＣＮＢＨ３（シアノ水素化ホウ素ナトリウム）を反応混合物に添加することによって、コンジュゲーション反応を開始させる。
コンジュゲーション反応が完了した後、ＮａＢＨ４（水素化ホウ素ナトリウム）を添加して、反応を終結させる。
４ コンジュゲートの精製
コンジュゲート溶液を、５ｍＭコハク酸塩－０．９％ＮａＣｌ緩衝剤で希釈した後、１００Ｋ ＭＷＣＯを使用する接線流濾過によって精製する。その結果を以下の表５にまとめる。
Figure 0007585203000122
（実施例８）
比濁法による抗原性
全ての血清型が担体タンパク質中に組み込まれることを確保するために、コンジュゲートを、比濁法によって抗原性について試験する（図１６および図１７を参照されたい）。
例えば、血清型１１Ａと２３Ｂまたは血清型８と１２Ｆを含む２つの二価コンジュゲートを、比濁法によって抗原性について試験し、総糖含量をアントロンアッセイによって測定した（図１６および図１７を参照されたい）。血清型２３Ｂは、比濁法によって分析しなかった。

Claims (15)

  1. 担体タンパク質の同じ分子にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３５Ｂに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖からなる群から選択される少なくとも２つの多糖を含む糖コンジュゲート。
  2. 担体タンパク質の同じ分子にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖からなる群から選択される少なくとも２つの多糖を含む糖コンジュゲート。
  3. 担体タンパク質の同じ分子にコンジュゲートされた、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８に由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ａに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ａに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖および肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２３Ｂに由来する２０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの分子量を有する多糖からなる群から選択される少なくとも２つの多糖を含む糖コンジュゲート。
  4. ２、３または４価糖コンジュゲートである、請求項１から３のいずれか一項に記載の糖コンジュゲート。
  5. 前記コンジュゲートのコンジュゲーション度が、２～１５である、請求項１から４のいずれか一項に記載の糖コンジュゲート。
  6. 糖コンジュゲート中の多糖の担体タンパク質に対する比（重量／重量）が、０．５～３．０である、請求項１から５のいずれか一項に記載の糖コンジュゲート。
  7. 多糖の比（重量／重量）が、約０．７、約０．８、約０．９、約１．０、約１．１または約１．２である、請求項１から６のいずれか一項に記載の糖コンジュゲート。
  8. 前記担体タンパク質が、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ変異体（例えば、ＣＲＭ１９７）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、ＰｈｔＸ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＤＥ融合物、解毒されたニューモリシン、ＰｏｒＢ、Ｎ１９タンパク質、ＰｓｐＡ、ＯＭＰＣ、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢおよびＰｓａＡからなる群において選択される、請求項１から７のいずれか一項に記載の糖コンジュゲート。
  9. 前記担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、請求項１から７のいずれか一項に記載の糖コンジュゲート。
  10. 前記糖コンジュゲートが還元的アミノ化を使用して調製される、請求項１から９のいずれか一項に記載の糖コンジュゲート。
  11. 請求項１から１０のいずれか一項に記載の少なくとも１つの糖コンジュゲートを含む免疫原性組成物。
  12. 少なくとも１つのアジュバントをさらに含む、請求項１１に記載の免疫原性組成物。
  13. 薬剤としての使用のための、請求項１１から１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  14. ワクチンとしての使用のための、請求項１１から１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
  15. 対象における肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染、疾患または状態を防止、処置または改善する方法における使用のための、請求項１１から１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
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