JP7301539B2 - ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム - Google Patents

Description

本発明は、液体ボツリヌス毒素組成物を含むガラス製シリンジバレル、プランジャーストッパー、及び先端キャップ又は針シールドなどの閉鎖デバイスを備える、望ましい注入力特性を有する、特に、低い摺動平衡応力（gliding force）及び低い摺動降伏応力（break loose force）を有する、ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムに関する。さらに本発明は、前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム及び所望による使用説明書を含むキット、並びに、治療応用及び美容応用における前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの使用に関する。

プレフィルドシリンジ（ＰＦＳ）は、バイアルやアンプルのような従来の送達系に優る、患者の安全性、利便性、投薬の正確さ、信頼性、及び薬剤廃棄量の減少などの、使用を迫る恩恵の範囲から、薬剤送達デバイスとして使用されることがますます増えている。現在、プレフィルドシリンジは、広範な用途に亘って、多数の注射用製剤にとっての最適な提示になると目されている。

しかしながら、タンパク質ベースの製剤のような非常に感受性が高い生物学的製剤をプレフィルドシリンジ式で提示することは、しばしば、製薬会社の主要な課題となる。１つの理由は、タンパク質ベースの製剤がｐＨ、温度、イオン強度、特定の化学物質（例えば、遊離シリコーン粒子）及び他の因子に対する感受性が高いことにより、その安定性がしばしば制限を受けるためである。一般に、タンパク質ベースの製剤はシリンジ表面に吸着する傾向も高く、凝集及び変性を起こし易い。さらに、一般に、保管中の液体タンパク質製剤とシリンジ材との相互作用によって、タンパク質の安定性及び活性に悪影響を及ぼす可能性がある、物質の放出（いわゆる「溶出物」及び「浸出物」）が引き起こされる。

感受性が高いタンパク質ベース製剤用のプレフィルドシリンジを開発する上での別の大きな懸案事項は、長期的なシリンジの機能性である。例えば、滑り力（sliding force）が高過ぎると、注射の所望の利便性、精度及び正確度を保証することができない。さらに、プレフィルドシリンジの摺動降伏応力は、特に長期保存後、許容できないほど高くなる場合があり、過剰投与のリスクに繋がる。従って、プランジャーが必要な時に自由に動き、長期保管後もバレルに固着しないことが必須となる。しかし、所望のシリンジ機能性を与え得るシリンジ材料は、タンパク質ベース製剤を不安定化し得る溶出物／浸出物及び他の物質を放出するため、感受性が高いタンパク質ベース製剤と適合しないことが多い。従って、多くの場合で、所望のシリンジ機能性を得ることは大きな課題となる。

ボツリヌス毒素は上記の感受性が高いタンパク質ベース製剤の一例である。ボツリヌス毒素は非常に強力な神経毒であり、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）及び関連クロストリジウム属種によって産生される。今日、ボツリヌス毒素は広範な消耗性神経筋疾患（例えば、痙性斜頚、眼瞼痙攣、痙縮、及び多汗）の治療、並びに美容医療（例えば、顔の皺の治療）で使用されている。ボツリヌス毒素の有効成分は、天然には他の非毒性クロストリジウムタンパク質との複合体として存在しており、神経毒性ポリペプチド（「神経毒成分」とも称される）である。この神経毒成分は様々な血清型（血清型Ａ～Ｇ）で存在しており、約１００ｋＤａの重鎖と約５０ｋＤａの軽鎖とからなる。

その固有の不安定性から、ボツリヌス毒素は、使用前に生理食塩水で再構成される凍結乾燥製剤として一般に市販されており、例えば、Ｂｏｔｏｘ（登録商標）（アラガン社、カリフォルニア州アービン）、Ｄｙｓｐｏｒｔ（登録商標）（イプセン社、フランス）、及びＸｅｏｍｉｎ（登録商標）（メルツファーマ社、ドイツ）などがある。しかしながら、このような凍結乾燥製品の使用は、使用の不便さ、無菌性の問題、不正確な投与、可溶化／希釈の問題、高価な再構成毒素の浪費、及び再構成後の毒素製剤の保管時間の制限など、多くの欠点に悩まされる。

従って、当該技術分野では、十分な毒素安定性を与え、適切な注入力特性という点で所望の機能性も有するボツリヌス毒素プレフィルドシリンジが強く求められている。特に、少量の毒素を注射しようとする場合であっても、且つ／又は、毒素を頻回注射によって投与しようとする場合であっても、摺動平衡応力が低いことで所与の用量の正確な投与を可能とする、ボツリヌス毒素シリンジに強い関心が集まっている。さらに、摺動降伏応力が低いことで、毒素の精確な反復注射を可能とし、且つ毒素を過剰投与するリスクを軽減する、ボツリヌス毒素シリンジにも強い関心が集まっている。

本発明の目的
上記に鑑みて、本発明の目的は、注入力特性の点で優れた機能性を有する安定なボツリヌス毒素プレフィルドシリンジを提供することである。

上記の目的は、シリンジの内側のボツリヌス毒素の十分な安定性を示すだけでなく、好都合に低い摺動平衡応力及び摺動降伏応力をそれぞれ示す、ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの提供により果たされる。ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの有益な化学的特性及び機械的特性が、長期保存後も達成可能であり、故に、その貯蔵寿命全体を通して達成可能であることが分かった。すなわち、本発明のプレフィルドシリンジシステムは、簡便で、信頼のおける、安全な、ボツリヌス毒素投与法である。

第一の態様において、本発明は、
液体ボツリヌス毒素製剤を含有するチャンバを規定する内側表面を含み、近位端及び遠位端を有し、且つ、所望によりその外側表面に標識が添付された、ガラス製シリンジバレル；
前記シリンジバレルの内側に摺動自在に配置された、且つ、シリンジバレルの近位端の液密シールを形成する、プランジャーストッパー；
液体ボツリヌス毒素製剤の漏出を防ぐための、前記シリンジシステムの遠位開口出口端をシール係合し閉鎖する出口係合部を有する、シリンジバレルの遠位端に取り付けられた閉鎖デバイス；
を備え、
３２Ｇ×１／２″針及び１００ｍｍ／分の変位速度を用いて２０℃の温度で測定された場合に２０Ｎ以下の正規化最大摺動平衡応力を有し、ここで正規化最大摺動平衡応力は以下の通りに定義され：
ＧＦ_ｍａｘ＝ＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}×（ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２／（Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２
式中、
ＧＦ_ｍａｘは正規化最大摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
ＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}は、前記プランジャーストッパーが前記シリンジバレルの遠位端で前進を終えるまでの、実測最高摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
ｄｂａｒｒｅｌは参照シリンジのバレル内径であり、６．３５ｍｍであり、
Ｄｂａｒｒｅｌはプレフィルドシリンジシステムのバレル内径（単位ｍｍ）である、
ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムを提供する。

加えて、前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、好ましくは、摺動降伏応力ピークを示さないか、ほとんど示さない（摺動降伏応力はプランジャーの移動を開始するのに必要な力である）。すなわち（this is）、プランジャーストッパーとシリンジバレルの内表面との間の抵抗に打ち勝つための力ピークが存在しないか又は実質的に存在せず、摺動降伏応力から摺動平衡応力への遷移において急落がない。むしろ、力対変位プロットの記録では、摺動降伏応力は摺動平衡応力の増加にそのまま併合できる。さらに、前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、さらに好ましくは、低い動的摺動平衡応力（プランジャーの移動を維持してシリンジの内容物を排出するために必要とされる力）を有する。

第二の態様において、本発明は、本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム、及び所望により、前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの使用説明書を含むキットを提供する。

第三の態様において、本発明は、治療で用いるための、本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムを提供する。前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、ジストニア、痙縮、パラトニア、ジスキネジア（diskinesia）、焦点性痙攣、斜視、振戦、チック、片頭痛、流涎症及び多汗を含むがこれらに限定はされない、筋肉又は外分泌腺の活動亢進性コリン作動性神経支配を原因とする、又はそれに関連した、患者の疾患又は状態の治療のために使用されることが好ましい。

第四の態様において、本発明は、美容用途における、特に皮膚の皺及び顔面非対称の美容整形術のための、例えば眉間皺線、目尻の皺、上部顔面皺及び広頸筋の横縞の治療のための、本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの使用に関する。

第五の態様において、本発明は、本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムを用いて有効量のボツリヌス毒素を患者の筋肉又は外分泌腺に局所投与することを含む、筋肉又は外分泌腺の活動亢進性コリン作動性神経支配を原因とする、又はそれに関連する、患者の疾患又は状態を治療するための方法を提供する。

第六の態様において、本発明は、本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムを用いて、好ましくは皮内注射、真皮下注射又は皮下注射によって、有効量のボツリヌス毒素を患者に局所投与することを含む、皮膚の美容整形術のための、特に皮膚の皺及び顔面非対称を治療するための方法を提供する。

添付の従属クレームには本発明のさらなる実施形態が記載されており、これら及び他の本発明の実施形態は、以下の発明を実施するための形態、実施例及び添付の図面を参照することにより、より深く理解される。

下記の発明を実施するための形態は添付の図面と併せることで最良の理解が得られる。

図１は本発明の例示的なプレフィルドシリンジシステムの横断側面図である。

図２は本発明のプレフィルドシリンジシステムの例示的なプランジャーストッパーの横断側面図である。

図３は、３２Ｇｘ１／２″針を介して、２０℃で、１００ｍｍ／分の変位速度を適用して測定された、１ｍｌの充填体積を有する例示的なボツリヌス毒素プレフィルドシリンジ（構成Ｂ）についての、プランジャーの変位に対する摺動平衡応力のプロットであり、示されている曲線は測定されたいくつかの個々のシリンジに対応している。

図４は、時間の関数としての、２～８℃における構成Ａ、Ｂ、Ｇ、及びＨのプレフィルドシリンジ内の液体ボツリヌス毒素製剤の安定性を示すグラフである（構成Ａ：（●）、構成Ｂ：（■）、構成Ｈ：（□）、構成Ｇ：（○））。

図５は、時間の関数としての、２５℃における構成Ａ、Ｂ、Ｇ、及びＨのプレフィルドシリンジ内の液体ボツリヌス毒素製剤の安定性を示すグラフである（構成Ａ：（●）、構成Ｂ：（■）、構成Ｈ：（□）、構成Ｇ：（○））。

本発明は、所望のタンパク質安定性を与え、注入特性の点で優れた機能性を有する、ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムを提供する。より具体的には、ボツリヌス毒素の複雑性及び不安定性、並びに高度に希釈されるその用法にもかかわらず、本発明のプレフィルドシリンジシステムは、タンパク質の安定性及びシリンジの機能性（摺動降伏応力、摺動平衡応力など）という技術的課題に念願の解決をもたらす。

有利には、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、全プランジャー変位距離に亘って、シリンジバレル内部でのプランジャーストッパーの滑らかな滑動を可能とする摺動平衡応力を有する。これにより、操作者は、簡便且つ正確にシリンジの全内容物を完全に放出することが可能となり、高価な毒素物質の浪費を回避することが可能となる。しかし、この摺動平衡応力は、例えば注射を止めた後、又は注射部位の変更時の患者の皮膚上への、神経毒性が強い液体ボツリヌス毒素製剤の、望ましくない滴りをもたらすほどには低すぎもしない。

さらに、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの、摺動降伏応力、すなわちプランジャーストッパーの移動を開始させるのに必要な力は、好都合に低い。高過ぎる摺動降伏応力は、特に摺動降伏応力から摺動平衡応力への遷移における急落と組み合わされた場合、投与しようとする薬剤の過剰投与のような問題をシリンジ使用者にもたらすことが知られている。これは、プレフィルドシリンジ内の製剤内容物を多刺法で適用しようとする場合に特に重要であり、典型的にはボツリヌス毒素の場合である。

驚くべきことに、本発明のプレフィルドシリンジシステムの上記の有利な特性は、プレフィルドシリンジの貯蔵寿命全体を通して、例えば１２ヶ月間の保管後も、達成できる。すなわち（this is）、他のプレフィルドシリンジ型では遭遇するような、数ヶ月間の保管後に典型的に生じる潜在的な望ましくない変化、例えば、数ヶ月間の保管後の摺動平衡応力の増加及び／又は摺動降伏応力の増加（例えば、プランジャーストッパーは嵌って動かなくなるため）が、基本的に本発明のプレフィルドシリンジシステムには観察されない。実際に、１８～２４ヶ月ほども長くの本発明のボツリヌス毒素シリンジの長期保存でさえ、驚くべきことに、その有利な特性の有意な劣化に繋がらないことが分かった。

すなわち、投薬過誤の最少化、安全性の強化、高い利便性及び使い易さ、並びに毒素の損失又は浪費の最小化によるコスト低減を含む、プレフィルドシリンジ型の薬剤提示に付随する多くの利点により、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジは、製造業者だけでなく最終用途にとっての双方両得の解決策となり、大きな潜在性を有することが期待される。

以下、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムのいくつかの態様及び特徴を、添付の図面を参照しながら説明するが、この添付の図面は、本発明の原理の例示と見なされるべきであり、本発明の広範な態様又は一般的な特徴を、例示された特定の実施形態に限定することを意図していない。

第一の態様において、本発明は、ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムに関する。

本明細書で使用される場合、用語「プレフィルドシリンジ」とは、エンドユーザーへの配布前に薬剤組成物を充填されたシリンジを指す。プレフィルドシリンジは、一般的には、シリンジ本体（すなわちシリンジバレル）の一部を形成する薬剤格納容器、シリンジの一方の開口端を封鎖し、薬剤を排出するための、プランジャーストッパー（及び通常はプランジャーロッド）、並びに、遠位出口開口部を封鎖するための、シリンジの出口端（例えば、シリンジ先端の、又は事前に装着された針若しくはカニューレの開口端）に接した閉鎖デバイス（例えば、先端キャップ又は針シールド）、を備える。用語「プレフィルドガラス製シリンジ」とは、本明細書で使用される場合、少なくともバレルがガラス製であるプレフィルドシリンジを指す。

本発明の範囲内で、前記プレフィルドシリンジシステムは、好ましくは、先端キャップ（針が事前装着されていない場合）又は針シールド（針が事前装着されている場合）を装着されていてもよい、ルアー型のシリンジ又はシリンジシステム、例えば、ルアースリップシリンジ又はルアーロックシリンジである。通常は無菌であり、すなわち使用準備済である。さらに、本明細書に記載のプレフィルドシリンジシステムは、通常は一回使い切り用であり、使い捨てであるよう意図されている。（空の）プレフィルドシリンジシステム又はその構成要素の好適な滅菌法としては、γ線照射、エチレンオキシド（ＥＴＯ）処理及び湿式加熱（例えば、オートクレーブ）が挙げられるが、これらに限定はされない。

プレフィルドシリンジの構成は特に制限されないが、一般的には、シリンジの遠位端をシール閉鎖するための閉鎖デバイスによって着脱可能に蓋をされ、且つ、充填後にプランジャー又はバレルの内壁と液密に係合するあらゆる他の手段によって近位端において閉鎖される、液受けバレルを備える。「閉鎖デバイス」は、例えば、使用前に取り外され針と置換される「キャップ」若しくは「先端キャップ」、又は取り外し可能若しくは常置の針を備えたシリンジの場合は針シールドのようなシール手段であり得る。前記プレフィルドシリンジを使用するには、先端キャップ、針シールド又は他の種類の閉鎖デバイスが取り除かれ、所望により針が取り付けられ（まだ取り付けられていない場合）、プランジャーの先端又はピストンがバレル内で前に押されて、バレルの内容物が注入される。

以下、図１を参照して、プレフィルドシリンジシステム１０は、シリンジバレル１２、通常はプランジャーロッド１６に接続されたプランジャーストッパー１４、及び閉鎖デバイス１８（例えば、先端キャップ又は針シールドを含む）を備える。シリンジバレル１２は、ガラス製であり、チャンバ２２を規定する内側表面２０を含み、遠位端２４及び開口近位端２６を有する。シリンジバレル１２の遠位端２４と近位端２６との間に伸びる壁は、概して円柱状の形を有していてよい。前記シリンジは、概して、シリンジバレル１２の遠位端２４から遠位に突出しているシリンジ先端２８を有する。前記先端２８は、シリンジ先端２８中に伸び、バレル内腔と連通している、液通路３８を有する。あるいは、シリンジバレル１２の遠位端２４は、針組立体などを受け入れられるように適合されていてもよい。

プランジャーストッパー１４は、シリンジバレル１２の内側に摺動自在に配置され、シリンジバレル１２の近位端２６の液密シールを形成する。プランジャーストッパー１４は、シリンジバレル１２の内側表面との複数の接触面を与える複数の環状リブ４２を有する。閉鎖デバイス１８（例えば、先端キャップ又は針シールドを含む）は、シリンジバレル１２の遠位端２４、通常は先端２８に取り付けられ、液体ボツリヌス毒素製剤の漏出を防ぐための密封を与える。あるいは、少なくとも針及び針シールドを含む針組立体が、針組立体などを受け入れられるように適合されたシリンジバレル１２の遠位端２４に取り付けられる。好ましい実施形態では、閉鎖デバイス１８は、ルアーロックアダプタ３０、開封明示エラストマー部分３２、及びプレフィルドシリンジシステム１０の遠位開口端３６にシール係合し閉鎖するエラストマー系ゴムインサート（elastomeric rubber insert）３４を含む、開封明示ルアーロッククロージャー（tamper evident Luer Lock Closure）（ＴＥＬＣ）である。

さらに、シリンジバレル１２は外表面４０に添付された標識（図示せず）を有していてもよい。前記標識は、接着剤で又は他のあらゆる好適な手段で外表面４０に固定されてよく、シリンジバレル１２の外表面上のその位置は特に限定はされない。例えば、前記標識は、シリンジバレル１２を円周方向に取り囲むように、特に、シリンジバレル１２の近位上半分（upper proximal half）に配置されてよい。また、前記標識は、透明な標識又は透明な部分に印刷又は他の方法で適用された目盛線を有する、透明な標識又は透明な部分を有する標識であってもよい。この種類の標識は、シリンジバレル１２の軸方向に、シリンジバレル１２の外表面４０に添付されてもよい。

本発明においては、前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、３２Ｇ×１／２″針及び１００ｍｍ／分の変位速度を用いて２０℃の温度で測定された場合に、２０Ｎ以下の正規化最大摺動平衡応力（ＧＦ_ｍａｘ）を有することを特徴とし、ここで前記正規化最大摺動平衡応力は以下の通りに定義される：
ＧＦ_ｍａｘ＝ＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}×（ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２／（Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２
式中、
ＧＦ_ｍａｘは正規化最大摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
ＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}は、前記プランジャーストッパーが前記シリンジバレルの遠位端で前進を終えるまでの、実測最高摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}は参照シリンジのバレル内径であり、６．３５ｍｍであり、
Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}はプレフィルドシリンジシステムのバレル内径（単位ｍｍ）である。

「プランジャーストッパーがシリンジバレルの遠位端で前進を終えるまでの最高摺動平衡応力」は、本発明の意義の範囲内では、シリンジ本体の端に対してシリンジプランジャーが圧迫されることにより摺動平衡応力が急速に増加するプロット部分を除く、摺動平衡応力対プランジャー変位プロットに見られる、最大の摺動平衡応力を意味することが意図される。典型的には、最大摺動平衡応力は、シリンジ本体の端にプランジャーが圧迫されることによる急速な終期の増加前の、有効なプランジャー変位距離の終わり頃に認められる。

正規化最大摺動平衡応力ＧＦ_ｍａｘは、好ましくは１８Ｎ以下又は１５Ｎ以下、より好ましくは１２Ｎ以下又は１０Ｎ以下、最も好ましくは８Ｎ以下又は７Ｎ以下である。しかし、過度に低い（例えば２Ｎ未満又は１Ｎ未満の）正規化最大摺動平衡応力は、シリンジ使用者が注入を止めることを決めた後にプランジャーの望まれない後滑り（after-sliding）をもたらすことが予測されるため、望ましくない。さらに、低過ぎる摺動平衡応力は、神経毒性が強い液体ボツリヌス毒素製剤の望まれない滴りのリスクをもたらし得るため、望ましくない。

本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの別の好ましい特性は、他のプレフィルドシリンジシステムではしばしば認められる、摺動降伏応力ピークを全く又はほとんど示さない点である。本明細書で使用される場合、用語「摺動降伏応力」は、プランジャー又はプランジャーストッパーの移動を開始させるのに必要な力を意味することが意図される。

本発明との関連において、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの正規化摺動降伏応力は、３２Ｇ×１／２″針及び１００ｍｍ／分の変位速度を用いて２０℃の温度で測定された場合に、１５Ｎ以下であることが好ましく、最大摺動平衡応力未満であることが好ましく、ここで、正規化摺動降伏応力は以下の通りに定義される：
ＢＬＦ_ｎｏｒｍ＝ＢＬＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}×（ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２／（Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２
式中、
ＢＬＦ_ｎｏｒｍは正規化摺動降伏応力（単位Ｎ）であり、
ＢＬＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}は実測摺動降伏応力（単位Ｎ）であり、０ｍｍ～２ｍｍのプランジャー変位距離間で最大の摺動平衡応力と定義され、
ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}は参照シリンジのバレル内径であり、６．３５ｍｍであり、
Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}はプレフィルドシリンジシステムのバレル内径（単位ｍｍ）である。

正規化摺動降伏応力は、好ましくは１０Ｎ以下、８Ｎ以下又は６Ｎ以下、より好ましくは５Ｎ以下、４Ｎ以下又は３Ｎ以下である。加えて、又はそれとは別に、正規化摺動降伏応力は、好ましくは正規化最大摺動平衡応力（ＧＦ_ｍａｘ）未満、より好ましくはＧＦ_ｍａｘの７０％以下、６０％以下又は５０％以下、最も好ましくはＧＦ_ｍａｘの４０％以下、３０％以下又は２０％以下である。

さらに、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、概して、好都合に低い動的摺動平衡応力も有する。本明細書で使用される場合、用語「動的摺動平衡応力」は、プランジャーの移動を維持してシリンジの内容物を排出するのに必要な力を指すことが意図される。

本発明の枠内で、ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの動的摺動平衡応力は、３２Ｇ×１／２″針及び１００ｍｍ／分の変位速度を用いて２０℃の温度で測定された場合に、１５Ｎ以下であることが好ましく、ここで、正規化動的摺動平衡応力は以下の通りに定義される：
ＤＧＦ_ｎｏｒｍ＝ＤＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}×（ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２／（Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２
式中、
ＤＧＦ_ｎｏｒｍは正規化動的摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
ＤＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}は総プランジャー変位距離の１／３及び２／３における実測摺動平衡応力から算出される平均摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}は参照シリンジのバレル内径であり、６．３５ｍｍであり、
Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}はプレフィルドシリンジシステムのバレル内径（単位ｍｍ）である。

正規化動的摺動平衡応力（ＤＧＦ_ｎｏｒｍ）は、好ましくは１３Ｎ以下、１２Ｎ以下、１１Ｎ以下又は１０Ｎ以下、より好ましくは８Ｎ以下、６Ｎ以下又は５Ｎ以下である。

本発明においては、上記の正規化最大摺動平衡応力（ＧＦ_ｍａｘ）、正規化摺動降伏応力（ＢＬＦ_ｎｏｒｍ）、及び正規化動的摺動平衡応力（ＤＧＦ_ｎｏｒｍ）の最大値は、本発明のプレフィルドシリンジシステムの貯蔵寿命全体を通して達成される。すなわち（this is）、本発明の範囲内で、正規化最大摺動平衡応力（ＧＦ_ｍａｘ）は、保管無しで（すなわち、試験シリンジの作製直後又は作製後間もなく、例えば、２～８℃又は２５℃で１週間以内又は１～２日間の保管）、又は２～８℃若しくは２５℃で１２ヶ月間の保管後に、又は２～８℃又は２５℃で２４ヶ月間の保管後に、測定され得る。

同様に、本発明においては、正規化最大摺動降伏応力（ＢＬＦ_ｎｏｒｍ）も、保管無しで（すなわち、試験シリンジの作製直後又は作製後間もなく、例えば、２～８℃又は２５℃で１週間以内又は１～２日間の保管）、又は２～８℃若しくは２５℃で１２ヶ月間の保管後に、又は２～８℃又は２５℃で２４ヶ月間の保管後に、測定され得る。また、正規化動的摺動平衡応力（ＤＧＦ_ｎｏｒｍ）も、保管無しで（すなわち、試験シリンジの作製直後又は作製後間もなく、例えば、２～８℃又は２５℃で１週間以内又は１～２日間の保管）、又は２～８℃若しくは２５℃で１２ヶ月間の保管後に、又は２～８℃又は２５℃で２４ヶ月間の保管後に、測定され得る。

さらに、完全を期して、最大摺動平衡応力、摺動降伏応力、動的摺動平衡応力などを含む、摺動平衡応力を測定するための本明細書に記載の測定が、液体ボツリヌス毒素製剤を含有するプレフィルドシリンジシステムを用いて実施される点に留意されたい。言い換えれば、前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは空にされずに測定される（「空シリンジ測定」）。

本発明の範囲内で、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムのプランジャーストッパーは、好ましくは複数の環状リブ、具体的には２～６個、より具体的には２～５個又は３～４個、最も具体的には３個の環状リブを有する。

以下、図２を参照して、プランジャーストッパー１４の環状リブ４２ａ、４２ｂ、４２ｃ及び４２ｄは、シリンジバレル１２の内側表面２０と係合するための、プランジャーストッパー１４の複数の離れた接触面を形成する。環状リブは、「環状ロブ（annular lob）」又は「ひだ（lamella）」と呼ばれる場合もあり、概して、プランジャーストッパーの軸から外に向かって放射状に広がっている。プランジャーストッパー１４とシリンジバレル１２の内側表面２０との間の各々の離れた接触面は、プレフィルドシリンジのチャンバ内の無菌ボツリヌス毒素製剤製品の無菌性及び製品品質を維持するために要求される容器施栓完全性（container closure integrity）（ＣＣＩ）を満たすための、独立した封止を形成する。

本発明の枠内で、用語「環状リブ」は、特定の外形又は外観に限定されない。例えば、環状リブ４２ｂ、４２ｃ及び４２ｄは、横断側面図で見た場合、大まかに言えば、側方に突出した、所望により扁平な、小球の外形を有する。一方、環状リブ４２ａは、例えば、近位遠位軸方向に幅広の、周方向突出部である。

プランジャーストッパー１４は、プランジャーストッパー１４の近位端４６に隣接して位置する環状リブ４２ｂ、４２ｃ、４２ｄの半値全幅（ＦＷＨＭ）よりも大きなプランジャーストッパー１４の軸方向のＦＷＨＭを有する、プランジャーストッパー１４の遠位端４４に隣接して位置する環状リブ４２ａを有すればよく、ここでＦＷＨＭは、本明細書においては、プランジャーストッパーの軸に対して垂直方向の環状リブ（例えば、環状リブ４０ｃを参照）の最大高さ（図２では、環状リブ４２ｂ、４２ｃ及び４２ｄについては「ｘ」、環状リブ４２ａについては「ｙ」と標識）の半分である、環状リブ（例えば、環状リブ４０ｃを参照）の表面上の２点間のプランジャーストッパー１４の軸方向の幅と定義される。あるいは、本発明のプランジャーストッパー１４の全ての環状リブが、同じＦＷＨＭを有していてもよいし、あるいは、プランジャーストッパー１４の近位端４６に隣接して位置する環状リブ（例えば、環状リブ４２ｄ参照）が、プランジャーストッパー１４の遠位端４４に隣接して位置する環状リブ（例えば、４２ａ、４２ｂ、４２ｃを参照 のＦＷＨＭよりも大きなＦＷＨＭを有していてもよい。

概して、プランジャーストッパーの軸方向の、任意の２つの近位の隣接する環状リブ（すなわち、最も遠位の環状リブを除く全ての環状リブ）間の距離は、その２つの隣接する環状リブの上記定義の半値全幅（ＦＷＨＭ）の和の少なくとも２倍である。図２を参照すると、任意の２つの隣接する環状リブ間の前記距離はｚ_１及びｚ_２として示されている。

本発明においては、前記プランジャーストッパーは、７０ｍｍ^２以下の前記シリンジバレルの内側表面との正規化総接触面積を有し、前記正規化総接触面積は以下の通りに算出され、
ＴＣＡ_ｎｏｒｍ＝ＴＣＡ_ｃａｌｃ×（ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２／（Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２
式中、
ＴＣＡ_ｎｏｒｍは正規化総接触面積（単位ｍｍ^２）であり、
ＴＣＡ_ｃａｌｃは算出総接触面積（単位ｍｍ^２）であり、各環状リブの接触面（ＣＴ_ｒｉｂ）（ｍｍ^２）の和と定義され、式中、ＣＴ_ｒｉｂ＝２πｒｈであり、ｒは、プランジャーストッパーの軸と垂直な、環状リブの表面上の一点とプランジャーストッパーの軸との間の最大距離（単位ｍｍ）であり、ｈは環状リブの半値全幅（ＦＷＨＭ）（単位ｍｍ）であり、ＦＷＨＭは、プランジャーストッパーの軸に対して垂直方向の環状リブの最大高さの半分である、環状リブの表面上の２点間の、プランジャーストッパーの軸方向の幅と定義され、
ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}は参照シリンジのバレル内径であり、６．３５ｍｍであり、
Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}はプレフィルドシリンジシステムのバレル内径（単位ｍｍ）である。

図２を参照すると、距離「ｒ」が、両矢印として、環状リブ４２ｂについて、例として示されている。さらにＦＷＨＭが、「ＦＷＨＭ」と標識された両矢印として示されている。

正規化総接触面積（ＴＣＡ_ｎｏｒｍ）は、好ましくは６０ｍｍ^２以下、５０ｍｍ^２以下又は４０ｍｍ^２以下、より好ましくは、３５ｍｍ^２以下である。

さらに、プランジャーストッパーの総側面面積（ＴＳＦＡ）に対する、プランジャーストッパーのシリンジバレル内側表面との算出総接触面積の割合は、好ましくは５０％以下、より好ましくは４０％以下、最も好ましくは３５％以下である。算出総接触面積（ＴＣＡ_ｃａｌｃ）は上記の通りに定義される。
プランジャーストッパーの総側面面積（ＴＳＦＡ）は以下の通りに定義される：
ＴＳＦＡ＝２πｒ_ｍａｘＨ
式中、
ＴＳＦＡはプランジャーストッパーの総側面面積（単位ｍｍ^２）であり、
ｒ_ｍａｘは、プランジャーストッパーの軸に対して垂直な、任意の環状リブの表面上の１点とプランジャーストッパーの軸との間の最大距離（単位ｍｍ）であり、
Ｈは軸方向のプランジャーストッパーの全長（単位ｍｍ）である。

図２を参照すると、環状リブ４２ａとプランジャーストッパー１４の軸との間に両矢印として変数「ｒ_ｍａｘ」が示されている。プランジャーストッパーの全長（Ｈ）は、遠位－近位方向のプランジャーストッパーの中心軸上の第一点と第二点との間の最大距離としてよい。また、プランジャーストッパー（Ｈ）の全長は、プランジャーストッパーの近位端の表面上の第一点と、最遠位の環状リブの表面上にあり、可能な限り遠位の、且つプランジャーストッパーの軸に対して垂直方向の環状リブの最大高さの半分の位置にある、第二点との間の、プランジャーストッパーの軸方向の最大長さと定義されてもよい。

ガラス製バレルの内側表面は通常、潤滑層でコーティングされている。前記潤滑層は、高い潤滑性を与えて、プランジャーがバレル内を容易に滑走することを可能にするだけでなく、水性ボツリヌス毒素製剤と適合して、その貯蔵寿命の保護もするべきである。本発明との関連において、前記潤滑層は、シリコーンを含有しない潤滑層であってもよく、シリコーン潤滑層であってもよい。

好適なシリコーン非含有潤滑層は、例えば、エチレン－テトラフルオロエチレン（ＥＴＦＥ）層及びペルフルオロポリエーテル系（ＰＦＰＥ系）層（例えば、ＴｒｉｂｏＧｌｉｄｅ（登録商標））などのフッ素樹脂層（例えば、フッ素樹脂（フルオロカーボン）層）、並びに酸化ケイ素系ガラスＰＥＣＶＤ（プラズマ化学気相成長法）のコーティングである。

シリコーン非含有潤滑層は、当該技術分野において公知の通りに、例えば、ガラス製シリンジバレルにペルフルオロポリエーテル油を噴霧して該シリンジの内側表面上に潤滑な薄層を実現させた後、その内部空洞を下流不活性ガス（例えば、アルゴン又はヘリウム）プラズマに暴露することで、作製できる。前記プラズマ処理によって前記ペルフルオロポリエーテルの架橋が生じ、それにより、コーティングが固定されて、標的表面からの剥がれ易さが低減し、その結果、ボツリヌス毒素薬剤の安定性／有効性を損ない得る粒子が少なくなる。国際公開第２０１４／０１４６４１号（ＷＯ、Ａ１）に例示的な製造工程が記載されており、前記国際公開の内容は参照により本明細書に援用される。さらに、本発明での使用に特に好適なシリコーン非含有バリアコーティングは、プラズマ処理で架橋されたペルフルオロポリエーテルコーティングである、ＴｒｉｂｏＧｌｉｄｅ（登録商標）コーティングとして当該技術分野において公知である。

本発明での使用に好適なシリコーン潤滑層は、シリコーン油をベースとする方法（例えば、シリコーン噴霧処理又はシリコーン焼付処理）及び蒸着法（例えば、プラズマ化学気相成長法（ＰＥＣＶＤ））から選択されるシリコーン処理法によって作製できるが、これらの方法に限定はされない。

シリコーン噴霧処理法では、例えば、ダイビングノズル（diving nozzle）又はスタティックノズル（static nozzle）を用いて、シリコーン油（例えば、１０００ｃＳｔの粘度を有するＤＯＷ ＣＯＲＮＩＮＧ（登録商標）３６０）がシリンジ（すなわちバレル）内に噴霧されることで、薄いシリコーン油層が作製される。シリコーン油は優れた潤滑油であるが、過剰なシリコーン油は望ましくない可視及び不可視のシリコーン油粒子の形成に繋がり得る。タンパク質ベースの製剤とは特に、これらのシリコーン油粒子は、望ましくないタンパク質製剤相互作用をもたらし得る。例えば、不可視のシリコーン油粒子はタンパク質凝集を促進すると考えられている。従って、生じる不可視及び可視のシリコーン油粒子がより少ないことから、シリコーン焼付処理工程が本発明での使用に特に好ましい。シリコーン焼付処理工程は、エマルジョンとしてのシリコーン油（例えば、ＤＯＷ ＣＯＲＮＩＮＧ（登録商標）３６５シリコーン処理用エマルジョン）を塗布した後、特定の温度で特定の時間、ガラス表面上に焼き付けすることを含む。

本発明においては、ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムのシリンジバレルの内側表面は、シリコーン処理、特にシリコーン噴霧処理又はシリコーン焼付処理されていることが好ましい。

シリンジバレルの設計は特に限定はされないが、典型的には、例えば、０．５ｃｍ^３、１．０ｃｍ^３、１．５ｃｍ^３又は２．０ｃｍ^３の所望の充填体積を収容できるように調整された内径を有する。通常、前記シリンジバレルはシリンジ内の液体の体積を示す目盛り（graduated mark）を有する。さらに、前記シリンジバレルはフランジ付きの接触部分を備えていてもよい。前記フランジの設計は、例えば、ＩＳＯ１１０４０と適合するものであり得る。前記フランジ付き接触部分はさらに、所望により存在するハンドルと適合するものであり得る。さらに、ルアーロックシリンジの場合、前記シリンジは、例えばポリカーボネート製の、ルアーロックアダプタが装着されてもよい。

前記プランジャーストッパーは、好ましくは、エラストマー材料で作られており、所望により、前記液体ボツリヌス毒素製剤が保管中及び／又は注入時にコーティングとのみ接触するように、プランジャーストッパーの少なくとも一部分上に該コーティングを有する。用語「コーティング」は、本明細書で使用される場合、特に限定はされず、コーティング組成が同じ又は異なるいくつかの層（例えば、１～３層又は１～２層）も包含し得る。

プランジャーストッパーのエラストマー材料は、イソプレンゴム、ネオプレンゴム、ブタジエンゴム、ブチルゴム、スチレン－ブタジエンコポリマー、アクリロニトリル－ブタジエンコポリマー、ポリスルフィドエラストマー、ウレタンゴム、及びエチレン－プロピレンエラストマーからなる群から選択される合成ゴムであることが好ましい。本発明で使用するのに特に好適なものはハロゲン化ブチルゴムなどのブチルゴムであり、特にクロロブチルゴム又はブロモブチルゴムである。前記エラストマー材料は不活性ミネラルで補強してもよい。さらに、（例えば、有機過酸化物、フェノール樹脂などで）加硫してもよい。

好適なプランジャーストッパーのコーティングは、概して、本水性ボツリヌス毒素製剤に望ましくない干渉をせず、且つ、低レベルの溶出物／浸出物しか示さない、材料でできている。そのようなコーティングとしては、限定はされないが、ポリプロピレン、ポリエチレン、パリレン（例えば、パリレンＮ、パリレンＣ及びパリレンＨＴ）、架橋シリコーン、及びフッ素樹脂が挙げられ、好ましくはフッ素樹脂コーティングである。好適な架橋シリコーンコーティングの例としては、Ｂ２－コーティング（大協精工社）又はＸＳｉ（商標）（ベクトン・ディッキンソン社）が挙げられる。

前記フッ素樹脂コーティングは、フッ素化エチレン－プロピレンコポリマー（例えば、テトラフルオロエチレン－ヘキサフルオロプロピレンコポリマー（ＦＥＰ））、フッ素化エチレン－エチレンコポリマー（例えば、ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）などのエチレンテトラフルオロエチレンコポリマー（ＥＴＦＥ））、ＰＶＡ（テトラフルオロエチレン（ＴＦＥ）及びペルフルオロプロピルビニルエーテル（ＰＰＶＥ）のコポリマー）、テトラフルオロエチレン－ペルフルオロエチレンコポリマー、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ポリフッ化ビニル（ＰＶＦ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、並びにこれらの混合物を包含するが、これらに限定はされない。前記コーティングは、好ましくはＥＴＦＥ製であり、特に、ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）コーティングである。

特に、プランジャーストッパーのコーティングは、好ましくは、フッ素樹脂コーティング、架橋シリコーンコーティング、又はフッ素樹脂コーティング上に積層された架橋シリコーンコーティング外層からなるコーティングである。

「閉鎖デバイス」とは、本発明の意義の範囲内で、シリンジの開口出口端を閉鎖及び封止して漏出を防ぐためのあらゆる手段を幅広く指す。本発明の範囲内で、用語「開口出口端」とは、概して、バレル内腔と流体連通した、あらゆるシリンジの遠位開口端を指す。事前装着針無しのプレフィルドシリンジの場合、閉鎖デバイスは、「先端キャップ」として一般に知られている閉鎖手段となる。使用前に、先端を取り外し、その後、針カニューレ（needle cannula）（又は針／針組立体）を安全にシリンジ先端に連結できる。

プレフィルドシリンジが、前記シリンジから液体ボツリヌス毒素製剤を送液するための、シリンジ先端から伸びる、取り外し可能又は取り外し不可な（常置の）カニューレ（「針」又は「針組立体」とも称される）を備えている場合、前記閉鎖デバイスは「針シールド」と称され得る。前記針シールドは、概して、シリンジ先端に取り付けられたカニューレ（針）を受け入れて連結するための寸法を持つ閉鎖端及び開口端を有する、チャネルを備える。典型的には、カニューレの（先の尖った）末端が針シールド内のチャネルの閉鎖端を貫通することで、カニューレの開口端が封止される。

閉鎖デバイス（例えば、先端キャップ又は針シールド）は、単一部材であってよく、通常は、可撓性且つ／又は弾性の高分子材料（例えば、エラストマー）で出来ており、少なくともその一部がシリンジの遠位開口部（「出口係合部」と称される）と接触しそれを封止する。あるいは、閉鎖デバイスは、可撓性且つ弾性の高分子材料（例えば、エラストマー）で出来ている可撓性且つ／又は弾性の内側キャップに連結された、剛塑性材料で出来ている外側キャップを有してもよく、該内側キャップの少なくとも一部はシリンジの遠位開口部（「出口係合部」と称される）と接触しそれを封止する。

本発明との関連において、ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの閉鎖デバイスの、例えば先端キャップ又は針シールドの、出口係合部は、概して、エラストマー材料で出来ており、所望により、液体ボツリヌス毒素製剤が保管中及び／又は注入時にコーティングとのみ接触するように、その外表面上に該コーティングを有する。

前記エラストマー材料は、好ましくは、イソプレンゴム、ネオプレンゴム、ブタジエンゴム、ブチルゴム、スチレン－ブタジエンコポリマー、アクリロニトリル－ブタジエンコポリマー、ポリスルフィドエラストマー、ウレタンゴム、及びエチレン－プロピレンエラストマーからなる群から選択される合成ゴムであり、前記エラストマー材料は好ましくはスチレン－ブタジエンコポリマー、ブチルゴム又はブチルゴム－イソプレンゴムブレンドであり、前記ブチルゴムは好ましくはハロゲン化ブチルゴムである。前記エラストマー材料は不活性ミネラルで補強してもよい。さらに、（例えば、有機過酸化物、フェノール樹脂などで）加硫してもよい。

エラストマー材料上に所望により存在し得る好適なコーティングは、水性ボツリヌス毒素製剤に望ましくない干渉をせず、且つ、低レベルの溶出物／浸出物しか示さない、材料で出来ている。そのようなコーティングの好ましい例は、フッ素樹脂製のコーティング、すなわちフルオロカーボンコーティングである。本発明で使用するのに好適な他のコーティングとしては、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン、パリレン（例えば、パリレンＮ、パリレンＣ及びパリレンＨＴ）、並びに架橋シリコーン（例えば、Ｂ２－コーティング（大協精工社）又はＸＳｉ（商標）（ベクトン・ディッキンソン社））が挙げられる。

前記フッ素樹脂コーティングは、フッ素化エチレン－プロピレンコポリマー（例えば、テトラフルオロエチレン－ヘキサフルオロプロピレンコポリマー（ＦＥＰ））、フッ素化エチレン－エチレンコポリマー（例えば、ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）などのエチレンテトラフルオロエチレンコポリマー（ＥＴＦＥ））、ＰＶＡ（テトラフルオロエチレン（ＴＦＥ）及びペルフルオロプロピルビニルエーテル（ＰＰＶＥ）のコポリマー）、テトラフルオロエチレン－ペルフルオロエチレンコポリマー、ポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）、ポリフッ化ビニル（ＰＶＦ）、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、並びにこれらの混合物を包含するが、これらに限定はされない。前記コーティングは、好ましくはＥＴＦＥ製であり、特に、ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）コーティングである。

特に、閉鎖デバイスの３つの出口係合部のコーティングは、好ましくは、フッ素樹脂コーティング、架橋シリコーンコーティング、又はフッ素樹脂コーティング上に積層された架橋シリコーンコーティング外層からなるコーティングである。

本発明においては、前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムはプランジャーロッドをさらに備えていてもよい。前記プランジャーロッドは、あらゆる好適な手段によりプランジャーストッパーに固定されていてもよいし、あるいは、一体成形されていてもよい。前記プランジャーロッドは、プランジャーロッドをプランジャーストッパーに取り外し可能に連結するためのプランジャーストッパーの第二接続部材と係合する第一接続部材を有することが好ましい。前記プランジャーストッパーのようなロッドは、概して、滅菌処理に耐えるように設計されるが、他の点では特に限定はされない。典型的には、前記ロッドは、エチレン酢酸ビニル（ＥＶＡ）コポリマー又はポリプロピレンなどの塑性物質で出来ている。

プレフィルドシリンジ内の液体ボツリヌス毒素製剤は、ボツリヌス毒素を、１０Ｕ／ｍｌ～１０００Ｕ／ｍｌ、例えば、１Ｕ／ｍｌ～３０００Ｕ／ｍｌ、１０Ｕ／ｍｌ～１０００Ｕ／ｍｌ、の濃度範囲で含有する。前記ボツリヌス毒素は、好ましくは約１０Ｕ／ｍｌ～４００Ｕ／ｍｌ、より好ましくは約２５Ｕ／ｍｌ～２００Ｕ／ｍｌ、最も好ましくは約４０Ｕ／ｍｌ～１５０Ｕ／ｍｌ（例えば、５０Ｕ／ｍｌ、７５Ｕ／ｍｌ又は１００Ｕ／ｍｌ）の濃度で存在する。

用語「ボツリヌス毒素」は、本明細書で使用される場合、あらゆる形態及び種類のボツリヌス毒素を広く指す。特に、前記ボツリヌス毒素は、Ａ型、Ｂ型、Ｃ１型、Ｄ型、Ｅ型、Ｆ型、Ｇ型のボツリヌス毒素、又はこれらの混合物から選択され得る。本発明の関連においては、前記ボツリヌス毒素は、血清型Ａ、血清型Ｂ又は血清型Ｃ１、特に血清型Ａのものが好ましい。

さらに、用語「ボツリヌス毒素」は、本明細書で使用される場合、ボツリヌス毒素複合体（「毒素複合体」）及びボツリヌス毒素複合体の「神経毒成分」の両方を包含することが意図される。本明細書で使用される場合、用語「ボツリヌス毒素複合体」又は「毒素複合体」は、およそ１５０ｋＤａの神経毒成分と、さらに、赤血球凝集素タンパク質及び非赤血球凝集素タンパク質を含めたボツリヌス菌（Clostridium botulinum）の非毒性タンパク質とを含む、高分子量の複合体を指す。ボツリヌス毒素血清型Ａ複合体は市販されており、例えば、Ｂｏｔｏｘ（登録商標）（アラガン社）として、又はＤｙｓｐｏｒｔ（登録商標）（イプセン社）として、市販されている。

用語「神経毒成分」は、本明細書で使用される場合、関連非毒性タンパク質を含まない、前記毒素複合体の神経毒性ポリペプチド（「１５０ｋＤａ」ポリペプチド）を指す。純粋な神経毒成分は、例えば、Ｘｅｏｍｉｎ（登録商標）及びＢｏｃｏｕｔｕｒｅ（登録商標）（メルツファーマスーティカル社）の商品名で市販されている。本発明の範囲の中で、ボツリヌス毒素は、例えば、血清型Ａ、Ｂ、Ｃ１のボツリヌス毒素複合体の神経毒成分、特に血清型Ａのボツリヌス毒素複合体の神経毒成分であることが好ましい。すなわち、プレフィルドガラスシリンジ内に含有される液体（又は水性）ボツリヌス毒素製剤は、前記神経毒成分（のみ）を含有し、且つ、ボツリヌス菌（Clostridium botulinum）毒素複合体のいかなる他のタンパク質も含んでいないことが好ましい。

本発明は、野生型ボツリヌス毒素に対して少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、及び、最大で６０％、最大で７０％、最大で８０％、最大で９０％、最大で１００％の配列同一性を示すボツリヌス毒素のアイソフォーム、相同体、オルソログ及びパラログ、例えば、野生型ボツリヌス毒素Ａ、又は受入番号ＡＡＡ２３２６２としてＧｅｎＢａｎｋデータベースに寄託された血清型Ａ１のボツリヌス毒素の神経毒成分、を包含することも企図される。前記配列同一性は、信頼できる結果を得るのに適していればいかなるアルゴリズムによっても算出でき、例えば、ＦＡＳＴＡアルゴリズム（W.R. Pearson & D.J. Lipman PNAS (1988) 85:2444-2448）を用いることで算出できる。配列同一性は、２つのＬＣドメイン又はその断片などの２つのポリペプチド又は２つのドメインの比較により算出されてもよい。

修飾ボツリヌス毒素及び組換えボツリヌス毒素も本発明の範囲内である。好適な変異体に関しては、参照により全て本明細書に援用される、国際公開第２００６／０２７２０７号、同第２００９／０１５８４０号、同第２００６／１１４３０８号、同第２００７／１０４５６７号、同第２０１０／０２２９７９号、同第２０１１／０００９２９号及び同第２０１３／０６８４７６号を参照されたい。さらに、本発明は、化学修飾されたボツリヌス毒素、例えば、特に１又は複数の表面又は溶媒露出アミノ酸の、ペグ化、グリコシル化、硫酸化（sulfatation）、リン酸化又はあらゆる他の修飾によって化学修飾されたボツリヌス毒素、も指す。本発明に使用するのに好適な修飾体、組換え体、アイソフォーム、相同体、オルソログ、パラログ及び変異体は、生物学的に活性であり、すなわち、ニューロンに移動し、ＳＮＡＲＥ複合体のタンパク質（例えば、ＶＡＭＰ／シンタキシン、シナプトブレビン、及びＳＮＡＰ－２５）を切断して、アセチルコリン阻害効果（例えば、筋肉麻痺効果）を及ぼすことができる。

本発明との関連において、液体、好ましくは水性の、ボツリヌス毒素製剤は、種々の他の薬剤的に許容できる物質、例えば、塩類（例えば、塩化ナトリウム）、安定化タンパク質（例えば、アルブミン、ゼラチン）、糖類（例えば、グルコース、フルクトース、ガラクトース、トレハロース、スクロース及びマルトース）、炭水化物ポリマー（例えば、ヒアルロン酸及びポリビニルピロリドン（polyvinylpyrollidone）（ＰＶＰ））、ポリオール類（例えば、グリセロール、及びマンニトール、イノシトール、ラクチロール（lactilol）、イソマルト（isomalt）、キシリトール、エリスリトール、ソルビトールのような糖アルコール）、アミノ酸、ビタミン類（例えば、ビタミンＣ）、亜鉛、マグネシウム、麻酔薬（例えば、リドカインのような局所麻酔薬）、界面活性剤、等張化剤など、を含んでいてもよい。用語「薬剤的に許容できる」とは、本明細書で使用される場合、哺乳類、特にヒトの組織と接触させるのに好適である化合物又は物質を指す。

用語「を含む（comprise）」は、本明細書で使用される場合、非限定的用語である「を含む（include）」と限定的用語である「からなる（consist (of)）」の両方を包含することが意図される。用語「で出来ている（made of）」は、本明細書で使用される場合、「で製造される（produced of）／から製造される（produced from）」、特に、から主に製造される（mainly produced from）、を広く指すことが意図され、通常は、「を含む（comprising）」（他の物質又は材料がいくらかの量で含まれていてもよいことを示す）を意味する。前記用語は「からなる（consisting of）」を意味している場合もある。

保管中、プレフィルドシリンジ内の液体ボツリヌス毒素製剤のｐＨは、５．５～７．８、６．０～７．５、６．５～７．５、６．１～７．３、６．２～７．２、６．３～７．１、及び６．５～７．０であることが好ましい。６．１～７．３の範囲内のｐＨは、そのような中性又は僅かに酸性の溶液の注射剤が注入時に酸性溶液よりも苦痛が少ないという点で有利である。

本明細書で使用される場合、用語「液体製剤」又は「液体ボツリヌス毒素製剤」は、好ましくは「水性製剤」又は「水性ボツリヌス毒素製剤」であり、特に限定はされずに水性懸濁液、水性分散液、水性乳剤を指していてもよく、好ましくは水溶液である。

液体又は水性ボツリヌス毒素製剤は、リン酸緩衝液、リン酸－クエン酸緩衝液、乳酸緩衝液、酢酸緩衝溶液などの緩衝物質を含有しないことが好ましい。用語「緩衝液」は、本明細書で使用される場合、医薬製剤のｐＨを安定化する、薬剤的に許容できる賦形剤を指す。さらに、液体又は水性ボツリヌス毒素製剤は、アミノ酸（例えば、メチオニン）及び／又は界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０などのポリソルベート）及び／又は動物由来タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）又はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））も含有しない場合がある。

本発明で使用するのに好ましい水性ボツリヌス毒素製剤は、水、１０Ｕ／ｍｌ～１５０Ｕ／ｍｌなどの濃度のボツリヌス毒素（例えば、ボツリヌス毒素の、好ましくはＡ型ボツリヌス毒素の神経毒成分）、０．５％ｗ／ｖ～１．５％ｗ／ｖなどの濃度の塩（例えば、塩化ナトリウム）、０．１％ｗ／ｖ～２％ｗ／ｖなどの濃度の糖（例えば、グルコース、フルクトース、ガラクトース、トレハロース、スクロース及びマルトースなどの単糖又は二糖）、並びに、０．００１％ｗ／ｖ～４％ｗ／ｖ、０．０１％ｗ／ｖ～３％ｗ／ｖ、０．１％ｗ／ｖ～１％ｗ／ｖ、又は、特に、０．０１％～０．５％若しくは０．０１％～０．５％などの濃度の安定化タンパク質（例えば、アルブミン）を含む。

本発明で使用するのに好ましい別の水性ボツリヌス製剤は、水、ボツリヌス毒素（例えば、Ａ型ボツリヌス毒素の神経毒成分）、塩化ナトリウム、スクロース、及びアルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン；ＨＳＡ）から本質的になる。上記成分の濃度は以下の範囲内であり得る：１０Ｕ／ｍｌ～２００Ｕ／ｍｌ又は３０Ｕ／ｍｌ～１２５Ｕ／ｍｌ（ボツリヌス毒素）、０．５％ｗ／ｖ～１．５％ｗ／ｖ又は０．７％ｗ／ｖ～１．１％ｗ／ｖ（塩化ナトリウム）、０．１％ｗ／ｖ～２％ｗ／ｖ又は０．２％ｗ／ｖ～１％ｗ／ｖ（スクロース）、０．０１％ｗ／ｖ～１％ｗ／ｖ、０．０５％ｗ／ｖ～０．５％ｗ／ｖ、０．１％ｗ／ｖ～３％ｗ／ｖ又は０．５％ｗ／ｖ～１．５％ｗ／ｖ（ＨＳＡ）。本発明で使用するのにさらに好ましいボツリヌス毒素製剤は、例えば、生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム）で再構成された、２０Ｕ／ｍｌ～１５０Ｕ／ｍｌのＡ型ボツリヌス毒素の神経毒成分を含む、Ｘｅｏｍｉｎ（登録商標）溶液である。

用語「から本質的になる（essentially consists of）」は、本明細書で使用される場合、示されているもの以外の物質、例えば、液体（水性）ボツリヌス毒素製剤の製剤化に使用される成分中に含有される不可避な不純物、及び、精製手順の結果、単離されたボツリヌス毒素（例えば、Ａ型ボツリヌス毒素の神経毒成分）中に含まれる少量の不純物（例えば、極少量の残留緩衝液、キレート化剤など）、が微量でのみ含有されていることを意味することが意図される。

ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム内の液体ボツリヌス毒素製剤は緩衝液を含有しないことが好ましい。

本発明はさらに、ガラス製シリンジ内の液体ボツリヌス毒素製剤が、低温（例えば、２～８℃）、さらには周囲温度（例えば、２５℃）での長期間の保管後に安定であるという驚くべき知見に基づく。従って、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、長期の貯蔵寿命を有利に示す。さらに、長期の高い安定性はコールドチェーン（cool chain）の途絶に対する耐性を与え、熱帯性気候の国々を含む全ての気候帯での承認手順及び／又は商品化を促進し得る。

毒素活性は、（ａ）標準的な冷蔵庫内温度（すなわち２～８℃、例えば５℃）で１２ヶ月間、及び（ｂ）２５℃で１２ヶ月間のプレフィルド容器の保管後に、初期毒素活性に対して２５％よりも多く低減されないことが好ましい。毒素活性は、（ａ）２～８℃（例えば、５℃）で６ヶ月間、又は（ｂ）２５℃で６ヶ月間のプレフィルドシリンジの保管後に、初期毒素活性に対して２０％又は１５％よりも多く低減されないことがより好ましい。毒素活性は、（ａ）２～８℃（例えば、５℃）で３～６ヶ月間、又は（ｂ）２５℃で３～６ヶ月間のプレフィルドシリンジの保管後に、初期毒素活性に対して１０％よりも多く低減されないことが特に好ましい。毒素活性は、（ａ）２～８℃（例えば、５℃）で３～６ヶ月間、又は（ｂ）２５℃で３～６ヶ月間のプレフィルドシリンジの保管後に、初期毒素活性に対して５％よりも多く低減されないことが特に好ましい。

驚くべきことに、プレフィルドシリンジ内の液体ボツリヌス毒素製剤は、２４ヶ月まで、又はさらに長期、のより長期の保管時間でさえ、安定である。例えば、２～８℃（例えば、５℃）又は２５℃で２４ヶ月まで（例えば、１５ヶ月、１８ヶ月又は２４ヶ月）の保管後に、毒素活性は、初期毒素活性に対して、好ましくは３０％又は２５％より多くは低減されず、より好ましくは２０％より多くは低減されず、特に１５％より多くは低減されず、特に好ましくは１０％より多くは低減されず、最も好ましくは５％より多くは低減されない。

特に、毒素活性は、２～８°で２４ヶ月間のプレフィルドシリンジの保管後に、初期毒素活性に対して、２５％、２０％、１５％、１０％又は５％よりも多く低減されないことが好ましい。毒素活性は、２～８°で１８ヶ月間のプレフィルドシリンジの保管後に、初期毒素活性に対して、２５％、２０％、１５％、１０％又は５％よりも多く低減されないことが好ましい。さらに、毒素活性は、２５℃で２４ヶ月間のプレフィルドシリンジの保管後に、初期毒素活性に対して、３５％、３０％、２５％、２０％又は１５％よりも多く低減されないことが好ましい。毒素活性は、２５℃で１８ヶ月間のプレフィルドシリンジの保管後に、初期毒素活性に対して、３０％、２５％、２０％、１５％又は１０％よりも多く低減されないことが好ましい。

本発明の範囲内で、用語「毒素活性」は、ボツリヌス毒素の生物活性を指すことが意図される。「生物活性」は、（ａ）受容体結合、（ｂ）内部移行、（ｃ）エンドソーム膜を超えての細胞質内への移行、及び／又は（ｄ）シナプス小胞膜融合に関与するタンパク質のエンド型タンパク質切断を指し得る。例えば、ＳＮＡＰ－２５アッセイにおいて対応する野生型ＬＣドメインの１０％超、２０％超、３０％超、４０％超、５０％超、６０％超、７０％超、８０％超、９０％超且つ１００％以下のタンパク質分解活性を示すものであればいかなるＬＣ（軽鎖）ドメインも、本発明の範囲内で、「生物学的に活性」又は「タンパク質分解活性を示す」と見なすことができる。さらに、細胞ＨＣドメイン受容体に、特に天然ＨＣドメイン受容体に結合することができ、且つ、それに結合したＬＣドメインを移動させることができるものであればいかなるＨＣ（重鎖）ドメインも、「生物学的に活性」と見なされる。

生物活性はマウス単位（ＭＵ）で表される。本明細書で使用される場合、１ＭＵは、Ｓｃｈａｎｔｚ及びＫａｕｔｅｒの方法（Schantz and Kauter, J. Assoc. Off. Anal. Chem. 1978, 61:96-99）に従って測定される、腹腔内注射後に特定のマウス集団の５０％を殺す神経毒成分の量、すなわちマウス腹腔内ＬＤ_５０、である。用語「ＭＵ」及び「単位（Unit）」又は「Ｕ」は本明細書において互換的に使用される。

生物活性を評価するための好適なアッセイとしては、Pearce et al.(Toxicol. Appl. Pharmacol. 128:69-77, 1994)に記載のマウス片側横隔膜アッセイ（mouse hemidiaphragm assay）（ＭＨＡ）、Goschel et al.(Experimental Neurology 147:96-102, 1997)に記載の片側横隔膜アッセイ（hemidiaphragm assay）（ＨＤＡ）、Dressler et al. (Mov. Disord. 20:1617-1619, 2005)に記載のマウス横隔膜アッセイ（mouse diaphragm assay）（ＭＤＡ）、ＳＮＡＰ－２５プロテアーゼアッセイ（例えば、国際公開第２００６／０２０７４８号に記載の「ＧＦＰ－ＳＮＡＰ２５蛍光放出アッセイ（GFP-SNAP25 fluorescence release assay）」又はJones et al., 2008, J. Immunol. Methods 329:92-101に記載の「改良型ＳＮＡＰ２５エンドペプチダーゼイムノアッセイ（improved SNAP25 endopeptidase immuno-assay）」）、国際公開第２００９／１１４７４８に記載の電気化学発光（ＥＣＬ）サンドイッチ型ＥＬＩＳＡ、並びに、国際公開第２００９／１１４７４８号、同第２００４／０２９５７６号、同第２０１３／０４９５０８号及び、特に、同第２０１４／２０７１０９号に記載される細胞ベースアッセイが挙げられる。

本明細書で使用される場合、用語「初期毒素活性」又は「初期効力」は、通常、測定開始時（ｔ＝０）のボツリヌス毒素の活性を指す。典型的には、ｔ＝０は毒素の調製直後である。さらに、用語「保管後」は、本明細書で使用される場合、ある特定の期間の保管後を意味することが意図される。加えて、用語「保管中」は、通常、保管期間全体を通じて、を意味する。

さらに、２℃～３０℃で６～２４ヶ月間の保管中、１０μｍ以上の不可視粒子（subvisible particle）の数は１０００個／ｍｌ未満である。さらに、通常、５℃又は２５℃で６～１２ヶ月間のプレフィルドシリンジの保管後、ｐＨ値は初期ｐＨ値に対して１０％よりも多く増減しない。

さらに、液体ボツリヌス毒素製剤は不可視粒子数に関して非常に安定である。本発明の意義の範囲内で、「不可視粒子」は、典型的には、直径１００μｍ未満の粒子である。具体的には、２～３０℃（例えば、５℃、２５℃又は３０℃）で６～２４ヶ月間（例えば、６ヶ月間、９ヶ月間、１２ヶ月間、１５ヶ月間、１８ヶ月間又は２４ヶ月間）の保管中、液体ボツリヌス毒素製剤中の１０μｍ以上の粒子の数は、通常は１０００個／ｍｌ未満、好ましくは６００個／ｍｌ未満、より好ましくは２００個／ｍｌ未満である。

粒子測定はマイクロフローイメージング（Micro-Flow Imaging）（ＭＦＩ）、共振式質量測定法（Resonant Mass Measurement）（ＲＭＭ）、及びナノ粒子トラッキング解析（Nanoparticle Tracking Analysis）（ＮＴＡ）などの様々な方法で行われてよい。粒子測定は通常ＵＳＰ＜７８８＞に準拠する。本発明との関連においては、マイクロフローイメージング測定が使用されることが好ましい。この測定法は、例えば、シランコーティングされた高分解能１００μｍフローセルを備えたＤＰＡ－５２００粒子分析システム（プロテインシンプル社（ProteinSimple）、米国カリフォルニア州サンタクララ）を用いて行われてもよい。通常、試料は無希釈で分析される。あるいは、粒子の数を測定するために、例えば、ＡＲＣＨＩＭＥＤＥＳ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｍｅｔｒｏｌｏｇｙ Ｓｙｓｔｅｍ（アフィニティー・バイオセンサーズ社（Affinity Biosensors）、米国カリフォルニア州サンタバーバラ）を用いる、共振式質量測定法（ＲＭＭ）が採用されてもよい。

さらに、プレフィルドシリンジの保管中にｐＨ値が本質的に安定であるという点において、液体ボツリヌス毒素製剤は高いｐＨ安定性を示す。ｐＨ値は、２～３０℃（例えば、５℃、２５℃又は３０℃）で６～２４ヶ月間（例えば、６ヶ月間、９ヶ月間、１２ヶ月間、１５ヶ月間、１８ヶ月間又は２４ヶ月間）、例えば、２５℃で１８ヶ月間又は２５℃で２４ヶ月間、のプレフィルドシリンジの保管後に、初期ｐＨ値に対して、１５％より多く、１０％より多く、８％より多く、又は６％より多く、増減しないことが好ましい。ｐＨは、多数の医薬品のｐＨ測定の概略を記している米国薬局方標準検査法ＵＳＰ＜７９１＞に準拠して測定されてもよい。適切であればいかなるｐＨメーターを用いてもよく、例えばスコット・インスツルメンツ社（Schott Instruments）のＬａｂ ８７０ ｐＨメーターが使用される。

特定の態様において、本発明は、本明細書に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムであって、但し、（ａ）国際出願番号第ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／００２６０２号の表１又は本明細書の以下の実施例セクションの表１に開示される材料で出来ている、シリンジバレル、先端キャップ及びプランジャーストッパー、並びに、所望により、（ｂ）国際出願番号第ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／００２６０２号の表１又は本明細書の以下の実施例セクションの表１に開示されるシリンジのサイズ及び／又は種類、を有するボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムではない、ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムに関することも企図される。さらに、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、国際出願番号第ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／００２６０２号の表１又は本明細書下記の表１に開示される構成Ａ、Ｂ、Ｇ及びＨのボツリヌス毒素プレフィルドシリンジのうちの１つでなくてもよい。

上記を考慮すると、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、頻回注射（例えば、２～８回、３～６回又は４～５回の注射）での前記毒素の投与、及び、所望により、少量の毒素（この場合、精確で正確な注射が特に重要となる）を必要とする、美容用途及び治療用途を含む用途に特に適している。すなわち（this is）、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、頻回注射（すなわち、２～８回、又は３～６回、又は４～５回の注射）のために使用されてもよい。

例えば、美容用途又は処置（例えば、眉間の皺線、額の水平皺線、目尻の皺などの処置）では、頻回注射部位（例えば、２～８回又は３～６回）は本発明のプレフィルドシリンジシステムを用いて注射され得る。典型的に、注射部位毎の毒素投与量は少ない（例えば、１～１０Ｕ又は２～５Ｕ）。治療用途の場合（例えば、痙攣、痙性斜頚（Torticollis spasmodicus）、眼瞼痙攣など）、注射の回数は例えば、２～５になり得る。通常、注射部位毎に適用される用量は美容用途の用量よりもかなり多くなる（例えば、３０～２００Ｕ又は５０～１００Ｕ）。

第二の態様において、本発明は、本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム、及び所望により、前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの使用説明書を含むキットを提供する。

第三の態様において、本発明は、治療で用いるための、本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムを提供する。前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、ジストニア、痙縮、パラトニア、ジスキネジア（diskinesia）、焦点性痙攣、斜視、振戦、チック、片頭痛、流涎症及び多汗を含むがこれらに限定はされない、筋肉又は外分泌腺の活動亢進性コリン作動性神経支配を原因とする、又はそれに関連した、患者の疾患又は状態の治療のために使用されることが好ましい。

用語「活動亢進性コリン作動性神経支配（hyperactive cholinergic innervation）」は、本明細書で使用される場合、シナプス間隙への異常に多量のアセチルコリン放出を特徴とする、シナプスに関連している。「異常に多い」とは、例えば、放出量を活動亢進状態ではない同種のシナプスにおける放出量と比較することで得られる参照活性に対して、２５％以下、５０％以下、又はそれ以上の増加に関連しており、筋ジストニアが活動亢進状態の徴候となり得る。「２５％以下」とは、例えば、約１％～約２５％を意味する。必要な測定を行うための方法は当該技術分野において公知である。

本発明の範囲内で、筋肉の活動亢進性コリン作動性神経支配を原因とする、又はそれに関連する疾患又は状態としては、ジストニア（例えば、眼瞼痙攣、痙性斜頚、肢ジストニア（limb dystonia）、及び書痙などの動作特異性ジストニア）、痙縮（例えば、脳卒中後痙縮、脳性麻痺を原因とする痙縮）、パラトニア、ジスキネジア（diskinesia）（例えば、遅発性ジスキネジア（diskinesia）） 焦点性痙攣（例えば、片側顔面痙攣）、（若年性）脳性麻痺（例えば、痙性、ジスキネジア関連又は失調性の脳性麻痺）、斜視、疼痛（例えば、神経因性疼痛）、創傷治癒、振戦、チック、並びに片頭痛が挙げられるが、これらに限定はされない。

本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジは、筋ジストニアの治療において特に有用である。例示的なジストニアとして、（１）眼瞼痙攣及び顎開口型又は顎閉鎖型の口顎部ジストニアを含む、頭蓋ジストニア、（２）頭部の前屈、後屈、側屈及び斜頚を含む痙性斜頚、（３）咽頭ジストニア、（４）痙攣性発声障害を含む、喉頭ジストニア、（５）動作特異性ジストニア（例えば、書痙）等の腕部ジストニア、脚部ジストニア、体軸ジストニア、分節性ジストニアを含む、肢ジストニア（limb dystonia）、並びに、（６）他のジストニアからなる群から選択されるジストニアが挙げられるが、これらに限定はされない。

本発明との関連において治療しようとする「機能亢進外分泌腺」は特に限定されず、機能亢進性のあらゆる外分泌腺を包含する。従って、本発明は、参照により本明細書に援用される、Sobotta, Johannes, Atlas der Anatomie des Menschen. 22. Auflage. Band 1 und 2, Urban & Fischer, 2005に記載される腺のいずれかに関する治療に適用できることが企図される。前記機能亢進腺は自律性外分泌腺であることが好ましい。ボツリヌス毒素組成物は機能亢進外分泌腺に、又はその近傍に、注射されることが好ましい。

本発明の範囲内で、機能亢進外分泌腺は汗腺、涙腺、唾液腺及び粘液腺からなる群から選択され得る。あるいは、機能亢進腺は、フレー症候群、ワニの涙症候群、腋窩多汗症（axillar hyperhidrosis）、手掌多汗症、足底多汗症、頭頸部多汗症、身体の多汗症（hyperhidrosis of the body）、鼻漏、又は脳卒中、パーキンソン病若しくは筋萎縮性側索硬化症の患者における相対的過流涎からなる群から選択される疾患又は状態とも関連し得る。特に、外分泌腺の活動亢進性コリン作動性神経支配を原因とする、又はそれと関連する疾患又は状態としては、流涎（過流涎、流涎症）及び過度の発汗（多汗）が挙げられ得る。

投与はいかなる特定の投与計画、投与様式、投与形態、投与用量及び投与間隔にも限定されない。当業者には公知であるように、ボツリヌス毒素の投与される量すなわち用量は、適用の様式、疾患の種類、患者の体重、年齢、性別及び容態、並びに注射のためにどの標的組織を選択するかによって変化する。ボツリヌス毒素製剤は、通常、局所的に、例えば、標的組織（例えば、筋肉、皮膚、外分泌腺）内、又はその近傍への皮下注射又は筋肉内注射によって、投与される。

さらに、一般に、異なる筋肉にはそのサイズに応じて異なる投薬が要求される。好適な用量は、１０～２０００Ｕ、好ましくは５０～５００Ｕ、より好ましくは１００～３５０Ｕの範囲のボツリヌス毒素であり得る。外分泌腺の治療では、前記用量は、通常は１０～５００Ｕ、好ましくは２０～２００Ｕ、より好ましくは３０～１００Ｕの範囲内である。このような総量が、治療の同日に投与されてもよいし、又は治療の後日に投与されてもよい。例えば、第一の治療セッション中に、第一の分割量が投与され得る。１又は複数の治療セッション中に、前記総用量の残りの分割量が投与され得る。さらに、適用の頻度は特に制限はされず、好適な投与間隔は３ヶ月以下（例えば、４週間又は８週間）の場合もあるし、３ヶ月を超える場合もある。

第四の態様において、本発明は、上部顔面皺、広頸筋の横縞、眉間皺線、鼻唇溝、二重顎（chin fold）、マリオネットライン、頬の継ぎ目（buccal commissure）、口元の皺、目尻の皺、及び下顎の輪郭など、顔面非対称並びに皮膚の皺及び線（例えば、顔の線及び顔の皺）の治療のためなどの、美容用途における本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジの使用に関する。

美容用途で投与されるボツリヌス毒素の量は、通常、１～１００Ｕ、５～１０Ｕ、１０～２０Ｕ又は２０～５０Ｕの範囲内である。このような総量が、治療の同日に投与されてもよいし、又は治療の後日に投与されてもよい。例えば、第一の治療セッション中に、第一の分割量が投与され得る。この第一の分割量は、最適以下の分割量、すなわち、皺又はスキンラインを完全には取り除かない分割量、であることが好ましい。１又は複数の治療セッション中に、前記総用量の残りの分割量が投与され得る。

第五の態様において、本発明は、本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムを用いて有効量のボツリヌス毒素を患者の筋肉又は外分泌腺に局所投与することを含む、筋肉又は外分泌腺の活動亢進性コリン作動性神経支配を原因とする、又はそれに関連する、患者の疾患又は状態を治療するための方法を提供する。

用語「有効量」とは、本明細書で使用される場合、有益又は所望の治療成果、美容成果又は麻酔結果をもたらすのに十分なボツリヌス毒素の量を指す。本文脈において、用語「局所投与」は、本発明の意義の範囲内で、標的組織（例えば、筋肉、皮膚、外分泌腺）内への、又はその近傍への皮下注射又は筋肉内注射を指すことが好ましい。用語「患者」は、本明細書で使用される場合、概して、患者の筋肉若しくは外分泌腺の活動亢進性コリン作動性神経支配を原因とする、若しくはそれに関連する疾患若しくは状態を患うヒト、又は、美容整形術若しくは麻酔処置を必要としているヒトに関する。本明細書で使用される場合、「患者」は「対象」又は「個人」と同義的に使用され得る。

投与はいかなる特定の投与計画、投与様式、投与形態、投与用量及び投与間隔にも限定されない。本明細書で使用される場合、用語「筋肉又は外分泌腺に」とは、ボツリヌス毒素が、１又は複数の筋肉又は外分泌腺の中、又はその近傍に、投与され得ることを意味する。通常、ボツリヌス毒素は局所筋肉内注射で投与される。投与に関するさらなる詳細（例えば、投与計画、投与様式、投与形態、投与用量及び投与間隔）並びに治療しようとする疾患又は状態については、美容用途及び治療用途のプレフィルドガラス容器（例えば、プレフィルドボツリヌス毒素シリンジ）の使用に関しての上記と同じ文言が適用される。

第六の態様において、本発明は、本発明の第一の態様によるボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムを用いて有効量のボツリヌス毒素を患者に局所投与（例えば、皮内注射、真皮下注射又は皮下注射）することを含む、皮膚の美容整形術のための、特に皮膚の皺及び顔面非対称を治療するための方法を提供する。この態様は上記の本発明の他の態様に密接に関連しているため、特に記載がない限り、これらの他の態様に関しての上記全ての文言、定義及び説明が第六の態様に同様に適用される。

次に、本発明を以下の非限定的な実施例によってさらに詳細に説明する。

下記の実施例は、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムのいくつかの実施形態（以下、「構成Ａ、Ｂ、Ｇ、及びＨ」と称する）によって本発明を説明し、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムが、長期保存後も、そして高温下においても、注入特性の点で安定であり、増強された機能性を有することを示すものである。

材料及び方法
材料
本発明の種々のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの性能を評価するために、以下のボツリヌス毒素水溶液を使用した：インコボツリヌス毒素Ａ（incobotulinumtoxinA）（５０Ｕ／ｍｌ）、１．０ｍｇ／ｍｌのヒトアルブミン、４．７ｍｇ／ｍｌのスクロース、０．９％食塩水（再構成されたＸｅｏｍｉｎ（登録商標））。各々１ｍｌの前記ボツリヌス毒素溶液を充填され、プランジャーをシリンジバレルの近位端に挿入することにより閉鎖された、４種の異なる構成（Ａ、Ｂ、Ｇ及びＨ；表１参照）のガラス製ルアーロックシリンジ。得られたプレフィルドシリンジを次に、標準的な冷蔵庫内温度（２～８℃）又は２５℃で所定の期間保管した。

摺動平衡応力測定
摺動平衡応力及び摺動降伏応力は、メクメシン社（Mecmesin）製のＩＬＣ １００Ｎロードセル及びＥｍｐｅｒｏｒ力試験ソフトウェアと組み合わせてメクメシン社製Ｍｕｌｔｉｔｅｓｔ ２．５－ｘｔ力試験システム（メクメシン社、ドイツ）を用いて測定した。力測定用に３２Ｇｘ１／２"検査針（Ｓｔｅｒｉｊｅｃｔ ＰＲＥ－３２０１３、タスク社、日本）をシリンジの先端に装着した。検査は室温（約２０℃）、空気中に１００ｍｍ／分の変位速度、で行った。測定は全て充填済みシリンジを用いて行い、すなわち、「空シリンジ測定」は行わなかった。

プランジャーストッパー及びプランジャーを摺動させるのに必要とした力を記録し、力対変位のプロットとして示した。単一測定の変動性を考慮に入れて、各々の力測定はいくつかの同様に作製及び保管されたプレフィルドシリンジを用いて数回行った。

力対変位プロットから以下のパラメータを求めた：
最大摺動平衡応力（ＧＦ_ｍａｘ）：プランジャーストッパーがシリンジバレルの遠位端で前進を終えるまでの、実測最高摺動平衡応力（単位ニュートン（Ｎ））、
摺動降伏応力（ＢＬＦ）：０ｍｍ～２ｍｍのプランジャー変位距離間で最大の力、
動的摺動平衡応力（ＤＧＦ）：総プランジャー変位距離の１／３及び２／３における実測摺動平衡応力から算出される平均摺動平衡応力（単位Ｎ）。

毒素安定性測定
ボツリヌス毒素溶液の安定性を、保管無し（「新鮮」；保管時間＝０ヶ月）、並びに所定の温度で１ヶ月間、３ヶ月間、６ヶ月間、９ヶ月間、１２ヶ月間、及び１８ヶ月間の保管後に、残存毒素効力を測定することにより、測定した。

毒素効力を片側横隔膜アッセイにより測定した。前記アッセイは、４ｍｌの媒体を含有するオルガンバス（organ bath）内に維持されたマウス神経筋標本を用いて行う。前記筋肉を力変換器に接続し、横隔神経を介して電気的に刺激すると、毒素の添加が無い場合は１８０分間を超えて一定を保つ等尺性収縮力が得られる。

オルガンバスに毒素を導入すると、神経を介して刺激された筋肉の収縮幅が徐々に減少していく。横隔膜の収縮幅を経時的にモニターする。読み出しとして、初期収縮力の半分が達成される時間を測定し、これを麻痺時間と呼ぶ。麻痺時間は活性毒素の存在量に比例する。

粒度測定及びｐＨ測定
マイクロフローイメージングを用いて粒度測定を行った。このマイクロフローイメージング測定は、シランコーティングされた高分解能１００μｍフローセルを備えたＤＰＡ－５２００粒子分析システム（プロテインシンプル社、米国カリフォルニア州サンタクララ）を用いて行った。試料は無希釈で解析した。ＭＦＩ Ｖｉｅｗ Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（ＭＶＳＳ）バージョン２－Ｒ２－６．１．２０．１９１５を用いて測定を行い、ＭＦＩ Ｖｉｅｗ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｕｉｔｅ（ＭＶＡＳ）ソフトウェアバージョン１．３．０．１００７を用いて試料を解析した。

ｐＨ測定は、ｐＨメーター（Ｌａｂ ８７０、スコット・インスツルメンツ社（Schott Instruments））を用いて、多数の医薬品のｐＨ測定の概略を記している米国薬局方標準検査法ＵＳＰ＜７９１＞に準拠して行った。
結果

試験されたプレフィルドシリンジについて得られた典型的な力対変位プロットを図３に示す。図３に示される各単一曲線は、２５℃で４週間の保管後の、構成Ｂのプレフィルドシリンジの単一測定値である。図から分かる通り、力対変位プロットには３つの異なる部分が存在し、第一はプランジャーの移動を開始するのに要求される初期摺動平衡応力による力の増加であり、第二はプラトー様部分であり、第三はシリンジバレルの端にプランジャーが圧迫されることによる力の急速な増加である。

力対変位プロットから求められた、２～８℃及び２５℃で、０ヶ月間、１２ヶ月間及び２４ヶ月間の保管後の構成Ｂシリンジの注射性能（injectability）のパラメータを表２に示す。

標準的な冷蔵庫内温度（２～８℃）及び２５℃で２４ヶ月間の長期保管後の、試験された全てのシリンジ構成（すなわちＡ、Ｂ、Ｇ、及びＨ）の最大摺動平衡応力（ＧＦ_ｍａｘ）及び最大摺動降伏応力（ＢＬＦ）を表３にまとめる。

構成Ａ、Ｂ、Ｇ、及びＨについての安定性測定の結果を以下の表４に示す。

^＊＝初期絶対毒素活性（単位Ｕ）は５１Ｕ～５６Ｕの範囲である。

図４（２～８℃における安定性）及び図５（２５℃における安定性）に、上記の安定性データをグラフで示す。２４ヶ月での効力値は２４ヶ月間の保管への外挿から推定できる。

表４並びに図４及び図５から分かる通り、測定された生物活性の最大減少は、２～８℃（１８ヶ月まで）及び２５℃（１２ヶ月まで）の温度条件において、それぞれ１２％及び２０％のみである。２～８℃で２４ヶ月間の保管後の生物活性の減少は構成Ａ、Ｂ、Ｇ、及びＨ全てにおいて５％未満と推定され、構成Ｂシリンジに関しては、２５℃の高温であっても２４ヶ月間の保管後の安定性減少が優れ、１０％未満と推定される。

１８ヶ月までのｐＨ測定によって、１８ヶ月までの期間に亘り、ｐＨが非常に安定な状態に保たれることが明らかとなった。より高い値又はより低い値に向けた動きは確認されず、全ての測定ｐＨ値が初期ｐＨの±０．５以内を維持した（結果は図示せず）。さらに、マイクロフローイメージングによる粒径測定では、２～８℃及び２５℃で１８ヶ月間までの保管後の粒子数に有意な増加は示されず、１０００個／ｍｌよりはるかに低く維持された（結果は図示せず）。

結論として、これらの結果は、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムが、２４ヶ月までの貯蔵寿命全体に亘って低い摺動平衡応力及び摺動降伏応力によって反映される優れた機能性を示すことを示している。また、プレフィルドシリンジシステム内の液体ボツリヌス毒素製剤は、２～８℃で２４ヶ月間まで安定であり、２５℃の高温であってもおよそ９～１２ヶ月間もの長期間安定であることが示された。従って、本発明のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、大きな可能性を有しており、ボツリヌス毒素で処置される様々な治療適用及び美容適用の、安全で簡便で信頼できる管理に対して、重要な貢献をもたらす。

Claims (10)

1. ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムであって、
   液体ボツリヌス毒素製剤を含有するチャンバを規定し、シリコーン処理された内側表面を含み、近位端及び遠位端を有し、且つ、その外側表面に標識が添付された、ガラス製シリンジバレル；
   前記シリンジバレルの内側に摺動自在に配置された、且つ、シリンジバレルの近位端の液密シールを形成する、プランジャーストッパー；
   液体ボツリヌス毒素製剤の漏出を防ぐための、前記シリンジシステムの遠位開口出口端をシール係合し閉鎖する出口係合部を有する、シリンジバレルの遠位端に取り付けられた閉鎖デバイス；
   を備え、
   前記プランジャーストッパーは、エラストマー材料で作られ、前記液体ボツリヌス毒素製剤が保管中及び／又は注入時にコーティングとのみ接触するように、前記プランジャーストッパーの少なくとも一部分上に当該コーティングを有しており、前記エラストマー材料は、ハロゲン化ブチルゴム、及びスチレン－ブタジエンコポリマーからなる群から選択される合成ゴムであり、前記コーティングは、フッ素樹脂コーティング、架橋シリコーンコーティング、又はフッ素樹脂コーティング上に積層された架橋シリコーンコーティング外層からなるコーティングであり、
   前記閉鎖デバイスの前記出口係合部は、エラストマー材料で作られ、当該エラストマー材料は、イソプレンゴム、ブタジエンゴム、ブチルゴム、ブチルゴム－イソプレンゴムブレンド、ハロゲン化ブチルゴム、及びスチレン－ブタジエンコポリマーからなる群から選択される合成ゴムであり、
   前記プランジャーストッパーは、前記シリンジバレルの前記内側表面と複数の離れた接触面を形成する複数の環状リブを有し、前記プランジャーストッパーの環状リブの数が３～５であり、
   前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、２～８℃若しくは２５℃で１２ヶ月間の保管後に３２Ｇ×１／２″針及び１００ｍｍ／分の変位速度を用いて２０℃の温度で測定された場合に１５Ｎ以下の正規化最大摺動平衡応力を有し、ここで正規化最大摺動平衡応力は以下の通りに定義され：
   ＧＦ_ｍａｘ＝ＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}×（ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２／（Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２
   式中、
   ＧＦ_ｍａｘは正規化最大摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
   ＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}は、前記プランジャーストッパーが前記シリンジバレルの遠位端で前進を終えるまでの実測最高摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
   ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}は参照シリンジのバレル内径であり、６．３５ｍｍであり、
   Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}はプレフィルドシリンジシステムのバレル内径（単位ｍｍ）であり、
   前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムは、２～８℃若しくは２５℃で１２ヶ月間の保管後に３２Ｇ×１／２″針及び１００ｍｍ／分の変位速度を用いて２０℃の温度で測定された場合に、以下の通りに定義される正規化摺動降伏応力が８Ｎ以下であり、
   ＢＬＦ_ｎｏｒｍ＝ＢＬＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}×（ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２／（Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２
   式中、
   ＢＬＦ_ｎｏｒｍは正規化摺動降伏応力（単位Ｎ）であり、
   ＢＬＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}は実測摺動降伏応力（単位Ｎ）であり、０ｍｍ～２ｍｍのプランジャー変位距離間で最大の力と定義され、
   ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}は参照シリンジのバレル内径であり、６．３５ｍｍであり、
   Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}はプレフィルドシリンジシステムのバレル内径（単位ｍｍ）であり、
   前記複数の離れた接触面はそれぞれ、前記シリンジバレルの前記内側表面に対して独立した封止を形成し、
   前記複数の環状リブは、前記プランジャーストッパーの軸から外に向かって放射状に広がっており、
   前記プランジャーストッパーの前記複数の環状リブのうち前記プランジャーストッパーの遠位端に隣接して位置する環状リブは、前記プランジャーストッパーの他の環状リブよりも大きな半値全幅（ＦＷＨＭ）を有し、ここで、当該ＦＷＨＭは、前記プランジャーストッパーの軸に対して垂直方向の最大高さの半分である、環状リブの表面上の２点間の、プランジャーストッパーの軸方向の幅と定義され、
   前記プランジャーストッパーの軸方向の、最も遠位の環状リブを除く任意の２つの近位の隣接する環状リブ間の距離は、その２つの隣接する環状リブの半値全幅（ＦＷＨＭ）の和の２倍より大きい、
   ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム。
2. ２～８℃若しくは２５℃で１２ヶ月間の保管後に３２Ｇ×１／２″針及び１００ｍｍ／分の変位速度を用いて２０℃の温度で測定された場合に、以下の通りに定義される正規化動的摺動平衡応力が１５Ｎ以下であり、
   ＤＧＦ_ｎｏｒｍ＝ＤＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}×（ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２／（Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２
   式中、
   ＤＧＦ_ｎｏｒｍは正規化動的摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
   ＤＧＦ_{ｍｅａｓｕｒｅｄ}は総プランジャー変位距離の１／３及び２／３における実測摺動平衡応力から算出される平均摺動平衡応力（単位Ｎ）であり、
   ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}は参照シリンジのバレル内径であり、６．３５ｍｍであり、
   Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}はプレフィルドシリンジシステムのバレル内径（単位ｍｍ）である、
   請求項１に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム。
3. （ｉ）前記プランジャーストッパーが、７０ｍｍ^２以下の前記シリンジバレルの内側表面との正規化総接触面積を有し、前記正規化総接触面積は以下の通りに算出され、
   ＴＣＡ_ｎｏｒｍ＝ＴＣＡ_ｃａｌｃ×（ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２／（Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}）^２
   式中、
   ＴＣＡ_ｎｏｒｍは正規化総接触面積（単位ｍｍ^２）であり、
   ＴＣＡ_ｃａｌｃは算出総接触面積（単位ｍｍ^２）であり、各環状リブの接触面（ＣＴ_ｒｉｂ）（ｍｍ^２）の和と定義され、式中、ＣＴ_ｒｉｂ＝２πｒｈであり、ｒは、プランジャーストッパーの軸と垂直な、環状リブの表面上の一点とプランジャーストッパーの軸との間の最大距離（単位ｍｍ）であり、ｈは環状リブの半値全幅（ＦＷＨＭ）（単位ｍｍ）であり、ＦＷＨＭは、プランジャーストッパーの軸に対して垂直方向の環状リブの最大高さの半分である、環状リブの表面上の２点間の、プランジャーストッパーの軸方向の幅と定義され、
   ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}は参照シリンジのバレル内径であり、６．３５ｍｍであり、
   Ｄ_{ｂａｒｒｅｌ}はプレフィルドシリンジシステムのバレル内径（単位ｍｍ）である、且つ／又は、
   （ｉｉ） プランジャーストッパーの総側面面積に対するプランジャーストッパーのシリンジバレルの内側表面との算出総接触面積の割合が５０％以下であり、前記算出総接触面積（ＴＣＡ_ｃａｌｃ）は（ｉ）と同様に定義され、プランジャーストッパーの総側面面積は以下の通りに定義され、
   ＴＳＦＡ＝２πｒ_ｍａｘＨ
   式中、
   ＴＳＦＡはプランジャーストッパーの総側面面積（単位ｍｍ^２）であり、
   ｒ_ｍａｘは、プランジャーストッパーの軸に対して垂直な、任意の環状リブの表面上の１点とプランジャーストッパーの軸との間の最大距離（単位ｍｍ）であり、
   Ｈは軸方向のプランジャーストッパーの全長（単位ｍｍ）である、
   請求項１又は２に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム。
4. シリンジバレルの内側表面がシリコーン噴霧処理又はシリコーン焼付処理されている、請求項１～３のいずれか一項に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム。
   
5. 前記閉鎖デバイスの出口係合部は、前記液体ボツリヌス毒素製剤が保管中及び／又は注入時にコーティングとのみ接触するように、その外表面上にコーティングを有する、請求項１～４のいずれか一項に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム。
6. 前記出口係合部のコーティングは、フッ素樹脂コーティング、架橋シリコーンコーティング、若しくはフッ素樹脂コーティング上に積層された架橋シリコーンコーティング外層からなるコーティングである、
   請求項５に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム。
7. ５℃又は２５℃で１２ヶ月間のプレフィルド容器の保管後に、毒素活性が初期毒素活性に対して２５％より多く低減されない、請求項１～６のいずれか一項に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム。
8. 請求項１～７のいずれか一項に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム、及び所望による前記ボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステムの使用説明書を含む、キット。
9. 治療で用いるための、請求項１～７のいずれか一項に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム。
10. 美容応用で用いるための、請求項１～７のいずれか一項に記載のボツリヌス毒素プレフィルドシリンジシステム。

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