JP7374124B2 - フローサイトメトリで選別された試料のための収集システムおよびそれを使用する方法 - Google Patents

Description

いくつかの研究および治療の用途は、ある特定の細胞特性に基づいて、試料から生体細胞を滅菌精製することを必要とする。例えば、細胞は、しばしば、細胞サイズ、形状、および表面タンパク質発現によって試料から分離される。単離された細胞は、均質な集団を生成し、臨床応用を含む様々な下流で実験室で研究され得るか、または患者に投与され得る。

臨床応用では、生体細胞は、細胞が疾患の治療として患者内に導入される細胞療法での使用のために収集され得る。それらのタイプに従って試料から細胞を選別し、精製するための現在の方法には、単一細胞選別、蛍光活性化細胞選別、磁気細胞選別、および浮力活性化細胞選別が含まれる。

そのような応用において細胞生存率および無菌性を維持することは、重要であり得る。選別プロセスの様々な細胞調製および品質管理ステップは、細胞を高応力および／または汚染された環境にさらす可能性があるため、細胞生存率と無菌性との両方が選別中に損なわれる可能性がある。選別中に細胞生存率に影響を及ぼし得る要因には、細胞のタイプ、選別前の細胞の状態、細胞が選別される圧力およびジェット速度、ならびに細胞が選別される緩衝液または培地が含まれる。選別された細胞の無菌性に影響を与える可能性がある要因には、細胞ソータ、シース流体、および細胞試料を処理するための全体的なシステムの無菌性が含まれる。

フローサイトメトリで選別された試料のための収集システムが提供される。収集システムの態様は、フローサイトメータの選別ブロックと液滴受容関係にあるように構成されている選別チューブを有する収集容器と、収集容器の細胞収集位置を、真空の受容容器などの受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合する試料出力とを含む。収集システムを使用する方法、ならびにシステムの構成要素を含むアセンブリおよびキットも提供される。

本発明は、添付の図面と併せて読む場合、以下の詳細な説明から最もよく理解され得る。図面には、以下の図が含まれる。

本発明の一実施形態による収集システムの概略図を提供する。 本発明の一実施形態による収集システムの一実施形態の概略図を提供する。 本発明の一実施形態による収集システムの概略図を提供する。 本発明の一実施形態による収集システムの概略図を提供する。 本発明の一実施形態による収集システムの概略図を提供する。 本発明の一実施形態による収集システムの概略図を提供する。

フローサイトメトリで選別された試料のための収集システムが提供される。収集システムの態様は、フローサイトメータの選別ブロックと液滴受容関係にあるように構成されている選別チューブを有する収集容器と、収集容器の細胞収集位置を、真空の受容容器などの受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合する試料出力とを含む。また、収集システムを使用する方法、ならびにシステムの構成要素を含むアセンブリおよびキットが提供される。

本発明がより詳細に記載される前に、本発明は、記載された特定の実施形態に限定されるものではなく、したがって、当然ながら変わり得ることを理解されたい。また、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのものにすぎず、限定することを意図するものではないことも理解されたい。

値の範囲が提供される場合、文脈が別段明確に指示しない限り、その範囲の上限および下限と、その記載された範囲内の任意の他の記載された値または介在値との間の、下限の単位の１０分の１までの各介在値が本発明の範囲内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、記載された範囲内の任意の具体的に除外された制限に従って、より小さい範囲に独立して含まれてよく、本発明内にも包含される。記載された範囲が制限の１つまたは両方を含む場合、それらの含まれる制限のいずれかまたは両方を除く範囲も本発明に含まれる。

本明細書では、数値の前に「約」という用語が付けられて、特定の範囲が提示される。本明細書では、「約」という用語は、それが先行する正確な数、ならびにその用語が先行する数に近い、または近似する数について文字通りの支持を提供するために使用される。数が具体的に列挙された数に近いまたは近似しているか否かを決定する際に、近いまたは近似する列挙されない数は、それが提示される文脈において、具体的に列挙された数の実質的な等価物を提供する数であり得る。

別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されたものと類似または同等の任意の方法および材料も、本発明の実施または試験に使用することができるが、代表的な例示的な方法および材料が現在記載されている。

本明細書に引用されるすべての公開および特許は、各個々の公開または特許が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示されているかのように参照により本明細書に組み込まれ、引用される公開に関連した方法および／または材料を開示し、記載するために参照により本明細書に組み込まれる。いずれかの公開の引用は、出願日前のその開示のためであり、本発明が先行発明によってそのような公開に先行する権利がないことを認めるものと解釈されないものとする。さらに、提供された公開日は、独立して確認される必要がある可能性がある実際の公開日とは異なる場合がある。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、文脈が別段明確に指示しない限り、複数の参照を含むことに留意されたい。特許請求の範囲は、任意の要素を除外するように起草され得ることにさらに留意されたい。したがって、この記述は、請求項の要素の列挙、または「否定的」な制限の使用に関連して、「単に」、「唯一」などの排他的な用語を使用するための先行詞として機能することが意図されている。

本開示を読むと当業者には明らかになるように、本明細書に記載および例示される個々の実施形態の各々は、本発明の範囲または趣旨から逸脱することなく、他のいくつかの実施形態のいずれかの特徴から容易に分離され得るか、またはそれらと組み合わされ得る個別の構成要素および特徴を有する。任意の列挙された方法は、列挙されたイベントの順序、または論理的に可能な任意の他の順序で実行することができる。

装置および方法は、機能的な説明を伴う文法的流動性のために記載されている、または記載されるが、特許請求の範囲は、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２下で明示的に策定されない限り、「手段」または「ステップ」制限の構築によって必ずしも制限されるものと解釈されるべきではなく、同等物の司法理論の下で特許請求の範囲によって提供される定義の意味および同等物の完全な範囲を付与されるべきであり、特許請求の範囲が３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２下で明示的に策定される場合、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２下で完全な法定同等物が付与されるべきであることを明示的に理解されたい。

収集システム
上記で要約したように、本発明の態様は、フローサイトメータからフローサイトメトリで選別された試料を受容するための収集システムを含む。「フローサイトメトリで選別された試料」とは、フローサイトメータ対応選別プロセス、すなわち、試料の細胞がフローサイトメータを使用して選別されるプロトコルの生成物である１つ以上の細胞で構成される組成物を意味する。したがって、本明細書に記載の収集システムによって収集され得るフローサイトメトリで選別された試料は、例えばフローサイトメトリで選別された細胞など、フローサイトメトリで選別された１つ以上の粒子で構成される組成物である。選別された粒子に加えて、本明細書に記載される収集システムが構成されているサイトメトリで選別された試料は、液体培地など１つ以上の追加の成分も含み得る。

本明細書に記載される収集システムは、流体、例えば、フローサイトメトリで選別された試料または廃液をフローサイトメータから受容するように構成されている１つ以上のチューブまたは類似の容器を含み得る。いくつかの事例では、収集システムの１つ以上のチューブは、流体をフローサイトメータの選別ブロックから受容するように構成されている。いくつかの場合には、収集システムの１つ以上のチューブは、選別ブロックの１つ以上の出口に流体結合され得、各チューブは、個別の出口に結合され得る。いくつかの事例では、１つ以上のチューブは、例えば、以下でより詳細に検討されるように、選別チューブ、廃棄チューブ、またはキャップオフチューブであり得る。本発明の収集システムは、フローサイトメータからフローサイトメトリで選別された試料を受容するように構成されている選別チューブを有し得る。いくつかの事例では、収集システムの選別チューブは、フローサイトメータの選別ブロックからフローサイトメトリで選別された試料を受容するように構成されている。選別チューブは、フローサイトメータ、例えばフローサイトメータの選別ブロックから試料を受容し、受容された試料を収集容器に誘導し得る。いくつかの場合には、選別チューブは、フローサイトメトリで選別された試料を、フローサイトメトリで選別された試料と、収集容器の様々な内面、例えば壁との間の接触を最小限に抑えるように、収集容器に誘導する。使用中、選別チューブは、例えば、選別チューブの縦軸が選別ストリームの縦軸と整列している場所など、選別チューブの内面との選別ストリームの接触を、排除しない場合、低減するように構成され得る。選別チューブは、収集容器に結合されてもよく、例えば、収集容器に取り付けられていてもよく、または収集容器の一体的な構成要素であってもよい。選別チューブは、収集容器の表面に対して任意の好適な位置に配置されてもよく、例えば、選別チューブは、収集容器の上面、収集容器の側面、または収集容器の底面に配置されてもよい。選別チューブは、任意の便利な形状または構造を有していてもよく、例えば、選別チューブは、チューブ、コーン、漏斗などでもよい。選別チューブは、任意の便利な寸法を有していてもよい。いくつかの場合には、選別チューブは、５ｃｍ～２５ｃｍの長さの範囲であり、例えば、選別チューブは、５ｃｍ～２０ｃｍの長さ、５ｃｍ～１５ｃｍの長さ、または５ｃｍ～１０ｃｍの長さの範囲であり得る。いくつかの場合には、選別チューブは、１ｍｍ～２５ｍｍの範囲の内径を有し、例えば、選別チューブは、１ｍｍ～２０ｍｍ、１ｍｍ～１５ｍｍ、または１ｍｍ～１０ｍｍの範囲の直径を有し得る。選別チューブは、選別ブロックの遠位端にガイドを含み得る。ガイドは、任意の好適な形状であってもよく、例えば、ガイドは円錐形または円筒形であってもよい。いくつかの場合には、ガイドは、拡張コーンとして構成され、例えば、ガイドは、コーンの中心から外側に拡張する壁を有するコーンであってもよい。いくつかの場合には、ガイドは、５ｃｍ～２５ｃｍの長さの範囲であり、例えば、ガイドは、５ｃｍ～２０ｃｍの長さ、５ｃｍ～１５ｃｍの長さ、または５ｃｍ～１０ｃｍの長さの範囲であり得る。

いくつかの場合には、本明細書に記載される収集システムは、フローサイトメータから廃棄流体を受容するように構成されている廃棄チューブを含む。いくつかの事例では、収集システムの廃棄チューブは、フローサイトメータの選別ブロックから廃棄流体を受容するように構成されている。廃棄チューブは、フローサイトメータ、例えば、フローサイトメータの選別ブロックから廃棄流体を受容し、廃棄流体を廃棄位置、例えば、廃棄容器に誘導し得る。廃棄チューブは、任意の便利な形状または構造を有していてもよく、例えば、廃棄チューブは、チューブ、コーン、漏斗などでもよい。廃棄チューブは、任意の便利な寸法を有していてもよい。いくつかの場合には、廃棄チューブは、５ｃｍ～２５ｃｍの長さの範囲であり、例えば、選別チューブは、５ｃｍ～２０ｃｍの長さ、５ｃｍ～１５ｃｍの長さ、または５ｃｍ～１０ｃｍの長さの範囲であり得る。いくつかの場合には、廃棄チューブは、１ｍｍ～２５ｍｍの範囲の内径を有し、例えば、廃棄チューブは、１ｍｍ～２０ｍｍ、１ｍｍ～１５ｍｍ、または１ｍｍ～１０ｍｍの範囲の直径を有し得る。

いくつかの場合には、本明細書に記載される収集システムは、キャップオフチューブを含む。チューブは、チューブを通る流体の流れがブロックされるようにキャップオフされ得る。チューブは、システムの無菌性を維持し、例えば、選別チューブおよび廃棄チューブなどの選別ブロックに結合された他のチューブを通る流体の流れを促進するためにキャップオフされ得る。キャップオフチューブは、第１の端部の選別ブロックの出口に結合され、第２の端部で密封され得る。チューブの第２の端部は、任意の好適なキャップまたは蓋によって密封され得る。代替的に、そのような事例では、例えば、その無菌性を維持するためなど、選別ブロックの出口を覆うために、任意のシーリングカバーが使用されてもよく、代替のシーリングカバーは、キャップ、蓋などを含む。

上述したような、選別チューブおよびガイド構成要素は、以下に詳述されるものを含む、任意の便利な材料から製造され得る。

本明細書に記載される収集システムは、収集容器をさらに含み得る。収集容器は、フローサイトメータからフローサイトメトリで選別された試料を受容し、収集し得る。上述のように、収集容器は、フローサイトメータの選別ブロックなど、フローサイトメータと液滴受容関係にある選別チューブを有していてもよい。いくつかの場合には、収集容器は、フローサイトメータの選別ブロックの出口に直接結合されてもよく、例えば、選別チューブがない容器は、フローサイトメータの選別ブロックの出口に直接取り付けられてもよい。収集容器は、フローサイトメトリで選別された細胞生成物を収集するための無菌環境を提供し得る。無菌環境とは、生きた細菌または他の微生物を含まないか、または実質的に含まない環境を意味する。システムの収集容器は、フローサイトメトリで選別された試料の収集のための任意の適切な構成を有し得る。いくつかの場合には、容器は、１ｍＬ～１００ｍＬの範囲の体積を有し、例えば、容器の体積は、１ｍＬ～９０ｍＬ、１ｍＬ～８０ｍＬ、１ｍＬ～７０ｍＬ、１ｍＬ～６０ｍＬ、１ｍＬ～５０ｍＬ、１ｍＬ～４０ｍＬ、１ｍＬ～３０ｍＬ、１ｍＬ～２０ｍＬ、または１ｍＬ～１０ｍＬの範囲であり得る。いくつかの場合には、容器は、例えば、１５０ｍＬ以下、１００ｍＬ以下、８０ｍＬ以下、７０ｍＬ以下、６０ｍＬ以下、５０ｍＬ以下、４０ｍＬ以下、３０ｍＬ以下、２０ｍＬ以下、または１０ｍＬ以下など、２００ｍＬ以下の体積を有する。

収集容器は、必要に応じて、剛性壁またはプライアント壁を有し得る。いくつかの場合には、収集容器は、例えば壁など、１つ以上の剛性構成要素を含み、１つ以上の剛性構成要素は、容器を画定する。「剛性」とは、例えば壁などの構成要素が、可撓性がないように、形状を曲げることができないか、または強制的に形状を崩すことができないことを意味する。そのような事例では、容器は、任意の便利な構成を有し得る。そのような実施形態のいくつかの事例では、収集容器は、チューブとして構成されている。そのような事例では、チューブの寸法は変わり得るが、いくつかの事例では、チューブは、２５～７５ｍｍなど、１０～１００ｍｍの範囲の最大内径を有する。容器が剛性構成要素を含む場合、容器は、任意の便利な材料から製造され得る。金属、ガラス（例えば、パイレックスガラス（登録商標）、ホウケイ酸ガラス）、セラミック、またはプラスチックを含む、流体試料（例えば、生体試料）と適合する任意の好適な材料が使用され得る。ある特定の実施形態では、容器は、剛性プラスチック、ポリマー、または熱可塑性材料などのプラスチックから形成される。例えば、好適なプラスチックは、これらに限定されないが、他の高分子プラスチック材料の中でも、ＰＥＴＧ（グリコール変性ポリエチレンテレフタレート）などのこれらの熱可塑性プラスチックのポリカーボネート、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、ポリウレタン、ポリエーテル、ポリアミド、ポリイミド、またはコポリマーを含み得る。ある特定の実施形態では、粒子選別モジュールハウジングは、ポリエステルから形成され、対象のポリエステルは、これらに限定されないが、ポリ（エチレンテレフタレート）（ＰＥＴ）、ボトルグレードＰＥＴ（モノエチレングリコール、テレフタリン酸、ならびにイソフタル酸、シクロヘキセンジメタノールなどの他のコモノマーに基づいて作製されたコポリマー）、ポリ（ブチレンテレフタレート）（ＰＢＴ）、およびポリ（ヘキサメチレンテレフタレート）などのポリ（アルキレンテレフタレート）、ポリ（エチレンアジペート）、ポリ（１，４－ブチレンアジペート）、およびポリ（ヘキサメチレンアジペート）などのポリ（アルキレンアジペート）、ポリ（エチレンスベレート）などのポリ（アルキレンスベレート）、ポリ（セバシン酸エチレン）などのポリ（アルキレンセバケート）、ポリ（ε－カプロラクトン）およびポリ（β－プロピオラクトン）、ポリ（エチレンイソフタレート）などのポリ（アルキレンイソフタレート）、ポリ（エチレン２，６－ナフタレンジカルボキシレート）などのポリ（アルキレン２，６－ナフタレンジカルボキシレート）、ポリ（エチレンスルホニル－４，４’－ジベンゾエート）などのポリ（アルキレンスルホニル－４，４’－ジベンゾエート）、ポリ（ｐ－フェニレンエチレンジカルボキシレートなどのポリ（ｐ－フェニレンアルキレンジカルボキシレート）、ポリ（トランス－１，４－シクロヘキサンジイルエチレンジカルボキシレート）などのポリ（トランス－１，４－シクロヘキサンジイルアルキレンジカルボキシレート）、ポリ（１，４－シクロヘキサンジメチレンエチレンジカルボキシレート）などのポリ（１，４－シクロヘキサンジメチレンアルキレンジカルボキシレート）、ポリ（［２．２．２］－ビシクロオクタン－１，４－ジメチレンエチレンジカルボキシレート）などのポリ（［２．２．２］－ビシクロオクタン－１，４－ジメチレンアルキレンジカルボキシレート）、（Ｓ）－ポリルアクチド、（Ｒ，Ｓ）－ポリルアクチド、ポリ（テトラメチルグリコリド）、およびポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）などの乳酸ポリマーおよびコポリマー、ならびにビスフェノールＡのポリカーボネート、３，３’－ジメチルビスフェノールＡ、３，３’，５，５’－テトラクロロビスフェノールＡ、３，３’，５，５’－テトラメチルフェノールＡ、ポリ（ｐ－フェニレンテレフタルアミド）などのポリアミド、ポリエステル、例えばポリエチレンテレフタレート、例えばマイラー（商標）ポリエチレンテレフタレートなどを含み得る。

いくつかの場合には、収集容器は、バッグなどのプライアント容器である。プライアントとは、収集容器が、断裂、亀裂、穿孔など、いかなる大きな構造変化もなく、その元の形状から曲げられても、屈曲されてもよいことを意味する。例えば、プライアント試料容器は、試料容器内の流体と周囲環境との間の接触を防止する密封バリアを依然として維持しながら、元の形状から屈曲されてもよく、および／または変形されてもよい。いくつかの場合には、プライアント容器は、例えば０．７ＧＰａ以下、０．５ＧＰａ以下を含む、例えば０．３ＧＰａ以下、または０．１ＧＰａ以下、例えば０．０５ＧＰａ以下、または０．０１ＧＰａ以下など、１ＧＰａ以下のヤング係数を有する可撓性材料から作製される。いくつかの場合には、収集容器は、バッグとして構成されている。これらの事例では、プライアント収集容器は、任意の便利な材料から製造され得る。対象の容器は、例えばＥＶＡ冷凍バッグなど、例えばＣＲＹＯＣＴＹＴＥ（商標）凍結バッグ（Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ，ＩＬ）、ＣＥＬＬ－ＦＲＥＥＺＥ（登録商標）低温凍結バッグ（Ｃｈａｒｔｅｒ Ｍｅｄｉｃａｌ，Ｗｉｎｓｔｏｎ－Ｓａｌｅｍ，ＮＣ）、ＯＲＩＧＥＮ ＣＲＹＯＳＴＯＲＥ（商標）凍結バッグ（ＯｒｉＧｅｎ ＢｉｏＭｅｄｉｃａｌ，Ａｕｓｔｉｎ，ＴＸ）など、エチニルビニルアセテート（ＥＶＡ）ベースの容器を含む。

望まれる場合、収集容器は、細胞収集位置を有し得る。「細胞収集位置」とは、フローサイトメトリで選別された試料を受容、収集、および／または保管するための収集容器内の位置を意味する。細胞収集位置は、収集容器内の任意の好適な位置に配置され得る。例えば、上述のように、収集容器がチューブである場合、チューブは、細胞収集位置を画定する底部を含んでもよい。チューブの底部は、例えば、フローサイトメータの選別ブロックから、フローサイトメトリで選別された試料の液滴を収集するために好適な任意の形状であってもよい。いくつかの事例では、チューブは、平坦なまたは円形の底部を有する。いくつかの事例では、チューブの底部は、細胞収集位置を画定する円錐形底部を含む。いくつかの事例では、チューブの底部は、細胞収集位置を画定する円筒底部を含む。細胞収集位置は、任意の便利な体積の試料を保持し得る。いくつかの場合には、細胞収集位置は、１ｍＬ～５０ｍＬ、１ｍＬ～２５ｍＬ、１ｍＬ～１５ｍＬ、または１ｍＬ～１０ｍＬの範囲の試料の体積を保持し得る。上記に示されるように、細胞収集位置は、フローサイトメトリで選別された細胞生成物を収集するための任意の好適な形状を有してもよく、例えば、細胞収集位置は、円錐形、円筒形、平坦、円形でもよい。

ある特定の実施形態では、システムの収集容器は、試料出力を含んでもよい。試料出力は、例えば、以下にさらに詳細に記載されるように、収集容器の細胞収集位置を、真空の受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合し得る。いくつかの事例では、試料出力は、例えば、フローサイトメトリで選別された細胞生成物を、収集容器の細胞収集位置から、真空の受容容器に輸送するための流体ラインを含む。望まれる場合、出力は、試料の無菌輸送を提供し得る。流体ラインは、任意の好適な構成を有してもよく、例えば、流体ラインは、管状流体ラインでもよい。いくつかの場合には、流体ラインは、剛性流体ラインである。ある特定の実施形態では、流体ラインは、プライアント、すなわち、可撓性流体ラインである。試料出力流体ラインは、任意の好適な材料から作製されてもよく、そのような材料は、これらに限定されないが、容器に関して上述されたものを含む。試料出力流体ラインは、任意の便利な長さを有していてもよい。いくつかの場合には、試料出力流体ラインの長さは、例えば、５ｃｍ～４０ｃｍ、５ｃｍ～３０ｃｍ、５ｃｍ～２０ｃｍ、または５ｃｍ～１０ｃｍなど、５ｃｍ～５０ｃｍの範囲である。試料出力流体ラインは、任意の便利な直径を有し得る。いくつかの場合には、試料出力流体ラインの内径は、例えば、１ｍｍ～１５ｍｍ、１ｍｍ～１０ｍｍ、１ｍｍ～５ｍｍ、または１ｍｍ～２ｍｍなど、１ｍｍ～２０ｍｍの範囲である。

いくつかの事例では、試料出力流体ラインは、収集容器の細胞収集位置に動作可能に結合するように構成されている第１の端部と、フローサイトメトリで選別された試料が、試料出力を通って細胞収集位置から、真空の受容容器に流れ得るように、真空の受容容器の嵌合接続部を含む第２の端部とを含む。フローサイトメトリで選別された試料は、試料出力の第１の近位端で試料出力に入り、近位端は、細胞収集位置に結合され得る。フローサイトメトリで選別された試料は、試料出力の第２の遠位端で試料出力を出てもよい。試料出力の第２の、すなわち遠位端は、嵌合接続部を含んでもよい。いくつかの場合、試料出力は、別の構成要素、例えば容器、嵌合接続部などに密封または溶接される１つ以上の端部を含む。いくつかの場合、試料出力の第１の端部は、収集容器との溶接接続部を有し、例えば、第１の端部は、収集容器に溶接され得る。いくつかの場合には、試料出力の第２の端部は、嵌合接続部との溶接接続部を有し、例えば、第２の端部は、嵌合接続部に溶接され得る。いくつかの場合には、試料出力の第２の端部は、複数の嵌合接続部を含む。

嵌合接続部は、試料出力の遠位端を真空の受容容器に動作可能に、例えば流体結合するように構成されている接続部である。ある特定の実施形態では、嵌合接続部は、試料出力の統合された構造であり、例えば、嵌合接続部は、試料出力との溶接接続部を有し、例えば、嵌合接続部は、試料出力の端部、例えば、遠位端に溶接される。嵌合接続部は、試料出力を真空の受容容器に結合し得る。嵌合接続部は、試料出力の端部と真空の受容容器との間の無菌接続部を提供し得る。いくつかの場合には、嵌合接続部は、試料出力、例えば、試料出力流体ラインに動作可能に接続された貫通部材を含む。いくつかの場合には、貫通部材は、試料出力流体ラインの端部に連結された中空針などの試料出力の一端から延在する剛性構造である。貫通部材は、例えば、真空の受容容器の隔壁など、真空の受容容器の表面を貫通することによって、嵌合接続部を、真空の受容容器に取り付け得る。いくつかの場合には、貫通部材は、貫通部材が真空の受容容器の表面を貫通した後に、真空の受容容器内に挿入され得る。いくつかの事例では、フローサイトメトリで選別された細胞生成物は、収集容器の細胞収集位置から、試料出力流体ラインを通って、および貫通部材を通って、真空の受容容器に流れ得る。嵌合接続部は、例えば、真空の受容容器の表面を貫通するための、単一の露出端を有する単一端の貫通部材または貫通部材を含み得る。いくつかの場合には、試料出力を真空の受容容器に結合するための嵌合接続部は、試料出力に動作可能に接続された管状部材を含む。管状部材は、以下に詳細に記載されるように、シリンジの針に接続してもよく、またはシリンジの針を受容してもよい。いくつかの場合には、管状部材は、シリンジの針が管状部材に挿入されるときに気密接続を確実にするように構成されている。フローサイトメトリで選別された細胞生成物は、収集容器の細胞収集位置から、試料出力流体ラインを通って、および管状部材を通ってシリンジに流れ得る。いくつかの事例では、試料出力は、試料出力を１つ以上の真空の受容容器に結合する複数の嵌合接続部を含む。試料出力は、上述のように、貫通部材を有する少なくとも１つの嵌合接続部、および上述のように、管状部材を有する少なくとも１つの嵌合接続部を含み得る。いくつかの場合には、試料出力は、少なくとも２つの嵌合接続部を有するコネクタ、例えば、Ｙコネクタを含み、各嵌合接続部は、真空の受容容器に別々に結合され得る。いくつかの場合には、少なくとも２つの嵌合接続部は、真空の受容容器、例えば、真空管に取り付けるための貫通部材を含む。いくつかの場合には、少なくとも２つの嵌合接続部は、真空の受容容器、例えば、シリンジの針と接続する、またはそれを受容するための管状部材を含む。いくつかの場合には、コネクタの少なくとも１つの嵌合接続部は、貫通部材を含み、コネクタの少なくとも１つの他の嵌合接続部は、管状部材を含む。

上述のように、システムは、真空の受容容器を含んでもよい。ある特定の実施形態では、真空の受容容器は、使用中、例えば、貫通部材によって、嵌合接続部に動作可能に結合される。真空の受容容器は、試料出力および嵌合接続部を介して収集容器の細胞収集位置からフローサイトメトリで選別された細胞生成物を受容するように構成され得る。「真空の受容容器」は、真空の内部体積を含む容器を指す。いくつかの場合には、真空の受容容器は、真空の内部体積および隔壁によって密封された開口部を含む容器である。いくつかの場合には、真空の受容容器は、試料を受容するための空気が排出され、密封されたチューブ容器である。真空の受容容器は、例えば、真空の採血チューブまたは真空管など任意の好適な空気が排出された無菌容器であってもよい。いくつかの場合には、真空の受容容器は、真空の内部体積およびプランジャによって密封された開口部を含む容器である。いくつかの場合には、真空の受容容器は、試料を受容するための針を有するシリンジであり、押されるか、または引かれ得るプランジャを収容するバレルである。真空の受容容器は、これらに限定されないが、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン－テレフタル酸塩、ポリスチレン、衝撃変性ポリスチレン、ガラスなど、任意の好適な材料から作製され得る。真空の受容容器は、例えば、１ｍｌ～１５ｍｌ、１ｍｌ～１０ｍｌ、１ｍｌ～５ｍｌ、または１ｍｌ～２ｍｌの範囲の任意の便利な体積を有し得る。ある特定の事例では、対象の真空の受容容器は、ＢＤ Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）採血チューブを含む。好適な真空の受容容器は、例えば、米国特許第５，３４４，６１１号、第５，３２６，５３５号、第５，３２０，８１２号、第５，２５７，６３３号、および第５，２４６，６６６号に記載され、これらの開示が参照により本明細書に組み込まれる。ある特定の実施形態では、対象の真空の受容容器は、シリンジを含む。好適な真空の受容容器は、例えば、米国特許第２，７５６，７４８号に記載され、これらの開示が参照により本明細書に組み込まれる。いくつかの事例では、システムは、複数の真空の受容容器を含む。真空の受容容器は、複数の試料出力に結合されてもよく、各試料出力は、各真空の受容容器に結合され得る少なくとも１つの嵌合接続部を有する。

システムは、例えば、上述のように、収集容器の内部への、または収集容器の内部からの培地の輸送のために、例えば、溶接接続部を介して、収集容器に流体結合された培地入力をさらに含んでもよい。培地入力は、ある量の液体培地を収集容器に送達し得る。いくつかの場合には、培地出力は、流体ラインを含む。流体ラインは、任意の好適な構成を有してもよく、例えば、流体ラインは、管状流体ラインでもよい。いくつかの場合には、流体ラインは、剛性流体ラインである。ある特定の実施形態では、流体ラインは、可撓性流体ラインである。いくつかの場合には、培地入力は、密封可能または溶接可能な１つ以上の端部を含み、例えば、培地入力の第１の端部は、収集容器との溶接接続部を有していてもよく、例えば、第１の端部は、収集容器に溶接され得る。培地入力流体ラインは、任意の便利な長さを有し得る。いくつかの場合には、培地入力流体ラインの長さは、例えば、５ｃｍ～４０ｃｍ、５ｃｍ～３０ｃｍ、５ｃｍ～２０ｃｍ、または５ｃｍ～１０ｃｍなど、５ｃｍ～５０ｃｍの範囲である。培地入力流体ラインは、任意の便利な直径を有し得る。いくつかの事例では、培地入力流体ラインの直径は、例えば、１ｍｍ～１５ｍｍ、１ｍｍ～１０ｍｍ、１ｍｍ～５ｍｍ、または１ｍｍ～２ｍｍなど、１ｍｍ～２０ｍｍの範囲である。いくつかの事例では、システムは、複数の培地入力を含む。ある特定の実施形態では、培地入力は、例えば培地供給容器などの培地ソースに結合される第２の端部を有する。そのような事例では、培地供給容器は、液体培地を含み、液体培地の性質は変わり得る。培地供給容器に存在し得る液体培地の例は、これらに限定されないが、細胞栄養培地、細胞保存培地などを含む。

上述のように、例えば、収集システム内、および／または収集システムと、培地供給容器などの他の構成要素との間の、収集システムに関する流体接続のいずれかは、必要に応じて、無菌チューブ溶接を使用して行われ得る。任意の便利な無菌チューブ溶接システムおよび材料が採用され得る。

収集システムについて全体的に上述されており、次に、６つの具体的な実施形態について、それらの図に関連してより詳細に検討する。図１～６に示される実施形態では、収集システムは、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）および／またはシリンジと統合された収集容器を含む。方法は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブおよび／またはシリンジの真空を使用して、収集容器内の試料に適切な真空引力を提供することによって、細胞回復損失を低減する。複数のＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブおよび／またはシリンジを使用して、システム内のわずかな液体損失を伴う選別血管から試料全体を完全に除去することができる。

図１は、本発明の一実施形態による無菌収集システムの概略図を示す。細胞ソータの選別ブロック１００は、選別された細胞を、選別された粒子ストリームとして、収集チューブ１３０である収集容器に送達する。選別チューブ１２０は、選別ブロックの出口に結合され、選別された粒子ストリームを収集チューブ１３０に誘導することができる。収集チューブ１３０に接続するストレート選別チューブ１２０は、選別時に細胞が収集チューブ１３０の壁に接触する機会を最小限に抑える。加えて、粒子、例えば、選別された粒子ストリーム内の細胞と選別チューブの内面との接触を最小限に抑えるように、選別チューブの縦軸が選別された粒子ストリームの縦軸と整列される。選別収集チューブの底部にある培地に落ちる前に、選別された細胞と選別チューブおよび／または収集チューブ１３０の壁との接触を最小限に抑えることによって、細胞損失が減少し、細胞生存率が増加する。ストレート選別チューブ１２０は、選別収集チューブ１３０の底部にある培地に着陸する前に、選別収集チューブ１３０内に試料が蓄積する可能性を最小限に抑え、これは、細胞生存率を増加させ、細胞回復損失を減少させる。選別された細胞は、選別収集チューブ１３０の円錐形底部内に収集される。培地入力チューブ１６０は、選別収集チューブ１３０に結合される。培地入力チューブ１６０は、溶接接続部を介して選別収集チューブ１３０に結合され得る。ＰＥＥＫチューブ１４０は、選別収集チューブ１３０の内部に挿入される。ＰＥＥＫチューブ１４０の第１の端部は、選別された細胞が収集される選別収集チューブ１３０の円錐形底部に配置される。ＰＥＥＫチューブ１４０の第２の端部は、試料出力チューブ１５０の第１の端部と接する。試料出力チューブ１５０の第２の端部は、出力チューブ１５０の内部をＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ１８０の内部に流体結合するように構成されている嵌合要素１７０を含む。嵌合要素１７０は、試料出力チューブ１５０の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素１７０は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ１８０の隔壁を貫通するための針を含む。ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ１８０が嵌合要素１７０に接続された後、選別された細胞のアリコートがＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ１８０に引き込まれる。

図２は、本発明の別の実施形態による、無菌収集システムの概略図を示す。細胞ソータの選別ブロック２００は、選別された細胞を、収集バッグ２２０である収集容器に送達する。選別チューブ２１０は、選別ブロックの出口に結合され、選別された細胞を収集バッグ２２０に誘導し得る。選別チューブは、選別ブロック２００から遠位にある選別チューブの端部に配置された拡張コーン２７０を有する。ストレート選別チューブ２１０および収集バッグ２２０に接続する拡張コーン２７０は、選別時に細胞が収集バッグ２２０の壁に接触する機会を最小限に抑える。加えて、粒子、例えば、選別された粒子ストリーム内の細胞と選別チューブの内面との接触を最小限に抑えるように、選別チューブの縦軸が選別された粒子ストリームの縦軸と整列される。バッグの底部にある培地に落ちる前に、選別された細胞が選別チューブおよび／または収集チューブ２２０の壁と接触することを最小限に抑えることによって、細胞損失が減少し、細胞生存率が増加する。ストレート選別チューブ２１０および拡張コーン２７０は、収集バッグ２２０の底部にある培地に着陸する前に、収集バッグ２２０内に試料が蓄積する可能性を最小限に抑え、これは、細胞生存率を増加させ、細胞回復損失を減少させる。細胞は、収集バッグ２２０の底部に収集され得る。収集バッグ２２０は、細胞がバッグの底部に落ちて細胞損失を最小限に抑えることを助けるために使用される統合コーン設計を含む。培地入力チューブ２３０は、収集バッグ２２０に結合され得る。培地入力チューブ２３０は、溶接接続部を介して収集バッグ２２０に結合され得る。試料出力チューブ２４０は、収集バッグ２２０に結合され得る。試料出力チューブ２４０の第１の端部は、溶接接続部を介して収集バッグ２２０に結合されてもよい。試料出力チューブ２４０の第２の端部は、出力チューブ２４０の内部をＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ２６０の内部に流体結合するように構成されている嵌合要素２５０を含む。嵌合要素２５０は、試料出力チューブ２４０の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素２４０は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ２６０の隔壁を貫通するための針を含む。ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ２６０が嵌合要素２５０に接続された後、選別された細胞のアリコートがＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ２６０に引き込まれる。

図３は、本発明の一実施形態による無菌収集システムの概略図を示す。細胞ソータの選別ブロック３００は、選別された細胞を、選別された粒子ストリームとして、収集チューブ３０４である収集容器に送達する。選別チューブ３０３は、選別ブロックの出口に結合され、選別された粒子ストリームを収集チューブ３０４に誘導することができる。廃棄物ライン３０２は、選別ブロックの第２の出口に結合され、選別ブロック３００は、廃棄流体を廃棄物ライン３０２に送達する。キャップオフチューブ３０１は、選別ブロック３００の第３の出口に結合される。キャップオフチューブの代わりに、開口部は、単純なキャップまたは蓋で覆われ得る。収集チューブ３０４に接続するストレート選別チューブ３０３は、選別時に細胞が収集チューブ３０４の壁に接触する機会を最小限に抑える。加えて、粒子、例えば、選別された粒子ストリーム内の細胞と選別チューブの内面との接触を最小限に抑えるように、選別チューブの縦軸が選別された粒子ストリームの縦軸と整列される。選別収集チューブの底部にある培地に落ちる前に、選別された細胞と選別チューブ３０３および／または収集チューブ３０４の壁との接触を最小限に抑えることによって、細胞損失が減少し、細胞生存率が増加する。ストレート選別チューブ３０３は、選別収集チューブ３０４の底部にある培地に着陸する前に、選別収集チューブ３０４内に試料が蓄積する可能性を最小限に抑え、これは、細胞生存率を増加させ、細胞回復損失を減少させる。選別された細胞は、選別収集チューブ３０４の円錐形底部内に収集される。ＰＥＥＫチューブ３１０は、選別収集チューブ３０４の内部に挿入される。ＰＥＥＫチューブ３１０の第１の端部は、選別された細胞が収集される選別収集チューブ３０４の円錐形底部に配置される。ＰＥＥＫチューブ３１０の第２の端部は、試料出力チューブ３０５の第１の端部と接する。試料出力チューブ３０５の第２の端部は、２つの嵌合要素３０６および３０８の１つまたは両方を含む。嵌合要素３０６は、出力チューブ３０５の内部をＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ３０７の内部に流体結合するように構成されている。嵌合要素３０６は、試料出力チューブ３０５の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素３０６は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ３０７の隔壁を貫通するための針を含む。ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ３０７が嵌合要素３０６に接続された後、選別された細胞のアリコートがＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ３０７に引き込まれる。嵌合要素３０８は、出力チューブ３０５の内部をシリンジ３０９の内部に流体結合するように構成されている。嵌合要素３０８は、試料出力チューブ３０５の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素３０８は、シリンジ３０９の針に接続するか、またはその針を受容するためのチューブを含む。シリンジ３０９が嵌合要素３０８に接続された後、選別された細胞のアリコートをシリンジ３０９に引き込むことができる。望まれる場合、嵌合要素３０８の出口のいずれかは、例えば、システムの無菌を維持するために、使用されていない場合に密封され得る。

図４は、本発明の別の実施形態による、無菌収集システムの概略図を示す。細胞ソータの選別ブロック４００は、選別された粒子ストリームとして選別された細胞を、収集チューブ４０３および４１０である２つの収集容器に送達し、各チューブは、選別された粒子ストリーム中の選別された細胞を、選別ブロックの別個の出口、例えば、第１の出口および第２の出口から受容する。選別チューブ４０１および４０９は、それぞれ、例えば、第１の出口および第２の出口などの選別ブロックの出口に結合することができ、選別された粒子ストリームをそれぞれ、収集チューブ４０３および４１０に誘導する。廃棄物ライン４０２は、例えば、第３の出口など、選別ブロック４００の出口に結合され、選別ブロック４００は、廃棄流体を廃棄物ライン４０２に送達する。それぞれ収集チューブ４０３および４１０に接続するストレート選別チューブ４０１および４０９は、選別時に細胞が収集チューブ４０３および４１０の壁に接触する機会を最小限に抑える。加えて、粒子、例えば、選別された粒子ストリーム内の細胞と選別チューブの内面との接触を最小限に抑えるように、各選別チューブの縦軸が選別された粒子ストリームの縦軸と整列される。選別収集チューブの底部にある培地に落ちる前に、選別された細胞と選別チューブ４０１および４０９ならびに／または収集チューブ４０３および４１０の壁との接触を最小限に抑えることによって、細胞損失が減少し、細胞生存率が増加する。ストレート選別チューブ４０１および４０９は、選別収集チューブの底部にある培地に着陸する前に、選別収集チューブ４０３および４１０内に試料が蓄積する可能性を最小限に抑え、これは、細胞生存率を増加させ、細胞回復損失を減少させる。選別された細胞は、選別収集チューブ４０３および４１０の円錐形底部内に収集される。ＰＥＥＫチューブ４１５および４１６は、選別収集チューブ４０３および４１０の内部に挿入される。ＰＥＥＫチューブ４１５および４１６の第１の端部は、選別細胞が収集される選別収集チューブ４０３および４１０の円錐形底部に配置される。ＰＥＥＫチューブ４１５および４１６の第２の端部は、試料出力チューブ４０４および４１１の第１の端部と接する。試料出力チューブ４０４の第２の端部は、２つの嵌合要素４０５および４０７の１つまたは両方を含む。試料出力チューブ４１１の第２の端部は、２つの嵌合要素４１２および４１７の１つまたは両方を含む。嵌合要素４０５および４１２は、出力チューブ４０４および４１１の内部をＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ４０６および４１３の内部に流体結合するように構成されている。嵌合要素４０５および４１２は、試料出力チューブ４０４および４１１の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素４０５および４１２は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ４０６および４１３の隔壁を貫通するための針を含む。ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ４０６および４１３が嵌合要素４０５および４１２に接続された後、選別された細胞のアリコートがＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ４０６および４１３に引き込まれる。嵌合要素４０７および４１７は、出力チューブ４０４および４１１の内部をシリンジ４０８および４１４の内部に流体結合するように構成されている。嵌合要素４０７および４１７は、試料出力チューブ４０４および４１１の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素４０７および４１７は各々、シリンジ４０８および４１４の針に接続するか、またはその針を受容するためのチューブを含む。シリンジ４０８および４１４がそれぞれ嵌合要素４０７および４１４に接続された後、選別された細胞のアリコートがシリンジ４０８および４１４の各々に引き込まれる。望まれる場合、嵌合要素４０７および４１４の出口のいずれかは、例えば、システムの無菌を維持するために、使用されていない場合に密封され得る。

図５は、本発明の別の実施形態による、無菌収集システムの概略図を示す。細胞ソータの選別ブロック５００は、選別された粒子ストリームとして選別された細胞を、収集チューブ５０３および５０９である２つの収集容器に送達し、各チューブは、選別された粒子ストリーム中の選別された細胞を、選別ブロックの別個の出口、例えば、第１の出口および第２の出口から受容する。収集チューブ５０３および５０９は、それぞれ、例えば、第１の出口および第２の出口などの選別ブロックの出口に結合することができ、選別された粒子ストリームを収集チューブの底部に誘導する。収集チューブ５０３および５０９は、選別ブロックに直接取り付けられる。廃棄物ライン５０１は、例えば、第３の出口など、選別ブロック５００の出口に結合され、選別ブロック５００は、廃棄流体を廃棄物ライン５０１に送達する。選別された細胞は、選別収集チューブ５０３および５０９の円錐形底部内に収集される。ＰＥＥＫチューブ５０２および５１０は、選別収集チューブ５０３および５０９の内部に挿入される。ＰＥＥＫチューブ５０２および５１０の第１の端部は、選別細胞が収集される選別収集チューブ５０３および５０９の円錐形底部に配置される。ＰＥＥＫチューブ５０２および５１０の第２の端部は、試料出力チューブ５０４および５１１の第１の端部と接する。試料出力チューブ５０４の第２の端部は、２つの嵌合要素５０５および５０７の１つまたは両方を含む。試料出力チューブ５１１の第２の端部は、２つの嵌合要素５１２および５１４の１つまたは両方を含む。嵌合要素５０５および５１２は、出力チューブ５０４および５１１の内部をＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ５０６および５１３の内部に流体結合するように構成されている。嵌合要素５０７および５１４は、試料出力チューブ５０４および５１１の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素５０５および５１２は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ５０６および５１３の隔壁を貫通するための針を含む。ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ５０６および５１３が嵌合要素５０５および５１２に接続された後、選別された細胞のアリコートがＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ５０６および５１３に引き込まれる。嵌合要素５０７および５１４は、出力チューブ５０４および５１１の内部をシリンジ５０８および５１５の内部に流体結合するように構成されている。嵌合要素５０７および５１４は、試料出力チューブ５０４および５１１の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素５０７および５１４は各々、シリンジ５０８および５１５の針に接続するか、またはその針を受容するためのチューブを含む。シリンジ５０８および５１５がそれぞれ嵌合要素５０７および５１４に接続された後、選別された細胞のアリコートがシリンジ５０８および５１５の各々に引き込まれる。望まれる場合、嵌合要素５０７および５１４の出口のいずれかは、例えば、システムの無菌を維持するために、使用されていない場合に密封され得る。

図６は、本発明の別の実施形態による、無菌収集システムの概略図を示す。細胞ソータの選別ブロック６００は、選別された細胞を、収集バッグ６０４である収集容器に送達する。選別チューブ６０３は、選別ブロックの出口に結合され、選別された細胞を収集バッグ６０４に誘導し得る。廃棄物ライン６０２は、選別ブロックの第２の出口に結合され、選別ブロック６００は、廃棄流体を廃棄物ライン６０２に送達する。キャップオフチューブ６０１は、選別ブロック６００の第３の出口に結合される。収集バッグ６０４に接続するストレート選別チューブ６０３は、選別時に細胞が収集バッグ６０４の壁に接触する機会を最小限に抑える。加えて、粒子、例えば、選別された粒子ストリーム内の細胞と選別チューブの内面との接触を最小限に抑えるように、選別チューブの縦軸が選別された粒子ストリームの縦軸と整列される。バッグの底部にある培地に落ちる前に、選別された細胞が選別チューブ６０３および／または収集チューブ６０４の壁と接触することを最小限に抑えることによって、細胞損失が減少し、細胞生存率が増加する。ストレート選別チューブ６０３は、収集バッグ６０４の底部にある培地に着陸する前に、収集バッグ６０４内に試料が蓄積する可能性を最小限に抑え、これは、細胞生存率を増加させ、細胞回復損失を減少させる。細胞は、収集バッグ６０４の底部に収集され得る。収集バッグ６０４は、細胞がバッグの底部に落ちて細胞損失を最小限に抑えることを助けるために使用される統合コーン設計を含む。培地入力チューブ６０６は、収集バッグ６０４に結合され得る。培地入力チューブ６０６は、溶接接続部を介して収集バッグ６０４に結合され得る。試料出力チューブ６０５は、収集バッグ６０４に結合され得る。試料出力チューブ６０５の第１の端部は、溶接接続部を介して収集バッグ６０４に結合されてもよい。試料出力チューブ６０５の第２の端部は、２つの嵌合要素６０７および６０８の１つまたは両方を含む。嵌合要素６０７は、出力チューブ６０５の内部をＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ６０９の内部に流体結合するように構成されている。嵌合要素６０７は、試料出力チューブ６０５の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素６０７は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ６０９の隔壁を貫通するための針を含む。ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ６０９が嵌合要素６０７に接続された後、選別された細胞のアリコートがＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブ６０９に引き込まれる。嵌合要素６０８は、出力チューブ６０５の内部をシリンジ６１０の内部に流体結合するように構成されている。嵌合要素６０８は、試料出力チューブ６０５の第２の端部に溶接または密封することができる。嵌合要素６０８は、シリンジ６１０の針に接続するか、またはその針を受容するためのチューブを含む。シリンジ６１０が嵌合要素６０８に接続された後、選別された細胞のアリコートがシリンジ６１０に引き込まれる。望まれる場合、嵌合要素６０８の出口のいずれかは、例えば、システムの無菌を維持するために、使用されていない場合に密封され得る。

フローサイトメータシステム
本発明の態様は、フローサイトメータシステムをさらに含み、フローサイトメータシステムは、例えば上述のように、収集システムに動作可能に結合された選別フローサイトメータを含む。選別フローサイトメータなどのフロータイプの粒子選別システムは、粒子の少なくとも１つの測定された特性に基づいて、流体試料内の粒子を選別するために使用される。フロータイプの粒子選別システムにおいて、流体懸濁液中の分子、分析物結合ビーズ、または個々の細胞などの粒子は、選別されるタイプのストリームに含まれる粒子をセンサが検出する検出領域によってストリームの中で通過する。センサは、選別されるタイプの粒子を検出すると、対象の粒子を選択的に単離する選別機構をトリガする。

粒子感知は、典型的には、１つ以上のレーザからの照射光に粒子がさらされ、粒子の光散乱および蛍光特性が測定される検出領域によって流体ストリームを通過することによって実行される。粒子またはその成分は、検出を容易にするために蛍光色素で標識することができ、多数の異なる粒子または成分は、スペクトル的に別個の蛍光色素を使用して、異なる粒子または成分を標識することによって、同時に検出され得る。検出は、各別個の蛍光色素の蛍光の独立した測定を容易にするために、１つ以上の光検出器を使用して実行される。

フロータイプの粒子選別システムの１つのタイプは、静電選別タイプである。静電ソータでは、流体懸濁液がノズルから噴射され、振動されてストリームを均一な別個の液滴に分解する。選別機構は、ジェットストリームから離れると電荷で選別されるタイプの粒子を含む液滴を帯電するためにストリームに接続された液滴帯電手段を含む。液滴のストリームは、一対の反対に帯電した偏向板によって確立された横方向の静電場を通過する。選別されるタイプの粒子を含む帯電した液滴は、液滴電荷の極性および大きさに関連する方向および量で偏向され、別個の収集容器内に収集される。帯電していない液滴は、静電場を通過する際に偏向されず、中央容器によって収集される。

選別フローサイトメータの様々な態様は、米国特許第３，９６０，４４９号、第４，３４７，９３５号、第４，６６７，８３０号、第４，７０４，８９１号、第４，７７０，９９２号、第５，０３０，００２号、第５，０４０，８９０号、第５，０４７，３２１号、第５，２４５，３１８号、第５，３１７，１６２号、第５，４６４，５８１号、第５，４８３，４６９号、第５，６０２，０３９号、第５，６２０，８４２号、第５，６２７，０４０号、第５，６４３，７９６号、第５，７００，６９２号、第６，３７２，５０６号、第６，８０９，８０４号、第６，８１３，０１７号、第６，８２１，７４０号、第７，１２９，５０５号、第７，２０１，８７５号、第７，５４４，３２６号、第８，１４０，３００号、第８，２３３，１４６号、第８，７５３，５７３号、第８，９７５，５９５号、第９，０９２，０３４号、第９，０９５，４９４号、および第９，０９７，６４０号に記載されており、これらの開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。いくつかの事例では、選別フローサイトメータは、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｆｌｕｘ（商標）細胞ソータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）ＩＩＩおよびＢＤ ＦＡＣＳＡｒｉａ（商標）Ｆｕｓｉｏｎ細胞ソータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＪａｚｚ（商標）細胞ソータ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＦＡＣＳＭｅｌｏｄｙ（商標）細胞ソータなどのＢｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ細胞選別である。

いくつかの場合には、フローサイトメータは、選別ブロックを含む。選別ブロックは、例えば、上述のように、選別された試料を収集容器に送達するように構成され得る。上述のように、収集容器は、選別ブロックと液滴受容関係にある選別チューブを有していてもよく、例えば、選別チューブは、例えば液滴の形態で、フローサイトメトリで選別された細胞生成物を選別ブロックから受容し、フローサイトメトリで選別された細胞生成物を収集容器に誘導し得る。いくつかの場合には、選別ブロックは、選別された試料を選別チューブに送達し、第１の端部は、選別ブロックの開口部に結合され、第２の端部は、収集容器に結合されている。選別ブロックは、例えば、米国特許第６，８８０，４１４号に記載される選別ブロックなど、当該技術分野で既知の任意の選別ブロックであってもよく、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

対象となるものは、ある特定の実施形態では、無菌単回使用粒子選別モジュールを有する無菌細胞ソータである。そのような事例では、粒子選別モジュールは、ハウジングを粒子選別システムと結合するためのアライナを有する密閉ハウジング、ハウジングの近位端に配置されたフローセルノズル、フローセルノズルのオリフィスと流体連通する試料検査領域、および液滴デフレクタ、および選別ブロックを含む。「密閉」という用語は、粒子選別モジュールの各構成要素がハウジング内に完全に含まれ、構成要素が周囲環境から密封または単離されていることを意味する。言い換えれば、密閉ハウジング内の構成要素は、外部環境にさらされない、または外部環境と接触しない。いくつかの実施形態では、ハウジング内に含まれる構成要素は、周囲環境の気体環境から単離される（すなわち、ハウジング外部の気体にさらされない）。他の実施形態では、ハウジング内に含まれる構成要素は、周囲環境の流体環境から単離される（すなわち、ハウジング外部に存在する任意の流体にさらされない）。さらに他の実施形態では、ハウジング内に含まれる構成要素は、無菌であり、周囲環境に存在する生きた細菌または他の微生物から単離される（すなわち、無菌）。そのような選別フローサイトメータに関するさらなる詳細は、ＷＯ２０１７／１８０３２５として公開されたＰＣＴ特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２４６０９号に提供されており、その開示が参照により本明細書に組み込まれる。

所与のフローサイトメータシステムは、単一の収集システム、または複数の収集システムに動作可能に結合され得る。したがって、所与のシステムは、フローサイトメータの選別ブロックに結合された複数の選別チューブを有してもよく、例えば、システムは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つの選別チューブを含んでもよい。ある特定の実施形態では、システムは、複数の選別チューブを含み、各選別チューブは、選別ブロックの遠位端にガイドを有する。いくつかの場合、本開示のシステムは、複数の収集容器を含み、例えば、システムは、少なくとも１個の収集容器、少なくとも２個の収集容器、少なくとも３個の収集容器、少なくとも４個の収集容器、または少なくとも５個の収集容器を含むことができる。複数の収集容器の各々は、フローサイトメータの選別ブロックからフローサイトメトリで選別された細胞生成物を受容するための選別チューブを含んでもよい。

方法
本開示の態様は、生体試料内の細胞など、初期試料の粒子を選別するための方法も含む。ある特定の実施形態による方法は、粒子選別モジュールのフローセルなど、フローセルの検査領域内のフローストリーム内に粒子を含む初期試料を照射することと、試料から光（例えば、蛍光光）を検出することと、例えば上述したように、試料の粒子を収集容器に選別することとを含む。ある特定の実施形態では、試料は、生体試料であり、方法は、少なくとも１つのタイプの細胞を選別し、収集することを含む。

いくつかの実施形態では、初期試料は、生体試料である。「生体試料」という用語は、その従来の意味で、全生物、植物、真菌、または、ある特定の事例において、血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、気管支肺胞洗浄、羊水、羊髄血、尿、膣液、および精液中に見られ得る動物組織、細胞、または成分部分のサブセットを指すために使用される。したがって、「生体試料」は、天然生物またはその組織のサブセットの両方、ならびに、これらに限定されないが、例えば、血漿、血清、脊髄液、リンパ液、皮膚の切片、呼吸器、胃腸、心血管、および泌尿器管、涙液、唾液、乳、血液細胞、腫瘍、臓器を含む、生物またはその組織のサブセットから調製されるホモジネート、溶解物、または抽出物を指す。生物学的試料は、健康組織と疾患組織（例えば、がん性、悪性、壊死性など）との両方を含む、任意のタイプの生物組織であってもよい。ある特定の実施形態では、生体試料は、血液またはその誘導体、例えば、血漿、涙液、尿、精液などの液体試料であり、いくつかの事例では、試料は、静脈穿刺または指先から取得された血液など、全血を含む血液試料である（血液は、防腐剤、抗凝固剤などのアッセイの前に任意の試薬と組み合わされてもよく、組み合わされなくてもよい）。

ある特定の実施形態では、試料のソースは、「哺乳類」または「哺乳類の動物」であり、これらの用語は、肉食類（例えば、イヌおよびネコ）、げっ歯類（例えば、マウス、モルモット、およびラット）、および霊長類（例えば、ヒト、チンパンジー、およびサル）を含む、哺乳類内の生物を記載するために広く使用される。いくつかの事例では、対象は、ヒトである。方法は、両方の性別のヒト対象から取得された試料に、および発達の任意の段階（すなわち、新生児、乳幼児、少年、思春期、成人）に適用されてもよく、ある特定の実施形態では、ヒト対象は、少年、思春期、または成人である。本発明は、ヒト対象からの試料に適用され得るが、これらに限定されないが、鳥、マウス、ラット、イヌ、ネコ、家畜、およびウマなど他の動物対象（すなわち、「非ヒト対象」において）からの試料に対しても実施され得ることを理解されたい。

対象の細胞は、特定の蛍光標識の対象の細胞への付着を介して識別される表現型特性など様々なパラメータに従ってフローストリームからの分離のための標的とされ得る。いくつかの実施形態では、システムは、標的細胞を含むと決定される分析された液滴を偏向させるように構成されている。主題の方法を使用して選別するために、様々な細胞が標的とされ得る。対象の標的細胞は、これらに限定されないが、幹細胞、Ｔ細胞、樹状細胞、Ｂ細胞、顆粒球、白血病細胞、リンパ腫細胞、ウイルス細胞（例えば、ＨＩＶ細胞）ＮＫ細胞、マクロファージ、単球、線維芽細胞、上皮細胞、内皮細胞、および赤血球細胞を含む。対象の標的細胞は、便利な親和性剤またはそのコンジュゲートによって捕捉または標識され得る便利な細胞表面マーカまたは抗原を有する細胞を含む。例えば、標的細胞は、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ１９３、ＣＤ２、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３、ＣＤ３３５、ＣＤ３６、ＣＤ４、ＣＤ４３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ５６、ＣＤ６１、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ３４、ＣＤ１ｃ、ＣＤ２３、ＣＤ３０４、ＣＤ２３５ａ、Ｔ細胞受容体α／β、Ｔ細胞受容体γ／Δ、ＣＤ２５３、ＣＤ９５、ＣＤ２０、ＣＤ１０５、ＣＤ１１７、ＣＤ１２０ｂ、Ｎｏｔｃｈ４、Ｌｇｒ５（Ｎ末端）、ＳＳＥＡ－３，ＴＲＡ－１－６０抗原、ジシアロガングリオシドＧＤ２、およびＣＤ７１などの細胞表面抗原を含み得る。いくつかの実施形態では、標的細胞は、全血、骨髄または臍帯血からのＨＩＶ含有細胞、Ｔｒｅｇ細胞、抗原特異的Ｔ細胞集団、腫瘍細胞または造血前駆細胞（ＣＤ３４＋）から選択される。

主題の方法を実践する際に、ある量の初期流体試料がフローサイトメータに注入される。粒子選別モジュールに注入される試料の量は、例えば０．００５ｍＬ～９００ｍＬ、例えば０．０１ｍＬ～８００ｍＬ、例えば０．０５ｍＬ～７００ｍＬ、例えば０．１ｍＬ～６００ｍＬ、例えば０．５ｍＬ～５００ｍＬ、例えば１ｍＬ～４００ｍＬ、例えば２ｍＬ～３００ｍＬ、および試料の５ｍＬ～１００ｍＬを含む、例えば０．００１ｍＬ～１０００ｍＬの範囲で変わり得る。

本開示の実施形態による方法は、試料内の標識された粒子（例えば、標的細胞）を計数し、選別することを含む。主題の方法を実践する際に、粒子を含む流体試料は、最初にシステムのフローノズルに導入される。フローノズルから出ると、粒子は、試料検査領域を実質的に１つずつ通過し、粒子の各々が光源に照射され、必要に応じて、光散乱パラメータ、および、いくつかの事例では、蛍光放射の測定値（例えば、２つ以上の光散乱パラメータおよび１つ以上の蛍光放射の測定値）が粒子ごとに別々に記録される。粒子は、各粒子が光源によって照射される粒子選別モジュール内の試料検査領域を通る流路において、実質的に１つずつフローストリームで通される。検査されるフローストリームの特性に応じて、フローストリームの０．００１ｍｍ以上は、光で照射され得、例えば０．００５ｍｍ以上、例えば０．０１ｍｍ以上、例えば０．０５ｍｍ以上、例えば０．１ｍｍ以上、例えば０．５ｍｍ以上、およびフローストリームの１ｍｍ以上を含むものは、光で照射され得る。ある特定の実施形態では、方法は、試料検査領域内のフローストリームの平面断面を、例えば（上述のように）レーザで照射することを含む。他の実施形態では、方法は、拡散レーザビームまたはランプの照射プロファイルに対応するなど、試料検査領域内の所定の長さのフローストリームを照射することを含む。

ある特定の実施形態では、方法は、フローセルノズルオリフィスにおいてまたはその近くでフローストリームを照射することを含む。例えば、方法は、例えば０．００５ｍｍ以上、例えば０．０１ｍｍ以上、例えば０．０５ｍｍ以上、例えば０．１ｍｍ以上、例えば０．５ｍｍ以上、およびノズルオリフィスから１ｍｍ以上を含む、ノズルオリフィスから約０．００１ｍｍ以上の位置でフローストリームを照射することを含んでもよい。ある特定の実施形態では、方法は、フローセルノズルオリフィスに直接隣接するフローストリームを照射することを含む。

感知領域と直列に、光増倍管（または「ＰＭＴ」）などの検出器を使用して、粒子が感知領域を通過し、エネルギー源によって照らされるときに、各粒子を通過する光（ある特定の場合は前方光散乱と呼ばれる）、感知領域を通過する粒子の流れの方向に直交して反射される光（いくつかの場合は直交または側方光散乱と呼ばれる）、および蛍光マーカで標識される場合、粒子から発せられる蛍光光を記録する。順方向光散乱（またはＦＳＣ）、直交光散乱（ＳＳＣ）、および蛍光放射（ＦＬ１、ＦＬ２など）の各々は、各粒子（または各「イベント」）について別々のパラメータを含む。したがって、例えば、２つの異なる蛍光マーカで標識された粒子から２つ、３つ、または４つのパラメータを収集（および記録）することができる。

好適な光検出プロトコルは、これらに限定されないが、他の光検出器の中でも、アクティブピクセルセンサ（ＡＰＳ）、アバランシェフォトダイオード、画像センサ、電荷結合デバイス（ＣＣＤ）、強化電荷結合デバイス（ＩＣＣＤ）、発光ダイオード、フォトンカウンタ、ボロメータ、焦電検出器、光抵抗器、太陽電池、フォトダイオード、光電子増倍管、フォトトランジスタ、量子ドット光伝導体またはフォトダイオード、ならびにこれらの組み合わせなどの光学センサまたは光検出器を含む。ある特定の実施形態では、粒子選別モジュールの試料検査領域で照射されたフローストリームからの光は、電荷結合デバイス（ＣＣＤ）、半導体電荷結合デバイス（ＣＣＤ）、アクティブピクセルセンサ（ＡＰＳ）、相補的金属酸化物半導体（ＣＭＯＳ）画像センサ、またはＮ型金属酸化物半導体（ＮＭＯＳ）画像センサで測定される。ある特定の実施形態では、光は、電荷結合デバイス（ＣＣＤ）で測定される。粒子選別モジュールの試料検査領域における照射されたフローストリームからの光がＣＣＤで測定される場合、ＣＣＤの活性検出表面積は、例えば０．０５ｃｍ^２～９ｃｍ^２、例えば０．１ｃｍ^２～８ｃｍ^２、例えば０．５ｃｍ^２～７ｃｍ^２、および１ｃｍ^２～５ｃｍ^２を含む、例えば０．０１ｃｍ^２～１０ｃｍ^２など変わり得る。

粒子ごとに記録されたデータは、必要に応じて、リアルタイムで分析されるか、またはコンピュータなどのデータ記憶および分析手段に記憶される。米国特許第４，２８４，４１２号は、単一の光源を備えた対象のフローサイトメータの構成および使用について記載し、米国特許第４，７２７，０２０号は、２つの光源を備えたフローサイトメータの構成および使用について記載している。

ある特定の実施形態では、粒子は、必要に応じて、粒子を励起光にさらし、１つ以上の検出チャネル内の各粒子の蛍光を測定することによって検出され、一意に識別される。粒子およびそれに関連付けられた結合複合体を識別するために使用される検出チャネルで発せられる蛍光は、単一の光源での励起後に測定されてもよく、または別個の光源での励起後に個別に測定されてもよい。粒子標識を励起するために個別の励起光源が使用される場合、標識は、すべての標識が使用される励起光源の各々によって励起可能であるように選択され得る。

ある特定の実施形態における方法はまた、コンピュータなどによるデータ取得、分析、および記録を含み、複数のデータチャネルは、各粒子が粒子選別モジュールの試料検査領域を通過する際に各粒子によって放射される光散乱および蛍光について各検出器からデータを記録する。これらの実施形態では、分析は、各粒子がデジタル化されたパラメータ値のセットとして存在するように、粒子を分類し、計数することを含む。主題のシステムは、対象の粒子を背景およびノイズから区別するために、選択されたパラメータ上でトリガするように設定され得る。「トリガ」は、パラメータを検出するための事前設定された閾値を指し、光源を通る粒子の通過を検出するための手段として使用され得る。選択されたパラメータの閾値を超えるイベントの検出は、粒子の光散乱および蛍光データの取得をトリガする。アッセイされる媒体内の粒子または他の成分に関して、閾値未満の応答を引き起こすデータは取得されない。トリガパラメータは、粒子が光ビームを通過することによって引き起こされる前方散乱光の検出であってもよい。次いで、フローサイトメータは、粒子に関する光散乱および蛍光データを検出し、収集する。

次いで、対象の特定の亜集団は、集団全体について収集されたデータに基づいて「ゲーティング」することによってさらに分析される。適切なゲートを選択するために、可能な限り亜集団の最良の分離を取得するために、データがプロットされる。この手順は、順方向光散乱（ＦＳＣ）対側方（すなわち、直交）光散乱（ＳＳＣ）を２次元ドットプロット上にプロットすることによって実行され得る。次いで、粒子の亜集団（すなわち、ゲート内のそれらの細胞）が選択され、ゲート内にない粒子が除外される。望まれる場合、ゲートは、コンピュータ画面上のカーソルを使用して、所望の亜集団の周囲にラインを描画することによって選択され得る。次いで、ゲート内のそれらの粒子のみが、蛍光など、これらの粒子の他のパラメータをプロットすることによってさらに分析される。望まれる場合、上記分析は、試料内の対象の粒子の計数をもたらすように構成され得る。

ある特定の実施形態では、システムは、１つ以上の収集システムが偏向された液滴受容位置、例えばフローサイトメータの選別ブロックの出力と整列されるタイムスロットを決定するように動作する。いくつかの事例では、偏向信号は、初期偏向サブ信号および最終偏向サブ信号を含み、システムは、存在する場合、分析された液滴を偏向させるようにデフレクタを構成する初期偏向サブ信号をタイムスロットの開始時に送信することによって、偏向信号を生成するように動作する。ある特定の場合では、方法は、分析された液滴を偏向させないようにデフレクタを構成する最終偏向サブ信号をタイムスロットの最後に粒子選別モジュールに送信することを含む。いくつかの実施形態では、方法は、単一の分析された液滴がタイムスロット中に偏向された後に、最終偏向サブ信号を粒子選別モジュールに送信することを含み、最終偏向サブ信号は、分析された液滴を偏向させないようにデフレクタを構成する。

例えば、上述のように、選別された対象の粒子、例えば、細胞は、収集システムによって収集される。したがって、方法の態様は、例えば、フローサイトメータの選別ブロックなどの出力と受容関係にあるように、収集システムをフローサイトメータに動作可能に結合することを含み得る。

ある特定の実施形態では、方法は、真空の受信容器を、収集システムの嵌合接続部に動作可能に結合することを含む。真空の受容容器は、試料出力の嵌合接続部の貫通部材が真空の受容容器の表面を貫通した後に嵌合接続部に結合されてもよく、例えば、嵌合接続部の貫通部材は、貫通部材が真空の受容容器に挿入されるように、受容容器の蓋またはキャップを貫通してもよい。真空の受容容器が嵌合接続部に結合された後、フローサイトメトリで選別された試料は、真空の受容容器内の真空によって、真空の受容容器内に出力された試料を通して、収集容器の細胞収集位置から引っ張られ得るか、または引き出され得る。いくつかの場合には、真空の受容容器はシリンジであり、シリンジの針が嵌合接続部の管状部材に挿入された後、シリンジは嵌合接続部に結合され得る。いくつかの場合には、フローサイトメトリで選別された試料は、例えば、シリンジのプランジャを引っ張ることによって作製され得る、真空の受容容器内の真空によって、収集容器の細胞収集位置から試料出力を通って、真空の受容容器内に引っ張られ得るか、または引き出され得る。所与の方法は、必要に応じて、単一の真空の容器のみを嵌合接続部に結合すること、または２つ以上の真空の容器を嵌合端に順次結合することを含んでもよい。

いくつかの場合には、方法は、例えば、流体結合された培地入力を介して液体培地を収集容器内に導入することをさらに含む。液体培地は、例えば、液体細胞試料が選別される前または後、フローサイトメトリで選別された細胞生成物が、収集容器の細胞収集位置に送達される前または後、フローサイトメトリで選別された細胞生成物が細胞収集位置から除去される前または後など、いつでも、収集容器に導入され得る。収集容器に導入するための好適な液体培地としては、これらに限定されないが、上記のような細胞栄養培地、細胞防腐剤培地などがある。導入された液体培地の体積は、５０ｍＬ以下、４０ｍＬ以下、３０ｍＬ以下、２０ｍＬ以下、または１０ｍＬ以下の体積を有し得る。

方法の態様は、フローサイトメトリで選別された試料を含む内部体積を囲む容器を生成することをさらに含み得る。いくつかの場合、方法は、例えば、その中にある量のフローサイトメトリで選別された細胞が存在するＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブなど、フローサイトメトリで選別された試料を含み、隔壁によって密封された開口部を含む内部体積を囲む容器を生成することを含む。ある特定の実施形態では、方法は、その中にある量のフローサイトメトリで選別された細胞が存在するシリンジを生成することを含む。容器は、フローサイトメトリで選別された試料のための無菌環境を提供し得る。容器は、例えば、収集容器からフローサイトメトリで選別された試料の体積を受容した、真空の受容容器であってもよい。いくつかの場合、フローサイトメトリで選別された試料は、無菌で選別された試料、例えば、上述のように、細胞ソータによって生成された選別された試料である。容器は、任意の体積のフローサイトメトリで選別された試料を含み得る。フローサイトメトリで選別された試料の体積は、１０ｍＬ以下、５ｍＬ以下、２ｍＬ以下、または１ｍＬ以下であり得る。サイトメトリで選別された試料は、１０^１１細胞以下、１０^１０細胞以下、１０^９細胞以下、１０^８細胞以下、１０^７細胞以下、１０^６細胞以下、１０^５細胞以下、１０^４細胞以下、１０^３細胞以下、５００細胞以下、１００細胞以下、１０細胞以下、または１ミリリットル当たり１細胞を含むことができる。容器内に存在する試料は、フローサイトメトリで選別された試料であるので、試料は、対象の１つ以上の選別された細胞に加えて、選別プロセスを介して導入される他の成分、例えば、蛍光標識、シース流体成分、細胞栄養培地成分、細胞防腐剤成分などを含んでもよい。

ユーティリティ
本明細書に記載のシステムおよび方法は、生体試料など、流体媒体中の試料内の粒子成分を分析し、選別し、次いで、選別された生成物を、例えば、治療的使用など、後での使用のために保管することが望ましい、様々な用途での使用を見出す。本発明の実施形態は、より純度が高い試料の収集を強化するとともに、研究および高スループット実験室試験におけるなど、分析された試料間の交差汚染の発生率を低減する、粒子選別システムへの増大した無菌性の提供における使用を見出す。

本開示の実施形態は、生物学的試料から調製された細胞が研究、実験室試験、または治療で使用するために望まれ得る用途での使用を見出す。いくつかの実施形態では、主題の方法およびデバイスは、目的の流体または組織生体試料から調製された個々の細胞の取得を促進し得る。例えば、主題の方法およびシステムは、がんなどの疾患の研究または診断標本として使用される流体または組織試料から細胞を取得することを容易にする。同様に、主題の方法およびシステムは、治療で使用される流体または組織試料から細胞を取得することを容易にし得る。本開示の方法およびデバイスは、従来のフローサイトメトリシステムと比較して、効率が向上し、コストが低い生体試料（例えば、臓器、組織、組織断片、流体）から細胞を分離し、収集することを可能にする。

本発明の実施形態は、処理される試料の汚染のリスク、生物学的危険性がある試料が処理されている状況において重要であり得る試料成分へのオペレータの曝露のリスクなどのうちの１つ以上を低減し得る閉鎖された選別デバイスおよび方法を提供する。

本明細書に記載のシステムおよび方法を使用して生成されたフローサイトメトリで選別された試料は、細胞療法プロトコルまたは被検者への無菌容量の生細胞の注入が望まれる任意の用途において、被検者に投与され得る。フローサイトメトリで選別された試料の投与によって治療され得る状態は、これらに限定されないが、血液障害、免疫系障害、臓器損傷などを含む。

したがって、本明細書に記載のシステムおよび方法は、細胞療法プロトコルでの使用を見出すことができる。細胞療法プロトコルは、例えば、細胞および組織を含む生存細胞材料を調製し、治療処置として被検者に導入し得るプロトコルである。典型的な細胞療法プロトコルは、試料収集、細胞単離、遺伝子組み換え、インビトロでの培養および増殖、細胞収穫、試料容量の低減および洗浄、生物保存、保管、ならびに被検者への細胞の導入のステップを含み得る。プロトコルは、被検者のソース組織から生存細胞および組織を収集して、細胞および／または組織の試料を生成することから開始し得る。試料は、例えば、細胞動員剤を被検者に投与すること、被検者から血液を採取すること、被検者から骨髄を除去することなどを含む任意の好適な手順を介して収集され得る。試料を収集した後、細胞濃縮は、例えば、遠心分離ベースの方法、フィルタベースの方法、溶出、磁気分離方法、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）などを含むいくつかの方法を介して生じ得る。いくつかの場合には、濃縮された細胞は、任意の便利な方法、例えば、ヌクレアーゼ媒介遺伝子編集によって遺伝子組み換えされ得る。遺伝子組み換え細胞は、インビトロで培養、活性化、および拡張することができる。いくつかの場合には、細胞は、保持され、例えば、凍結保存され、将来の使用のために保存され、細胞は、解凍され、次いで、患者に投与され、例えば、細胞は、患者内に注入され得る。

キット
本開示の態様は、例えば、上述のように、システムおよびアセンブリの構成要素の任意の組み合わせを含むキットも含む。いくつかの事例では、キットは、１）フローサイトメータの選別ブロックと液滴受容関係に配置されるように構成されている選別チューブを有する収集容器と、２）収集容器の細胞収集位置を、真空の受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合する試料出力とを含む、ａ）アセンブリと、ｂ）例えば、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブまたはシリンジなど、真空の受容容器とを含む。いくつかの事例では、キットは、フローサイトメータの選別ブロックの出口に直接結合され得る少なくとも１つの収集容器を含む。いくつかの事例では、キットは、選別ブロックの出口に結合するための廃棄チューブを含む。ある特定の実施形態では、キットは、選別ブロックに結合されたチューブの開口部を覆うためのチューブキャップまたは蓋を含む。好適な収集容器、選別チューブ、試料出力、嵌合接続部、および真空の受容容器は、上記に詳細に記載されている。キットは、上述した、容器、チューブ、出力、嵌合接続部、および構成要素のいずれかを複数含んでもよい。望まれる場合、キットは、ある用途での使用を見出す１つ以上の追加の構成要素、例えば、試薬、緩衝液などをさらに含んでもよい。キット構成要素のいずれかまたは全部は、必要に応じて、無菌包装中に存在し得る。

上記の構成要素に加えて、主題のキットは、例えば主題の方法を実践するためにキットの構成要素を使用するための命令をさらに含み得る。命令は、好適な記録媒体に記録され得る。例えば、命令は、紙またはプラスチックなどの基板上に印刷され得る。したがって、命令は、キットまたはその構成要素の容器の標識（すなわち、パッケージまたはサブパッケージに関連付けられた）など、パッケージインサートとして、キット内に存在し得る。他の実施形態では、命令は、例えば、ポータブルフラッシュドライブ、ＣＤ－ＲＯＭ、ディスケット、ハードディスクドライブ（ＨＤＤ）など、好適なコンピュータ可読記憶媒体に存在する電子記憶データファイルとして存在する。さらに他の実施形態では、実際の命令は、キット内に存在しないが、例えば、インターネットを介して、リモートソースから命令を取得するための手段が提供される。本実施形態の一例は、命令を閲覧することができる、および／または命令をダウンロードすることができるウェブアドレスを含むキットである。命令と同様に、命令を取得するための手段は、好適な基板上に記録される。

添付の特許請求の範囲にかかわらず、本開示はまた、以下の付記によって定義される。

１．ａ）選別フローサイトメータと、
ｂ）選別フローサイトメータと液滴受容関係にある選別チューブを有する収集容器と、
ｃ）収集容器の細胞収集位置を、受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合する試料出力とを含む、フローサイトメータシステム。
２．収集容器は、剛性壁を含む、付記１に記載のシステム。
３．収集容器は、チューブとして構成されている、付記２に記載のシステム。
４．チューブは、細胞収集位置を画定する円錐形底部を含む、付記３に記載のシステム。
５．収集容器は、可撓性壁を含む、付記１に記載のシステム。

６．収集容器は、バッグとして構成されている、条項５に記載のシステム。
７．選別チューブは、ガイドを含む、付記１～６のいずれか一つに記載のシステム。
８．ガイドは、拡張コーンとして構成されている、付記７に記載のシステム。
９．試料出力は、流体ラインを含む、付記１～８のいずれか一つに記載のシステム。
１０．流体ラインは、管状流体ラインを含む、付記９に記載のシステム。

１１．嵌合接続部は、試料出力に動作可能に接続された貫通部材または管状部材を含む、付記１～１０のいずれか一つに記載のシステム。
１２．システムは、嵌合接続部に動作可能に結合された真空の受容容器をさらに含む、付記１～１１のいずれか一つに記載のシステム。
１３．真空の受信容器は、試料出力を介して収集位置から引き出すために十分な真空を有する、付記１２に記載のシステム。
１４．真空の受容容器は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブである、付記１２または１３に記載のシステム。
１５．真空の受容容器は、シリンジである、付記１２または１３に記載のシステム。

１６．システムは、収集容器に流体結合した培地入力をさらに含む、条項１～１５のいずれか一項に記載のシステム。
１７．システムは、無菌である、付記１～１６のいずれか一つに記載のシステム。
１８．システムは、溶接接続部を含む、付記１～１７のいずれか一つに記載のシステム。

１９．ａ）選別ブロックを有するフローサイトメータと、
ｂ）選別ブロックと液滴受容関係にある選別チューブを有する収集容器と、
ｃ）収集容器の細胞収集位置を、受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合する試料出力とを含むフローサイトメータシステムにて、試料をフローサイトメトリ処理することを含む、方法。
２０．収集容器は、剛性壁を含む、付記１９に記載の方法。
２１．収集容器は、チューブとして構成されている、付記２０に記載の方法。
２２．チューブは、細胞収集位置を画定する円錐形底部を含む、付記２１に記載の方法。
２３．収集容器は、可撓性壁を含む、付記１９に記載の方法。

２４．収集容器は、バッグとして構成されている、付記２３に記載の方法。
２５．選別チューブは、選別ブロックの遠位端にガイドを含む、付記１９～２４のいずれか一つに記載の方法。
２６．ガイドは、拡張コーンとして構成されている、付記２５に記載の方法。
２７．試料出力は、流体ラインを含む、付記１９～２６のいずれか一つに記載の方法。
２８．流体ラインは、管状流体ラインを含む、付記２７に記載の方法。

２９．嵌合接続部は、試料出力に動作可能に接続された貫通部材または管状部材を含む、付記１９～２８のいずれか一つに記載の方法。
３０．方法は、嵌合接続部に、真空の受容容器を動作可能に結合することをさらに含む、付記１９～２９のいずれか一つに記載の方法。
３１．真空の受信容器は、試料出力を介して収集位置から引き出すために十分な真空を有する、条項３０に記載の方法。
３２．真空の受容容器は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブである、付記３０または３１に記載の方法。
３３．真空の受容容器は、シリンジである、付記３０または３１に記載の方法。

３４．真空の受容容器を嵌合接続部から分離することと、第２の真空の受容容器を嵌合接続部に結合することとをさらに含む、付記３０～３３のいずれか一つに記載の方法。
３５．システムは、収集容器に流体結合した培地入力をさらに含む、付記１９～３４のいずれか一つに記載の方法。
３６．方法は、流体結合された培地入力を介して液体培地を収集容器内に導入することをさらに含む、付記３５に記載の方法。
３７．システムは、無菌である、付記１９～３６のいずれか一つに記載の方法。
３８．試料は、血液試料を含む、付記１９～３７のいずれか一つに記載の方法。

３９．血液試料は、全血を含む、付記３８に記載の方法。
４０．血液試料は、非全血生成物を含む、付記３８に記載の方法。
４１．フローサイトメトリ処理することは、試料から１つ以上のタイプの細胞を選別することを含む、付記１９～４０のいずれか一つに記載の方法。
４２．１つ以上のタイプの細胞は、細胞療法の用途に有用な細胞を含む、付記４１に記載の方法。

４３．ａ）フローサイトメータの選別ブロックと液滴受容関係に配置されるように構成されている選別チューブを有する収集容器と、
ｂ）収集容器の細胞収集位置を、受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合する試料出力と
を含む、アセンブリ。
４４．収集容器は、剛性壁を含む、付記４３に記載のアセンブリ。
４５．収集容器は、チューブとして構成されている、付記４４に記載のアセンブリ。
４６．チューブは、細胞収集位置を画定する円錐形底部を含む、付記４５に記載のアセンブリ。
４７．収集容器は、可撓性壁を含む、付記４４に記載のアセンブリ。

４８．収集容器は、バッグとして構成されている、付記４７に記載のアセンブリ。
４９．選別チューブは、選別ブロックの遠位端にガイドを含む、付記４３～４８のいずれか一つに記載のアセンブリ。
５０．ガイドは、拡張コーンとして構成されている、付記４９に記載のアセンブリ。
５１．試料出力は、流体ラインを含む、付記４３～５０のいずれか一つに記載のアセンブリ。
５２．流体ラインは、管状流体ラインを含む、付記５１に記載のアセンブリ。

５３．嵌合接続部は、試料出力に動作可能に接続された貫通部材を含む、付記４３～５２のいずれか一つに記載のアセンブリ。
５４．アセンブリは、収集容器に流体結合した培地入力をさらに含む、付記４３～５３のいずれか一つに記載のアセンブリ。
５５．アセンブリは、無菌である、付記４３～５４のいずれか一つに記載のアセンブリ。
５６．アセンブリは、溶接接続部を含む、付記４３～５５のいずれか一つに記載のアセンブリ。

５７．フローサイトメトリで選別された細胞生成物と、隔壁またはプランジャによって密封された開口部とを含む内部体積を囲む、容器。
５８．フローサイトメトリで選別された細胞生成物は、血液細胞を含む、付記５７に記載の容器。
５９．フローサイトメトリで選別された細胞生成物は、標識細胞を含む、付記５７～５８に記載の容器。
６０．容器は、高分子材料から製造される、付記５７～５９のいずれか一項に記載の容器。
６１．高分子材料は、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン－テレフタル酸塩、ポリスチレン、および衝撃改質ポリスチレンからなる群から選択される、付記６０に記載の容器。

６２．容器は、ガラスから製造される、付記５７～５９のいずれか一つに記載の容器。
６３．容器は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブである、付記５７～６２のいずれか一つに記載の容器。
６４．容器は、シリンジである、付記５７～６２のいずれか一つに記載の容器。

６５．収集容器の細胞収集位置に動作可能に結合するように構成されている第１の端部と、受容容器の嵌合接続部を含む第２の端部とを含む、試料出力流体ライン。
６６．流体ラインは、管状流体ラインである、付記６５に記載の試料出力流体ライン。
６７．嵌合接続部は、試料出力流体ラインに動作可能に接続された貫通部材または管状部材を含む、付記６５または６６に記載の試料出力流体ライン。
６８．容器は、真空の受容容器である、付記６６または６７に記載の試料出力流体ライン。
６９．真空の受容容器は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブである、付記６８に記載の試料出力流体ライン。
７０．真空の受容容器は、シリンジである、付記６８に記載の試料出力流体ライン。

７１．ａ）１）フローサイトメータの選別ブロックと液滴受容関係に配置されるように構成されている選別チューブを有する収集容器、および、
２）収集容器の細胞収集位置を、真空の受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合する試料出力を含むアセンブリと、
ｂ）受容容器と
を含む、キット。
７２．収集容器は、剛性壁を含む、付記７１に記載のキット。
７３．収集容器は、チューブとして構成されている、付記７２に記載のキット。
７４．チューブは、細胞収集位置を画定する円錐形底部を含む、付記７３に記載のキット。
７５．収集容器は、可撓性壁を含む、付記７１に記載のキット。

７６．収集容器は、バッグとして構成されている、付記７５に記載のキット。
７７．選別チューブは、選別ブロックの遠位端にガイドを含む、付記７１～７６のいずれか一つに記載のキット。
７８．ガイドは、拡張コーンとして構成されている、付記７７に記載のキット。
７９．試料出力は、流体ラインを含む、付記７１～７８のいずれか一つに記載のキット。
８０．流体ラインは、管状流体ラインを含む、付記７９に記載のキット。

８１．嵌合接続部は、試料出力に動作可能に接続された貫通部材または管状部材を含む、付記７１～８０のいずれか一つに記載のキット。
８２．アセンブリは、収集容器に流体結合した培地入力をさらに含む、付記７１～８１のいずれか一つに記載のキット。
８３．真空の受容容器は、真空の内部体積と、隔壁によって密封された開口部とを含む、付記７１～８２のいずれか一つに記載のキット。
８４．真空の受容容器は、ＶＡＣＵＴＡＩＮＥＲ（登録商標）採血チューブである、付記８３に記載のキット。
８５．真空の受容容器は、シリンジである、付記７１～８３のいずれか一つに記載のキット。
８６．キットは、無菌である、付記７１～８５のいずれか一つに記載のキット。

上記の発明は、明確な理解のために例示および例としてある程度詳細に説明されているが、添付の特許請求の範囲の趣旨または範囲から逸脱することなく、本発明の教示に照らして、ある特定の変更および修正が行われてもよいことは、当業者には容易に明らかである。

したがって、前述したことは、本発明の原理を例示するにすぎない。当業者であれば、本明細書に明示的に記載または示されていないが、本発明の原理を具現化し、その趣旨および範囲内に含まれる様々な配置を考案することができることが理解される。さらに、本明細書に列挙されるすべての例および条件付き言語は、主に、読者が本発明の原理および当該技術をさらに進めるために発明者が寄与する概念を理解することを助ける点を意図しており、そのような具体的に列挙される例および条件に限定されないと解釈されるべきである。さらに、本発明の原理、態様、および実施形態を列挙する本明細書におけるすべての記述、ならびにその具体例は、その構造的および機能的等価物の両方を包含することが意図される。加えて、そのような等価物は、構造に関係なく、現在知られている等価物と将来開発される等価物の両方、すなわち、同じ機能を実行するように開発された任意の要素を含むことが意図される。さらに、本明細書に開示されるものは、そのような開示が特許請求の範囲において明示的に列挙されるか否かにかかわらず、公衆専用であることが意図されるものではない。

したがって、本発明の範囲は、本明細書に示され、記載される例示的な実施形態に限定されることを意図しない。むしろ、本発明の範囲および趣旨は、添付の特許請求の範囲によって具現化される。特許請求の範囲において、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２（ｆ）または３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２（６）は、特許請求の範囲におけるそのような制限の開始時に正確な語句「のための手段」または正確な語句「のためのステップ」が列挙されるときにのみ、特許請求の範囲における制限のために呼び出されるものとして明示的に定義され、そのような正確な語句が特許請求の範囲における制限で使用されない場合、３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２（ｆ）または３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１２（６）は呼び出されない。

関連出願の相互参照
３５Ｕ．Ｓ．Ｃ．§１１９（ｅ）に従って、本出願は、２０１８年４月２７日に出願された米国仮特許出願第６２／６６３，７９２号の出願日に対する優先権を主張し、その出願の開示が参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (15)

1. ａ）選別フローサイトメータと、
   ｂ）前記選別フローサイトメータと液滴受容関係にある選別チューブと、
   ｃ）前記選別チューブと液滴受容関係にある収集容器と、
   ｄ）前記収集容器の底部の細胞収集位置を、受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合する流体ラインと
   を含む、フローサイトメータシステム。
2. 前記収集容器は、剛性または可撓性の壁を含む、請求項１に記載のシステム。
3. 前記選別チューブは、ガイドを含む、請求項１または２に記載のシステム。
4. 前記嵌合接続部は、前記流体ラインに動作可能に接続された貫通部材または管状部材を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のシステム。
5. 前記システムは、前記嵌合接続部に動作可能に結合された真空の受容容器をさらに含む、請求項１～４のいずれか一項に記載のシステム。
6. 前記真空の受信容器は、前記流体ラインを介して収集位置から引き出すために十分な真空を有する、請求項５に記載のシステム。
7. 前記真空の受容容器は、シリンジである、請求項５または６のいずれか一項に記載のシステム。
8. 前記システムは、前記収集容器に流体結合した培地入力流体ラインをさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のシステム。
9. 前記システムは、無菌である、請求項１～８のいずれか一項に記載のシステム。
10. 請求項１～９のいずれか一項に記載のフローサイトメータシステムで試料をフローサイトメトリ処理することを含む方法。
11. 前記試料は、血液試料を含む、請求項１０に記載の方法。
12. ａ）フローサイトメータの選別ブロックと液滴受容関係にある選別チューブと、
    ｂ）前記選別チューブと液滴受容関係にある収集容器と、
    ｃ）前記収集容器の底部の細胞収集位置を、受容容器の嵌合接続部に動作可能に結合する流体ラインと
    を含む、アセンブリ。
13. 請求項１～９のいずれか一項に記載のフローサイトメータシステムによるフローサイトメトリで選別された細胞生成物と、隔壁またはプランジャによって密封された開口部とを含む内部体積を囲む、容器。
14. 前記選別フローサイトメータは、フローサイトメトリで選別された試料を供給するための静電液滴デフレクタをさらに含む、請求項１に記載のシステム。
15. 前記流体ラインは、前記収集容器内に配置されたチューブを含む、請求項１に記載のシステム。

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