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JP7049137B2 - Evaluation method of risk of developing coronary heart disease using ApoE-contining HDL value - Google Patents

Evaluation method of risk of developing coronary heart disease using ApoE-contining HDL value Download PDF

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JP7049137B2 JP2018037492A JP2018037492A JP7049137B2 JP 7049137 B2 JP7049137 B2 JP 7049137B2 JP 2018037492 A JP2018037492 A JP 2018037492A JP 2018037492 A JP2018037492 A JP 2018037492A JP 7049137 B2 JP7049137 B2 JP 7049137B2
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Description

本発明は、冠動脈心疾患発症リスクの評価方法に関する。 The present invention relates to a method for evaluating the risk of developing coronary heart disease.

高密度リポ蛋白（HDL）は、動脈硬化壁を含めた各組織からコレステロールを受け取るので細胞内に蓄積したコレステロールの除去作用に関係し、抗動脈硬化作用を示すことから冠動脈心疾患（Coronary Heart Disease、以下「CHD」という）をはじめとする各種動脈硬化性心疾患の危険予防因子であり、その血中レベルは将来的なCHD発症リスク予知に有用な指針となることが知られている。 High-density lipoprotein (HDL) receives cholesterol from each tissue including the arteriosclerosis wall and is involved in the removal of cholesterol accumulated in cells. , Hereinafter referred to as "CHD"), and is a risk-preventing factor for various arteriosclerotic heart diseases, and its blood level is known to be a useful guideline for predicting the risk of developing CHD in the future.

HDLはアポタンパクとよばれるタンパク質と、リン脂質、コレステロール、中性脂肪といった脂質成分の複合体であるが、その成分の一つであるアポリポタンパク質Ｅ（ApoE）の含量比率の違いからApoE-containing HDLとApoE deficient HDLの亜分画に分類することが出来る。ApoE-containing HDLは、コレステロール引き抜き能が強く、抗血小板作用もあり、HDLの中でも抗動脈硬化作用が強いリポタンパク亜分画として注目されている。しかしながら過去の臨床例においてApoE-containing HDLの将来的なCHD発症リスク予知を示すエビデンスは確立していない。 HDL is a complex of a protein called apoprotein and lipid components such as phospholipids, cholesterol, and neutral fat. ApoE-containing is due to the difference in the content ratio of apolipoprotein E (ApoE), which is one of the components. It can be classified into HDL and ApoE deficient HDL subfractions. ApoE-containing HDL is attracting attention as a lipoprotein subfraction that has a strong cholesterol-extracting ability, an anti-platelet effect, and a strong anti-arteriosclerosis effect among HDL. However, there is no established evidence for predicting the future risk of developing CHD in ApoE-containing HDL in past clinical cases.

またHDLは密度が1.063～1.210g/mlに分類されるリポ蛋白だが、さらに1.063～1.125g/mlであるHDL2と1.125～1.210g/mlであるHDL3の2つの分画に分類される。HDL2およびHDL3は異なる働きを示すことが知られており、HDL2はHDLの中でも抗動脈硬化作用が強いリポタンパク亜分画として知られている。 HDL is a lipoprotein whose density is classified into 1.063 to 1.210 g / ml, but is further classified into two fractions, HDL2 having a density of 1.063 to 1.125 g / ml and HDL3 having a density of 1.125 to 1.210 g / ml. HDL2 and HDL3 are known to have different functions, and HDL2 is known as a lipoprotein subfraction with a strong anti-arteriosclerosis effect among HDL.

低密度リポ蛋白（LDL）は血液中におけるコレステロールを保持して、肝から外周組織へ運搬する主なキャリアであり、CHDの主な危険因子の１つであるが、LDLの中でも特に粒子サイズが小さく平均的なLDLより高比重な、Small Dense LDL（以下、「sd LDL」という）は動脈硬化惹起性が通常のLDLより高くなることが知られている。sd LDL中コレステロール（以下、「sd LDL-C」という）はCHDリスクのマーカーであることが知られており、sd LDL-C高値の場合将来的なCHD発症リスク（ハザード比）が2-3倍増加する。 Low-density lipoprotein (LDL) is the main carrier that retains cholesterol in the blood and transports it from the liver to the surrounding tissues, and is one of the major risk factors for CHD. Small Dense LDL (hereinafter referred to as "sd LDL"), which is smaller and has a higher specific gravity than average LDL, is known to have a higher arteriosclerosis-inducing property than normal LDL. Cholesterol in sd LDL (hereinafter referred to as "sd LDL-C") is known to be a marker of CHD risk, and if sd LDL-C is high, the risk of developing CHD in the future (hazard ratio) is 2-3. Double.

Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2014; 34, 1069-1077Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2014; 34, 1069-1077 Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2014; 34, 196-201Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2014; 34, 196-201

本発明は、被験体が将来的に冠動脈心疾患（CHD）を発症する危険性の評価方法を提供することを目的とする。 It is an object of the present invention to provide a method for assessing the risk of a subject developing coronary heart disease (CHD) in the future.

本発明者らは鋭意検討した結果、ApoE-containing HDL値を単独で用いた場合、またはApoE-containing HDL値をHDL値、HDL2値、HDL3値等の抗動脈硬化作用を示すマーカーで除して比を算出した場合、または動脈硬化作用を示すsd LDL値をApoE-containing HDL値で除して比を算出した場合、該比を指標として用いることにより、将来的なCHDリスクを単独のマーカーを指標として用いるよりも高い確率で診断できることを見いだした。 As a result of diligent studies, the present inventors have conducted diligent studies and found that the ApoE-containing HDL value was used alone, or the ApoE-containing HDL value was divided by markers showing anti-arteriosclerosis such as HDL value, HDL2 value, and HDL3 value. When the ratio is calculated, or when the sd LDL value indicating arteriosclerosis is divided by the ApoE-containing HDL value to calculate the ratio, the future CHD risk can be used as a single marker by using the ratio as an index. We found that it was possible to make a diagnosis with a higher probability than using it as an index.

また、本発明者らはApoE-containing HDL値を単独で用いるか、またはApoE-containing HDL値とHDL値もしくはHDL2値もしくはHDL3値もしくはsd LDL値の比を用いることにより将来的なCHDリスクを防ぐための治療開始を判断することができることを見いだした。 In addition, the present inventors prevent future CHD risk by using the ApoE-containing HDL value alone or by using the ratio of the ApoE-containing HDL value to the HDL value or the HDL2 value or the HDL3 value or the sd LDL value. We have found that we can determine the start of treatment for.

本発明において、ApoE-containing HDL値、HDL値、sd LDL値、HDL2値、HDL3値の測定のためには、それぞれ、ApoE-containing HDL、HDL、sd LDL、HDL2、HDL3中のコレステロール値または中性脂肪値またはリン脂質値または粒子数またはリポ蛋白重量を求めればよい。 In the present invention, for the measurement of ApoE-containing HDL value, HDL value, sd LDL value, HDL2 value, and HDL3 value, cholesterol level or medium in ApoE-containing HDL, HDL, sd LDL, HDL2, HDL3, respectively. The sex fat value, the phospholipid value, the number of particles, or the weight of lipoprotein may be determined.

本発明者らが、ApoE-containing HDL-C値を、ApoE-containing HDL値の指標の一例として検討したところ、ApoE-containing HDL-C値を単独で用いた場合、ApoE-containing HDL-C値が減少すると将来的なCHDリスクが上昇傾向にあることが分かった。言い換えると、ApoE-containing HDL-C値、すなわちApoE-containing HDL値が増加すると将来的なCHDリスクが減少傾向になることがわかった。 When the present inventors examined the ApoE-containing HDL-C value as an example of an index of the ApoE-containing HDL value, when the ApoE-containing HDL-C value was used alone, the ApoE-containing HDL-C value. It was found that the risk of CHD in the future tends to increase as the number of CHD decreases. In other words, it was found that increasing the ApoE-containing HDL-C value, that is, the ApoE-containing HDL value, tends to decrease the risk of CHD in the future.

一方HDL-CについてもApoE-containing HDL-Cと類似の傾向が認められた（後記の参考例１、図６）。さらにApoE-containing HDL-CとHDL-Cは非常に高い相関性が認められた（後記の参考例２、図７）。このことから一見するとApoE-containing HDL-C、HDL-Cそれぞれを単独で見た場合、これらのマーカーは類似の作用を示し臨床的有用性に大きな差は無いと思われた。 On the other hand, HDL-C also showed a tendency similar to that of ApoE-containing HDL-C (Reference Example 1 and Fig. 6 below). Furthermore, a very high correlation was observed between ApoE-containing HDL-C and HDL-C (Reference Example 2 and FIG. 7 below). From this, at first glance, when ApoE-containing HDL-C and HDL-C were viewed alone, these markers showed similar effects and there was no significant difference in clinical usefulness.

しかしながら、本発明者らはApoE-containing HDL-C値をHDL-C値で除してApoE-containing HDL-C／HDL-Cの比率を求めた場合、この比が減少すると将来的なCHDリスクを示すハザード比がこれらを単独で用いた場合に比べて著明に増加することを見いだした。つまり、後記の参考例２でのApoE-containing HDL-CとHDL-Cの相関解析におけるわずかなバラツキの部分が、CHDリスクを予知するためには重要であり、HDL-C等の従来から知られているマーカーを単独で用いるよりもApoE-containing HDL値を単独で用いるかまたはApoE-containing HDL-C／HDL-C比すなわちApoE-containing HDL／HDL比を用いることにより非常に高い確率でCHDリスクを予知することができる。 However, when the present inventors divide the ApoE-containing HDL-C value by the HDL-C value to obtain the ratio of ApoE-containing HDL-C / HDL-C, if this ratio decreases, the future CHD risk It was found that the hazard ratio indicating the above was significantly increased as compared with the case where these were used alone. In other words, the slight variation in the correlation analysis between ApoE-containing HDL-C and HDL-C in Reference Example 2 below is important for predicting CHD risk, and has been known from the past such as HDL-C. There is a very high probability of CHD by using the ApoE-containing HDL value alone or by using the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio or ApoE-containing HDL / HDL ratio rather than using the markers alone. You can predict the risk.

同様にsd LDL-C値をApoE-containing HDL-C値で除してsd LDL-C／ApoE-containing -C比すなわちsd LDL／ApoE-containing HDL比を求めた場合、sd LDL-C値を単独で用いるよりも非常に高い確率でCHDリスクを予知することができる。 Similarly, when the sd LDL-C value is divided by the ApoE-containing HDL-C value to obtain the sd LDL-C / ApoE-containing -C ratio, that is, the sd LDL / ApoE-containing HDL ratio, the sd LDL-C value is calculated. CHD risk can be predicted with a much higher probability than when used alone.

また、ApoE-containing HDL-C値をHDL2-C値、またはHDL3-C値で除してApoE-containing HDL-C／HDL2-C比すなわちApoE-containing HDL／HDL2比、またはApoE-containing HDL-C／HDL3-C比すなわちApoE-containing HDL／HDL3比を求めた場合、これらのマーカーを単独で用いるよりも非常に高い確率でCHDリスクを予知することができる。 Also, the ApoE-containing HDL-C value divided by the HDL2-C value or the HDL3-C value, the ApoE-containing HDL-C / HDL2-C ratio, that is, the ApoE-containing HDL / HDL2 ratio, or the ApoE-containing HDL- When the C / HDL3-C ratio, that is, the ApoE-containing HDL / HDL3 ratio, is determined, the CHD risk can be predicted with a much higher probability than when these markers are used alone.

なお、本明細書においてApoE-containing HDL、HDL、HDL2、HDL3、sd LDLとは、それぞれApoE-containing HDL値、HDL値、HDL2値、HDL3値、sd LDL値を、ApoE-containing HDL１-C、HDL-C、HDL2-C、HDL3-C、sd LDL-Cとは、それぞれApoE-containing HDL-C値、HDL-C値、HDL2-C値、HDL3-C値、sd LDL-C値を示す場合がある。前記のコレステロール（-C）同様に中性脂肪（-TG）、リン脂質（-PL）についての表記もそれぞれの値のことを示す場合がある。 In the present specification, ApoE-containing HDL, HDL, HDL2, HDL3, and sd LDL refer to ApoE-containing HDL value, HDL value, HDL2 value, HDL3 value, and sd LDL value as ApoE-containing HDL1-C, respectively. HDL-C, HDL2-C, HDL3-C, and sd LDL-C indicate ApoE-containing HDL-C value, HDL-C value, HDL2-C value, HDL3-C value, and sd LDL-C value, respectively. In some cases. Similar to the above-mentioned cholesterol (-C), the notation for triglyceride (-TG) and phospholipid (-PL) may also indicate the respective values.

上記の知見より、本発明を完成させるに至った。 From the above findings, the present invention has been completed.

本発明は具体的には以下の方法およびキットを提供する。
[１] 被験体から採取した被検試料中の
(i) ApoE-containing HDLの値、
(ii) ApoE-containing HDLのHDLに対する比率、
(iii) Small dense LDL のApoE-containing HDLに対する比率、
(iv) ApoE-containing HDLのHDL2に対する比率、
(v) ApoE-containing HDLのHDL3に対する比率
の少なくとも１つを測定することを含み、
被検試料中のApoE-containing HDLの減少、
ApoE-containing HDLのHDLに対する比率の減少、
Small Dense LDLのApoE-containing HDLに対する比率の増加、
ApoE-containing HDLのHDL2に対する比率の減少、または
ApoE-containing HDLのHDL3に対する比率の減少が、前記被験体の将来的な冠動脈心疾患リスクの増加を示すと判断される、冠動脈心疾患リスクを判断する方法。
[２] 前記ApoE-containing HDLの定量がApoE-containing HDL中コレステロール（ApoE-containing HDL-C）またはApoE-containing HDL中中性脂肪（ApoE-containing HDL-TG）またはApoE-containing HDL中リン脂質（ApoE-containing HDL-PL）またはApoE-containing HDL粒子数（ApoE-containing HDL-N）、またはApoE-containing HDL粒子重量を測定することにより行われることを特徴とする[１]の方法。
[３] 前記HDLの定量がHDL中コレステロール(HDL-C)またはHDL中中性脂肪（HDL-TG）またはHDL中リン脂質（HDL-PL）またはHDL粒子数（HDL-N）またはHDL粒子重量を測定することにより行われる、[１]の方法。
[４] 前記Small Dense LDLの定量がSmall Dense LDL中コレステロール(Small Dense LDL-C) またはsd LDL中中性脂肪(Small Dense LDL-TG)またはsd LDL中リン脂質(Small Dense LDL-PL)またはsd LDL粒子数(Small Dense LDL-N)、またはsd LDL粒子重量を測定することにより行われる、[１]の方法。
[５] 前記HDL2の定量がHDL2中コレステロール(HDL2-C)またはHDL2中中性脂肪(HDL2-TG)またはHDL2中リン脂質(HDL2-PL)またはHDL2粒子数(HDL2-N)またはHDL2粒子重量を測定することにより行われる、[１]の方法。
[６] 前記HDL3の定量がHDL3中コレステロール(HDL3-C)またはHDL3中中性脂肪(HDL3-TG)またはHDL3中リン脂質(HDL3-PL)またはHDL3粒子数(HDL3-N)またはHDL3粒子重量を測定することにより行われる、[１]の方法。
[７] 前記ApoE-containing HDL中コレステロールとHDL中コレステロールとの比率が10.0％未満の時に被験体の将来的な冠動脈心疾患リスクがあると判断される、[１]から[３]のいずれかに記載の方法。
[８] 前記Small Dense LDL中コレステロールとApoE-containing HDL中コレステロールとの比率が4.7％以上の時に被験体の将来的な冠動脈心疾患リスクがあると判断される、[１]、[２]又は[４]に記載の方法。
[９] 前記ApoE-containing HDL中コレステロールとHDL2中コレステロールとの比率が14.1％未満の時に被験体の将来的な冠動脈心疾患リスクがあると判断される、[１]、[２]又は[５]に記載の方法。
[１０] 前記ApoE-containing HDL中コレステロールとHDL3中コレステロールとの比率が18.8％未満の時に被験体の将来的な冠動脈心疾患リスクがあると判断される、[１]、[２]又は[６]に記載の方法。
[１１] ApoE-containing HDL中コレステロール、HDL中コレステロール、Small Dense LDL中コレステロール、HDL2中コレステロール、HDL3中コレステロールの測定用試薬を含む冠動脈心疾患リスクを判断するための測定用キット。 Specifically, the present invention provides the following methods and kits.
[1] In the test sample collected from the subject
(i) ApoE-containing HDL value,
(ii) Ratio of ApoE-containing HDL to HDL,
(iii) Ratio of Small dense LDL to ApoE-containing HDL,
(iv) Ratio of ApoE-containing HDL to HDL2,
(v) involves measuring at least one of the ratios of ApoE-containing HDL to HDL3.
Decrease in ApoE-containing HDL in test sample,
Decreased ratio of ApoE-containing HDL to HDL,
Increased ratio of Small Dense LDL to ApoE-containing HDL,
Decreased ratio of ApoE-containing HDL to HDL2, or
A method for determining the risk of coronary heart disease, wherein a decrease in the ratio of ApoE-containing HDL to HDL3 is determined to indicate an increased risk of future coronary heart disease of the subject.
[2] The quantification of ApoE-containing HDL is cholesterol in ApoE-containing HDL (ApoE-containing HDL-C) or ApoE-containing HDL neutral fat (ApoE-containing HDL-TG) or phospholipid in ApoE-containing HDL. (ApoE-containing HDL-PL) or ApoE-containing HDL particle count (ApoE-containing HDL-N), or ApoE-containing HDL particle weight.
[3] The quantification of HDL is cholesterol in HDL (HDL-C) or neutral fat in HDL (HDL-TG) or phospholipid in HDL (HDL-PL) or the number of HDL particles (HDL-N) or HDL particle weight. The method of [1], which is carried out by measuring.
[4] The quantification of Small Dense LDL is Cholesterol in Small Dense LDL (Small Dense LDL-C) or sd LDL Neutral Fat (Small Dense LDL-TG) or Sd LDL Lymphlipid (Small Dense LDL-PL) or The method of [1], which is carried out by measuring the number of sd LDL particles (Small Dense LDL-N) or the weight of sd LDL particles.
[5] The quantification of HDL2 is cholesterol in HDL2 (HDL2-C) or triglyceride in HDL2 (HDL2-TG) or phospholipid in HDL2 (HDL2-PL) or the number of HDL2 particles (HDL2-N) or HDL2 particle weight. The method of [1], which is carried out by measuring.
[6] The quantification of HDL3 is cholesterol in HDL3 (HDL3-C) or triglyceride in HDL3 (HDL3-TG) or phospholipid in HDL3 (HDL3-PL) or number of HDL3 particles (HDL3-N) or HDL3 particle weight. The method of [1], which is carried out by measuring.
[7] Any of [1] to [3], in which the subject is judged to be at risk of future coronary heart disease when the ratio of cholesterol in HDL to ApoE-containing cholesterol is less than 10.0%. The method described in.
[8] When the ratio of cholesterol in Small Dense LDL to cholesterol in ApoE-containing HDL is 4.7% or more, it is judged that the subject is at risk of future coronary heart disease, [1], [2] or. The method according to [4].
[9] When the ratio of cholesterol in ApoE-containing HDL to cholesterol in HDL2 is less than 14.1%, it is judged that the subject is at risk of future coronary heart disease, [1], [2] or [5]. ] The method described in.
[10] When the ratio of cholesterol in ApoE-containing HDL to cholesterol in HDL3 is less than 18.8%, it is judged that the subject is at risk of future coronary heart disease, [1], [2] or [6]. ] The method described in.
[11] ApoE-containing A measurement kit for determining the risk of coronary heart disease, which comprises a reagent for measuring cholesterol in HDL, cholesterol in HDL, cholesterol in Small Dense LDL, cholesterol in HDL2, and cholesterol in HDL3.

ApoE-containing HDL-C値、またはApoE-containing HDL-CのHDL-Cに対する比率、またはSmall Dense LDL-CのApoE-containing HDL-Cに対する比率、またはApoE-containing HDL-CのHDL2-Cに対する比率、またはApoE-containing HDL-CのHDL3-Cに対する比率はCHDリスクと大きく関連しており、これらの値または比を指標として用いる本発明の方法により、将来的にCHDを発症する危険性を判断し、適切な処置を生ずることができる。 ApoE-containing HDL-C value, or ApoE-containing HDL-C to HDL-C, or Small Dense LDL-C to ApoE-containing HDL-C, or ApoE-containing HDL-C to HDL2-C. The ratio, or the ratio of ApoE-containing HDL-C to HDL3-C, is highly associated with CHD risk, and the method of the invention using these values or ratios as an indicator indicates the risk of developing CHD in the future. Judgment can be made and appropriate measures can be taken.

実施例１におけるApoE-containing HDL-C値とCHDリスクとの関連性を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the ApoE-containing HDL-C value and CHD risk in Example 1. FIG. 実施例２におけるApoE-containing HDL-C／HDL-C比とCHDリスクとの関連性を示す図である。It is a figure which shows the relationship between ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio and CHD risk in Example 2. FIG. 実施例３におけるsd LDL-C／ApoE-containing HDL-C比とCHDリスクとの関連性を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the sd LDL-C / ApoE-containing HDL-C ratio in Example 3 and CHD risk. 実施例４におけるApoE-containing HDL-C／HDL2-C比とCHDリスクとの関連性を示す図である。It is a figure which shows the relationship between ApoE-containing HDL-C / HDL2-C ratio and CHD risk in Example 4. FIG. 実施例５におけるApoE-containing HDL-C／HDL3-C比とCHDリスクとの関連性を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the ApoE-containing HDL-C / HDL3-C ratio and CHD risk in Example 5. 参考例１におけるHDL-C値とCHDリスクとの関連性を示す図である。It is a figure which shows the relationship between the HDL-C value and CHD risk in Reference Example 1. 参考例２におけるApoE-containing HDL-C値とHDL-C値との相関性を示す図である。It is a figure which shows the correlation between the ApoE-containing HDL-C value and the HDL-C value in Reference Example 2.

以下、本発明を詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.

本発明は、冠動脈心疾患リスクを判断する方法である。冠動脈心疾患（CHD）とは、粥状（じゅくじょう）動脈硬化（アテローム硬化とも呼ぶ）により冠動脈の狭窄や閉塞を起こし、心筋の虚血、酸素不足や壊死を引き起こして発症する心疾患をいい、冠動脈硬化性疾患ともいい、冠動脈が狭窄している疾患（Coronary Artery Disease：CAD）、心筋梗塞、狭心症等を含む。本発明の方法により、CAD、心筋梗塞、狭心症等の心血管イベントを発症するリスクを判断、評価することができる。また、本発明の方法は、冠動脈心疾患リスクを判断するための補助的データを取得する方法である。 The present invention is a method for determining the risk of coronary heart disease. Coronary heart disease (CHD) is a heart disease that occurs when coronary arteries are narrowed or occluded due to porphyritic arteriosclerosis (also called atherosclerosis), causing ischemia of the myocardium, oxygen deficiency, or necrosis. , Also referred to as coronary artery disease, including coronary artery disease (CAD), myocardial infarction, angina, etc. According to the method of the present invention, the risk of developing cardiovascular events such as CAD, myocardial infarction, and angina can be determined and evaluated. In addition, the method of the present invention is a method for acquiring auxiliary data for determining the risk of coronary heart disease.

本発明において、ApoE-containing HDL、HDL、sd LDL (Small Dense LDL)、HDL2、HDL3の測定のためには、それぞれ、ApoE-containing HDL、HDL、sd LDL、HDL2、HDL3中のコレステロール値または中性脂肪値またはリン脂質値または粒子数またはリポ蛋白重量を求めればよい。この方法は、被検体のリポ蛋白濃度を反映している。 In the present invention, for the measurement of ApoE-containing HDL, HDL, sd LDL (Small Dense LDL), HDL2, HDL3, the cholesterol level or medium in ApoE-containing HDL, HDL, sd LDL, HDL2, HDL3, respectively. The sex fat value, the phospholipid value, the number of particles, or the weight of lipoprotein may be determined. This method reflects the lipoprotein concentration of the subject.

本発明の方法において、
(i) ApoE-containing HDLの値、
(ii) ApoE-containing HDLのHDLに対する比率、
(iii) sd LDLのApoE-containing HDL に対する比率、
(iv) ApoE-containing HDLのHDL2に対する比率、
(v) ApoE-containing HDLのHDL3に対する比率
の少なくとも１つをCHDリスクの判断等の指標として用いる。従って、被験体から採取した被検試料中のリポ蛋白におけるコレステロール値または中性脂肪値またはリン脂質値または粒子数またはリポ蛋白重量を測定する必要がある。本発明の方法で用いる被検試料は、血液、血清または血しょうである。ここで、例えば、ApoE-containing HDL-CのHDL-Cに対する比率という場合、被検試料中のApoE-containing HDL-C濃度のHDL-C濃度に対する比率をいう。 In the method of the present invention
(i) ApoE-containing HDL value,
(ii) Ratio of ApoE-containing HDL to HDL,
(iii) Ratio of sd LDL to ApoE-containing HDL,
(iv) Ratio of ApoE-containing HDL to HDL2,
(v) At least one of the ratios of ApoE-containing HDL to HDL3 is used as an index for determining CHD risk. Therefore, it is necessary to measure the cholesterol level, triglyceride level, phospholipid level, particle number, or lipoprotein weight in the lipoprotein in the test sample collected from the subject. The test sample used in the method of the present invention is blood, serum or plasma. Here, for example, the ratio of ApoE-containing HDL-C to HDL-C means the ratio of the ApoE-containing HDL-C concentration in the test sample to the HDL-C concentration.

ApoE-containing HDLの測定法としてはApoE-containing HDLを含めて全HDLを測定できる13％PEG沈殿法とApoE-containing HDLを含まないHDL（ApoE-deficient HDL）測定法であるPT-DS-Mg沈殿法の差を用いる方法を好適に用いることが出来る。HDL粒子を2種類の沈殿法により分離した後、コレステロール、または中性脂肪またはリン脂質を定量し、その差を求めることによりApoE-containing HDL-CまたはApoE-containing HDL-TGまたはApoE-containing HDL-PLを測定する事が出来る。また2種類の沈殿法により全HDL とApoE-deficient HDL を分離した後、NMR法によりそれぞれの粒子数を計測し、その差を求めることによりApoE-containing HDL-Nを測定する事が出来る。また13%PEG沈殿法による分離の後、抗ApoE抗体を用いて抗原抗体反応により生ずる濁度を測定することによりApoE-containing HDL粒子重量を測定することが出来る。さらに被検試料中のApoE-containing HDL-Cを全自動により測定出来る方法などがあり、これらに好適に用いることができる。ApoE-containing HDL-Cの全自動による測定は、特許第5813284号公報、特開2013-215169号公報等の記載に従って行うことができる。 ApoE-containing HDL can be measured by the 13% PEG precipitation method, which can measure all HDL including ApoE-containing HDL, and PT-DS-Mg, which is an HDL (ApoE-deficient HDL) measurement method that does not contain ApoE-containing HDL. A method using the difference in the precipitation method can be preferably used. After separating HDL particles by two types of precipitation methods, cholesterol, triglyceride or phospholipids are quantified, and the difference is determined to determine the difference between ApoE-containing HDL-C or ApoE-containing HDL-TG or ApoE-containing HDL. -PL can be measured. In addition, after separating all HDL and ApoE-deficient HDL by two types of precipitation methods, the number of each particle is measured by the NMR method, and the difference can be calculated to measure ApoE-containing HDL-N. In addition, the weight of ApoE-containing HDL particles can be measured by measuring the turbidity generated by the antigen-antibody reaction using an anti-ApoE antibody after separation by the 13% PEG precipitation method. Further, there is a method in which ApoE-containing HDL-C in the test sample can be measured fully automatically, and it can be suitably used for these methods. The fully automated measurement of ApoE-containing HDL-C can be performed in accordance with the descriptions in Japanese Patent No. 5813284, Japanese Patent Application Laid-Open No. 2013-215169 and the like.

HDLの測定法として、超遠心分離によりHDLを分離し、分離後のコレステロール、中性脂肪、リン脂質を定量する方法、またはリンタングステン酸－マグネシウムやデキストラン硫酸－マグネシウム、ヘパリン－カルシウムを沈殿剤としてHDL以外のリポ蛋白を凝集沈殿させ、上清中のコレステロール、中性脂肪、リン脂質を定量する方法があり、これらの方法によりHDL-CまたはHDL-TGまたはHDL-PLを測定する事が出来る。またNMR法を用いることによりHDL-N（粒子数）を測定する事が出来る。また抗ApoA1抗体を抗原抗体反応により生ずる濁度を測定することによりHDL粒子重量を測定することが出来る。さらに分離操作無しで全自動によりHDL-Cを定量する方法があり、これらを好適に用いることができる。HDL-Cの全自動による測定は、特開平7-301636号公報、特開平8-131197号公報、特開平8-201393号公報、WO98/26090等の記載に従って行うことができる。 As a method for measuring HDL, HDL is separated by ultracentrifugation and the separated cholesterol, neutral fat, and phospholipids are quantified, or phosphotungstate-magnesium, dextran sulfate-magnesium, and heparin-calcium are used as precipitants. There are methods for coagulating and precipitating lipoproteins other than HDL to quantify cholesterol, neutral fat, and phospholipids in the supernatant, and these methods can measure HDL-C, HDL-TG, or HDL-PL. .. In addition, HDL-N (number of particles) can be measured by using the NMR method. In addition, the weight of HDL particles can be measured by measuring the turbidity of the anti-ApoA1 antibody caused by the antigen-antibody reaction. Further, there is a method of quantifying HDL-C by full automation without a separation operation, and these can be preferably used. Fully automated measurement of HDL-C can be performed according to the description in JP-A-7-301636, JP-A-8-131197, JP-A-8-201393, WO98 / 26090 and the like.

sd LDLの測定法として、超遠心法、電気泳動法、高速液体クロマトグラフィーを用いる方法などがある。超遠心法では密度の差を利用して小粒子LDLを分離し、分離後のコレステロール、中性脂肪、リン脂質を定量することによりsd LDL-C、sd LDL-TG、sd LDL-PLを定量する。超遠心分離後に抗ApoB抗体を用いて抗原抗体反応により生ずる濁度を測定することによりsd LDL粒子重量を測定することが出来る。またNMR法を用いることによりsd LDL-N（粒子数）を測定する事が出来る。超遠心法によるsd LDLの測定は、Atherosclerosis, 1993; 98, 33-49、Atherosclerosis, 1994; 106, 241-253等の記載に従って行うことができる。 Methods for measuring sd LDL include ultracentrifugation, electrophoresis, and high performance liquid chromatography. In the ultracentrifugation method, small particles of LDL are separated using the difference in density, and sd LDL-C, sd LDL-TG, and sd LDL-PL are quantified by quantifying cholesterol, triglyceride, and phospholipid after separation. do. The sd LDL particle weight can be measured by measuring the turbidity generated by the antigen-antibody reaction using an anti-ApoB antibody after ultracentrifugation. In addition, sd LDL-N (number of particles) can be measured by using the NMR method. Measurement of sd LDL by ultracentrifugation can be performed according to the description of Atherosclerosis, 1993; 98, 33-49, Atherosclerosis, 1994; 106, 241-253 and the like.

電気泳動法はポリアクリルアミドゲルを用いてLDLの移動度や粒子直径を測る方法であり、さらに、アガロース電気泳動において泳動後のゲルを脂質染色し、その染色パターンをコンピューター解析しリポ蛋白を定量する方法がある。電気泳動法によるsd LDLの測定は、JAMA, 1998; 260, 1917-1921、特開2000-356641号公報等の記載に従って行うことができる。 Electrophoresis is a method of measuring the mobility and particle diameter of LDL using polyacrylamide gel. Furthermore, in agarose gel electrophoresis, the gel after electrophoresis is lipid-stained, and the staining pattern is analyzed by computer to quantify lipoproteins. There is a way. The measurement of sd LDL by electrophoresis can be performed according to the description in JAMA, 1998; 260, 1917-1921, JP-A-2000-356641 and the like.

また小粒子LDLの定量法としていくつかの簡便な方法があるが、これらを好適に用いることができる。例えば、臨床病理, 2004; 25, 406-413、特許4476814号公報、米国特許第8030081号明細書、米国特許第8440419号明細書等の記載に従って行うことができる。 Further, there are some simple methods for quantifying small particle LDL, and these can be preferably used. For example, clinical pathology, 2004; 25, 406-413, Japanese Patent No. 4476814, US Pat. No. 8030081, US Pat. No. 8440419, etc. can be described.

HDL3の測定法として、超遠心法、電気泳動法、高速液体クロマトグラフィーを用いる方法などがある。超遠心法では密度の差を利用して密度が1.125＜d＜1.210のHDL3分画を分離し、上清中のコレステロール、中性脂肪、リン脂質を定量することによりHDL3-CまたはHDL3-TGまたはHDL3-PLを測定する。分離後のHDL3分画に抗ApoA1抗体を用いて抗原抗体反応により生ずる濁度を測定することによりHDL3粒子重量を測定することが出来る。またNMR法を用いることによりHDL3-N（粒子数）を測定する事が出来る。さらに被検試料中のHDL3-Cを全自動により測定出来る方法などがあり、これらに好適に用いることができる。全自動によるHDL3-Cの測定は、Clinica Chimica Acta,2014;427, 86-93、特許5969978号公報等の記載に従って行うことができる。 Methods for measuring HDL3 include ultracentrifugation, electrophoresis, and high performance liquid chromatography. In the ultracentrifugation method, the difference in density is used to separate the HDL3 fraction with a density of 1.125 <d <1.210, and cholesterol, triglyceride, and phospholipids in the supernatant are quantified to determine HDL3-C or HDL3-TG. Or measure HDL3-PL. The HDL3 particle weight can be measured by measuring the turbidity generated by the antigen-antibody reaction using an anti-ApoA1 antibody in the HDL3 fraction after separation. In addition, HDL3-N (number of particles) can be measured by using the NMR method. Further, there is a method in which HDL3-C in the test sample can be measured fully automatically, and these can be suitably used. Fully automated measurement of HDL3-C can be performed according to the description in Clinica Chimica Acta, 2014; 427, 86-93, Japanese Patent No. 5969978, etc.

HDL2の測定法として、超遠心法、電気泳動法、高速液体クロマトグラフィーを用いる方法などがある。超遠心法では密度の差を利用して密度が1.063＜d＜1.125のHDL2分画を分離し、上清中のコレステロール、中性脂肪、リン脂質を定量することによりHDL2-CまたはHDL2-TGまたはHDL2-PLを測定する。分離後のHDL2分画に抗ApoA1抗体を用いて抗原抗体反応により生ずる濁度を測定することによりHDL2粒子重量を測定することが出来る。またNMR法を用いることによりHDL2-N（粒子数）を測定する事が出来る。さらに被検試料中のHDL2-Cを全自動により測定出来る方法などがあり、これらに好適に用いることができる。全自動によるHDL2-Cの測定は、WO2012/118017等の記載に従って行うことができる。また上述のHDL測定法によって得られる値よりHDL3測定法によって得られる値を差し引くことによりHDL2値を算出することが出来る。 Methods for measuring HDL2 include ultracentrifugation, electrophoresis, and high performance liquid chromatography. In the ultracentrifugation method, the difference in density is used to separate the HDL2 fraction with a density of 1.063 <d <1.125, and cholesterol, triglyceride, and phospholipids in the supernatant are quantified to determine HDL2-C or HDL2-TG. Or measure HDL2-PL. The HDL2 particle weight can be measured by measuring the turbidity generated by the antigen-antibody reaction using an anti-ApoA1 antibody in the HDL2 fraction after separation. In addition, HDL2-N (number of particles) can be measured by using the NMR method. Further, there is a method in which HDL2-C in the test sample can be measured fully automatically, and these can be suitably used. Fully automated measurement of HDL2-C can be performed according to the description in WO2012 / 118017 and the like. Further, the HDL2 value can be calculated by subtracting the value obtained by the HDL3 measurement method from the value obtained by the above-mentioned HDL measurement method.

本発明の方法は、冠動脈心疾患、すなわちCHDの発症リスクを判断する方法であるため、CHDの定義に含まれる冠動脈が狭窄している疾患（Coronary Artery Disease：CAD）や心筋梗塞、狭心症などの心血管イベントを発症するリスクも判定、評価することができる。本発明の方法により、将来的なCHD発生のリスクの程度例えば確率が低い、中程度または高いと判断することが出来る。また、測定値と心筋梗塞、狭心症などの心疾患イベントが発生する頻度を関連付けることにより、確率を数値で示すことも可能である。また、実際に心筋梗塞や不安定狭心症等の心血管イベントが発生している被験者を診断または検出することも可能である。 Since the method of the present invention is a method for determining the risk of developing coronary heart disease, that is, CHD, a disease in which the coronary artery is narrowed (Coronary Artery Disease (CAD)), myocardial infarction, or angina, which is included in the definition of CHD. The risk of developing cardiovascular events such as these can also be determined and evaluated. According to the method of the present invention, it can be determined that the degree of risk of future CHD occurrence is low, medium or high, for example, the probability is low. It is also possible to indicate the probability numerically by associating the measured value with the frequency of occurrence of heart disease events such as myocardial infarction and angina. It is also possible to diagnose or detect a subject who actually has a cardiovascular event such as myocardial infarction or unstable angina.

ApoE-containing HDL単独の値が健常人よりも減少している場合、
ApoE-containing HDL／HDL比が健常人よりも減少している場合、
ApoE-containing HDL／HDL2比が健常人よりも減少している場合、
ApoE-containing HDL／HDL3比が健常人よりも減少している場合、または
sd LDL／ApoE-containing HDL比が健常人よりも増加している場合、に将来冠動脈心疾患、すなわちCHDを引き起こす確率が高いと判断することができる。 If the value of ApoE-containing HDL alone is lower than that of a healthy person,
If the ApoE-containing HDL / HDL ratio is lower than in healthy individuals
If the ApoE-containing HDL / HDL2 ratio is lower than in healthy individuals
If the ApoE-containing HDL / HDL3 ratio is lower than in healthy individuals, or
When the sd LDL / ApoE-containing HDL ratio is higher than that of healthy subjects, it can be judged that there is a high probability of causing coronary heart disease, that is, CHD in the future.

言い換えれば、
ApoE-containing HDL単独の値が健常人よりも増加している場合、
ApoE-containing HDL／HDL比が健常人よりも増加している場合、
ApoE-containing HDL／HDL2比が健常人よりも増加している場合、
ApoE-containing HDL／HDL3比が健常人よりも増加している場合、または
sd LDL／ApoE-containing HDL比が健常人よりも減少している場合に将来CHDを引き起こす確率が低いと判断することができる。 In other words,
If the value of ApoE-containing HDL alone is higher than in healthy subjects,
If the ApoE-containing HDL / HDL ratio is higher than in healthy individuals
If the ApoE-containing HDL / HDL2 ratio is higher than in healthy individuals
If the ApoE-containing HDL / HDL3 ratio is higher than in healthy individuals, or
When the sd LDL / ApoE-containing HDL ratio is lower than that of healthy subjects, it can be judged that the probability of causing CHD in the future is low.

例えば、健常人のApoE-containing HDL-C/HDL-C比が10.0％以上の場合を基準としCHDを引き起こすリスクを1とした場合に、ApoE-containing HDL-C/HDL-C比が9.3-9.9％、8.6-9.2％、8.6％未満と低くなるに従ってCHDリスクがそれぞれ3.26倍、3.76倍、3.89倍と上昇し、将来的にCHDを発症する危険性が高まると判断することができる。 For example, if the risk of causing CHD is 1 based on the case where the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio of a healthy person is 10.0% or more, the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio is 9.3-. As it decreases to 9.9%, 8.6-9.2%, and less than 8.6%, the CHD risk increases 3.26 times, 3.76 times, and 3.89 times, respectively, and it can be judged that the risk of developing CHD in the future increases.

加えて、ApoE-containing HDL-C／HDL-C比には特定の診断基準値を設定することができる。例えば、ApoE-containing HDL-C／HDL-C比が10.0％より低下する場合は将来のCHDリスクが高まると判断される。そのように、判断された場合、運動療法、食事療法、薬剤療法によりこれらを予防することができる。 In addition, specific diagnostic criteria can be set for the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio. For example, if the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio is lower than 10.0%, it is judged that the risk of CHD in the future will increase. As such, if determined, exercise therapy, diet therapy, drug therapy can prevent these.

同様にsd LDL-CとApoE-containing HDL-Cとの比率が健常人よりも増加している場合に将来CHDを引き起こす確率が高いと判断することができる。例えば、健常人のsd LDL-C／ApoE-containing HDL-C比が4.7％未満の場合を基準としCHDリスクを1とした場合に、sd LDL-C／ApoE-containing HDL-C比が4.7-8.6％、8.7-12.6％、12.7％以上と高くなるに従ってCHDリスクがそれぞれ3.57倍、3.89倍、4.10倍と上昇し、将来的にCHDを発症する危険性が高まると判断することができる。また、sd LDL-C/ApoE-containing HDL-C比にも特定の診断基準値を設定することができ、4.7％以上に増加する場合は将来のCHDリスクが高まると判断される。そのように判断された場合は、上述の治療によりこれらを予防することができる。 Similarly, when the ratio of sd LDL-C to ApoE-containing HDL-C is higher than that of healthy subjects, it can be judged that the probability of causing CHD in the future is high. For example, if the CHD risk is 1 based on the case where the sd LDL-C / ApoE-containing HDL-C ratio of a healthy person is less than 4.7%, the sd LDL-C / ApoE-containing HDL-C ratio is 4.7-. As it increases to 8.6%, 8.7-12.6%, and 12.7% or more, the CHD risk increases 3.57 times, 3.89 times, and 4.10 times, respectively, and it can be judged that the risk of developing CHD in the future increases. In addition, a specific diagnostic reference value can be set for the sd LDL-C / ApoE-containing HDL-C ratio, and if it increases to 4.7% or more, it is judged that the future CHD risk will increase. If so, the treatments described above can prevent them.

ApoE-containing HDL-Cの値を単独で用いた場合も、ApoE-containing HDL-C値が健常人よりも減少している場合に将来CHDを引き起こす確率が高いと判断することができる。 Even when the ApoE-containing HDL-C value is used alone, it can be judged that the probability of causing CHD in the future is high when the ApoE-containing HDL-C value is lower than that of a healthy person.

尚、上記記載において、ApoE-containing HDL-Cの定量値、ApoE-containing HDL-CとHDL-Cとの比率、またはsd LDL-CとApoE-containing HDL-Cとの比率、またはApoE-containing HDL-CとHDL2-Cとの比率、またはApoE-containing HDL-CとHDL3-Cとの比率に関する数値は、一例であり、上記値には限定されない。 In the above description, the quantitative value of ApoE-containing HDL-C, the ratio of ApoE-containing HDL-C to HDL-C, or the ratio of sd LDL-C to ApoE-containing HDL-C, or ApoE-containing. The numerical values relating to the ratio of HDL-C to HDL2-C or the ratio of ApoE-containing HDL-C to HDL3-C are examples and are not limited to the above values.

本発明を以下の実施例によって具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。 The present invention will be specifically described with reference to the following examples, but the present invention is not limited to these examples.

［実施例１］
中国における冠動脈心疾患（CHD）に関する危険因子のコホート試験の保存検体を用いて、ApoE-containing HDL-Cとの関連性を評価した。具体的には、ベースラインの採血時にCHD、糖尿病を発症していない5,417例を対象として、上記項目を測定した。そして、コホート研究の被験者を６．４５年間追跡した結果より、その間のCHD発症を調査し、測定項目との関連性を検証した。 [Example 1]
We evaluated the association with ApoE-containing HDL-C using preserved specimens from a cohort of risk factors for coronary heart disease (CHD) in China. Specifically, the above items were measured for 5,417 patients who did not develop CHD or diabetes at the time of baseline blood sampling. Then, from the results of following the subjects of the cohort study for 6.45 years, the onset of CHD during that period was investigated and the relationship with the measurement items was verified.

ApoE-containing HDL-Cの測定は、第1工程でApoE-containing HDL以外のリポ蛋白中コレステロールをコレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、カタラーゼで消去し、第2工程でコレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼを用いてApoE-containing HDL-Cを測定する方法（特開2013-215169号公報）を用いた。 For the measurement of ApoE-containing HDL-C, cholesterol in lipoproteins other than ApoE-containing HDL is eliminated with cholesterol esterase, cholesterol oxidase, and catalase in the first step, and cholesterol esterase, cholesterol oxidase, and peroxidase are used in the second step. A method for measuring ApoE-containing HDL-C (Japanese Patent Laid-Open No. 2013-215169) was used.

ApoE-containing HDL-C値を<5mg/dL（女性）または<4mg/dL（男性）、5.0-5.9mg/dL（女性）または4.0-4.9mg/dL（男性）、6.0-6.9mg/dL（女性）または5.0-5.9mg/dL（男性）、≧7mg/dL（女性）または≧6mg/dL（男性）、の4群に分け、COX proportional regression model モデルを用いてApoE-containing HDL-Cが≧7mg/dL（女性）または≧6mg/dL（男性）の群に対する各群のハザード比を比較した。
結果を図１に示す。 ApoE-containing HDL-C values <5mg / dL (female) or <4mg / dL (male), 5.0-5.9mg / dL (female) or 4.0-4.9mg / dL (male), 6.0-6.9mg / dL Divided into 4 groups (female) or 5.0-5.9 mg / dL (male), ≧ 7 mg / dL (female) or ≧ 6 mg / dL (male), and ApoE-containing HDL-C using the COX proportional regression model model. Hazard ratios for each group were compared for groups with ≧ 7 mg / dL (female) or ≧ 6 mg / dL (male).
The results are shown in FIG.

図１に示すように、ApoE-containing HDL-C値が小さくなるに従いハザード比が上昇し、CHD発症のリスクの増加が認められた。また、ApoE-containing HDL-C 5mg/dL未満（女性）または4mg/dL未満（男性）の群では、対照群に対してCHD発症のリスクの顕著な増加が認められた。以上の記載はApoE-containing HDL-C値を求めることにより将来的なCHD発症のリスクの程度を判断できること、ApoE-containing HDL-C値 5mg/dL（女性）または4mg/dL（男性）がCHD発症リスクの境界値として有効であることを示すものである。 As shown in FIG. 1, the hazard ratio increased as the ApoE-containing HDL-C value decreased, and the risk of developing CHD increased. In addition, the ApoE-containing HDL-C <5 mg / dL (female) or <4 mg / dL (male) group showed a marked increase in the risk of developing CHD compared to the control group. The above description indicates that the degree of risk of developing CHD in the future can be determined by determining the ApoE-containing HDL-C value, and the ApoE-containing HDL-C value of 5 mg / dL (female) or 4 mg / dL (male) is CHD. It shows that it is effective as a boundary value of the onset risk.

［実施例２］
実施例１と同様のコホート検体を用いて、ApoE-containing HDL-C／HDL-C比と、CHD発症のハザードとの関連性を比較した。
ApoE-containing HDL-Cの測定は、実施例１と同様の方法を用い、HDL-CはHDL-EX“Seiken”（デンカ生研株式会社製）を使用した。 [Example 2]
Using the same cohort sample as in Example 1, the association between the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio and the hazard of CHD onset was compared.
ApoE-containing HDL-C was measured by the same method as in Example 1, and HDL-EX “Seiken” (manufactured by Denka Seiken Co., Ltd.) was used as HDL-C.

ApoE-containing HDL-CとHDL-Cとの比を<8.6％、8.6-9.2％、9.3-9.9％、≧10.0％の4群に分け、COX proportional regression model モデルを用いてApoE-containing HDL-C／HDL-C ≧10.0％群に対する各群のハザード比を比較した。
結果を図２に示す。 The ratio of ApoE-containing HDL-C to HDL-C was divided into 4 groups of <8.6%, 8.6-9.2%, 9.3-9.9%, and ≧ 10.0%, and ApoE-containing HDL- was used using the COX proportional regression model model. The hazard ratios of each group to the C / HDL-C ≥ 10.0% group were compared.
The results are shown in FIG.

図２に示すように、ApoE-containing HDL-C／HDL-C比が小さくなるに従いハザード比が上昇し、CHD発症のリスクの増加が認められた。また、ApoE-containing HDL-C／HDL-C ≧10.0％群に対し、それ以外の群ではCHD発症のリスクの顕著な増加が認められた。以上の記載はApoE-containing HDL-C/HDL-C比を求めることにより将来的なCHD発症のリスクの程度を判断できること、ApoE-containing HDL-C／HDL-C比10.0％がCHD発症リスクの境界値として有効であることを示すものである。 As shown in FIG. 2, the hazard ratio increased as the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio decreased, and the risk of developing CHD increased. In addition, the risk of developing CHD was significantly increased in the other groups compared to the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ≥ 10.0% group. The above description indicates that the degree of risk of developing CHD in the future can be determined by determining the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio, and 10.0% of the ApoE-containing HDL-C / HDL-C ratio is the risk of developing CHD. It shows that it is effective as a boundary value.

［実施例３］
実施例１と同様のコホート検体を用いて、sd LDL-C／ApoE-containing HDL-C比と、CHD発症のハザードとの関連性を比較した。 [Example 3]
Using the same cohort sample as in Example 1, the association between the sd LDL-C / ApoE-containing HDL-C ratio and the hazard of CHD onset was compared.

ApoE-containing HDL-Cの測定は、実施例１と同様の方法を用い、sd LDL-C測定はsd LDL-EX“Seiken” （デンカ生研株式会社製）を使用した。 The same method as in Example 1 was used for the measurement of ApoE-containing HDL-C, and sd LDL-EX “Seiken” (manufactured by Denka Seiken Co., Ltd.) was used for the measurement of sd LDL-C.

sd LDL-CとApoE-containing HDL-Cとの比を、＜4.7％、4.7-8.6％、8.7-12.6％、≧12.7％の4群に分けCOX proportional regression model モデルを用いてsd LDL-C／ApoE-containing HDL-C＜4.7％群に対する各群のハザード比を比較した。
結果を図３に示す。 The ratio of sd LDL-C to ApoE-containing HDL-C was divided into 4 groups <4.7%, 4.7-8.6%, 8.7-12.6%, ≧ 12.7%, and sd LDL-C was used using the COX proportional regression model model. The hazard ratios of each group to the / ApoE-containing HDL-C <4.7% group were compared.
The results are shown in FIG.

図３に示すように、sd LDL-C ／ApoE-containing HDL-C比が大きくなるに従いハザード比が上昇し、CHD発症のリスクの増加が認められた。また、sd LDL-C /ApoE-containing HDL-C＜4.7％群に対し、それ以外の群ではCHD発症のリスクの顕著な増加が認められた。以上の記載はsd LDL-C／ApoE-containing HDL-C比を求めることにより将来的なCHD発症のリスクの程度を判断できること、sd LDL-C／ApoE-containing HDL-C比4.7％がCHD発症リスクの境界値として有効であることを示すものである。 As shown in FIG. 3, the hazard ratio increased as the sd LDL-C / ApoE-containing HDL-C ratio increased, and the risk of developing CHD increased. In addition, the risk of developing CHD was significantly increased in the other groups compared to the sd LDL-C / ApoE-containing HDL-C <4.7% group. The above description indicates that the degree of risk of developing CHD in the future can be determined by determining the sd LDL-C / ApoE-containing HDL-C ratio, and 4.7% of the sd LDL-C / ApoE-containing HDL-C ratio develops CHD. It shows that it is effective as a boundary value of risk.

［実施例４］
実施例１と同様のコホート検体を用いて、ApoE-containing HDL-C／HDL2-C比と、CHD発症のハザードとの関連性を比較した。 [Example 4]
Using the same cohort sample as in Example 1, the association between the ApoE-containing HDL-C / HDL2-C ratio and the hazard of CHD onset was compared.

ApoE-containing HDL-Cの測定は、実施例１と同様の方法を用いた。HDL2-C測定はHDL-CからHDL3-Cを差し引くことにより求めた。HDL-Cは実施例１と同様の方法を用い、HDL3-Cは第1工程でHDL以外のリポ蛋白中コレステロールをコレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、カタラーゼで消去し、第2工程で残ったHDLのうちコレステロールエステラーゼ、コレステロールオキシダーゼ、ペルオキシダーゼを用いてHDL3-Cのみを測定する方法を用いた。 For the measurement of ApoE-containing HDL-C, the same method as in Example 1 was used. The HDL2-C measurement was obtained by subtracting HDL3-C from HDL-C. For HDL-C, the same method as in Example 1 was used, and for HDL3-C, cholesterol in lipoproteins other than HDL was eliminated with cholesterol esterase, cholesterol oxidase, and catalase in the first step, and among the HDL remaining in the second step. A method of measuring only HDL3-C using cholesterol esterase, cholesterol oxidase, and peroxidase was used.

ApoE-containing HDL-CとHDL2-Cとの比を<14.1％、14.1-15.9％、16.0-17.9％、≧18.0％の4群に分け、COX proportional regression model モデルを用いてApoE-containing HDL-C／HDL2-C ≧18.0％群（対照群）に対する各群のハザード比を比較した。
結果を図４に示す。 The ratio of ApoE-containing HDL-C to HDL2-C was divided into 4 groups <14.1%, 14.1-15.9%, 16.0-17.9%, ≧ 18.0%, and ApoE-containing HDL- was used using the COX proportional regression model model. The hazard ratios of each group to the C / HDL2-C ≧ 18.0% group (control group) were compared.
The results are shown in FIG.

図４に示すように、ApoE-containing HDL-C／HDL2-C比が小さくなるに従いハザード比が上昇し、CHD発症のリスクの増加が認められた。また、ApoE-containing HDL-C／HDL2-C <14.1％群では、対照群に対しCHD発症のリスクの顕著な増加が認められた。以上の記載はApoE-containing HDL-C／HDL2-C比を求めることにより将来的なCHD発症のリスクの程度を判断できること、ApoE-containing HDL-C/HDL2-C比14.1％がCHD発症リスクの境界値として有効であることを示すものである。 As shown in FIG. 4, the hazard ratio increased as the ApoE-containing HDL-C / HDL2-C ratio decreased, and the risk of developing CHD increased. In addition, in the ApoE-containing HDL-C / HDL2-C <14.1% group, a marked increase in the risk of developing CHD was observed compared to the control group. The above description indicates that the degree of risk of developing CHD in the future can be determined by determining the ApoE-containing HDL-C / HDL2-C ratio, and 14.1% of the ApoE-containing HDL-C / HDL2-C ratio is the risk of developing CHD. It shows that it is effective as a boundary value.

［実施例５］
実施例１と同様のコホート検体を用いて、ApoE-containing HDL-C／HDL3-C比と、CHD発症のハザードとの関連性を比較した。 [Example 5]
Using the same cohort sample as in Example 1, the association between the ApoE-containing HDL-C / HDL3-C ratio and the hazard of CHD onset was compared.

ApoE-containing HDL-C、HDL3-Cの測定は、それぞれ実施例１、実施例４と同様の方法を用いた。 The same methods as in Example 1 and Example 4 were used for the measurement of ApoE-containing HDL-C and HDL3-C, respectively.

ApoE-containing HDL-CとHDL3-Cとの比を<18.8％、18.8-20.8％、20.9-22.9％、≧23.0％の4群に分け、COX proportional regression model モデルを用いてApoE-containing HDL-C／HDL3-C ≧23.0％群（対照群）に対する各群のハザード比を比較した。
結果を図５に示す。 The ratio of ApoE-containing HDL-C to HDL3-C was divided into 4 groups of <18.8%, 18.8-20.8%, 20.9-22.9%, and ≧ 23.0%, and ApoE-containing HDL- was used using the COX proportional regression model model. The hazard ratios of each group to the C / HDL3-C ≧ 23.0% group (control group) were compared.
The results are shown in FIG.

図５に示すように、ApoE-containing HDL-C／HDL3-C比が小さくなるに従いハザード比が上昇し、CHD発症のリスクの増加が認められた。また、ApoE-containing HDL-C／HDL3-C <18.8％群では、対照群に対しCHD発症のリスクの顕著な増加が認められた。以上の記載はApoE-containing HDL-C／HDL3-C比を求めることにより将来的なCHD発症のリスクの程度を判断できること、ApoE-containing HDL-C/HDL3-C比18.8％がCHD発症リスクの境界値として有効であることを示すものである。 As shown in FIG. 5, the hazard ratio increased as the ApoE-containing HDL-C / HDL3-C ratio decreased, and the risk of developing CHD increased. In addition, in the ApoE-containing HDL-C / HDL3-C <18.8% group, a marked increase in the risk of developing CHD was observed compared to the control group. The above description can determine the degree of risk of developing CHD in the future by determining the ApoE-containing HDL-C / HDL3-C ratio, and the ApoE-containing HDL-C / HDL3-C ratio of 18.8% is the risk of developing CHD. It shows that it is effective as a boundary value.

[参考例１]
実施例１と同様の検体を用いてHDL-Cを単独で用いた場合の将来的なCHDリスクとの関連性を調べた。結果を図６に示す。図６に示すように、HDL-CとCHD発症のハザードとの関連性についても、ApoE-containing HDL-Cと類似の傾向が認められた。 [Reference example 1]
The relationship with the future CHD risk when HDL-C was used alone using the same sample as in Example 1 was investigated. The results are shown in FIG. As shown in FIG. 6, a tendency similar to that of ApoE-containing HDL-C was observed in the relationship between HDL-C and the hazard of CHD onset.

[参考例２]
ApoE-containing HDL-CとHDL-Cの測定値の相関を調べた。結果を図７に示す。図７に示すように、ApoE-containing HDL-CとHDL-Cは非常に高い相関性が認められた。 [Reference example 2]
The correlation between ApoE-containing HDL-C and HDL-C measurements was investigated. The results are shown in FIG. As shown in FIG. 7, a very high correlation was observed between ApoE-containing HDL-C and HDL-C.

本発明の方法により、被験体の冠動脈心疾患リスクを判断することができる。 According to the method of the present invention, the risk of coronary heart disease of a subject can be determined.

Claims (11)

健常人から採取した被検試料中の
(i) ApoE-containing HDLの値、
(ii) ApoE-containing HDLのHDLに対する比率、
(iii) Small dense LDLのApoE-containing HDLに対する比率、
(iv) ApoE-containing HDLのHDL2に対する比率、
(v) ApoE-containing HDLのHDL3に対する比率
の少なくとも１つを測定することを含み、
被検試料中のApoE-containing HDLの減少、
ApoE-containing HDLのHDLに対する比率の減少、
Small Dense LDLのApoE-containing HDLに対する比率の増加、
ApoE-containing HDLのHDL2に対する比率の減少、または
ApoE-containing HDLのHDL3に対する比率の減少が、前記健常人の将来的な冠動脈心疾患リスクの増加を示すと判断するための、冠動脈心疾患リスクを判断するための補助的データを取得する方法。 In the test sample collected from a healthy person
(i) ApoE-containing HDL value,
(ii) Ratio of ApoE-containing HDL to HDL,
(iii) Ratio of Small dense LDL to ApoE-containing HDL,
(iv) Ratio of ApoE-containing HDL to HDL2,
(v) involves measuring at least one of the ratios of ApoE-containing HDL to HDL3.
Decrease in ApoE-containing HDL in test sample,
Decreased ratio of ApoE-containing HDL to HDL,
Increased ratio of Small Dense LDL to ApoE-containing HDL,
Decreased ratio of ApoE-containing HDL to HDL2, or
A method for obtaining ancillary data for determining the risk of coronary heart disease for determining that a decrease in the ratio of ApoE-containing HDL to HDL3 indicates an increased risk of coronary heart disease in the healthy person in the future. 前記ApoE-containing HDLの定量がApoE-containing HDL中コレステロール（ApoE-containing HDL-C）またはApoE-containing HDL中中性脂肪（ApoE-containing HDL-TG）またはApoE-containing HDL中リン脂質（ApoE-containing HDL-PL）またはApoE-containing HDL粒子数（ApoE-containing HDL-N）、またはApoE-containing HDL粒子重量を測定することにより行われることを特徴とする請求項１に記載の方法。 The quantification of ApoE-containing HDL is cholesterol in ApoE-containing HDL (ApoE-containing HDL-C) or ApoE-containing HDL neutral fat (ApoE-containing HDL-TG) or phospholipid in ApoE-containing HDL (ApoE- The method according to claim 1 , wherein the method is carried out by measuring the number of containing HDL-PL) or ApoE-containing HDL particles (ApoE-containing HDL-N), or the weight of ApoE-containing HDL particles. 前記HDLの定量がHDL中コレステロール(HDL-C)またはHDL中中性脂肪（HDL-TG）またはHDL中リン脂質（HDL-PL）またはHDL粒子数（HDL-N）またはHDL粒子重量を測定することにより行われる、請求項１に記載の方法。 The HDL quantification measures cholesterol in HDL (HDL-C) or neutral fat in HDL (HDL-TG) or phospholipid in HDL (HDL-PL) or the number of HDL particles (HDL-N) or HDL particle weight. The method according to claim 1, which is carried out by the above. 前記Small Dense LDLの定量がSmall Dense LDL中コレステロール(Small Dense LDL-C)またはsd LDL中中性脂肪(Small Dense LDL-TG)またはsd LDL中リン脂質(Small Dense LDL-PL)またはsd LDL粒子数(Small Dense LDL-N)、またはsd LDL粒子重量を測定することにより行われる、請求項１に記載の方法。 The quantification of Small Dense LDL is cholesterol in Small Dense LDL (Small Dense LDL-C) or sd LDL neutral fat (Small Dense LDL-TG) or phospholipid in sd LDL (Small Dense LDL-PL) or sd LDL particles. The method of claim 1, which is performed by measuring the number (Small Dense LDL-N), or sd LDL particle weight. 前記HDL2の定量がHDL2中コレステロール(HDL2-C)またはHDL2中中性脂肪(HDL2-TG)またはHDL2中リン脂質(HDL2-PL)またはHDL2粒子数(HDL2-N)またはHDL2粒子重量を測定することにより行われる、請求項１に記載の方法。 The quantification of HDL2 measures cholesterol in HDL2 (HDL2-C) or triglyceride in HDL2 (HDL2-TG) or phospholipid in HDL2 (HDL2-PL) or the number of HDL2 particles (HDL2-N) or HDL2 particle weight. The method according to claim 1 , which is carried out by the above . 前記HDL3の定量がHDL3中コレステロール(HDL3-C)またはHDL3中中性脂肪(HDL3-TG)またはHDL3中リン脂質(HDL3-PL)またはHDL3粒子数(HDL3-N)またはHDL3粒子重量を測定することにより行われる、請求項１に記載の方法。 The quantification of HDL3 measures cholesterol in HDL3 (HDL3-C) or triglyceride in HDL3 (HDL3-TG) or phospholipid in HDL3 (HDL3-PL) or number of HDL3 particles (HDL3-N) or HDL3 particle weight. The method according to claim 1 , which is carried out by the above . 前記ApoE-containing HDL中コレステロールとHDL中コレステロールとの比率が10.0％未満の時に健常人の将来的な冠動脈心疾患リスクがあると判断される、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。 The invention according to any one of claims 1 to 3, wherein when the ratio of cholesterol in ApoE-containing HDL to cholesterol in HDL is less than 10.0%, it is judged that there is a future risk of coronary heart disease in a healthy person . Method. 前記Small Dense LDL中コレステロールとApoE-containing HDL中コレステロールとの比率が4.7％以上の時に健常人の将来的な冠動脈心疾患リスクがあると判断される、請求項１、２又は４に記載の方法。 The method according to claim 1, 2 or 4, wherein when the ratio of cholesterol in Small Dense LDL to cholesterol in ApoE-containing HDL is 4.7% or more, it is judged that there is a future risk of coronary heart disease in a healthy person . .. 前記ApoE-containing HDL中コレステロールとHDL2中コレステロールとの比率が14.1％未満の時に健常人の将来的な冠動脈心疾患リスクがあると判断される、請求項１、２又は５に記載の方法。 The method according to claim 1, 2 or 5, wherein when the ratio of cholesterol in ApoE-containing HDL to cholesterol in HDL2 is less than 14.1%, it is judged that there is a future risk of coronary heart disease in a healthy person . 前記ApoE-containing HDL中コレステロールとHDL3中コレステロールとの比率が18.8％未満の時に健常人の将来的な冠動脈心疾患リスクがあると判断される、請求項１、２又は６に記載の方法。 The method according to claim 1, 2 or 6, wherein when the ratio of cholesterol in ApoE-containing HDL to cholesterol in HDL3 is less than 18.8%, it is judged that there is a future risk of coronary heart disease in a healthy person . ApoE-containing HDL中コレステロール、HDL中コレステロール、Small Dense LDL中コレステロール、HDL2中コレステロール、HDL3中コレステロールの測定用試薬を含む、健常人における冠動脈心疾患リスクを判断するための補助的データを取得するための測定用キット。 ApoE-containing To obtain supplementary data to determine the risk of coronary heart disease in healthy individuals , including reagents for measuring cholesterol in HDL, cholesterol in HDL, cholesterol in Small Dense LDL, cholesterol in HDL2, and cholesterol in HDL3. Measurement kit .
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