JP6929292B2

JP6929292B2 - 新規なクリプトフィシン化合物およびコンジュゲート、これらの製造およびこれらの治療用途

Info

Publication number: JP6929292B2
Application number: JP2018541548A
Authority: JP
Inventors: アントニー・ビゴ; エルヴェ・ブーシャール; マリー−プリシール・ブラン; フランソワ・クレール; ジィドン・チャン
Original assignee: Sanofi SA
Current assignee: Sanofi SA
Priority date: 2015-11-05
Filing date: 2016-11-03
Publication date: 2021-09-01
Anticipated expiration: 2036-11-03
Also published as: TW201730164A; SI3371179T1; MY189448A; LT3371179T; ECSP18034035A; KR20180073678A; ZA201802322B; TWI714661B; CA3003085A1; US20190382391A1; AU2016347724A1; WO2017076998A1; US10941139B2; PT3371179T; MX2018005379A; PL3371179T3; CR20180256A; PH12018500852A1; EA201890898A1; RS59498B1

Description

本発明は、新規なクリプトフィシン化合物と、新規なクリプトフィシンペイロードと、新規なクリプトフィシンコンジュゲートと、これらを含有する組成物と、特に抗がん剤としてのこれらの治療用途とに関する。本発明はまた、これらのコンジュゲートを製造するための方法にも関する。

クリプトフィシンは、ネンジュモ属の藍色細菌によって産生される大環状デプシペプチドのクラスに属する二次代謝産物である。分子のこのクラスの第１の代表、クリプトフィシン−１（Ｃ−１）は、１９９０年に藍色細菌であるネンジュモ属ｓｐから単離された（ＡＴＣＣ５３７８９；非特許文献１を参照されたい）。エポキシド官能基によって特徴づけられるクリプトフィシンＣ−１およびＣ−５２は、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでの抗腫瘍活性を有することが１９９０年代初期に発見された。これらのクロロヒドリン、Ｃ−８およびＣ−５５は、非常に活性が強いが、安定な溶液として製剤化することができなかった（非特許文献２）。これらの高い活性は、細胞内での相応するエポキシドを生成するこれらの推定活性によって関連付けられた。クロロヒドリンを適切に安定化させる方法が無かった当時、クリプトフィシンＣ−５２（ＬＹ３５５７０３）は治験に入ったが、肺がんの第ＩＩ相臨床試験において３０〜４０％の疾患の安定を伴ったもののごくわずかな抗腫瘍活性を生じ、したがって中止となった（非特許文献３および非特許文献４）。

メイタンシノイドおよびオーリスタチンによるこれらの高い力価および一般的なメカニズムを考慮して、この２種の細胞障害性分子が抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）向けに臨床において検証され、この系列はＡＤＣ向けの可能性のあるチューブリン結合剤として考慮された。したがって、クリプトフィシン系列のコンジュゲートは、大環状体のパラ−ベンジル位での誘導体化から出発して開発された（非特許文献５）。

特許文献１には、クリプトフィシン抗体−薬物コンジュゲートが記載されているが、このコンジュゲート向けに、種々の種類のリンカーを使用して、細胞障害性部分がパラ−ベンジル位を通して抗体にリンクしている。これらは、切断可能であっても、ジスルフィドもしくはプロテアーゼ感受性であっても、切断不可能であってもよい。

特許文献１には、クリプトフィシン抗体−薬物コンジュゲートに関してさらなる最適化について記載されているが、この最適化によって、有力な抗腫瘍活性を提示するがマウス血漿中では不安定であることが見いだされたものの、いっぽう、非げっ歯類の血漿中では安定である、強力なクリプトフィシンコンジュゲートがもたらされた。それ故、改善された安定特性を示すクリプトフィシンコンジュゲートが必要であった。

ＷＯ２０１１／００１０５２

ＥｉｓｓｌｅｒＳ．ら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ２００６、２２、３７４７〜３７８９ＢｉｏｎｐａｌｌｙＲ．Ｒ．ら、ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍｏｔｈｅｒＰｈａｒｍａｃｏｌ２００３、５２、２５〜３３ＥｄｅｌｍａｎＭ．Ｊ．ら、ＬｕｎｇＣａｎｃｅｒ２００３、３９、１９７〜９９ＳｅｓｓａＣ．ら、ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒ２００２、３８、２３８８〜９６Ａｌ−ＡｗａｒＲ．Ｓ．ら、ＪＭｅｄＣｈｅｍ２００３、４６、２９８５〜３００７

本発明の目的は、抗体に一旦コンジュゲートしたらマウス血漿中で安定な新規の大環状クリプトフィシンおよびこういった安定な環状体から構成される新規なクリプトフィシンコンジュゲートを提案することである。

この点で、本発明は式（Ｉ）：

のクリプトフィシン化合物に関する
（式中：
・Ｒ_１は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｒ_２およびＲ_３は、互いに独立して、水素原子もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
または代替的にＲ_２およびＲ_３は、それらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ_３〜Ｃ_６）シクロアルキルもしくは（Ｃ_３〜Ｃ_６）ヘテロシクロアルキル基を形成し；
・Ｒ_４およびＲ_５は、互いに独立して、水素原子もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＨ（Ｒ_１２）基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＯＨ基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＳＨ基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＣＯ_２Ｈ基を表し；
または代替的にＲ_４およびＲ_５は、それらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ_３〜
Ｃ_６）シクロアルキルもしくは（Ｃ_３〜Ｃ_６）ヘテロシクロアルキル基を形成し；
・Ｒ_６は水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｒ_７およびＲ_８は、互いに独立して、水素原子もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＣＯ_２Ｈ基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｎ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル_２基を表し；
または代替的にＲ_７およびＲ_８は、それらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ_３〜Ｃ_６）シクロアルキル基もしくは（Ｃ_３〜Ｃ_６）ヘテロシクロアルキル基を形成し；
・Ｒ_９は、水素原子、−ＯＨ、（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルコキシ、ハロゲン原子、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、−Ｎ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル_２、−ＮＨ（Ｃ_１〜Ｃ_６）シクロアルキルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_６）ヘテロシクロアルキルから互いに独立して選択されるフェニル核の１つまたはそれ以上の置換基を表し；
・Ｒ_１０は、水素原子および基（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルから選択されるフェニル核の少なくとも１つの置換基を表し；
・Ｗは、
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＨ（Ｒ_１１）、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＮＨＲ_１１；
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＯＨ、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＯＨ；
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＳＨ、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＳＨ；
・ＣＯ_２ＨもしくはＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２；
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＣＯ_２Ｈもしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２；または
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｎ_３を表し；
Ｗは、フェニル核のオルト（ｏ）位、メタ（ｍ）位またはパラ（ｐ）位に位置し、
・Ｒ_１１およびＲ_１２は、互いに独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、より具体的にはメチル基を表し；
・ｎは１から６の間の整数を表す）。

本発明はさらに、式（ＩＩ）：

のクリプトフィシンペイロードに関する
（式中：
・Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９およびＲ_１０は式（Ｉ）に規定のとおりであり；
・Ｙは、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_１１もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｏもしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｓを表し；
または代替的にＹは、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）Ｏもしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨを表し；
または代替的にＹは、

のような（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−トリアゾール−を表し；
Ｙは、フェニル核のオルト（ｏ）位、メタ（ｍ）位またはパラ（ｐ）位に位置し；
・Ｒ_１１は、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｌはリンカーを表し；
・ＲＣＧ１はリンカーの末端に存在する反応性化学基を表し、ＲＣＧ１は抗体上に存在する反応性化学基に向けて反応性である）。

本発明はまた、式（ＩＩＩ）：

のコンジュゲートにも関する
（式中：
・Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９およびＲ_１０は式（Ｉ）に規定のとおりであり；
・ＹおよびＬは式（ＩＩ）に規定のとおりであり；
・Ｇは、リンカーの末端に存在する反応性化学基であるＲＣＧ１と、抗体（Ａｂ）上に存在する直交反応性化学基であるＲＣＧ２との間の反応生成物を表し；
・Ａｂは抗体を表す）。

各置換基Ｒ_１〜Ｒ_１１は、例に記載の空間配置（例えば、ＲもしくはＳまたは代替的にＺもしくはＥ）のうちの１つを取ることもできる。

式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、１つまたはそれ以上の不斉炭素原子を含有することができる。それ故、それらはエナンチオマーまたはジアステレオ異性体の形態で存在することができる。こういったエナンチオマーおよびジアステレオ異性体、ならびにこれらの混合物は、ラセミ混合物を含めて、本発明の一部を形成する。

式（Ｉ）の化合物は、例示されているものを含めて、塩基の形態で、または特に医薬的に許容される酸の、酸付加塩の形態で存在することができる。

定義
本発明に関して、ある特定の用語は次の定義を有する：
・アルケニル基：アルケンから１個の水素原子を取り外すことによって得られる炭化水素基。アルケニル基は直鎖であっても分枝であってもよい。言及することができる例としては、エテニル（−ＣＨ＝ＣＨ_２、ビニルともいう）およびプロペニル（−ＣＨ_２−ＣＨ＝ＣＨ_２、アリルともいう）が挙げられる。
・アルコキシ基：基−Ｏ−アルキルであり、アルキル基は下に定義のとおりである；
・アルキル基：アルカンから１個の水素原子を取り外すことによって得られる、直鎖のまたは分枝の飽和脂肪族の炭化水素に基づく基。言及することができる例としては、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチル、２，２−ジメチルプロピルおよびヘキシル基が挙げられる；
・アルキレン基：アルカンから２個の水素原子を取り外すことによって得られる、実験式−Ｃ_ｎＨ_２ｎ−の飽和した二価の基。アルキレン基は直鎖であっても分枝であってもよい。言及することができる例としては、メチレン（−ＣＨ_２−）、エチレン（−ＣＨ_２ＣＨ_２−）、プロピレン（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）、ブチレン（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）およびヘキシレン（−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−）基または次の分枝基；

が挙げられ、好ましくは、アルキレン基は、式−（ＣＨ_２）_ｎ−のもので、ｎは、整数を表す；値の範囲には限度値が含まれる（例えば、「１から６までの範囲のｎ」または「１から６の間」というタイプの範囲は、限度値１および６を含む）；
・抗体：生物学的標的に対して親和性を有する抗体、より具体的にはモノクローナル抗体。抗体の機能は、細胞傷害性化合物としての生物学的活性化合物を生物学的標的に向けて誘導することである。抗体は、モノクローナルであっても、ポリクローナルであっても、多重特異性であってもよい；これはまた抗体フラグメントであってもよい；これはまた、マウス抗体でも、キメラ抗体でも、ヒト化抗体でもヒト抗体でもよい。「抗体」は、２本の重鎖が相互にジスルフィド結合によって連結し、各重鎖が軽鎖に対してジスルフィド結合によって連結している、天然の、または従来の抗体であってよい（「完全長抗体」ともいう）。用語「従来の（または完全長）抗体」とは、シグナルペプチド（またはプロペプチド、存在する場合）を含む抗体と、上記の鎖が分泌されかつタンパク質分解の処理を受けて得られる成熟型と、の両方を指す。ラムダ（ｌ）およびカッパ（ｋ）の２タイプの軽鎖が存在する。主たる５つ重鎖のクラス（またはアイソタイプ）：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡおよびＩｇＥが存在し、これらは抗体分子の機能的活性を決定する。各鎖は、別個の配列のドメインを含有する。軽鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＬ）および１つの定常ドメイン（ＣＬ）の、２つのドメインまたは領域を含む。重鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＨ）および３つの定常ドメイン（集合的にＣＨと呼ぶ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３）の４つのドメインを含む。軽鎖（ＶＬ）および重鎖（ＶＨ）両方の可変ドメインは、抗原に対する結合の認識および特異性を決定する。軽鎖（ＣＬ）および重鎖（ＣＨ）の定常領域ドメインは、抗体鎖の会合、分泌、経胎盤の移動性、補体結合、およびＦｃ受容体（ＦｃＲ）に対する結合のような、重要な生物学的性質を付与する。Ｆｖフラグメントは、免疫グロブリンのＦａｂフラグメントのＮ末端部分であり、１本の軽鎖および１本の重鎖の可変ポーションからなる。抗体の特異性は、抗体の結合性の部位と抗原性決定基との間の構造的な相補性にある。抗体の結合性の部位は、主に高頻度可変性領域、または相補性決定領域（ＣＤＲ）に由来する残基から構成されている。時には、非高頻度可変性領域、またはフレームワーク領域（ＦＲ）由来の残基がドメイン構造全体に、それゆえに結合部位に影響を及ぼす。相補性決定領域すなわちＣＤＲとは、天然の免疫グロブリン結合部位の自然のＦｖ領域の結合親和性および特異性を一緒に規定するアミノ酸配列を指す。免疫グロブリンの軽鎖および重鎖それぞれは、ＣＤＲ１−Ｌ、ＣＤＲ２−Ｌ、ＣＤＲ３−Ｌ、およびＣＤＲ１−Ｈ、ＣＤＲ２−Ｈ、ＣＤＲ３−Ｈとそれぞれ呼ばれる、３つのＣＤＲを有する。したがって、従来の抗体の抗原結合部位は、重鎖のＶ領域および軽鎖のＶ領域のそれぞれに由来するＣＤＲのセットを含む、６つのＣＤＲを含む。本明細書で使用する用語「抗体」とは、従来の（完全長）抗体およびそのフラグメント、ならびに単一ドメイン抗体およびそのフラグメント、特に単一ドメイン抗体の可変重鎖を示す。（従来の）抗体のフラグメントは、インタクトな抗体のポーション、特に、インタクトな抗体の抗原結合性領域または可変領域を典型的に含み、従来の抗体の生物学的機能を保持している。そのようなフラグメントの例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’、ｄｓＦｖ、（ｄｓＦｖ）２、ｓｃＦｖ、ｓｃ（Ｆｖ）２およびダイアボディが挙げられる。

抗体の機能は、細胞傷害性化合物としての生物学的活性化合物を生物学的標的に向けて誘導することである。
・アリール基：５〜１０個の間の炭素原子を含有する環式芳香族基。アリール基の例としては、フェニル、トリル、キシリル、ナフチルが挙げられる；
・生物学的標的：好ましくは、がん細胞または本腫瘍に関連する間質細胞の表面に存在している抗原（または抗原の群）；こういった抗原は、例えば、増殖因子受容体、がん遺伝子産物もしくは変異「腫瘍抑制」遺伝子産物、血管新生関連分子または接着分子とすることができる；
・コンジュゲート：抗体−薬物コンジュゲートまたはＡＤＣ、すなわち、細胞傷害性化合物の少なくとも１つの分子がリンカーを介して共有結合で結合している抗体；
・シクロアルキル基：環状構造に係合している３個から６個の間の炭素原子を含む環状アルキル基。言及することができる例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシル基が挙げられる；
・ＤＡＲ（薬物／抗体比）：リンカーを介して１抗体に結合している細胞障害性分子の平均数；
・ハロゲン：４つの元素、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素のいずれか；
・ヘテロアリール基：２〜１０個の間の炭素原子と、当該環に係合しかつ当該環を形成している炭素原子に結合している窒素、酸素または硫黄のような１〜５個の間のヘテロ原子と、を含有するアリール基。ヘテロアリール基の例としては、ピリジル、ピリミジル、チエニル、イミダゾリル、トリアゾリル、インドリル、イミダゾ−ピリジル、ピラゾリルが挙げられる；
・ヘテロシクロアルキル基：２〜８個の間の炭素原子と、当該環に係合しかつ当該環を形成している炭素原子に結合している窒素、酸素または硫黄のような１〜３個の間のヘテロ原子と、を含有するシクロアルキル基。例としては、アジリジニル、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、テトラヒドロピラニル、アゼチジニル、オキセタニルおよびピラニルが挙げられる；
・リンカー：コンジュゲートを形成するために、細胞傷害性化合物を抗体に共有結合で結合させることができる原子団または単結合；
・フラグメント：クリプトフィシン化合物の全合成を可能とするより単純な分子；
・ペイロード：リンカーが共有結合で結合している細胞障害性物質；
・反応性化学基：化学反応を進行させるかまたは起こすことができる原子団。

略語
ＡＤＣ：抗体−薬物コンジュゲート；ＡｃＯＨ：酢酸；ＡＩＢＮ：アゾビスイソブチロニトリル；ＡＬＫ：（Ｃ_１〜Ｃ_１２）アルキレン基、より具体的には（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキレン、より具体的には−（ＣＨ_２）_ｎ−の形態のもの、ここで、ｎは、１から１２の整数、好ましくは１から６の整数である；ａｑ．：水性；Ａｒ：アルゴン；ＡＵＣ：曲線下面積；ＢＥＭＰ：２−ｔｅｒｔ−ブチルイミノ−２−ジエチルアミノ−１，３−ジメチルペルヒドロ−１，３，２−ジアザホスホリン；ＢＦ_３：三フッ化ホウ素；Ｂｏｃ_２Ｏ：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカーボネート；ＢｕＬｉ：ブチルリチウム；ＣＡＮ：硝酸セリウムアンモニウム；Ｃｂｚ：カルボキシベンジル；ＣＨＣｌ_３：クロロホルム；ＣＨ_３ＣＮ：アセトニトリル；ＣＨ_３Ｉ：ヨウ化メチル；ＣＯ_２：二酸化炭素；ＣＬ：クリアランス；ｍ−ＣＰＢＡ：ｍ−クロロ過安息香酸；ＣＲ：完全奏功；
クリプトは、式

のユニットを示し、ここで、クリプトは、後に記載のＤ_１〜Ｄ_１９クリプトフィシン化合物のうちの１つまたは一例の一クリプトフィシン化合物を特に示す；Ｄ１とは１のＤＡＲを有するＡＤＣを指し、Ｄ２とは２のＤＡＲを有するＡＤＣを指す、等；ｄ：日；ＤＡＲ：薬物対抗体比；ＤＢＵ：８−ジアザビシクロ「５．４．０」ウンデカ−７−エン；ＤＣＣ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド；ＤＣＥ：ジクロロエタン；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＤＤＱ：２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン；ＤＩＣ：Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド；ＤＩＡＤ：ジイソプロピルアゾジカルボキシレート；ＤＩＥＡ：Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン；ＤＭＡ：ジメチルアセトアミド；ＤＭＡＰ：４−（ジメチルアミノ）ピリジン；ＤＭＥ：ジメトキシエタン；ＤＭＥＭ：ダルベッコ改変イーグル培地；ＤＭＥＭ／Ｆ１２：ダルベッコ改変イーグル培地栄養素混合物Ｆ−１２；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；ＤＰＢＳ：ダルベッコのリン酸緩衝食塩水；ＤＰＰＡ：ジフェニルホスホラジド（ＰｈＯ）_２Ｐ（＝Ｏ）Ｎ_３；ＤＳＣ：Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカーボネート；ＥＤＡ：エチレンジアミン；ＥＤＣ：１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド；ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸；ＥＥＤＱ：Ｎ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン；ＥＬＳＤ：蒸発光散乱検出器；ｅｑ．：当量；ＥＳ：エレクトロスプレー；ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；Ｅｔ_２Ｏ：ジエチルエーテル；ＥｔＯＨ：エタノール；Ｅｘ．：例；ＦＣＳ：ウシ胎児血清；Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメトキシカルボニル；ＦｍｏｃＯＳｕ：Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニルオキシ）スクシンイミド；ＧＩ：電気誘導性基（ｅｌｅｃｔｒｏｉｎｄｕｃｔｉｖｅｇｒｏｕｐ）；グラブスＩ：ベンジリデン−ビス（トリシクロヘキシルホスフィン）ジクロロルテニウム；グラブスＩＩ：（１，３−ビス（２，４，６−トリメチルフェニル）−２−イミダゾリジニリデン）ジクロロ（フェニルメチレン）（トリシクロヘキシルホスフィン）ルテニウム；ｈ：時；Ｈ_２Ｏ：水；Ｈａｌ：ハロゲン；ＨＡＴＵ：１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾロ［４，５−ｂ］ピリジニウム３−オキシドヘキサフルオロホスフェート；ＨＣｌ：塩化水素酸；ＨＥＰＥＳ：４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸；ＨＩＣ：疎水性相互作用クロマトグラフィー；ＨＯＡｔ：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール；ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール；ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー；ＨＲＭＳ：高分解能質量分析；ＩＣ_５０：半抑制濃度；ｉ．ｅ．：ｉｄｅｓｔはすなわちを意味する；ＩＥＣ：イオン交換クロマトグラフィー；ｉＰｒＯＨ：２−プロパノール；ｉＰｒ_２Ｏ：ジイソプロピルエーテル；ｉ．ｖ．：静脈内；Ｋ_２ＣＯ_３：炭酸カリウム；ＬＤＡ：リチウムジイソプロピルアミド；ＬｉＯＨ：水酸化リチウム；ｍａｒｇ．：ごくわずかに；ＭｅＯＨ：メタノール；ＭｅＴＨＦ：２−メチル−テトラヒドロフラン；ＭｇＳＯ_４：硫酸マグネシウム；ｍｉｎ：分；ＭＮＢＡ：２−メチル−６−ニトロ安息香酸無水物；ＭＴＢＥ：メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル；ＭＴＤ：最大耐性量；ＮａＨ：水素化ナトリウム；ＮａＨＳＯ_４：重硫酸ナトリウム；Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３：チオ硫酸ナトリウム；ＮａＣｌ：塩化ナトリウム；ＮａＨＣＯ_３：炭酸水素ナトリウム；ＮａＨＳＯ_３：亜硫酸水素ナトリウム；ＮａＨＳＯ_４：硫酸水素ナトリウム；ＮａＯＨ：水酸化ナトリウム；ＮＨ_４Ｃｌ：塩化アンモニウム；ＮＨＳ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド；ＮＭＰ：１−メチル−２−ピロリドン；ＮＭＲ：核磁気共鳴；Ｐ_２−Ｅｔ：１−エチル−２，２，４，４，４−ペンタキス（ジメチルアミノ）−２λ５，４λ５−カテナジ（ホスファゼン）；ＰＢＳ：リン酸緩衝食塩水；ＰＥＧ：ポリエチレングリコール；ＰＫ：薬物動態；ＰＭＢ：パラ−メトキシベンジル；ＰＮＧａｓｅＦ：ペプチド−Ｎ−グリコシダーゼＦ；ＰＰｈ_３：トリフェニルホスフィン；ｐｐｍ：百万分率；ＰＲ：部分奏功；ＱＳ：ｑｕａｎｔｕｍｓａｔｉｓとは必要とされる量を意味する；Ｑ−Ｔｏｆ：四重極飛行時間；ｑｕａｎｔ．：定量的収量；ＲＣＧ：反応性化学基；ＲＴ：室温；ｓａｔ．：飽和；ｓ．ｃ．：皮下；ＳＣＩＤ：重症複合免疫不全症；ＳＥＣ：サイズ排除クロマトグラフィー；ＴＢＡＦ：テトラブチルアンモニウムフルオライド；ｔＢｕＯＫ：カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド；ＴＣＥＰ：トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＴＥＭＰＯ：（２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−イル）オキシル；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴＦＳ：無腫瘍生存；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；ＴＨＰ：テトラヒドロピラン；ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー；ｔ_１／２：半減期；ｔ_Ｒ：保持時間；ｐ−ＴｓＯＨ：パラ−トルエンスルホン酸；ＵＰＬＣ：超高速液体クロマトグラフィー；ＵＶ：紫外線；Ｖ_ｓｓ：定常状態での見かけの分布容積。

実施例３の高分解能質量スペクトルを示す図である。実施例７の高分解能質量スペクトルを示す図である。実施例１０の高分解能質量スペクトルを示す図である。実施例１４の高分解能質量スペクトルを示す図である。実施例２０の高分解能質量スペクトルを示す図である。実施例２３の高分解能質量スペクトルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植に対する実施例３のインビボ効果を示す図である。ＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植に対する実施例７のインビボ効果を示す図である。ＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植に対する実施例１０のインビボ効果を示す図である。ＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植に対する実施例１４のインビボ効果を示す図である。ＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植に対する実施例２０のインビボ効果を示す図である。ＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植に対する実施例２３のインビボ効果を示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後のＡＤＣ１のインビボＰＫプロファイルを示す図である。非げっ歯類における単回静脈内投与後のＡＤＣ１のインビボＰＫプロファイルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後の実施例３のインビボＰＫプロファイルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後の実施例７のインビボＰＫプロファイルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後９６時間目での脱グリコシルしたＡＤＣ１のＨＲＭＳスペクトルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後９６時間目でのＡＤＣ２軽鎖のＨＲＭＳスペクトルを示す図である。非げっ歯類における単回静脈内投与後６日目での脱グリコシルしたＡＤＣ１のＨＲＭＳスペクトルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後９６時間目での実施例３のＨＲＭＳスペクトルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後９６時間目での実施例７のＨＲＭＳスペクトルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後９６時間目での実施例１０のＨＲＭＳスペクトルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後９６時間目での実施例１４のＨＲＭＳスペクトルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後９６時間目での実施例２０のＨＲＭＳスペクトルを示す図である。ＳＣＩＤマウスにおける単回静脈内投与後９６時間目での実施例２３のＨＲＭＳスペクトルを示す図である。

本発明は、式（Ｉ）：

のクリプトフィシン化合物に関する
（式中：
・Ｒ_１は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｒ_２およびＲ_３は、互いに独立して、水素原子もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
または代替的にＲ_２およびＲ_３は、それらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ_３〜Ｃ_６）シクロアルキルもしくは（Ｃ_３〜Ｃ_６）ヘテロシクロアルキル基を形成し；
・Ｒ_４およびＲ_５は、互いに独立して、水素原子もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＨ（Ｒ_１２）基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＯＨ基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＳＨ基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＣＯ_２Ｈ基を表し；
または代替的にＲ_４およびＲ_５は、それらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ_３〜Ｃ_６）シクロアルキルもしくは（Ｃ_３〜Ｃ_６）ヘテロシクロアルキル基を形成し；
・Ｒ_６は水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｒ_７およびＲ_８は、互いに独立して、水素原子もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＣＯ_２Ｈ基もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｎ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル_２基を表し；
または代替的にＲ_７およびＲ_８は、それらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ_３〜Ｃ_６）シクロアルキル基もしくは（Ｃ_３〜Ｃ_６）ヘテロシクロアルキル基を形成し；
・Ｒ_９は、水素原子、−ＯＨ、（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルコキシ、ハロゲン原子、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルまたは−Ｎ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル_２または−ＮＨ（Ｃ_１〜Ｃ_６）シクロアルキルまたは（Ｃ_３〜Ｃ_６）ヘテロシクロアルキル基から互いに独立して選択されるフェニル核の１つまたはそれ以上の置換基を表し；
・Ｒ_１０は、水素原子および基（Ｃ_１〜Ｃ_４）アルキルから選択されるフェニル核の少なくとも１つの置換基を表し；
・Ｗは、
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＨ（Ｒ_１１）、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＮＨＲ_１１；
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＯＨ、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＯＨ；
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＳＨ、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＳＨ；
・ＣＯ_２ＨもしくはＣ（＝Ｏ）ＮＨ_２；
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＣＯ_２Ｈもしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ_２；または
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｎ_３を表し；
Ｗは、フェニル核のオルト（ｏ）位、メタ（ｍ）位またはパラ（ｐ）位に位置し、
・Ｒ_１１およびＲ_１２は、互いに独立して、水素原子または基（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、より具体的にはメチル基を表し；
・ｎは１から６の間の整数を表す）。

クリプトフィシン化合物は、次のＤ_１〜Ｄ_１９：

のうちの１つとすることができる
（式中：
・ＷおよびＲ_１２は式（Ｉ）に既定のとおりである）。

または、クリプトフィシン化合物は、上記例のうちの１つに記載の同等のユニットとすることができる。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第１の群の化合物は、Ｒ_１は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル基を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第２の群の化合物は、Ｒ_２およびＲ_３のそれぞれは水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第３の群の化合物は、Ｒ_２およびＲ_３の一方は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル基を表し、他方は水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第４の群の化合物は、Ｒ_２およびＲ_３はそれらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ_３〜Ｃ_６）シクロアルキル基、特にシクロプロピル基を形成している化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第５の群の化合物は、Ｒ_４およびＲ_５のそれぞれは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル基を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第６の群の化合物は、Ｒ_６は水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第７の群の化合物は、Ｒ_７およびＲ_８は互いに独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第８の群の化合物は、Ｒ_９は、メトキシ基および塩素原子から選択される２つの置換基を表す化合物から構成される。より具体的には、フェニル核は２つの置換基をフェニル核の３位および４位に含む。好ましくは、これは３−Ｃｌおよび４−メトキシである。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第９の群の化合物は、Ｒ_１０は水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第１０の群の化合物は、Ｗはフェニル核のパラ位に位置している化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第１１の群の化合物は、Ｗは、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＨＲ_１１、特に（Ｃ_１〜Ｃ_３）アルキル−ＮＨＲ_１１、特にＣＨ_２−ＮＨ_２基；（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＯＨ、特に（Ｃ_１〜Ｃ_３）アルキル−ＯＨ、特にＣＨ_２−ＯＨ基；（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＳＨ、特に（Ｃ_１〜Ｃ_３）アルキル−ＳＨ、および（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＣＯ_２Ｈ、特に（Ｃ_１〜Ｃ_３）アルキル−ＣＯ_２Ｈから選択される、化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第１２の群の化合物は、Ｒ_１は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル基を表し、Ｒ_２およびＲ_３のそれぞれは水素原子を表し、Ｒ_６は水素原子を表し、Ｒ_９は、メトキシ基および塩素原子から選択される２つの置換基を表し、より具体的には、フェニル核は２つの置換基をフェニル核の３位および４位に含み、好ましくは、これは３−Ｃｌおよび４−メトキシであり、Ｒ_１０は水素原子を表す、化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第１３の群の化合物は、Ｒ_１は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル基を表し、Ｒ_２およびＲ_３の一方は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル基を表し、他方は水素原子を表し、Ｒ_６は水素原子を表し、Ｒ_９は、メトキシ基および塩素原子から選択される２つの置換基を表し、より具体的には、フェニル核は２つの置換基をフェニル核の３位および４位に含み、好ましくは、これは３−Ｃｌおよび４−メトキシであり、Ｒ_１０は水素原子を表す、化合物から構成される。

代替的に、Ｗは（ＣＨ_２）_ｎＮＨＲ_１１、（ＣＨ_２）_ｎＳＨ、（ＣＨ_２）_ｎＯＨから選択され、ここで、ｎは１から６の間の整数を表す。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第１４の群の化合物は、次の構造（ベータエポキシド立体配置）：

の化合物から構成される。

単独でまたは組み合わせで使用されるこういったサブグループの全ては本発明の一部である。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、次の化合物：

を特に言及することができる。

本発明はさらに、式（ＩＩ）：

のクリプトフィシンペイロードに関する
（式中：
・Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９およびＲ_１０は式（Ｉ）に規定のとおりであり；
・Ｙは、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_１１または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｏもしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｓを表し；
または代替的にＹは、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）Ｏもしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨを表し；
または代替的にＹは、

のような（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−トリアゾール−を表し；
Ｙは、フェニル核のオルト（ｏ）位、メタ（ｍ）位もしくはパラ（ｐ）位に位置し；
・Ｒ_１１は、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｌはリンカーを表し；
・ＲＣＧ１はリンカーの末端に存在する反応性化学基を表し、ＲＣＧ１は抗体上に存在する反応性化学基に向けて反応性である）。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第１の群の化合物は、Ｒ_１は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル基を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第２の群の化合物は、Ｒ_２およびＲ_３のそれぞれは水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第３の群の化合物は、Ｒ_２およびＲ_３の一方は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル基を表し、他方は水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第４の群の化合物は、Ｒ_２およびＲ_３はそれらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ_３〜Ｃ_６）シクロアルキル基、特にシクロプロピル基を形成している化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第５の群の化合物は、Ｒ_４およびＲ_５のそれぞれは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、特にメチル基を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第６の群の化合物は、Ｒ_６は水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第７の群の化合物は、Ｒ_７およびＲ_８は互いに独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第８の群の化合物は、Ｒ_９は、メトキシ基および塩素原子から選択される２つの置換基を表す化合物から構成される。より具体的には、フェニル核は２つの置換基をフェニル核の３位および４位に含む。好ましくは、これは３−Ｃｌおよび４−メトキシである。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第９の群の化合物は、Ｒ_１０は水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第１０の群の化合物は、Ｙはフェニル核のパラ位に位置している化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第１１の群の化合物は、Ｙは、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_１１特に（Ｃ_１〜Ｃ_３）アルキル−ＮＲ_１１より具体的には
ＣＨ_２−ＮＨを表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、第１４の群の化合物は、次の構造（ベータエポキシド立体配置）：

の化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩ）の化合物のうちで、次の化合物：

を特に言及することができる。

本発明はまた、式（ＩＩＩ）：

コンジュゲートにも関する
（式中：
・Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９およびＲ_１０は式（Ｉ）に規定のとおりであり；
・ＹおよびＬは式（ＩＩ）に規定のとおりであり；
・Ｇは、リンカーの末端に存在する反応性化学基であるＲＣＧ１と、抗体（Ａｂ）上に存在する直交反応性化学基であるＲＣＧ２との間の反応生成物を表し；
・Ａｂは抗体を表す）。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第１の群の化合物は、Ｒ_１は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、特にメチル基を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第２の群の化合物は、Ｒ_２およびＲ_３のそれぞれは水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第３の群の化合物は、Ｒ_２およびＲ_３の一方は（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、特にメチル基を表し、他方は水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第４の群の化合物は、Ｒ_２およびＲ_３はそれらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ_３〜Ｃ_６）シクロアルキル基、特にシクロプロピル基を形成している化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第５の群の化合物は、Ｒ_４およびＲ_５のそれぞれは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、特にメチル基を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第６の群の化合物は、Ｒ_６は水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第７の群の化合物は、Ｒ_７およびＲ_８は互いに独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第８の群の化合物は、Ｒ_９は、メトキシ基および塩素原子から選択される２つの置換基を表す化合物から構成される。より具体的には、フェニル核は２つの置換基をフェニル核の３位および４位に含む。好ましくは、これは３−Ｃｌおよび４−メトキシである。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第９の群の化合物は、Ｒ_１０は水素原子を表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、第１１の群の化合物は、Ｙは、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_１１特に（Ｃ_１〜Ｃ_３）アルキル−ＮＲ_１１より具体的にはＣＨ_２−ＮＨを表す化合物から構成される。

本発明の主題である、式（Ｉ）の化合物のうちで、第１２の群の化合物は、次の構造（ベータエポキシド立体配置）：

の化合物から構成される。

本発明の主題である、式（ＩＩＩ）の化合物のうちで、次の化合物：

を特に言及することができる。

式（ＩＩ）のクリプトフィシンペイロードと抗体の間の結合は、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを得るために、抗体上に存在する反応基ＲＣＧ２に向けて反応性である、ペイロード上に存在する反応性化学基ＲＣＧ１によって、生じる。ＲＣＧ１とＲＣＧ２の間の反応によって、共有結合が形成されることで式（ＩＩ）の化合物が抗体に結合することが確保される。式（ＩＩＩ）のコンジュゲートでは、ＲＣＧ１の一部とＲＣＧ２の一部とが、リンカーと抗体の間の結合を形成し続けることが可能である。

言及することができるＲＣＧ１の例としては、
（ｉ）−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ａＲ_ａ反応基、ここで、Ｚ_ａは、単結合、ＯまたはＮＨ、より具体的にはＯを表し、Ｒ_ａは、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_３〜Ｃ_７）シクロアルキル、アルケニル、アリール、ヘテロアリールもしくは（Ｃ_３〜Ｃ_７）ヘテロシクロアルキル基を表す。アリール基は、ハロゲン、特にＦ、アルキル、アルコキシ、ニトロおよびシアノ基から選択される１〜５の基によって置換されていてもよい；
（ｉｉ）次の反応基のうちの１つ；
マレイミド基；

ハロアセタミド基

（式中、Ｒ_１３は水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、より具体的にはＭｅを表す）；
−Ｃｌ；−Ｎ_３；−ＯＨ；−ＳＨ；−ＮＨ_２；−Ｃ≡ＣＨまたは

のようなシクロオクチン部分等の活性化Ｃ≡ＣＣ；
Ｏ−アルキルヒドロキシルアミン基または
ＡｇａｒｗａｌＰら、ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ２０１３、２４、８４６〜８５１に記載の

等のＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応基質、
を挙げることができる。

より具体的には、−Ｚ_ａＲ_ａは、−ＯＨ、−ＯＣＨ_３、−ＯＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２、

（Ｏ−ＮＨＳ）または

（式中、カチオンは例えばナトリウム、カリウム、またはセシウムを表す）または

または

基（式中、ＧＩは、−ＮＯ_２または−Ｈａｌ、特に−Ｆ等の少なくとも１つの電気誘導性基を表す）を表す。

これらは例えば次の基：

であってもよい。−Ｃ（＝Ｏ）Ｚ_ａＲ_ａ基の別のタイプの次の通り：

である。より具体的には、ＲＣＧ１は例に記載のもののうちの１つから選択することができる。

言及することができるＲＣＧ２の例としては：
（ｉ）抗体の表面に存在するリジン残基の側鎖が有する、リジンのε−アミノ基；
（ｉｉ）抗体の重鎖および軽鎖のＮ末端アミノ酸のα−アミノ基；
（ｉｉｉ）ヒンジ領域のサッカリド基；
（ｉｖ）鎖内ジスルフィド結合の還元によって生じるシステインのチオール、または工学的に操作されたシステインのチオール；
（ｖ）抗体の表面に存在する、一部のグルタミン残基の側鎖が有するアミド基；
（Ｖｉ）ホルミルグリシン生成酵素を使用して導入したアルデヒド基
が挙げられる（ＧａｒｎｅｔｔＭ．Ｃ．ら、ＡｄｖａｎｃｅｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＲｅｖｉｅｗｓ２００１、５３、１７１〜２１６）。

さらに最近、他のコンジュゲーションアプローチ、例えば、突然変異によるシステインの導入（ＪｕｎｕｔｕｌａＪ．Ｒ．ら、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２００８、２６、９２５〜９３２）、他のタイプの化学反応を可能にする非天然アミノ酸の導入（ＡｘｕｐＪ．Ｙ．ら、ＰＮＡＳ２０１２、１０９、４０、１６１０１〜１６１０６）、または抗体グリカン上でのコンジュゲーション（ＺｈｏｕＱ．ら、ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．２０１４、２５、５１０〜５２０）が検討されている。抗体の部位特異的修飾に関する別のアプローチは、例えば微生物トランスグルタミナーゼ（ＪｅｇｅｒＳ．ら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１０、４９、９９９５〜９９９７；ＳｔｒｏｐＰ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１３、２０、１６１〜１６７）またはホルミルグリシン生成酵素（ＨｕｄａｋＪ．Ｅ．ら、Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２０１２、５１、４１６１〜４１６５）を使用する、酵素による標識に基づいている。部位特異的コンジュゲーションの戦略に関する総説については、ＡｇａｒｗａｌＰ．およびＢｅｒｔｏｚｚｉＣ．Ｒ．、ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ２０１５、２６、１７６〜１９２を参照されたい。こういったコンジュゲーション技法はまた、本発明に記載のクリプトフィシンペイロードに適用できる。

抗体を化学的に修飾して新規な反応性化学基ＲＣＧ２を導入することも可能である。したがって、例えば活性化ジスルフィド、チオール、マレイミドまたはハロアセタミド基を導入する修飾剤を用いて抗体を修飾する方法は、当業者によく知られている（とりわけＷＯ２００５／０７７０９０、１４頁およびＷＯ２０１１／００１０５２を参照されたい）。上記の修飾によって、コンジュゲーション反応の改善およびより幅広い様々な基ＲＣＧ１の使用が可能となる。

より具体的には、ＲＣＧ１が上のタイプ（ｉｉ）のものである場合、適切な修飾剤を使用して抗体を化学修飾することが可能であり、または１つもしくはそれ以上の非天然アミノ酸を導入して適切な官能基ＲＣＧ２を導入することが可能である。例えば：
− ＲＣＧ１はＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルを表す場合、ＲＣＧ２は−ＮＨ_２基を表し；
− ＲＣＧ１はマレイミドもしくはハロアセタミド官能基または−Ｃｌ基を表す場合、ＲＣＧ２は−ＳＨ基とすることができ；
− ＲＣＧ１は−Ｎ_３基を表す場合、ＲＣＧ２は−Ｃ≡ＣＨ基またはシクロオクチン部分等の活性化Ｃ≡Ｃとすることができ；
− ＲＣＧ１は−ＯＨ基または−ＮＨ_２基を表す場合、ＲＣＧ２はカルボン酸官能基またはアミド官能基とすることができ；
− ＲＣＧ１は−ＳＨ基を表す場合、ＲＣＧ２はマレイミド官能基またはハロアセタミド官能基とすることができ；
− ＲＣＧ１は−Ｃ≡ＣＨ官能基または活性化Ｃ≡Ｃを表す場合、ＲＣＧ２は−Ｎ_３基とすることができ；
− ＲＣＧ１は、Ｏ−アルキルヒドロキシルアミン官能基またはＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐｅｎｇｌｅｒ反応基質を表す場合、ＲＣＧ２はアルデヒド官能基またはケトン官能基とすることができる。

言及することができるＧの例としては：

を挙げることができる。

本発明は、式（ＩＩ）のクリプトフィシンペイロードと式（ＩＩＩ）のコンジュゲート：

とに関し、

ここで、リンカーＬは式（ＩＶ）：

である
（式中：
・Ｌ１は、
・Ｙ＝（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｎ（Ｒ_１１）である場合、単結合またはＮＲ_１６（ヘテロ）アリール−ＣＲ_１５Ｒ_１４−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）基；
・Ｙ＝（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｏ−または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｓである場合、ＮＲ_１８−（Ｃ_２〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_１７−Ｃ（＝Ｏ）基またはＮＲ_１６（ヘテロ）アリール−ＣＲ_１５Ｒ_１４−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ_１８−（Ｃ_２〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_１７−Ｃ（＝Ｏ）基；
・Ｙ＝Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）Ｏまたは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨの場合、ＮＲ_１６（ヘテロ）アリール−ＣＲ_１５Ｒ_１４基を表し；
・Ｒ_１１、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７およびＲ_１８は、互いに独立して、Ｈまたは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・（ＡＡ）_ｗは、ペプチド結合を介して互いに連結しているｗ個のアミノ酸ＡＡの配列を表し；
・ｗは１から１２、好ましくは１から６の範囲の整数を、より具体的には２または３を表し；
・Ｌ２は、単結合または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｉ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基またはＣＨ（ＳＯ_３Ｈ）−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＣＨ（ＳＯ_３Ｈ）基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−シクロヘキシル基またはＮＲ_１９−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基またはＮＲ_２０−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｉ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基またはＮＲ_２１−アリール基またはＮＲ_２１−へテロアリール基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_２２Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_２２Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ基を表す。より具体的には、Ｌ２は、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ基またはＣＨ（ＳＯ_３Ｈ）−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１およびＲ_２２は、互いに独立して、Ｈまたは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・ｉは１から５０の間の、好ましくは１から１０の間の整数を表す。（ｉは１と５０の間の全ての値を取ることができる））。

ＡＡは、立体配置ＤまたはＬの天然または非天然アミノ酸を示し、より具体的には：アラニン（Ａｌａ）、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、２−アミノ−２−シクロヘキシル酢酸、２−アミノ−２−フェニル酢酸、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、システイン（Ｃｙｓ）、α，α−ジメチル−γ−アミノ酪酸、β，β−ジメチル−γ−アミノ酪酸、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、ε−アセチル−リジン（ＡｃＬｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、バリン（Ｖａｌ）から選択される。より具体的には、ＡＡは、アラニン（Ａｌａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ε−アセチル−リジン（ＡｃＬｙｓ）、バリン（Ｖａｌ）から選択される。

配列（ＡＡ）_ｗは式：

を有する
（式中、Ｒ_２３は、上に記載のアミノ酸のうちの１つの側鎖を表す）。配列の例は次のとおりである：Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−ＡｃＬｙｓ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｉｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ−Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｐｈｅ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｈｅ、Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ。

Ｙ＝（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｎ（Ｒ_１１）、より具体的にはＣＨ_２ＮＨの場合、ＲＣＧ１−Ｌは次の（ＩＶ１〜１７）：

のうちの１つとすることができる
（式中：
・（ＡＡ）_ｗは、上に記載の、ペプチド結合を介して互いに連結しているｗ個のアミノ酸ＡＡの配列を表し；
・ｗは１から１２、好ましくは１から６の範囲の整数を、より具体的には２または３を表し；
・ｉは１から５０の間の、好ましくは１から１０の間の整数を表し（ｉは１と５０の間の全ての値を取ることができる）；
・Ｍ_１、Ｍ_２、Ｍ_３およびＭ_４は、互いに独立して、ＣＲ_２４およびＮから選択され；
・Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２およびＲ_２４は、互いに独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、より具体的には水素原子またはメチル基を表す）。

Ｙ＝（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｏまたは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｓ、より具体的にはＣＨ_２ＯまたはＣＨ_２Ｓの場合、ＲＣＧ１−Ｌは次の（ＩＶ１８〜３４）：

のうちの１つとすることができる
（式中：
・（ＡＡ）_ｗは、上に記載の、ペプチド結合を介して互いに連結しているｗ個のアミノ酸ＡＡの配列を表し；
・ｗは１から１２、好ましくは１から６の範囲の整数を、より具体的には２または３を表し；
・ｉは１から５０の間の、好ましくは１から１０の間の整数を表し（ｉは１と５０の間の全ての値を取ることができる）；
・Ｍ_１、Ｍ_２、Ｍ_３およびＭ_４は、互いに独立して、ＣＲ_２４およびＮから選択され；
・Ｒ_１７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２およびＲ_２４は、互いに独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、より具体的には水素原子またはメチル基を表す）。

Ｙ＝（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｎ（Ｒ_１１）、より具体的にはＣＨ_２ＮＨの場合、ＲＣＧ１−Ｌはまた次の（ＩＶ３５〜５１）：

のうちの１つとすることができる
（式中：
・（ＡＡ）_ｗは、上に記載の、ペプチド結合を介して互いに連結しているｗ個のアミノ酸ＡＡの配列を表し；
・ｗは１から１２、好ましくは１から６の範囲の整数を、より具体的には２または３を表し；
・ｉは１から５０の間の、好ましくは１から１０の間の整数を表し（ｉは１と５０の間の全ての値を取ることができる）；
・Ｊ_１、Ｊ_２、Ｊ_３およびＪ_４は、互いに独立して、ＣＲ_２４およびＮから選択され；
・Ｍ_１、Ｍ_２、Ｍ_３およびＭ_４は、互いに独立して、ＣＲ_２４およびＮから選択され；
・Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２およびＲ_２４は、互いに
独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、より具体的には水素原子またはメチル基を表す）。

Ｙ＝（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｏまたは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｓ、より具体的にはＣＨ_２ＯまたはＣＨ_２Ｓの場合、ＲＣＧ１−Ｌはまた次の（ＩＶ５２〜６８）：

のうちの１つとすることができる
（式中：
・（ＡＡ）_ｗは、上に記載の、ペプチド結合を介して互いに連結しているｗ個のアミノ酸ＡＡの配列を表し；
・ｗは１から１２、好ましくは１から６の範囲の整数を、より具体的には２または３を表し；
・ｉは１から５０の間の、好ましくは１から１０の間の整数を表し（ｉは１と５０の間の全ての値を取ることができる）；
・Ｊ_１、Ｊ_２、Ｊ_３およびＪ_４は、互いに独立して、ＣＲ_２４およびＮから選択され；
・Ｍ_１、Ｍ_２、Ｍ_３およびＭ_４は、互いに独立して、ＣＲ_２４およびＮから選択され；
・Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７、Ｒ_１８、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２および
Ｒ_２４は、互いに独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、より具体的には水素原子またはメチル基を表す）。

Ｙ＝Ｃ（＝Ｏ）Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）Ｏまたは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ、より具体的にはＣ（＝Ｏ）ＯまたはＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）Ｏの場合、ＲＣＧ１−Ｌは次の（ＩＶ６９〜８５）：

のうちの１つとすることができる
（式中：
・（ＡＡ）_ｗは、上に記載の、ペプチド結合を介して互いに連結しているｗ個のアミノ酸ＡＡの配列を表し；
・ｗは１から１２、好ましくは１から６の範囲の整数を、より具体的には２または３を表し；
・ｉは１から５０の間の、好ましくは１から１０の間の整数を表し（ｉは１と５０の間の全ての値を取ることができる）；
・Ｊ_１、Ｊ_２、Ｊ_３およびＪ_４は、互いに独立して、ＣＲ_２４およびＮから選択され；
・Ｍ_１、Ｍ_２、Ｍ_３およびＭ_４は、互いに独立して、ＣＲ_２４およびＮから選択され；
・Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２およびＲ_２４は、互いに独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、より具体的には水素原子またはメチル基を表す）。

Ｙ＝Ｃ（＝Ｏ）または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）の場合、本発明はまた、式（ＩＩ）のクリプトフィシンペイロードと式（ＩＩＩ）のコンジュゲート：

とに関し、
ここで、リンカーＬは式（Ｖ）：

である
（式中：
・（ＡＡ）’_ｗは、ペプチド結合を介して互いに連結しているｗ個のアミノ酸ＡＡの配列を表し；
・ｗは１から１２、好ましくは１から６の範囲の整数を、より具体的には２または３を表し；
・Ｒ_２５は水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｌ３は、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｉ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ基またはＣＨ（ＳＯ_３Ｈ）−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−（ＯＣＨ_２ＣＨ_２）_ｉ−Ｏ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基またはＮＲ_１９−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基またはＮＲ_２０−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｉＣＨ_２ＣＨ_２基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−シクロヘキシル−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_１９−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−シクロヘキシル−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_２０−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｉ−ＣＨ_２ＣＨ_２基またはＮＲ_２１−アリール−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_１９−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基またはＮＲ_２１−ヘテロアリール−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ_１９−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_２２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｉ−（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２およびＲ_２５は水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・ＲＣＧ１は、上に規定の通り、抗体上に存在する反応性化学基に向けて反応性である、反応性化学基を表し；
・Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、Ｒ_９およびＲ_１０は上に規定のとおりである）。

ＡＡは、立体配置ＤまたはＬの天然または非天然アミノ酸を示し、より具体的には、アラニン（Ａｌａ）、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、２−アミノ−２−シクロヘキシル酢酸、２−アミノ−２−フェニル酢酸、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、システイン（Ｃｙｓ）、α，α−ジメチル−γ−アミノ酪酸、β，β−ジメチル−γ−アミノ酪酸、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、ε−アセチル−リジン（ＡｃＬｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、バリン（Ｖａｌ）から選択される。より具体的には、ＡＡは、アラニン（Ａｌａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ε−アセチル−リジン（ＡｃＬｙｓ）、バリン（Ｖａｌ）から選択される。

配列（ＡＡ）’_ｗは式：

を有する
（式中、Ｒ_２６は、上に記載のアミノ酸のうちの１つの側鎖を表す）。配列の例は次のとおりである：Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ、Ｌｙｓ−Ｖａｌ、ＡｃＬｙｓ−Ｖａｌ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−ＤＰｈｅ、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｌｙｓ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｃｉｔ−Ｐｈｅ、Ｃｉｔ−Ｌｅｕ、Ｃｉｔ−Ｉｌｅ、Ｃｉｔ−Ｔｒｐ、ＡｌａーＰｈｅ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ、Ｃｉｔ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ、Ｃｉｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ。

Ｙ＝Ｃ（＝Ｏ）または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）、より具体的にはＣ（＝Ｏ）またはＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）の場合、ＲＣＧ１−Ｌは次の（ＩＶ８６〜１０１）：

のうちの１つとすることができる
（式中：
・（ＡＡ）’_ｗは、上に記載の、ペプチド結合を介して互いに連結しているｗ個のアミノ酸ＡＡの配列を表し；
・ｗは１から１２、好ましくは１から６の範囲の整数を、より具体的には２または３を表し；
・ｉは１から５０の間の、好ましくは１から１０の間の整数を表し（ｉは１と５０の間の全ての値を取ることができる）；
・Ｍ_１、Ｍ_２、Ｍ_３およびＭ_４は、互いに独立して、ＣＲ_２４およびＮから選択され；
・Ｒ_１９、Ｒ_２０、Ｒ_２１、Ｒ_２２、Ｒ_２４およびＲ_２５は、互いに独立して、水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、より具体的には水素原子またはメチル基を表す）。

リンカーＬはまた、例示の化合物から選択することができる。

本発明によれば、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物を以下の方法により製造できる。

クリプトフィシン化合物を製造するための方法
Ｗ＝ＣＨ_２Ｎ_３またはＣＨ_２ＮＨ_２の場合での式（Ｉ）の化合物を製造するための一般ルートＡ

以下に詳述した工程を用いて、フラグメントＡ、Ｂ、ＣおよびＤによりクリプトフィシン化合物Ｐ_１からＰ_３を製造する：
工程（ｉ）：例えばＨＯＡｔおよびＨＡＴＵ等のカップリング試薬の存在下でのフラグメントＡＤ１とＢＣとの間のペプチドカップリング；
工程（ｉｉ）：例えばＴＦＡを用いる酸性条件での脱保護および例えばＨＯＡｔおよびＨＡＴＵ等のカップリング試薬の存在下での大環状化；
工程（ｉｉｉ）：例えばｍ−ＣＰＢＡを使用するオレフィンのエポキシドへの酸化；
工程（ｖ）：例えばＴＣＥＰを使用するアジド基の還元。

フラグメントＡおよびＢを以下に記載した合成に従って製造した。メチルエステルとして保護化されたフラグメントＣは、Ｒ_４＝Ｈ、Ｒ_５＝Ｍｅ（Ｒ）、Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｈ（ＣＡＳ番号［９２５３５−２６−７］）；Ｒ_４＝Ｈ、Ｒ_５＝Ｍｅ（Ｓ）、Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｈ（ＣＡＳ番号［１１８１３８−５６−０］）；Ｒ_４＝Ｒ_５＝Ｍｅ、Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｈ（ＣＡＳ番号［２５３０７−８２−８］）；Ｒ_２＝Ｈ、Ｒ_３＝Ｍｅ（Ｒ）、Ｒ_４＝Ｈ、Ｒ_５＝Ｍｅ（Ｒ）（ＣＡＳ番号［８６５４４−９２−５］）；Ｒ_２＝Ｈ、Ｒ_３＝Ｍｅ（Ｓ）、Ｒ_４＝Ｈ、Ｒ_５＝Ｍｅ（Ｒ）（ＣＡＳ番号［８６５４４−９３−６］）；Ｒ_２＝Ｈ、Ｒ_３＝Ｍｅ（Ｒ）、Ｒ_４＝Ｒ_５＝Ｍｅ（ＣＡＳ番号［１３１５０５２−２５−５］）；Ｒ_２＝Ｈ、Ｒ_３＝Ｍｅ（Ｓ）、Ｒ_４＝Ｒ_５＝Ｍｅ（ＣＡＳ番号［１３１５０５０−９６−４］）；Ｒ_２＝Ｈ、Ｒ_３＝ｉＰｒ（Ｒ）、Ｒ_４＝Ｒ_５＝Ｍｅ（ＣＡＳ番号［１３１４９９９−０６−８］）；Ｒ_２＝Ｈ、Ｒ_３＝ｉＰｒ（Ｓ）、Ｒ_４＝Ｒ_５＝Ｍｅ（ＣＡＳ番号［１３１５０５４−３３−１］）；Ｒ_２＝Ｒ_３＝Ｒ_４＝Ｒ_５＝Ｍｅ（ＣＡＳ番号［９０８８６−５３−６］）；Ｒ_４およびＲ_５はそれらが結合する炭素原子と一緒になってシクロプロピル基を形成（ＣＡＳ番号［９１４２２６−２６−９］）に関して市販されている。これらは実施例に記載した通りに製造もできる。市販されていないフラグメントＣは実施例に記載した通りに製造した。全てのフラグメントＤは市販されている：Ｌ−Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ（ＣＡ
Ｓ番号［３５６６１−３９−３］）；Ｌ−Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−ＯＨ（ＣＡＳ番号［６８８５８−２０−８］）；Ｌ−Ｆｍｏｃ−ｔｅｒｔ−Ｌｅｕ−ＯＨ（ＣＡＳ番号［１３２６８４−６０−７］）；Ｌ−Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（ＣＡＳ番号［３５６６１−６０−０］）；Ｌ−Ｆｍｏｃ−ＮＭｅ−Ｌｅｕ−ＯＨ（ＣＡＳ番号［１０３４７８−６２−２］）；Ｌ−Ｆｍｏｃ−３−ジメチルアミノ−Ａｌａ−ＯＨ（ＣＡＳ番号［５８７８８０−８６−２］）；Ｌ−Ｆｍｏｃ−（Ｏアリル）Ａｓｐ−ＯＨ（ＣＡＳ番号［１４６９８２−２４−３］）；Ｌ−Ｆｍｏｃ−４−メチル−Ｌｅｕ−ＯＨ（ＣＡＳ番号［１３９５５１−７４−９］）。構成単位ＡＤ１およびＢＣは以下に記載した合成に従って製造した。

Ｗ＝ＣＨ_２ＯＨまたはＣＨ_２Ｎ_３またはＣＨ_２ＮＨ_２の場合での式（Ｉ）の化合物を製造するための一般ルートＢ

以下に詳述した工程を用いて、フラグメントＡ、Ｂ、ＣおよびＤによりクリプトフィシン化合物Ｐ_２からＰ_４を製造する：
工程（ｉ）：例えばＨＯＡｔおよびＨＡＴＵ等のカップリング試薬の存在下でのフラグメントＡＤ１とＢＣとの間のペプチドカップリング；
工程（ｉｉ）：例えばＴＦＡを用いる酸性条件での脱保護、例えばＨＯＡｔおよびＨＡＴＵ等のカップリング試薬の存在下での大環状化および水およびＡｃＯＥｔの混合物中例えばＮａＯＨを用いるｐＨ６〜７での酢酸塩の加水分解；
工程（ｉｉｉ）：例えばイミダゾール等の塩基の存在下例えばクロロトリイソプロピルシランを用いるシリルエーテルとしてのベンジル酸アルコール保護化；例えばｍ−ＣＰＢＡを使用するオレフィンのエポキシドへの酸化；例えばＴＢＡＦ溶液を使用するシリルエーテルの脱保護。
工程（ｉｖ）：ＤＰＰＡおよび例えばＤＢＵ等の塩基の存在下でのアジド化；
工程（ｖ）：例えばＴＣＥＰを使用するアジド基の還元。

フラグメントＡおよびＢは以下に記載した合成に従って製造した。フラグメントＣは前章に報告した通り市販されているか、または実施例に記載した通りに製造される。全てのフラグメントＤは前章に報告した通り市販されている。構成単位ＡＤ２およびＢＣは以下に記載した合成に従って製造した。

Ｗ＝ＣＨ_２ＯＨまたはＣＨ_２Ｎ_３またはＣＨ_２ＮＨ_２の場合での式（Ｉ）の化合物を製造するための一般ルートＣ

以下に詳述した工程を用いて、ＳａｋｕｒａｉアルコールならびにフラグメントＢ、ＣおよびＤによりクリプトフィシン化合物Ｐ_２からＰ_４を製造する：
工程（ｉ）：例えばＨＯＡｔおよびＨＡＴＵ等のカップリング試薬の存在下でのフラグメントＡＤ３と代替のＢＣとの間のペプチドカップリング；
工程（ｉｉ）：例えばＧｒｕｂｂｓＩ触媒等の触媒の存在下での閉環メタセシスによる大環状化；
工程（ｉｉｉ）：例えば１０％ＴＦＡ等の酸性条件でのｐ−メトキシベンジルエーテルの脱保護；
工程（ｉｖ）：次亜塩素酸ナトリウムの存在下例えばＴＥＭＰＯ等の酸化剤を使用するアルコールの酸化；
工程（ｖ）：例えばホスファゼン塩基Ｐ_２−Ｅｔ等の塩基の存在下での、適切に置換されたイソチオシネオール−誘導化キラルスルホニウムを使用する不斉Ｃｏｒｅｙ−Ｃｈａｙｋｏｖｓｋｙ反応によるエポキシドの導入；
工程（ｖｉ）：例えばＴＣＥＰを使用するアジド基の還元。

ＳａｋｕｒａｉアルコールおよびフラグメントＢは以下に記載した合成に従って製造した。フラグメントＣは前章に報告した通り市販されているか、または実施例に記載した通りに製造される。全てのフラグメントＤは前章に報告した通り市販されている。構成単位ＡＤ３および代替のＢＣは以下に記載した合成に従って製造した。

Ｗ＝ＣＨ_２ＳＨの場合での式（Ｉ）の化合物の製造

以下に詳述した工程を用いて、Ｐ_４により他のクリプトフィシン化合物Ｐ_５およびＰ_６を製造する：
工程（ｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下メタンスルホニルクロリドを用いるクロロ基の導入；
工程（ｉｉ）：スキーム３に示した中間体の二量体が通常生成される反応の過程で、ＨｕＪ．ら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９９年、６４巻、４９５９〜４９６頁に従いＴＢＡＦおよびヘキサメチルジシラチアンからｉｎｓｉｔｕで製造したテトラブチルアンモニウムトリメチルシリルチオレートを用いる官能基化；
工程（ｉｉｉ）：例えばＴＣＥＰ等のホスフィンを使用する二量体の還元。

スキーム１、２、３および４はｎ＝１の場合を表すが、以下に詳述しおよびＷＯ２０１１／００１０５２のスキーム２に記載されている工程を用いてＰ_２、Ｐ_３またはＰ_４を出発物としｎ＞１の場合の式（Ｉ）の化合物を製造するためにも適用できる：

工程（ｉ）：ジオール基を得るための酸性媒体中でのエポキシ環の開環；例えば濃過塩素酸を使用できる；
工程（ｉｉ）：例えば過ヨウ素酸ナトリウムを使用するジオールの酸化開裂；
工程（ｉｉｉ）：例えば臭化物の適切なハロゲン化ホスホニウム、および一例としてＢｕＬｉの強塩基を使用するＷｉｔｔｉｇ反応；
工程（ｉｖ）：例えばｍ−ＣＰＢＡを使用するオレフィンのエポキシドへの酸化；
工程（ｖ）：例えばＴＢＡＦ溶液を使用するシリルエーテルの脱保護。

Ｗ＝ＣＯ_２Ｈの場合での式（Ｉ）の化合物の製造

以下に詳述した工程を用いて、Ｐ_４により他のクリプトフィシン化合物Ｐ_７およびＰ_８を製造する：
工程（ｉ）：デス−マーチン試薬を使用する酸化；
工程（ｉｉ）：２メチル−２−ブテンの存在下でのＰｉｎｎｉｃｋ型の酸化（ＰｉｎｎｉｃｋＨ．Ｗ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ１９８１年、３７巻、２０９１〜２０９６頁）。

スキーム６はｎ＝０の場合を示すが、Ｗ＝（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｈの場合において（ＣＨ_２）_ｎ＋１ＯＨ基を有するＰ_４の類似体を出発物として、式（Ｉ）の化合物を製造するためにも適用できる。スキーム１、２、３、４、５および６はパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これらはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）の他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

クリプトフィシンペイロードを製造するための方法
式（ＩＩ）の化合物は式（Ｉ）のクリプトフィシン化合物およびリンカー前駆体（ＬＰ）を出発物としスキーム７に従って製造できた：

Ｗは、
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＨ（Ｒ_１１）、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＮＨＲ_１１；・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＯＨ、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＯＨ；
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＳＨ、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＳＨ；
・ＣＯ_２Ｈ；
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＣＯ_２Ｈ、より具体的には（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｈ；または
・（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｎ_３を表す。
式中、Ｒ_１１は水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、より具体的にはメチル基を示す。
リンカー前駆体ＬＰは、Ｗ基とＬＰ上に存在する化学官能基との反応後に、クリプトフィシン化合物中にリンカーＬの前駆体を導入する機能を有する。

スキーム７において、種々の工程および／または反応がクリプトフィシン化合物（Ｉ）を出発物としてクリプトフィシンペイロード（ＩＩ）を製造するために必要である。例えばＺ_ａＲ_ａ＝−Ｏ−ＮＨＳの場合、Ｚ_ａＲ_ａ＝−Ｏ−アリルであるリンカーＬは、対応するリンカー前駆体を使用して導入し、続いてエステル官能基を脱保護し、−Ｏ−ＮＨＳを導入できる。例えばモルホリンの捕捉剤アミンの存在下例えばＰｄ（ＰＰｈ_３）_４のパラジウム触媒で処理することにより脱保護を行うことができ、例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣを用いてまたは例えばＤＣＣ等のカップリング剤の存在下ＮＨＳを用いて活性化を行うことができる。このＺ_ａＲ_ａ基の他のＺ_ａＲ_ａ基への変換（例えば−Ｏ−アリル→−Ｏ−ＮＨＳ）は、他のＺ_ａＲ_ａ基、特に前記した基を得るために適用できる。

スキーム７’は同様に、各々マレイミド、ハロアセトアミド、アミノまたはアジド基を有するリンカーを含むクリプトフィシン化合物の製造を示す（Ｌ^＊はＬ＝−Ｌ^＊−マレイミドまたはＬ＝−Ｌ^＊−ハロアセトアミドまたはＬ＝−Ｌ^＊−ＮＨ_２−またはＬ＝−Ｌ^＊−Ｎ_３のようなリンカーのフラグメントを示す）。

これらの化合物は、アミノ基を含むリンカーＬ’を含むクリプトフィシン化合物と変性剤との間の反応により得られ、各々マレイミド、ハロアセトアミド、アミノまたはアジド基を導入する。

式（ＩＩ）の化合物は代替的に、同じ式（Ｉ）のクリプトフィシン化合物および他のリンカー前駆体（ＬＰ’）を出発物とし、スキーム８に従って製造できた：

スキーム８において、いくつかの工程および／または反応により、クリプトフィシン化合物（Ｉ）を出発物としてクリプトフィシンペイロード（ＩＩ）に導かれることが必然である。例えばＺ_ａＲ_ａ＝−Ｏ−ＮＨＳの場合、保護化リンカー前駆体Ｌ’を導入し、続いて脱保護し、リンカー前駆体Ｌ’’とカップリングしてＺ_ａＲ_ａ＝−Ｏ−ＮＨＳに直接活性化できるカルボン酸官能基を導入する、または最初に脱保護し引き続いて活性化する（Ｌ’およびＬ’’はＬ＝Ｌ’−Ｌ’’のようにリンカーのフラグメントを表す）。例えばピペリジンの塩基で処理することにより脱保護を行うことができ、リンカーＬ’’へのカップリングは、例えばグルタル酸無水物の環状無水物の開環を通して進行し、例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣを用いてまたは例えばＤＣＣ等のカップリング剤の存在下ＮＨＳを用いて活性化を行うことができる。

Ｗ基とＬＰ上に存在する化学官能基との間での反応の例は、カルボン酸官能基を有するリンカー前駆体ＬＰとＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２との間またはアミン官能基を有するリンカー前駆体ＬＰとＷ＝ＣＯ_２Ｈまたは（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｈとの間のいずれかのアミド化であり、例えばＥＤＣＩまたはＨＯＢｔ等のカップリング剤の存在下でこの反応を行うことができる。これはアミン官能基を有するリンカー前駆体ＬＰとＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＯＨおよびｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（アルコールをカルボネートの形で活性化）から得られたＷ’＝（ＣＨ_２）_ｎＯ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（４−ニトロフェニル）とを以下のスキーム（Ｒ_１７＝Ｈまたは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル）に従って反応させることもできる：
−ＮＨＲ_１７＋クリプト−（ＣＨ_２）_ｎＯ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−（４−ニトロフェニル）→クリプト−（ＣＨ_２）_ｎＯ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ_１７−

同種の反応は、カルボネートとして活性化されたアルコール官能基を有するリンカー前駆体ＬＰとＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２との間で行うこともできる。他の反応の例は、アルコール官能基を有するリンカー前駆体とＷ＝ＣＯ_２Ｈまたは（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｈとの間のエステル化であり、例えばＭＮＢＡ等のカップリング剤の存在下でこの反応を行うことができる。他の反応の例は、アルキン基を有するリンカー前駆体とＷ＝（ＣＨ_２）Ｎ_３との間の銅触媒アジド−アルキンシクロ付加であり、この反応は硫酸銅およびアスコルビン酸ナトリウムの存在下で行うことができる。

スキーム７に基づき、Ｗ＝（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２ならびにｎ＝１、Ｒ_１５＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ１）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＥＤＣおよびＨＯＡｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのペプチドカップリング；
工程（ｉｉ）：例えばテトラキス−（トリフェニルホスフィン）パラジウム等の触媒の存在下でのアリルエステルの脱保護；
工程（ｉｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム８に基づき、Ｗ＝（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２ならびにｎ＝１、Ｒ_１１＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ１）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＥＤＣおよびＨＯＡｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのペプチドカップリング；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基の存在下でのＦｍｏｃアミンの脱保護；
工程（ｉｉｉ）：グルタル酸無水物とのカップリング；
工程（ｉｖ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム９および１０は、ｎ＝１、Ｒ_１１＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ１）の場合を表すが、これらはＲＣＧ１＝Ｃ（＝Ｏ）ＯＮＨＳであるその他のリンカーＬ、すなわちｎ≠１および／またはＲ_１１≠Ｈおよび／またはＡＬＫ≠（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ１）の場合ならびにＬ（ＩＶ２）およびＬ（ＩＶ３）の場合にも適用できる。これらはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これらはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）のその他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

ｎ＝１、Ｒ_１１＝ＨおよびＲＣＧ１＝マレイミド、ハロアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２すなわちリンカーＬ（ＩＶ４）からＬ（ＩＶ１７）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＥＤＣおよびＨＯＡｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのペプチドカップリング；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基の存在下でのＦｍｏｃアミンの脱保護。

スキーム１１は、ｎ＝１、Ｒ_１１＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_５であるＬ（ＩＶ４）、ｎ＝１およびＲ_１１＝ＨであるＬ（ＩＶ８）、ｎ＝１、Ｒ_１１＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_４であるＬ（ＩＶ１２）、ｎ＝１、Ｒ_１１＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ１４）ならびにｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｈ、ＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３およびＡＬＫ’＝（ＣＨ_２）_２であるＬ（ＩＶ１６）の場合を表すが、これはＲＣＧ１＝マレイミド、ヨード
アセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるその他のリンカーＬ（ＩＶ４）からＬ（ＩＶ１７）にも適用できる。これはヨードアセトアミド反応性基に対して示すが、ブロモアセトアミド反応性基に対して同様に適用できる。これはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）のその他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

スキーム７に基づき、Ｘ＝ＯまたはＳであるＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＸならびにｎ＝１、Ｒ_１７およびＲ_１８＝ＨならびにＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ１８）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールまたはベンジル酸チオールのｐ−ニトロフェニル−（チオ）カルボネートとしての活性化。
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのアミンとの反応による（チオ）カルバメートの生成；
工程（ｉｉｉ）：例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム等の触媒の存在下でのアリルエステルの脱保護；
工程（ｉｖ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム８に基づき、Ｘ＝ＯまたはＳであるＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＸならびにｎ＝１、Ｒ_１７およびＲ_１８＝ＨならびにＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ１８）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのアミンとの反応による（チオ）カルバメートの生成；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基の存在下でのＦｍｏｃアミンの脱保護；
工程（ｉｉｉ）：グルタル酸無水物とのカップリング；
工程（ｉｖ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム１２および１３は、ｎ＝１、Ｒ_１７およびＲ_１８＝ＨならびにＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ１８）の場合を表すが、これらはＲＣＧ１＝Ｃ（＝Ｏ）ＯＮＨＳであるその他のリンカーＬ、すなわちｎ≠１および／またはＲ_１７、Ｒ_１８≠Ｈおよび／またはＡＬＫ≠（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ１８）の場合ならびにＬ（ＩＶ１９）およびＬ（ＩＶ２０）の場合にも適用できる。これらはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これらはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）のその他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

Ｘ＝ＯまたはＳおよびＲＣＧ１＝マレイミド、ハロアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＸすなわちリンカーＬ（ＩＶ２１）から（ＩＶ３４）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う、（チオ）カルバメートの生成；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基の存在下でのＦｍｏｃアミンの脱保護。

スキーム１４は、ｎ＝１、Ｒ_１７およびＲ_１８＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_５であるＬ（ＩＶ２１）の場合、ｎ＝１およびＲ_１７およびＲ_１８＝ＨであるＬ（ＩＶ２５）の場合、ｎ＝１、Ｒ_１７およびＲ_１８＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_４であるＬ（ＩＶ２９）の場合、ｎ＝１、Ｒ_１７およびＲ_１８＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ３１）の場合ならびにｎ＝１、Ｒ_１７、Ｒ_１８およびＲ_２２＝Ｈ、ＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３ならびにＡＬＫ’＝（ＣＨ_２）_２であるＬ（ＩＶ３３）の場合を表すが、これはＲＣＧ１＝マレイミド、ヨードアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるその他のリンカーＬ（ＩＶ２１から３４）にも適用できる。これはヨードアセトアミド反応性基に対して示すが、ブロモアセトアミド反応性基に対して同様に適用できる。これはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）のその他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

スキーム７に基づき、Ｗ＝（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２ならびにｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ３５）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う、カルバメートの生成；
工程（ｉｉ）：例えばテトラキス−（トリフェニルホスフィン）パラジウム等の触媒の存在下でのアリルエステルの脱保護；
工程（ｉｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム８に基づき、Ｗ＝（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２ならびにｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ３５）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：適切なｐ−ニトロフェニルカルボネート試薬の存在下例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う、カルバメートの生成；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基の存在下でのＦｍｏｃアミンの脱保護；
工程（ｉｉｉ）：グルタル酸無水物とのカップリング；
工程（ｉｖ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム１５および１６は、ｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ３５）の場合を表すが、これらはＲＣＧ１＝Ｃ（＝Ｏ）ＯＮＨＳであるその他のリンカーＬ、すなわちｎ≠１および／またはＲ_１１、Ｒ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６≠Ｈおよび／またはＪ_１、Ｊ_２、Ｊ_３、Ｊ_４≠ＣＨおよび／またはオルト−ベンジル酸アルコールおよび／またはＡＬＫ≠（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ３５）の場合ならびにＬ（ＩＶ３６）およびＬ（ＩＶ３７）の場合にも適用できる。これらはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これらはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）の他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

ｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびＲＣＧ１＝マレイミド、ハロアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＮＨ_２すなわちリンカーＬ（ＩＶ３８）からＬ（ＩＶ１５１）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：適切なｐ−ニトロフェニルカルボネート試薬の存在下例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う、カルバメートの生成；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基の存在下でのＦｍｏｃアミンの脱保護。

スキーム１７は、ｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_５であるＬ（ＩＶ３８）、ｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝ＨおよびＪ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびパラ−ベンジル酸アルコールであるＬ（ＩＶ４２）、ｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_４であるＬ（ＩＶ４６）、ｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ４８）ならびにｎ＝１、Ｒ_１１＝Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_２２＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコール、ＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３およびＡＬＫ’＝（ＣＨ_２）_２であるＬ（ＩＶ５０）の場合を示すが、これはＲＣＧ１＝マレイミド、ヨードアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるその他のリンカーＬ（ＩＶ３８）からＬ（ＩＶ５１）にも適用できる。これはパラ−ベンジル酸アルコールを与えるが、これはオルト−ベンジル酸アルコールにも適用できる。これはヨードアセトアミド反応性基に対して示すが、ブロモアセトアミド反応性基に対して同様に適用できる。これはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）の他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

スキーム７に基づき、Ｘ＝ＯまたはＳであるＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＸならびにｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_１７＝Ｒ_１８＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ５２）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのアミンとの反応による（チオ）カルバメートの生成；
工程（ｉｉ）：例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム等の触媒の存在下でのアリルエステルの脱保護；
工程（ｉｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム８に基づき、Ｘ＝ＯまたはＳであるＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＸならびにｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_１７＝Ｒ_１８＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ５２）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

スキーム１８および１９は、ｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_１７＝Ｒ_１８＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ５２）の場合を表すが、これらはＲＣＧ１＝Ｃ（＝Ｏ）ＯＮＨＳであるその他のリンカーＬ、すなわちｎ≠１および／またはＲ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６、Ｒ_１７、Ｒ_１８≠Ｈおよび／またはＪ_１、Ｊ_２、Ｊ_３、Ｊ_４≠ＣＨおよび／またはオルト−ベンジル酸アルコールおよび／またはＡＬＫ≠（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ５２）の場合ならびにＬ（ＩＶ５３）およびＬ（ＩＶ５４）の場合にも適用できる。これらはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これらはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）の他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

Ｘ＝ＯまたはＳおよびＲＣＧ１＝マレイミド、ハロアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるＷ＝（ＣＨ_２）_ｎＸすなわちリンカーＬ（ＩＶ５５）から（ＩＶ６８）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのアミンとの反応による（チオ）カルバメートの生成；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基の存在下でのＦｍｏｃアミンの脱保護。

スキーム２０は、ｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_１７＝Ｒ_１８＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコール、ＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_２およびＡＬＫ’＝（ＣＨ_２）_５であるＬ（ＩＶ５５）の場合、ｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_１７＝Ｒ_１８＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_２であるＬ（ＩＶ５９）の場合、ｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_１７＝Ｒ_１８＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコール、ＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_２およびＡＬＫ’＝（ＣＨ_２）_４であるＬ（ＩＶ６３）の場合、ｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_１７＝Ｒ_１８＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコール、ＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_２およびＡＬＫ’＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ６５）の場合ならびにｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_１７＝Ｒ_１８＝Ｒ_２２＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコール、ＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_２、ＡＬＫ’＝（ＣＨ_２）_５およびＡＬＫ’’＝（ＣＨ_２）_２であるＬ（ＩＶ６７）の場合を表すが、これはＲＣＧ１＝マレイミド、ヨードアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるその他のリンカーＬ（ＩＶ５５から６８）にも適用できる。これはヨードアセトアミド反応性基に対して示すが、ブロモアセトアミド反応性基に対して同様に適用できる。これはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）の他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

スキーム７に基づき、Ｗ＝Ｃ（＝Ｏ）ＯならびにＲ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ６９）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＭＮＢＡ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＭＡＰおよびＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのエステル化；
工程（ｉｉ）：例えばテトラキス−（トリフェニルホスフィン）パラジウム等の触媒の存在下でのアリルエステルの脱保護；
工程（ｉｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム８に基づき、Ｗ＝Ｃ（＝Ｏ）ＯならびにＲ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ＝（ＩＶ６９）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＭＮＢＡ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＭＡＰおよびＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのエステル化；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基の存在下でのＦｍｏｃアミンの脱保護；
工程（ｉｉｉ）：グルタル酸無水物とのカップリング；
工程（ｉｖ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム２１および２２は、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ６９）の場合を表すが、これらはＲＣＧ１＝Ｃ（＝Ｏ）ＯＮＨＳであるその他のリンカーＬ、すなわちＲ_１４、Ｒ_１５、Ｒ_１６≠Ｈおよび／またはＪ_１、Ｊ_２、Ｊ_３、Ｊ_４≠ＣＨおよび／またはオルト−ベンジル酸アルコールおよび／またはＡＬＫ≠（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ６９）の場合ならびにＬ（ＩＶ７０）およびＬ（ＩＶ７１）の場合にも適用できる。これらはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これらはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）の他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびＲＣＧ１＝マレイミ
ド、ハロアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるＷ＝Ｃ（＝Ｏ）ＯすなわちリンカーＬ（ＩＶ７２）からＬ（ＩＶ８５）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＭＮＢＡ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＭＡＰおよびＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのエステル化；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基の存在下でのＦｍｏｃアミンの脱保護。

スキーム２３は、ｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_５であるＬ（ＩＶ７２）、ｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝ＨおよびＪ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨおよびパラ−ベンジル酸アルコールであるＬ（ＩＶ７６）、ｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_４であるＬ（ＩＶ８０）、ｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコールおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（ＩＶ８２）ならびにｎ＝１、Ｒ_１４＝Ｒ_１５＝Ｒ_１６＝Ｒ_２２＝Ｈ、Ｊ_１＝Ｊ_２＝Ｊ_３＝Ｊ_４＝ＣＨ、パラ−ベンジル酸アルコール、ＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３およびＡＬＫ’＝（ＣＨ_２）_２であるＬ（ＩＶ８４）の場合を表すが、これはＲＣＧ１＝マレイミド、ヨードアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるその他のリンカーＬ（ＩＶ７２）からＬ（ＩＶ８５）にも適用できる。これはパラ−ベンジル酸アルコールを与えるが、これはオルト−ベンジル酸アルコールにも適用できる。これはヨードアセトアミド反応性基に対して示すが、ブロモアセトアミド反応性基に対して同様に適用できる。これはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）の他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

Ｗ＝Ｃ（＝Ｏ）ＯならびにＲ_２５＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_７であるＬ＝（Ｖ８６）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのペプチドカップリング；
工程（ｉｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＳＣで処理することによるカルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化。

スキーム２４は、Ｒ_２５＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_７であるＬ（Ｖ８６）の場合を表すが、これらはＲＣＧ１＝Ｃ（＝Ｏ）ＯＮＨＳである他のリンカーＬ、すなわちＲ_２５≠Ｈおよび／またはＡＬＫ≠（ＣＨ_２）_７であるＬ（Ｖ８６）の場合ならびにＬ（Ｖ８７）およびＬ（Ｖ８８）の場合にも適用できる。これらはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これらはクリプトフィシン化合物を与え
るが、式（Ｉ）の他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

Ｒ_３０＝ＨおよびＲＣＧ１＝マレイミド、ハロアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンであるＷ＝Ｃ（＝Ｏ）ＯすなわちリンカーＬ（Ｖ８９）からＬ（Ｖ１０１）の場合の式（ＩＩ）の化合物の製造

工程（ｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのペプチドカップリング；
工程（ｉｉ）：例えばＴＣＥＰ等の還元剤で処理することによるアジドの還元。

スキーム２５は、Ｒ_２５＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_５であるＬ（Ｖ８９）、Ｒ_２５＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（Ｖ９３）、Ｒ_２５＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_４であるＬ（Ｖ９６）、Ｒ_２５＝ＨおよびＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３であるＬ（Ｖ９８）ならびにＲ_２２＝Ｒ_２５＝Ｈ、ＡＬＫ＝（ＣＨ_２）_３およびＡＬＫ’＝（ＣＨ_２）_２であるＬ（Ｖ１００）の場合を表すが、これはＲＣＧ１＝マレイミド、ヨードアセトアミド、ＮＨ_２、Ｎ_３またはシクロオクチンである他のリンカーＬ（Ｖ８９）からＬ（Ｖ１０１）にも適用できる。これはヨードアセトアミド反応性基に対して示すが、ブロモアセトアミド反応性基にも同様に適用できる。これはパラ位にリンカーを与えるが、オルトまたはメタ位に同様に適用できる。同様に、これはクリプトフィシン化合物を与えるが、式（Ｉ）
の他の化合物、特にＤ_１〜Ｄ_１９を製造するためにも適用できる。

クリプトフィシンコンジュゲートを製造するための方法
式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ＩＩ）のクリプトフィシンペイロードおよび抗体（Ａｂ）を出発物としスキーム２６に従って製造できた：

（式中：
・Ｙは、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−ＮＲ_１１もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｏもしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｓを表し；
または代替的にＹは、Ｃ（＝Ｏ）ＯもしくはＯ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−Ｃ（＝Ｏ）Ｏを表し；
または代替的にＹは、

のような（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル−チアゾール−を表し；
Ｙはフェニル核のオルト（ｏ）、メタ（ｍ）またはパラ（ｐ）位に位置し；
・Ｒ_１１は水素原子または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基を表し；
・Ｌは、上記定義した通り、フェニル核のオルト（ｏ）、メタ（ｍ）またはパラ（ｐ）位に位置するリンカーを表し；
・ＲＣＧ１は、上記定義した通り、抗体上に存在する反応性化学基に向けて反応性である反応性化学基を表し；
・Ａｂは抗体を表す）。

式（Ｉ）のクリプトフィシン化合物を合成するための構成単位を製造するための方法
フラグメントＡの一般的合成

以下に詳述した工程を用いて、フラグメントＡを適切なヒドロキシエステルを出発物として１２工程で製造できる：
工程（ｉ）：例えばｐ−ＴｓＯＨ等の触媒量の酸の存在下トリクロロアセトイミデートとして活性化されたｐ−メトキシベンジルアルコールを用いるｐ−メトキシベンジルエーテルとしてのアルコールの保護化；
工程（ｉｉ）：例えば水素化ホウ素リチウム等の還元剤を使用するエステルの還元；
工程（ｉｉｉ）：次亜塩素酸ナトリウムの存在下例えばＴＥＭＰＯ等の酸化剤を使用するアルコールの酸化；
工程（ｉｖ）：四塩化スズの存在下アリルトリブチルスズを用いるジアステレオ選択的アリル化；
工程（ｖ）：例えばＧｒｕｂｂｓＩＩ触媒等の触媒の存在下ｔｅｒｔ−ブチルアクリレートを用いるクロスメタセシス；
工程（ｖｉ）：ＣＡＮを用いるｐ−メトキシベンジルエーテルの脱保護および引き続く例えばｐ−ＴｓＯＨ等の触媒量の酸の存在下エタンジチオールでの処理；
工程（ｖｉｉ）：例えばイミダゾール等の塩基の存在下クロロトリエチルシランを用いるシリルエーテルとしてのアルコールの保護化；
工程（ｖｉｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＤＭＳＯおよび塩化オキサリルを用いるＳｗｅｒｎ酸化；
工程（ｉｘ）：例えば臭化物の適切なハロゲン化ホスホニウムおよび例えばＢｕＬｉ等の強塩基を用いるＷｉｔｔｉｇ反応；
工程（ｘ）：例えばＴＢＡＦ溶液を使用するシリルエーテルの脱保護。
工程（ｘｉ）：例えば酸化マンガン等の酸化剤を使用するベンジル酸アルコールの酸化；工程（ｘｉｉ）：ベンゼンチオールの存在下ＡＩＢＮを使用する二重結合の異性化。

ヒドロキシエステルはＲ_１＝Ｍｅ（ＣＡＳ番号［７２６５７−２３−９］）、Ｅｔ（ＣＡＳ番号［７２６０４−８１−０］）およびｉＰｒ（ＣＡＳ番号［７２６０４−８２−１］）に関して市販されている。ハロゲン化ホスホニウムの製造はＷＯ２０１１／００１０
５２に記載されている。

フラグメントＢの一般的合成

以下に詳述した工程を用いて、フラグメントＢを適切なアミノ酸を出発物として２工程で製造できる：
工程（ｉ）：例えばＴＥＡ等の塩基の存在下Ｂｏｃ_２Ｏで処理することによるアミンの保護化；
工程（ｉｉ）：例えばＬｉＯＨ等の塩基を使用するメチルエステルの鹸化。

メチルエステルとして保護化されたアミノ酸は、Ｒ_９＝３−Ｃｌ、４−ＯＭｅ（ＣＡＳ番号［７０４８７０−５４−２］）；３−Ｃｌ、４−ＯＥｔ（ＣＡＳ番号［１２５６９６３−００−９］）；３−Ｃｌ、４−ＯＰｒ（ＣＡＳ番号［１２５９７０９−５９−９］）；３−Ｃｌ、４−ＯＭｅ、５−Ｆ（ＣＡＳ番号［１２１３６７０−９８−４］）；３−Ｃｌ、４−ＯＭｅ、５−Ｃｌ（ＣＡＳ番号［１２５９７０１−４２−２］）；３−Ｃｌ、４−ＯＭｅ、５−ＯＭｅ（ＣＡＳ番号［１２１２８２０−３４−２］）；３−Ｃｌ、４−ＯＨ、５−ＯＭｅ（ＣＡＳ番号［１２１３４２６−９３−７］）；３−Ｃｌ、４−ＮＨ_２（ＣＡＳ番号［１２１３６７２−６４−０］）；２−Ｃｌ、３−Ｃｌ、４−ＮＨ_２（ＣＡＳ番号［１２１３６０７−４９−８］）；３−Ｃｌ、４−ＮＨ_２、５−Ｆ（ＣＡＳ番号［１２１３４００−６６−８］）；３−Ｃｌ、４−ＮＨ_２、５−Ｃｌ（ＣＡＳ番号［１２１３４８０−３０−８］）に関して市販されている。

構成単位ＡＤ１の一般的合成

以下に詳述した工程を用いて、フラグメントＡおよびＤより構成単位ＡＤ１を製造する：
工程（ｉ）：例えばＭＮＢＡ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＭＡＰおよびＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのフラグメントＤのフラグメントＡを用いるエステル化；
工程（ｉｉ）：例えばトリメトキシ水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤を使用するアルデヒドのアルコールへの還元；
工程（ｉｉｉ）：例えばＴＥＡ等の塩基の存在下メタンスルホニルクロリドで処理することによるアルコールのメシレートとしての活性化；アジ化ナトリウムで処理することによるアジド基によるメシレートの置換；
工程（ｉｖ）：例えばピペリジン等の塩基で処理することによるアミンの脱保護。

構成単位ＡＤ２の一般的合成

以下に詳述した工程を用いて、フラグメントＡおよびＤより構成単位ＡＤ２を製造する：
工程（ｉ）：例えばＭＮＢＡ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＭＡＰおよびＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのフラグメントＤのフラグメントＡを用いるエステル化；
工程（ｉｉ）：例えばトリメトキシ水素化ホウ素ナトリウム等の還元剤を使用するアルデヒドのアルコールへの還元；
工程（ｉｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基で処理することによるアミンの脱保護。

構成単位ＡＤ３の一般的合成

工程（ｉ）：例えばＭＮＢＡ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＭＡＰおよびＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのフラグメントＤのＳａｋｕｒａｉアルコールを用いるエステル化；
工程（ｉｉ）：例えばピペリジン等の塩基で処理することによるアミンの脱保護。

構成単位ＢＣの一般的合成

以下に詳述した工程を用いて、フラグメントＢおよびＣより構成単位ＢＣを製造する：工程（ｉ）：例えばＨＯＢｔおよびＥＤＣ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのフラグメントＢのフラグメントＣとのペプチドカップリング；
工程（ｉｉ）：例えばＬｉＯＨ等の塩基を使用するメチルエステルの鹸化。

代替の構成単位ＢＣの一般的合成

以下に詳述した工程を用いて、フラグメントＢおよびＣより代替の構成単位ＢＣを製造する：
工程（ｉ）：例えばＨＯＢｔおよびＥＤＣ等のカップリング剤ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でのフラグメントＢのフラグメントＣとのペプチドカップリング；
工程（ｉｉ）：例えばＴＦＡを使用する酸性条件中でのＢｏｃ基の脱保護；
工程（ｉｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下アクリロイルクロリドで処理することによるアクリルアミドの生成；
工程（ｉｖ）：例えばｔＢｕＯＫ等の塩基を使用するメチルエステルの鹸化。

リンカー前駆体ＬＰの製造
ＬＰは以下の一つである；ＬＰ_１からＬＰ_１０１はＬアミノ酸を使用して記載されるが、Ｄアミノ酸にも適用できる。これらはｗ＝２に関して得られるが、ペプチドカップリング工程を必要なだけ何回も繰り返すことによりｗ＞２にも同様に適用できる。

ＬＰ_１

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中室温で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；アリルエステルとしてモノ保護化された二酸はｎ＝２（モノアリルスクシネート）に関して市販されているか、またはメチルもしくはｔｅｒｔ−ブチルモノエステルのトランスエステル化により製造でき、これらはｎ＝２から６に関して市販されている。

ＬＰ_２

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えば担持ＤＣＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；アリルエステルとしてモノ保護化されたＰＥＧ二酸は以下のスキームに従って製造できる：
ＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

工程（ｉ）：ＰＥＧ鎖の伸長；ＴＨＦまたはＤＭＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中、不飽和の保護化酸をナトリウムの活性化により生成させた触媒量のアルコキシドで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。後者の場合、構造上に存在するアルコール官能基のトリフルオロ酢酸塩を生成できる。このトリフルオロ酢酸塩は続く工程（ｉｉｉ）の間で開裂する；
工程（ｉｉｉ）：メチルエステルとしてのカルボン酸の保護化；ＭｅＯＨ等の極性非プロトン性溶媒中トリメチルシリルジアゾメタンで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：メチルエステルの鹸化；ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒の混合物中ＬｉＯＨの存在下で反応を行う；
工程（ｖ）：アリルエステルとしてのカルボン酸の保護化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中アリルアルコール、例えばＥＤＣ等のカップリング剤および例えばＤＭＡＰ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｖｉ）：ＰＥＧ鎖の伸長；ＴＨＦまたはＤＭＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中、ハロゲン化エステルをＴＨＰエーテルとしてモノ保護化されたＰＥＧジオールのアルコキシドで処理することにより反応を行う。このタイプのモノ保護化ＰＥＧジオールの製造は文献に十分に記載されている：例えばＲｉｃｈａｒｄＡ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００５年、１１巻、７３１５〜７３２１頁またはＳａｋｅｌｌａｒｉｏｕＥ．Ｇ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ２００３年、５９巻、９０８３〜９０９０頁参照。

出発物のＰＥＧジオールはｉ＝３から１２に関して市販されている。

ＬＰ_３

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＭＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネートで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中室温で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；アリルエステルとしてモノ保護化されたスルホ二酸は以下のスキームに従って製造できる：

代替のＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

工程（ｉ）：アリルエステルとしてのカルボン酸の保護化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中アリルアルコール、例えばＥＤＣ等のカップリング剤および例えばＤＭＡＰ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：カルボン酸のα−スルホン化；ＤＣＥのような極性非プロトン性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下クロロスルホン酸で処理することにより７５℃で反応を行う。
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸部分の生成；水酸化ナトリウムで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：チオアセチルによる臭化物の置換；ＴＨＦ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下チオ酢酸を使用して−２０℃で反応を行う；
工程（ｖ）：スルホン酸部分の生成；過酸化水素および酢酸で処理することにより室温で反応を行う。

シアノカルボン酸はｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_４

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；マレイミドカルボン酸はｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_５

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；マレイミド酸はＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝ＣＨ_２ＣＨ_２およびｉ＝１から７に関して市販されており、その他は以下のスキームに従って製造できる：

ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝ＣＨ_２ＣＨ_２およびｉ＞７の場合

ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２およびＡＬＫ’＝ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

ＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２およびＡＬＫ’≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

ＡＬＫおよびＡＬＫ’≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

工程（ｉ）：ＰＥＧ鎖の伸長；ＴＨＦまたはＤＭＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中、不飽和の保護化酸をナトリウムの活性化により生成させた触媒量のアルコキシドで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉ）：マレイミドへの光延反応；ＴＨＦ等の極性非プロトン性溶媒中ＰＰｈ_３およびＤＩＡＤの存在下マレイミドをＰＥＧヒドロキシ酸により処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護；
工程（ｉｖ）：ＰＥＧ鎖の伸長；ＴＨＦまたはＤＭＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中、ハロゲン化エステルをＴＨＰエーテルとしてモノ保護化されたＰＥＧジオールのアルコキシドで処理することにより反応を行う。このタイプのモノ保護化ＰＥＧジオールの製造は、文献に十分に記載されている：例えばＲｉｃｈａｒｄＡ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００５年、１１巻、７３１５〜７３２１頁またはＳａｋｅｌｌａｒｉｏｕＥ．Ｇ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ２００３年、５９巻、９０８３〜９０９０頁参照；
工程（ｖ）：ＴＨＰエーテルの選択的脱保護；ＭｅＯＨ等の極性プロトン性溶媒中触媒量の塩化アセチルを使用して反応を行う；
工程（ｖｉ）：アルコールのメシレートとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＴＥＡ等の塩基の存在下でメタンスルホニルクロリドにて処理することにより反応を行う；
工程（ｖｉｉ）：求核置換；ＤＭＦ等の極性非プロトン性溶媒中例えば水素化ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｖｉｉｉ）：アルコールのベンジルエーテルとしての保護化；ＴＨＦ等の極性非プロトン性溶媒中例えば水素化ナトリウム等の塩基の存在下で臭化ベンジルにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｘ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するアルコールの脱保護；工程（ｘ）：例えば炭素担持パラジウム等の触媒の存在下で水素化分解することによるアルコールの脱保護。

出発物のＰＥＧジオールはｉ＝３から１２に関して市販されている。出発物のＡＬＫジオールはｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_６

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＭＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネートにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；マレイミドシクロヘキサンカルボン酸はＡＬＫ＝ＣＨ_２に関して市販されており、その他は下記のスキームに従って製造することができる：

ｎ＝２から４の場合

ｎ＞４の場合

工程（ｉ）：水素化；酢酸中例えば６０ｐｓｉの水素圧下酸化白金等の触媒の存在下にて６０℃で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの保護化；ジオキサン／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性プロトン性溶媒中例えばＮａＯＨ等の塩基の存在下でベンジルクロロホルメートにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸の保護化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング試薬および例えばＤＭＡＰ等の塩基の存在下でｔｅｒｔ−ブタノールにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：アミンの脱保護；ＭｅＯＨ等の極性プロトン性溶媒中例えばパラジウム等の触媒の存在下で水素化分解することにより反応を行う；
工程（ｖ）：マレイミド部分の導入；ＤＭＦ等の極性非プロトン性溶媒中ＮＨＳの存在下無水マレイン酸および例えばＥＤＣ等のカップリング試薬で処理することにより反応を行う；
工程（ｖｉ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護；
工程（ｖｉｉ）：パラジウム−触媒カップリング；ＴＨＦ等の極性非プロトン性溶媒中塩化リチウム、亜鉛およびトリメチルクロロシランならびに例えばテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム等の触媒の存在下でブロモ−ＡＬＫ−シアノ誘導体にて処理することにより反応を行う。

適切なブロモ−ＡＬＫ−シアノ誘導体はｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_７

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のα−スルホン化；ＤＣＥのような極性非プロトン性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でクロロスルホン酸にて処理することにより７５℃で反応を行う；
工程（ｉｖ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＭＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネートにて処理することにより室温で反応を行う；
工程（ｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中室温で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；マレイミド酸はｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_８

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートは市販されている。

ＬＰ_９

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしてのカップリングおよび活性化；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートとアミノカルボン酸とのカップリングを、ＤＣＭ／ＤＭＦ混合物等の極性非プロトン性溶媒中室温で行い、続いてＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネートおよび例えばＤＩＥＡ等の塩基を加える；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテート、ｎ＝１から１２に関してアミノカルボン酸およびｎ＝１から７に関してＮ−メチル化アミノカルボン酸は市販されている。

ＬＰ_１０

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしてのカップリングおよび活性化；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートとアミノカルボン酸とのカップリングをＤＣＭ／ＤＭＦ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で行い、続いてＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネートおよび例えばＤＩＥＡ等の塩基を加える；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートは市販されており；ＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２およびＲ_２０＝Ｈの場合、アミノＰＥＧカルボン酸はｉ＝１から６に関して市販されており、その他はｔｅｒｔ−ブチルアクリレートおよび対応するアミノ−ＰＥＧ−アルコールから製造でき；ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合、これらは以下のスキームに従って製造できる：

ＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２およびＲ_２０≠Ｈの場合

ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合
Ｒ_２０＝Ｈの場合

Ｒ_２０≠Ｈの場合

工程（ｉ）：アミンの保護化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＴＥＡ等の塩基の存在下でアミンをジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉ）：カルボン酸の保護化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング試薬および例えばＤＭＡＰ等の塩基の存在下でｔｅｒｔ−ブタノールにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：窒素原子のアルキル化；ＴＨＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中ハロゲン化物等の脱離基を有する試薬の存在下で水素化ナトリウム等の塩基にて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護；
工程（ｖ）：ＰＥＧ鎖の伸長；ＴＨＦまたはＤＭＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中、ハロゲン化エステルをＷＯ２００７／１２７４４０に記載されている通りに水素化ナトリウムまたはカリウムナフタレニドの活性化により生成したベンゾフェノン−イミン−ＰＥＧ−アルコールのアルコキシドで処理することにより反応を行う；
工程（ｖｉ）：エステルの鹸化；Ｈ_２Ｏの存在下エステルをＬｉＯＨと反応させることにより反応を行う。

アミノ−ＰＥＧ−アルコールは、例えばｉ＝３、４、７、８に関して市販されており、または米国特許第７２３０１０１号に記載されている手順に従ってｉ＝３から１２に関して市販されているＰＥＧジオールから製造できる。アミン官能基のベンゾフェノンでの保護化は、ＢＦ_３エーテレート等のＬｅｗｉｓ酸の存在下共沸脱水により行うことができる。

ＬＰ_１１

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンＦｍｏｃの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしてのカップリングおよび活性化；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートとアミノカルボン酸とのカップリングをＤＣＭ／ＤＭＦ混合物等の極性非プロトン性溶媒中室温で行い、続いてＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネートおよび例えばＤＩＥＡ等の塩基を加える；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中室温で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートは市販されており；アミノ−（ヘテロ）アリール−カルボン酸は、例えば４−アミノ−２−安息香酸、６−アミノ−３−ピリジンカルボン酸、５−アミノ−２−ピラジンカルボン酸、２−アミノ−５−ピリミジンカルボン酸または６−アミノ−１，２，４，５−テトラジンカルボン酸等が市販されている。

ＬＰ_１２

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；アミノカルボン酸はｎ＝１から１１に関して市販されている。

ＬＰ_１３

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；ＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２の場合、Ｆｍｏｃ−保護化アミノＰＥＧカルボン酸はｉ＝１から６に関して市販されており、その他はｔｅｒｔ−ブチルアクリレートおよび対応するアミノ−ＰＥＧ−アルコールから製造でき；ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合、これらはリンカー前駆体ＬＰ_１０にて記載したスキームに従って製造できる。アミン基のＦｍｏｃ基での保護化は例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＦｍｏｃＯＳｕ（ＣＡＳ番号［８２９１１−６９−１］）で処理することにより実現できる。

ＬＰ_１４

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：アジド基の導入；アセトン／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中アジ化ナトリウムで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；ブロモカルボン酸はｎ＝１から１１に関して市販されている。

ＬＰ_１５

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；アジドＰＥＧ酸は以下のスキームに従って製造できる：
ＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

工程（ｉ）：ＰＥＧ鎖の伸長；ＴＨＦまたはＤＭＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中、不飽和の保護化酸をナトリウムの活性化により生成させた触媒量のアルコキシドで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉ）：アルコール官能基の活性化；ＤＣＭ等の極性溶媒中例えばＴＥＡ等の塩基の存在下メタンスルホニルクロリドを使用して反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：アジド基によるメシレートの置換；アセトン／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中アジ化ナトリウムで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用する脱保護；
工程（ｖ）：ＰＥＧ鎖の伸長；ＴＨＦまたはＤＭＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中、ＴＨＰエーテルとしてモノ保護化されたＰＥＧジオールのアルコキシド、例えば水素化ナトリウムで生成したアルコキシドでハロゲン化エステルを処理することにより反応を行う。このタイプのモノ保護化ＰＥＧジオールの製造は文献に十分に記載されている：例えばＲｉｃｈａｒｄＡ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００５年、１１巻、７３１５〜７３２１頁またはＳａｋｅｌｌａｒｉｏｕＥ．Ｇ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ２００３年、５９巻、９０８３〜９０９０頁参照；
工程（ｖｉ）：メチルエステルの鹸化；ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒の混合物中ＬｉＯＨの存在下で室温で反応を行う。

出発物のＰＥＧジオールはｉ＝３から１２に関して市販されており；ブロモメチルエステルはｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_１６

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：シクロオクチンカップリング；ＤＣＭ等の極性溶媒中で反応を行う；
工程（ｉｖ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；シクロオクチンはｎ’＝１、２、３および５に関して市販されており；ＮＨＳエステルとして一活性化されている二酸はｎ＝１から３に関しおよびｎ＝４から１０に関して市販されており、これらは例えばＤＣＣ等のカップリング剤および例えばＤＭＡＰ等の塩基の存在下、市販されている二酸をＮＨＳで活性化することにより製造できる。

ＬＰ_１７

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：シクロオクチンカップリング；ＤＣＭ等の極性溶媒中で反応を行う；
工程（ｉｖ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用する脱保護；
工程（ｖ）：ＮＨＳエステルとしてのシクロオクチン−ＰＥＧカルボン酸の活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｖｉ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；シクロオクチンはｎ’＝１、２、３および５に関して市販されており；ＮＨＳエステルとして一活性化されているＰＥＧ二酸は以下のスキームに従って製造する：
ＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

工程（ｉ）：ＰＥＧ鎖の伸長；ＴＨＦまたはＤＭＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中、不飽和の保護化酸をナトリウムの活性化により生成させた触媒量のアルコキシドで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護；
工程（ｉｉｉ）：一酸のＮＨＳエステルとしてのモノ活性化；ＴＨＦ等の極性溶媒中例えばＤＣＣ等のカップリング剤および例えばＤＭＡＰ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｖ）：ＰＥＧ鎖の伸長；ＴＨＦまたはＤＭＦ等の無水極性非プロトン性溶媒中、ハロゲン化エステルをＴＨＰエーテルとしてモノ保護化されたＰＥＧジオールのアルコキシドで処理することにより反応を行う。このタイプのモノ保護化ＰＥＧジオールの製造は文献に十分に記載されている：例えばＲｉｃｈａｒｄＡ．ら、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００５年、１１巻、７３１５〜７３２１頁またはＳａｋｅｌｌａｒｉｏｕＥ．Ｇ．ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ２００３年、５９巻、９０８３〜９０９０頁参照；
工程（ｖ）：メチルエステルとしてのカルボン酸の保護化；ＭｅＯＨ等の極性非プロトン性溶媒中トリメチルシリルジアゾメタンで処理することにより反応を行う；
工程（ｖｉ）：メチルエステルの鹸化；ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒の混合物中ＬｉＯＨの存在下で反応を行う；
工程（ｖｉｉ）：酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＴＨＦ等の極性溶媒中例えばＤＣＣ等のカップリング剤および例えばＤＭＡＰ等の塩基の存在下でＮＨＳを用いて反応を行う。

ＬＰ_１８

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：ペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下またはＤＣＭ等の極性溶媒中プロピルホスホン酸無水物等のカップリング試薬および例えばＴＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う；
工程（ｖ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されている。アリルエステルとしてモノ保護化された二酸はｎ＝２（モノアリルスクシネート）に関して市販されているか、またはメチルまたはｔｅｒｔ−ブチルモノエステルのトランスエステル化により製造でき、これらはｎ’＝２から６に関して市販されている。

ＬＰ_１９

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；アリルエステルとしてモノ保護化されたＰＥＧ二酸はリンカー前駆体ＬＰ_２にて記載したスキームに従って製造される。

ＬＰ_２０

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；アリルエステルとしてモノ保護化されたスルホ二酸はリンカー前駆体ＬＰ_３にて記載したスキームに従って製造される。

ＬＰ_２１

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：ペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下またはＤＣＭ等の極性溶媒中プロピルホスホン酸無水物等のカップリング試薬および例えばＴＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う。
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う；
工程（ｖ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；マレイミドカルボン酸はｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_２２

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：ペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下またはＤＣＭ等の極性溶媒中プロピルホスホン酸無水物等のカップリング試薬および例えばＴＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えば担持ＤＣＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う；
工程（ｖ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；マレイミドＰＥＧ酸はＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝ＣＨ_２ＣＨ_２およびｉ＝１から７に関して市販されており、その他はリンカー前駆体ＬＰ_５にて記載したスキームに従って製造される。

ＬＰ_２３

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；マレイミドシクロヘキサンカルボン酸はＡＬＫ＝ＣＨ_２に関して市販されており、その他はリンカー前駆体ＬＰ_６に関して記載したスキームに従って製造できる。

ＬＰ_２４

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：ペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下またはＤＣＭ等の極性溶媒中プロピルホスホン酸無水物等のカップリング試薬および例えばＴＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のα−スルホン化；ＤＣＥのような極性非プロトン性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でクロロスルホン酸にて処理することにより７５℃で反応を行う；
工程（ｉｖ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＥＤＣ等のカップリング剤の存在下でＮＨＳにて処理することにより反応を行う；
工程（ｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う；
工程（ｖｉ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；マレイミド酸はｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_２５

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：ペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下またはＤＣＭ等の極性溶媒中プロピルホスホン酸無水物等のカップリング試薬および例えばＴＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う；
工程（ｉｖ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートは市販されている。

ＬＰ_２６

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：ペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下またはＤＣＭ等の極性溶媒中プロピルホスホン酸無水物等のカップリング試薬および例えばＴＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アミンの脱保護；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしてのカップリングおよび活性化；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートとアミノカルボン酸とのカップリングをＤＣＭ／ＤＭＦ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で行い、続いてＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネートおよび例えばＤＩＥＡ等の塩基を加える；
工程（ｉｖ）：ジペプチドとＮＨＳエステルとの間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う；
工程（ｖ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートは市販されており；アミノカルボン酸はｎ＝１から１２に関して、Ｎ−メチル化アミノカルボン酸はｎ＝１から７に関して市販されている。

ＬＰ_２７

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートは市販されており；ＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２およびＲ_２０＝Ｈの場合、アミノＰＥＧカルボン酸はｉ＝１から６に関して市販されており、その他はｔｅｒｔ−ブチルアクリレートおよび対応するアミノ−ＰＥＧ−アルコールから製造でき；ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合、これらはリンカー前駆体ＬＰ_１０にて記載したスキームに従って製造できる。

ＬＰ_２８

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートは市販されており；アミノ−（ヘテロ）アリール−カルボン酸は例えば４−アミノ−２−安息香酸、６−アミノ−３−ピリジンカルボン酸、５−アミノ−２−ピラジンカルボン酸、２−アミノ−５−ピリミジンカルボン酸または６−アミノ−１，２，４，５−テトラジンカルボン酸等が市販されている。

ＬＰ_２９

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；アミノカルボン酸はｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_３０

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；Ｆｍｏｃ保護化アミノＰＥＧカルボン酸はｉ＝１から６に関して市販されており、その他はｔｅｒｔ−ブチルアクリレートおよび対応するアミノ−ＰＥＧ−アルコールから製造でき；ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合、これらはリンカー前駆体ＬＰ_１０に関するスキームに従って製造できる。アミン官能基のＦｍｏｃ基での保護化は例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＦｍｏｃＯＳｕ（ＣＡＳ番号［８２９１１−６９−１］）で処理することにより実現できる。

ＬＰ_３１

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；アジドカルボン酸はリンカー前駆体ＬＰ_１４にて記載したスキームに従って製造できる。

ＬＰ_３２

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；アジドＰＥＧカルボン酸はリンカー前駆体ＬＰ_１５にて記載したスキームに従って製造できる。

ＬＰ_３３

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；ＮＨＳエステルとして活性化されたシクロオクチンリンカーは、リンカー前駆体ＬＰ_１６にて記載したスキームに従って製造できる。

ＬＰ_３４

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；モノ保護化ジアミンはｎ＝２から４ならびにそれぞれ独立にＲ_１７およびＲ_１８＝ＨまたはＭｅに関して市販されており；ＮＨＳエステルとして活性化されたシクロオクチンリンカーは、リンカー前駆体ＬＰ_１７にて記載したスキームに従って製造できる。

ＬＰ_３５

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_１とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

多くのアニリン誘導体は、例えば４−（ヒドロキシメチル）−アニリン（ＣＡＳ番号［６２３−０４−１］）、４−（１−ヒドロキシエチル）−アニリン（ラセミ体の（ＣＡＳ番号［１４５７２−８９−５］）またはエナンチオピュア（Ｒ）（ＣＡＳ番号［２１０７５４−２５−９］）または（Ｓ）（ＣＡＳ番号［５００２２９−８４−５］））、４−アミノ−α，α−ジメチル−ベンゼン−メタノール（ＣＡＳ番号［２３２４３−０４−１］）、４−アミノ−α−メトキシ−α−メチル−ベンゼンメタノール（ＣＡＳ番号［１３７９３１８−８１−６］）、４−アミノ−α−メチル−α−トリフルオロメチル−ベンゼンメタノール（ＣＡＳ番号［８５１６５２−５６−７］）、２−アミノ−ベンゼンメタノール（ＣＡＳ番号［５３４４−９０−１］）、２−アミノ−α−メチル−ベンゼンメタノール（ラセミ（ＣＡＳ番号［１０５１７−５０−７］）またはエナンチオピュア（Ｒ）（ＣＡＳ番号［３２０５−２１−８］）または（Ｓ）（ＣＡＳ番号［３２０５−２１−８］））、６−アミノ−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［１１３２９３−７１−３］）、６−アミノ−α−メチル−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［１３３５０５４−８３−５］）、６−アミノ−α−エチル−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［１３５５２２５−８５−２］）、６−アミノ−α，α−ジメチル−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［８４３６４６−０３−８］）、５−アミノ−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［８７３６５１−９２−４］）、２−アミノ−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［２３６１２−５７−９］）、２−アミノ−α−メチル−３−ピリジンメタノール（ラセミ（ＣＡＳ番号［８６９５６７−９１−９］）またはエナンチオピュア（Ｒ）（ＣＡＳ番号［９３６７１８−０１−３］）または（Ｓ）（ＣＡＳ番号［９３６７１８−００−２］））、２−アミノ−α−エチル−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［９１４２２３−９０−８］）、２−アミノ−α，α−ジメチル−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［２１３６６６−９６−７］）、３−アミノ−４−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［１５２３９８−０５−５］）、３−アミノ−α−メチル−４−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［１２４２４７０−８８−７］）、３−アミノ−α，α−メチル−４−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［１３３５７−８１−８］）、４−アミノ−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［１３８１１６−３４−４］）、４−アミノ−α−メチル−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［７４１２２３−４９−４］）、４−アミノ−α，α−メチル−３−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［１３３９０１３−２６−１］）、３−アミノ−２−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［５２３７８−６３−９］）、３−アミノ−α−メチル−２−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［９５４２４０−５４−１］）、３−アミノ−α，α−メチル−２−ピリジンメタノール（ＣＡＳ番号［８９９４３８−５７−４］）等市販されている。

ＬＰ_３６

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_２とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

多くのアニリン誘導体は、例えばＬＰ_３５に関して示した誘導体等市販されている。

ＬＰ_３７

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_３とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_３８

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４とアニリン誘導体との間のペプチドカップリン
グ；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_３９

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_５とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４０

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_６とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４１

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_７とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４２

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_８とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４３

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ９_３とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４４

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_１０とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４５

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_１１とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４６

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_１２とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４７

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_１３とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４８

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_１４とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_４９

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_１５とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_５０

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_１６とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_５１

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_１７とアニリン誘導体との間のペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＭｅＯＨ混合物等の極性溶媒中例えばＥＥＤＱ等のカップリング剤の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ｐ−ニトロフェニル−クロロホルメートで処理することによるベンジル酸アルコールのｐ−ニトロフェニル−カルボネートとしての活性化。

ＬＰ_５２

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_３５とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_５３

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_３６とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_５４

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_３７とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_５５

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_３８とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_５６

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_３９とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_５７

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４０とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_５８

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４１とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_５９

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４２とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６０

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４３とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６１

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４４とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６２

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４５とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６３

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４６とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６４

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４７とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６５

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４８とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６６

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_４９とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６７

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：リンカー前駆体ＬＰ_５０とモノ保護化ジアミンとの間でのカルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６８

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：カルバメートの生成；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護。

ＬＰ_６９

はリンカー前駆体ＬＰ_３５について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７０

はリンカー前駆体ＬＰ_３６について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７１

はリンカー前駆体ＬＰ_３７について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７２

はリンカー前駆体ＬＰ_３８について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７３

はリンカー前駆体ＬＰ_３９について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７４

はリンカー前駆体ＬＰ_４０について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７５

はリンカー前駆体ＬＰ_４１について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７６

はリンカー前駆体ＬＰ_４２について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７７

はリンカー前駆体ＬＰ_４３について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７８

はリンカー前駆体ＬＰ_４４について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_７９

はリンカー前駆体ＬＰ_４５について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_８０

はリンカー前駆体ＬＰ_４６について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_８１

はリンカー前駆体ＬＰ_４７について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_８２

はリンカー前駆体ＬＰ_４８について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_８３

はリンカー前駆体ＬＰ_４９について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_８４

はリンカー前駆体ＬＰ_５０について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_８５

はリンカー前駆体ＬＰ_５１について記載した１番目の工程に従って製造される。

ＬＰ_８６

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：エステル化によるＷａｎｇ樹脂への酸のカップリング；ＤＣＭ等の極性溶媒中例えばＤＩＣ等のカップリング試薬および例えばＤＭＡＰ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：Ｆｍｏｃ基の脱保護；ＤＭＦ等の極性溶媒中例えばピペリジン等の塩基で処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：ペプチドカップリング；ＤＭＦ等の極性溶媒中例えばＨＯＢｔおよびＨＡＴＵ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｖ）：樹脂の開裂；ＤＭＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えばＴＦＡ等の酸の存在下で反応を行う。

Ｆｍｏｃ保護化アルキル−アミノ酸はｎ＝１から９に関して市販されており；ＦｍｏｃＬ−アミノ酸は市販されている。

ＬＰ_８７

は下記のスキームに従って製造される：

Ｆｍｏｃ−保護化アミノＰＥＧカルボン酸はｉ＝１から６に関して市販されており、その他はｔｅｒｔ−ブチルアクリレートおよび対応するアミノ−ＰＥＧ−アルコールから製造でき；ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合、これらはリンカー前駆体ＬＰ_１０にて記載したスキームに従って製造できる。アミン官能基のＦｍｏｃ基での保護化は、例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下ＦｍｏｃＯＳｕ（ＣＡＳ番号［８２９１１−６９−１］）で処理することにより実現でき；ＦｍｏｃＬ−アミノ酸は市販されている。

ＬＰ_８８

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：スルホアミノ酸とのペプチドカップリング；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＣＣおよびＨＯＢｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

Ｌ−アミノ酸は市販されており；Ｂｏｃ−保護化Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；スルホアミノ酸はｎ＝１および２に関して市販されており、またはその他は以下のスキームに従って製造できる：

工程（ｉ）：チオアセチルによる臭化物の置換；例えばＴＨＦ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でチオ酢酸を使用して反応を行う；
工程（ｉｉ）：スルホン酸部分の生成；過酸化水素および酢酸で処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：アジドによる臭化物の置換；例えばＤＭＡ等の極性溶媒中アジ化ナトリウムで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：メチルエステル脱保護；例えばＨＣｌとＡｃＯＨとの混合物等の酸性条件下で反応を行う；
工程（ｖ）：アジドの還元；Ｈ_２Ｏ等の極性溶媒中炭素担持パラジウム等の触媒の存在下で加水分解することにより反応を行う。

ジブロモ誘導体はｎ＝３、４および９に関して市販されている。

ＬＰ_８９

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：マレイミドアミンとのペプチドカップリング；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＣＣおよびＨＯＢｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

Ｌ−アミノ酸は市販されており；Ｂｏｃ−保護化Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；マレイミドアミンはｎ＝２から６に関して市販されている。

ＬＰ_９０

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：マレイミドＰＥＧアミンとのペプチドカップリング；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＣＣおよびＨＯＢｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

Ｌ−アミノ酸は市販されており；Ｂｏｃ−保護化Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；マレイミドＰＥＧアミンはＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝ＣＨ_２ＣＨ_２ならびにｉ＝０および１に関して市販されており、またはその他は以下のスキームに従って製造できる：ＡＬＫ＝ＡＬＫ’＝ＣＨ_２ＣＨ_２およびｉ＞１の場合

ＡＬＫおよびＡＬＫ’≠ＣＨ_２ＣＨ_２の場合

工程（ｉ）：マレイミドへの光延反応；例えばＴＨＦ等の極性非プロトン性溶媒中ＰＰｈ_３およびＤＩＡＤの存在下でＰＥＧヒドロキシ酸によりマレイミドを処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護；
工程（ｉｉｉ）：アルコールのトシレートとしての活性化；例えばＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＴＥＡ等の塩基の存在下で塩化トシルにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｖ）：トシル基の置換；例えばＴＨＦ等の極性非プロトン性溶媒中例えば水素化ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う
工程（ｖ）：ベンジル基の脱保護；例えばＭｅＯＨ等の極性溶媒中例えば炭素担持パラジウム等の触媒量の触媒の存在下で水素化分解することにより反応を行う；
工程（ｖｉ）：アルコールのメシレートとしての活性化；例えばＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＴＥＡ等の塩基の存在下でメタンスルホニルクロリドにて処理することにより反応を行う；
工程（ｖｉｉ）：求核置換；例えばＤＭＦ等の極性非プロトン性溶媒中水素化ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；

出発物のＢｏｃ−保護化ＰＥＧアミノアルコールはｉ＝２から４に関して市販されており、またはｉ＝５から８に関して市販されているＰＥＧアミノアルコールをＢｏｃ_２Ｏにより処理することにより製造でき；出発物のＡＬＫアミノアルコールはｎ＝１および３から１０に関して市販されており；出発物のベンジル基でモノ保護化されたＰＥＧジオールはｉ＝１から９に関して市販されており；出発物のＡＬＫ’ジオールはｎ＝１から１２に関して市販されている。

ＬＰ_９１

は下記のスキームに従って製造される：

Ｌ−アミノ酸は市販されており；Ｂｏｃ−保護化Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；マレイミドアミンは以下のスキームに従って製造できる：

工程（ｉ）：カルボン酸のＮＨＳエステルとしての活性化；ＤＭＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下でＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネートにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉ）：ペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

マレイミドシクロヘキサンカルボン酸はＡＬＫ＝ＣＨ_２に関して市販されており、またはその他はＬＰ_６にて記載したスキームに従って製造でき；Ｂｏｃ基でモノ保護化されたジアミンはｎ＝１から１０に関して市販されている。

ＬＰ_９２

は下記のスキームに従って製造される：

Ｌ−アミノ酸は市販されており；Ｂｏｃ−保護化Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；マレイミドＰＥＧアミンは以下のスキームに従って製造できる：

マレイミドシクロヘキサンカルボン酸はＡＬＫ＝ＣＨ_２に関して市販されており、またはその他はＬＰ_６にて記載したスキームに従って製造でき；Ｂｏｃ基でモノ保護化されたＰＥＧジアミンはｉ＝１から９に関して市販されている。

ＬＰ_９３

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：ハロゲノアセトアミドＰＥＧアミンとのペプチドカップリング；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＣＣおよびＨＯＢｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

Ｌ−アミノ酸は市販されており；Ｂｏｃ−保護化Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；ハロゲノアセトアミドアミンはｎ＝２から４および８に関して市販されており、または以下のスキームに従って製造できる：

工程（ｉｉ）：ペプチドカップリング；ＤＣＭ／ＣＨ_３ＣＮ混合物等の極性非プロトン性溶媒中で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートは市販されており；Ｂｏｃ基でモノ保護化されたジアミンはｎ＝１から１０に関して市販されている。

ＬＰ_９４

は下記のスキームに従って製造される：

Ｎ−スクシンイミジルブロモ−およびヨード−アセテートは市販されており；Ｂｏｃ基でモノ保護化されたＰＥＧジアミンはｉ＝１から９に関して市販されている。

ＬＰ_９５

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：ハロゲノアセトアミドアミンとのペプチドカップリング；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＣＣおよびＨＯＢｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

Ｌ−アミノ酸は市販されており；Ｂｏｃ−保護化Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；ハロゲノアセトアミドアミンは以下のスキームに従って製造できる：

ハロゲノアセトアミドのＮＨＳエステルはリンカー前駆体ＬＰ_１１にて記載した通りに製造でき；Ｂｏｃ基でモノ保護化されたジアミンはｎ＝１から１０に関して市販されている。

ＬＰ_９６およびＬＰ_９８

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アジドアミンとのペプチドカップリング；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＣＣおよびＨＯＢｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

Ｌ−アミノ酸は市販されており；Ｂｏｃ−保護化Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；アジドアミンはｎ＝２から８および１０に関して市販されている。

ＬＰ_９７およびＬＰ_９９

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：アジドＰＥＧアミンとのペプチドカップリング；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＣＣおよびＨＯＢｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

Ｌ−アミノ酸は市販されており；Ｂｏｃ−保護化Ｌ−アミノ酸のＮＨＳエステルは市販されており；ＡＬＫ＝ＣＨ_２ＣＨ_２に関して、アジドＰＥＧアミンはｉ＝１から８および１０に関して市販されており、ＡＬＫ≠ＣＨ_２ＣＨ_２に関して、アジドＰＥＧアミンは以下のスキームに従って製造できる：

工程（ｉ）：アルコールのメシレートとしての活性化；例えばＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＴＥＡ等の塩基の存在下でメタンスルホニルクロリドにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉ）：アジド基によるメシレートの置換；アセトン／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中アジ化ナトリウムで処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

出発物のＰＥＧアミノアルコールは、リンカー前駆体ＬＰ_９０にて記載した通りに製造できる。

ＬＰ_１００

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：シクロオクチンアミンとのペプチドカップリング；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＣＣおよびＨＯＢｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

シクロオクチンアミンはｎ＝１、２、３および５に関して市販されている。

ＬＰ_１０１

は下記のスキームに従って製造される：

工程（ｉ）：Ｂｏｃ−Ｌ−アミノ酸−ＯＮＨＳとＬ−アミノ酸との間のペプチドカップリング；ＤＭＥ／ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ混合物等の極性溶媒中例えば重炭酸ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉ）：シクロオクチンＰＥＧアミンとのペプチドカップリング；ＣＨ_３ＣＮ等の極性溶媒中例えばＤＣＣおよびＨＯＢｔ等のカップリング試薬ならびに例えばＤＩＥＡ等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸の溶液（例えばジオキサン中溶液）を使用するＢｏｃ基の脱保護。

シクロオクチンＰＥＧアミンは以下のスキームに従って製造できる：

工程（ｉ）：アルコールのメシレートとしての活性化；例えばＤＣＭ等の極性非プロトン性溶媒中例えばＴＥＡ等の塩基の存在下でメタンスルホニルクロリドにて処理することにより反応を行う；
工程（ｉｉ）：求核置換；例えばＤＭＦ等の極性非プロトン性溶媒中水素化ナトリウム等の塩基の存在下で反応を行う；
工程（ｉｉｉ）：塩酸（例えばジオキサン中溶液）のまたはトリフルオロ酢酸の溶液を使用する脱保護；
工程（ｉｖ）：アミンのＢｏｃ基での保護化；例えばＤＣＭ等の極性溶媒中例えばＴＥＡ等の塩基の存在下でＢｏｃ_２Ｏにて処理することにより反応を行う；
工程（ｖ）：ペプチドカップリング；例えばＤＣＭ等の極性溶媒中例えばＨＯＢｔおよびＥＤＣ等のカップリング試薬の存在下で反応を行う。

出発物のＡＬＫアミノアルコールはｎ＝１から１０に関して市販されており；シクロオクチンはｎ＝１、２、３および５に関して市販されている。

式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを製造するための方法
本発明のコンジュゲートは、
（ｉ）
修飾剤によって場合によりまず修飾されている抗体の、場合により緩衝化された水溶液と、
式（ＩＩ）のクリプトフィシンペイロードの水溶液であって、
式（ＩＩ）の化合物の化学基ＲＣＧ１は抗体上に存在する化学基ＲＣＧ２に向けて、特に抗体上に存在するアミノ基に向けて反応性であり、
前記化学基ＲＣＧ２は、適切であれば、共有結合の形成によって式（ＩＩ）の化合物を抗体に結合するように、修飾剤によって導入されている、
クリプトフィシンペイロードの水溶液と
を接触させ、反応させること；
（ｉｉ）次いで、工程（ｉ）で形成させたコンジュゲートを、クリプトフィシンペイロードおよび／または未反応抗体および／または形成された任意の凝集体から、場合により分離すること
にある工程を含む方法によって得ることができる。

一変形形態によれば、より具体的には、工程（ｉｉ）において、工程（ｉ）からのコンジュゲートを、未反応クリプトフィシンペイロードと形成された任意の凝集体とからだけ分離し、任意の未反応抗体を溶液中に放置する。

接触させることの機能は、共有結合の形成によりクリプトフィシンペイロードを抗体に確実に結合させるために化学基ＲＣＧ１と化学基ＲＣＧ２とを反応させることであり；好ましくは
・ＲＣＧ１が、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ａＲ_ａを表す場合、上記反応は、抗体のアミノ官能基上で、とりわけ抗体のリジン（Ｌｙｓ）残基の側鎖が持つε−アミノ基上で、ならびに抗体の重鎖および軽鎖のＮ末端のアミノ酸のα−アミノ基の上で、起こるのが好ましい。次式のコンジュゲート：ｍＡｂ−［ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｌ^＊−クリプト］_ｄがこの場合得られるが、ここで、Ｌ^＊＝リンカーＬのフラグメントはＲＣＧ１＝−Ｃ＝（＝Ｏ）−Ｚ_ａＲ_ａおよびＬ＝−Ｌ^＊Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_ａＲ_ａ等のものを含み、ｄは薬物対抗体比すなわちＤＡＲを表す；
・ＲＣＧ１は、−Ｃｌまたはマレイミドもしくはハロアセタミド基を表す場合、抗体はチオール化学基を含むことができ；
・ＲＣＧ１はアジド基を表す場合、抗体は−Ｃ≡ＣＨ部分またはシクロオクチン等の活性化三重結合を含むことができ；
・ＲＣＧ１が−ＮＨ_２を表す場合、上記反応は、酵素的触媒を使用して抗体のアミド官能基上で、とりわけ抗体のグルタミン（Ｇｌｎ）残基の側鎖が持つアミド基上で起こることができる。次式のコンジュゲート：ｍＡｂ−［Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｌ^＊−クリプト］_ｄがこの場合得られるが、ここで、Ｌ^＊＝リンカーＬのフラグメントはＲＣＧ１＝−ＮＨ_２およびＬ＝−Ｌ^＊ＮＨ_２等のものを含み、ｄは薬物対抗体比すなわちＤＡＲを表す；
・ＲＣＧ１が−Ｃ≡ＣＨまたはシクロオクチン部分等の活性化Ｃ≡Ｃを表す場合、抗体はアジド基を含むことができる。

用語「凝集体」とは、２つ以上抗体の間で形成し得る会合体を意味し、当該抗体は、コンジュゲーションによって改変された可能性がある。凝集体は、溶液中での抗体の高い濃度、溶液のｐＨ、高い剪断力、グラフトされている薬物の数およびこれらの疎水性、温度といった広範な様々なパラメータの影響下で、形成しやすいが（Ｊ．ＭｅｍｂｒａｎｅＳｃｉ．２００８、３１８、３１１〜３１６の序論に引用されている参考文献を参照のこと）、これらのパラメータのうちの幾つかの影響は、明確に解明されていない。タンパク質または抗体の場合、ＡＡＰＳＪｏｕｒｎａｌ、「ＰｒｏｔｅｉｎＡｇｇｒｅｇａｔｉｏｎａｎｄＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ」２００６、８（３）、Ｅ５７２〜Ｅ５７９を参照することができる。凝集体含有量は、ＳＥＣ等の既知の技法によって決定することができる（これに関しては、ＡｎａｌｙｔｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９９３、２１２（２）、４６９〜４８０を参照されたい）。

抗体の水溶液を、例えばリン酸カリウムもしくはＨＥＰＥＳまたは後で説明する緩衝剤Ａ等の緩衝剤の混合物といった緩衝剤で緩衝することができる。緩衝剤は、抗体の性質によって異なる。クリプトフィシンペイロードを例えばＤＭＳＯまたはＤＭＡ等の極性有機溶媒に溶解させる。

反応を一般には２０℃から４０℃の間の温度で行う。反応時間は、１時間から２４時間の間で様々であり得る。抗体とクリプトフィシンペイロードの間の反応の進度を決定するために、屈折率検出器および／もしくは紫外線検出器を備えるＳＥＣならびに／またはＨＲＭＳによって、その反応をモニタリングすることができる。置換度が不十分である場合、反応をより長く放置してもよく、および／またはクリプトフィシン化合物を添加してもよい。特定の条件に関するさらなる詳細については実施例の節で参照することができる。特定の実施形態については、例３、７、１０、１４、２０および２３に記載されている。

当業者であれば、工程（ｉｉ）の分離向けに様々なクロマトグラフ技法を自由に使える：例えば、立体排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）により、吸着クロマトグラフィー（例えば、イオン交換、ＩＥＣ）により、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）により、アフィニティークロマトグラフィーにより、セラミックヒドロキシアパタイト等の混合支持体でのクロマトグラフィーにより、またはＨＰＬＣにより、コンジュゲートを精製することができる。透析または透析濾過による精製を使用することもできる。

工程（ｉ）または（ｉｉ）の後、コンジュゲートの溶液を限外濾過および／または透析濾過工程（ｉｉｉ）に付してもよい。これらの工程の後、水溶液のコンジュゲートはこのようにして得られる。

抗体
抗体は、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体およびヒト抗体からなる群から選択されるモノクローナル抗体とすることができる。

一実施形態では、抗体は単一特異性抗体、すなわち１つの単一標的に特異的に結合する抗体である。代替的に、これは多重特異性_{［ＲＣＰ１］}抗体であってもよい。

一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ抗体、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３またはＩｇＧ_４抗体である。

本発明による抗体は、標的に特異的に結合し、それによって、細胞傷害性化合物としての生物学的活性化合物を前記標的に向けて誘導する。本明細書で使用する、「特異的に結合する」または「に特異的に結合する」または「に結合する」その他は、抗体またはその抗原結合性フラグメントが、生理的条件下で比較的に安定的である、抗原との複合体を形成することを意味する。特異的な結合は、少なくとも約１×１０^−８Ｍ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）（例えば、より小さいＫ_Ｄはより密接な結合を示す）によって特徴付けることができる。２個の分子が特異的に結合するか否か決定する方法は、当技術分野においてよく知られており、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴法等が挙げられる。本明細書に記載の通り、抗体は、表面プラズモン共鳴法、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）を使用して、これが標的および／または標的抗原に特異的に結合することによって、特徴付けられた。

標的は、細胞表面で発現するタンパク質、例えば、腫瘍細胞の表面で発現するタンパク質に通常は相当する。

一実施形態では、標的はＥｐｈＡ２受容体である。ＥｐｈＡ２受容体はエフリン受容体であり、「ＥＰＨ受容体Ａ２」または「上皮細胞受容体タンパク質−チロシンキナーゼ」とも呼ばれる（例えば、ＯＭＩＭＥｎｔｒｙ ^＊１７６９４６を参照のこと、ｏｍｉｍ．ｏｒｇ／ｅｎｔｒｙ／１７６９４６ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂｓｉｔｅで入手可、バージョンは２０１６年７月２１日に更新）_{［ＲＣＰ２］}。ＥｐｈＡ２受容体に特異的に結合する抗体は、例えば、ＷＯ２００８／０１０１０１またはＷＯ２０１１／０３９７２４に記載の抗体のうちの１つに相当するであろう。

別の実施形態では、標的はＣＤ１９である。ＣＤ１９は、Ｂリンパ球および造血系の濾胞性樹状細胞によって特異的に発現される細胞表面分子であり、「Ｂリンパ球抗原ＣＤ１９」とも呼ばれる（例えば、ＯＭＩＭＥｎｔｒｙ ^＊１０７２６５を参照のこと、ｏｍｉｍ．ｏｒｇ／ｅｎｔｒｙ／１０７２６５ｗｏｒｌｄｗｉｄｅｗｅｂｓｉｔｅで入手可、バージョンは２０１５年５月１１日に最終更新）。ＣＤ１９に特異的に結合する抗体は、例えばコルツキシマブ（Ｃｏｌｔｕｘｉｍａｂ）、すなわちコルツキシマブラブタンシン（ＣｏｌｔｕｘｉｍａｂＲａｖｔａｎｓｉｎ）の抗体部分（部分）に相当するであろう。

抗体は、場合により、先に記載のクリプトフィシンペイロードの結合を促進するように修飾剤で修飾することができる。抗体は、特に、モノクローナル、ポリクローナルまたは多重特異性とすることができる。これは、抗体フラグメントであってもよい。これはまた、マウス抗体でも、ヒト抗体でも、ヒト化抗体でも、キメラ抗体であってもよい。本発明の例において使用される抗体は、ｈｕ２Ｈ１１＿Ｒ３５７４、ＥｐｈＡ２受容体に対するアンタゴニスト抗体である。ｈｕ２Ｈ１１＿Ｒ３５７４の配列は、ＷＯ２０１１／０３９７２４（重鎖については配列番号１８、軽鎖については配列番号１６）に記載されている。

コンジュゲート
コンジュゲートは、一般に、抗体に共有結合で結合している約１から１０のクリプトフィシン化合物を含む（これが、グラフト度、または「薬物対抗体比」すなわち「ＤＡＲ」である）。この数は、抗体のおよびクリプトフィシン化合物の性質の関数として変化するとともに、またコンジュゲーションプロセスで使用される操作条件（例えば、抗体に対するクリプトフィシン化合物の当量数、反応時間、溶媒のおよび任意の共溶媒の性質）の関数としても変化する。抗体とクリプトフィシン化合物とを接触させることによって、様々なＤＡＲにより互いに個々に区別される幾つかのコンジュゲート、場合により未反応抗体、場合により凝集体を含む混合物がもたらされる。したがって、最終溶液で決定されるＤＡＲは、平均ＤＡＲに相当する。ＤＡＲは、コンジュゲートのＳＥＣ−ＨＲＭＳスペクトルのデコンボリューションから算出することができる。ＤＡＲ（ＨＲＭＳ）は、０．５超であることが好ましく、より具体的には１から１０の間であり、さらにより具体的には２から７の間である。

上記コンジュゲートを抗がん剤として使用することができる。抗体が存在するため、コンジュゲートは、健常細胞ではなく腫瘍細胞に対して高選択的となる。このことにより、クリプトフィシン化合物を腫瘍に類似した環境へとまたは直接腫瘍中へ誘導することが可能になる；（これに関しては、がん処置におけるモノクローナル抗体コンジュゲートの使用について記載している次の出版物を参照されたい：「Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇｃｏｎｊｕｇａｔｅｓｆｏｒｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ」、ＣａｒｔｅｒＰ．Ｊ．ら、ＣａｎｃｅｒＪ．２００８、１４、１５４〜１６９；「Ｔａｒｇｅｔｅｄｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ：ｃｏｎｆｅｒｒｉｎｇｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｔｏｃｙｔｏｔｏｘｉｃｄｒｕｇｓ」、ＣｈａｒｉＲ．、Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．２００８、４１、９８〜１０７））。固形がんまたはリキッドがん（ｌｉｑｕｉｄｃａｎｃｅｒ）を処置することが可能である。コンジュゲートは、単独で使用することができ、または少なくとも１つの他の抗がん剤と併用することができる。

上記コンジュゲートは、一般には１ｍｇ／ｍＬから１０ｍｇ／ｍＬの間の濃度で、緩衝水溶液の形態で製剤化される。この溶液自体を潅流形態で注入することができ、またはこの溶液を再希釈して潅流溶液を形成することができる。

以下の実施例は、本発明に従う特定の化合物の製造を記載する。これらの実施例は限定的ではなく、単に本発明を説明するのみである。

使用した分析方法
高圧液体クロマトグラフィー−質量分析法（ＬＣＭＳ）
方法Ａ１
スペクトルを、ＥＬＳＤおよびＵＶ（２１０〜４００ｎｍ）検出を使用する正のおよび／または負のエレクトロスプレーモード（ＥＳ＋／−）でのＷａｔｅｒｓＵＰＬＣ−ＳＱＤシステムで取得した。クロマトグラフィー条件は以下であった：
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＢＥＨＣ１８−１．７μｍ−２．１×５０ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）、Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：５０℃；流速：０．８ｍＬ／分；濃度勾配（２．５分）：１．８分で５から１００％のＢ；２．４分：１００％のＢ；２．４５分：０．０５分で１００から５％のＢ。

方法Ａ２
スペクトルを、ＥＬＳＤおよびＵＶ（２１０〜４００ｎｍ）検出を使用する正のエレクトロスプレーモード（ＥＳ＋）でのＷａｔｅｒｓＸｅＶｏ−ＱＴｏｆシステムで取得した。クロマトグラフィー条件は以下であった：
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＢＥＨＣ１８−１．７μｍ−２．１×１００ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）、Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：７０℃；流速：０．５５ｍＬ／分；濃度勾配（１１分）：８．３分で５から９７％のＢ；８．６分：９７％のＢ；９分：０．７分で９７から５％のＢおよび２分間５％のＢ。

方法Ａ３
スペクトルを、正のエレクトロスプレーモード（ＥＳ＋）でのＷａｔｅｒｓＸｅＶｏ−ＱＴｏｆシステムで取得した。クロマトグラフィー条件は以下であった：
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＢＥＨＣ１８−１．７μｍ−２．１×１００ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）、Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：４５℃；流速：０．６ｍＬ／分；濃度勾配（５．３分）：３分間５％のＢ；３．７分で５から１００％のＢ；４．６分：１００％のＢ；５．３分５％のＢ。

方法Ａ４
スペクトルを、ＥＬＳＤおよびＵＶ（２１０〜４００ｎｍ）検出を使用する正のおよび／または負のエレクトロスプレーモード（ＥＳ＋／−）でのＷａｔｅｒｓＵＰＬＣ−ＳＱＤシステムで取得した。クロマトグラフィー条件は以下であった：
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＢＥＨＣ１８−１．７μｍ−２．１×５０ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）、Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：４５℃；流速：０．８ｍＬ／分；濃度勾配（１０分）：８．６分で５から１００％のＢ；９．６分：１００％のＢ；９．８分：５％のＢ。

方法Ａ５
スペクトルを、ＥＬＳＤおよびＵＶ（２１０〜４００ｎｍ）検出を使用する正のおよび／または負のエレクトロスプレーモード（ＥＳ＋／−）でのＷａｔｅｒｓＵＰＬＣ−ＳＱＤシステムで取得した。クロマトグラフィー条件は以下であった：
カラム：ＡＣＱＵＩＴＹＣＳＨＣ１８−１．７μｍ−２．１×５０ｍｍ；溶媒：Ａ：Ｈ_２Ｏ（０．１％ギ酸）、Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ（０．１％ギ酸）；カラム温度：４０℃；流速：０．８５ｍＬ／分；濃度勾配（２．５分）：１．８分で５から１００％のＢ；２．４分：１００％のＢ；２．４５分：０．０５分で１００から５％のＢ。

^１Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）
^１ＨＮＭＲスペクトルを、モデルＤＲＸ−３００、ＤＲＸ−４００またはＤＲＸ−５００のいずれかのＢｒｕｋｅｒＡｖａｎｃｅ分光計により獲得した。化学シフト（δ）をｐｐｍで与える。

サイズ排除クロマトグラフィー−高分解能質量分析法（ＳＥＣ−ＨＲＭＳ）
クロマトグラフ分析は、ＡｇｉｌｅｎｔＨＰ１１００マシンおよびＷａｔｅｒｓＢＥＨＳＥＣ２００１．７μｍ（２．１×１５０ｍｍ）カラムにて、３０℃で０．５ｍＬ／分の流量および（Ａ）２５ｍＭギ酸アンモニウム＋１％ギ酸／（Ｂ）ＣＨ_３ＣＮ＋０．１％ギ酸７０／３０の１５分間の定組成溶離を用いて行った。質量分析法は、ＷａｔｅｒｓＱＴＯＦ−ＩＩマシンにて、正のモードでのエレクトロスプレーイオン化（ＥＳ＋）を用いて行った。質量スペクトルをＷａｔｅｒｓＭａｘＥｎｔ１ソフトウェアでデコンボリューションした。

分析的サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
分析を、フォトダイオードアレイ検出器を装備したＷａｔｅｒｓＡｌｌｉａｎｃｅＨＰＬＣシステムまたはＨｉｔａｃｈｉＬａｃｈｒｏｍシステムならびにＫＣｌ（０．２Ｍ）、ＫＨ_２ＰＯ_４（０．０５２Ｍ）、Ｋ_２ＨＰＯ_４（０．１０７Ｍ）およびイソプロパノール２０容量％を含むｐＨ７の緩衝液を用いる流速０．５ｍＬ／分および３０分の定組成溶離でのＴｏｓｏｈＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅＴＳＫｇｅｌＧ３０００ＳＷＸＬ５μｍ（７．８×３００ｍｍ）カラムで行った。

緩衝液
・緩衝液Ａ（ｐＨ６．５）：ＮａＣｌ（５０ｍＭ）、リン酸カリウム（５０ｍＭ）、ＥＤＴＡ（２ｍＭ）
・緩衝液Ｂ（ｐＨ６．５）：ＮａＣｌ（１４０ｍＭ）、リン酸カリウムおよびリン酸ナトリウム（９．６ｍＭ）
・ＰＢＳ（ｐＨ７．４）：ＫＨ_２ＰＯ_４（１．０６ｍＭ）、ＮａＣｌ（１５５．１７ｍＭ）、Ｎａ_２ＨＰＯ_４−７Ｈ_２Ｏ（２．９７ｍＭ）
・ＤＰＢＳ：５ＮＨＣｌ（１ｍＬ／緩衝液１０００ｍＬ）を用いてｐＨ６．５で調節したＫＣｌ（２．６７ｍＭ）、ＫＨ_２ＰＯ_４（１．４７ｍＭ）、ＮａＣｌ（１３６．９ｍＭ）、Ｎａ_２ＨＰＯ_４（８．１０ｍＭ）

抗体−薬剤コンジュゲート（ＡＤＣ）の製造に使用した一般方法
緩衝液Ａと１ＮＨＥＰＥＳとの９６：４混合物から成る水性緩衝液中の抗体溶液を、最終抗体濃度が３ｍｇ／ｍＬになるようにおよび水性緩衝液中のＤＭＡの百分率が２０％になるように、およそ１０ｍＭでの過剰のクリプトフィシンペイロードのＤＭＡ中溶液で処理した。２時間撹拌した後、混合物をＳＥＣ−ＨＰＬＣにより分析して、モノマー抗体集団に関するＤＡＲを決定した。ＤＡＲが不十分と考えられる場合、混合物を更に過剰（１から５当量）のＤＭＡ中クリプトフィシン溶液で、攪拌しながら室温で更に２時間処理した。ＮＭＰ１０から２０％を含む水性緩衝液ｐＨ６．５（緩衝液ＢまたはＤＰＢＳ）で予め平衡させたＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ｐｇマトリックス（ＨｉＬｏａｄ１６／６０または２６／６０脱塩カラム、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するゲル濾過により混合物を精製した。モノマー形態のコンジュゲート化抗体を含有するフラクションをプールし、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ−１５（１０ｋまたは５０ｋのＵｌｔｒａｃｅｌ膜、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で２ｍｇ／ｍＬと５ｍｇ／ｍＬの間の濃度に濃縮した。次いで緩衝液の交換または適切な緩衝液中への希釈を行って、最終緩衝液におけるコンジュゲートを形成させた。緩衝液交換の場合、組成およびｐＨがそれぞれのコンジュゲートに適している最終水性緩衝液で予め平衡させたＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）Ｇ２５マトリックス（ＮＡＰ−５、ＮＡＰ−１０、ＮＡＰ−２５／ＰＤ−１０またはＨｉｐｒｅｐ２６／１０脱塩カラム、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するゲル濾過により実現させた。コンジュゲートをＳｔｅｒｉｆｌｉｐ（登録商標）濾過ユニット（０．２２μｍのＤｕｒａｐｏｒｅ（登録商標）ＰＶＤＦ膜、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に最後に通して濾過した。コンジュゲート濃度を測定するためのＵＶスペクトルまたはＳＥＣ−ＨＰＬＣにより、モノマー純度を決定するためのＳＥＣ−ＨＰＬＣによりおよびコンジュゲートの質量スペクトルのデコンボリューションからＤＡＲを決定するためのＳＥＣ−ＨＰＬＣにより、最終コンジュゲートをアッセイした。

フラグメントＡ：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル８−（４−ホルミルフェニル）−５−ヒドロキシ−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエートの合成

化合物１：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−ヒドロキシ−７−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−６−メチルヘプタ−２−エノエート
アルゴン下、（２Ｒ，３Ｓ）−１−［（４−メトキシフェニル）メトキシ］−２−メチル−５−ヘキセン−３−オールまたはＳａｋｕｒａｉアルコール（ＣＡＳ番号［２０３９２６−５５−０］、１００ｇ、３９９．５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３５０ｍＬ）中溶液に、ｔｅｒｔ−ブチルアクリレート（３５４．７ｍＬ、２．４３５ｍｏｌ）およびＧｒｕｂｂｓ触媒（４．８４９ｇ、２．４３５ｍｏｌ）を加えた。室温で１７時間撹拌した後、反応混合物をシリカ２３０ｇ上で濾過し、ヘプタン／ＡｃＯＥｔの混合物（５０／５０、６×３００ｍＬ）で溶離した。濃縮後、残留物をシリカゲル１．２ｋｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃの濃度勾配溶離）により精製して、茶褐色油状物１４０．８ｇを得た。油状物を無水ＤＣＭ（５５０ｍＬ）に溶解し、ｑｕａｄｒａＰｕｒｅ（商標）ＴＵ樹脂１０ｇを加えて、過剰の触媒を除去した。混合物を３５℃で３時間撹拌した。樹脂を濾過し、ＤＣＭで洗浄し、濾液を濃縮し、真空乾固して、化合物１（１３５．７５ｇ）を茶褐色油状物として得た（９７％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.42 (s, 9 H); 1.72 (m, 1 H); 2.18 (m, 1 H); 2.30 (m, 1 H); 3.24 (dd, J = 7.0および9.3 Hz, 1 H); 3.46 (dd, J = 7.7および9.3 Hz, 1 H); 3.49 (m, 1 H); 3.73 (s, 3 H); 4.35 (s, 2 H); 4.65 (d, J = 5.8 Hz, 1 H); 5.76 (td, J = 1.5および15.6 Hz, 1 H); 6.83 (td, J = 7.4および15.6 Hz, 1 H); 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2 H); 7.23 (d, J = 8.8 Hz, 2 H).

化合物２：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル５，７−ジヒドロキシ−６−メチルヘプタ−２−エノエート
化合物１のＣＨ_３ＣＮ（９１０ｍＬ）中溶液に、Ｈ_２Ｏ（９０ｍＬ）を加え、混合物を１２℃で冷却した後、ＣＡＮ（１９６．７ｇ、３５８．９ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（３００ｍＬ）中溶液を２５分で加えた。室温で１時間撹拌を続けた。更にＣＨ_３ＣＮ（７０ｍＬ）とＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）との混合物に溶解したＣＡＮ（１８．８３ｇ、３４．３６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌して、反応を完結させた。水層が飽和するまで混合物をＮａＣｌでクエンチし、次いでＭＴＢＥ（４００ｍＬ）を加えた。デカント除去した後、水層をＭＴＢＥ（２×８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を５％ＮａＨＣＯ_３／Ｈ_２Ｏの３：１混合物（３×２００ｍＬ）、飽和ブライン（２×１３０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。水層を２ＮＨＣｌでｐＨ４にまで酸性化し、次いでＮａＣｌで飽和し、ＭＴＢＥ（２×１５０ｍＬ）で抽出した。この２番目の有機層を５％ＮａＨＣＯ_３（６０ｍＬ）、飽和ブライン（６０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濃縮し、最初の有機層と合わせて、茶褐色オレンジ色油状物を得た。

混合物をＭｅＴＨＦ（３００ｍＬ）に溶解し、次いで１，２−エタンジチオール（２２ｍＬ、０．２６０ｍｏｌ）およびｐ−ＴｓＯＨ（１．６５１ｇ、８．５９０ｍｍｏｌ）を加えた。６０℃で５時間撹拌した後、ＭＴＢＥ（２００ｍＬ）を反応混合物に加え、これを５％ＮａＨＣＯ_３（２×１２０ｍＬ）、飽和ブライン（１２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル５２０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭＴＢＥの濃度勾配溶離）により精製して、化合物２（２９．４８ｇ）を黄色油状物として得た（７５％）。

化合物３：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル６−メチル−５，７−ビス（（トリエチルシリル）オキシ）ヘプタ−２−エノエート
アルゴン下、化合物２（３９．３８ｇ、０．１７１ｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（５００ｍＬ）中溶液に、イミダゾール（５１．５４０ｇ、０．７４９ｍｏｌ）を加えた。黄色混合物を０℃で冷却し、次いでトリエチルクロロシラン（６３．９９ｍＬ、０．３７４ｍｏｌ）を加え、溶液を室温に終夜加温した。反応混合物を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（４００ｍＬ）、ＭＴＢＥ（３００ｍＬ）および氷でクエンチした。２ＭＮａＨＳＯ_４を用いてｐＨを４で調節し、激しく撹拌した後層を分離した。水層をＭＴＢＥ（２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を半飽和ＮＨ_４Ｃｌ（２×２５０ｍＬ）、リン酸塩緩衝液ｐＨ７（１５０ｍＬ）、飽和ブライン（１５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル４９０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／Ｅｔ_２Ｏの濃度勾配溶離）により精製して、化合物３（７４．５２ｇ）を淡黄色油状物として得た（９５％）。

化合物４：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチル６−メチル−７−オキソ−５−（（トリエチルシリル）オキシ）ヘプタ−２−エノエート
アルゴン下、ＤＭＳＯ（１０２．４００ｍＬ、１．４２７ｍｏｌ）のＤＣＭ（３００ｍＬ）中溶液に、−７５℃で塩化オキサリル（６３ｍＬ、０．７１９ｍｏｌ）を１時間で滴下添加し、１５分間撹拌を続けた後、温度を−７０℃未満に維持しながら−７５℃で化合物３のＤＣＭ（１５０ｍＬ）中溶液を加えた。反応混合物を−４０℃に加温し、２時間撹拌を続けた。反応混合物を−７５℃で再度冷却し、次いで温度を−６５℃未満に維持しながらＤＩＥＡ（４２５ｍＬ、２．４３２ｍｏｌ）を７５分で加えた。反応混合物を室温に加温し、次いでＭＴＢＥ（５００ｍＬ）、氷、飽和ＮＨ_４Ｃｌ（２００ｍＬ）および２Ｍ
ＮａＨＳＯ_４でクエンチして、ｐＨ４に達した。激しく撹拌した後、層を分離した。水層をＭＴＢＥ（２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＮＨ_４Ｃｌ（３×３００ｍＬ）、リン酸塩緩衝液ｐＨ７（３００ｍＬ）、飽和ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル１．２５ｋｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／Ｅｔ_２Ｏの濃度勾配溶離）により精製して、化合物４（５１．７４ｇ）をオレンジ色油状物として得た（９３％）。

化合物５：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−ヒドロキシ−８−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート
アルゴン下、ホスホニウムブロミド（ＷＯ２０１１／００１０５２に記載されている合成、１４７ｇ、０．２３７ｍｏｌ）の無水ＴＨＦ（１．５Ｌ）中懸濁液に、−５０℃でｎ−ＢｕＬｉのヘキサン中２．５Ｍ溶液（９０ｍＬ、０．２２５ｍｏｌ）を加えた。温度を−４０℃にまで加温し、１５分間撹拌を続けた。室温に加温した後、赤色混合物を１時間撹拌した。反応媒体を−７０℃で冷却した後、温度を−６５℃未満に維持しながら化合物４（５１．６３ｇ、１２６．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２００ｍＬ）中溶液を加えた。添加が完了した時点で、反応混合物を室温に加温し、終夜撹拌を続けた。反応混合物を濾過して不溶物を除去し、これをＭＴＢＥ（５００ｍＬ）で洗浄した。濾液を４２℃で部分的に濃縮（１／３）し、次いで氷、ＮＨ_４Ｃｌ（５００ｍＬ）、ＭＴＢＥ（５００ｍＬ）および２ＭＮａＨＳＯ_４でクエンチして、ｐＨ４にした。層を分離し、水層をＭＴＢＥ（２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を半飽和ＮＨ_４Ｃｌ（２５０ｍＬ）、リン酸塩緩衝液ｐＨ７（２５０ｍＬ）、飽和ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、２５０ｍｂａｒまでの真空で半濃縮した。懸濁液を氷浴で冷却した５０：５０ヘプタン／ＭＴＢＥ（６００ｍＬ）で希釈し、濾別し、５０：５０ヘプタン／ＭＴＢＥで洗浄した。濾液を真空で濃縮して、茶褐色油状物として１００．０５ｇ得た。

粗製の化合物を無水ＴＨＦ（３２０ｍＬ）に溶解し、次いでＴＢＡＦ３水和物（９０ｇ、２８２．４０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を３時間撹拌した。真空で濃縮した後、粗製物を１０：１ＭＴＢＥ／ＴＨＦ（７７０ｍＬ）で希釈し、半飽和ＮＨ_４Ｃｌ（３×２００ｍＬ）、１ＭＮａＨＳＯ_４（２００ｍＬ）、リン酸塩緩衝液ｐＨ７（２００ｍＬ）、飽和ブライン（２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。水層をＭＴＢＥで抽出した。デカント除去した後、有機層をリン酸塩緩衝液ｐＨ７（３０ｍＬ）、飽和ブライン（３０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過した。濃縮後、合わせた有機層をシリカゲル１．２５ｋｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／Ｅｔ_２Ｏの濃度勾配溶離）により精製して、化合物５（３６．９１ｇ）を赤茶褐色油状物として得た（８８％）。

フラグメントＡ：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル８−（４−ホルミルフェニル）−５−ヒドロキシ−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート
アルゴン下、化合物５（３０．３ｇ、９１．７ｍｍｏｌ）の無水ＤＣＭ（６００ｍＬ）中溶液に、１０℃で酸化マンガン（１７５ｇ、３．０１３ｍｏｌ）を加え、反応混合物を３５℃で４時間撹拌した。酸化剤をセライトのプラグに通して濾過し、加温アセトンで洗浄した。濾液を濃縮して、赤オレンジ色油状物３０．４３ｇを得た。

アルゴン下、油状物をベンゼン（８００ｍＬ）で希釈し、ＡＩＢＮ（８８０ｍｇ、４．５８ｍｍｏｌ）およびチオフェノール（２．８１ｍＬ、２７．５１ｍｍｏｌ）の存在下１時間還流した。更にＡＩＢＮ（５３０ｍｇ、０．０３当量）およびチオフェノール（１．０３ｍＬ、１０．０８７ｍｍｏｌ）を加え、更に１時間還流を続けた。更にＡＩＢＮ（５３０ｍｇ、０．０３当量）およびチオフェノール（１．０３ｍＬ、１０．０８７ｍｍｏｌ）を加え、３時間還流を続けた。更にＡＩＢＮ（３５３ｍｇ、１．８３４ｍｍｏｌ）およびチオフェノール（４６８μＬ、４．５８ｍｍｏｌ）を加え、１時間還流を続けた。Ｅ／Ｚ比は９２／８であり、ＡＩＢＮ（３５２．６ｍｇ）を加え、１時間還流を続けた。反応混合物を室温に冷却し、真空で濃縮して、フラグメントＡ（２８．０３ｇ）をオレンジ色油状物として（９２％）、９８／２を超えるＥ／Ｚ比で得た。

フラグメントＢ：（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシ−フェニル）プロパン酸の合成

メチル（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフィル）−プロパノエート（ＣＡＳ番号［１６２４６５−４４−３］、３０ｇ、８７．２６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２２５ｍＬ）中溶液に、Ｈ_２Ｏ（３０ｍＬ）およびＬｉＯＨ一水和物（４．４ｇ、１０４．８５ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で２時間撹拌した。この後、反応媒体をＨ_２Ｏ（２００ｍＬ）で希釈し、次いで５ＮＨＣｌ（２０ｍＬ）を用いてｐＨ２で酸性化し、ＥｔＯＡｃ（２×２５０ｍＬ）により抽出した。合わせた有機相をＨ_２Ｏ（５００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、Ｅｔ_２Ｏで希釈し、真空で濃縮して、フラグメントＢ（２６．９ｇ）を白色固体として得た（９４％）。
RMN ¹H (300 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 1.21〜1.37 (m, 9 H); 2.74 (dd, J = 11.0および14.3 Hz, 1 H); 2.96 (dd, J = 5.0および14.3 Hz, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 4.04 (m, 1 H); 6.99〜7.09 (m, 2 H); 7.18 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1 H); 7.29 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 12.60 (広幅なm, 1 H).

フラグメントＣ１：メチル３−アミノ−２，２−ジメチルプロパノエート塩酸塩の合成

化合物６：メチル３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２，２−ジメチルプロパノエート
アルゴン下、３−（［（ｔｅｒｔ−ブトキシ）カルボニル］アミノ）−２，２−ジメチルプロパン酸（ＣＡＳ番号［１８０１８１−０２−６］、２５０ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２ｍＬ）中溶液に、０℃で黄色が変化しなくなるまで（トリメチルシリル）ジアゾメタン（８１９．８６μＬ、１．６４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。次いで変色が完了するまでＡｃＯＨを加えた。反応混合物を真空で濃縮し、次いでＨ_２Ｏで希釈し、ＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機相を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、化合物６（２６０ｍｇ）を無色油状物として得た（定量的）。

フラグメントＣ１：メチル３−アミノ−２，２−ジメチルプロパノエート塩酸塩
化合物６（２６０ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中溶液に、１，４−ジオキサン中４ＮＨＣｌ（２．８１ｍＬ、１１．２４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌し、次いで真空で濃縮して、フラグメントＣ１（２００ｍｇ、定量的）を得た。

フラグメントＣ２：メチル３−アミノ−２，２−ジメチルブタノエート塩酸塩の合成

化合物７：３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタン酸
ＤＬ−３−アミノ酪酸（ＣＡＳ番号［５４１−４８−０２］、１８．７２ｇ、１７６．０９ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（９６ｍＬ）中溶液に、Ｈ_２Ｏ（７６ｍＬ）中のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネート（３９．６２ｇ、１７６．０９ｍｍｏｌ）およびＮａＯＨ（８．０３ｇ、２００．７４ｍｍｏｌ）を、次いでｔｅｒｔ−ブチルアルコール（１３２ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温で終夜撹拌した。この後、反応媒体を真空で濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で希釈し、希薄ＨＣｌを用いてｐＨ３で酸性化した。安定化した後、水相をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、化合物７（３４．５ｇ）を無色油状物として得た（８２％）。
RMN ¹H (300 MHz, δ ppm, CDCl₃-d1): 1.25 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.45 (s, 9 H); 2.55 (m, 2 H); 4.04 (m, 1 H); 4.93 (広幅なm, 1 H); 8,41 (広幅なm, 1 H).

化合物８：メチル３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）ブタノエート
アルゴン下、化合物７（１０ｇ、４９．２０ｍｍｏｌ）のトルエン（３５０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１００ｍＬ）中溶液を＋５℃で撹拌した。＋５℃と＋１０℃との間で、（トリメチルシリル）ジアゾメタン（７３．８１ｍＬ、１４７．６１ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を３時間撹拌し、次いで真空で蒸発させて、化合物８（１０．８ｇ）を淡黄色油状物として得た（定量的）。
RMN ¹H (300 MHz, δ ppm, CDCl₃-d1): 1.20 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.45 (s, 9 H); 2.50 (m, 2 H); 3.69 (s, 3 H); 4.03 (m, 1 H); 4.90 (広幅なm, 1 H).

化合物９：メチル３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルブタノエート
アルゴン下、ＬＤＡ（ＴＨＦ中２Ｍ、２５．３２ｍＬ、５０．６３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４８ｍＬ）中溶液に、−７０℃で化合物８（５ｇ、２３．０１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６２ｍＬ）中溶液を滴下添加した。反応混合物を−７５℃で１時間撹拌し、次いでヨードメタン（５．７９ｍＬ、９２．０５ｍｍｏｌ）を−７０℃で滴下添加した。反応混合物を−７５℃で３時間、次いで室温で終夜撹拌した。この後、２０％ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１００ｍＬ）およびＥｔ_２Ｏ（１２５ｍＬ）を加えた。安定化した後、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３（８０ｍＬ）次いで飽和ＮａＣｌ（８０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水相をＥｔ_２Ｏ（１２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、粗製の油状物５．４９ｇを得た。ペンタン（１５ｍＬ）で結晶化し、真空乾固した後、化合物９（２．６５ｇ）を得た。ペンタン溶液を真空で濃縮し、シリカゲル１００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／Ｅｔ_２Ｏの濃度勾配溶離）により精製して、化合物９（１．９８ｇ）を得た。２つのバッチをプールし（８７％）、以下の工程にそのまま使用した。

化合物１０：メチル３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２，２−ジメチルブタノエート
アルゴン下、ＴＨＦ（４６ｍＬ）を−７２℃で冷却し、次いでＬＤＡ（ＴＨＦ中２Ｍ、２２ｍＬ、４４．０ｍｍｏｌ）を加え、−７２℃（＋／−２℃）で化合物９（４．６０ｇ、１９．８９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６４ｍＬ）中溶液を滴下添加した。反応混合物を−７５℃で１時間１５分撹拌し、次いでヨードメタン（５ｍＬ、７９．５５ｍｍｏｌ）を−７２℃（＋／−２℃）で滴下添加した。反応媒体を−７５℃で３時間、次いで室温で終夜撹拌した。この後、２０％ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（５０ｍＬ）およびＥｔ_２Ｏ（８０ｍＬ）を加えた。安定化した後、有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）および飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた水相をＥｔ_２Ｏ（８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、粗製の油状物６．５ｇを得、これをシリカゲル２００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ｉＰｒ_２Ｏの濃度勾配溶離）により精製して、化合物１０（１．９ｇ）を無色油状物として得た（３９％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.92 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.02 (s, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.48 (s, 9 H); 3.58 (s, 3 H); 3.88 (m, 1 H); 6.62 (広幅なd, J = 10.5 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 146, m/z = 246 [M+H]⁺; t_R = 1.2分.

フラグメントＣ２：メチル３−アミノ−２，２−ジメチルブタノエート塩酸塩
丸底フラスコ中に機械撹拌しながら、化合物１０（０．３ｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を、続いて１，４−ジオキサン（５ｍＬ）および１，４−ジオキサン中４ＮＨＣｌ（５ｍＬ）を導入した。反応混合物を室温で終夜撹拌し、次いで真空で濃縮した。得られた粗製の固体をｉＰｒ_２Ｏ（１５ｍＬ）中で沈殿させ、濾過し、乾燥して、フラグメントＣ２（２１０ｍｇ）を白色固体として得た（９５％）。
ＬＣＭＳ（Ａ１）：ＥＳｍ／ｚ＝１４６［Ｍ＋Ｈ］^＋；ｔ_Ｒ＝０．８分。

フラグメントＣ３：エチル２−（１−アミノシクロプロピル）−２，２−ジメチルプロパノエートの合成

アルゴン下、エチル２−シアノ−２−メチルプロピオネート（ＣＡＳ番号［１５７２−９８−１］、２ｇ、１３．８８ｍｍｏｌ）のＥｔ_２Ｏ（４８ｍＬ）中溶液に、チタン（ＩＶ）イソプロポキシド（４．６３ｇ、１５．９７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで−５℃で冷却した。３ＭエチルマグネシウムブロミドのＥｔ_２Ｏ中溶液（９．７２ｍＬ、２９．１６ｍｍｏｌ）を−５℃〜０℃で２５分にて滴下添加し、次いで反応混合物を冷却浴を用いずに４０分間撹拌した。この時点で、ＴＬＣは反応が完結していることを示した。反応媒体を０℃で冷却し、三フッ化ホウ素ジエチルエーテレート（Ｅｔ_２Ｏ中３Ｍ、３．６ｍＬ、２９．１６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下添加した。反応混合物を冷却浴を用いずに３０分間撹拌した。この後、１ＮＨＣｌを０℃でｐＨが１〜２になるまで加え（８ｍＬ）、次いでｐＨ８になるまで２ＮＮａＯＨ（２８ｍＬ）を加え、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、粗製の黄色油状物２．４ｇを得、これをシリカゲル７０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、フラグメントＣ３（９１５ｍｇ）を淡黄色油状物として得た（３９％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, CDCl₃-d1): 0.52 (m, 2 H); 0.70 (m, 2 H); 1.11 (s, 6 H);
1.27 (t, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.64 (広幅なs, 2 H); 4.18 (q, J = 7.2 Hz, 2 H).

フラグメントＣ４：メチル３−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート塩酸塩の合成

化合物１１：３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルプロパン酸
ＤＬ−３−アミノイソ酪酸（ＣＡＳ番号［１０５６９−７２−９］、５ｇ、４７．５２ｍｍｏｌ）の２ＮＮａＯＨ（２４．７ｍＬ）中溶液に、氷水浴で反応媒体温度を３０℃未満に維持しながら、Ｂｏｃ_２Ｏ（１１．７３ｇ、５３．２２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７５ｍＬ）中溶液を滴下添加した。反応媒体を室温で１８時間撹拌し、次いで真空で濃縮し、Ｈ_２Ｏ（７５ｍＬ）に希釈し、ＭＴＢＥ（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。水相を１００ｇ／Ｌでのクエン酸（１５０ｍＬ）を加えることによりｐＨ３に酸性化し、ＥｔＯＡｃ（３×１５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＨ_２Ｏ（３×４５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、化合物１１（９．４ｇ）を無色油状物として得た（９７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 1.01 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.38 (s, 9H); 2.48 (m, 1H); 2.91 (dt, J = 6.1, 6.5および13.5 Hz, 1H); 3.15 (ddd, J = 6.1, 7.4および13.5 Hz, 1H); 6.80 (t, J = 6.1 Hz, 1H); 12.15 (広幅なs, 1H).

化合物１２：メチル３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−メチルプロパノエート
化合物１１（９．４ｇ、４６．２５ｍｍｏｌ）のアセトン（３００ｍＬ）中溶液に、Ｋ_２ＣＯ_３（１６．１４ｇ、１１５．６３ｍｍｏｌ）およびＣＨ_３Ｉ（１３．２６ｇ、９２．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体、黄色懸濁液を室温で２０時間撹拌し、次いでＣｌａｒｃｅｌ上で濾過した。このように得られたケーキをアセトンで洗浄し、濾液を真空で濃縮し、ＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、Ｃｌａｒｃｅｌ上で濾過し、このように得られたケーキをＤＣＭで洗浄し、濾液を真空で濃縮して、化合物１２（９．４ｇ）を黄色液体として得た（９３％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 1.01 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.37 (s, 9H); 2.54
(m, 1H); 2.91 (dt, J = 6.2および13.5 Hz, 1H); 3.15 (ddd, J = 6.2, 6.9および13.5 Hz, 1H); 3.59 (s, 3H); 6.90 (t, J = 6.2 Hz, 1H).

化合物１３：メチル３−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−２−（（（４−メトキシベンジル）オキシ）メチル）−２−メチルプロパノエート
−７５℃で冷却したＤＩＥＡ（３．２ｍＬ、２２．４５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中溶液に、１．６Ｍｎ−ＢｕＬｉのＴＨＦ中溶液（１４ｍＬ、２２．４ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応媒体を−７５℃で２０分間撹拌し、次いで−７５℃で化合物１２（２ｇ、９．２１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１６ｍＬ）中溶液を滴下添加し、反応混合物を−７５℃で１０分間撹拌した。次いで１−（（クロロメトキシ）メチル）−４−メトキシベンゼン（１．７２ｇ、９．２１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１６ｍＬ）中溶液を、反応混合物に素早く加え、−２５℃で４時間撹拌を行った。反応媒体をＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈した後、温度を５℃未満に維持しながら１００ｇ／Ｌでのクエン酸溶液（５０ｍＬ）を加えた。反応媒体を室温で１５分間撹拌した。有機相を１００ｇ／Ｌでのクエン酸溶液（２×５０ｍＬ）、Ｈ_２Ｏ（３×５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、黄オレンジ色油状物４．０８ｇを得、これをシリカゲル１５０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃの濃度勾配溶離）により精製して、化合物１３（２．０５ｇ）を無色油状物として得た（６０％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 1.03 (s, 3H); 1.37 (s, 9H); 3.14 (d, J = 6.8 Hz, 2H); 3.31 (d, J = 9.1 Hz, 1H); 3.48 (d, J = 9.1 Hz, 1H); 3.58 (s, 3H); 3.73 (s, 3H); 4.38 (s, 2H); 6.76 (t, J = 7.1 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.9 Hz, 2H); 7.20 (m, 2H).

フラグメントＣ４：メチル３−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート塩酸塩
化合物１３（１．５ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）を室温で１時間ジオキサン中４ＭＨＣｌ溶液（２４ｍＬ）にて処理した。次いで反応媒体を真空で濃縮し、トルエンの存在下で共蒸発させて、フラグメントＣ４（７９４ｍｇ）を粘稠性油状物として得た（定量的）。

ＡＤ１：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−（（（Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−（アジドメチル）フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエートの合成

化合物１４：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−（（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−４−メチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−ホルミルフェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート
アルゴン下丸底フラスコ中で機械撹拌しながら、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（４．９ｇ、１３．８６ｍｍｏｌ）を、続いてＤＣＭ（１００ｍＬ）中のフラグメントＡ（３．５ｇ、１０．５９ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（６．６ｍＬ、３８．１３ｍｍｏｌ）を導入した。次いでＭＮＢＡ（５ｇ、１４．５２ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（６２０ｍｇ、５．０７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で終夜撹拌した。この後、反応媒体をＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）および飽和ブライン（１００ｍＬ）で洗浄した。有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、粗製のオレンジ色油状物９．１ｇを得、これをシリカゲル４００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物１４（５ｇ）を淡黄色油状物として得た（７１％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.77 (d, J = 6.8 Hz, 6 H); 1.05 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.33〜1.64 (m, 4 H); 1.38 (s, 9 H); 2.39〜2.63 (部分的にマスクされたm, 2 H); 4.01 (m, 1 H); 4.13〜4.31 (m, 3 H); 4.95 (m, 1 H); 5.81 (d, J = 15.9 Hz, 1
H); 6.37 (dd, J = 8.8および16.2 Hz, 1 H); 6.52 (d, J = 16.2 Hz, 1 H); 6.70 (td,
J = 7.3および15.9 Hz, 1 H); 7.29 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.40 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.56 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.67 (dd, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.74〜7.82 (m, 3 H); 7.87 (d, J = 7.9 Hz, 2 H); 9.93 (s, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 666 [M+H]⁺, m/z = 689 [M+Na]⁺; t_R = 1.92分.

化合物１５：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−（（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−４−メチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート
アルゴン下、化合物１４（５ｇ、７．５１ｍｍｏｌ）のＭｅＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液に、トリメトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１．２ｇ、８．９１ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応媒体を室温で５時間撹拌した。この後、飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１００ｍＬ）およびアセトン（２０ｍＬ）を加えた。反応媒体を室温で１時間撹拌した。安定化した後、有機相をＨ_２Ｏで、次いで飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、粗製の黄色油状物５．３ｇを得、これをシリカゲル３００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物１５（３．１５ｇ）を白色半固体として得た（６３％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80 (m, 6 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.35〜1.66 (m, 4 H); 1.38 (s, 9 H); 2.35〜2.56 (部分的にマスクされたm, 2 H); 4.02 (m, 1 H); 4.15〜4.32 (m, 3 H); 4.43 (d, J = 5.5 Hz, 2 H); 4.92 (m, 1 H); 5.12 (t, J = 5.5 Hz, 1 H); 5.80 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.10 (dd, J = 8.8および16.2 Hz, 1 H); 6.39 (d, J = 16.2 Hz, 1 H); 6.69 (m, 1 H); 7.20 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.28〜7.33 (m, 4 H); 7.41 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.69 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.80 (d, J = 8.2 Hz, 1 H); 7.88 (d, J = 7.9 Hz, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 668 [M+H]⁺; m/z = 690 [M+Na]⁺; m/z = 712 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.84分.

化合物１６：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−（（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−４−メチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−（アジドメチル）フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート
アルゴン下、化合物１５（３．１５ｇ、４．７２ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（５０ｍＬ）を丸底フラスコ中に導入した。０℃で、ＴＥＡ（９８７μＬ、７．０８ｍｍｏｌ）を、続いてメタンスルホニルクロリド（４３８μＬ、５．６６ｍｍｏｌ）を加え、反応媒体を０℃で１時間および室温で１３時間撹拌した。この後、ＤＣＭ（５０ｍＬ）および水（５０ｍＬ）を加えた。安定化した後、有機相を飽和ブライン（３×２５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、真空で濃縮した。アルゴン下、このように得られた粗生成物をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（６４４ｍｇ、９．９１ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で終夜撹拌した。この後、ＤＭＦを真空で濃縮し、ＡｃＯＥｔを加えた。得られた混合物を０．１ＮＨＣｌ（２５ｍＬ）で、飽和ＮａＨＣＯ_３（２５ｍＬ）および飽和ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して粗製物３．３ｇを得、これをシリカゲル２００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物１６（１．８ｇ）を無色ゴム状物として（５５％）および化合物ＡＤ１（７４０ｍｇ、３３％）を得た。
ＬＣＭＳ（Ａ２）：ＥＳｍ／ｚ＝７１５［Ｍ＋Ｎａ］^＋；ｔ_Ｒ＝８．９５分。

化合物ＡＤ１：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−（（（Ｓ）−２−アミノ−４−メチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−（アジドメチル）フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート
アルゴン下丸底フラスコ中で機械撹拌しながら、化合物１６（１．８ｇ、２．６ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（５０ｍＬ）を、続いてピペリジン（１．６ｍＬ、１６．２ｍｍｏｌ）を導入した。反応媒体を室温で終夜撹拌した。この後、これを１ＮＨＣｌで、次いで飽和ＮａＨＣＯ_３、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して粗製物２ｇを得、これをシリカゲル１３０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物ＡＤ１（１．４８ｇ）を淡黄色油状物として得た（定量的）。
ＬＣＭＳ（Ａ３）：ＥＳｍ／ｚ＝４７１［Ｍ＋Ｈ］^＋；ｔ_Ｒ＝２．６５分。

ＡＤ２：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−（（（Ｓ）−２−アミノ−４，４−ジメチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート塩酸塩の合成

化合物１７：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−（（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−４，４−ジメチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−ホルミルフェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート
アルゴン下丸底フラスコ中、化合物Ａ（１．６３３ｇ、４．９４ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６０ｍＬ）中溶液に、Ｌ−Ｆｍｏｃ−ｔｅｒｔ−Ｌｅｕ−ＯＨ（１．８２ｇ、４．９４ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（２．５７ｍＬ、１４．８３ｍｍｏｌ）、ＭＮＢＡ（１．７０ｇ、４．９４ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（２４１．５１ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２時間撹拌した後、反応媒体をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機相をクエン酸（２×５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）および飽和ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、粗製の化合物１７（３．２４ｇ）を得、引き続く還元に直接使用した（９６％）。

化合物１８：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−（（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−４，４−ジメチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート
アルゴン下丸底フラスコ中、化合物１７（３．２４ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）のＭｅＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液に、０℃でトリメトキシ水素化ホウ素ナトリウム（６７０．５６ｍｇ、５．２４ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間撹拌した後、更にトリメトキシ水素化ホウ素ナトリウム（３０４ｍｇ、２．３８ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。次いで反応媒体を０℃で冷却し、アセトン（１８ｍＬ）および飽和ＮＨ_４Ｃｌ（３６ｍＬ）で希釈し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機相を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル１００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配）により精製して、化合物１８（２．６１ｇ）を無色非晶性固体として得た（８０％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.35〜1.60 (m, 4 H); 1.38 (s, 9 H); 2.37〜2.58 (部分的にマスクされたm, 2 H); 4.04 (m, 1 H); 4.16〜4.33 (m, 3 H); 4.45 (d, J = 5.7 Hz, 2 H); 4.91 (m, 1 H); 5.12 (t, J = 5.7 Hz, 1 H); 5.80 (d, J = 16.0 Hz, 1 H); 6.10 (dd, J = 8.8および16.2 Hz, 1 H); 6.39 (d, J = 16.2 Hz, 1 H); 6.69 (m, 1 H); 7.21 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.25〜7.33 (m, 4 H); 7.40 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.68 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.78 (d, J = 8.3 Hz, 1 H); 7.88 (d, J = 7.9 Hz, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 608; m/z = 682 [M+H]⁺; m/z = 726 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 1.85分.

化合物ＡＤ２：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−ｔｅｒｔ−ブチル５−（（（Ｓ）−２−アミノ−４，４−ジメチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエノエート塩酸塩
アルゴン下丸底フラスコ中、化合物１８（２．６１ｇ、３．８３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４０ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（７．６０ｍＬ、７６．５６ｍｍｏｌ）を加え、反応媒体を室温で１時間撹拌した。次いでこれを濃縮し、ＡｃＯＥｔで抽出した。合わせた有機層を１ＮＨＣｌ、Ｈ_２Ｏおよび飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。残留物をｉＰｒ_２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、室温で４０時間撹拌した。粗生成物を濾過し、ｉＰｒ_２Ｏで洗浄し、４０℃で３時間真空乾固して、化合物ＡＤ２（１．７０６ｇ）を無色非晶性固体として得た（９０％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.88 (s, 9 H); 1.10 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.39〜1.49 (m, 1 H); 1.42 (s, 9 H); 1.75 (dd, J = 6.1および15.1 Hz, 1 H); 2.47〜2.64 (部分的にマスクされたm, 2 H); 3.92 (t, J = 5.5 Hz, 1 H); 4.47 (d, J = 5.7 Hz, 2 H); 5.02 (m, 1 H); 5.15 (t, J = 5.7 Hz, 1 H); 5.90 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.15 (dd, J = 8.3および16.1 Hz, 1 H); 6.44 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 6.77 (td, J = 7.3および15.9 Hz, 1 H); 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 8.10 (広幅なm, 3 H). LCMS (A1): ES m/z = 460 [M+H]⁺; t_R = 0.95分.

ＡＤ３：（２Ｒ，３Ｓ）−１−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−２−メチルヘキサ−５−エン−３−イル（Ｓ）−２−アミノ−４，４−ジメチルペンタノエートの合成

化合物１９：（２Ｒ，３Ｓ）−１−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−２−メチルヘキサ−５−エン−３−イル（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−４，４−ジメチルペンタノエート
Ｓａｋｕｒａｉアルコール（１．０２ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−４，４−ジメチルペンタン酸（１．５ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍＬ）中溶液に、２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド（１．０２ｇ、４．０８ｍｍｏｌ）を加え、ＴＥＡ（１．１４ｍＬ、８．１６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１２６．０ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応媒体を室温で５時間撹拌し、次いで氷浴を使用して冷却した後、温度を１０℃未満に維持しながら１ＮＨＣｌ（６０ｍＬ）を加えた。得られた媒体を室温で１５分間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３（１５ｍＬ）、飽和ブライン（３×１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル上での連続した３種のフラッシュクロマトグラフィー（１５０ｇ、ヘプタン／ＥｔＯＡｃの濃度勾配溶離；１５０ｇおよび２０ｇ、ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物１９（１．７８ｇ）を無色油状物として得た（７２％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 0.89 (s, 9H); 1.51 (dd, J = 2.8および14.3 Hz, 1H); 1.61 (dd, J = 9.0および14.3 Hz, 1H); 1.95 (m, 1H); 2.21 (m, 1H); 2.31 (m, 1H); 3.20 (dd, J = 6.5および9.6 Hz, 1H); 3.35 (m, 1H); 3.73 (s, 3H); 4.04 (m, 1H); 4.18〜4.34 (m, 5H); 4.83 (m, 1H); 5.00 (dq, J = 2.1および10.3 Hz, 1H); 5.05 (dq, J = 2.1および7.3 Hz, 1H); 5.70 (m, 1H); 6.87 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.17 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.30 (m, 2H); 7.41 (t, J = 7.8 Hz, 2H); 7.70 (d, J = 7.8 Hz, 2H); 7.75 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 7.90 (d, J = 7.8 Hz, 2H). LCMS (A5): ES m/z = 600 [M+H]⁺; m/z = 617 [M+H+NH₃]⁺; m/z = 644 [M-H+HCO₂H]^-; t_R
= 1.86分.

化合物ＡＤ３：（２Ｒ，３Ｓ）−１−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−２−メチルヘキサ−５−エン−３−イル（Ｓ）−２−アミノ−４，４−ジメチルペンタノエート
化合物１９（１．７８ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６３ｍＬ）中溶液に、ピペリジン（１．７７ｍＬ、１７．９ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応媒体を室温で４時間撹拌し、ＤＣＭ（１５０ｍＬ）で希釈し、１ＮＨＣｌ（２×２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（２０ｍＬ）、飽和ブライン（３×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル５０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃの濃度勾配溶離）により精製して、化合物ＡＤ３（６４４ｍｇ）を無色油状物として得た（５７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.88 (s, 9H); 0.89 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.21 (dd, J = 6. 9および13.9 Hz, 1H); 1.56 (dd, J = 5.0および13.9 Hz, 1H); 1.66 ( 広幅なs, 2H); 2.00 (m, 1H); 2.24 (m, 1H); 2.33 (m, 1H); 3.26 (m, 2H); 3.38 (dd, J = 5.5および9.4Hz, 1H); 3.74 (s, 3H); 4.36 (s, 2H); 4.84 (m, 1H); 5.00〜5.10 (m,
2H); 5.72 (m, 1H); 6.89 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.22 (d, J = 8.8 Hz, 2H). LCMS (A5): ES m/z = 378 [M+H]⁺; t_R= 0.88分.

ＢＣ１：３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルプロパン酸の合成

化合物２０：メチル３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルプロパノエート
アルゴン下、丸底フラスコ中にフラグメントＣ１（９８１．４５ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（５０ｍＬ）を、続いてＤＩＥＡ（１．８４ｍＬ、１０．９２ｍｍｏｌ）、フラグメントＢ（１．２ｇ、３．６４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（５６３．４０ｍｇ、４．００ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１．４５ｍＬ、８．０１ｍｍｏｌ）を導入した。反応媒体を室温で終夜撹拌した。この後、反応媒体をＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭで２回抽出した。合わせた有機相を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して粗製の油状物２．５ｇを得、これをシリカゲル１１０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物２０（１．０６ｇ）を白色メレンゲ状物として得た（６６％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 1.06 (s, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.30 (s, 9 H); 2.65 (dd, J = 11.6および13.9 Hz, 1 H); 2.82 (dd, J = 4.0および13.9 Hz, 1 H); 3.18 (dd, J = 6.1および13.4 Hz, 1 H); 3.29 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.60 (s, 3 H); 3.81 (s, 3 H); 4.11 (m, 1 H); 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.19 (dd, J = 2.3および8.6 Hz, 1 H); 7.33 (広幅なs, 1 H); 7.75 (大きなt, J = 6.1 Hz, 1 H).

化合物ＢＣ１：３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルプロパン酸
アルゴン下、丸底フラスコ中に化合物２０（１．０６ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（２５ｍＬ）を、続いてＬｉＯＨ（７０．１８ｍｇ、２．８７ｍｍｏｌ）およびＨ_２Ｏ（１ｍＬ）を導入した。反応媒体を数時間撹拌した後、ＬｉＯＨ（７０ｍｇ）を加え、室温で終夜撹拌した。この後、Ａｍｂｅｒｌｉｔ樹脂をｐＨが４になるまで加え、濾過し、次いでＴＨＦで洗浄し、真空で濃縮して、化合物ＢＣ１（１ｇ）を白色固体として得た（９７％）。

ＢＣ２：３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタン酸の合成

化合物２１：メチル３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタノエート
アルゴン下、丸底フラスコ中にフラグメントＢ（１．０２ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（２５ｍＬ）を、続いてＥＤＣ（５９２ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（４７８ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）を導入した。反応媒体を１５分間撹拌し、次いでフラグメントＣ２（０．５ｇ、２．７５ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．７ｍＬ、９．７３ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で終夜撹拌した。この後、反応媒体を真空で濃縮し、次いでＡｃＯＥｔで希釈した。有機層を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して粗製の油状物１．４５ｇを得、これをシリカゲル１００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物２１（８４５ｍｇ）を白色泡状物として得た（６７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): ジアステレオ異性体混合物50:50; 0.87 (d, J = 6.8 Hz, 1.5 H); 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 1.5 H); 1.01 (s, 1.5 H); 1.03 (s, 1.5 H); 1.07 (s, 3 H); 1.31 (s, 9 H); 2.58〜2.87 (m, 2 H); 3.59 (s, 1.5 H); 3,60 (s, 1.5 H); 3.81 (s, 3 H); 3.99〜4.20 (m, 2 H); 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 0.5 H); 6.97 (d, J = 9.0 Hz, 0.5 H); 7.05 (広幅なd, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.19 (分割されたdd, J = 2.4および8.6 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 2.4 Hz, 0.5 H); 7.34 (d, J = 2.4 Hz, 0.5 H); 7.54
(d, J = 10.1 Hz, 0.5 H); 7.62 (d, J = 10.1 Hz, 0.5 H). LCMS (A3): ジアステレオ異性体混合物50:50; ES m/z = 457 [M+H]⁺; m/z = 479 [M+Na]⁺; t_R = 3.19-3.2分.

化合物２１ステレオマー１および２：メチル３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタノエートステレオマー１および２
アルゴン下丸底フラスコ中、フラグメントＢ（１．１７ｇ、３．５５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液に、ＥＤＣ（７４１．７５ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（５９２．５７ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１５分撹拌した後、フラグメントＣ２（６３９ｍｇ、３．５２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２．１７ｍＬ、１２．３１ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を４時間撹拌し、次いで濃縮し、ＡｃＯＥｔ（１００ｍＬ）で希釈した。有機層をＨ_２Ｏ（２×１０ｍＬ）および飽和ブライン（２×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。粗生成物をシリカゲル５０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、ジアステレオ異性体の混合物（１．３０６ｇ、８１％）を得、これを連続した２種のフラッシュクロマトグラフィーにより分離し、シリカゲル１００ｇ上での最初の溶離（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により化合物２１ステレオマー１（３７６ｍｇ、２３％）を得、シリカゲル７０ｇ上での２番目の溶離（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により化合物２１ステレオマー１（１８１ｍｇ、１１％）、化合物２１ステレオマー２（２７９ｍｇ、１７％）およびジアステレオ異性体の混合物４７６ｍｇを得た。

化合物２１ステレオマー１
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 6.8 Hz, 3 H); 1.07 (s, 6 H); 1.31 (s, 9 H); 2.57 (m, 1H); 2.80 (dd, J = 5.2および13.8 Hz, 1 H); 3.60 (s, 3 H); 3.81 (s, 3 H); 4.05 (m, 1 H); 4.16 (m, 1 H); 6.99 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.0および8.6 Hz, 1 H); 7.34 (d, J=2.0 Hz, 1 H); 7.57 (d, J=10.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 381; m/z = 401; m/z = 455 [M-H]^-; m/z = 457 [M+H]⁺; t_R = 1.29分.
化合物２１ステレオマー２
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.95 (d, J = 6.8 Hz, 3 H); 1.00 (s, 3 H); 1.03 (s, 3 H); 1.31 (s, 9 H); 2.55 (m, 1H); 2.80 (dd, J = 5.0および14.3 Hz, 1 H); 3.59 (s, 3 H); 3.81 (s, 3 H); 4.09〜4.22 (m, 2 H); 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.0および8.6 Hz, 1 H); 7.34 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.64 (d, J = 10.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 381; m/z = 401; m/z = 455 [M-H]^-; m/z = 457 [M+H]⁺; t_R = 1.29分.

化合物ＢＣ２：３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタン酸
化合物２１（０．８４５ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（２０ｍＬ）を、続いて１０ＭＮａＯＨ（１．８ｍＬ）を丸底フラスコ中に導入した。溶液を撹拌し、５０℃で終夜加熱した。反応媒体を真空で蒸発させ、次いでＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、５Ｎ
ＨＣｌで中和した。溶液をＡｃＯＥｔで２回抽出した。合わせた有機層を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、化合物ＢＣ２（８００ｍｇ）を白色泡状物として得た（９７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): ジアステレオ異性体混合物50:50; 0.91 (d, J = 6.8 Hz, 1.5 H); 0.97 (d, J = 6.8 Hz, 1.5 H); 1.00 (s, 3 H); 1.03 (s, 1.5 H); 1.07 (s, 1.5 H); 1.31 (s, 9 H); 2.57 (m, 1 H); 2.83 (m, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 4.01〜4.16 (m, 2 H); 6.90 (d, J = 9.0 Hz, 0.5 H); 6.95 (d, J = 9.0 Hz, 0.5 H); 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.20 (広幅, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.31 (広幅なs, 1 H); 7.49 (d, J = 10.1 Hz, 0.5 H); 7.54 (d, J = 10.1 Hz, 0.5 H); 11.94 (広幅なm, 1 H). LCMS (A1): ジアステレオ異性体混合物50:50; ES m/z = 387; m/z = 443 [M+H]⁺; t_R = 1.20-1.21分.

化合物ＢＣ２ステレオマー１：３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタン酸ステレオマー１
化合物２１ステレオマー１（０．３２５ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（８ｍＬ）を、続いて１０ＭＮａＯＨ（０．６９２ｍＬ）を丸底フラスコ中に導入した。黄色溶液を撹拌し、５０℃で終夜加熱した。反応媒体を真空で蒸発させ、次いでＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、ＡｃＯＥｔ（３×５ｍＬ）で抽出した。水層を５ＮＨＣｌで酸性化し、ＡｃＯＥｔ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ブライン（５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、化合物ＢＣ２ステレオマー１（３０３ｍｇ）を白色泡状物（９６％）として得、引き続く反応に直接使用した。

化合物ＢＣ２ステレオマー２：３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタン酸ステレオマー２
化合物２１ステレオマー２（１．０９４ｇ、２．３９ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（５ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（５ｍＬ）を、続いてＬｉＯＨ（３０１ｍｇ、７．１８ｍｍｏｌ）を丸底フラスコ中に導入した。溶液を室温で４４時間撹拌した。反応は完結しておらず、ＬｉＯＨ（３０１ｍｇ）を加えた。混合物を４８時間撹拌し、次いでＬｉＯＨ（３０１ｍｇ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（５ｍＬ）中で加え、反応媒体を６０℃で４０時間撹拌した。反応媒体を真空で蒸発させた。１Ｍクエン酸をｐＨ２になるまで加え、混合物をＡｃＯＥｔ（２×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＨ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、化合物ＢＣ２ステレオマー２（１．０９６ｇ）を白色非晶性固体として得（定量的）、引き続く反応に直接使用した。

ＢＣ３：エチル２−（（Ｒ）−１−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）シクロプロピル）−２−メチルプロパン酸の合成

化合物２２：エチル２−（（Ｒ）−１−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）シクロプロピル）−２−メチルプロパノエート
アルゴン下、丸底フラスコ中にフラグメントＣ３（１．２ｇ、７．０１ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１６．５ｍＬ）を、続いてフラグメントＢ（２．５４ｇ、７．７１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１．７７ｇ、８．７６ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（１．２３ｇ、８．０６ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．３５ｍＬ、７．７１ｍｍｏｌ）を導入した。反応媒体を室温で２時間撹拌した。この後、反応媒体をＨ_２Ｏ（２５ｍＬ）で希釈し、ＡｃＯＥｔ（２５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＨ_２Ｏ（２×２５ｍＬ）、飽和ブライン（２×２５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製し、シリカゲル２００ｇ上での最初の溶離（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により、化合物２２（２．１６ｇ）を無色泡状物として（６４％）、および所望の化合物を含む混合物３４３ｍｇを得、これをシリカゲル３０ｇ（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）上で更に精製して、化合物２２（１６０ｍｇ）を無色泡状物として得た（４．７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.62 (m, 1 H); 0.74〜0.99 (m, 3 H); 1.03 (s, 3 H); 1.10 (s, 3 H); 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.42 (s, 9 H); 2.90 (m, 2 H); 3.88 (s, 3 H); 4.08 (m, 1 H); 4.10 (q, J = 7.2 Hz, 2 H); 4.96 (m, 1 H); 6.33 (広幅なs, 1 H); 6.85 (d, J = 8.5 Hz, 1 H); 7.03 (dd, J = 2.4および8.5 Hz, 1 H); 7.17 (d, J = 2.4 Hz, 1 H).

化合物ＢＣ３：２−（（Ｒ）−１−（２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）
−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）シクロプロピル）−２−メチルプロパン酸
化合物２２（２．０９ｇ、４．３３ｍｍｏｌ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（８ｍＬ）を、続いてＬｉＯＨ（７２６．３３ｍｇ、１７．３１ｍｍｏｌ）を丸底フラスコ中に導入した。溶液を撹拌し、６５℃で加熱した。１６時間後、反応は完結しておらず、Ｈ_２Ｏ（１０ｍＬ）中のＬｉＯＨ（７２６．３３ｍｇ）を加えた。混合物を６５℃で４８時間撹拌した。冷却後、反応媒体をＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、次いでＡｃＯＥｔ（３×４０ｍＬ）で抽出した。有機層をＨ_２Ｏ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、エステル／酸の混合物１．２９ｇを得た。水層を５ＮＨＣｌでｐＨ３にまで酸性化し、次いでＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層をＨ_２Ｏ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、化合物ＢＣ３（７８７ｍｇ）をベージュ色泡状物として得た（４０％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.50〜0.90 (m, 4 H); 1.03 (s, 6 H); 1.30 (s, 9 H); 2.60 (dd, J = 10.5および14.1 Hz, 1 H); 2.78 (dd, J = 5.0および14.1 Hz, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 3.97 (m, 1 H); 6.80 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.0および8.5 Hz, 1 H); 7.31 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.86 (s, 1 H); 12.11 (広幅なm, 1 H).

ＢＣ４：（Ｓ）−３−（（Ｒ）−２−アクリルアミド−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタン酸の合成

化合物２３：メチル（Ｓ）−３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタノエート
フラグメントＢ（２ｇ、６．０６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６０ｍＬ）中溶液に、ＥＤＣ（１．１３ｍＬ、７．０６ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（９４８ｍｇ、６．６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で１５分間撹拌し、次いでメチル（Ｓ）−３−アミノ−２，２−ジメチルブタノエート（８８１ｍｇ、６．０６ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．５３ｍＬ、９．１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で４時間撹拌し、真空で濃縮し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈した。水相をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を飽和ブライン（２×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル１５０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃの濃度勾配溶離）により精製して、化合物２３（２．２１ｇ）を無色ラッカーとして得た（７９％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.08 (s, 6H); 1.32 (s, 9H); 2.67 (dd, J = 9.9および13.6 Hz, 1H); 2.82 (dd, J = 5.2および13.6 Hz, 1H); 3.62 (s, 3H); 3.83 (s, 3H); 4.06 (m, 1H); 4.77 (m, 1H) 6.97 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4および8.6 Hz, 1H); 7.33 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 7.55 (d, J = 9.8 Hz, 1H).

化合物２４：メチル（Ｓ）−３−（（Ｒ）−２−アミノ−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタノエート２，２，２−トリフルオロアセテート
化合物２３（２．２ｇ、４．８１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２５ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（３．６ｍＬ、４８．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で終夜撹拌し、真空で濃縮し、トルエンの存在下で共蒸発させて、化合物２４（２．０ｇ）をジアステレオ異性体混合物として得た（８８％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.04 (s, 3H); 1.10 (s, 3H); 2.95 (d, J = 7.0 Hz, 2H); 3.62 (s, 3H); 3.84 (s, 3H); 4.00 (m, 1H); 4.15 (m, 1H); 7.10〜7.30 (m, 3H); 8.00 (d, J = 9,5 Hz, 1H); 8.22 (広幅なs, 3H).

化合物２５：メチル（Ｓ）−３−（（Ｒ）−２−アクリルアミド−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタノエート
化合物２４（２．０ｇ、４．２５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、塩化アクリロイル（５３６μＬ、６．３７ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２．５ｍＬ、１２．７４ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で２時間撹拌し、次いでＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈した。水相をＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を飽和ブライン（２×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル１００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃの濃度勾配溶離）により精製して、化合物２５（８５０ｍｇ）を８５：１５ジアステレオ異性体混合物として得た（６８％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.03 (s, 3H); 1.04 (s, 3H); 2.72 (dd, J = 9.7および13.9 Hz, 1H); 2.86 (dd, J = 5.8および13.9 Hz, 1H); 3.58 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.15 (m, 1H); 4.56 (m, 1H); 5.56 (dd, J = 2.3および10.2 Hz, 1H); 6.03 (dd, J = 2.3および17.2 Hz, 1H); 6.28 (dd, J = 10.2および17.2 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.17 (dd, J = 2.2および8.5 Hz, 1H); 7.31 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.72 (d, J = 9.8 Hz, 1H); 8.36 (d, J = 8.6 Hz, 1H).

化合物ＢＣ４：（Ｓ）−３−（（Ｒ）−２−アクリルアミド−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタン酸
０℃で冷却したｔＢｕＯＫ（１．１１ｇ、９．８６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）中溶液に、Ｈ_２Ｏ（４７μＬ）および化合物２５（４５０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で３時間撹拌し、次いで１ＮＨＣｌ（５ｍＬ）で酸性化した。水相をＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をＨ_２Ｏ（３０ｍＬ）、飽和ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。２種のジアステレオマーをＣｈｉｒａｌｐａｋＡＳ１０μｍカラム上での超臨界流体クロマトグラフィー（８５／１５ＣＯ_２／［ＭｅＯＨ＋０．１％ＴＥＡ］での定組成溶離）により分離して、化合物ＢＣ４（３８５ｍｇ）を非晶性固体として得た（８９％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.00 (s, 3H); 2.71 (dd, J = 9.4および13.7 Hz, 1H); 2.88 (dd, J = 5.3および13.7 Hz, 1H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 1H); 4.54 (m, 1H); 5.55 (dd, J = 2.3および10.2 Hz, 1H); 6.01 (dd, J = 2.3および17.1 Hz, 1H); 6.28 (dd, J = 10.2および17.1 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.17 (dd, J = 2.4および8.7 Hz, 1H); 7.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 7.80 (d, J = 9.8 Hz, 1H); 8.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 12.00 (広幅なs, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 395 [M-H]^-; m/z = 397 [M+H]⁺; t_R = 0.92分.

ＢＣ５：（Ｓ）−３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタン酸の合成

メチル（３Ｓ）−３−アミノ−２，２−ジメチルブタノエート（ＭＦＣＤ０９２５６６８９）を出発物とし、スキーム３２に示し、化合物ＢＣ１およびＢＣ２にて説明した構成単位ＢＣの一般的合成に従って、化合物ＢＣ５を製造した。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.89 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.02 (s, 3H); 1.04 (s, 3H); 1.30 (s, 9H); 2.68 (dd, J = 13.6および10.2 Hz, 1H); 2.82 (dd, J = 5.2および13.6 Hz, 1H); 3.80 (s, 3H); 4.05 (m, 1H); 4.12 (m, 1H); 7.00 (d, J = 8.7 Hz,
1H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 1H); 7.32 (d, J =
2.2 Hz, 1H); 7.52 (d, J = 9.9 Hz, 1H); 12.35 (広幅なs, 1H). LCMS (A1): ES m/z =
441 [M-H]^-; m/z = 443 [M+H]⁺; m/z = 883 [2M-H]^- ; t_R = 1.16分.

ＢＣ６：３−（（Ｒ）−２−アクリルアミド−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパン酸の合成

化合物２６：メチル３−（（Ｒ）−２−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート
フラグメントＣ４（１．０５９ｇ、５．７７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６０ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（２．０６ｍＬ、１１．７６ｍｍｏｌ）、フラグメントＢ（１．９０ｇ、５．７７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（９３５ｍｇ、６．９２ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１．２３ｍＬ、６．９２ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で４８時間撹拌し、真空で濃縮し、シリカゲル２００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃの定組成溶離）により精製して、化合物２６（１．０５ｇ）を無色油状物として得た（３９％）。RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.98 (s, 3H); 1.30 (s, 9H); 2.63 (m, 1H); 2.83 (m, 1H); 3.18〜3.48 (m, 4H); 3.60 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 1H); 4.81 (m, 1H); 6.98 (d, J = 8.9 Hz, 1H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.1および8.7 Hz, 1H); 7.35 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 7.83 (m, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 457 [M-H]^-; m/z = 459 [M+H]⁺; m/z = 503 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.1分.

化合物２７：メチル３−（（Ｒ）−２−アミノ−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパノエート塩酸塩
化合物２６（１．０５ｇ、２．２９ｍｍｏｌ）を室温で１時間ジオキサン中４ＭＨＣｌ（１６ｍＬ、６４ｍｍｏｌ）で処理した。反応媒体を真空で濃縮し、トルエンの存在下２回共蒸発させた。粗生成物をｉＰｒ_２Ｏ（１０ｍＬ）で摩砕し、濾過し、ｉＰｒ_２Ｏ（５ｍＬ）で２回洗浄した。次いでケーキをＤＣＭに溶解し、濾過し、真空で濃縮して、化合物２７（８０９ｍｇ）を白色泡状物として得（９０％）、これを更には精製せずに使用した。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.92 (s, 1.5H); 0.97 (s, 1.5H); 2.88 (m, 1H);
3.00 (m, 1H); 3.19〜3.47 (m, 4H); 3.60 (s, 3H); 3.85 (s, 3H); 4.05 (m, 1H); 4.89 (m, 1H); 7.11 (分割されたd, J = 8.6 Hz, 1H); 7.19 (分割されたdd, J = 2.0および8.6 Hz, 1H); 7.38 (分割されたd, J = 2.0 Hz, 1H); 8.15 (広幅なs, 3H); 8.39 (m, 1H).

化合物２８：メチル３−（（Ｒ）−２−アミノ−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２−メチル−２−（（（トリエチルシリル）オキシ）メチル）プロパノエート
氷浴で冷却した化合物２７（８０９ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）中溶液に、温度を４℃未満に維持しながらＴＥＡ（１．４３ｍＬ、１０．２３ｍｍｏｌ）およびクロロトリエチルシラン（１．３７ｍＬ、８．１９ｍｍｏｌ）を加えた。４℃で１０分間撹拌を行い、次いで反応媒体を室温で２０時間撹拌した。飽和ブライン（２０ｍＬ）およびＤＣＭを媒体に加え、これを１０分間撹拌した。有機相を飽和ブライン（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル７０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物２８（７０６ｍｇ）を淡黄色油状物として得た（７３％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.52 (q, J = 8.0 Hz, 6H); 0.89 (t, J = 8.0 Hz, 9H); 0.98 (s, 3H); 1.70 (広幅なs, 2H); 2.54 (m, 1H); 2.82 (m, 1H); 3.18〜3.45 (m, 3H); 3.58 (m, 2H); 3.60 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.14 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1H); 7.28 (分割されたd, J = 2.3 Hz, 1H); 7.78 (m, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 471 [M-H]^-; m/z = 473 [M+H]⁺; m/z = 517 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 0.97分.

化合物２９：メチル３−（（Ｒ）−２−アクリルアミド−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２−メチル−２−（（（トリエチルシリル）オキシ）メチル）プロパノエート
氷／アセトン浴で冷却した化合物２８（７０４ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１９ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（７８０μＬ、４．４６ｍｍｏｌ）を加え、塩化アクリロイル（１８１μＬ、２．２３ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応媒体を０〜５℃で１時間撹拌し、次いでＥｔＯＡｃ（３８ｍＬ）を加え、媒体を１ＮＨＣｌ（５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（５ｍＬ）、飽和ブライン（３×１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル３０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物２９（７４２ｍｇ）を無色油状物として得た（９４％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.52 (分割されたq, J = 8.0 Hz, 6H); 0.89 (分割されたt, J = 8.0 Hz, 9H); 0.99 (s, 1.5H); 1.01 (s, 1.5H); 2.69 (m, 1H); 2.87 (m, 1H); 3.20 (m, 1H); 3.28 (m, 1H); 3.50 (dd, J = 3.1および9.9 Hz, 1H); 3.58 (s, 3H); 3.68 (d, J = 9.9 Hz, 1H); 3.80 (s, 3H); 4.59 (m, 1H); 5.55 (d, J = 10.3 Hz, 1H); 6.00 (d, J = 17.3 Hz, 1H); 6.25 (分割されたdd, J = 10.3および17.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.18 (分割されたdd, J = 2.0および8.5 Hz, 1H); 7.31 (分割されたd, J = 2.0 Hz, 1H); 7.96 (m, 1H); 8.39 (d, J = 8.9 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 525 [M-H]^-; m/z = 527 [M+H]⁺; m/z = 571 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.54分.

化合物ＢＣ６：３−（（Ｒ）−２−アクリルアミド−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２−（ヒドロキシメチル）−２−メチルプロパン酸
氷／アセトン浴で冷却したｔＢｕＯＫ（１．４２ｇ、１２．６５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）中懸濁液に、Ｈ_２Ｏ（５０μＬ）を加え、媒体を１０分間撹拌した後、化合物２９（７４１ｍｇ、１．４１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）中溶液を加えた。０℃で１０分間次いで室温で１時間撹拌を行った。反応媒体を氷浴で冷却した後、１ＮＨＣｌ（１６．９ｍＬ）を加えた。１５分撹拌した後、反応媒体をＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ブライン（２×１５ｍＬ）、Ｈ_２Ｏ（１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、化合物ＢＣ６（６５６ｍｇ）を黄色泡状物として得た（定量的）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.91 (s, 3H); 2.69 (m, 1H); 2.90 (dd, J = 4.8および13.6 Hz, 1H); 3.18〜3.42 (m, 4H); 3.80 (s, 3H); 4.59 (m, 1H); 4.73 (広幅, 1H); 5.55 (d, J = 2.3および10.3 Hz, 1H); 6.00 (dd, J = 2.3および17.2 Hz, 1H); 6.24 (dd, J = 10.3および17.2 Hz, 1H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.19 (dd, J = 2.0および8.7 Hz, 1H); 7.35 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 8.00 (m, 1H); 8.39 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 12.30 (広幅なs, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 397 [M-H]^-; m/z = 399 [M+H]⁺; t_R = 0.77分.

実施例１から３：アザ−Ｃ５２のベンジル酸アミン、グルタリル−Ｖａｌ−Ａｌａ−アザ−Ｃ５２ベンジル酸アミンのＮＨＳエステルおよび対応するＡＤＣの合成

化合物３０：（６Ｒ，１３Ｓ）−（１Ｅ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｅ）−１−（４−（アジドメチル）フェニル）−８−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−メチル−８−オキソオクタ−１，６−ジエン−４−イル６−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１３−イソブチル−２，２，１０，１０−テトラメチル−４，７，１１−トリオキソ−３−オキサ−５，８，１２−トリアザテトラデカン−１４−オエート
アルゴン下、丸底フラスコ中にＤＭＦ（２５ｍＬ）中の化合物ＢＣ１（８９９．５５ｍｇ、２．１０ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（８６１ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｔ（３０２ｍｇ、２．２０ｍｍｏｌ）を導入した。混合物を室温で３０分間撹拌した。この後、化合物ＡＤ１（９４０ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．０５ｍＬ、５．９９ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で４時間撹拌した。この後、反応媒体をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＡｃＯＥｔ（２×４０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル８０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物３０（１．０１１ｇ）を黄色半固体として得た（５７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.76 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.78 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.07 (s, 6 H); 1.39 (s, 9 H); 1.37〜1.63 (m, 3 H); 1.41 (s, 9 H); 2.36〜2.60 (部分的にマスクされたm, 3 H); 2.64 (dd, J = 9.5および14.1 Hz, 1 H); 2.86 (dd, J = 5.6および14.1 Hz, 1 H); 3.18 (dd, J = 6.1および13.5 Hz, 1 H); 3.25 (dd, J = 6.9および13.5 Hz, 1 H); 3.79 (s, 3 H); 4.09 (m, 1 H); 4.26 (m, 1 H); 4.40 (s, 2 H); 4.92 (m, 1 H); 5.81 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.17 (dd, J = 8.4および16.1 Hz, 1 H); 6.44 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.70 (m, 1 H); 6.94 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.3および8.9 Hz, 1 H); 7.31 (m, 3 H); 7.42 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.59 (t, J = 6.3 Hz, 1 H); 7.77 (d, J = 7.9 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 879 [M-H]^-; m/z = 881 [M+H]⁺; m/z = 925 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.89分.

化合物３１：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｒ，Ｅ）−４−（４−（アジドメチル）フェニル）ブタ−３−エン−２−イル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６−ジメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
化合物３１を２工程で製造した。
工程１：丸底フラスコ中にＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物３０（１．０１１ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）を導入した。０℃に冷却した後、ＴＦＡ（１．７２ｍＬ、２２．９４ｍｍｏｌ）およびＨ_２Ｏ（１００μＬ）を加えた。反応媒体を室温で７２時間撹拌した。完結した時点で、トルエンを媒体に加え、これを真空で濃縮して、アミノ／酸中間体９００ｍｇ（定量的）を得た。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.76 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.78 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.08 (s, 3 H); 1.38〜1.62 (m, 3 H); 2.35〜2.58 (部分的にマスクされたm, 3 H); 2.79 (dd, J = 11.0および13.8 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 4.1および13.8 Hz, 1 H); 3.16 (dd, J = 5.9および13.5 Hz, 1 H); 3.28〜3.39 (マスクされたm, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 4.03 (m, 1 H); 4.26 (m, 1 H); 4.40 (s, 2 H); 4.92 (m, 1 H); 5.82 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 6.16 (dd, J = 8.8および16.4 Hz, 1 H); 6.42 (d, J = 16.4 Hz, 1 H); 6.73 (m, 1 H); 7.09 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.0および8.6 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2 H); 7.37 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.41 (d, J = 8.6 Hz, 2 H); 7.84 (d, J = 7.9 Hz, 1 H); 8.01 (広幅で大きなs, 3 H); 8.10 (t, J = 6.4 Hz, 1 H); 12.2 (広幅なs, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 723 [M-H]^-; m/z = 725 [M+H]⁺; t_R = 1.09分.

工程２：丸底フラスコ中、アミノ／酸中間体（８４０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（２００ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（１．９５ｍＬ、１１．５８ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（１５９．２３ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（４９９．４０ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で３時間撹拌した。真空で濃縮した後、粗製物をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）で希釈し、０．５Ｍクエン酸（１２ｍＬ）および１ＮＨＣｌ（６ｍＬ）で中和した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＳＯ_３、飽和ＮａＨＣＯ_３、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル４０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物３１（５５８ｍｇ）を白色固体として得た（６８％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.60 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.61 (d, J = 6.7 H
z, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.09 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.15 (m, 1 H);
1.33〜1.48 (m, 2 H); 2.24 (m, 1 H); 2.53〜2.70 (m, 2 H); 2.88 (大きなd, J = 13.6 Hz, 1 H); 3.01 (dd, J = 3.5および14.5 Hz, 1 H); 3.23〜3.32 (マスクされたm, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.18 (m, 1 H); 4.35 (m, 1 H); 4.40 (s, 2 H); 4.95 (m, 1 H); 5.86 (dd, J = 1.7および15.8 Hz, 1 H); 6.13 (dd, J = 8.8および16.1 Hz, 1 H); 6.40 (m, 1 H); 6.47 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.0および8.6 Hz, 1 H); 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 2 H); 7.41 (広幅なd, J = 8.6 Hz, 3 H); 7.89 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 8.1 (d, J = 8.2 Hz, 1 H).
LCMS (A1): ES m/z = 705 [M-H]^-; m/z = 707 [M+H]⁺; t_R = 1.58分.

化合物３２：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アジドメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６−ジメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
丸底フラスコ中、化合物３１（４１０ｍｇ、０．５７９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、０℃でｍ−ＣＰＢＡ（２５９ｍｇ，１．１６ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間撹拌した後、ｍ−ＣＰＢＡ（１３０ｍｇ）を２４時間で２回加えた。反応が完結した時点で、粗製の混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３（１５ｍＬ）および飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（１５ｍＬ）と共に１時間撹拌し、次いでＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、αおよびβエポキシドの混合物４４０ｍｇを黄色半固体として得た。αおよびβエポキシドをキラル液体クロマトグラフィーにより分離し、これは８０：２０ヘプタン／ＥｔＯＨでの定組成溶離を使用し、１０μｍのＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤ（１．１ｋｇ、アミローストリス−３，５−ジメチルフェニルカルバメートをシリカゲル担体上に被覆、ＣｈｉｒａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＥｕｒｏｐｅ）でパックした７６×３５０ｍｍカラム上で行った。濃縮後、化合物３２（１８５ｍｇ）を白色固体として得（４４％）、αエポキシド１１８ｍｇを白色固体として得た（２８％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.72 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.74 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.96 (s, 3 H); 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.08 (s, 3 H); 1.11 (m, 1 H); 1.40〜1.55 (m, 2 H); 1.79 (m, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.64 (m, 2 H); 2.85 (広幅なd, J = 13.2 Hz, 1 H); 3.00 (m, 2 H); 3.25 (dd, J = 10.2および13.2 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.17 (m, 1 H); 4.35 (m, 1 H); 4.46 (s, 2 H); 5.12 (m, 1 H); 5.80 (dd, J = 1.7および16.0 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.6および16.0 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.0および8.6 Hz, 1 H); 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.31〜7.40 (m, 5 H); 7.94 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.40 (d, J = 8.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 723 [M+H]⁺; t_R = 1.48分.

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アミノメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６−ジメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
丸底フラスコ中、化合物３２（１８５ｍｇ、２５５．７９μｍｏｌ）のＤＣＭ（６ｍＬ）、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（０．８ｍＬ）中溶液に、ＴＣＥＰ（８１，４７ｍｇ、２８１，３７μｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で１６時間撹拌した。反応が完結した時点で、粗製の混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３（１５ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１５ｇ上での連続した２種のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、実施例１（９０ｍｇ）を白色固体として得た（５１％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.72 (d, J = 6.6 Hz, 3 H); 0.75 (d, J = 6.6 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.14 (m, 1 H); 1.42〜1.57 (m, 2 H); 1.77 (m, 1 H); 1.92 (広幅なm, 2 H); 2.26 (m, 1 H); 2.64 (m, 2 H); 2.86 (広幅なd, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.94 (dd, J = 2.0および8.0 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.6および14.4 Hz, 1 H); 3.27 (dd, J = 10.2および13.0 Hz, 1 H); 3.70 (s, 2 H); 3.80 (s, 3 H); 3.84 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.18 (m, 1 H); 4.34 (m, 1 H); 5.11 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.7および15.6 Hz, 1 H); 6.38 (ddd, J = 4.1, 11.6および15.6 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.0および8.6 Hz, 1 H); 7.22 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.28 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.31 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.35 (d, J = 10.2 Hz, 1 H); 7.91 (d, J = 9.0 Hz, 1 H); 8.38 (d, J = 8.0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 695 [M-H]^-; m/z = 697 [M+H]⁺; t_R = 0.83分.

化合物３３：（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６−ジメチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド
アルゴン下丸底フラスコ中、実施例１（９０ｍｇ、１２９．０１μｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（（（（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）−３−メチルブタン−アミド）プロパン酸またはＦｍｏｃＶａｌＡｌａ（ＣＡＳ番号［１５０１１４−９７−９］、７９．４７ｍｇ、１９３．６１μｍｏｌ）、ＥＤＣ（３４．２７μＬ、１９３．６１μｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（２０．９３ｍｇ、１５４．９μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で終夜撹拌した。この後、ピペリジン（１２９μＬ、１．２９ｍｍｏｌ）を加え、２時間撹拌した。溶媒を除去し、粗製の残留物をシリカゲル１５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物３３（５０ｍｇ、４５％）を白色固体として得た。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.75 (m, 9 H); 0.88 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 0.96 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.08 (s, 3 H); 1.18 (m, 1 H); 1.23 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.42〜1.57 (m, 2 H); 1.70 (広幅なm, 2 H); 1.79 (m, 1 H); 1.92 (m, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.63 (m, 2 H); 2.86 (広幅なd, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.99 (m, 3 H); 3.22〜3.33 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.86 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.18 (m, 1 H); 4.28 (d, J = 6.3 Hz, 2 H); 4.33 (m, 2 H); 5.11 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.7および15.6 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 4.1, 11.6および15.6 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.0および8.6 Hz, 1 H); 7.24 (s, 4 H); 7.28 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.37 (d, J = 10.2 Hz, 1 H); 7.92 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.07 (広幅なd, J = 8.3 Hz, 1 H); 8.38 (d, J = 8.1 Hz, 1 H); 8.42 (t, J = 6.3 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 434 [M+2H]²⁺; m/z = 865 [M-H]^-; m/z = 867 [M+H]⁺; m/z = 911 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 0.88分.

化合物３４：５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６−ジメチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
アルゴン下丸底フラスコ中、化合物３３（５４ｍｇ、５７．６４μｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）中溶液に、グルタル酸無水物（８ｍｇ、６９．１７μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で３．５時間撹拌した。この後、溶媒を除去し、粗製の残留物をシリカゲル１．８ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物３４（５１ｍｇ）を白色固体として得た（９０％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.73 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.76 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.81 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.05 (s, 3 H); 1.15 (m, 1 H); 1.22 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.43〜1.52 (m, 2 H); 1.70 (m, 2 H); 1.77 (m, 1 H); 1.97 (m, 1 H); 2.17 (m, 2 H); 2.24 (m, 1 H); 2.55〜2.68 (m, 2 H); 2.85 (広幅なd, J = 12.7 Hz, 1 H); 2.96 (dd, J = 1.8および7.7 Hz, 1 H); 2.99 (dd, J = 3.0および14.6 Hz, 1 H); 3.23〜3.40 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.85 (d, J = 1.8 Hz, 1 H); 4.22〜4.38 (m, 4 H); 5.11 (m, 1 H); 5.79 (d, J = 14.9 Hz, 1 H); 6.37 (ddd, J = 4.1, 11.3および14.9 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 (dd, J = 2.0および8.7 Hz, 1 H); 7.23 (広幅なs, 4 H); 7.28 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 7.37 (広幅なd, J = 10.7 Hz, 1 H); 7.87 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.93 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 8.06 (大きなm, 1 H); 8.37 ( 広幅なm, 1 H); 8.41 (広幅なm, 1 H); 12.03 (広幅なm, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 979 [M-H]^-; m/z = 981 [M+H]⁺; t_R= 1.17分.

２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６−ジメチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート
アルゴン下丸底フラスコ中、化合物３４（３０ｍｇ、３０．５６μｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（５．３４μＬ、３０．５６μｍｏｌ）およびＤＳＣ（１６．３１ｍｇ、６１．１３μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で２時間撹拌した。この後、溶媒を除去し、粗製の残留物をシリカゲル１．３ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、実施例２（９ｍｇ）を白色固体として得た。不純物と共に所望の化合物を含む２番目のバッチをＭｅＴＨＦで希釈し、Ｈ_２Ｏ、飽和ブラインで２回洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、実施例２（１５ｍｇ）を白色固体として得た（合計収率７３％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.73 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.77 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.96 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.07 (s, 3 H); 1.15 (m, 1 H); 1.23 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.43〜1.56 (m, 2 H); 1.78 (m, 1 H); 1.81 (m, 1 H); 1.97 (m, 1 H); 2.20〜2.33 (m, 3 H); 2.58〜2.69 (m, 4 H); 2.80 (s, 4 H); 2.85 (広幅なd, J = 12.7 Hz, 1 H); 2.98 (dd, J = 2.1および7.9 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.2および14.7 Hz, 1 H); 3.22〜3.34 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.85 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 4.15 (m, 2 H); 4.22〜4.38 (m, 4 H); 5.11 (m, 1 H); 5.79 (d, J = 15.1 Hz, 1 H); 6.38 (ddd, J = 3.9, 11.2および15.1 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 1 H); 7.22 (広幅なs, 4 H); 7.29 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.36 (広幅なd, J = 10.3 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.92 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 8.04 (d, J = 7.4 Hz, 1 H); 8.32 (t, J = 6.1 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 8.0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 540; m/z = 1076 [M-H]^-; m/z = 1078 [M+H]⁺; m/z = 1122 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.23分.

ｍＡｂ−Ｅｘ２
前に記載した一般方法を実施例３の製造に使用した。ｈｕ２Ｈ１１＿Ｒ３５−７４（６０ｍｇ）を、実施例２のＤＭＡ中９．９６ｍＭ溶液（１６１μＬ、１．７３３ｍｇ、４当量）と２時間反応させた。この時点で、実施例２の溶液（１２１μＬ、３当量）を加え、媒体を２時間撹拌した。この時点で、実施例２の溶液（１２１μＬ、３当量）を加え、２時間撹拌した。ＤＰＢＳｐＨ６．５＋２０％ＮＭＰ中Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ｐｇ上で精製し、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ−１５上で濃縮し、緩衝液ＢｐＨ６．５＋５％ＮＭＰ中ＰＤ−１０上で緩衝液を交換し、Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ上で濾過した後、実施例３（３９．９ｍｇ）を無色透明溶液として２．２８ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＡＲ４．６（ＨＲＭＳ）、単量体純度９９％および合計収率６６％にて得た。

ＳＥＣ−ＨＲＭＳ：図１におけるインタクトＡＤＣのスペクトル；ｍ／ｚ＝１５０３４６（Ｄ１）；ｍ／ｚ＝１５１３０７（Ｄ２）；ｍ／ｚ＝１５２２７４（Ｄ３）；ｍ／ｚ＝１５３２４０（Ｄ４）；ｍ／ｚ＝１５４２００（Ｄ５）；ｍ／ｚ＝１５５１６５（Ｄ６）；ｍ／ｚ＝１５６１３３（Ｄ７）；ｍ／ｚ＝１５７０９５（Ｄ８）。

実施例４から７：（Ｓ）−３−ネオペンチル−アザ−Ｃ５２のベンジル酸アミン、グルタリル−Ｖａｌ−Ａｌａ−（Ｓ）−３−ネオペンチル−アザ−Ｃ５２ベンジル酸アミンのＮＨＳエステルおよび対応するＡＤＣの合成

化合物３５：（６Ｒ，１３Ｓ）−（１Ｅ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｅ）−８−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−３−メチル−８−オキソオクタ−１，６−ジエン−４−イル６−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−２，２，１０，１０−テトラメチル−１３−ネオペンチル−４，７，１１−トリオキソ−３−オキサ−５，８，１２−トリアザテトラデカン−１４−オエート
アルゴン下丸底フラスコ中、フラグメントＢＣ１（１．３２ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６０ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（１．５３ｍＬ、９．２５ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（５０３．７５ｍｇ、３．７０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１．４１ｇ、３．７０ｍｍｏｌ）を加えた。黄色懸濁液を室温で３０分間撹拌し、次いでフラグメントＡＤ２（１．７ｇ、３．０８ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で２時間撹拌した。この後、ＤＩＥＡ（１．５３ｍＬ）を加え、１時間撹拌した。混合物を１Ｍクエン酸（５０ｍＬ）で中和し、ＡｃＯＥｔ（２×８０ｍＬ）で抽出した。有機層を１ＭＮａＨＳＯ_４、Ｈ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物３５（１．４７５ｇ）を無色固体として得た（５７％）。

化合物３６：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−５−（（（Ｓ）−２−（３−（（Ｒ）−２−アミノ−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルプロパンアミド）−４，４−ジメチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−（ヒドロキシメチル）−フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエン酸
丸底フラスコ中、化合物３５（１．４７５ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（８ｍＬ、５２．２７ｍｍｏｌ）およびＨ_２Ｏ（２ｍＬ）を加えた。反応媒体を室温で５時間撹拌した。溶媒を除去した。残留物をＨ_２Ｏ（２０ｍＬ）およびＡｃＯＥｔ（２０ｍＬ）で希釈し、室温で２時間２ＭＮａＯＨ（２ｍＬ）で処理した。有機層を分離し、水層をＡｃＯＥｔ（２×１０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、無色固体１．２４ｇを得た。固体をＡｃＯＥｔ（１０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）に溶解し、室温で２時間２ＭＮａＯＨ（４００μＬ）で処理した。有機層を分離し、水層をＡｃＯＥｔ（２×１０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物３６（９９０ｍｇ）を白色固体として得た（８２％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.99 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.05 (s, 3 H); 1.52 (dd, J = 2.0および14.8 Hz, 1 H); 1.69 (dd, J = 9.9および14.8 Hz, 1 H); 2.36〜2.61 (部分的にマスクされたm, 4 H); 2.84 (dd, J = 5.0および13.9 Hz, 1 H); 3.18 (d, J = 7.5 Hz, 2 H); 3.40 (dd, J = 5.1および8.1 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.29 (m, 1 H); 4.45 (s, 2 H); 4.90 (m, 1 H); 5.12 (広幅なm, 1 H); 5.81 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.10 (dd, J = 8.4および15.9 Hz, 1 H); 6.40 (d, J = 15.9 Hz, 1 H); 6.70 (td, J = 7.5および15.5 Hz, 1 H); 7.01 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.11 (dd, J = 2.4および8.7 Hz, 1 H); 7.25 (m, 3 H); 7.32 (d, J = 8.2 Hz, 2 H); 7.72 (t, J = 6.5 Hz, 1 H); 7.79 (d, J = 7.8 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 712 [M-H]^-; m/z = 714 [M+H]⁺; t_R = 0.94分.

化合物３７：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｒ，Ｅ）−４−（４−（ヒドロキシメチル）−フェニル）ブタ−３−エン−２−イル）−６，６−ジメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
アルゴン下、丸底フラスコ中に化合物３６（９９０ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ）およびＣＨ_３ＣＮ（１５０ｍＬ）を導入し、完全に溶解するまで水浴で５０℃にて加熱し、１０分間撹拌した。この後、ＤＩＥＡ（６８７．２０μＬ、４．１６ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（２０７．５１ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（５７９．７ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分間撹拌した。反応媒体を１Ｍクエン酸（３０ｍＬ）で中和した。溶媒を除去し、水層をＡｃＯＥｔ（２×４０ｍＬ）で抽出した。有機層を１ＭＮａＨＳＯ_４、Ｈ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮した。粗製の固体をＨ_２Ｏ（２００ｍＬ）で希釈し、１時間撹拌した。固体を濾過し、次いでＡｃＯＥｔで希釈し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、化合物３７とＨＡＴＵとの混合物を得た。固体をＭｅＴＨＦ（５０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）と共に撹拌した。有機層を分離し、Ｈ_２Ｏ（４×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）により精製して、化合物３７（６８０ｍｇ）を無色固体として得た（７０％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.68 (s, 9 H); 0.98 (s, 3 H); 1.03 (s, 3 H); 1.09 (d, J = 6.9 Hz, 3 H); 1.19 (広幅なd, J = 14.5 Hz, 1 H); 1.58 (dd, J = 10.3および14.5 Hz, 1 H); 2.23 (m, 1 H); 2.52〜2.70 (m, 3 H); 2.86 (広幅なd, J = 12.7
Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.3および14.8 Hz, 1 H); 3.22〜3.33 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.18 (m, 1 H); 4.42 (m, 1 H); 4.46 (d, J = 6.0 Hz, 2 H); 4.91 (m, 1 H); 5.13 (t, J = 6.0 Hz, 1 H); 5.85 (広幅なd, J = 15.0 Hz, 1 H); 6.05 (dd, J = 8.4および15.9 Hz, 1 H); 6.40 (m, 2 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 1 H); 7.25 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.29 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 7.31 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.42 (d, J = 10.6 Hz, 1 H); 7.94 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.41 (d, J = 8.2 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 694 [M-H]^-; m/z = 696 [M+H]⁺; t_R = 1.36分.

化合物３８：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６−ジメチル−３−ネオペンチル−１６−（（Ｒ，Ｅ）−４−（４−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）フェニル）ブタ−３−エン−２−イル）−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
アルゴン下０℃で丸底フラスコ中、化合物３７（６８０ｍｇ、０．９７６ｍｍｏｌ）のＣＨＣｌ_３（１０ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−イミダゾール（３０５．８４ｍｇ、４．４９ｍｍｏｌ）およびクロロトリイソプロピルシラン（４８０．１３μｌ、２．２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で５時間撹拌し、次いで飽和ＮＨ_４ＣｌおよびＭＴＢＥ（３０ｍＬ）で希釈した。有機層を１ＭＮａＨＳＯ_４、飽和ＮａＨＣＯ_３、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、化合物３８（９７０ｍｇ）をオレンジ色非晶性固体として得た（定量的）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.63 (s, 9 H); 0.87〜1.17 (m, 31 H); 1.53 (dd, J = 10.9および14.3 Hz, 1 H); 2.22 (m, 1 H); 2.51〜2.70 (m, 3 H); 2.86 (広幅なd, J = 13.0 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.2および14.9 Hz, 1 H); 3.24〜3.35 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.18 (m, 1 H); 4.41 (m, 1 H); 4.76 (s, 2 H); 4.91 (m, 1 H); 5.87 (広幅なd, J = 15.4 Hz, 1 H); 6.06 (dd, J = 8.9および15.9 Hz, 1 H); 6.40 (m, 2 H); 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1 H); 7.18 (広幅なd, J = 8.5 Hz, 1 H); 7.25 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.28 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.30 (広幅なs, 1 H); 7.42 (d, J = 10.5 Hz, 1 H); 7.93 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 8.42 (d, J = 8.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 850 [M-H]^-; m/z = 852 [M+H]⁺; m/z = 896 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 2.15分.

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（ヒドロキシ−メチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−６，６−ジメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
実施例４を２工程で製造した。
工程１：アルゴン下丸底フラスコ中、化合物３８（８３２ｍｇ、０．９７６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、ｍ−ＣＰＢＡ（３３９．１５ｍｇ、１．５１ｍｍｏｌ）を３回で加えた。反応混合物を室温で５０時間撹拌し、次いでＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３（３０ｍＬ）およびＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３（３０ｍＬ）と共に１５分間撹拌した。有機層を分離し、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、αおよびβエポキシドの混合物１．１ｇを無色泡状物として得た（定量的）。

工程２：αおよびβエポキシドの混合物をＴＨＦ（３０ｍＬ）に希釈し、１ＭＴＢＡＦ（９５２．３２μＬ）を加えた。２時間撹拌した後、ＴＢＡＦ（９５２μＬ）を加えた。１時間撹拌した後、混合物をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、αおよびβエポキシドの混合物７７０ｍｇを黄色固体として得た（定量的）。αおよびβエポキシドをキラル液体クロマトグラフィーにより分離し、これは７５：２５ヘプタン／ＥｔＯＨでの定組成溶離を使用し、１０μｍのＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤ（１．１ｋｇ、アミローストリス−３，５−ジメチルフェニルカルバメートをシリカゲル担体上に被覆、ＣｈｉｒａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＥｕｒｏｐｅ）でパックした７６×３５０ｍｍカラム上で行った。濃縮後、実施例４（１９０ｍｇ）を白色固体として得（３１％）、αエポキシド１２５ｍｇを白色固体として得た（２０％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.81 (s, 9 H); 0.98 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.05 (s, 3 H); 1.26 (m, 1 H); 1.71 (dd, J = 10.4および14.5 Hz, 1 H); 1.82 (m, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.52 (m, 2 H); 2.84 (d, J = 12.8 Hz, 1 H); 2.92 (dd, J = 2.1および7.8 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.1および14.5 Hz, 1 H); 3.24〜3.36 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 4.17 (ddd, J = 3.4, 8.0および11.7 Hz, 1 H); 4.42 (m, 1 H); 4.50 (d, J = 6.0 Hz, 2 H); 5.10 (m, 1 H); 5.20 (t, J = 6.0 Hz, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.8および15.4 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.5および15.4 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.1および8.6 Hz, 1 H); 7.26 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.29 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.41 (d, J = 10.3 Hz, 1 H); 8.02 (d, J = 9.2 Hz, 1 H); 8.38 (d, J = 8.2 Hz, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 710 [M-H]^-; m/z = 712 [M+H]⁺; t_R = 1.28分.

化合物３９：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アジドメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６−ジメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
アルゴン下丸底フラスコ中、実施例４（１００ｍｇ、１４０μｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に、ＤＰＰＡ（１５６．８２μｌ、７０１．９８μｍｏｌ）およびＤＢＵ（１１０．２２μｌ、７０１．９８μｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で６時間撹拌し、次いでＨ_２Ｏで希釈し、ＡｃＯＥｔ（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１５ｇ（ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物３９（１００ｍｇ）を白色固体として得た（４０％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.28 (d, J = 14.5 Hz, 1 H); 1.69 (dd, J = 10.7および14.5 Hz, 1 H); 1.84 (m, 1 H); 2.28 (m, 1 H); 2.62 (m, 2 H); 2.84 (d, J = 12.8 Hz, 1 H); 2.93〜3.03 (m, 2 H); 3.22〜3.34 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.92 (広幅なs, 1 H); 4.17 (m, 1 H); 4.40〜4.49 (m, 3 H); 5.10 (m, 1 H); 5.80 (d, J = 15.8 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.7および15.8 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 1 H); 7.28 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.39 (d, J = 8.3 Hz, 2 H); 7.41 (m, 1 H); 8.00 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.36 (d, J = 8.2 Hz, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 735 [M-H]^-; m/z = 737 [M+H]⁺; t_R = 1.54分.

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アミノメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６−ジメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
丸底フラスコ中、化合物３９（１００ｍｇ、１２２．０７μｍｏｌ）のＤＣＭ（２．５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（２．５ｍＬ）中溶液に、ＴＣＥＰ（３８．８８ｍｇ、１３４．２８μｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（５００μＬ）中溶液を滴下添加した。反応媒体を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をＨ_２Ｏおよび飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈し、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、実施例５（７３ｍｇ）を白色固体として得（８４％）、更には精製せずに次の工程に使用した。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.82 (s, 9 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.
0 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.29 (d, J = 14.4 Hz, 1 H); 1.70 (dd, J = 10.2および14.4 Hz, 1 H); 1.80 (m, 1 H); 2.02 (広幅なm, 2 H); 2.25 (m, 1 H); 2.62 (m, 2 H); 2.83 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.93 (dd, J = 2.2および7.8 Hz, 1 H); 2.99 (dd, J = 3.4および14.5 Hz, 1 H); 3.23〜3.35 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.71 (s, 2 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.17 (ddd, J = 3.5, 8.5および11.5 Hz, 1 H); 4.41 (m, 1 H); 5.09 (m, 1 H); 5.79 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.7, 11.4および15.7 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1 H); 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.28 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.40 (d, J = 10.3, 1 H); 8.02 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 8.38 (d, J = 8.2 Hz, 1H). LCMS (A1): ES m/z = 709 [M-H]^-; m/z = 711 [M+H]⁺; t_R = 0.86分.

化合物４０：（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６−ジメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
アルゴン下、丸底フラスコ中に実施例５（７３ｍｇ、８２．１０μｍｏｌ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）を、続いてＦｍｏｃＶａｌＡｌａ（５０．５５ｍｇ、１２３．１６μｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１７．７５ｍｇ、１３１．３７μｍｏｌ）、ＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＥＤＣ（１４．５３μｌ、８２．１０μｍｏｌ）を導入した。溶液を室温で４時間撹拌し、次いでＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、Ｈ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１５ｇ（ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物４０（９０ｍｇ）を無色固体として得た（９９％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.84 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 0.86 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 0.93 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.24 (d, J = 7.3 Hz, 3 H); 1.29 (d, J = 14.5 Hz, 1 H); 1.70 (dd, J = 10.5および14.5 Hz, 1 H); 1.81 (m, 1 H); 1.99 (m, 1 H); 2.25 (m, 1 H); 2.60 (m, 2 H); 2.82 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.91 (dd, J = 1.9および7.6 Hz, 1 H); 2.99 (dd, J = 3.4および14.5 Hz, 1 H); 3.29 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 1.9 Hz, 1 H); 3.90 (m, 1 H); 4.16 (ddd, J = 3.4, 8.0および11.8 Hz, 1 H); 4.20〜4.35 (m, 6 H); 4.41 (m, 1 H); 5.09 (m, 1 H); 5.79 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.7, 11.6および15.7 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.15 (dd, J = 2.5および8.6 Hz, 1 H); 7.21 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.24 (d, J = 8.5 Hz, 2 H); 7.28 (d, J = 2.5 Hz, 1 H); 7.32 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.38〜7.47 (m, 4 H); 7.73 (t, J = 7.9 Hz, 2 H); 7.89 (d, J = 7.9 Hz, 2 H); 8.03 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.05 (d, J = 7.9 Hz, 1 H); 8.39 (m, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 1103 [M+H]⁺; m/z = 1147 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.71分.

化合物４１：（Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６−ジメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド
アルゴン下、丸底フラスコ中にＤＣＭ（５ｍＬ）中の化合物４０（１０４ｍｇ、７６．６５μｍｏｌ）を、続いてピペリジン（１３８．８７μｌ、１．４０ｍｍｏｌ）を導入した。溶液を室温で５時間撹拌し、次いで濃縮し、シリカゲル１０ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物４１（５０ｍｇ）を無色固体として得た（６０％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.76 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.81 (s, 9 H); 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.22 (d, J = 7.3 Hz, 3 H); 1.29 (d, J = 14.6 Hz, 1 H); 1.66 (広幅なm, 2 H); 1.70 (dd, J = 10.6および14.6 Hz, 1 H); 1.81 (m, 1 H); 1.92 (m, 1 H); 2.25 (m, 1 H); 2.60 (m, 2 H); 2.83 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.93 (dd, J = 1.9および7.4 Hz, 1 H); 2.99 (m, 2 H); 3.28 (dd, J = 10.4および13.0 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 1.9 Hz, 1 H); 4.16 (ddd, J = 3.2および8.2および11.8 Hz, 1 H); 4.29 (d, J = 6.0 Hz, 2 H); 4.34 (m, 1 H); 4.41 (m, 1 H); 5.09 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.7および15.5 Hz, 1 H); 6.38 (ddd, J = 3.8, 11.3および15.5 Hz, 1 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 1 H); 7.25 (m, 4 H); 7.29 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.40 (d, J = 10.4 Hz, 1 H); 8.02 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.08 (大きなd, J = 7.7 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 8.2 Hz, 1 H); 8.45 (t, J = 6.0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M+2H]²⁺; m/z = 879 [M-H]^-; m/z = 881 [M+H]⁺; m/z = 925 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 0.99分.

化合物４２：５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシ−ベンジル）−６，６−ジメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
アルゴン下、丸底フラスコ中にＤＣＭ（１０ｍＬ）中の化合物４１（５０ｍｇ、５１．０５μｍｏｌ）を、続いてグルタル酸無水物（１０．４８ｍｇ、９１．８９μｍｏｌ）を導入した。反応媒体を室温で２時間撹拌し、濃縮し、シリカゲル１０ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物４２（４２ｍｇ）を無色固体として得た（８２％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.23 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.29 (d, J = 14.2 Hz, 1 H); 1.70 (m, 3 H); 1.81 (m, 1 H); 1.96 (m, 1 H); 2.18〜2.25 (m, 5 H); 2.61 (m, 2 H); 2.83 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.93 (dd, J = 2.0および7.4 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.1および14.5 Hz, 1 H); 3.29 (dd, J = 10.4および13.0 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.16 (m, 2 H); 4.25〜4.31 (m, 3 H); 4.42 (m, 1 H); 5.09 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.9および15.5 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.6および15.5 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 (dd, J = 2.1および8.7 Hz, 1 H); 7.23 (m, 4 H); 7.28 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 7.40 (d, J = 10.4 Hz, 1 H); 7.83 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 8.02 (m, 2 H); 8.35 (t, J = 6.1 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 8.0 Hz, 1 H); 12.04 (広幅なm, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 498 [M+2H]²⁺; m/z = 993 [M-H]^-; m/z = 995 [M+H]⁺; t_R = 1.27分.

２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６−ジメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート
アルゴン下、丸底フラスコ中にＤＣＭ（５ｍＬ）中の化合物４２（２３ｍｇ、２３．１０μｍｏｌ）を、続いてＤＳＣ（８．２９ｍｇ、３２．３４μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（５．６３μＬ、３２．３４μｍｏｌ）を導入した。反応媒体を室温で２時間撹拌した。この後、ＤＳＣ（２ｍｇ）、ＤＩＥＡ（１μＬ）およびＤＣＭ（２ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。溶媒を除去し、粗製の残留物をシリカゲル１０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、実施例６（２０ｍｇ）を無色固体として得た（７９％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80 (s, 9 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.02 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.04 (s, 3 H); 1.23 (d, J = 7.2 Hz, 3 H); 1.30 (d, J = 14.2 Hz, 1 H); 1.70 (dd, J = 10.7および14.7 Hz, 1 H); 1.81 (m, 3 H); 1.97 (m, 1 H); 2.21〜2.32 (m, 3 H); 2.61 (m, 2 H); 2.68 (t, J = 7.8 Hz, 2 H); 2.80 (広幅なs, 4 H); 2.83 (d, J = 13.0 Hz, 1 H); 2.94 (dd, J = 2.0および7.6 Hz, 1 H); 3.00 (dd, J = 3.4および14.9 Hz, 1 H); 3.28 (dd, J = 10.5および13.0 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.16 (m, 2 H); 4.23〜4.31 (m, 3 H); 4.42 (m, 1 H); 5.10 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.9および15.3 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 3.8, 11.4および15.3 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2および8.8 Hz, 1 H); 7.23 (m, 4 H); 7.28 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.40 (d, J = 10.5 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 8.02 (d, J = 9.1 Hz, 1 H); 8.06 (d, J = 7.5 Hz, 1 H); 8.34 (t, J = 6.1 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 8.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 546.5 [M+2H]²⁺; m/z = 1090 [M-H]^-; m/z = 1092 [M+H]⁺; m/z = 1136 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 1.34分.

ｍＡｂ−Ｅｘ６
前に記載した一般方法を実施例７の製造に使用した。ｈｕ２Ｈ１１＿Ｒ３５−７４（６０ｍｇ）を、実施例６のＤＭＡ中１０．６ｍＭ溶液（２３３μＬ、５当量）と２時間反応させた。ＤＰＢＳｐＨ６．５＋２０％ＮＭＰ中Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ｐｇ上で精製し、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ−１５上で濃縮し、緩衝液ＢｐＨ６．５＋５％ＮＭＰ中ＮＡＰ−２５上で緩衝液を交換し、Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ上で濾過した後、実施例７（３９ｍｇ）を無色透明溶液として１．９８ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＡＲ４．１（ＨＲＭＳ）、単量体純度１００％および合計収率６６％にて得た。

ＳＥＣ−ＨＲＭＳ：図２におけるインタクトＡＤＣのスペクトル；ｍ／ｚ＝１４９３７０（ネイキッドｍＡｂ）；ｍ／ｚ＝１５０３５７（Ｄ１）；ｍ／ｚ＝１５１３３０（Ｄ２）；ｍ／ｚ＝１５２３０７（Ｄ３）；ｍ／ｚ＝１５３２８５（Ｄ４）；ｍ／ｚ＝１５４２６２（Ｄ５）；ｍ／ｚ＝１５５２３８（Ｄ６）；ｍ／ｚ＝１５６２２２（Ｄ７）。

実施例８から１０：７−Ｍｅ−アザ−Ｃ５２ステレオマー１のベンジル酸アミン、グルタリル−Ｖａｌ−Ａｌａ−７−Ｍｅ−アザ−Ｃ５２ベンジル酸アミンステレオマー１のＮＨＳエステルおよび対応するＡＤＣの合成

化合物４３：（６Ｒ，１３Ｓ）−（１Ｅ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｅ）−１−（４−（アジドメチル）フェニル）−８−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−３−メチル−８−オキソオクタ−１，６−ジエン−４−イル６−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１３−イソブチル−２，２，９，１０，１０−ペンタメチル−４，７，１１−トリオキソ−３−オキサ−５，８，１２−トリアザテトラデカン−１４−オエート
アルゴン下、丸底フラスコ中にＤＭＦ（５ｍＬ）中のフラグメントＢＣ２（１．１０ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）を、続いてＨＡＴＵ（９５０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｔ（３４０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を導入した。混合物を室温で３０分間撹拌し、次いでフラグメントＡＤ１（１．２４ｇ、２．１８ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１．２ｍＬ、６．８７ｍｍｏｌ）を加えた。黄色溶液を室温で１６時間撹拌し、Ｈ_２Ｏでクエンチし、ＡｃＯＥｔ（３×３０ｍＬ）で抽出した。有機層をＨ_２Ｏ、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル２００ｇ（ヘプタン／ＡｃＯＥｔの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物４３（１．５５ｇ）を白色メレンゲ状物として得た（７７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 55/45 ジアステレオ異性体混合物; 0.82〜0.89 (m, 6 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 1.65 H); 0.91 (d, J = 7.0 Hz, 1.35 H); 0.99〜1.09 (m, 9 H); 1.30 (s, 9 H); 1.40 (s, 10 H); 1.50〜1.70 (m, 2 H); 2.38〜2.59 (部分的にマスクされたm, 3 H); 2.68 (m, 1 H); 2.84 (m, 1 H); 3.79 (s, 1.35 H); 3.81 (s, 1.65 H); 4.00〜4.18 (m, 2 H); 4.30 (m, 1 H); 4.40 (広幅なs, 2 H); 4.92 (m, 1 H);
5.81 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.18 (dd, J = 8.3および16.1 Hz, 1 H); 6.45 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 6.71 (td, J = 7.3および15.7 Hz, 1 H); 6.94 (d, J = 8.1 Hz, 0.45 H); 6.96 (d, J = 8.1 Hz, 0.55 H); 7.04 (分割されたd, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.19 (広幅なd, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.30 (d, J = 7.8 Hz, 2 H); 7.32 (広幅なs, 1 H); 7.41 (d, J = 8.7 Hz, 2 H); 7.52 (d, J = 10.1 Hz, 0.45 H); 7.59 (d, J = 10.1 Hz, 0.55 H); 7.74 (m, 1 H). LCMS (A1): 55/45 ジアステレオ異性体混合物; ES m/z = 895 [M+H]⁺; m/z = 917 [M+Na]⁺; t_R = 6.94-6.98分.

化合物４４および４５：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｒ，Ｅ）−４−（４−（アジドメチル）フェニル）ブタ−３−エン−２−イル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６，７−トリメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
化合物４４および４５を２工程で得た。
工程１：０℃で丸底フラスコ中、化合物４３（１．５０ｇ、１．６７ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１１ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（２．６ｍＬ、３４．６５ｍｍｏｌ）およびＨ_２Ｏ（１００μＬ）を加えた。混合物を０℃で１５分間および室温で６．５時間撹拌した。次いで反応媒体を真空で蒸発させ、トルエンの存在下で共蒸発させて、脱保護中間体１．７ｇをオレンジ色固体として得た。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 55/45 ジアステレオ異性体混合物; 0.70〜0.80 (m, 7.65 H); 0.90 (s, 1.35 H); 0.95 (m, 3 H); 1.01〜1.09 (m, 6 H); 1.38〜1.68 (m, 3 H); 2.40〜2.60 (部分的にマスクされたm, 3 H); 2.80〜3.02 (m, 2 H); 3.81 (s, 1.35 H); 3.82 (s, 1.65 H); 3.96〜4.08 (m, 1 H); 4.18 (m, 1 H); 4.28 (m, 1 H); 4.41 (s, 2 H); 4.91 (m, 1 H); 5.83 (d, J = 15.7 Hz, 0.45 H); 5.85 (d, J = 15.7 Hz, 0.55 H); 6.18 (m, 1 H); 6.43 (d, J = 16.1 Hz, 0.45 H); 6.46 (d, J = 16.1 Hz, 0.55 H); 6.74 (m, 1 H); 7.08〜7.20 (m, 2 H); 7.30 (マスクされたm, 0.45 H); 7.32 (d, J = 7.8 Hz, 2 H); 7.37 (d, J = 2.0 Hz, 0.55 H); 7.42 (m, 2 H); 7.76 (d, J = 8.00 Hz, 0.45 H); 7.79 (d, J = 8.00 Hz, 0.55 H); 7.86 (d, J = 10.1 Hz, 0.55 H); 8.00 (d, J = 10.1 Hz, 0.45 H); 8.11 (広幅なm, 3 H); 12.22 (広幅なm, 1 H). LCMS (A1): 55/45 ジアステレオ異性体混合物; ES m/z = 737 [M-H]^-; m/z = 739 [M+H]⁺; t_R = 1.07-1.09分.

工程２：丸底フラスコ中、脱保護中間体（１．４３ｇ、１．６８ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（２５ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（３ｍＬ、１６．２３ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（２５０．９１ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（７００．９１ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１時間撹拌した。次いで溶媒を除去し、媒体をＡｃＯＥｔ（２００ｍＬ）で希釈し、０．５Ｍクエン酸およびＨＣｌで中和した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＳＯ_３、飽和ＮａＨＣＯ_３、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１００ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物４４および４５（６４０ｍｇ）を黄色固体として得た（５３％）。

Ｃ７でのジアステレオ異性体をキラル液体クロマトグラフィーにより分離し、これは５０：５０ヘプタン／ＥｔＯＨでの定組成溶離を使用する１０μｍのＷｈｅｌｋ０１ＳＳ（１．１ｋｇ、４−（３，５−ジニトロベンズアミド）テトラヒドロフェナントレン、ＲｅｇｉｓＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）でパックした７６．５×３５０ｍｍカラム上で行った。濃縮後、化合物４４（２１０ｍｇ、ステレオマー１）を白色固体として得（１７％）、化合物４５（２３６ｍｇ、ステレオマー２）を白色固体として得た（１９％）。

化合物４４（ステレオマー１）：
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.60 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.62 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.98 (s, 3 H); 1.05 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.10 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.14 (s, 3 H); 1.18 (m, 1 H); 1.40〜1.54 (m, 2 H); 2.24 (m, 1 H); 2.48〜2.61 (部分的にマスクされたm, 2 H); 2.65 (dd, J = 11.8および14.5 Hz, 1 H); 3.04 (dd, J = 3.2および14.5 Hz, 1 H); 3.55 (m, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 4.19 (m, 2 H); 4.40 (s, 2 H); 4.96 (m, 1 H); 5.91 (dd, J = 1.4および15.5 Hz, 1 H); 6.13 (dd, J = 8.9および16.1 Hz, 1 H); 6.40 (ddd, J = 3.9, 11.3および15.5 Hz, 1 H); 6.46 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.19 (dd, J = 2.1および8.7 Hz, 1 H); 7.30 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.87 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 8.36 (d, J = 9.9 Hz, 1 H); 8.40 (d, J = 8.0 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 719 [M-H]^-; m/z = 721 [M+H]⁺; t_R = 1.61分
化合物４５（ステレオマー２）：
RMN ¹H (δ ppm, DMSO-d6): 0.59 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.67 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.88 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 1.03 (s, 3 H); 1.10 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.21 (m, 1 H); 1.49〜1.60 (m, 2 H); 2.23 (m, 1 H); 2.46〜2.61 (部分的にマスクされたm, 2 H); 2.71 (dd, J = 11.3および14.5 Hz, 1 H); 2.98 (dd, J = 3.7および14.5 Hz, 1 H); 3.48 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 4.05 (m, 1 H); 4.11 (ddd, J = 3.7, 7.6および11.3 Hz, 1 H); 4.40 (s, 2 H); 4.90 (m, 1 H); 5.93 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.14 (dd, J = 8.7および16.1 Hz, 1 H); 6.47 (d, J = 16.1 Hz, 1 H); 6.51 (ddd, J = 5.2, 10.3および15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.21 (dd, J = 2.4および8.7 Hz, 1 H); 7.31 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.37 (d, J = 2.4 Hz, 2 H); 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.87 (d, J = 6.9 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 9.0 Hz, 1 H); 8.51 (d, J = 7.6 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 719 [M-H]^-; m/z = 721 [M+H]⁺; t_R = 1.61分.

化合物４６：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（３−（４−（アジドメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６，７−トリメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
０℃でアルゴン下丸底フラスコ中、化合物４４（１５４ｍｇ、２１３．５１μｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に、ｍ−ＣＰＢＡ（８０ｍｇ、３２４．５１μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で５日間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３（６ｍＬ）およびＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３（６ｍＬ）と共に１５分間撹拌した。有機層を分離し、飽和ブライン（２×３ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、化合物４６（１５０ｍｇ）を白色固体として得た（定量的）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 60/40 ジアステレオ異性体混合物; 0.75 (d, J = 6.8 Hz, 1.8 H); 0.79 (d, J = 6.8 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 6.8 Hz, 1.2 H); 0.95〜0.99 (m, 4.2 H); 1.02〜1.09 (m, 4.8 H); 1.15 (s, 1.8 H); 1.18 (s, 1.2 H); 1.20 (m, 0.6 H); 1.38 (m, 0.4 H); 1.59〜1.62 (m, 2 H); 1.80 (m, 0.6 H); 1.89 (m, 0.4 H); 2.25 (m, 0.6 H); 2.40〜2.71 (部分的にマスクされたm, 2.4 H); 2.96〜3.08 (m, 2 H); 3.54 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.82 (d, J = 1.9 Hz, 0.4 H); 3.92 (d, J = 1.9 Hz, 0.6 H); 4.14〜4.29 (m, 2 H); 4.40〜4.50 (m, 2 H); 5.11 (m, 1 H); 5.85 (dd, J = 2.0および15.5 Hz, 0.6 H); 5.95 (dd, J = 2.0および15.5 Hz, 0.4 H); 6.38 (m, 1 H); 7.04 (分割されたd, J = 8.8 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2および8.8 Hz, 0.6 H); 7.19 (dd, J = 2.2および8.8 Hz, 0.4 H); 7.28 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 7.30 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 7.30〜7.40 (m, 4 H); 7.89 (d, J = 8.1 Hz, 0.6 H); 7.92 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H); 8.29 (d, J = 10.0 Hz, 0.6 H); 8.32 (d, J = 8.1 Hz, 0.6 H); 8.35 (d, J = 10.0 Hz, 0.4 H); 8.40 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 735 [M-H]^-; m/z = 737 [M+H]⁺; t_R = 1.52分.

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（３−（４−（アミノメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６，７−トリメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
０℃で丸底フラスコ中、化合物４６（６０ｍｇ、８１．３８μｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３ｍＬ）中溶液に、ＴＣＥＰ（３８．９ｍｇ、１３４．３μｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（１ｍＬ）中溶液を滴下添加した。反応混合物を室温で３５時間撹拌し、次いでＤＣＭ（１５ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈した。１０分間撹拌した後、有機層を分離し、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル５ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）上で精製して、実施例８（２３ｍｇ）を白色固体として得た（４０％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 60/40 ジアステレオ異性体混合物; 0.77 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.81 (分割されたd, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 1.4 H); 0.95 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.98 (s, 1.8 H); 1.00 (s, 1.2 H); 1.02〜1.09 (m, 4.8 H); 1.17 (s, 1.8 H); 1.19 (s, 1.2 H); 1.22 (m, 0.6 H); 1.40 (m, 0.4 H); 1.51〜1.64 (m, 2 H); 1.78 (m, 0.6 H); 1.89 (m, 0.4 H); 2.28 (m, 0.6 H); 2.40〜2.71 (部分的にマスクされたm, 2.4 H); 2.96 (dd, J = 2.2および7.5 Hz, 0.6 H); 2.99 (dd, J = 2.2および7.5 Hz, 0.4 H); 3.03 (m, 1 H); 3.55 (m, 1 H); 3.70 (s, 1.2 H); 3.72 (s, 1.8 H); 3.78 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 3.81 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 4.12〜4.30 (m, 2 H); 5.12 (m, 1 H); 5.84 (dd, J = 1.8および15.6 Hz, 0.6 H); 5.96 (dd, J = 1.8および15.6 Hz, 0.4 H); 6.39 (m, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16〜7.38 (m, 6 H); 7.90 (d, J = 8.1 Hz, 0.6 H); 7.93 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H); 8.28 (d, J = 10.0 Hz, 0.6 H); 8.32 (d, J = 8.1 Hz, 0.6 H); 8.37 (d, J = 10.0 Hz, 0.4 H); 8.41 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 709 [M-H]^-; m/z = 711 [M+H]⁺; t_R = 0.86分.

化合物４７：（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６，７−トリメチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
アルゴン下、丸底フラスコ中に実施例８（１１０ｍｇ、１５４．６５μｍｏｌ）およびＤＭＦ（２ｍＬ）を、続いてＦｍｏｃＶａｌＡｌａ（９０ｍｇ、２１９μｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３０ｍｇ、２２２μｍｏｌ）、ＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＥＤＣ（３５μｌ、１９７．５２μｍｏｌ）を導入した。溶液を室温で３時間３０分撹拌し、次いでＨ_２Ｏ（１０ｍＬ）でクエンチし、ＤＣＭ（３×１０ｍＬ）により抽出した。有機層を分離し、飽和ＮａＨＣＯ_３、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、トルエンの存在下で濃縮し、シリカゲル１５ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物４７（４９ｍｇ）を白色固体として得た（４６％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 60/40 ジアステレオ異性体混合物; 0.76 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.80 (m, 3 H); 0.82〜0.89 (m, 6.4 H); 0.95 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.98 (s, 1.8 H); 1.00 (s, 1.2 H); 1.02〜1.09 (m, 4.8 H); 1.17 (s, 1.8 H); 1.19 (s, 1.2 H); 1.20〜1.32 (m, 3.6 H); 1.40 (m, 0.4 H); 1.51〜1.63 (m, 2 H); 1.78 (m, 0.6 H); 1.85 (m, 0.4 H); 2.00 (m, 1 H); 2.27 (m, 0.6 H); 2.40〜2.72 (部分的にマスクされたm, 2.4 H); 2.96 (m, 1 H); 3.04 (m, 1 H); 3.55 (m, 1 H); 3.77 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 3.81 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 3.90 (m, 1 H); 4.15〜4.38 (m, 6 H); 5.12 (m, 1 H); 5.85 (dd, J = 1.8および15.6 Hz, 0.6 H); 5.95 (dd, J = 1.8および15.6 Hz, 0.4 H); 6.39 (m, 1 H); 7.05 (分割されたd, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15〜7.48 (m, 19 H); 7.73 (t, J = 8.1 Hz, 2 H); 7.90 (d, J = 8.1 Hz, 2.6 H); 7.92 (d, J = 8.1 Hz, 0.4 H); 8.05 (d, J = 8.1 Hz, 1 H); 8.25〜8.45 (m, 3 H).
LCMS (A1): ES m/z = 552 [M+2H]²⁺; m/z = 1103 [M+H]⁺; m/z = 1147 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.55-1.57分.

化合物４８：（２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（２Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（１Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６，７−トリメチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド
丸底フラスコ中、ピペリジン（６０μＬ、６００．６μｍｏｌ）を、化合物４７（５０ｍｇ、４５．３０μｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に加えた。得られた混合物を室温で２４時間撹拌し、真空で濃縮し、シリカゲル５ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）上で精製して、αおよびβエポキシド７０ｍｇを得た。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 60/40 ジアステレオ異性体混合物; 0.75 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.80 (m, 3 H); 0.82〜0.92 (m, 6.4 H); 0.96 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.98 (s, 1.8 H); 1.00 (s, 1.2 H); 1.02〜1.09 (m, 4.8 H); 1.15 (s, 1.8 H); 1.19 (s, 1.2 H); 1.20〜1.42 (m, 4 H); 1.50〜1.70 (マスクされたm, 2 H); 1.78 (m, 0.6 H); 1.85 (m, 0.4 H); 2.00 (m, 1 H); 2.25 (m, 0.6 H); 2.40〜2.72 (部分的にマスクされたm, 2.4 H); 2.92〜3.08 (m, 3 H); 3.54 (m, 1 H); 3.79 (d, J = 2.1 Hz, 0.4 H); 3.81 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.1 Hz, 0.6 H); 4.13〜4.41 (m, 6 H); 5.12 (m, 1 H); 5.85 (d, J = 15.4 Hz, 0.6 H); 5.93 (d, J = 15.4 Hz, 0.4 H); 6.38 (m, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15〜7.32 (m, 6 H); 7.90 (d, J = 8.3 Hz, 0.6 H); 7.93 (d, J = 8.3 Hz, 0.4 H); 8.10〜8.55 (m, 7 H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M+2H]²⁺; m/z = 879 [M-H]^-; m/z = 881 [M+H]⁺; m/z = 925 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 0.92分.

αおよびβエポキシドをキラル液体クロマトグラフィーにより分離し、これは７０：３０ヘプタン／ＥｔＯＨでの定組成溶離を使用する１０μｍのＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤ（１．１ｋｇ、アミローストリス−３，５−ジメチルフェニルカルバメートをシリカゲル担体上に被覆、ＣｈｉｒａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＥｕｒｏｐｅ）でパックされた７６×３５０ｍｍカラム上で行った。濃縮後、化合物４８（２８ｍｇ）を白色固体（７０％）として得、αエポキシド１９ｍｇを白色固体として得た。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.75 (d, J = 7.0 Hz, 6 H); 0.80 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.88 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.98 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 6 H); 1.17 (s, 3 H); 1.23 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.35 (m, 1 H); 1.50〜1.68 (m, 2 H); 1.78 (m, 1 H); 1.91 (m, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.58〜2.70 (m, 2 H); 2.96 (dd, J = 1.9および7.7 Hz, 1 H); 2.99 (d, J = 4.8 Hz, 1 H); 3.02 (dd, J = 3.3および14.8 Hz, 1 H); 3.53 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 1.9 Hz, 1 H); 4.10〜4.23 (m, 3 H); 4.28 (d, J = 6.1 Hz, 2 H); 4.35 (m, 1 H); 5.11 (m, 1 H); 5.83 (dd, J = 1.9および15.2 Hz, 1 H); 6.37 (ddd, J = 4.0, 11.2および15.2 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.8 Hz, 1 H); 7.18 (dd, J = 2.4および8.8 Hz, 1 H); 7.26 (s, 4 H); 7.29 (d, J = 2.4 Hz, 1 H); 7.90 (d, J = 8.2 Hz, 1 H); 8.08 (広幅なd, J = 7.7 Hz, 1 H); 8.29 (d, J = 10.1 Hz, 1 H); 8.33 (d, J = 8.2 Hz, 1 H); 8.46 (t, J = 6.7 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 441 [M+2H]²⁺; m/z = 879 [M-H]^-; m/z = 881 [M+H]⁺; m/z = 925 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 0.92分.

化合物４９：５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６，７−トリメチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
アルゴン下丸底フラスコ中、グルタル酸無水物（３．７８ｍｇ、３２．４４μｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）中溶液を、化合物４８（２６ｍｇ、２９．５μｍｏｌ）のＤＣＭ（９ｍＬ）中溶液に加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、真空で濃縮し、シリカゲル２．５ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物４９（１８ｍｇ）を白色固体として得た（６１％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.78 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.80 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.97 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 6 H); 1.15 (s, 3 H); 1.23 (広幅なd, J = 7.0 Hz, 4 H); 1.49〜1.61 (m, 2 H); 1.70 (m, 2 H); 1.78 (m, 1 H); 1.97 (m, 1 H); 2.20 (m, 4 H); 2.25 (m, 1 H); 2.62 (m, 2 H); 2.95 (m, 1 H); 3.02 (m, 1 H); 3.53 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (s, 1 H); 4.10〜4.22 (m, 3 H); 4.24〜4.31 (m, 3 H); 5.11 (m, 1 H); 5.83 (d, J = 15.7 Hz, 1 H); 6.36 (m, 1 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.19 (広幅なd, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.23 (m, 4 H); 7.29 (広幅なs, 1 H); 7.87 (d, J = 8.9 Hz, 1 H); 7.90 (d, J = 8.1 Hz, 1 H); 8.06 (大きなd, J = 7.3 Hz, 1 H); 8.29 (d, J = 10.1 Hz, 1 H); 8.37 (m, 2 H); 12.0 (広幅なm, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 993 [M-H]^-; m/z = 995 [M+H]⁺; t_R = 1.21分.

２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６，７−トリメチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート
アルゴン下丸底フラスコ中、化合物４９（１５ｍｇ、１５．０７μｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、ＤＳＣ（５．６３ｍｇ、２１．０９μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（３．５６μＬ、２１．０９μｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、真空で濃縮し、シリカゲル２．５ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）上で精製して、実施例９（７．７ｍｇ）を白色固体として得た（４７％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.78 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.80 (d, J = 6.7 Hz, 3 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.99 (s, 3 H); 1.04 (d, J = 7.2 Hz, 6 H); 1.18 (s, 3 H); 1.26 (m, 4 H); 1.57 (m, 2 H); 1.79 (m, 1 H); 1.83 (m, 2 H); 1.99 (m, 1 H); 2.22〜2.33 (m, 3 H); 2.60〜2.71 (m, 4 H); 2.82 (s, 4 H); 2.97 (dd, J = 2.1および7.7 Hz, 1 H); 3.04 (dd, J = 3.4および14.7 Hz, 1 H); 3.55 (m, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 4.19 (m, 3 H); 4.26〜4.34 (m, 3 H); 5.12 (m, 1 H); 5.86 (dd, J = 2.0および15.7 Hz, 1 H); 6.38 (ddd, J = 3.8, 11.2および15.7 Hz, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.19 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 1 H); 7.26 (m, 4 H); 7.29 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.91 (m, 2 H); 8.09 (m, 1 H); 8.29 (d, J = 9.9 Hz, 1 H); 8.35 (m, 2 H). LCMS (A1): ES m/z = 1092 [M+H]⁺; m/z = 1136 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.26分.

ｍＡｂ−Ｅｘ９
前に記載した一般方法を実施例１０の製造に使用した。ｈｕ２Ｈ１１＿Ｒ３５−７４（６０ｍｇ）を実施例９のＤＭＡ中１０．７８ｍＭ溶液（１９８μＬ、５当量）と２時間反応させた。この時点で、実施例９の溶液（１２０μＬ、３当量）を加え、媒体を２時間撹拌した。ＤＰＢＳｐＨ６．５＋２０％ＮＭＰ中Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ｐｇ上で精製し、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ−１５上で濃縮し、緩衝液ＢｐＨ６．５＋５％ＮＭＰ中ＰＤ−１０上で緩衝液を交換し、Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ上で濾過した後、実施例１０（４６ｍｇ）を無色透明溶液として２．２３ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＡＲ４．７（ＨＲＭＳ）、単量体純度９９．２％および合計収率７８％にて得た。

ＳＥＣ−ＨＲＭＳ：図３におけるインタクトＡＤＣのスペクトル；ｍ／ｚ＝１５０３４５（Ｄ１）；ｍ／ｚ＝１５１３１９（Ｄ２）；ｍ／ｚ＝１５２２９７（Ｄ３）；ｍ／ｚ＝１５３２７４（Ｄ４）；ｍ／ｚ＝１５４２５１（Ｄ５）；ｍ／ｚ＝１５５２２２（Ｄ６）；ｍ／ｚ＝１５６２０２（Ｄ７）；ｍ／ｚ＝１５７１８３（Ｄ８）。

実施例１１から１４：３−（Ｓ）−ネオペンチル−７−Ｍｅ−アザ−Ｃ５２ステレオマー１のベンジル酸アミン、グルタリル−Ｖａｌ−Ａｌａ−３−（Ｓ）−ネオペンチル−７−Ｍｅ−アザ−Ｃ５２ベンジル酸アミンステレオマー１のＮＨＳエステルおよび対応するＡＤＣの合成

化合物５０：（６Ｒ，１３Ｓ）−（１Ｅ，３Ｒ，４Ｓ，６Ｅ）−８−（ｔｅｒｔ−ブトキシ）−１−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−３−メチル−８−オキソオクタ−１，６−ジエン−４−イル６−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−２，２，９，１０，１０−ペンタメチル−１３−ネオペンチル−４，７，１１−トリオキソ−３−オキサ−５，８，１２−トリアザテトラデカン−１４−オエート
アルゴン下丸底フラスコ中、フラグメントＢＣ２（７４２ｍｇ、１．６８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（７１６ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｔ（２５１ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で３０分撹拌した。次いでフラグメントＡＤ１（７３０ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍＬ）およびＤＩＥＡ（９８１μＬ、５．５６ｍｍｏｌ）中溶液を加えた。反応媒体を室温で２４時間撹拌した。この後、反応媒体を氷（２００ｇ）で希釈し、ＡｃＯＥｔ（４×２００ｍＬ）で抽出した。有機層をＨ_２Ｏ（８０ｍＬ）、飽和ブライン（２×８０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、連続した２種のフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、シリカゲル３００ｇ上での最初の溶離（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）として、およびシリカゲル７０ｇ上での２番目の溶離（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）として、化合物５０（４２８ｍｇ）を無色泡状物として得た（３０％）。

化合物５１：（２Ｅ，５Ｓ，６Ｒ，７Ｅ）−５−（（（２Ｓ）−２−（３−（（Ｒ）−２−アミノ−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）−プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタンアミド）−４，４−ジメチルペンタノイル）オキシ）−８−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）−６−メチルオクタ−２，７−ジエン酸
丸底フラスコ中に化合物５０（４２８ｍｇ、４８３．８７μｍｏｌ）およびＤＣＭ（２７ｍＬ）を導入した。溶液を０℃で冷却し、次いでＴＦＡ（８ｍＬ、１０６．６２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を除去し、減圧下トルエン（３×１００ｍＬ）を用いて共蒸発させた。粗製の油状物を１：１ＡｃＯＥｔ／Ｈ_２Ｏ（７５ｍＬ）で希釈し、２ＭＮａＯＨ（２５０μＬ）でｐＨ６〜７まで中和した。混合物を室温で６時間撹拌した。層を分離した。水層をＡｃＯＥｔ（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ブライン（２×１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、化合物５１（３７４ｍｇ）を無色泡状物として得た（定量的）。

化合物５２：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｒ，Ｅ）−４−（４−（ヒドロキシメチル）−フェニル）ブタ−３−エン−２−イル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
アルゴン下丸底フラスコ中、化合物５１（３５２ｍｇ、４８３．３１μｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（６０ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（２０８ｍｇ、５３１．６４ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（７３．０９ｍｇ、５３１．６４μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２４４．５２μＬ、１．４５ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で４５分間撹拌した。この後、反応媒体を０．５Ｎクエン酸でｐＨ４まで中和し、真空で部分的に濃縮し、ＡｃＯＥｔ（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）、飽和ブライン（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物５２（１８８ｍｇ）を無色泡状物として得た（５４％）。

化合物５３：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１６−（（Ｒ，Ｅ）−４−（４−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）フェニル）ブタ−３−エン−２−イル）−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
０℃でアルゴン下丸底フラスコ中、化合物５２（１８８ｍｇ、２６４．６８μｍｏｌ）のＤＣＭ（７ｍＬ）中溶液に、１Ｈ−イミダゾール（８３．７２ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）および１Ｍクロロトリイソプロピルシラン（１３４．１５μｌ）を加えた。反応媒体を室温で５時間撹拌し、次いで飽和ＮＨ_４Ｃｌでクエンチし、１５分間撹拌した。層を分離した。水層をＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出した。有機層を１ＭＮａＨＳＯ_４（１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）、飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物５３（１３７ｍｇ）を無色泡状物として得た（５９％）。

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
実施例１１を２工程で製造した。
工程１：０℃でアルゴン下丸底フラスコ中、化合物５３（１３７ｍｇ、１５８．０８μｍｏｌ）のＤＣＭ（５．５ｍＬ）中溶液に、ｍ−ＣＰＢＡ（５０．６６ｍｇ、２０５．５１μｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液を加え、反応媒体を２時間撹拌した。次いで２時間撹拌した後、ｍ−ＣＰＢＡ（３９ｍｇ）を２回加えた。１６時間撹拌した後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ_３（３０ｍＬ）およびＮａ_２Ｓ_２Ｏ_３（３０ｍＬ）でクエンチし、１５分間撹拌し、ＤＣＭ（４０ｍＬ）で希釈した。層を分離した。水層をＤＣＭ（２×２０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ブライン（２×８ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、αおよびβエポキシド１６０ｍｇを無色固体として得た（定量的）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 60/40 ジアステレオ異性体混合物; 0.80〜0.91 (m, 12 H); 0.97〜1.09 (m, 24 H); 1.12〜1.21 (m, 6 H); 1.32 (d, J = 14.7 Hz, 0.6 H); 1.40 (d, J = 14.7 Hz, 0.4 H); 1.70〜1.87 (m, 1 H); 1.90 (dd, J = 10.1および14.7 Hz, 0.4 H); 1.97 (dd, J = 10.1および14.7 Hz, 0.6 H); 2.28 (m, 0.6 H); 2.40 (m, 0.4 H); 2.55〜2.79 (m, 2 H); 2.90〜3.00 (m, 2 H); 3.44 (m, 1 H); 3.79 (d, J = 2.1 Hz, 0.4 H); 3.80 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.1 Hz, 0.6 H); 4.03〜4.22 (m, 2 H); 4.78 (s, 0.8 H); 4.80 (s, 1.2 H); 5.03 (m, 1 H); 5.90 (dd, J = 1.5および15.5 Hz, 0.6 H); 5.99 (dd, J = 1.5および15.5 Hz, 0.4 H); 6.40〜6.55 (m, 1 H); 7.02〜7.07 (m, 1 H); 7.13〜7.38 (m, 6 H); 7.85〜7.93 (m, 2 H); 8.40 (d, J = 7.3 Hz, 0.6 H); 8.51 (d, J = 7.3 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 880 [M-H]^-; m/z = 882 [M+H]⁺; m/z = 926 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 2.05-2.06分.

工程２：０℃でアルゴン下丸底フラスコ中、αおよびβエポキシド（１７７ｍｇ、２００．５３μｍｏｌ）のＴＨＦ（７．５ｍＬ）中溶液に、１ＭＴＢＡＦ（２２１μＬ、２２１μｍｏｌ）を滴下添加した。室温で２時間撹拌した後、ＴＢＡＦ（５０μＬ）を加え、３．５時間撹拌した。反応媒体をＨ_２Ｏ（９ｍＬ）で希釈し、１０分間撹拌し、ＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ブライン（３×８ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、αおよびβエポキシド２１０ｍｇを無色固体として得た（定量的）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 60/40 ジアステレオ異性体混合物; 0.82〜1.25 (m, 21 H); 1.32 (d, J = 14.5 Hz, 0.6 H); 1.42 (d, J = 14.5 Hz, 0.4 H); 1.80 (m, 1 H); 1.91 (dd, J = 10.0および14.5 Hz, 0.4 H); 1.98 (dd, J = 10.0および14.5 Hz, 0.6 H); 2.22〜2.48 (m, 1 H); 2.55〜2.78 (m, 2 H); 2.89〜3.03 (m, 2 H); 3.44 (m, 1 H); 3.79 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 3.80 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 4.04〜4.22 (m, 2 H); 4.48 (d, J = 5.8 Hz, 0.8 H); 4.50 (d, J = 5.8 Hz, 1.2 H); 5.03 (m, 1 H); 5.16 (t, J = 5.8 Hz, 0.4 H); 5.19 (t, J = 5.8 Hz, 0.6 H); 5.89 (dd, J = 1.9および15.6 Hz, 0.6 H); 5.99 (dd, J = 1.9および15.6 Hz, 0.4 H); 6.40〜6.52 (m, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 0.6 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 0.4 H); 7.16〜7.37 (m, 6 H); 7.83〜7.94 (m, 2 H); 8.39 (d, J = 7.4 Hz, 0.6 H); 8.50 (d, J = 7.4 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 724 [M-H]^-; m/z = 726 [M+H]⁺; t_R = 1.29分.

αおよびβエポキシドをキラル液体クロマトグラフィーにより分離し、これは７５：２５ヘプタン／ＥｔＯＨでの定組成溶離を使用し、１０μｍのＣｈｉｒａｌｐａｋＡＤ（１．１ｋｇ、アミローストリス−３，５−ジメチルフェニルカルバメートをシリカゲル担体上に被覆、ＣｈｉｒａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＥｕｒｏｐｅ）でパックした７６×３５０ｍｍカラム上で行った。濃縮後、実施例１１（６６ｍｇ）を白色固体として得（４５％）、αエポキシド４５ｍｇを白色固体として得た（３１％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.82〜0.89 (m, 12 H); 0.99 (s, 3 H); 1.03 (d,
J = 6.9 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.34 (d, J = 14.6 Hz, 1 H); 1.80 (m, 1 H); 1.98 (dd, J = 10.1および14.6 Hz, 1 H); 2.26 (m, 1 H); 2.61 (m, 1 H); 2.69 (dd, J = 11.1および14.6 Hz, 1 H); 2.91 (dd, J = 2.1および7.8 Hz, 1 H); 2.94 (dd, J = 3.7および14.6 Hz, 1 H); 3.42 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.91 (d, J = 2.1 Hz, 1 H); 4.03〜4.14 (m, 2 H); 4.50 (d, J = 5.8 Hz, 2 H); 5.03 (m, 1 H); 5.19 (t, J = 5.8 Hz, 1 H) ; 5.89 (dd, J = 2.1および15.5 Hz, 1 H); 6.43 (ddd, J = 4.7, 10.9および15.5 Hz, 1 H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1 H); 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.30 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 1 H); 7.92 (d, J = 7.1 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 9.1 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 724 [M-H]^-; m/z = 726 [M+H]⁺; t_R = 1.29分.

化合物５４：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アジドメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
アルゴン下丸底フラスコ中、実施例１１（６６ｍｇ、９０．８７μｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍＬ）中溶液に、０℃でＤＰＰＡ（１００．２３μｌ、４５４．３６μｍｏｌ）およびＤＢＵ（６９．２７μｌ、４５４．３６μｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で５時間撹拌し、次いでＨ_２Ｏで希釈し、ＡｃＯＥｔ（２×１５ｍＬ）で抽出した。有機層を分離し、飽和ブライン（２×５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、シリカゲル１５ｇ（ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物５４（６４ｍｇ）を無色固体として得た（９４％）。

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アミノメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
丸底フラスコ中、化合物５４（６４ｍｇ、８５．１８μｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）、ＭｅＯＨ（３ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（４００μＬ）中溶液に、ＴＣＥＰ（２６．８６ｍｇ、９３．７０μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をＤＣＭ（１５ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ_３で希釈し、１０分間撹拌し、ＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮し、アミノプロピルで修飾したシリカゲル４．５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、実施例１２（４２ｍｇ）を白色固体として得た（６８％）。

化合物５５：（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（２Ｓ）−１−（（（２Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（１Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート
アルゴン下、丸底フラスコ中に実施例１２（４２ｍｇ、５７．９１μｍｏｌ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）を、続いてＦｍｏｃＶａｌＡｌａ（３４．４４ｍｇ、８６．８６μｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（１３．２０ｍｇ、９３．８１μｍｏｌ）、ＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＥＤＣ（１０．３６μｌ、５７．９１μｍｏｌ）を導入した。反応媒体を室温で３時間撹拌し、次いでＨ_２Ｏ（１５ｍＬ）で希釈し、室温で１０分間撹拌し、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、濃縮して、化合物５５（８３ｍｇ）を白色固体として得た（定量的）。

化合物５６：（２Ｓ）−２−アミノ−Ｎ−（（２Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（１Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）−３−メチルブタンアミド
丸底フラスコ中、ピペリジン（５７．８μＬ、５７９．１０μｍｏｌ）を、化合物５５（６４．７３ｍｇ、５７．９１μｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中溶液に加えた。５時間撹拌した後、ピペリジン５７．８μＬを加え、媒体を室温で終夜撹拌した。反応媒体を真空で濃縮し、シリカゲル１５ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの濃度勾配）上で精製して、化合物５６（３０ｍｇ）を無色固体として得た（５８％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.86 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.82〜0.90 (m, 15 H); 1.00 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H) ; 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.34 (d, J = 14.6 Hz, 1 H); 1.66 (広幅なm, 2 H); 1.80 (m, 1 H); 1.91 (m, 1 H); 1.98 (dd, J = 10.2および14.6 Hz, 1 H); 2.27 (m, 1 H); 2.60 (m, 1 H); 2.69 (dd, J = 11.1および14.6 Hz, 1 H); 2.91 (dd, J = 2.0および7.7 Hz, 1 H); 2.94 (dd, J = 3.7および14.6 Hz, 1 H); 2.99 (d, J = 4.9 Hz, 1 H); 3.43 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.91 (d, J = 2.0 Hz, 1 H); 4.03〜4.12 (m, 2 H); 4.29 (d, J = 6.2 Hz, 2 H); 4.34 (m, 1 H); 5.03 (m, 1 H); 5.89 (dd, J = 1.8および15.6 Hz, 1 H); 6.43 (ddd, J = 4.8, 10.9および15.6 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.2および8.6 Hz, 1 H); 7.22 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.32 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 1 H); 7.92 (d, J = 7.2 Hz, 1 H); 8.07 (広幅なd, J = 7.9 Hz, 1 H); 8.40 (d, J = 7.3 Hz, 1 H); 8.45 (t, J = 6.2 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 448 [M+2H]²⁺; m/z = 893 [M-H]^-; m/z = 895 [M+H]⁺; m/z = 939 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.29分.

化合物５７：５−（（（２Ｓ）−１−（（（２Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（１Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタン酸
アルゴン下丸底フラスコ中、グルタル酸無水物（４．２９ｍｇ、３６．８５μｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）中溶液を、化合物５６（３０ｍｇ、３３．５μｍｏｌ）のＤＣＭ（６ｍＬ）中溶液に加えた。反応媒体を室温で２時間撹拌し、真空で部分的に濃縮し、シリカゲル２．５ｇ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの濃度勾配溶離）上で精製して、化合物５７（３４ｍｇ）を無色ラッカーとして得た（定量的）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80〜0.89 (m, 18 H); 0.99 (s, 3 H); 1.03 (d,
J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.34 (d, J = 14.6 H
z, 1 H); 1.70 (m, 2 H); 1.80 (m, 1 H); 1.97 (m, 2 H); 2.19 (m, 4 H); 2.26 (m, 1 H); 2.60 (m, 1 H); 2.70 (dd, J = 11.2および14.6 Hz, 1 H); 2.90 (dd, J = 2.2および7.8 Hz, 1 H); 2.95 (dd, J = 3.7および14.6 Hz, 1 H); 3.43 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.91 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.03〜4.18 (m, 3 H); 4.22〜4.33 (m, 3 H); 5.03 (m, 1 H); 5.90 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.43 (ddd, J = 4.9, 11.0および15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.19〜7.28 (m, 5 H); 7.32 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 7.85 (広幅なd, J = 8.9 Hz, 2 H); 7.91 (d, J = 7.2 Hz, 1 H); 8.06 (広幅なd, J = 7.5 Hz, 1 H); 8.36 (広幅なt, J = 6.6 Hz, 1 H); 8.42 (d, J = 7.8 Hz, 1 H); 12.10 (広幅なm, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 1007 [M-H]^-; m/z = 1009 [M+H]⁺; t_R = 1.21分.

２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（（２Ｓ）−１−（（（２Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（１Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート
アルゴン下丸底フラスコ中、化合物５７（３３ｍｇ、３２．６９μｍｏｌ）のＤＣＭ（８ｍＬ）中溶液に、ＤＳＣ（１１．７２ｍｇ、４５．７６μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（７．７μＬ、４５．７６μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で１時間撹拌し、真空で濃縮し、シリカゲル２．５ｇ上での連続した２種のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、実施例１３（１７．９ｍｇ）を無色固体として得た（４９％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.80〜0.90 (m, 18 H); 1.00 (s, 3 H); 1.04 (d,
J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.34 (d, J = 14.6 Hz, 1 H); 1.80 (m, 1 H); 1.83 (m, 2 H); 1.98 (m, 2 H); 2.26 (m, 1 H); 2.29 (m, 2 H); 2.60 (m, 1 H); 2.68 (t, J = 7.5 Hz, 2 H); 2.70 (dd, J = 11.2および14.6 Hz, 1
H); 2.80 (s, 4 H); 2.91 (dd, J = 2.2および7.6 Hz, 1 H); 2.95 (dd, J = 3.7および14.6 Hz, 1 H); 3.43 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.06〜4.15 (m, 2 H); 4.18 (dd, J = 6.9および8.7 Hz, 1 H); 4.21〜4.33 (m, 3 H); 5.03 (m, 1 H); 5.89 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.43 (ddd, J=4.9, 10.9および15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J=8.7 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1 H); 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.25 (d, J = 8.4 Hz, 2 H); 7.31 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.84 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 7.89 (m, 2 H); 8.04 (d, J = 7.5 Hz, 1 H); 8.33 (t, J = 6.5 Hz, 1 H); 8.39 (d, J = 7.6 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 796; m/z = 1104 [M-H]^-; m/z = 1106 [M+H]⁺; m/z = 1150 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.26分.

ｍＡｂ−Ｅｘ１３
前に記載した一般方法を実施例１４の製造に使用した。ｈｕ２Ｈ１１＿Ｒ３５−７４（６０ｍｇ）を、実施例１３のＤＭＡ中１０．０５ｍＭ溶液（２００μＬ、５当量）と２時間反応させた。この時点で、実施例１３の溶液（１８０μＬ、４．５当量）を加え、媒体を２時間撹拌した。緩衝液ＢｐＨ６．５＋１０％ＮＭＰ中のＳｕｐｅｒｄｅｘ２００ｐｇ上で精製し、ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ−１５上で濃縮し、緩衝液ＢｐＨ６．５＋５％ＮＭＰ中ＰＤ−１０上で緩衝液を交換し、Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ上で濾過した後、実施例１４（４６ｍｇ）を無色透明溶液として２ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＡＲ３．５（ＨＲＭＳ）、単量体純度９９．７％および合計収率７７％にて得た。

ＳＥＣ−ＨＲＭＳ：図４におけるインタクトＡＤＣのスペクトル；ｍ／ｚ＝１４９３３６（ネイキッドｍＡｂ）；ｍ／ｚ＝１５０３２８（Ｄ１）；ｍ／ｚ＝１５１３１９（Ｄ２）；ｍ／ｚ＝１５２３１１（Ｄ３）；ｍ／ｚ＝１５３３０２（Ｄ４）；ｍ／ｚ＝１５４２９５（Ｄ５）；ｍ／ｚ＝１５５２９０（Ｄ６）；ｍ／ｚ＝１５６２８２（Ｄ７）。

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｓ）−１−（３−（４−（ヒドロキシ−メチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−３，６，６−トリメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン

スキーム２に示し、実施例４および１１にて記載した一般ルートＢに従って、実施例１５を製造した。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 65/35 ジアステレオ異性体混合物; 0.93〜1.26 (m, 12 H); 1.75 (m, 0.65 H); 1.83 (m, 0.35 H); 2.22 (m, 0.65 H); 2.41 (m, 0.35 H); 2.55〜2.70 (m, 2 H); 2.81 (d, J = 13.7 Hz, 0.65 H); 2.88 (d, J = 13.7 Hz, 0.35 H); 2.93 (dd, J = 2.1および8.2 Hz, 0.65 H); 3.00 (m, 1.35 H); 3.22〜3.35 (部分的にマスクされたm, 1 H); 3.77 (d, J = 2.1 Hz, 0.35 H); 3.81 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.1 Hz, 0.65 H); 4.25〜4.39 (m, 1.65 H); 4.34 (m, 0.35 H); 4.48 (d, J = 6.0 Hz, 0.7 H); 4.50 (d, J = 6.0 Hz, 1.3 H); 5.08 (m, 1 H); 5.17 (t, J = 6.0 Hz, 0.35 H); 5.20 (t, J = 6.0 Hz, 0.65 H); 5.78 (dd, J = 1.9および15.5 Hz, 0.65 H); 5.89 (dd, J = 1.9および15.5 Hz, 0.35 H); 6.40 (m, 1 H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.16 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 0.65 H); 7.19 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 0.35 H); 7.20〜7.34 (m, 5 H); 7.58 (広幅なd, J = 10.2 Hz, 0.65 H); 7.64 (広幅なd, J = 10.2 Hz, 0.35 H); 8.00 (d, J = 8.4 Hz, 0.65 H); 8.07 (d, J = 8.4 Hz, 0.35 H); 8.35 (d, J = 8.3 Hz, 0.65 H); 8.44 (d, J = 8.3 Hz, 0.35 H). LCMS (A1): ES m/z = 654 [M-H]^-; m/z = 656 [M+H]⁺; t_R = 1.06分.

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｓ）−１−（３−（４−（ヒドロキシ−メチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−６，６−ジメチル−３−イソプロピル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン

スキーム２に示し、実施例４および１１にて記載した一般ルートＢに従って、実施例１
６を製造した。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 60/40 ジアステレオ異性体混合物; 0.72 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 0.87 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 0.98 (s, 1.8 H); 0.99 (d, J = 7.0 Hz, 1.8 H); 1.01 (s, 1.2 H); 1.05 (d, J = 7.0 Hz, 1.2 H); 1.09 (s, 1.8 H); 1.11 (s, 1.2 H); 1.82 (m, 1 H); 1.91 (m, 0.6 H); 2.01 (m, 0.4 H); 2.30 (m, 1 H); 2.52〜2.72 (m, 2 H); 2.88〜3.04 (m, 3 H); 3.25〜3.35 (マスクされたm, 1 H); 3.79 (d, J = 2.2 Hz, 0.4 H); 3.80 (s, 3 H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 0.6 H); 4.09〜4.21 (m, 2 H); 4.48 (d, J = 5.8 Hz, 0.8 H); 4.50 (d, J = 5.8 Hz, 1.2 H); 5.14〜5.29 (m, 2 H); 5.79 (dd, J = 1.7および15.4 Hz, 0.6 H); 5.90 (dd, J = 1.7および15.4 Hz, 0.4 H); 6.40〜6.52 (m, 1 H); 7.05 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.10 (dd, J = 2.0および10.2 Hz, 1 H); 7.17 (m, 1 H); 7.21〜7.35 (m, 5 H); 7.70 (d, J = 9.3 Hz, 0.6 H); 7.80 (d, J = 9.3 Hz, 0.4 H); 8.39 (d, J = 8.0 Hz, 0.6 H); 8.44 (d, J = 8.0 Hz, 0.4 H). LCMS (A1): ES m/z = 682 [M-H]^-; m/z = 684 [M+H]⁺; t_R = 1.16分.

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｓ）−１−（３−（４−（ヒドロキシ−メチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−３−ｔｅｒｔ−ブチル−６，６−ジメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン

スキーム２に示し、実施例４および１１にて記載した一般ルートＢに従って、実施例１７を製造した。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 50/50 ジアステレオ異性体混合物; 0.90 (s, 4.5 H); 0.91 (s, 4.5 H); 1.00 (d, J = 7.0 Hz, 1.5 H); 1.03 (s, 1.5 H); 1.05 (s, 1.5 H); 1.06 (d, J = 7.0 Hz, 1.5 H); 1.10 (s, 1.5 H); 1.12 (s, 1.5 H); 1.85 (m, 1H);
2.32 (m, 1H); 2.55〜2.72 (m, 2 H); 2.90〜3.03 (m, 3 H); 3.25〜3.35 (マスクされたm, 1 H); 3.81 (s, 3 H); 3.90 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.15 (m, 1 H); 4.36 (d, J =
10.0 Hz, 0.5 H); 4.43 (d, J = 10.0 Hz, 0.5 H); 4.49 (d, J = 5.9 Hz, 1 H); 4.51 (d, J = 5.9 Hz, 1 H); 5.15 (t, J = 5.9 Hz, 0,5 H); 5.18 (t, J = 5.9 Hz, 0.5 H); 5.29 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 2.0および15.4 Hz, 0.5 H); 5.90 (d, J = 15.4 Hz, 0.5
H); 6.39 (m, 1 H); 6.91 (dd, J = 2.5および10.4 Hz, 0.5 H); 6.98 (dd, J = 2.5および10.4 Hz, 0.5 H); 7.05 (分割されたd, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.15 (分割されたdd, J = 2.4および8.7 Hz, 1 H); 7.20〜7.39 (m, 6 H); 8.32 (d, J = 7.9 Hz, 0.5 H); 8.40 (d, J = 7.9 Hz, 0.5 H). LCMS (A4): ES m/z = 696 [M-H]^-; m/z = 698 [M+H]⁺; t_R= 4.13-4.16分.

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アミノメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６，７−トリメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン

スキーム１に示し、実施例８にて記載した一般ルートＡに従って、実施例１８を製造した。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.78 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.87 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.00 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.19 (s, 3 H); 1.30 (m, 1 H); 1.50〜1.90 (m, 5 H); 2.28 (m, 1 H); 2.55〜2.76 (m, 2 H); 2.90〜3.00 (m, 2 H); 3.48 (m, 1 H); 3.70 (s, 2 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (s, 1 H); 4.02〜4.15 (m, 2 H); 5.06 (m, 1 H); 5.88 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.47 (m, 1
H); 7.03 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.20 (m, 3 H); 7.31 (m, 3 H); 7.80 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 7.3 Hz, 1 H); 8.41 (d, J = 8.2 Hz, 1 H).

２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−３−イソブチル−６，６，７−トリメチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート

スキーム３に示し、実施例２、６、９および１３にて記した通りに、実施例１９を製造した。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.79 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.81〜0.89 (m, 18 H); 1.01 (s, 3 H); 1.03 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.20 (s, 3 H); 1.24 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.31 (m, 1 H); 1.60〜1.74 (m, 2 H); 1.78〜1.86 (m, 3 H); 1.96 (m, 1 H); 2.21〜2.31 (m, 3 H); 2.55〜2.72 (m, 4 H); 2.80 (s, 4 H); 2.96 (m, 2 H); 3.47 (m, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.03〜4.14 (m, 2 H); 4.17 (dd, J = 6.8および8.6 Hz, 1 H); 4.21〜4.33 (m, 3 H); 5.06 (m, 1 H); 5.89 (d, J = 15.5 Hz, 1 H); 6.47 (ddd, J = 5.2, 10.5および15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.20 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1 H); 7.23 (m, 4 H); 7.32 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.80 (d, J = 8.3 Hz, 1 H); 7.89 (m, 2 H); 8.04 (d, J = 7.6 Hz, 1 H); 8.32 (t, J = 6.3 Hz, 1 H); 8.42 (d, J = 7.6 Hz, 1 H). LCMS (A1): ES m/z = 1092 [M+H]⁺; m/z = 1136 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 1.23分.

ｍＡｂ−Ｅｘ１９

実施例２０を実施例３、７、１０および１４と同様の方法で製造した。実施例２０（４５ｍｇ）を無色透明溶液として２．５５ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＡＲ４．４（ＨＲＭＳ）、単量体純度９９．１％および合計収率７８％にて得た。

ＳＥＣ−ＨＲＭＳ：図５におけるインタクトＡＤＣのスペクトル；ｍ／ｚ＝１５０３６８（Ｄ１）；ｍ／ｚ＝１５１３５０（Ｄ２）；ｍ／ｚ＝１５２３２７（Ｄ３）；ｍ／ｚ＝１５３３０４（Ｄ４）；ｍ／ｚ＝１５４２８１（Ｄ５）；ｍ／ｚ＝１５５２５５（Ｄ６）；ｍ／ｚ＝１５６２３７（Ｄ７）；ｍ／ｚ＝１５７２１７（Ｄ８）。

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（３−（４−（アミノメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−７−シクロプロピル−３−イソブチル−６，６−ジメチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロ−ヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン

スキーム１に示し、実施例１および８にて記載した一般ルートＡに従って、実施例２１を製造した。

２，５−ジオキソピロリジン−１−イル５−（（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−７−シクロプロピル−３−イソブチル−６，６−ジメチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）アミノ）−５−オキソペンタノエート

スキーム３に示し、実施例２、６、９および１３にて記載した通りに、実施例２２を製造した。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.34 (m, 1 H); 0.66 (m, 1 H); 0.74 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.76 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.78 (s, 3 H); 0.80 (m, 1 H); 0.82 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.08 (s, 3 H); 1.11 (m, 1 H); 1.20 (m, 1 H); 1.23 (d, J = 7.0 Hz, 3 H); 1.43〜1.54 (m, 2 H); 1.78 (m, 1 H); 1.82 (m, 2 H); 1.98 (m, 1 H); 2.22 (m, 1 H); 2.28 (m, 2 H); 2.65 (m, 3 H); 2.79 (m, 1 H); 2.81 (s, 4 H); 2.97 (dd, J = 2.2および7.9 Hz, 1 H); 3.80 (s, 3 H); 3.89 (d, J = 2.2 Hz, 1 H); 4.02 (m, 1 H); 4.17 (dd, J = 6.7および8.7 Hz, 1 H); 4.27 (d, J = 6.3 Hz, 2 H); 4.30 (m, 1 H); 4.37 (m, 1 H); 5.10 (m, 1 H); 5.79 (dd, J = 1.8および15.5 Hz, 1 H); 6.39 (ddd, J = 4.0, 11.6および15.5 Hz, 1 H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1 H); 7.11 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1 H); 7.20 (d, J = 2.3 Hz, 1 H); 7.22 (m, 4 H); 7.46 (s, 1 H); 7.77 (d, J = 9.0 Hz, 1 H); 7.89 (d, J = 8.6 Hz, 1 H); 8.05 (d, J = 7.5 Hz, 1 H); 8.29 (d, J = 7.6 Hz, 1 H); 8.32 (t, J = 6.3 Hz, 1 H).

ｍＡｂ−Ｅｘ２２

実施例２３を実施例３、７、１０および１４と同様の方法で製造した。実施例２３（４５ｍｇ）を無色透明溶液として２．１４ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＡＲ３．６（ＨＲＭＳ）、単量体純度１００％および合計収率７５％にて得た。

ＳＥＣ−ＨＲＭＳ：図６におけるインタクトＡＤＣのスペクトル；ｍ／ｚ＝１５０３４１（Ｄ１）；ｍ／ｚ＝１５１３２９（Ｄ２）；ｍ／ｚ＝１５２３１７（Ｄ３）；ｍ／ｚ＝１５３３０８（Ｄ４）；ｍ／ｚ＝１５４２９６（Ｄ５）；ｍ／ｚ＝１５５２８７（Ｄ６）；ｍ／ｚ＝１５６２７９（Ｄ７）；ｍ／ｚ＝１５７２６７（Ｄ８）。

（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アジドメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）−エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン

スキーム３に示し、実施例３２にて記載した一般ルートＣに従って、実施例２４を製造した。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.83 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.8 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.03 (d, J = 7,1 Hz, 3H); 1.19 (s, 3H); 1.33 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.84
(m, 1H); 1.97 (dd, J = 9.8および14.5 Hz, 1H); 2.27 (dd, J = 11.1および14.5 Hz, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.1および14.2 Hz, 1H); 2.92 (dd, J = 2.1および7.7 Hz, 1H); 2.96 (dd, J = 3.6および14.2 Hz, 1H); 3.43 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.96 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 4.08 (ddd, J = 3.6, 7.1および11.1 Hz, 1H); 4.12 (m, 1H); 4.46 (s, 2H); 5.05 (ddd, J = 1.3, 3.9および11.3 Hz, 1H); 5.90 (dd, J = 1.3および15.3 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.7, 10.7および15.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4および8.7 Hz, 1H); 7.32 (m, 3H); 7.40 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.92 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 8.40 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 749 [M-H]^-; m/z = 751 [M+H]⁺; m/z = 795 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 1.52分.

（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アミノメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン

実施例１、５、８および１１に記載した通りに、実施例２５を製造した。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.86 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.98 (s, 3H); 1.02 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.18 (s, 3H); 1.34 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.80
(m, 1H); 1.98 (dd, J = 9.8および14.5 Hz, 1H); 2.27 (dd, J = 11.1および14.5 Hz, 1H); 2.40 (広幅なm, 2H); 2.62 (m, 1H); 2.68 (dd, J = 11.1および14.2 Hz, 1H); 2.90 (dd, J = 2.1および7.7 Hz, 1H); 2.96 (dd, J = 3.6および14.2 Hz, 1H); 3.43 (m, 1H); 3.76 (s, 2H); 3.80 (s, 3H); 3.91 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 4.02〜4.15 (m, 2H); 5.04 (ddd, J = 1.3, 3.9および11.3 Hz, 1H); 5.88 (dd, J = 1.3および15.4 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.7, 10.7および15.3 Hz, 1H); 7.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.2および8.5 Hz, 1H); 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.32 (d, J = 2.2 Hz, 2H); 7.36 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.86 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 7.93 (d, J = 6.9 Hz, 1H); 8.40 (d, J = 7.1 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 723 [M-H]^-; m/z = 725 [M+H]⁺; m/z = 769 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 0.87分.

実施例２６から２８：３−（Ｓ）−ネオペンチル−７−（Ｓ）−Ｍｅ−アザ−Ｃ５２ベンジル酸アルコール、グルタリル−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＥＤＡ−３−（Ｓ）−ネオペンチル−７−（Ｓ）−Ｍｅ−アザ−Ｃ５２ベンジル酸アルコールのＮＨＳエステルおよび対応するＡＤＣの合成

化合物５８：（２Ｒ，３Ｓ）−１−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−２−メチルヘキサ−５−エン−３−イル（Ｓ）−２−（（Ｓ）−３−（（Ｒ）−２−アクリルアミド−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−２，２−ジメチルブタンアミド）−４，４−ジメチルペンタノエート
化合物ＢＣ４（３６５ｍｇ、９１９．７μｍｏｌ）のＤＭＦ（１２ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（４０２ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）およびＨＯＡｔ（１４４ｍｇ、１．０６ｍｍｏｌ）を加え、反応媒体を室温で３０分間撹拌し、次いで化合物ＡＤ３（３６５ｍｇ、９６５．７μｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）およびＤＩＥＡ（５６２μＬ、３．２２ｍｍｏｌ）中溶液を加えた。反応媒体を室温で４時間撹拌し、次いでＨ_２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＨ_２Ｏ（１５ｍＬ）、飽和ブライン（３×１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル３０ｇ上での連続した２種のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨおよびヘプタン／ＥｔＯＡｃの濃度勾配溶離）により精製して、化合物５８（５６４ｍｇ）を無色泡状物として得た（８１％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.83 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.85 (s, 9H); 0.87 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.03 (s, 3H); 1.55 (dd, J = 2.4および14.5 Hz,
1H); 1.78 (dd, J = 9.5および14.5 Hz, 1H); 1.96 (m, 1H); 2.20 (m, 1H); 2.30 (m, 1H); 2.72 (dd, J = 9.6および13.9 Hz, 1H); 2.87 (dd, J = 5.3および13.9 Hz, 1H); 3.20 (dd, J = 6.5および9.5 Hz, 1H); 3.37 (dd, J = 5.4および9.5 Hz, 1H); 3.76 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.19 (m, 1H); 4.28 (m, 1H); 4.34 (s, 2H); 4.55 (m, 1H); 4.82 (m, 1H); 5.00 (d, J = 10.2 Hz, 1H); 5.07 (d, J = 17.4 Hz, 1H); 5.55 (dd, J = 2.3および10.2 Hz, 1H); 5.71 (m, 1H); 6.01 (dd, J = 2.3および17.1 Hz, 1H); 6.28 (dd,
J = 10.2および17.1 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H);
7.17 (dd, J = 2.3および8.6 Hz, 1H); 7.22 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.32 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.65 (d, J = 9.5 Hz, 1H); 7.70 (d, J = 7.9 Hz, 1H); 8.35 (d, J = 8.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 754 [M-H]^-; m/z = 756 [M+H]⁺; m/z = 800 [M-H+HCO₂H]^-;
t_R = 1.62分.

化合物５９：（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｒ）−１−（（４−メトキシ−ベンジル）オキシ）プロパン−２−イル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
化合物５８（５６０ｍｇ、７４０．４μｍｏｌ）のＤＣＭ（５６ｍＬ）中溶液に、Ａｒ下ＧｒｕｂｂｓＩ触媒（３１．０ｍｇ、３７．０２μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で１時間３０分撹拌した後、触媒３１．０ｍｇを加えた。室温で１時間３０分撹拌を行った後、触媒３１．０ｍｇを加えた。室温で１時間３０分撹拌を行った後、触媒３１．０ｍｇを加え、反応媒体を室温で１時間３０分撹拌した。次いでこれを真空で濃縮し、シリカゲル２５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物５９（３３０ｍｇ、６１％）および２２０ｍｇを得、これをシリカゲル１５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により更に精製して、化合物５９（２０４ｍｇ、３７％）をトリシクロヘキシルホスフィンオキシドとの混合物として得た。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.85 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.91 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.04 (s, 3H); 1.20 (s, 3H); 1.29 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.95
(dd, J = 9.8および14.5 Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.26 (m, 1H); 2.43 (m, 1H); 2.72 (dd, J = 10.1および14.3 Hz, 1H); 2.97 (dd, J = 3.6および14.3 Hz, 1H); 3.27 (dd, J = 6.1および9.3 Hz, 1H); 3.40 (dd, J = 5.8および9.3 Hz, 1H); 3.46 (m, 1H) ; 3.72 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 1H); 4.13 (m, 1H); 4.38 (s, 2H); 4.97 (m, 1H); 5.93 (d, J = 15.4 Hz, 1H); 6.43 (ddd, J = 4.8, 10.7および15.4 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.17 (d, J = 8.6 Hz, 3H); 7.36 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.88 (m, 2H); 8.48 (d, J = 7.5 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 726 [M-H]^-; m/z = 728 [M+H]⁺; m/z = 772 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.54分.

化合物６０：（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｒ）−１−ヒドロキシプロパン−２−イル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
化合物５９（５３２ｍｇ、７３０．４μｍｏｌ）を、室温でＴＦＡ（３．９３ｍＬ）のＤＣＭ（３６ｍＬ）中溶液で３０分間処理した。反応媒体を機械撹拌しながら９％ＮａＨＣＯ_３水溶液（１３０ｍＬ）上に注ぎ入れた。３０分間撹拌を行い、次いで水相をＤＣＭ（２×７０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＨ_２Ｏ（３×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル３０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物６０（２９９ｍｇ）を白色泡状物として得た（６７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.89 (s, 9H); 0.90 (d, J = 7.0 Hz, 3H) 1.03 (s, 3H); 1.20 (s, 3H); 1.36 (dd, J = 1.8および14.5 Hz,
1H); 1.80 (m, 1H); 1.96 (dd, J = 9. 6および14.5 Hz, 1H); 2.25 (m, 1H); 2.43 (m, 1H); 2.72 (dd, J = 11.1および14.3 Hz, 1H); 2.97 (dd, J = 3.8および14.3 Hz, 1H); 3.25 (m, 1H); 3.45 (m, 2H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 1H); 4.16 (m, 1H); 4.57 (t, J
= 5.3 Hz, 1H); 4.98 (m, 1H); 5.93 (dd, J = 1.3および15.3 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.9, 10.7および15.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.22 (dd, J = 2.3および8.6 Hz, 1H); 7.36 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.89 (m, 2H); 8.48 (d, J = 7.3 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 606 [M-H]^-; m/z = 608 [M+H]⁺; t_R = 1.2分.

化合物６１：（Ｓ）−２−（（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）プロパナール
氷／アセトン浴で冷却した化合物６０（２９７ｍｇ、４８８．４μｍｏｌ）のＤＣＭ（６ｍＬ）中溶液に、０℃でＫＢｒ（５８．１１ｍｇ、４８８．４μｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（１．１８ｍＬ）中溶液、ＴＥＭＰＯ（１．５７ｍｇ、９．８μｍｏｌ）を加え、１．５６Ｍ次亜塩素酸ナトリウム水溶液ｐＨ９．５（４６７．６μＬ、７３２．５２μｍｏｌ）を滴下添加した。０℃で１５分間撹拌を行い、次いで０℃で飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（３．５６ｍＬ）を加え、氷浴を除去し、反応媒体を１０分間撹拌した。次いでこれをＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をＨ_２Ｏ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル１５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物６１（１３９ｍｇ）を白色ラッカーとして得た（４７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.85 (s, 9H); 0.90 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.03 (s, 3H) ; 1.04 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.20 (s, 3H); 1.26 (d, J = 15.3 Hz, 1H); 1.95 (m, 1H); 2.44 (m, 1H); 2.57 (m, 1H); 2.72 (dd, J = 11.2および14.4 Hz, 1H); 2.80 (m, 1H); 2.98 (dd, J = 3.1および14.4 Hz, 1H); 3.80 (s, 3H); 4.10 (m, 3H); 5.22 (m, 1H); 5.98 (d, J = 15.3 Hz, 1H); 6.47 (ddd, J = 4.9, 10.8および15.3 Hz, 1H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.22 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1H); 7.37 (s, 1H); 7.90 (m, 1H); 7.92 (d, J = 8.2 Hz, 1H); 8.53 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 9.68 (s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 604 [M-H]^-; m/z = 606 [M+H]⁺; m/z = 650 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.28分.

化合物６２：（４−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）フェニル）メタノール
１，４−ベンゼンジメタノール（２ｇ、１４．３３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中溶液に、イミダゾール（１．１３ｇ、１６．４８ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で１５分間撹拌し、次いでトリイソプロピルシリルクロリド（３．１４ｍＬ、１４．３３ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌を行った。Ｅｔ_２Ｏ（５０ｍＬ）を反応混合物に加え、有機相を飽和ブライン（１００ｍＬ）で２回洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で濾過し、真空で濃縮し、ＤＣＭに溶解し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル２００ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（８：２ヘプタン／ＥｔＯＡｃの定組成溶離）により精製して、化合物６２（１．９ｇ）を無色油状物として得た（４５％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 1.04 (d, J = 6,7 Hz, 18H); 1.15 (m, 3H); 4.48
(d, J = 5.7 Hz, 2H); 4.78 (s, 2H); 5.13 (t, J = 5.7 Hz, 1H); 7.29 (s, 4H).

化合物６３：（（４−（ブロモメチル）ベンジル）オキシ）トリイソプロピルシラン
０℃で冷却したＮ−ブロモスクシンイミド（１．２９ｇ、７．１６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（６５ｍＬ）中懸濁液に、ジメチルスルフィド（９５３μＬ、１２．９ｍｍｏｌ）を滴下添加した。０℃で１０分間撹拌を行い、次いで反応媒体を−２０℃で冷却し、−２０℃で１０分間撹拌した。次いで−２０℃で冷却した化合物６２（１．９ｇ、６．４５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中溶液を滴下添加した。−２０℃で１５分間次いで０℃で１５分間および室温で終夜撹拌を行った。反応媒体を飽和ブライン（１００ｍＬ）で２回洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル４０ｇ上での連続した２種のフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃの濃度勾配溶離）により精製した。所望の化合物を含むフラクションを合わせ、真空で濃縮し、ヘプタン（８ｍＬ）に溶解した。懸濁液を濾過し、濾液を真空で濃縮し、Ｅｔ_２Ｏ（５ｍＬ）に溶解し、−２０℃で冷却し、濾過し、真空で濃縮して、化合物６３（１．１８ｇ）を淡黄色油状物として得た（５１％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 1.04 (d, J = 6,8 Hz, 18H); 1.15 (m, 3H); 4.70
(s, 2H); 4.81 (s, 2H); 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.41 (d, J = 8.4 Hz, 2H). LCMS
(A5): ES m/z = 104; m/z = 356 [M]⁺; t_R= 1.99分.

化合物６４：（１Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−４，７，７−トリメチル−６−（４−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）ベンジル）−６−チアビシクロ［３．２．１］オクタン−６−イウムトリフルオロメタンスルホネート
（１Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４，７，７−トリメチル−６−チアビシクロ［３．２．１］オクタン（ＣＡＳ番号［５７１８−７５−２］、５６２．３ｍｇ、３．３ｍｍｏｌ）に、化合物６３（１．１８ｇ、３．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３．４ｍＬ）中溶液を加えた。次いでトリフルオロメタンスルホン酸リチウム（２．６３ｇ、１６．５１ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（３ｍＬ）中溶液を滴下添加し、反応媒体を室温で終夜撹拌した。次いでＨ_２Ｏ（１５ｍＬ）およびＤＣＭ（１５ｍＬ）を反応媒体に加え、室温で１０分間撹拌を行った。水相をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を飽和ブライン（３×８ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。淡黄色油状物をｉＰｒ_２Ｏ（５ｍＬ）中で摩砕し、このように得られた固体を濾過し、ｉＰｒ_２Ｏ（２×５ｍＬ）で洗浄し、真空乾固して、化合物６４（１．１２５ｇ）を白色固体として得た（５７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 1.04 (m, 21H); 1.15 (m, 3H); 1.45 (m, 1H); 1.60 (m, 2H); 1.68 (s, 3H); 1.71 (m, 1H); 1.74 (s, 3H); 1,98 (m, 1H); 2.40 (d, J = 14.6 Hz, 1H); 2.45 (m, 1H); 2.58 (広幅なd, J = 14.6 Hz, 1H); 3.85 (m, 1H); 4.56 (d, J = 12.6 Hz, 1H); 4.83 (s, 2H); 4.90 (d, J = 12.6 Hz, 1H); 7.44 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H).

化合物６５：（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（（（トリイソプロピルシリル）オキシ）メチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
−７０℃で冷却した化合物６１（１３８ｍｇ、２２７．７μｍｏｌ）および６４（１４９．５ｍｇ、２５０．４μｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）中溶液に、ＢＥＭＰ（ＣＡＳ番号［９８０１５−４５−３］、９０．２μＬ、２９６．０μｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を−７０℃で２時間撹拌し、飽和ブライン（７ｍＬ）を反応混合物に加え、浴を除去し、室温にまで激しく撹拌を行った。水相をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル１０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物６５（１６３ｍｇ）を無色油状物（３０％）としておよび化合物６１（６０ｍｇ、４３％）を得た。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.84 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.05 (d, J = 7.3 Hz, 18H); 1.15 (m, 3H); 1.19
(s, 3H); 1.32 (d, J = 14.8 Hz, 1H); 1.82 (m, 1H); 1.97 (dd, J = 9.9および14.8 Hz, 1H); 2.28 (dt, J = 11.1および14.9 Hz, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.2および14.3 Hz, 1H); 2.91 (dd, J = 2.2および7.6 Hz, 1H); 2.95 (dd, J = 3.8および14.3 Hz, 1H); 3.43 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.91 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.08 (ddd, J = 3.8, 7.4および11.2 Hz, 1H); 4.12 (m, 1H); 4.81 (s, 2H); 5.04 (ddd, J = 1.5, 4.5および11.1 Hz, 1H); 5.89 (dd, J = 1.5および15.2 Hz, 1H); 6.44 (ddd, J = 4.5, 10.6および15.2 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.91 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 8.39 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 120; m/z = 882 [M+H]⁺; t_R = 7.65分.

（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（ヒドロキシメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
０℃で冷却した化合物６５のＴＨＦ中溶液に、ＴＢＡＦを加えた。反応媒体を０℃で１時間３０分撹拌し、次いでＨ_２Ｏ（５ｍＬ）を加え、２０分間撹拌を行った。反応媒体をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を飽和ブライン（３×５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル１５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの濃度勾配溶離）により精製して、実施例２６（６９ｍｇ）を白色ラッカーとして得た（９１％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.85 (s, 9H); 0.89 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.19 (s, 3H); 1.35 (d, J = 14.8 Hz, 1H); 1.80
(m, 1H); 1.99 (dd, J = 9.9および14.8 Hz, 1H); 2.27 (dt, J = 11.1および14.9 Hz, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.2および14.3 Hz, 1H); 2.90 (dd, J = 2.2および7.6 Hz, 1H); 2.95 (dd, J = 3.8および14.3 Hz, 1H); 3.43 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.91 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.06〜4.15 (m, 2H); 4.50 (d, J = 5.9 Hz, 2H); 5.03 (dd, J = 1.5, 3.7および11.5 Hz, 1H); 5.20 (t, J = 5.9 Hz, 1H); 5.89 (dd, J = 1.5および15.3 Hz, 1H); 6.43 (ddd, J = 4.6, 10.7および15.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.2および8.6 Hz, 1H); 7.23 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.32 (m, 3H); 7.87 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 7.92 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 8.40 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 724 [M-H]^-; m/z = 726 [M+H]⁺; m/z = 770 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.29分.

化合物６６：４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
実施例２６（６８ｍｇ、９３．６μｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、ビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（１１８．７ｍｇ、３７４．５μｍｏｌ）を加え、ＤＩＥＡ（４９μＬ、２８１．０μｍｏｌ）を滴下添加した。反応媒体を室温で６日間撹拌し、次いで飽和ブラインを加え、これをＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物６６（７９ｍｇ）を白色ラッカーとして得た（９４％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.85 (s, 9H); 0.89 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.05 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.19 (s, 3H); 1.34 (d, J = 14.6 Hz, 1H); 1.83
(m, 1H); 1.97 (dd, J = 9.9および14.6 Hz, 1H); 2.28 (dt, J = 11.1および14.9 Hz, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.2および14.3 Hz, 1H); 2.93 (m, 2H); 3.42 (m, 1H); 3.79 (s, 3H); 3.99 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.09 (m, 2H); 5.05 (dd, J = 1.3, 4.0および11.1 Hz, 1H); 5.31 (s, 2H); 5.89 (dd, J = 1.3および15.3 Hz, 1H); 6.47 (ddd, J = 4.8, 10.8および15.3 Hz, 1H); 7.01 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.21 (dd, J = 2.2および8.6 Hz, 1H); 7.31 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.36 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.50 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.59 (d, J = 9.3 Hz, 2H); 7.87 (d, J = 8.3 Hz, 1H); 7.92 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 8.32 (d, J = 9.3 Hz, 2H); 8.39 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 889 [M-H]^-; m/z = 891 [M+H]⁺; m/z = 935 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.55分.

化合物６７：（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（２−ＮＢｏｃ−アミノエチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート塩酸塩
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＯＨ（３．５ｇ、８．５３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１００ｍＬ）中懸濁液に、ＴＥＡ（３．６ｍＬ、２５．５８ｍＬ）を加えて、出発物Ｎ−Ｂｏｃ−ＥＤＡ（１．６２ｍＬ、１０．２３ｍｍｏｌ）およびプロピルホスホン酸無水物（６．５１ｇ、１０．２３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ中５０％溶液を完全に溶解させた。反応媒体を室温で３時間撹拌し、次いで１ＮＮａＯＨ（５０ｍＬ）を加え、懸濁液を濾過し、Ｈ_２ＯおよびＤＣＭで洗浄した。濾液の有機相をＨ_２Ｏで洗浄した。ケーキおよび有機相を合わせ、真空で部分的に濃縮し、濾過し、ＤＣＭで洗浄し、乾燥して、化合物６７（３．９５２ｇ）を白色粉体として得た（８４％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.84 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.86 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.19 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.37 (s, 9H); 1.99 (m, 1H); 2.92〜3.14 (m, 4H); 3.88 (dd, J = 6.9および9.1 Hz, 1H); 4.19〜4.35 (m, 4H); 6.71 (m, 1H); 7.32 (m, 2H); 7.38 (m, 1H); 7.42 (m, 2H); 7.73 (m, 2H); 7.84 (t, J = 6.8 Hz, 1H); 7.89 (d, J = 7.8 Hz, 2H); 7.92 (d, J = 7.8 Hz, 1H).

化合物６８：（９Ｈ−フルオレン−９−イル）メチル（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−１−（（２−アミノエチル）アミノ）−１−オキソプロパン−２−イル）アミノ）−３−メチル−１−オキソブタン−２−イル）カルバメート塩酸塩
化合物６７（１００ｍｇ、１５９．５μｍｏｌ）のジオキサン（３ｍＬ）中懸濁液に、ジオキサン中４ＮＨＣｌ（９０５μＬ、３．６２ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で２０時間撹拌し、次いで真空で濃縮した。粗生成物をｉＰｒ_２Ｏ（３ｍＬ）に再度懸濁し、超音波浴中に浸漬し、濾過した。このように得られたケーキをｉＰｒ_２Ｏ（２×３ｍＬ）で洗浄し、真空乾固して、化合物６８（７８ｍｇ）を白色固体として得た（８８％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.85 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 0.87 (d, J = 6.9 Hz, 3H); 1.23 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.99 (m, 1H); 2,83 (m, 2H); 3.29 (m, 2H); 3.89 (dd, J = 6.9および8.9 Hz, 1H); 4.19〜4.38 (m, 4H); 7.33 (m, 2H); 7.42 (m, 3H); 7.75 (m, 2H); 7.88 (広幅なs, 3H); 7.90 (d, J = 7.6 Hz, 2H); 8.08 (d, J = 7.3 Hz, 1H); 8.14 (d, J = 5.9 Hz, 1H).

化合物６９：４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル（２−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンアミド）プロパンアミド）エチル）カルバメート
化合物６６（７８ｍｇ、８７．５μｍｏｌ）および６８（５１．４ｍｇ、１０５．０μｍｏｌ）のＤＣＭ中懸濁液に、ＤＩＥＡ（４４．０μＬ、２６２．５μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で終夜撹拌し、次いで化合物６８（２４ｍｇ、４９μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１５μＬ）を加え、室温で１日間撹拌を行った。ピペリジン（８７．０μＬ、８７５．０μｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌を行った。反応媒体を真空で濃縮し、シリカゲル５ｇ上での連続する２種のフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの濃度勾配溶離）により精製して、化合物６９（５７ｍｇ）を白色ラッカーとして得た（６６％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.75 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.85 (s, 9H); 0.86 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.87 (d, J = 6.7 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.18 (m, 6H); 1.33 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.75 (広幅なs, 2H); 1.81 (m, 1H); 1.92 (m, 1H); 1.98 (dd, J = 10.0および14.5 Hz, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.3および14.7 Hz, 1H); 2.90 (dd, J = 2.0および7.5 Hz, 1H); 2.96 (m, 1H); 2.98 (d, J = 4.7 Hz, 1H); 3.05 (m, 2H); 3.12 (m, 2H); 3.43 (m, 1H); 3.81 (s, 3H); 3.93 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 4.09 (m, 2H); 4.26 (m, 1H); 5.01 (s, 2H); 5.04 (m, 1H); 5.89 (dd, J = 1.5および15.2 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.5, 10.4および15.2 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4および8.8 Hz, 1H); 7.26 (t, J = 6.0 Hz, 1H); 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.32 (d, J = 2.5 Hz, 1H); 7.37 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.88 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.93 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 8.00 (t, J = 6.0 Hz, 1H); 8.03 (d, J = 8.1 Hz, 1H); 8.41 (d, J = 7.2 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 492 [M+2H]²⁺; m/z = 980 [M-H]^-; m/z = 982 [M+H]⁺; m/z = 1026 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 0.91分.

化合物７０：（９Ｓ，１２Ｓ）−１−（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシ−ベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）フェニル）−１２−イソプロピル−９−メチル−３，８，１１，１４−テトラオキソ−２−オキサ−４，７，１０，１３−テトラアザオクタデカン−１８−オン酸
化合物６９（５６．０ｍｇ、５６．８μＬ）のＤＣＭ（８ｍＬ）中溶液に、グルタル酸無水物（７．２７ｍｇ、６２．５μｍｏｌ）のＤＣＭ（４ｍＬ）中溶液を加えた。反応媒体を室温で２時間撹拌し、真空で濃縮し、シリカゲル５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの濃度勾配溶離）により精製して、化合物７０（３５．５ｍｇ）を白色ラッカーとして得た（５６％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.81 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.83 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.85 (s, 9H); 0.87 (d, J = 6.5 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.19 (m, 6H); 1.32 (d, J = 14.3 Hz, 1H); 1.70 (m, 2H); 1.81 (m, 1H); 1.92 (m, 1H); 1.98 (m, 2H); 2.15 (m, 2H); 2.19 (t, J = 7.5 Hz, 2H); 2.27 (m, 1H); 2.61 (m, 1H); 2.69 (dd, J = 11.1および14.1 Hz, 1H); 2.91 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 2.95 (m, 1H); 3.04 (m, 2H); 3.10 (m, 2H); 3.41 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.93 (s, 1H); 4.03〜4.16 (m, 3H); 4.19 (m, 1H); 5.01 (s, 2H); 5.04 (m, 1H); 5.89 (d, J = 15.6 Hz, 1H); 6.43 (ddd, J = 5.3, 11.0および15.6 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1H); 7.28 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.30 (m, 1H); 7,32 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.36 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.88 (m, 2H); 7.93 (d, J = 7.4 Hz, 1H); 7.98 (広幅なs, 1H); 8.06 (広幅なs, 1H); 8.42 (d, J = 7.4 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 549 [M+2H]²⁺; m/z = 1094 [M-H]^-; m/z = 1096 [M+H]⁺; t_R = 1.21分.

２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（９Ｓ，１２Ｓ）−１−（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロ−ヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）フェニル）−１２−イソプロピル−９−メチル−３，８，１１，１４−テトラオキソ−２−オキサ−４，７，１０，１３−テトラアザオクタデカン−１８−オエート
化合物７０（１４．６ｍｇ、１３．３μｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、Ａｒ下ＤＳＣ（４．３ｍｇ、１６．０μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２．８μＬ、１６．０μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で３時間撹拌し、次いでＤＳＣ（１．５ｍｇ、５．６μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１μＬ、５．７μｍｏｌ）を加え、室温で１時間撹拌を行った。反応媒体を真空で濃縮し、ジオールで修飾したシリカゲル１６．４ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、実施例２７（１１．４ｍｇ）を白色ラッカーとして得た（７２％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.81 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.83 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.85 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.5 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.19 (m, 6H); 1.34 (d, J = 14.4 Hz, 1H); 1.83 (m, 3H); 1.98 (m, 2H); 2.26 (m, 1H); 2.29 (m, 2H); 2.60 (m, 1H); 2.68 (t, J = 7.6 Hz, 2H); 2.70 (dd, J = 11.2および14.3 Hz, 1H); 2.80 (s, 4H); 2.91 (dd, J = 2.3および7.6 Hz, 1H); 2.95 (dd, J = 3.7および14.3 Hz, 1H); 2.99〜3.20 (m, 4H); 3.43 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.93 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.05〜4.25 (m, 4H); 5.01 (m, 2H); 5.03 (m, 1H); 5.89 (dd, J = 1.6および15.4 Hz, 1H); 6.44 (ddd, J = 4.6, 10.9および15.4 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.20 (m, 2H); 7.28 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.31 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.37 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.86 (m, 3H); 7.91 (d, J = 7.1 Hz, 1H); 7.95 (d, J = 7.6 Hz, 1H); 8.39 (d, J = 7.3 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 311; m/z = 1191 [M-H]^-; m/z = 1193 [M+H]⁺; m/z = 1237 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.26分.

ｍＡｂ−Ｅｘ２７
実施例２８を実施例３、７、１０および１４と同様の方法で製造した。実施例２８（１．５６ｍｇ）を無色透明溶液として０．７８ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＡＲ４（ＨＲＭＳ）、単量体純度１００％および合計収率１３％にて得た。
ＳＥＣ−ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ＝１４９４０５（ネイキッドｍＡｂ）；ｍ／ｚ＝１５０４８６（Ｄ１）；ｍ／ｚ＝１５１５６８（Ｄ２）；ｍ／ｚ＝１５２６４５（Ｄ３）；ｍ／ｚ＝１５３７２５（Ｄ４）；ｍ／ｚ＝１５４８０２（Ｄ５）；ｍ／ｚ＝１５５８８２（Ｄ６）；ｍ／ｚ＝１５６９６１（Ｄ７）；ｍ／ｚ＝１５８０３９（Ｄ８）。

実施例２９：マレイミド−ｍｃ−ｖｃ−ＰＡＢＡ−３−（Ｓ）−ネオペンチル−７−（Ｓ）−Ｍｅ−アザ−Ｃ５２ベンジル酸アミンの合成

化合物７１：４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチルブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４−ニトロフェニル）カルボネート
ＶｅｒｍａＶ．Ａ．ら、ＢｉｏｏｒｇＭｅｄＣｈｅｍＬｅｔｔ２０１５年、２５巻、８６４〜８６８頁により記載されている通りに、化合物７２を製造した。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.83 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.87 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.18 (m, 2H); 1.31〜1.75 (m, 8H); 1.96 (m, 1H); 2.10 (m, 1H); 2.18 (m, 1H); 2.96 (m, 1H); 3.01 (m, 1H); 3.37 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 4.19 (dd, J = 7.0および8.6 Hz, 1H); 4.38 (m, 1H); 5.24 (s, 2H); 5.42 (s, 2H); 5.98 (t, J = 6.0 Hz, 1H); 7.00 (s, 2H); 7.40 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.57 (d, J = 9.2 Hz, 2H); 7.66 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.81 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 8.12 (d, J = 7.9 Hz, 1H); 8.31 (d, J = 9.2 Hz, 2H); 10.08 (s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 738 [M+H]⁺; m/z = 782 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 1.1分.

４−（（Ｓ）−２−（（Ｓ）−２−（６−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール−１−イル）ヘキサンアミド）−３−メチル−ブタンアミド）−５−ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）カルバメート
化合物７１（１６．０ｍｇ、２１．７μｍｏｌ）に、実施例２５（１４．３ｍｇ、１９．７μｍｏｌ）のＤＣＭ（２．５ｍＬ）およびＤＩＥＡ（３．４μＬ、１９．７μｍｏｌ）中溶液を加えた。反応媒体を室温で終夜撹拌し、次いでＤＭＦ（１ｍＬ）を加え、室温で１日間撹拌を行った。Ｈ_２Ｏ（８ｍＬ）を反応媒体に加え、１５分間撹拌を行い、次いで水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、トルエンを用いて２回共蒸発させ、シリカゲル５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、実施例２９（１５．８ｍｇ）を白色固体として得た（６０％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.81 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.85 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 0.86 (s, 9H); 0.89 (d, J = 6.8 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.0 Hz, 3H); 1.18 (s, 3H); 1.19 (m, 2H); 1.31〜1.75 (m, 9H); 1.80 (m, 1H); 1,96 (m, 2H) 2.10 (m, 1H); 2.18 (m, 1H); 2,27 (m, 1H); 2.61 (m, 1H); 2,69 (dd, J = 10.8および14.3 Hz, 1H); 2,90 (dd, J = 2.1および7.6 Hz, 1H); 2.96 (m, 2H); 3.01 (m, 1H); 3.37 (t, J = 7.2 Hz, 2H); 3.42 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.90 (d, J = 2.1 Hz, 1H); 4.08 (m, 1H); 4.11 (m, 1H); 4.20 (m, 3H); 4.39 (m, 1H); 4.97 (s, 2H); 5.04 (m, 1H); 5.40 (s, 2H); 5.89 (dd, J = 1.7および15.5 Hz, 1H); 5.97 (t, J = 6.2 Hz, 1H); 6.45 (ddd, J = 4.8, 10.7および15.5 Hz, 1H); 6.99 (s, 2H); 7.01 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 1H); 7.21〜7.30 (m, 6H); 7.31 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.59 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.78 (m, 2H); 7.85 (d, J = 8.5 Hz, 1H); 7.90 (d, J = 6.9 Hz, 1H); 8.07 (d, J = 7.8 Hz, 1H); 8.39 (d, J = 7.3 Hz, 1H); 9.97 (s, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 662 [M+2H]²⁺; m/z = 1322 [M-H]^-; m/z = 1324 [M+H]⁺; m/z = 1368 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 1.3分.

実施例３０および３１：非開裂性トリアゾール−３−（Ｓ）−ネオペンチル−７−（Ｓ）−Ｍｅ−アザ−Ｃ５２のＮＨＳエステルおよび対応するＡＤＣの合成

化合物７２：ｔｅｒｔ−ブチル３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）プロパノエート
プロパルギルアルコール（１．３６２ｍＬ、２３．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２３ｍＬ）中溶液に、ナトリウム（２０．０８ｍｇ、０．８７４ｍｍｏｌ）を加え、ナトリウムが完全に溶解するまで反応媒体を６０℃で加熱し、次いで室温で冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルアクリレート（２．２８６ｍＬ、１５．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で終夜撹拌し、次いでＨ_２Ｏ（２５ｍＬ）を加え、水相をＥｔＯＡｃ（３×２５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮して、化合物７２（２ｇ）を無色油状物として得た（７０％）。

化合物７３：３−（プロパ−２−イン−１−イルオキシ）プロパン酸
化合物７２（２．０ｇ、１０．８６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（５０ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（８．０６５ｍＬ、１０８．６ｍｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で終夜撹拌し、真空で濃縮し、トルエンを用いて共蒸発させ、シリカゲル８０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物７３（１．１ｇ）を油状物として得た（８０％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 2.46 (t, J = 6.4 Hz, 2H); 3.43 (t, J = 2.4 Hz, 1H); 3.63 (t, J = 6.4 Hz, 2H); 4.11 (d,J = 2.4 Hz, 2H); 12.20 (広幅, 1H).

化合物７４：３−（（１−（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）プロパン酸
実施例２４（５０ｍｇ、６６．６μｍｏｌ）のＴＨＦ（０．５ｍＬ）中溶液に、化合物７３（１７．０５ｍｇ、１１３．１μｍｏｌ）、０．１Ｍ硫酸銅（ＩＩ）水溶液（２６６μＬ、２６．６μｍｏｌ）および０．２Ｍアスコルビン酸ナトリウム水溶液（２６６μＬ、５３．２μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で１日間撹拌し、次いでＨ_２Ｏ（１ｍＬ）を加え、水相をＥｔＯＡｃ（３×１ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ２０（ＤＣＭ溶離）上での濾過により精製して、油状物４０ｍｇを得、これをシリカゲル５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により更に精製して、化合物７４（２０ｍｇ、３５％）を得た。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.82 (s, 9H); 0.88 (d, J = 6.7 Hz, 3H); 1.00 (s, 3H); 1.04 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.18 (s, 3H); 1.31 (d, J = 14.6 Hz, 1H); 1.80
(m, 1H); 1.97 (dd, J = 10.0および14.6 Hz, 1H); 2.25 (m, 1H); 2.42 (t, J = 6.6 Hz, 2H); 2.60 (m, 1H); 2,70 (dd, J = 10.9および14.4 Hz, 1H); 2.90 (dd, J = 2.2および7.6 Hz, 1H); 2.95 (dd, J = 3.6および14.4 Hz, 1H); 3.44 (m, 1H); 3.62 (t, J =
6.6 2H); 3.80 (s, 3H); 3.94 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.08 (m, 2H); 4.49 (s, 2H); 5.03 (m, 1H); 5.59 (s, 2H); 5.89 (dd, J = 1.7および15.3 Hz, 1H); 6.43 (ddd, J = 4.8, 10.8および15.3 Hz, 1H); 7.02 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4および8.7 Hz, 1H); 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.32 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 7.35 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.90 (d, J = 7.0 Hz, 1H); 8.13 (s, 1H); 8.46 (m, 1H); 12.20 (広幅, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 440 [M+2H]²⁺; m/z = 877 [M-H]^-; m/z = 879 [M+H]⁺; t_R = 1.24分.

２，５−ジオキソピロリジン−１−イル３−（（１−（４−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（Ｓ）−１−（（３Ｓ，７Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６，６，７−トリメチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−１−オキサ−４，８，１１−トリアザ−シクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）エチル）オキシラン−２−イル）ベンジル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メトキシ）プロパノエート
化合物７４（２０ｍｇ、２２．７μｍｏｌ）のＤＣＭ（５ｍＬ）中溶液に、ＤＩＥＡ（５．０μＬ、２８．５μｍｏｌ）およびＤＳＣ（６．３４ｍｇ、２３．８μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で３時間撹拌し、次いでＤＳＣ（３ｍｇ、１１．３μｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（５μＬ、２８．５μｍｏｌ）を加え、室温で２時間撹拌を行った。次いで反応媒体を真空で濃縮し、ジオールで修飾したシリカゲル１．５ｇ上での連続した２種のフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ｉＰｒＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、実施例３０（１１．５ｍｇ、５０％）を得た。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.83 (s, 9H); 0.87 (d, J = 6.6 Hz, 3H); 0.99 (s, 3H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.04 (d, J = 6.6 Hz, 3H); 1.19 (s, 3H); 1.32 (d, J = 14.5 Hz, 1H); 1.81 (m, 1H); 1.96 (dd, J = 10.2および14.5 Hz, 1H); 2.25 (m, 1H); 2.60 (m, 1H); 2.70 (dd, J = 11.2および14.5 Hz, 1H); 2.80 (s, 4H); 2.90 (dd, J = 2.0および7.4 Hz, 1H); 2.94 (t, J = 6.1 Hz, 2H); 2.97 (dd, J = 3.6および14.1 Hz, 1H); 3.42 (m, 1H); 3.74 (t, J = 6.1 Hz, 2H); 3.80 (s, 3H); 3.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H); 4.09 (m, 2H); 4.55 (s, 2H); 5.03 (m, 1H); 5.59 (s, 2H); 5.89 (dd, J
= 1.6および15.2 Hz, 1H); 6.44 (ddd, J = 4.7, 10.6および15.2 Hz, 1H); 7.02 (d, J
= 8.6 Hz, 1H); 7.20 (dd, J = 2.4および8.6 Hz, 1H); 7.29 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.32 (m, 3H); 7.86 (d, J = 8.4 Hz, 1H); 7.90 (d, J = 6.9 Hz, 1H); 8.14 (s, 1H); 8.39 (d, J = 7.5 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 120; m/z = 974 [M-H]^-; m/z = 976 [M+H]⁺; m/z = 1020 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 1.29分.

ｍＡｂ−実施例３０
実施例３１を実施例３、７、１０および１４と同様の方法で製造した。実施例３１（５．４ｍｇ）を無色透明溶液として１．８ｍｇ／ｍＬの濃度でＤＡＲ４（ＨＲＭＳ）、単量体純度９８．１％および合計収率４５％にて得た。
ＳＥＣ−ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ＝１４９３９９（ネイキッドｍＡｂ）；ｍ／ｚ＝１５０２４５（Ｄ１）；ｍ／ｚ＝１５１１０１（Ｄ２）；ｍ／ｚ＝１５１９６５（Ｄ３）；ｍ／ｚ＝１５２８３１（Ｄ４）；ｍ／ｚ＝１５３６７９（Ｄ５）；ｍ／ｚ＝１５４５４６（Ｄ６）；ｍ／ｚ＝１５５４０８（Ｄ７）；ｍ／ｚ＝１５６２７３（Ｄ８）；ｍ／ｚ＝１５７２８４（Ｄ９）。

実施例３２：３−（Ｓ）−ネオペンチル−６−Ｍｅ−６−ＣＨ_２ＯＨ−アザ−Ｃ５２ベンジル酸アミンの合成

化合物７５：（２Ｒ，３Ｓ）−１−（（４−メトキシベンジル）オキシ）−２−メチルヘキサ−５−エン−３−イル（２Ｓ）−２−（（４−（（Ｒ）−２−アクリルアミド−３−（３−クロロ−４−メトキシフェニル）プロパンアミド）−３−（ヒドロキシメチル）−３−メチル−２−オキソブチル）アミノ）−４，４−ジメチルペンタノエート
化合物ＢＣ６（３８５．６ｍｇ、７７３．５μｍｏｌ）のＤＭＦ（１２ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（３４８．７ｍｇ、８８９．５μｍｏｌ）およびＨＯＡｔ（１２２．３ｍｇ、８８９．５μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を室温で３０分間撹拌し、次いで化合物ＡＤ３（２９２ｍｇ、７７３．５μｍｏｌ）のＤＭＦ（５ｍＬ）およびＤＩＥＡ（４７５．２μＬ、２．７１ｍｍｏｌ）中溶液を加え、室温で４時間撹拌を行った。Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）を加え、水相をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相をＨ_２Ｏ（１５ｍＬ）、飽和ブライン（３×１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル３０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物７５（３８３ｍｇ）を黄色油状物として得た（６５％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 55/45 ジアステレオ異性体混合物; 0.85〜0.88 (m, 12H); 0.91 (s, 1.65H) ; 0.92 (s, 1.35H) ; 1.56 (m, 1H) ; 1.60 (m, 1H) ; 1.98 (m, 1H) ; 2.21 (m, 1H) ; 2.30 (m, 1H); 2.71 (m, 1H); 2.92 (m, 1H); 3.19〜3.45 (m, 6H); 3.73 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.29 (m, 1H); 4.33 (m, 2H); 4.58 (m, 1H); 4.82 (m, 1H); 4.95〜5.09 (m, 3H); 5.55 (dd, J = 2.2および10.2 Hz, 1H); 5.71 (m, 1H); 6.01 (dd, J = 2.2および17.2 Hz, 1H); 6.23 (dd, J = 10.2および17.2 Hz, 1H); 6.89 (m, 2H); 7.01 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.17 (dd, J = 2.2および8.6 Hz, 1H); 7.21 (m, 2H); 7.34 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.82 (d, J = 8.0 Hz, 0.45H); 7.84 (d, J = 8.0 Hz, 0.55H); 7.98 (t, J = 6.5 Hz, 0.45H); 8.00 (t, J = 6.5 Hz, 0.55H); 8.39 (d, J = 8.6 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 756 [M-H]^-; m/z = 758 [M+H]⁺; m/z = 802 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 1.54-1.56分.

化合物７６：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６−（ヒドロキシメチル）−１６−（（Ｒ）−１−（（４−メトキシベンジル）オキシ）プロパン−２−イル）−６−メチル−３−ネオペンチル−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
化合物７５（３８０ｍｇ、５０１．１μｍｏｌ）のＤＣＭ（３８ｍＬ）中溶液に、Ａｒ下ＧｒｕｂｂｓＩ触媒（２０．９７ｍｇ、２５．０５μｍｏｌ）を加えた。反応媒体をＡｒ下室温で４時間撹拌し、次いでＧｒｕｂｂｓＩ触媒（２０．９７ｍｇ、２５．０５μｍｏｌ）を加えた。室温で３時間撹拌を行い、次いでＧｒｕｂｂｓＩ触媒（２０．９７ｍｇ、２５．０５μｍｏｌ）を加え、室温で撹拌を行った。２４時間反応した後、ＧｒｕｂｂｓＩ触媒（２０．９７ｍｇ、２５．０５μｍｏｌ）を加え、４時間撹拌を行った。反応媒体を真空で濃縮し、シリカゲル２０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃの定組成溶離）により精製して、化合物７６ステレオマー１（１７０ｍｇ、５６％）および化合物７６ステレオマー２（１３８ｍｇ、３７％）を得た。

化合物７６ステレオマー１
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.83 (s, 9H); 0.91 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.02 (s, 3H); 1.30 (dd, J = 2.4および14.6 Hz, 1H); 1.53 (dd, J = 9.9および14.6 Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.45 (m, 1H); 2.67 (m, 1H); 2.91 (dd, J = 3.0および13.7 Hz, 1H); 2.97 (dd, J = 4.0および14.5 Hz, 1H); 3.17〜3.49 (m, 5H); 3.72 (s, 3H); 3.80 (s, 3H); 4.18 (m, 1H); 4.37 (m, 2H); 4.50 (td, J = 2.4および9.6 Hz, 1H); 5.00 (m, 3H); 5.82 (dd, J = 1.9および15.4 Hz, 1H); 6.39 (ddd, J = 4.2, 11.6および15.4 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.04 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.12 (m, 1H); 7.15 (dd, J = 2.3および8.6 Hz, 1H); 7.21 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.28 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 8.09 (d, J = 9.6 Hz, 1H); 8.38 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 728 [M-H]^-; m/z = 730 [M+H]⁺; m/z = 774; t_R = 5.15分.
化合物７６ステレオマー２
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.83 (s, 9H); 0.88 (s, 3H); 0.91 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.28 (dd, J = 2.4および14.6 Hz, 1H); 1.67 (dd, J = 9.9および14.6 Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.45 (m, 1H); 2.67 (m, 1H); 3.02 (dd, J = 3.3および14.2 Hz, 1H); 3.08 (dd, J = 1.9および13.5 Hz, 1H); 3.25〜3.42 (m, 4H); 3.55 (dd, J = 5.1および11.0 Hz, 1H); 3.73 (s, 3H); 3.81 (s, 3H); 4.17 (m, 1H); 4.37 (m, 2H); 4.44 (td, J = 2.1および9.3 Hz, 1H); 4.80 (t, J = 5.1 Hz, 1H); 5.00 (m, 2H); 5.86 (dd, J = 1.6および15.1 Hz, 1H); 6.38 (ddd, J = 4.0, 11.4および15.3 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.19 (dd, J = 2.2および8.7 Hz, 1H); 7.22 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.30 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.42 (d, J = 10.4 Hz, 1H); 7.92 (d, J = 8.9 Hz, 1H); 8.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 728 [M-H]^-; m/z = 730 [M+H]⁺; m/z = 774; t_R = 4.79分.

化合物７７：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｒ）−１−（（４−メトキシ−ベンジル）オキシ）プロパン−２−イル）−６−メチル−３−ネオペンチル−６−（（（トリエチルシリル）オキシ）メチル）−１−オキサ−４，８，１１−トリアザ−シクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
氷浴で冷却した化合物７６ステレオマー１（１７０ｍｇ、２３２．８μｍｏｌ）のＤＣＭ（３ｍＬ）中溶液に、４℃でクロロトリエチルシラン（１５９．３μＬ、９３１．１μｍｏｌ）を加え、ＴＥＡ（１３１．１μＬ、９３１．１μｍｏｌ）を滴下添加した。反応媒体を４℃で３０分間、次いで室温で２０時間撹拌した。反応媒体をＤＣＭ（５０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で希釈し、１０分間撹拌を行った。有機相を飽和ブライン（２×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。化合物７６のその他のジアステレオマー（１３８ｍｇ、１８９．０μｍｏｌ）を同様に保護化し、両バッチをプールし、シリカゲル２０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ヘプタン／ＥｔＯＡｃの定組成溶離）により精製して、化合物７７ステレオマー１（１３９ｍｇ）を無色泡状物として（３９％）、化合物７７ステレオマー２（１０７ｍｇ）を無色泡状物として得た（３０％）。

化合物７７ステレオマー１
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.62 (q, J = 8.1 Hz, 6H); 0.83 (s, 9H); 0.91 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 0.96 (t, J = 8.1 Hz, 9H); 1.04 (s, 3H); 1.66 (dd, J = 3.4および14.4 Hz, 1H); 1.43 (dd, J = 9.3および14.4 Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.47 (m, 1H); 2.68 (m, 1H); 2.92 (dd, J = 3.0および13.5 Hz, 1H); 2.99 (dd, J = 4.0および14.8 Hz, 1H); 3.21〜3.40 (m, 3H); 3.48 (m, 1H); 3.63 (d, J = 10.3 Hz, 1H); 3.73 (s, 3H); 3.81 (s, 3H); 4.17 (m, 1H); 4.36 (m, 2H); 4.51 (td, J = 2.9および9.4 Hz, 1H); 5.02 (m, 1H); 5.82 (dd, J = 1.8および15.4 Hz, 1H); 6.39 (ddd, J = 4.3, 11.6および15.4 Hz, 1H); 6.89 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.02 (m, 1H); 7.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H); 7.15 (dd, J = 2.3および8.7 Hz, 1H); 7.21 (d, J = 8.7 Hz, 2H); 7.29 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.96 (d, J = 9.4 Hz, 1H); 8.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H).
LCMS (A4): ES m/z = 842 [M-H]^-; m/z = 844 [M+H]⁺; m/z = 888 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 7.08分.
化合物７７ステレオマー２
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.52 (q, J = 8.1 Hz, 6H) 0.84 (s, 9H); 0.88〜0.93 (m, 15H); 1.29 (dd, J = 2.6および14.5 Hz, 1H); 1.68 (dd, J = 10.1および14.5
Hz, 1H); 1.99 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.47 (m, 1H); 2.68 (m, 1H); 3.01 (dd, J = 3.4および14.5 Hz, 1H); 3.15 (d, J = 12.8 Hz, 1H); 3.33 (m, 1H); 3.48 (d, J = 10.4 Hz, 1H); 3.73 (s, 3H); 3.81 (s, 3H); 3.83 (d, J = 10.4 Hz, 1H); 4.17 (m, 1H); 4.36 (m, 2H); 4.45 (td, J = 2.4および9.2 Hz, 1H); 5.01 (m, 1H); 5.84 (dd, J = 1.8および15.3 Hz, 1H); 6.39 (ddd, J = 3.9, 11.4および15.3 Hz, 1H); 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.05 (d, J = 8.6 Hz, 1H); 7.19 (dd, J = 2.2および8.6 Hz, 1H); 7.22 (d, J = 8.8 Hz, 2H); 7.30 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 7.47 (d, J = 10.4 Hz, 1H); 8.01 (d, J = 9.2 Hz, 1H); 8.41 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A4): ES m/z = 842 [M-H]^-; m/z = 844 [M+H]⁺; m/z = 888 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 6.88分.

化合物７８：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−１６−（（Ｒ）−１−ヒドロキシプロパン−２−イル）−６−メチル−３−ネオペンチル−６−（（（トリエチルシリル）オキシ）メチル）−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
氷／アセトン浴で冷却した化合物７７の両方のジアステレオマー（２４５ｍｇ、２９０．１μｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（２．５ｍＬ）中溶液に、ＤＤＱ（３３９．４ｍｇ、１．４５ｍｍｏｌ）および２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピリジン（１７１．７ｍｇ、８７０．３μｍｏｌ）を加えた。反応媒体を０℃で２時間撹拌し、次いでＮａＨＣＯ_３水溶液（１０ｍＬ）およびＤＣＭ（１０ｍＬ）で希釈し、１０分間撹拌を行った。水相をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を飽和ブライン（３×５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル２０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物７８（１５５ｍｇ）を白色泡状物として得た（７４％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.49〜0.65 (m, 6H); 0.80〜1.07 (m, 24H); 1.35〜1.71 (m, 2H); 1.83 (m, 1H); 2.28 (m, 1H); 2.47 (m, 1H ; 2.68 (m, 1H); 2.90〜3.50 (m, 5.96H); 3.65 (d, J = 10.6 Hz, 0.52H); 3.80 (s, 3H); 3.82 (d, J = 10.6 Hz, 0.52H); 4.18 (m, 1H); 4.29〜4.70 (m, 2H); 5.02 (m, 1H); 5.80〜5.89 (m, 1H); 6.05 (m, 0.11H); 6.39 (m, 0.89H); 6.98〜7.31 (m, 3.48H); 7.47 (d, J = 10.6 Hz, 0.52H); 7.87 (d, J = 9.4 Hz, 0.11H); 7.96 (d, J = 9,4 Hz, 0.52H); 8.00 (d, J = 9.4 Hz, 0.37H); 8.31 (d, J = 8.0 Hz, 0.63H); 8.42 (d, J = 8.4 Hz, 0.37H). LCMS (A4): ES m/z = 722 [M-H]^-; m/z = 724 [M+H]⁺; m/z = 768 [M-H+HCO₂H]^-; t_R = 5.68-5.78分.

化合物７９：（２Ｓ）−２−（（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６−メチル−３−ネオペンチル−２，５，９，１２−テトラオキソ−６−（（（トリエチルシリル）オキシ）メチル）−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−１６−イル）プロパナール
氷／アセトン浴で冷却した化合物７８（１５４ｍｇ、２１２．６μｍｏｌ）のＤＣＭ（１．５ｍＬ）中溶液に、０℃でＫＢｒ（２５．６ｍｇ、２１２．６μｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（６１２μＬ）中溶液、５ｍｇ／ｍＬでのＴＥＭＰＯのＤＣＭ中溶液（１３７μＬ、４．２５μｍｏｌ）を加え、１．５６Ｍ次亜塩素酸ナトリウム水溶液ｐＨ９．５（２０４μＬ、３１８．９μｍｏｌ）を滴下添加した。０℃で１５分間撹拌を行い、次いで０℃で飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（１．９ｍＬ）を加え、氷浴を除去し、反応媒体を１０分間撹拌した。次いでこれをＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をＨ_２Ｏ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル１５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物６１（３６ｍｇ、２３％）を得た。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 72/28 ジアステレオ異性体混合物: 0.49〜0.65 (m, 6H); 0.80〜1.08 (m, 24H); 1.32〜1.69 (m, 2H); 2.40 (m, 1H); 2.68 (m, 2H); 2.79 (m, 1H); 2.89〜3.70 (m, 5H); 3.80 (s, 3H); 4.10〜4.53 (m, 2H); 5.02 (m, 0.28H); 5.28 (m, 0.72H); 5.78〜5.91 (m, 1H); 6.07 (m, 0.28H); 6.40 (m, 0.72H); 7.00〜7.51 (m, 4H); 7.90 (d, J = 9.4 Hz, 0.28H); 7.98 (d, J = 9.4 Hz, 0.72H); 8.34 (m, 1H); 9.59 (d, J = 2.5 Hz, 0.28H); 9.63 (d, J = 1.8 Hz, 0.72H). LCMS (A5): m/z = 722 [M+H]⁺; t_R = 1.71分.

化合物８０：１−（アジドメチル）−４−（ブロモメチル）ベンゼン
ｐ−キシレンジブロミド（２．０ｇ、７．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液に、２０分でアジ化ナトリウム（５８４．９ｍｇ、８．６４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中溶液を加えた。反応媒体を室温で２０時間撹拌し、次いで氷（１００ｇ）上に注ぎ入れ、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を飽和ブライン（３×１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、トルエンを用いて共蒸発させ、シリカゲル７０ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（Ｅｔ_２Ｏ溶離）により精製して、化合物８０（７７３ｍｇ）を無色油状物として得た（４７％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 4.45 (s, 2H); 4.71 (s, 2H); 7.35 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H).

化合物８１：（１Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｓ）−６−（４−（アジドメチル）ベンジル）−４，７，７−トリメチル−６−チアビシクロ［３．２．１］オクタン−６−イウムトリフルオロメタンスルホネート
（１Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−４，７，７−トリメチル−６−チアビシクロ［３．２．１］オクタン（ＣＡＳ番号［５７１８−７５−２］、５８０．１ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ）に、化合物８０（７７０ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２．２ｍＬ）中溶液を加えた。次いでトリフルオロメタンスルホン酸リチウム（２．７１ｇ、１７．０３ｍｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（２ｍＬ）中溶液を滴下添加し、反応媒体を室温で２日間撹拌した。次いでＨ_２Ｏ（１５ｍＬ）およびＤＣＭ（１５ｍＬ）を反応媒体に加え、室温で１０分間撹拌を行った。水相をＤＣＭ（３×１５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を飽和ブライン（３×８ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮した。淡黄色油状物をｉＰｒ_２Ｏ（５ｍＬ）中で摩砕し、このように得られた固体を濾過し、ｉＰｒ_２Ｏ（２×５ｍＬ）で洗浄し、真空乾固して、化合物８１（１．２６６ｇ）を白色固体として得た（７９％）。
RMN ¹H (400 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 1.08 (d, J = 7.2 Hz, 3H); 1.45 (m, 1H); 1.55〜1.80 (m, 3H); 1.69 (s, 3H); 1.75 (s, 3H); 1.99 (m, 1H); 2.40 (d, J = 13.8 Hz, 1H); 2.45 (m, 1H); 2.59 (dm, J = 13.8 Hz, 1H); 3.88 (t, J = 4.6 Hz, 1H); 4.52 (s, 2H); 4.60 (d, J = 12.8 Hz, 1H); 4.90 (d, J = 12.8 Hz, 1H); 7.47 (d, J = 8.5 Hz, 2H); 7.61 (d, J = 8.5 Hz, 2H).

化合物８２：（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アジドメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６−メチル−３−ネオペンチル−６−（（（トリエチルシリル）オキシ）メチル）−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
−７０℃で冷却した化合物７９（３５ｍｇ、４８．５μｍｏｌ）および８１（２４．８ｍｇ、５３．３μｍｏｌ）のＤＣＭ（１．５ｍＬ）中溶液に、ＢＥＭＰ（ＣＡＳ番号［９８０１５−４５−３］、１８．６μＬ、６３．０μｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を−７０℃で２時間３０分撹拌し、飽和ブライン（１．５ｍＬ）を反応混合物に加え、浴を除去し、室温にまで激しく撹拌を行った。水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨの濃度勾配溶離）により精製して、化合物８２（１０．２ｍｇ）を無色ラッカーとして得た（２４％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.61 (q, J = 8.1 Hz, 6H); 0.80 (s, 9H); 0.98 (t, J = 8.1 Hz, 9H); 1.02 (s, 3H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.34 (dd, J = 2.5および14.4 Hz, 1H); 1.44 (dd, J = 10.0および14.4 Hz, 1H); 1.85 (m, 1H); 2.27 (m, 1H); 2.62 (m, 2H); 2.88 (dd, J = 2.6および13.5 Hz, 1H); 2.97 (dd, J = 3.7および14.2 Hz, 1H); 3.00 (dd, J = 2.3および7.3 Hz, 1H); 3,35 (m, 1H); 3.48 (dd, J = 9.5および14.2 Hz, 1H); 3.61 (d, J = 10.3 Hz, 1H); 3.81 (s, 3H); 3.92 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 4.15 (m, 1H); 4.46 (s, 2H); 4.48 (td, J = 2.5および9.7 Hz, 1H); 5.10 (m, 1H); 5.78 (dd, J = 2.2および15.3 Hz, 1H); 6.40 (ddd, J = 4.3, 11.6および15.3 Hz, 1H); 7.04 (m, 2H); 7.14 (dd, J = 2.3および8.6 Hz, 1H); 7.28 (d, J = 2.3 Hz, 1H); 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.39 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.96 (d, J = 9.7 Hz, 1H); 8.28 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 120; m/z = 865 [M-H]^-; m/z = 867 [M+H]⁺; m/z = 911 [M-H+HCO₂H]^-; t_R= 1.87分.

（３Ｓ，１０Ｒ，１６Ｓ，Ｅ）−１６−（（Ｓ）−１−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（４−（アミノメチル）フェニル）オキシラン−２−イル）エチル）−１０−（３−クロロ−４−メトキシベンジル）−６−メチル−３−ネオペンチル−６−（（（トリエチルシリル）オキシ）メチル）−１−オキサ−４，８，１１−トリアザシクロヘキサデカ−１３−エン−２，５，９，１２−テトラオン
化合物８２（９．４ｍｇ、１０．８４μｍｏｌ）のＤＣＭ（１．３ｍＬ）およびＭｅＯＨ（０．７ｍＬ）中溶液に、ＴＣＥＰ（３．４５ｍｇ、１１．９μｍｏｌ）のＨ_２Ｏ（０．７ｍＬ）中溶液を加えた。反応媒体を室温で終夜撹拌し、次いでＮａＨＣＯ_３水溶液（２．５ｍＬ）を加え、１０分間撹拌を行った。水相をＤＣＭ（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相をＭｇＳＯ_４で脱水し、濾過し、真空で濃縮し、シリカゲル５ｇ上でのフラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏの濃度勾配溶離）により精製して、実施例３２（４．５５ｍｇ）を白色ラッカーとして得た（５７％）。
RMN ¹H (500 MHz, δ ppm, DMSO-d6): 0.82 (s, 9H); 1.01 (s, 3H); 1.03 (d, J = 7.1 Hz, 3H); 1.33 (dd, J = 2.3および14.5 Hz, 1H); 1.56 (dd, J = 10.1および14.5 Hz, 1H); 1.82 (m, 1H); 2.27 (m, 1H); 2.64 (m, 2H); 2.88 (dd, J = 2.6および13.5 Hz, 1H); 2.92 (dd, J = 2.2および7.3 Hz, 1H); 2.96 (dd, J = 4.0および11.2 Hz, 1H); 3,19 (dd, J = 4.3および10.9 Hz, 1H); 3.41 (m, 2H); 3.74 (s, 2H); 3.81 (s, 3H); 3.88 (d, J = 2.2 Hz, 1H); 4.18 (m, 1H); 4.47 (td, J = 2.1および9.4 Hz, 1H); 4.91 (dd, J = 4.2および6.2 Hz, 1H); 5.08 (m, 1H); 5.76 (dd, J = 2.3および15.5 Hz, 1H); 6.40 (ddd, J = 3.7, 11.5および15.5 Hz, 1H); 7.05 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 7.11 (m, 1H); 7.14 (dd, J = 2.4および8.8 Hz, 1H); 7.22 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 7.25 (d, J = 2.4 Hz, 1H); 7.35 (d, J = 8.3 Hz, 2H); 8.08 (d, J = 9.4 Hz, 1H); 8.31 (d, J = 8.0 Hz, 1H). LCMS (A5): ES m/z = 725 [M-H]^-; m/z = 727 [M+H]⁺; t_R = 0.79分.

薬理学的結果
本発明の化合物を、その抗腫瘍効果を決定するための薬理学的試験に供した。式（ＩＩＩ）のＡＤＣはまた、血漿安定性に関して評価した。

例示の目的のために、ＷＯ２０１１／００１０５２に由来する以下に示す２つのコンジュゲート、ＡＤＣ１およびＡＤＣ２も試験した。

式（Ｉ）のクリプトフィシン化合物によるＨＣＴ１１６細胞株およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株の増殖の阻害の評価
指数増殖期にあるＨＣＴ１１６細胞およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をトリプシン処理し、これらのそれぞれの培地（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞についてはＤＭＥＭ／Ｆ１２Ｇｉｂｃｏ＃２１３３１、１０％ＦＣＳＧｉｂｃｏ＃１０５００−０５６、２ｎＭグルタミンＧｉｂｃｏ＃２５０３０；ＨＣＴ１１６細胞についてはＤＭＥＭＧｉｂｃｏ＃１１９６０、１０％ＦＣＳＧｉｂｃｏ＃１０５００−０５６、２ｍＭグルタミンＧｉｂｃｏ＃２５０３０）に再懸濁させた。細胞懸濁液を、血清を含有する全培地のＣｙｔｏｓｔａｒ９６ウエル培養プレート（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＥｕｒｏｐｅ、＃ＲＰＮＱ０１６３）に５０００細胞／ウエルの密度で播種した。４時間のインキュベーション後、クリプトフィシン化合物の系列希釈物をウエルに１０^−７から１０^−１２Ｍの漸減濃度で添加した（各濃度について３回重複で）。５％ＣＯ_２を含有する雰囲気中３７℃で
、クリプトフィシン化合物の存在中で、細胞を３日間培養した。第４日目に、各ウエルに^１４Ｃ−チミジン溶液（０．１μＣｉ／ウエル、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ＃ＮＥＣ５６８２５０００）１０μｌを添加した。実験開始の９６時間後、マイクロベータ放射能カウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して^１４Ｃ−チミジンの取り込みを測定した。クリプトフィシン化合物で処理した細胞で得られた低下したカウントと（培地のみで処理した）対照ウエルの細胞で得られたカウントとの間の比を決定することにより、生存の百分率の形でデータを表した。

阻害活性は、活性の５０％を阻害する濃度によって与えられている。

^１式（Ｉ）のクリプトフィシン化合物は、「構造のコメント」と題する欄に指定の、純粋なβエポキシドとしてまたはαおよびβエポキシドの混合物としていずれかで試験した。βエポキシドはαエポキシドより通常５０〜１００倍強力であることが、文献から知られている（例えば、Ａｌ−ＡｗａｒＲ．Ｓ．ら、ＪＭｅｄＣｈｅｍ２００３、４６、２９８５〜３００７を参照されたい）。

式（Ｉ）のクリプトフィシン化合物は、５０ｐＭから２．８１５ｎＭの範囲のＩＣ_５０でＨＣＴ１１６細胞株およびＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株の増殖を阻害することが見出された。

式（ＩＩＩ）のＡＤＣによるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株の増殖の阻害の評価
指数増殖期にあるＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞をトリプシン処理し、その培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２Ｇｉｂｃｏ＃２１３３１、１０％ＦＣＳＧｉｂｃｏ＃１０５００−０５６、２ｎＭグルタミンＧｉｂｃｏ＃２５０３０）に再懸濁させた。細胞懸濁液を、血清を含有する全培地のＣｙｔｏｓｔａｒ９６ウエル培養プレート（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＥｕｒｏｐｅ、＃ＲＰＮＱ０１６３）に５０００細胞／ウエルの密度で播種した。４時間のインキュベーション後、ＡＤＣの系列希釈物をウエルに１０^−７から１０^−１２Ｍの漸減濃度で添加した（各濃度について３回重複で）。５％ＣＯ_２を含有する雰囲気中３７℃で、ＡＤＣの存在中で、細胞を３日間培養した。第４日目に、各ウエルに^１４Ｃ−チミジン溶液（０．１μＣｉ／ウエル、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ＃ＮＥＣ５６８２５０００）１０μｌを添加した。実験開始の９６時間後、マイクロベータ放射能カウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して^１４Ｃ−チミジンの取り込みを測定した。ＡＤＣで処理した細胞で得られた低下したカウントと（培地のみで処理した）対照ウエルの細胞で得られたカウントとの間の比を決定することにより、生存の百分率の形でデータを表した。ある特定の実験では、ネイキッド抗体を実験の開始時に１μＭの濃度でウエルに添加し、増殖の阻害を先に記載の通り測定した。

式（ＩＩＩ）のクリプトフィシンＡＤＣならびにＡＤＣ１およびＡＤＣ２は、２０ｐＭから１３０ｐＭの範囲のＩＣ_５０で、かつ１８５から５００の間の選択比、ＡＤＣ単独ｖｓＡＤＣ＋ネイキッド抗体で、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞株の増殖を阻害することが見出された

ＳＣＩＤマウスにおける単回ｉ．ｖ．投与後の式（ＩＩＩ）のＡＤＣのＭＴＤの決定
個々のマウスについて３日間連続で１５％の体重減を誘導しないか、もしくは１日のうちで２０％の体重減を誘導しないか、または死亡を誘導しない最大用量として、ＭＴＤを決定した。これについては、３匹のメスＳＣＩＤマウスにおける単回の静脈内（ｉ．ｖ．）ボーラス注射後および処置後２８日の期間、評価を行った。

式（ＩＩＩ）のクリプトフィシンＡＤＣは、ＳＣＩＤマウスにおいてＭＴＤは２０ｍｇ／ｋｇから≧５０ｍｇ／ｋｇまでの範囲であることを示した。

単回ｉ．ｖ．投与後のＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ-ＭＢ-２３１に対する式（ＩＩＩ）のＡＤＣのｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価
ｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性を、メスＳＣＩＤマウスにｓ．ｃ．移植した測定可能な乳房ＭＤＡ−ＭＢ−２３１異種移植片に対して３用量レベルで評価した。対照群は未処置のままとした。コンジュゲートを単一のｉ．ｖ．ボーラス注射によって投与し、処置の日を各グラフ上に矢印（↓）で示した。

コンジュゲートの抗腫瘍活性の評価のため、動物を週２回秤量し、キャリパーで腫瘍を週２回測定した。動物の体重には腫瘍の重量が含まれていた。質量（ｍｍ^３）＝［長さ（ｍｍ）×幅（ｍｍ）^２］／２の式を使用して腫瘍の体積を算出した。主要評価項目は、ΔＴ／ΔＣ、メディアン退縮パーセント、部分退縮および完全退縮（ＰＲおよびＣＲ）とした。特定された観察日の腫瘍量から最初の処置日（ステージング日）の腫瘍量を引くことによって、処置した各腫瘍（Ｔ）のおよび対照（Ｃ）の腫瘍量の変化を各腫瘍に対して算出した。メディアンΔΤを処置したグループに対して算出し、メディアンΔＣを対照グループに対して算出した。次いで比ΔΤ／ΔＣを算出し、百分率：ΔΤ／ΔＣ＝（デルタＴ／デルタＣ）×１００として表現した。

腫瘍退縮の百分率は、最初の処置の初日（ｔ０）における腫瘍量と比較した場合の、特定された観察日（ｔ）における処置したグループの腫瘍量の減少の％と定義した。特定の時間点および各動物に対して、％退縮を算出した。よって、処置したグループに対するメディアン％退縮を算出した：％退縮（ｔにおいて）＝（（体積_ｔ０−体積_ｔ）／体積_ｔ０）×１００。退縮は、処置開始時の腫瘍量の５０％まで腫瘍量が低減した場合、部分的（ＰＲ）であると、および腫瘍量が測定不能である場合（０ｍｍ^３）、完全（ＣＲ）であると、定義した。無腫瘍（ＴＦＳ）とは、実験の終わりに、腫瘍が検出不能な動物と定義した（最終処置後＞１００日）。

単回ｉ．ｖ．投与後のＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対するＥｘ．３のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価

単回ｉ．ｖ．投与後のＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対するＥｘ．７のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価

単回ｉ．ｖ．投与後のＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対するＥｘ．１０のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価

単回ｉ．ｖ．投与後のＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対するＥｘ．１４のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価

単回ｉ．ｖ．投与後のＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対するＥｘ．２０のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価

単回ｉ．ｖ．投与後のＳＣＩＤマウスにおけるＭＤＡ−ＭＢ−２３１に対するＥｘ．２３のｉｎｖｉｖｏ抗腫瘍活性の評価

これらの結果が示すところによれば、本発明の試験された全ての例ならびにＡＤＣ２は、０．６２５ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で抗腫瘍活性を提示した。

ＳＣＩＤマウスにおける単回ｉ．ｖ．投与後（５ｍｇ／ｋｇ）のＥｘ．３およびＥｘ．７に関するＰＫパラメータの決定
ＡＤＣおよび全抗体のｉｎｖｉｖｏ薬物動態を、コンジュゲートを単回ｉ．ｖ．ボーラス注射による投与後、メスＳＣＩＤマウスにおいて評価した。メスＳＣＩＤマウス（５〜６週齢、平均体重２０〜２５ｇ）は、無菌室に、ラミナーフード中に無菌条件下で収容し、飼料は自由摂取とした。ＡＤＣは、１回の用量レベル（１０ｍＬ／ｋｇ）でのｉ．ｖ．ボーラスとして投与した（非シリアルデザイン、ｎ＝３／サンプリング時）。各動物についておよび選択された各時点において（すなわち０．０８３、０．２５、２４、７２、９６、１６８、２４０、３３６ｈ）、血液６００μＬを心臓穿刺を介して採取し、血液試料は次いで遠心分離した（４℃および３５００ｔｒ／分で１５分）。血漿試料のＡＤＣおよび全抗体の定量化をイムノアッセイを使用して行った。マウスにおけるコンジュゲートおよび全抗体の血漿濃度対時間プロファイルおよびＰＫパラメータを、非コンパートメント分析（Ｐｈｏｅｎｉｘ、ＷｉｎＮｏｎＬｉｎバージョン６．３）を使用して特徴付けしたが、これらを図１５および図１６に示す。濃度時間曲線下面積、ＡＵＣ（μｇ．日／ｍＬ）を台形法により推定した。ｔ＝０における濃度Ｃ_０（μｇ／ｍＬ）、クリアランスＣＬ（Ｌ／（日．ｋｇ）、および終末消失半減期ｔ_１／２（日）を曲線から導出し算出した。

ＳＣＩＤマウスにおける５ｍｇ／ｋｇでの単回ｉ．ｖ．投与後の式（ＩＩＩ）のクリプトフィシンＡＤＣの血漿安定性に関するＨＲＭＳによる評価
ＰＫ試験由来の血漿試料についてはＬＣ−ＨＲＭＳによる分析も行った。クロマトグラフ分析を、下に記載の（Ａ）水＋０．１％ギ酸／（Ｂ）ＣＨ_３ＣＮ＋０．１％ギ酸からなる勾配溶出を使用して、ＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＩＣｌａｓｓおよび８０℃でのＷａｔｅｒｓＭａｓｓＰｒｅｐＭｉｃｒｏＤｅｓａｌｔｉｎｇ２０μｍ（２．１×５ｍｍ）カラム上で行った。

質量分析を正のモード（ＥＳ＋）のエレクトロスプレーイオン化法を使用してＷａｔｅｒｓＱＴＯＦＳｙｎａｐｔＧ２−Ｓ器で行った。マススペクトルはＷａｔｅｒｓＢｉｏｐｈａｌａｌｙｎｘソフトウェアを使用してデコンボリューションした。ＨＲＭＳスペクトルについては試験した例全てについて得たが、これらを図２０〜図２５に示す。
これらの結果が示すところによれば、本発明の試験された全ての例は、基準ＡＤＣ、ＡＤＣ１およびＡＤＣ２で観察された代謝を提示しなかった。

したがって、本発明の化合物は抗がん活性を有すること、および本発明のコンジュゲートはマウス血漿において改善された安定性を提示していることは明らかである。

したがって、その態様の別の態様では、本発明はまた、抗がん剤としての式（Ｉ）のクリプトフィシン化合物の使用または式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの使用にも関する。

本発明はまた、その態様の別の態様によれば、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを含む医薬を提供する。

これらの医薬は治療的に、特にがんの処置に用いられる。

その態様の別の態様によれば、本発明は、本発明による式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを有効成分として含む医薬組成物に関する。これらの医薬組成物は、本発明による式（ＩＩＩ）の少なくとも１つのコンジュゲートの有効量およびまた少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤を含む。

前記賦形剤は、当業者に知られている通常の賦形剤から、所望の医薬形態および投与方法に従って、選択される。

本発明はまた、その態様の別の態様によれば、本発明による式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの有効量を患者に投与することを含む、上記の病状を処置する方法も提供する。

Claims

式（Ｉ）：

の化合物
（式中：
・Ｒ₁は（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表し；
・Ｒ₂およびＲ₃は、互いに独立して、水素原子もしくは（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表し；
または代替的にＲ₂およびＲ₃は、それらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ₃〜Ｃ₆）シクロアルキル基もしくは（Ｃ₃〜Ｃ₆）ヘテロシクロアルキル基を形成し；
・Ｒ₄およびＲ₅は、互いに独立して、水素原子、（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基、−（Ｃ₁〜
Ｃ₆）アルキレン−ＮＨ（Ｒ₁₂）基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＯＨ基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆
）アルキレン−ＳＨ基、または−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＣＯ₂Ｈ基を表し；
または代替的にＲ₄およびＲ₅は、それらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ₃〜Ｃ₆）シクロアルキル基もしくは（Ｃ₃〜Ｃ₆）ヘテロシクロアルキル基を形成し；
・Ｒ₆は水素原子または（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表し；
・Ｒ₇およびＲ₈は、互いに独立して、水素原子、（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基、−（Ｃ₁〜
Ｃ₆）アルキレン−ＣＯ₂Ｈ基、または−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｎ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル₂基を表し；
または代替的にＲ₇およびＲ₈は、それらが結合している炭素原子と一緒に（Ｃ₃〜Ｃ₆）シクロアルキル基もしくは（Ｃ₃〜Ｃ₆）ヘテロシクロアルキル基を形成し；
・Ｒ₉は、互いに独立して、水素原子、−ＯＨ、（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルコキシ基、ハロゲン
原子、−ＮＨ₂、−ＮＨ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル、−Ｎ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル₂、−ＮＨ（Ｃ₁〜Ｃ₆）シクロアルキル基または（Ｃ₃〜Ｃ₆）ヘテロシクロアルキル基から選択される、１つまたはそれ以上の置換基を表し；
・Ｒ₁₀は、水素原子および（Ｃ₁〜Ｃ₄）アルキル基から選択される少なくとも１つの置換基を表し；
・Ｗは、
・−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＮＨ（Ｒ₁₁）、
・−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＯＨ、
・−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＳＨ、
・−ＣＯ₂Ｈ、
・−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ₂；
・−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＣＯ₂Ｈ；
・−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ₂；または
・−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｎ₃を表し；
・Ｒ₁₁およびＲ₁₂は、互いに独立して、水素原子または（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基である）。
次の構造：

を有する、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
Ｒ₁はメチル基を表すことを特徴とする、請求項１または２に記載の式（Ｉ）の化合物。
Ｒ₂およびＲ₃のそれぞれは水素原子を表す；または
Ｒ₂およびＲ₃の一方はメチル基を表し、他方は水素原子を表す；または
Ｒ₂およびＲ₃は、それらが結合している炭素原子と一緒にシクロプロピル基を形成している；
ことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
Ｒ₄およびＲ₅のそれぞれはメチル基を表すことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
Ｒ₆は水素原子を表すことを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の式（Ｉ
）の化合物。
Ｒ₇およびＲ₈は互いに独立して水素原子または（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表すことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
Ｒ₉は、メトキシ基および塩素原子から選択される２つの置換基を表すことを特徴とす
る、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
Ｒ₁₀は水素原子を表すことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
・Ｒ₁は（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表し；
・Ｒ₂およびＲ₃のそれぞれは水素原子を表し；
・Ｒ₆は水素原子を表し；
・Ｒ₉は、メトキシ基および塩素原子から選択される、互いに独立する２つの置換基を
表し；
・Ｒ₁₀は水素原子を表す
ことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
・Ｒ₁は（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表し；
・Ｒ₂およびＲ₃の一方は（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表し、他方は水素原子を表し；
・Ｒ₆は水素原子を表し；
・Ｒ₉は、メトキシ基および塩素原子から選択される、互いに独立する２つの置換基を
表し；
・Ｒ₁₀は水素原子を表す
ことを特徴とする、請求項１〜９のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
Ｗは、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＮＨ（Ｒ₁₁）、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＯＨ、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＳＨおよび−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＣＯ₂Ｈから選択さ
れることを特徴とする、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物。
次のリスト：

から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
式（ＩＩ）：

の化合物。
（式中、
Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉およびＲ₁₀は請求項１〜１１に規定の
とおりであり、
・Ｙは、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｎ（Ｒ₁₁）−基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｏ−基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｓ−基、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−基、または−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｃ（＝
Ｏ）ＮＨ−基から選択され；
・Ｒ₁₁は、水素原子または（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表し；
・Ｌはリンカーを表し；
・ＲＣＧ₁は該リンカーの末端に存在する反応性化学基を表し、
Ｌは式（ＩＶ）：

であって、
式中：
・Ｌ１は、
・Ｙ＝−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｎ（Ｒ₁₁）−である場合、単結合または−ＮＲ₁₆（ヘテロ）アリール−ＣＲ₁₅Ｒ₁₄−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−基；
・Ｙ＝−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｏ−または−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｓ−である場合、−ＮＲ₁₈−（Ｃ₂〜Ｃ₆）アルキレン−ＮＲ₁₇−Ｃ（＝Ｏ）−基またはＮＲ₁₆（ヘテロ）アリール−ＣＲ₁₅Ｒ₁₄−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ₁₈−（Ｃ₂〜Ｃ₆）アルキレン−ＮＲ₁₇−Ｃ（＝Ｏ）−基；
・Ｙ＝−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−または−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−の場合、−ＮＲ₁₆（ヘテロ）アリール−ＣＲ₁₅Ｒ₁₄−基を表し；
Ｌ１は、Ｙに共有結合的に結合し；
・Ｒ₁₁、Ｒ₁₄、Ｒ₁₅、Ｒ₁₆、Ｒ₁₇およびＲ₁₈は、互いに独立して、水素原子または（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表し；
・（ＡＡ）_wは、ペプチド結合を介して互いに連結しているｗ個のアミノ酸ＡＡの配列
を表し；
・ｗは１から１２の範囲の整数を表し；
・Ｌ２は、単結合、（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−（ＯＣＨ₂ＣＨ₂）_i−基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−（ＯＣＨ₂ＣＨ₂）_i−Ｏ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン基、−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_i（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン基、−ＣＨ（ＳＯ₃Ｈ）−（Ｃ₁〜
Ｃ₆）アルキレン基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＣＨ（ＳＯ₃Ｈ）−基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−シクロヘキシル−基、−ＮＲ₁₉−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン基、−ＮＲ₂₀−（ＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）_i（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン基、−ＮＲ₂₁−アリール基、−ＮＲ₂₁−へテロ
アリール基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＮＲ₂₂Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン基または−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−ＮＲ₂₂Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−（ＯＣＨ₂ＣＨ₂）_i−基を表し；
・Ｌ２はＲＣＧ₁に共有結合的に結合し、
・Ｒ₁₉、Ｒ₂₀、Ｒ₂₁およびＲ₂₂は、互いに独立して、水素原子または（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表し；
・ｉは１から５０の間の整数を表し；
ＡＡは、立体配置ＤまたはＬの天然または非天然アミノ酸を示し、アラニン（Ａｌａ）、β−アラニン、γ−アミノ酪酸、２−アミノ−２−シクロヘキシル酢酸、２−アミノ−２−フェニル酢酸、アルギニン（Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、システイン（Ｃｙｓ）、α，α−ジメチル−γ−アミノ酪酸、β，β−ジメチル−γ−アミノ酪酸、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、リジン（Ｌｙｓ）、ε−アセチル−リジン（ＡｃＬｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔ）、オルニチン（Ｏｒｎ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プロリン（Ｐｒｏ）、
セリン（Ｓｅｒ）、スレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）、およびバリン（Ｖａｌ）から選択される）
次の構造：

を有する、請求項１４に記載の式（ＩＩ）の化合物。
Ｙは−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−Ｎ（Ｒ₁₁）−基を表すことを特徴とする、請求項１４または１５に記載の式（ＩＩ）の化合物。
配列（ＡＡ）_Wは式：

（式中、Ｒ₂₃はＡＡの側鎖を表し、ＡＬＫは（Ｃ₁〜Ｃ₁₂）アルキレン基を表す）
を有することを特徴とする、請求項１４に記載の式（ＩＩ）の化合物。
配列ＡＡのアミノ酸は、アラニン（Ａｌａ）、シトルリン（Ｃｉｔ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グリシン（Ｇｌｙ）、ε−アセチル−リジン（ＡｃＬｙｓ）、およびバリン（Ｖａｌ）から選択されることを特徴とする、請求項１４または１７に記載の式（ＩＩ）の化合物。
ＲＣＧ₁は：
− −Ｃ（＝Ｏ）−Ｚ_aＲ_a基
（式中、
・Ｚ_aは、単結合、−Ｏ−または−ＮＨ−を表し、
・Ｒ_aは、水素原子、（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基、（Ｃ₃〜Ｃ₇）シクロアルキル基、（Ｃ₅〜Ｃ₁₀）アリール基、（Ｃ₅〜Ｃ₁₀）ヘテロアリール基、（Ｃ₃〜Ｃ₇）ヘテロシクロアルキル基またはスクシンイミジル基を表す）；または
− Ｒ_aは、次の反応基のうちの１つ：
マレイミド基

ハロアセタミド基

（式中、Ｒ₁₃は水素原子または（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基を表す）；−Ｃｌ；−Ｎ₃；
−ＯＨ；−ＳＨ；−ＮＨ₂；−Ｃ≡ＣＨ、

基、または−Ｏ−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレンヒドロキシルアミン基
から選択されることを特徴とする、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載の式（ＩＩ）の化合物。
Ｌ２は、（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン基、−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン−（ＯＣＨ₂ＣＨ₂）_i
−基または−ＣＨ（ＳＯ₃Ｈ）−（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキレン基を表すことを特徴とする、請
求項１４〜１８のいずれか１項に記載の式（ＩＩ）の化合物。
から選択される、請求項１４に記載の式（ＩＩ）の化合物。
式（ＩＩＩ）：

の化合物
（式中、
・Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆、Ｒ₇、Ｒ₈、Ｒ₉およびＲ₁₀は請求項１〜１１に規定
のとおりであり；
・ＹおよびＬは請求項１４〜２１のいずれか１項に規定のとおりであり；
・Ｇは、リンカーの末端に存在する反応基であるＲＣＧ₁と、Ａｂ上に存在する直交反
応基であるＲＣＧ₂との間の反応生成物を表し；
・Ａｂは抗体を表す）。
次の構造：

を有する、請求項２２に記載の式（ＩＩＩ）の化合物。
ＲＣＧ₂は、
・抗体の表面に存在するリジン残基の側鎖が有する、ε−アミノ基；
・抗体の重鎖および軽鎖のＮ末端アミノ酸のα−アミノ基；
・抗体のヒンジ領域のサッカリド基；
・抗体の鎖内ジスルフィド結合の還元によって生じるシステインのチオール、または抗体の工学的に操作されたシステインのチオール；
・抗体の表面に存在する、一部のグルタミン残基の側鎖が有するアミド基；
・ホルミルグリシン生成酵素を使用して抗体内に導入したアルデヒド基
から選択されることを特徴とする、請求項２２または２３に記載の式（ＩＩＩ）の化合物。
・ＲＣＧ₁はＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルを表す場合、ＲＣＧ₂は−ＮＨ₂基を表し；
・ＲＣＧ₁はマレイミドもしくはハロアセタミド官能基または−Ｃｌ基を表す場合、
ＲＣＧ₂は−ＳＨ基を表し；
・ＲＣＧ₁は−Ｎ₃基を表す場合、ＲＣＧ₂は−Ｃ≡ＣＨ基または活性化Ｃ≡Ｃを表し
；
・ＲＣＧ₁は−ＯＨ基または−ＮＨ₂基を表す場合、ＲＣＧ₂はカルボン酸官能基また
はアミド官能基を表し；
・ＲＣＧ₁は−ＳＨ基を表す場合、ＲＣＧ₂はマレイミド官能基またはハロアセタミド官能基を表し；
・ＲＣＧ₁は−Ｃ≡ＣＨ官能基または活性化Ｃ≡Ｃを表す場合、ＲＣＧ₂は−Ｎ₃基を
表し；
・ＲＣＧ₁は、Ｏ−アルキルヒドロキシルアミン官能基またはＰｉｃｔｅｔ−Ｓｐ
ｅｎｇｌｅｒ反応基質を表す場合、ＲＣＧ₂はアルデヒド官能基またはケトン官能基を表
す、
ことを特徴とする、請求項２２または２３に記載の式（ＩＩＩ）の化合物。
Ｇは：

から選択されることを特徴とする、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の式（ＩＩＩ）の化合物。
工程：

を含む、式（Ｉ）の化合物を製造するための方法であって、
ここで：
− 工程（ｉ）は、カップリング試薬の存在下でのフラグメントＡＤ３と代替のＢＣとの間のペプチドカップリングであり；
− 工程（ｉｉ）は、触媒の存在下での閉環メタセシスによる大環状化であり；
− 工程（ｉｉｉ）は、酸性条件でのｐ−メトキシベンジルエーテルの脱保護であり；
− 工程（ｉｖ）は、酸化剤を使用するアルコールの酸化であり；
− 工程（ｖ）は、塩基の存在下での、適切に置換された、イソチオシネオール由来のキラルスルホニウムを使用する、不斉Ｃｏｒｅｙ−Ｃｈａｙｋｏｖｓｋｙ反応によるエポキシドの導入であり；
− 工程（ｖｉ）はアジド基の還元である、
前記方法。
請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の式（ＩＩＩ）の化合物を製造するための方法であって、
（ｉ）：
− 修飾剤によって場合により修飾されている抗体の、場合により緩衝化された水溶
液と、
− 請求項１４〜２１のいずれか１項に規定の式（ＩＩ）の化合物の水溶液であって、
式（ＩＩ）の該化合物の化学基ＲＣＧ₁は該抗体上に存在する化学基ＲＣＧ₂に向けて、特に抗体上に存在するアミノ基に向けて反応性であり、
前記化学基ＲＣＧ₂は、適切であれば、共有結合の形成によって式（ＩＩ）の該化合物を該抗体に結合するように、該修飾剤によって導入されている、該化合物の水溶液と
を接触させ、反応させる工程と；
（ｉｉ）次いで、工程（ｉ）で形成させた該化合物を、式（ＩＩ）の該化合物からおよび／または未反応抗体からおよび／または形成し得た任意の凝集体から場合により分離する工程と
を含む、前記方法。
医薬であって、該医薬は請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の式（ＩＩＩ）の化合物を含むことを特徴とする、前記医薬。
医薬組成物であって、該医薬組成物は請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の式（ＩＩＩ）の化合物を含み、また、少なくとも１つの医薬的に許容される賦形剤を含むことを特徴とする、前記医薬組成物。
がんの処置に使用するための、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の式（ＩＩＩ）の化合物を含む医薬。