JP6869941B2

JP6869941B2 - ある含有量のマイトマイシンｃを有する凍結乾燥医薬組成物を製造する方法

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Description

本発明は、高い安定性および純度を特徴とし、素早く再構成されて、すぐに使用可能な溶液を形成しうる、マイトマイシンＣを含有する凍結乾燥医薬組成物を調製するための方法に関する。

化学名が（１ａＳ，８Ｓ，８ａＲ，８ｂＳ）−６−アミノ−８−［［（アミノカルボニル）オキシ］メチル］−１，１ａ，２，８，８ａ，８ｂ−ヘキサヒドロ−８ａ−メトキシ−５−メチル−アジリノ［２’，３’：３，４］ピロロ［１，２−ａ］インドール−４，７−ジオンまたは６−アミノ−８ａ−メトキシ−５−メチル−４，７−ジオキソ−１，１ａ，２，４，７，８，８ａ，８ｂ−オクタヒドロアザリノ［２’，３’：３，４］ピロロ［１，２−ａ］インドール−８−イルメチルカルバメートであるマイトマイシンＣは、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｃａｅｓｐｉｔｏｓｕｓから、１９５８年に初めて単離された（Ｗａｋａｋｉら、ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、８巻、２２８頁、１９５８年およびＧＢ８３０８７４を参照されたい）。この物質は、優れた抗腫瘍活性を有し、とりわけ、膀胱腫瘍、胃癌、気管支癌、膵癌、結腸直腸癌、乳癌、肝細胞癌、子宮頚癌、食道癌、頭頸部癌、慢性骨髄性白血病、および骨肉腫の処置に使用することができる。このため、それは、注射もしくは注入用の水溶液または嚢内に使用するための溶液の形態で使用される。

ＵＳ５，２１６，０１１は、たとえば、注射によって投与することのできる、マイトマイシンＣの溶液を記載している。こうした溶液は、凍結乾燥製剤の調製における難しさを回避しようとするものである。溶液は、溶媒として、４０〜１００体積％のプロピレングリコールおよび０〜６０体積％の水を含む。

さらに、ＤＥ１９９５７３７１から、緩衝液を含み、ｐＨが６．０〜９．０の範囲である、マイトマイシンＣの水溶液が公知である。加えて、この溶液は、緩衝液イオン強度に対するマイトマイシンＣ濃度の特定の比率を特徴とする。

しかし、マイトマイシンのすぐに使用可能な溶液の貯蔵寿命は、貯蔵時に活性物質含有量が際立って減少するので、十分でない。この理由のために、マイトマイシンＣは、凍結乾燥物または乾燥粉末の形態で調製されており、こうした医薬形態が投与直前に無菌溶媒で再構成されて、すぐに使用可能な溶液が得られるようになる。凍結乾燥物は、たとえば、「Ｍｉｔｅｍ」のブランド名で市販されている。たとえばＮａＣｌと混合された乾燥粉末は、たとえば、「Ｍｉｔｏ−ｍｅｄａｃ」のブランド名で入手可能である。

しかし、市販品として入手可能な凍結乾燥物は、それについて長くとも２年という比較的短い貯蔵寿命しか述べられていないという短所を有する。これは、凍結乾燥用溶液中で、一連の分解産物の形成を伴いながら容易に分解する、マイトマイシンＣの高度な不安定性のためである。主な分解産物は、アルボミトマイシンＣ、Ｄ１、およびＤ２であり、その構造式を、マイトマイシンＣの構造式と共に以下に再現する。

マイトマイシンＣの乾燥粉末は、約４年というより長い貯蔵寿命を有するものの、その調製の際に粉じんが形成される結果、作業員に対する健康を脅かす汚染および製造工場の汚染につながるという短所を有する。こうした乾燥粉末を完全に溶解させるのに必要な時間が長いことも、満足度を不十分にしている。

公知の凍結乾燥物および乾燥粉末では、溶液への再構成は、通常、１ｍｇ／ｍｌのマイトマイシンＣ、たとえば、２０ｍｌの水または等張性食塩水溶液に対して２０ｍｇのマイトマイシンＣ（０．９重量％）の最終濃度が得られるように実施する。眼科用途では、０．２および０．１５ｍｇ／ｍｌに希釈した後の、より低い濃度も公知である。しかし、公知製品の溶解性は不十分であるため、水中での最終濃度をより高くすることは、不可能である。文献では、公知製品の飽和濃度は、０．５〜１．０ｍｇ／ｍｌと述べられている。

したがって、本発明の目的は、公知の凍結乾燥物および乾燥粉末の短所を回避すること、特に、活性物質含有量の有意な減少をもたらさず、また、高い安定性および純度を有し、それゆえに長期間貯蔵されても活性物質の分解をわずかしか示さない組成物をもたらす、マイトマイシンＣの凍結乾燥医薬組成物を調製するための方法を提供することである。加えて、製造された医薬組成物は、高濃度の活性物質を含みうる、すぐに使用可能な溶液を形成するように、素早くかつ完全に再構成可能なものにすべきである。

英国特許出願公開第８３０８７４号明細書米国特許第５２１６０１１号明細書独国特許出願公開第１９９５７３７１号明細書

Ｗａｋａｋｉら、ＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓａｎｄＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、８巻、２２８頁、１９５８年

この目的は、請求項１から１４に記載の方法によって実現される。また、請求項１５から１９に記載の凍結乾燥医薬組成物ならびに請求項２０および２１に記載のマイトマイシンＣ含有溶液も、本発明の対象である。

マイトマイシンＣを含む凍結乾燥医薬組成物を調製するための本発明による方法は、マイトマイシンＣの溶液が凍結乾燥されており、上記溶液が少なくとも１種の有機溶媒を含むことを特徴とする。

本方法において凍結乾燥に供される溶液を、以下では、「凍結乾燥用溶液」とも呼ぶ。

本発明による方法で使用する有機溶媒は、特に、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、エタノール、メタノール、１−ペンタノール、クロロブタノール、酢酸、アセトン、炭酸ジメチル、アセトニトリル、ジクロロメタン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、酢酸メチル、四塩化炭素、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ヘキサフルオロアセトン、ジメチルスルホン、およびシクロヘキサンを含む群から選択される。有機溶媒は、ｔｅｒｔ−ブタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドの群から選択されることが好ましい。有機溶媒は、ｔｅｒｔ−ブタノールであることが特に好ましい。

一実施形態では、有機溶媒は、溶液中の唯一の溶媒である。室温で固体である有機溶媒を使用するとき、マイトマイシンＣは、通常、予め融解させた有機溶媒に溶解させる。

さらなる好ましい実施形態では、本発明による方法で使用する溶液は、水も含む。

マイトマイシンＣを、少なくとも１種の有機溶媒、好ましくは、水との混合物に溶解させると、意外にも、室温では４８時間まで、５℃では実に９日まで物理的および化学的に安定である凍結乾燥用溶液が得られる。同時に、この溶液中の不純物の含有量も意外にも少ないままであり、したがって、溶液の純度は非常に高いままである。溶液の安定性が高くかつ純度も高いので、本発明による方法で、マイトマイシンＣの非常に純粋な凍結乾燥組成物を調製することができる。

この溶液を凍結乾燥すると、意外にも、不純物の有意な増加が起こらず、その結果、得られる凍結乾燥組成物も、高い純度を示す。組成物は、意外にも、非常に高い安定性も示し、数カ月間の貯蔵の後でさえ、それは高い活性物質含有量およびほんの少量の望ましくない分解産物を呈す。

さらに、以下では「凍結乾燥物」とも呼ぶ、本発明による方法で製造された組成物は、再構成に通常使用される溶媒への驚くほど高い溶解性を示し、１ｍｇ／ｍｌを超える濃度でマイトマイシンＣを含むすぐに使用可能な溶液の調製を可能にする。したがって、上記
組成物を使用することにより、活性物質濃度が特に高いすぐに使用可能な溶液を製造することができる。

本発明による方法で使用する溶液は、エタノールと水との混合物、イソプロパノールと水との混合物、アセトンと水との混合物、ジメチルスルホキシドと水との混合物、またはジメチルスルホキシドとジメチルアセトアミドとの混合物を含むことが好ましい。上記溶液は、ｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物を含むことが特に好ましい。

使用するエタノールと水との混合物は、特に少なくとも１重量％、好ましくは少なくとも５重量％、特に好ましくは少なくとも１０重量％、格別に好ましくは少なくとも１５重量％のエタノールを含む。

使用するイソプロパノールと水との混合物は、特に少なくとも１重量％、好ましくは少なくとも５重量％、特に好ましくは少なくとも１０重量％、格別に好ましくは少なくとも１５重量％のイソプロパノールを含む。

使用するアセトンと水との混合物は、特に少なくとも１重量％、好ましくは少なくとも５重量％、特に好ましくは少なくとも１０重量％、格別に好ましくは少なくとも１５重量％のアセトンを含む。

使用するジメチルスルホキシドと水との混合物は、特に少なくとも１重量％、好ましくは少なくとも３０重量％、特に好ましくは少なくとも５０重量％、格別に好ましくは少なくとも８０重量％のジメチルスルホキシドを含む。

使用するジメチルスルホキシドとジメチルアセトアミドとの混合物は、特に少なくとも５重量％、好ましくは少なくとも５０重量％のジメチルスルホキシドを含む。

本発明による方法では、ｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物を含む溶液を使用することが特に好ましい。このｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物は、特に少なくとも１重量％、好ましくは少なくとも５重量％、特に好ましくは少なくとも１０重量％、より好ましくは少なくとも１５重量％のｔｅｒｔ−ブタノールを含む。

格別に好ましい実施形態では、使用するｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物は、８０〜９９重量％、特に８４〜９５重量％、好ましくは８８〜９２重量％、格別に好ましくは約８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールを含む。格別に好ましい代替実施形態では、使用するｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物は、１０〜３０重量％、特に１５〜２５重量％、好ましくは１８〜２２重量％、格別に好ましくは約２０重量％のｔｅｒｔ−ブタノールを含む。

本発明による方法で使用する凍結乾燥用溶液は、通常、０．１〜５００ｍｇ／ｇ、特に０．５〜１０．０ｍｇ／ｇ、好ましくは０．８〜６．０ｍｇ／ｇ、特に好ましくは１．０〜４．０ｍｇ／ｇの濃度でマイトマイシンＣを含む。

溶液が、尿素、ポリエチレングリコール、およびマンニトールの群から選択される少なくとも１種の添加剤もまた含むことが好ましい。これらの添加剤によって、再構成に使用する溶媒への溶解性が特に高い凍結乾燥物を調製することができる。活性物質に対して不活性なこれらの添加剤を使用すると、その特別な性質に起因して、不安定化の影響から活性物質を保護し、したがって活性物質をその純粋な形で保持する凍結乾燥物がもたらされる。

本発明による方法の好ましい実施形態では、溶液は、１〜２００ｍｇ／ｇ、特に５〜１００ｍｇ／ｇ、好ましくは１０〜６０ｍｇ／ｇの濃度で尿素を含む。

ポリエチレングリコールは、特に１０００〜８０００、好ましくは２０００〜８０００の平均分子量（数平均）を有する。平均分子量（数平均）が約４０００である、ＰＥＧ４０００をポリエチレングリコールとして使用することが特に好ましい。

本発明による方法の好ましい実施形態では、溶液は、１〜２００ｍｇ／ｇ、特に５〜１００ｍｇ／ｇ、好ましくは１０〜６０ｍｇ／ｇの濃度でポリエチレングリコールを含む。

本発明による方法の好ましい実施形態では、溶液は、１〜２００ｍｇ／ｇ、特に５〜１００ｍｇ／ｇ、好ましくは１０〜６０ｍｇ／ｇの濃度でマンニトールを含む。

加えて、溶液は、他の通常の添加剤、たとえば、さらなる糖アルコール、たとえば、イソマルトール（ｉｓｏｍａｌｔ）、ラクチトール、ソルビトール、ラクチトール、ソルビトール、キシリトール、トレイトール、エリスリトール、もしくはアラビトール、糖、たとえば、スクロース、グルコース、フルクトース、マルトース、ラムノース、ラクトース、もしくはトレハロース、アミノ酸、たとえば、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−プロリン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−グリシン、もしくはＬ−アルギニン、ポリマー、たとえば、ポリビニルピロリドン、ポリ酢酸ビニル、デンプン誘導体、たとえば、シクロデキストリン、デキストロース、アミロペクチン、アミロース、多糖、たとえば、アルギネート、ペクチン、セルロース、等張性調整剤、たとえば、塩化ナトリウム、塩化カルシウム二水和物、酢酸ナトリウム三水和物、リン酸水素二ナトリウム二水和物、および／またはｐＨ調整剤、たとえば、トロメタモールを、通常、各場合において、１〜２００、特に５〜１００、好ましくは１０〜６０ｍｇ／ｇの濃度で含んでもよい。

凍結乾燥用溶液の凍結乾燥は、一般に、医薬の目的で通常使用される凍結乾燥方法および機械を使用して実施される。一般には、適切な容器を溶液で満たし、その容器を、冷却可能かつ加熱可能な表面を有する従来の凍結乾燥機の中に置き、上記表面上で溶液を凍結乾燥方法の種々の温度に曝すことができる。乾燥を実現するには、溶液を凍結させ、低下させた大気圧に曝すのが通常である。結果として、凍結した溶液からの溶媒の昇華が大きく起こり、溶媒は、たとえば、このために設けられた、凍結乾燥機の冷却器領域に沈着する。次いで、一般にはこれに続いて、より高温度での二次的な乾燥を行う。凍結乾燥が完了した後、得られた凍結乾燥物は、一般に、室温に到達させ、使用した容器を無菌条件下で密閉する。凍結乾燥に適するプログラムは、室温で容器に装入すること、常圧において−５０℃〜−３５℃で凍結させること、続いて大気圧を低下させること、次いで、乾燥を実施する目的で温度を２５〜９５℃上昇させて乾燥を実施することを含むことができる。

本発明による方法で得られた凍結乾燥組成物はまた、すぐに使用可能な溶液を形成するための完全な再構成に、６０秒未満、特に３０秒未満、好ましくは４〜２０秒という非常に短い時間だけで十分であることから、明らかに特別で有利な構造を有する。これは、結果として、診療所スタッフが完全に溶解させるための長い待ち時間を許容する必要なく患者への目的の投与直前に、すぐに使用可能な溶液を新たに調製することが可能になるので、重要な利点である。同様に、このような短い再構成時間により、活性物質の望ましくない分解反応のリスクも低減する。

組成物の再構成には、通常、注射用の等張性食塩水溶液または水が用いられる。再構成には、たとえば、リンゲル乳酸溶液またはリン酸緩衝液などの、薬学的に許容される他の溶液も可能である。

記載した有利な性質により、本発明はまた、本発明による方法によって取得可能である、マイトマイシンＣを含む凍結乾燥医薬組成物に関する。

本発明による組成物は、尿素、ポリエチレングリコール、およびマンニトールの群から選択される少なくとも１種の添加剤を含むことが好ましい。そのような組成物は、より少量の再構成剤を再構成に必要とし、したがって、特に高い濃度のマイトマイシンＣを含むすぐに使用可能な溶液が、それによって調製され得る。

組成物は、通常、尿素を、組成物１グラムあたり０．２〜１、特に０．５〜０．９９、好ましくは０．８〜０．９５、特に好ましくは０．９３〜０．９４ｇの濃度で含む。

組成物は、通常、ポリエチレングリコールを、組成物１グラムあたり０．２〜１、特に０．５〜０．９９、好ましくは０．８〜０．９５、特に好ましくは０．９３〜０．９４ｇの濃度で含む。

組成物は、通常、マンニトールを、組成物１グラムあたり０．２〜１、特に０．５〜０．９９、好ましくは０．８〜０．９５、特に好ましくは０．９３〜０．９４ｇの濃度で含む。

本発明による組成物は、総量で特に２．０％未満、好ましくは１．５％未満、特に好ましくは１．０％未満、より好ましくは０．８％未満、格別に好ましくは０．６％未満の不純物Ｄ１、Ｄ２、およびアルボミトマイシンＣを含み、ここで、これらの不純物の量は、ＰｈＥｕｒ８．０ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＭｏｎｏｇｒａｐｈ０１／２００８：１６５５による不純物法に従って決定される。実施例では、この決定法を方法４とも呼ぶ。

前述の有利な性質により、本発明はまた、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、エタノール、メタノール、１−ペンタノール、クロロブタノール、酢酸、アセトン、炭酸ジメチル、アセトニトリル、ジクロロメタン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、酢酸メチル、四塩化炭素、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミド、ヘキサフルオロアセトン、ジメチルスルホン、およびシクロヘキサンの群から選択される少なくとも１種の有機溶媒を含む、凍結乾燥用のマイトマイシンＣ含有溶液に関する。

有機溶媒は、ｔｅｒｔ−ブタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドの群から選択されることが好ましく、有機溶媒は、ｔｅｒｔ−ブタノールであることが特に好ましい。

本発明による方法の説明の中で上述した、使用する溶液の好ましい実施形態は、本発明による溶液についても好ましい。

既に上述したとおり、本発明による溶液は、特に、それの中の活性物質が非常に安定しており、不純物の形成がほとんど起こらないことを特徴とする。

本発明について、以下で、例を挙げてより詳細に説明する。

（実施例１）
種々の溶媒におけるマイトマイシンＣの溶解性および安定性
表１に述べた種々の溶媒および溶媒混合物におけるマイトマイシンＣの溶解性および安定性を調査した。

この目的で、これら混合物のそれぞれを使用して、２．０〜２．２ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび４．０〜４．４ｍｇ／ｇのマンニトールを含有する溶液を調製した。

室温にて遮光下で１．５時間の撹拌時間経過後、得られた混合物について、直線偏光を照射して粒子を調べた。目視試験の結果を表２に示す。

さらに、室温で２４時間貯蔵した後、得られた混合物中のマイトマイシンＣおよび不純物の含有量を決定した。対応する結果を表３に示す。

＊方法１による決定（表５を参照のこと）
＊＊方法２による決定（表５を参照のこと）

表３に示した結果は、本発明に従って使用した、ｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物での凍結乾燥用溶液中のマイトマイシンＣが、特に高い安定性を有することを示している。

さらに、遮光下、（ａ）室温および（ｂ）２〜８℃で２４時間貯蔵した後、得られた混合物について、直線偏光を照射して、目に見える粒子を再び調べた。そうして得られた結果を表４に示す。

本発明に従って使用可能な溶媒混合物を用いると、水を用いるより際立って安定した溶液が得られた。３２．６重量％のｔｅｒｔ−ブタノールと６７．４重量％の水との混合物を用いて得られた溶液は、室温および２〜８℃の両方で、２４時間後でさえ溶液中に目に見える粒子がなかったことから、最も安定していることがわかった。さらに、室温で２４時間貯蔵後のｔｅｒｔ−ブタノール−水混合物において、マイトマイシンＣの含有量が最も高く、不純物の含有量が最も低かった。

高圧液体クロマトグラフィーによるマイトマイシンＣおよび不純物の含有量の決定
試料をそれぞれＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドで希釈して０．５ｍｇ／ｍｌのマイトマイシンＣとする。基準溶液は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド中に０．５ｍｇ／ｍｌのマイトマイシンＣを含有する。

カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＰｈｅｎｙｌ４．６ｍｍ×３００ｍｍ、１０μｍ
温度：２５°Ｃ
注入体積：１０μｌ

（実施例２）
ジメチルスルホキシド、およびジメチルスルホキシドとＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドとの混合物における、マイトマイシンＣの溶解性および安定性
表６に述べた溶媒、すなわち、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、およびジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）とＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（ＤＭＡＡ）との混合物における、マイトマイシンＣの溶解性および安定性を調査した。

この目的で、これら溶媒のそれぞれを使用する溶液を調製し、溶液は、６番（ＤＭＳＯ／ＤＭＡＡ）については０．５３ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび８．０ｍｇ／ｇの尿素、７番（ＤＭＳＯ）については１．８２ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび２７．３ｍｇ／ｇの尿素を含有した。溶液を、室温にて遮光下で、７１．５時間までの期間にわたり貯蔵した。

^１方法３によって決定された含有量。

^２方法４によって決定された純度。純度は、ＨＰＬＣクロマトグラムにおけるすべてのピークの総面積に対するマイトマイシンのピークの面積と定義される。

両方の溶媒において、マイトマイシンＣは、非常に安定していることがわかった。ＤＭＳＯだけを使用すると、２６．５時間の期間内で、マイトマイシンＣの当初の含有量は、１００％から９９．３２％へとごくわずかに低下した。

マイトマイシンＣの含有量、したがって、得られた溶液の安定性は、方法３および４によって検査した。方法３は、ＰｈＥｕｒ８．０ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＭｏｎｏｇｒａｐｈ０１／２００８：１６５５による含有量法に相当する。方法４は、ＰｈＥｕｒ
８．０ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＭｏｎｏｇｒａｐｈ０１／２００８：１６５５による不純物法に相当する。

（実施例３）
種々のｔｅｒｔ−ブタノール／水混合物におけるマイトマイシンＣの溶解性および安定性
表８に述べたｔｅｒｔ−ブタノールと水との種々の混合物におけるマイトマイシンＣの溶解性および安定性を調査した。

この目的で、これら混合物のそれぞれを使用する溶液を調製し、マイトマイシンＣの濃度は、８番の混合物については２．１ｍｇ／ｇ、９番の混合物については２．２ｍｇ／ｇ
、１０番の混合物については２．４ｍｇ／ｇとした。

これらの溶液を、遮光下、（ａ）室温および（ｂ）２〜８℃で１６時間貯蔵し、次いで、直線偏光を照射して、目に見える粒子を再び調べた。こうして得られた結果を表８にも示す。

ｔｅｒｔ−ブタノールと水とのすべての混合物が、述べた量のマイトマイシンＣを溶解可能であり、得られた溶液中には、１６時間の貯蔵後でさえ、目に見える粒子はなかった。

ｔｅｒｔ−ブタノール／水混合物中でのマイトマイシンＣの安定性をＨＰＬＣで決定するために、１０ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣ濃度の溶液が得られるような量で、２０重量％のｔｅｒｔ−ブタノールと８０重量％の水との混合物（１１番）に、マイトマイシンＣを加えた。さらに、２．１ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣ濃度の溶液が得られるような量で、３２．６重量％のｔｅｒｔ−ブタノールと６７．４重量％の水との混合物（１２番）に、マイトマイシンＣを加えた。さらに、５ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣ濃度の溶液が得られるような量で、８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールと１１重量％の水との混合物（１３番）に、マイトマイシンＣを加えた。さらに、純粋なｔｅｒｔ−ブタノール（１００重量％）のマイトマイシン含有溶液（１４番）および比較のための水溶液（１５番）を調製した。純粋なｔｅｒｔ−ブタノールを用いた実験では、ｔｅｒｔ−ブタノールを約３０℃に温めることにより最初に融解させ、次いで、マイトマイシンＣを融解物に溶解させた。

次いで、溶液を褐色ガラス容器において室温で２４時間貯蔵した。それぞれの結果を表９に示す。

＊方法２によるＨＰＬＣでの決定。純度は、ＨＰＬＣクロマトグラムにおけるすべてのピークの総面積に対するマイトマイシンのピークの面積と定義される。

ｔｅｒｔ−ブタノール含有溶液において、マイトマイシンＣは、高い安定性を有し、混
合物１２番および１３番を使用すると、マイトマイシンＣのｔ＝０時点での当初の純度は、１００．０％から９８．７％へ、また９９．５６％から９８．４７％へとごくわずかに低下した。２４時間後に１００．０重量％という特に高い純度を１００重量％のｔｅｒｔ−ブタノールで実現することができたが、純粋なｔｅｒｔ−ブタノールへのマイトマイシンＣの溶解性は低い。

これとは対照的に、２４時間後の水中でのマイトマイシンＣの純度は、著しく不良である（ｔ＝０時点での９６．８％から８９．９％）。

（実施例４）
さらなる添加剤のｔｅｒｔ−ブタノール／水混合物との適合性
それぞれ、２０ｍｇのマイトマイシンＣを８９重量％のｔｅｒｔブタノールと１１重量％の水との混合物６ｇに溶解させることにより、いくつかの溶液を調製した。各場合において濃度を５０ｍｇ／ｇとするために、これらの溶液に添加剤の尿素、ＰＥＧ４０００またはトロメタモールを加えた。加えて、トロメタモールを含む溶液は、酢酸でｐＨ７．４に調整した。

室温でｔ＝０時点、６時間後、および２４時間後に、溶液について、そのマイトマイシンＣ含有量を調べ、さらなる添加剤を含有しない溶液と比較した。含有量の決定は、方法２に従って実施しており、結果を表１０に示す。

（実施例５）
尿素含有ｔｅｒｔブタノール／水混合物中でのマイトマイシンＣの安定性
５重量％の濃度を実現するような量で、尿素を８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールと１１重量％の水との混合物に溶解させた。次に、３．３３ｍｇ／ｇの濃度を得るような量でマイトマイシンＣを加え、溶液を１時間撹拌した。褐色ガラス容器を溶液で満たし、光から保護せず室温（ＲＴ）で、遮光下室温（ＲＴ）で、また遮光下５℃で９日間貯蔵した。

方法２による純度決定を、異なる時点で実施した。結果を表１１に示す。

９日間の貯蔵後でさえ、すべての条件下で、溶液は依然として意外にも安定しており、溶液の純度は意外にも高かった。

（実施例６）
種々のｔｅｒｔ−ブタノール／水混合物中のマイトマイシンＣの溶液の凍結乾燥
最初に、１６．１重量％、３２．６重量％、および７２．９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールを用いたｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物中のマイトマイシンＣの溶液を調製した。これらの溶液は、１６．１重量％のｔｅｒｔ−ブタノールとの混合物を用いた溶液については、２．１ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび４．１ｍｇ／ｇのマンニトール、３２．６重量％のｔｅｒｔ−ブタノールとの混合物を用いた溶液については、２．２ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび４．３ｍｇ／ｇのマンニトール、７２．９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールとの混合物を用いた溶液については、２．４ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび４．８ｍｇ／ｇのマンニトールを含有した。

すべての溶液が、透明であり、十分に安定していた。

比較のために、７ｍｇ／ｇのマンニトール、および水への溶解性に乏しいために０．７ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣを含有した、マイトマイシンＣの水溶液も調製した。

（ｉ）溶液の凍結、（ｉｉ）真空の適用、（ｉｉｉ）一次、および（ｉｖ）二次乾燥を伴う従来の凍結乾燥により、凍結乾燥物を得た。これらを水で再構成し、得られた再構成された溶液について、実施例１に従い、そのマイトマイシンＣおよび不純物含有量を分析した。結果を表１２に示す。

＊ＮＤ＝検出不能、すなわち、検出限界未満
＊＊方法１によるＨＰＬＣでの決定
＊＊＊方法２によるＨＰＬＣでの決定

凍結乾燥および再構成後、本発明に従って使用したｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物すべてが、マイトマイシンＣ含有量が非常に高くかつ非常に低い含有量の不純物（Ｄ１、Ｄ２、およびアルボミトマイシンＣ）しか含まない溶液をもたらした。

これとは対照的に、水を使用する凍結乾燥では、マイトマイシンＣの含有量が際立って低く、極めて著しい量の不純物を含む再構成溶液が得られた。

（実施例７）
２０ｍｇ／ｇの尿素を含むｔｅｒｔ−ブタノール−水混合物（８９／１１）中でのマイトマイシンＣの安定性
８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールと１１重量％の水との混合物中のマイトマイシンＣ
の溶液を調製した。溶液は、１．３３ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび、それぞれ２０ｍｇ／ｇの尿素も含有した。室温（ＲＴ）にて遮光下、冷蔵庫内でｔ＝０時点、５、２２、および２７時間後に、方法２に従って溶液の純度を調査した。結果を表１３に示す。

室温で１日より長く貯蔵した後でさえ、溶液の純度は意外にも高く、溶媒中での活性物質の安定性が意外にも高いことを反映している。

（実施例８）
２５ｍｇ／ｇの尿素を含むｔｅｒｔ−ブタノール−水混合物（８９／１１）中でのマイトマイシンＣの安定性
８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールと１１重量％の水との混合物中のマイトマイシンＣの溶液を調製した。溶液は、１．６７ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび、それぞれ２５ｍｇ／ｇの尿素も含有した。室温（ＲＴ）にて遮光下、冷蔵庫内でｔ＝０時点、５、２２、および２７時間後に、方法２に従って溶液の純度を調査した。

（実施例９）
尿素またはポリエチレングリコール（５０ｍｇ／ｇ）を含有するマイトマイシンＣの溶液の凍結乾燥
８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールと１１重量％の水との混合物中のマイトマイシンＣの溶液を調製した。溶液は、３．３３ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび、それぞれ５０ｍｇ／ｇの尿素またはＰＥＧ４０００も含有した。各場合において、小さいバイアルをこれらの溶液６ｇで満たし、従来の手法で凍結乾燥した。尿素およびＰＥＧ４０００を含有する凍結乾燥物ケークは、堅く、欠陥がなかった。

凍結乾燥物について、その調製直後（ｔ＝０）および４０℃で１カ月間貯蔵した後（ｔ＝１カ月）のマイトマイシンＣの純度を分析した。結果を表１５に示す。

４０℃という高温で貯蔵した後でさえ、生成した凍結乾燥物は、マイトマイシンＣの純度が高く、その非常に良好な安定性を反映している。

その上、凍結乾燥物は、等張性食塩水溶液を用い、３０秒よりはるかに短時間で完全に再構成することができた。

（実施例１０）
尿素（２０ｍｇ／ｇ）を含有するマイトマイシンＣの溶液の凍結乾燥
８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノール（ＴＢＡ）と１１重量％の水との混合物中のマイトマイシンＣの溶液を調製した。溶液は、１．３３ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび、それぞれ２０ｍｇ／ｇの尿素も含有した。各場合において、小さいバイアルをこの溶液１．５ｇで満たし、従来の手法で凍結乾燥した。凍結乾燥物ケークは、堅く、欠陥がなかった。

凍結乾燥物について、その調製直後（ｔ＝０）のマイトマイシンＣの純度を分析した。加えて、再構成時間も決定した。再構成は、等張性食塩水溶液で実施して、マイトマイシンＣの最終濃度を１ｍｇ／ｇとした。結果を表１６に示す。

生成した凍結乾燥物は、マイトマイシンＣの純度が高く、このことは、上記過程中の活性物質の非常に良好な安定性を反映している。

（実施例１１）
尿素（２５ｍｇ／ｇ）を含有するマイトマイシンＣの溶液の凍結乾燥
８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノール（ＴＢＡ）と１１重量％の水との混合物中のマイトマイシンＣの溶液を調製した。溶液は、１．６７ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび、それぞれ２５ｍｇ／ｇの尿素も含有した。各場合において、小さいバイアルをこの溶液１．２ｇで満たし、従来の手法で凍結乾燥した。尿素を含む凍結乾燥物ケークは、堅く、欠陥がなかった。

生成した凍結乾燥物は、マイトマイシンＣの純度が高く、このことは、上記過程中の活性物質の非常に良好な安定性を反映している。その上、凍結乾燥物は、等張性食塩水溶液を用い、３０秒よりはるかに短時間で完全に再構成することができた。

（実施例１２）
マンニトール（４５ｍｇ／ｇ）を含むｔｅｒｔ−ブタノール／水混合物（９５／５）中のマイトマイシンＣ
９５重量％のｔｅｒｔ−ブタノール（ＴＢＡ）と５重量％の水との混合物中のマイトマイシンＣの溶液を調製した。溶液は、５ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび、それぞれ４５ｍｇ／ｇのマンニトールも含有した。各場合において、小さいバイアルをこの溶液４．０ｇで満たし、従来の手法で凍結乾燥した。凍結乾燥物ケークは、堅く、欠陥がなかった。

（実施例１３）
マイトマイシン凍結乾燥物の安定性
８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノール（ＴＢＡ）と１１重量％の水との混合物中のマイトマイシンＣの溶液を調製した。溶液は、３．３３ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび、それぞれ５０ｍｇ／ｇの尿素も含有した。各場合において、小さいバイアルを、これらの溶液６ｇ［２０ｍｇのマイトマイシンＣに対応する］または１２ｇ［４０ｍｇのマイトマイシンＣに対応する］で満たし、従来の手法で凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物を、４０℃、相対湿度（ｒ．ｈ．）７５％において、ｔ＝０、ｔ＝３カ月、およびｔ＝６カ月の異なる時点で調べた。

マイトマイシンＣの含有量の決定は方法３によって、不純物含有量の決定は方法４によって実施した。再構成は、それぞれ２０ｍｌおよび４０ｍｌの等張性食塩水溶液で実施して、最終濃度を１ｍｇ／ｍｌとした。

＊方法３による決定
＊＊方法４による決定

＊方法３による決定
＊＊方法４による決定

４０℃という高温およびｒ．ｈ．７５％という高い大気湿度で６カ月間貯蔵した後でさえ、生成した凍結乾燥物は、ごく少量の不純物しか含有しなかった。その上、凍結乾燥物は、等張性食塩水溶液を用い、３０秒よりはるかに短時間で完全に再構成することができた。

（実施例１４）
再構成後の高い最終濃度
８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールと１１重量％の水との混合物中のマイトマイシンＣの溶液を調製した。溶液は、３．３３ｍｇ／ｇのマイトマイシンＣおよび、それぞれ５０ｍｇ／ｇの尿素も含有した。各場合において、小さいバイアルをこれらの溶液６ｇ［２０ｍｇのマイトマイシンＣに対応する］で満たし、従来の手法で凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物を、２０ｍｌまたは１０ｍｌの注射用水で再構成した。

＊方法３による決定

再構成された注射用水溶液は、マイトマイシンＣの含有量が高かった。溶液は、透明で、目に見える粒子を含まなかった。
本発明の実施形態は、例えば、以下を提供する。
（項目１）
マイトマイシンＣを含む凍結乾燥医薬組成物を調製するための方法であって、マイトマイシンＣの溶液は、凍結乾燥されており、前記溶液は、少なくとも１種の有機溶媒を含む、方法。
（項目２）
前記溶液が水をさらに含む、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記有機溶媒が、ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、エタノール、メタノール、１−ペンタノール、クロロブタノール、酢酸、アセトン、炭酸ジメチル、アセトニトリル、ジクロロメタン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、酢酸メチル、四塩化炭素、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ヘキサフルオロアセトン、ジメチルスルホン、およびシクロヘキサンの群から選択される、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記有機溶媒が、ｔｅｒｔ−ブタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドの群から選択される、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記有機溶媒がｔｅｒｔ−ブタノールである、項目４に記載の方法。
（項目６）
前記溶液が、ｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物を含む、項目１から５のいずれか一項に記載の方法。
（項目７）
前記ｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物が、少なくとも１重量％、好ましくは少なくとも５重量％、特に好ましくは少なくとも１０重量％、より好ましくは少なくとも１５重量％のｔｅｒｔ−ブタノールを含む、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記ｔｅｒｔ−ブタノールと水との混合物が、８０〜９９重量％、特に８４〜９５重量％、好ましくは８８〜９２重量％、格別に好ましくは約８９重量％のｔｅｒｔ−ブタノールを含むか、または１０〜３０重量％、特に１５〜２５重量％、好ましくは１８〜２２％、格別に好ましくは約２０重量％のｔｅｒｔ−ブタノールを含む、項目６に記載の方法。（項目９）
前記溶液が、０．１〜５００ｍｇ／ｇ、特に０．５〜１０．０ｍｇ／ｇ、好ましくは０．８〜６．０ｍｇ／ｇ、特に好ましくは１．０〜４．０ｍｇ／ｇの濃度でマイトマイシンＣを含む、項目１から８のいずれか一項に記載の方法。
（項目１０）
前記溶液が、尿素、ポリエチレングリコール、およびマンニトールの群から選択される少なくとも１種の添加剤をさらに含む、項目１から９のいずれか一項に記載の方法。
（項目１１）
前記溶液が、１〜２００ｍｇ／ｇ、特に５〜１００ｍｇ／ｇ、好ましくは１０〜６０ｍｇ／ｇの濃度で尿素を含む、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
前記ポリエチレングリコールが、１０００〜８０００、好ましくは２０００〜８０００の平均分子量（数平均）を有する、項目１０または１１に記載の方法。
（項目１３）
前記溶液が、１〜２００ｍｇ／ｇ、特に５〜１００ｍｇ／ｇ、好ましくは１０〜６０ｍｇ／ｇの濃度でポリエチレングリコールを含む、項目１０から１２のいずれか一項に記載の方法。
（項目１４）
前記溶液が、１〜２００ｍｇ／ｇ、特に５〜１００ｍｇ／ｇ、好ましくは１０〜６０ｍｇ／ｇの濃度でマンニトールを含む、項目１０から１３のいずれか一項に記載の方法。
（項目１５）
マイトマイシンＣを含む凍結乾燥医薬組成物であって、項目１から１４のいずれか一項に記載の方法によって取得可能である、凍結乾燥医薬組成物。
（項目１６）
尿素、ポリエチレングリコール、およびマンニトールの群から選択される少なくとも１種の添加剤を含む、項目１５に記載の組成物。
（項目１７）
組成物１グラムあたり０．２〜１ｇ、特に０．５〜０．９９ｇ、好ましくは０．８〜０．９５ｇ、特に好ましくは０．９３〜０．９４ｇの濃度で尿素を含む、項目１６に記載の組成物。
（項目１８）
組成物１グラムあたり０．２〜１ｇ、特に０．５〜０．９９ｇ、好ましくは０．８〜０．９５ｇ、特に好ましくは０．９３〜０．９４ｇの濃度でポリエチレングリコールを含む、項目１６または１７に記載の組成物。
（項目１９）
組成物１グラムあたり０．２〜１ｇ、特に０．５〜０．９９ｇ、好ましくは０．８〜０．９５ｇ、特に好ましくは０．９３〜０．９４ｇの濃度でマンニトールを含む、項目１６
から１８のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２０）
ｔｅｒｔ−ブタノール、ｎ−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、エタノール、メタノール、１−ペンタノール、クロロブタノール、酢酸、アセトン、炭酸ジメチル、アセトニトリル、ジクロロメタン、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、酢酸メチル、四塩化炭素、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、ヘキサフルオロアセトン、ジメチルスルホン、およびシクロヘキサンの群から選択される少なくとも１種の有機溶媒を含む、凍結乾燥用のマイトマイシンＣ含有溶液。
（項目２１）
前記有機溶媒が、ｔｅｒｔ−ブタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、ジメチルスルホキシド、およびＮ，Ｎ−ジメチルアセトアミドの群から選択され、特に好ましくはｔｅｒｔ−ブタノールである、項目２０に記載のマイトマイシンＣ含有溶液。

Claims

マイトマイシンＣを含む凍結乾燥医薬組成物であって、前記組成物は、尿素を含み、マイトマイシンＣの溶液を凍結乾燥する方法によって得られ、前記溶液は、ｔｅｒｔ−ブタノールを含む、組成物。
組成物１グラムあたり０．２〜１ｇの濃度で尿素を含む、請求項１に記載の組成物。
組成物１グラムあたり０．５〜０．９９ｇの濃度で尿素を含む、請求項２に記載の組成物。
組成物１グラムあたり０．８〜０．９５ｇの濃度で尿素を含む、請求項３に記載の組成物。
組成物１グラムあたり０．９３〜０．９４ｇの濃度で尿素を含む、請求項４に記載の組成物。
総量で２．０％未満の不純物Ｄ１、Ｄ２、およびアルボミトマイシンＣを含み、ここで、これらの不純物の量は、ＰｈＥｕｒ８．０ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＭｏｎｏｇｒａｐｈ０１／２００８：１６５５による不純物法に従って決定され、ここで、Ｄ１が、

であり、Ｄ２が、

である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
総量で１．０％未満の不純物Ｄ１、Ｄ２、およびアルボミトマイシンＣを含み、ここで、これらの不純物の量は、ＰｈＥｕｒ８．０ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＭｏｎｏｇｒａｐｈ０１／２００８：１６５５による不純物法に従って決定される、請求項６に記載の組成物。
総量で０．６％未満の不純物Ｄ１、Ｄ２、およびアルボミトマイシンＣを含み、ここで、これらの不純物の量は、ＰｈＥｕｒ８．０ＭｉｔｏｍｙｃｉｎＭｏｎｏｇｒａｐｈ０１／２００８：１６５５による不純物法に従って決定される、請求項７に記載の組成物。
前記溶液が水をさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
マイトマイシンＣ、尿素およびｔｅｒｔ−ブタノールを含む溶液であって、前記溶液が、マイトマイシンＣを含む医薬組成物を得るために凍結乾燥される、溶液。