JP6524222B2 - キレノール又はシーゲスベッキアハーブ抽出物を含む筋機能改善用又は運動能力増強用組成物 - Google Patents

Description

本発明は、キレノール（ｋｉｒｅｎｏｌ）、シーゲスベッキアハーブ（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｈｅｒｂａ）抽出物又はその分画物を有効成分として含有する筋機能改善用又は運動能力増強用組成物に関する。

去る５０〜１００年間、人間身体活動の減少現象は、第２型糖尿、肥満、心血管疾患などのような代謝性疾患の発病率増加と関連していることが知られた。身体活動不足は、世界保健機構で発表した死亡原因のうち４位を占める。このような現象によって、世界保健機構、米国心臓協会、英国心臓財団などの団体では、一週間に５日以上、最小３０分の有酸素運動を勧奨している。実際に、運動は、糖尿、肥満、乳房癌と大腸癌の発病率を低減し、鬱病にも良い治療効果を示す（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７０：１１５３−１１６６、２０１３、Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１１０：５８Ｂ−６８Ｂ、２０１２）。

エネルギー消比を促進し、運動能力を向上するための代表的な方法のうち一つとしては、ミトコンドリアによる脂肪酸酸化（ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ）を増加させて、ＡＴＰエネルギーを生成させる方法がある。これを担当するミトコンドリアの個数と能力は、ＰＧＣ−１α（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｇａｍｍａ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ １ ａｌｐｈａ）という補助活性子により調節され、ＰＧＣ−１αの活性は、ＳＩＲＴ１（ｓｉｒｔｕｌｉｎ）によって調節されると明らかにされた（ＥＭＢＯ．Ｊ．２６：１９１３−１９２３、２００７、Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ．１：３６１−３７０、２００５）。

Ｓｃａｒｐｕｌｌａと共同研究者らは、ＮＲＦ（ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒ）というタンパク質を同定した（Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９７：６７３−６８３、２００６）。ＮＲＦ群のタンパク質は、核でミトコンドリアの多様な遺伝子のプロモーターに結合し、ミトコンドリアの複製と転写を活性化させる。ミトコンドリアの複製及び転写の活性化によって、ミトコンドリアの生成が誘導されることが明らかにされた。また、ＮＲＦ群のタンパク質は、ＰＧＣ−１α補助活性子と物理的に相互作用して発現が増進されるものことが明らかにされた（Ｃｅｌｌ ９８：１１５−２４、１９９９）。

そのほか、ＡＭＰＫ、ｐ−ＡＭＰＫ、ＰＰＡＲδＥＲＲα及びＴｆａｍなどが運動能力向上と関連がある因子であると知られている。

なお、筋萎縮（Ｍｕｓｃｌｅ ａｔｒｏｐｈｙ）というのは、筋肉量の漸進的減少によって発生するものであって、筋肉の弱化及び退行を称する（Ｃｅｌｌ １１９：９０７１０、２００４）。筋萎縮は、非活動、酸化的ストレス、慢性炎症によって促進され、筋肉機能と運動能力を弱化させる（Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．２６：５２４−５３４、２００７）。筋肉機能を決定する最も重要な要素は、筋肉量であり、これは、タンパク質合成と分解の均衡によって維持される。筋萎縮症は、タンパク質分解が合成より大きく起こるときに発生する（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３７：１９８５−１９９６、２００５）。

筋肉のサイズは、筋肉内で起きる同化作用（ａｎａｂｏｌｉｓｍ）や異化作用（ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ）を誘導する細胞内信号伝逹過程（ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ）によって調節され、筋肉タンパク質の分解より合成を誘導する信号伝逹反応が多く起きる場合、筋肉タンパク質合成が増加する。筋肉タンパク質合成の増加は、筋肉タンパク質の増加による筋肉サイズ増加（ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ、筋肥大）や筋線維数増加（ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）として現われる（Ｔｈｅ Ｋｏｒｅａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｐｏｒｔｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０：１５５１−１５６１、２０１１）。

筋肥大誘導因子は、筋細胞内でＰＩ３Ｋ（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ−３ｋｉｎａｓｅ）／Ａｋｔ経路の刺激を基点としてダウンストリームタンパク質（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｐｒｏｔｅｉｎｓ）をリン酸化させることによって、タンパク質合成を誘導する。このうちＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号伝逹によるｍＴＯＲ（ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ）の活性は、細胞内で多様な成長信号を統合する中心成長信号伝逹機作と認められている。ｍＴＯＲの活性化は、二つのダウンストリームターゲット（ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｔａｒｇｅｔｓ）である４Ｅ−ＢＰ１（４Ｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ）とｐ７０Ｓ６Ｋ（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ ７０−ｋＤａ ｒｉｂｏｓｏｍａｌ Ｓ６ ｋｉｎａｓｅ）を活性化させることによって、筋タンパク質合成を誘導し、筋肉量の増加に寄与する（Ｔｈｅ Ｋｏｒｅａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｐｏｒｔｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０：１５５１−１５６１、２０１１、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：４０７１７−４０７２２、２００３）。

筋肉細胞の分化と筋肉の形成は、多様な筋肉調節因子（ｍｕｓｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｆａｃｔｏｒｓ）によって調節される（Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ７０：４１１７−４１３０、２０１３）。そのうち、ｍｙｏＤは、筋肉分化に特異的な遺伝子の発現を開始させ、間葉系幹細胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ）が根源細胞（ミオブラスト）に分化することを誘導する。ＭｙｏＤにより調節されるミオゲニン（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）は、根源細胞の結合（ｆｕｓｉｏｎ）に最も重要な要素であって、筋管細胞（ｍｙｏｔｕｂｅ）の形成に関与する。このような過程を通じて形成された筋線維は、束を成して最終的に筋肉を形成する（Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ７０：４１１７−４１３０、２０１３；Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ ６：ｒｅ２、２０１３）。

シーゲスベッキアハーブ（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｈｅｒｂａ）（別名；きれん）は、キク科のシーゲスベッキア属植物（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｓｐｐ．）であるシーゲスベッキア・グラブレセンス（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｇｌａｂｒｅｓｃｅｎｓ Ｍａｋ．）、シーゲスベッキア・プベスセンス（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ Ｍａｋ．）又はシーゲスベッキア・オリエンタリス（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ Ｌ．）の枝上部を乾燥したものである。ジンドクチァルと呼ばれるシーゲスベッキア・グラブレセンスは、抗菌（Ｉｎｔ．Ｊ．ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．１６０：２６０−２６６、２０１３）、抗癌（Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．３０：２２１−２２６、２０１３）、抗糖尿（Ｊ．ＥｎｚｙｍｅＩｎｈｉｂ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２１：３７９−３８３、２００６）、抗炎（Ｆｏｏｄ Ａｇｒｉｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１４５−１６０、２０１１）などの活性が報告されている。タルジンドクチァルと呼ばれるシーゲスベッキア・プベスセンスは、抗炎及び鎮痛（Ｐａｋ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．２１：８９−９１、２００８）、抗酸化及び抗肥満（Ｋｏｒ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４１：３４１−３４９、２０１３）、傷治癒（Ｊ．Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３４：１０３３−１０３８、２０１１）、関節炎治療（Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ １９：８８２−８８９、２０１２）などの活性が報告されている。ゼジュジンドクチァルと呼ばれるシーゲスベッキア・オリエンタリスは、抗癌（Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｒａｄｉａｎｃｅ６：３４−３９、２００７）、抗炎（Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓ．３：７５４−７６１、２００６）、抗酸化（Ｋｏｒｅａｎ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｇｎ．３６：１５０−１６３、２００５）などの活性が報告されている。

キレノール（Ｋｉｒｅｎｏｌ）は、主として、シーゲスベッキアハーブ（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｈｅｒｂａ）で発見されるジテルペノイド（ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄ）であって、抗炎効果及び鎮痛効果（Ｊ．Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３７：１０８９−１０９４、２０１１）、抗菌効果（Ｐｈａｒｍａｃｏｇｎ．Ｍａｇ．８：１４９−１５５、２０１２）、関節炎治療効果（Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ １９：８８２−８８９、２０１２）、抗肥満効果（ＢＢＲＣ ４４５、４３３−４３８、２０１４）などを有するものと報告されている。

しかし、本発明の以前には、シーゲスベッキアハーブ又はキレノールの筋機能改善効果又は運動能力増強効果については知られたところがない。

Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１７０：１１５３−１１６６、２０１３ Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１１０：５８Ｂ−６８Ｂ、２０１２ ＥＭＢＯ．Ｊ．２６：１９１３−１９２３、２００７ Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ．１：３６１−３７０、２００５ Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９７：６７３−６８３、２００６ Ｃｅｌｌ ９８：１１５−２４、１９９９ Ｃｅｌｌ １１９：９０７１０、２００４ Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．２６：５２４−５３４、２００７ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．３７：１９８５−１９９６、２００５ Ｔｈｅ Ｋｏｒｅａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｐｏｒｔｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０：１５５１−１５６１、２０１１ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：４０７１７−４０７２２、２００３ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ７０：４１１７−４１３０、２０１３ Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ ６：ｒｅ２、２０１３ Ｉｎｔ．Ｊ．ＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．１６０：２６０−２６６、２０１３ Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｐ．３０：２２１−２２６、２０１３ Ｊ．ＥｎｚｙｍｅＩｎｈｉｂ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２１：３７９−３８３、２００６ Ｆｏｏｄ Ａｇｒｉｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：１４５−１６０、２０１１ Ｐａｋ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．２１：８９−９１、２００８ Ｋｏｒ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４１：３４１−３４９、２０１３ Ｊ．Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３４：１０３３−１０３８、２０１１ Ｐｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ １９：８８２−８８９、２０１２ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｒａｄｉａｎｃｅ６：３４−３９、２００７ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｄｉｖｅｒｓ．３：７５４−７６１、２００６ Ｋｏｒｅａｎ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｇｎ．３６：１５０−１６３、２００５ Ｊ．Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．１３７：１０８９−１０９４、２０１１ Ｐｈａｒｍａｃｏｇｎ．Ｍａｇ．８：１４９−１５５、２０１２ ＢＢＲＣ ４４５、４３３−４３８、２０１４

これより、本発明者は、優れた筋機能調節活性又は優れた運動能力活性を有し、安全に適用され得る天然物質を探索した結果、キレノール（ｋｉｒｅｎｏｌ）又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｈｅｒｂａ）抽出物又はその分画物が筋機能改善活性と運動能力増強活性があることを確認し、本発明を完成した。

したがって、本発明の目的は、シーゲスベッキアハーブ抽出物を有効成分として含む筋機能改善用又は運動能力増強用組成物を提供することにある。

本発明の他の目的は、下記化学式１の化合物を有効成分として含む筋機能改善用又は運動能力増強用組成物を提供することにある：

［化学式１］

前記課題を解決するための手段として、本発明は、シーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物を有効成分として含む筋機能改善用又は運動能力増強用薬学組成物及び食品組成物を提供する。

前記課題を解決するための他の手段として、本発明は、下記化学式１で表示される化合物を有効成分として含む筋機能改善用又は運動能力増強用薬学組成物及び食品組成物を提供する：

［化学式１］

本発明によるキレノール（ｋｉｒｅｎｏｌ）、又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｈｅｒｂａ）抽出物又はその分画物は、筋機能改善に関与する主要遺伝子であるｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現を増加させることによって、筋肉量を増大させるのに優れた効果がある。また、本発明によるキレノール（ｋｉｒｅｎｏｌ）、又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｈｅｒｂａ）抽出物又はその分画物は、運動能力に関与する主要遺伝子であるＰＧＣ−１αのタンパク質発現を増加させることによって、運動能力を顕著に増強する効果がある。

また、本発明は、天産物であるため、副作用なしに安全に使用され得、医薬品又は食品として使用され得る。

Ｌ６筋肉細胞において、キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の処理によるｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量を測定した結果を示す。 Ｌ６筋肉細胞において、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物の処理によるｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量を測定した結果を示す。 Ｌ６筋肉細胞において、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の処理による筋肉分化調節遺伝子（ミオゲニン及びＭｙｏＤ）のｍＲＮＡ発現量を測定した結果を示す。 Ｌ６筋肉細胞において、キレノール処理による筋肉分化調節遺伝子（ミオゲニン及びＭｙｏＤ）のｍＲＮＡ発現量を測定した結果を示す。 Ｌ６筋肉細胞において、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の処理による筋肉内タンパク質異化作用に関与する主要遺伝子（アトロジン−１（Ａｔｒｏｇｉｎ−１）及びＭｕＲＦ１）のｍＲＮＡ発現量を測定した結果を示す。 Ｌ６筋肉細胞において、キレノール処理による筋肉内タンパク質異化作用に関与する主要遺伝子（アトロジン−１及びＭｕＲＦ１）のｍＲＮＡ発現量を測定した結果を示す。 正常食餌動物モデルにおいて、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与による筋肉量増大水準を測定した結果を示す。 正常食餌動物モデルにおいて、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与による筋肉体積増大水準を測定した結果を示す（左側：ＰＥＴ／ＣＴ結果、右側：筋肉体積測定結果）。 高脂肪食餌動物モデルにおいて、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与による筋肉量増大水準を測定した結果を示す。 高脂肪食餌動物モデルにおいて、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与による筋肉体積増大水準を測定した結果を示す（左側：ＰＥＴ／ＣＴ結果、右側：筋肉体積測定結果）。 Ｌ６筋肉細胞において、キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の処理によるＰＧＣ−１αのタンパク質発現量を測定した結果を示す。 Ｌ６筋肉細胞で、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物の処理によるＰＧＣ−１αのタンパク質発現量を測定した結果を示す。 正常食餌動物モデルにおいて、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与による運動能力の変化を測定した結果を示す（ａ：運動距離、ｂ：運動時間）。 高脂肪食餌で誘導された肥満動物モデルにおいて、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与による運動能力の変化を測定した結果を示す（ａ：運動距離、ｂ：運動時間）。 動物モデルのふくらはぎ筋肉において、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与による運動能力向上と関連した遺伝子であるｐ−ＡＭＰＫ、ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ−１α、ＰＰＡＲδタンパク質発現量を測定した結果を示す。 動物モデルのふくらはぎ筋肉において、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与によるミトコンドリア生合成と関連した遺伝子であるＰＧＣ−１α、ＮＲＦ−１、ＥＲＲα、ＴｆａｍのｍＲＮＡ発現量を測定した結果を示す。

以下、本発明の構成を具体的に説明する。
本発明は、シーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物、又は下記化学式１で表示される化合物の筋機能改善又は運動能力増強用途；シーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物、又は下記化学式１で表示される化合物を含む筋機能改善用又は運動能力増強用組成物；又はシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物、又は下記化学式１で表示される化合物を個体に投与することを含む筋機能改善又は運動能力増強方法を提供する。

［化学式１］

本明細書において「シーゲスベッキアハーブ」又は「きれん」は、キク科のシーゲスベッキア属植物（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｓｐｐ．）であるシーゲスベッキア・グラブレセンス（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａｇｌａ ｂｒｅｓｃｅｎｓ Ｍａｋ．）、シーゲスベッキア・プベスセンス（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｐｕｂｅｓｃｅｎｓ Ｍａｋ．）又はシーゲスベッキア・オリエンタリス（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ Ｌ．）の枝上部を乾燥したものを意味する。シーゲスベッキア・グラブレセンスは、ジンドクチァル、シーゲスベッキア・プベスセンスは、トルジンドクチァル、シーゲスベッキア・オリエンタリスは、ゼジュジンドクチァルとも言う。

本明細書において「シーゲスベッキアハーブ抽出物」又は「きれん抽出物」は、相互交換的に使用され、シーゲスベッキアハーブ（きれん）を抽出して收得した抽出物を意味する。シーゲスベッキアハーブ抽出物の製造方法は、当業界に公知された通常の抽出方法を制限なく利用でき、例えば、シーゲスベッキアハーブ植物又は植物の一部（葉又は根）から水、炭素数１〜６の有機溶媒、及び亜臨界水及び超臨界流体よりなる群から選択される一つ以上の溶媒で抽出して收得できる。

本明細書において「分画物」は、多様な構成成分を含む混合物から特定成分又は特定グループを分離する分画方法によって得られた結果物を意味する。分画物を製造する方法は、当業界によく知られており、公知の方法を制限なく利用可能である。例えば、溶媒分画、シリカゲルクロマトグラフィー（ｓｉｌｉｃａ ｇｅｌ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、ｐｒｅｐ−ＨＰＬＣなどの技術を利用して活性物質が濃縮された特定分画物を製造できる。

一具体例において、シーゲスベッキアハーブ抽出物の分画物は、シーゲスベッキアハーブ抽出物をエチルアセテート、メタノール又はこれらの混合溶媒で分画して收得できる。

本明細書において、「筋」は、筋、筋肉、腱を包括的に指称し、「筋機能」は、筋肉の収縮によって力を発揮する能力を意味し、筋肉が抵抗に耐えるために最大限に収縮力を発揮できる能力である筋力、筋肉が与えられた重量にどれほど長時間又はどれほど何回収縮と弛緩を繰り返すことができるかどうかを示す能力である筋持久力、短時間内に強い力を発揮する能力である瞬発力を含む。このような筋機能は、肝が担当し、筋肉量に比例する。用語「筋機能改善」は、筋機能がさらに良好に向上させることを言う。
本明細書において、「筋機能改善用組成物」というのは、筋機能改善効果がある物質を有効成分として含む組成物であって、薬学組成物又は食品組成物を含む。

本明細書において、「運動能力」、日常生活やスポーツで見られる身体動作を外形的に走り、飛び、投げ、泳ぎなどに区分するとき、前記動作を速く、強く、正確に、長時間、上手にできる程度を示すものであって、運動能力は、筋力、敏捷性及び持久力などの因子に規定される。用語「運動能力増強」は、運動能力を改善するか、向上させることを言う。

本明細書において、「運動能力増強用組成物」というのは、運動能力増強効果がある物質を有効成分として含む組成物であって、薬学組成物又は食品組成物を含む。

本発明の筋機能改善用又は運動能力増強用組成物は、シーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物以外に、更に、同一又は類似の機能を示す有効成分を１種以上含有できる。例えば、公知の筋機能改善成分又は運動能力増強成分を含むことができる。更なる成分を含むと、本発明の組成物の筋機能改善効果又は運動能力増強効果がさらに増進され得る。前記成分追加時には、複合使用による皮膚安全性、剤形化の容易性、有効成分の安定性を考慮できる。本発明の一具体例において、前記組成物は、当業界に公知された筋機能改善成分又は運動能力増強成分として、ケンペリア・パルウィフローラ抽出物、ピパーレトロフラクタム（Ｐｉｐｅｒｒｅｔｒｏｆｒａｃｔｕｍ Ｖａｈｌ．）実の抽出物、ミリセチン、ククルビタン抽出物、パンジュラータ抽出物、ブドウ根抽出物、露根抽出物及び紅参抽出物よりなる群から選択される１種以上の成分を更に含むことができる。更なる成分は、全体組成物の重量に対して０．０００１重量％以上〜１０重量％以下で含まれることができる。例えば、０．０００１重量％以上〜１重量％以下、０．０００１重量％以上〜０．１重量％以下、０．０００１重量％以上〜０．００１重量％以下、０．００１重量％以上〜１０重量％以下、０．００１重量％以上〜１重量％以下、０．００１重量％以上〜０．１重量％以下、０．０１重量％以上〜１０重量％以下、０．０１重量％以上〜１重量％以下であることができる。前記含量範囲は、皮膚安全性、前記化学式１の化合物の剤形化時の容易性などの要件によって調節され得る。

本発明のシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物を有効成分として含む筋機能改善用又は運動能力増強用組成物は、薬学組成物又は食品組成物であることができる。

本発明の化学式１で表示される化合物を有効成分として含む筋機能改善用又は運動能力増強用組成物は、薬学組成物又は食品組成物であることができる：

［化学式１］

前記化学式１の化合物は、できるだけ、すべての異性質体を含むことができ、例えば、下記化学式２の化合物を含むことができる。

［化学式２］

前記化学式２の化合物は、別名としてキレノール（ｋｉｒｅｎｏｌ）という。前記化学式１の化合物又は前記化学式２の化合物は、植物抽出物から分離又は合成して利用するか、市販されている化合物を利用できる。

一具体例において、前記化学式１で表示される化合物又は化学式２で表示される化合物は、シーゲスベッキアハーブ抽出物から分離したものであることができる。

一具体例において、シーゲスベッキアハーブ抽出物は、シーゲスベッキア・グラブレセンス、シーゲスベッキア・プベスセンス及びシーゲスベッキア・オリエンタリスよりなる群から選択される一つ以上の植物の抽出物であることができる。例えば、シーゲスベッキア・グラブレセンス、シーゲスベッキア・プベスセンス又はシーゲスベッキア・オリエンタリスの乾燥した葉と幹を利用したエタノール抽出物、熱水抽出物、ヘキサン抽出物、エチルアセテート抽出物、超高圧抽出物であることができる。

一具体例において、シーゲスベッキアハーブ抽出物は、水、炭素数１〜６の有機溶媒、亜臨界水及び超臨界流体よりなる群から選択される一つ以上の溶媒でシーゲスベッキアハーブを抽出して收得できる。例えば、シーゲスベッキアハーブ植物を１００ＭＰａ以上の超高圧条件下で抽出して收得することもできる。必要な場合には、当業界に公知された方法によって濾過及び濃縮段階をさらに含んで製造できる。

一具体例において、炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール（ａｌｃｏｈｏｌ）、アセトン（ａｃｅｔｏｎｅ）、エーテル（ｅｔｈｅｒ）、ベンゼン（ｂｅｎｚｅｎｅ）、クロロホルム（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）、エチルアセテート（ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ）、メチレンクロリド（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ヘキサン（ｈｅｘａｎｅ）、シクロヘキサン（ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）及び石油エーテル（ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ）よりなる群から選択される一つ以上であることができる。

また、本発明のシーゲスベッキアハーブ抽出物は、乾燥させたシーゲスベッキアハーブを食品加工に適した精製水、エタノール、亜臨界水又は超臨界二酸化炭素を利用して抽出、精製して得ることができるか、超高圧抽出装置を利用して抽出、精製して得ることができ、又はシーゲスベッキアハーブ植物を直接圧着して得たオイルから分離精製して得ることができる。例えば、１００ＭＰａ以上の超高圧条件下でシーゲスベッキアハーブを抽出して抽出物を收得できる。

一具体例において、シーゲスベッキアハーブ抽出物の分画物は、エチルアセテート、メタノール又はこれらの混合溶媒でシーゲスベッキアハーブ抽出物を分画して收得できる。

本発明の組成物が薬学組成物である場合、筋機能改善のために、筋肉消耗又は退化による筋肉疾患の予防又は治療に使用され得る。筋肉消耗及び退化は、遺伝的要因、後天的要因、老化などを原因として発生し、筋肉消耗は、筋肉量の漸進的損失、筋肉、特に骨格筋又は随意筋及び心臓筋肉の弱化及び退行を特徴とする。これと関連した疾患の例としては、緊張減退症（ａｔｏｎｙ）、筋萎縮症（ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ）、筋異栄養症（ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、筋肉退化、筋無力症及び筋肉減少症（Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ）などが挙げられる。本発明の組成物は、筋肉量増大効果があり、筋肉の種類は制限されない。

本発明の薬学組成物は、キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物の薬剤学的に許容可能な塩を含むことができる。本明細書において用語「薬剤学的に許容可能な」というのは、生理学的に許容され、人間に投与されるとき、通常、アレルギー反応又はこれと類似の反応を起こさないことを言い、前記塩としては、薬剤学的に許容可能な遊離酸（ｆｒｅｅ ａｃｉｄ）によって形成された酸付加塩が好ましい。

前記キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物の薬剤学的に許容可能な塩は、有機酸又は無機酸を利用して形成された酸付加塩であることができ、前記有機酸は、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、乳酸、ブチル酸、イソブチル酸、トリフルオロ酢酸、リンゴ酸、マレイン酸、マロン酸、フマル酸、コハク酸、コハク酸モノアミド、グルタミン酸、タルタル酸、シュウ酸、クエン酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、安息香酸、フタル酸、サリチル酸、アントラニル酸、ジクロロ酢酸、アミノオキシ酢酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸又はメタンスルホン酸を含む。無機酸は、例えば塩酸、臭素酸、硫酸、リン酸、硝酸、炭酸又はホウ酸を含む。酸付加塩は、好ましくは、塩酸塩又は酢酸塩形態であることができ、より好ましくは、塩酸塩形態であることができる。

前記言及された酸付加塩は、ａ）キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物及び酸を直接混合するか、ｂ）これらのうち一つを溶媒又は含水溶媒の中に溶解させ混合させるか、又はｃ）キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物を溶媒又は水和溶媒中の酸に位置させ、これらを混合する一般的な塩の製造方法で製造される。

前記とは別に、更なる塩の可能な形態は、ガバ塩、ガバペンチン塩、プレガバリン塩、ニコチン酸塩、アジペート塩、ヘミマロン酸塩、システイン塩、アセチルシステイン塩、メチオニン塩、アルギニン塩、リシン塩、オルニチン塩又はアスパルト酸塩などがある。

また、本発明の薬学組成物は、薬学的に許容可能な担体を更に含むことができる。

薬学的に許容される担体としては、例えば、経口投与用担体又は非経口投与用担体を更に含むことができる。経口投与用担体は、ラクトース、澱粉、セルロース誘導体、マグネシウムステアレート、ステアリン酸などを含むことができる。また、非経口投与用担体は、水、適当なオイル、食塩水、水性グルコース及びグリコールなどを含むことができる。また、安定化剤及び保存剤を更に含むことができる。適当な安定化剤としては、亜黄酸水素ナトリウム、亜黄酸ナトリウム又はアスコルビン酸のような抗酸化剤がある。適当な保存剤としては、塩化ベンザルコニウム、メチル−又はプロピル−パラベン及びクロロブタノールがある。その他の薬学的に許容される担体としては、次の文献に記載されているものを参照できる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９ｔｈ ｅｄ．、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９９５）。

本発明の薬学組成物は、人間を含めた哺乳動物にどんな方法でも投与できる。例えば、経口又は非経口で投与でき、非経口的な投与方法としては、これに制限されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、骨髄内、硬膜内、心臓内、経皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、腸管、局所、舌下又は直腸内投与であることができる。

本発明の薬学組成物は、前述したような投与経路によって経口投与用又は非経口投与用製剤に剤形化できる。剤形化する場合には、一つ以上の緩衝剤（例えば、食塩水又はＰＢＳ）、抗酸化剤、静菌剤、キレート化剤（例えば、ＥＤＴＡ又はグルタチオン）、充填剤、増量剤、結合剤、アジュバント（例えば、アルミニウムヒドロキサイド）、懸濁液剤、濃厚剤、湿潤剤、崩解剤、界面活性剤、希釈剤又は賦形剤を使用して調剤され得る。

経口投与のための製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液又はカプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、本発明の薬学組成物に少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉（とうもろこし澱粉、小麦澱粉、米澱粉、じゃがいも澱粉などを含む）、カルシウムカーボネート（Ｃａｌｃｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ）、スクロース（Ｓｕｃｒｏｓｅ）、ラクトース（Ｌａｃｔｏｓｅ）、デキストロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及びヒドロキシプロピルメチル−セルロース又はゼラチンなどを混ぜて調剤され得る。例えば、活性成分を固体賦形剤と配合した後、これを粉砕し、適当な補助剤を添加した後、顆粒混合物で加工することによって、錠剤又は糖衣錠剤を收得できる。

単純な賦形剤以外に、マグネシウムステアレート、タルクのような潤滑剤も使用される。液状製剤の場合には、頻繁に使用される希釈剤である水又はリキッドパラフィン以外に、さまざまな賦形剤、例えば湿潤剤、甘味剤、芳香剤又は保存剤などが含まれることができる。

また、場合によって、架橋結合ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸又はナトリウムアルギネートなどを崩解剤として添加でき、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤及び防腐剤などを更に含むことができる。

非経口的に投与する場合、本発明の薬学組成物は、適当な非経口用担体とともに、注射剤、経皮投与剤及び鼻腔吸入剤の形態で当業界に公知された方法によって剤形化され得る。前記注射剤の場合には、必ず滅菌されなければならならず、バクテリア及び真菌のような微生物の汚染から保護されなければならない。注射剤の場合、適当な担体の例としては、これに限定されないが、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエチレングリコールなど）、これらの混合物及び／又は植物油を含む溶媒又は分散媒質であることができる。より好ましくは、適当な担体としては、ハンクス溶液、点滴溶液、トリエタノールアミンが含有されたＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ）又は注射用滅菌水、１０％エタノール、４０％プロピレングリコール及び５％デキストロースのような等張溶液などを使用できる。前記注射剤を微生物汚染から保護するためには、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどのような多様な抗菌剤及び抗真菌剤を更に含むことができる。また、前記注射剤は、大部分の場合、糖又はナトリウムクロリドのような等張化剤を更に含むことができる。

経皮投与剤の場合、軟膏剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、外用液剤、パスタ(paste)剤、リニメント剤、エアロール剤などの形態が含まれる。前記で「経皮投与」は、薬学組成物を局所的に皮膚に投与し、薬学組成物に含有された有効な量の活性成分が皮膚内に伝達されることを意味する。

吸入投与剤の場合、本発明によって使用される化合物は、適当な推進剤、例えば、ジクロロフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の適当な気体を使用して、加圧パック又は煙霧機からエアロゾールスプレー形態で便利に伝達できる。加圧エアロゾールの場合、投薬単位は、計量された量を伝達する弁を提供して決定できる。例えば、吸入器又は吹入器に使用されるゼラチンカプセル及びカートリッジは、化合物、及びラクトース又は澱粉のような適当な粉末基剤の粉末混合物を含有するように剤形化できる。非経口投与用剤形は、すべての制約化学に一般的に公知された処方書である文献（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、１９７５．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ １８０４２、Ｃｈａｐｔｅｒ ８７：Ｂｌａｕｇ、Ｓｅｙｍｏｕｒ）に記載している。

本発明の薬学組成物はキレノール又はシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物を有効量として含むとき、好ましい筋機能改善効果又は運動能力増強効果を提供できる。本明細書において、「有効量」というのは、陰性対照群に比べてそれ以上の反応を示す量を言い、好ましくは、筋機能を向上させるか、運動能力を向上するに十分な量を言う。本発明の薬学組成物にキレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物が０．０１〜９９．９９％含まれることができ、残量は、薬学的に許容可能な担体が占めることができる。本発明の薬学組成物に含まれるキレノール又はシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物の有効量は、組成物が製品化される形態などによって変わる。

本発明の薬学組成物の全体有効量は、単一投与量（ｓｉｎｇｌｅ ｄｏｓｅ）で患者に投与され得、多重投与量（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｄｏｓｅ）で長期間投与される分割治療方法（ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌ）によって投与されることもできる。本発明の薬学組成物は、疾患の程度によって有効成分の含量を異にすることができる。非経口投与時は、前記キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物を基準にして一日に体重１ｋｇ当たり好ましくは０．０１〜５０ｍｇ、より好ましくは０．１〜３０ｍｇの量で投与されるように、また、経口投与時には、キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物を基準にして一日に体重１ｋｇ当たり好ましくは０．０１〜１００ｍｇ、より好ましくは０．０１〜１０ｍｇの量で投与されるように１〜数回に分けて投与できる。しかし、前記キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物の容量は、投与経路及び治療回数だけでなく、患者の年齢、体重、健康状態、性別、疾患の重症度、食餌及び排泄率など多様な要因を考慮して決定されるので、このような点を考慮するとき、当業界の通常的な知識を有する者なら、前記キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物を筋機能改善又は運動能力増強のための用途による適切な有効投与量を決定できる。本発明による薬学組成物は、本発明の効果を示す限り、その剤形、投与経路及び投与方法に特に制限されない。

本発明の薬学組成物は、単独で、又は手術、放射線治療、ホルモン治療、化学治療又は生物学的反応調節剤を使用する方法と併用して使用できる。

本発明の薬学組成物は、また、キレノール又はシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物を有効成分として含む外用剤の剤形で提供できる。

本発明の薬学組成物を皮膚外用剤として使用する場合、更に、脂肪物質、有機溶媒、溶解剤、濃縮剤及びゲル化剤、軟化剤、抗酸化剤、懸濁化剤、安定化剤、発泡剤（ｆｏａｍｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、芳香剤、界面活性剤、水、イオン型乳化剤、非イオン型乳化剤、充填剤、金属イオン封鎖剤、キレート化剤、保存剤、ビタミン、遮断剤、湿潤化剤、必須オイル、染料、顔料、親水性活性剤、親油性活性剤又は脂質小嚢など皮膚外用剤に通常的に使用される任意の他の成分のような皮膚科学分野において通常的に使用される補助剤を含むことができる。また、前記成分は、皮膚科学分野において一般的に使用される量で導入できる。

本発明の薬学組成物が皮膚外用剤で提供される場合、これに制限されるのではないが、軟膏、パッチ、ゲル、クリーム又は噴霧剤などの剤形であることができる。

本発明の組成物は、また、食品組成物であることができる。本発明の筋機能改善用又は運動能力増強用組成物が食品組成物である場合、筋肉消耗又は退化による筋肉疾患の予防又は改善に使用され得る。筋肉消耗及び退化は、遺伝的要因、後天的要因、老化などを原因として発生し、筋肉消耗は、筋肉量の漸進的損失、筋肉、特に骨格筋又は随意筋及び心臓筋肉の弱化及び退行を特徴とする。これと関連した疾患の例としては、緊張減退症（ａｔｏｎｙ）、筋萎縮症（ｍｕｓｃｕｌ ａｒａｔｒｏｐｈｙ）、筋異栄養症（ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、筋肉退化、筋無力症及び筋肉減少症（Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ）などが挙げられる。本発明の組成物は、筋肉量増大効果があり、筋肉の種類は、制限されない。

本発明の食品組成物は、機能性食品（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｆｏｏｄ）、栄養補助剤（ｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｌ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、健康食品（ｈｅａｌｔｈ ｆｏｏｄ）、食品添加剤（ｆｏｏｄ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ）及び飼料などのすべての形態を含み、人間又は家畜を含めた動物を取食対象とする。

前記類型の食品組成物は、当業界に公知された通常的な方法によって多様な形態で製造できる。一般食品としては、これに限定されないが、飲料（アルコール性飲料を含む）、果実及びその加工食品（例：果物缶詰め、瓶詰め、ジャム、マーマレードなど）、魚類、肉類及びその加工食品（例：ハム、ソーセージ、コンビーフなど）、パン類及び麺類（例：うどん、そば、ラーメン、スパゲート、マカロニなど）、果汁、各種ドリンク、クッキー、飴、乳製品（例：バター、チイズなど）、食用植物油脂、マーガリン、植物性タンパク質、レトルト食品、冷凍食品、各種調味料（例：みそ、醤油、ソースなど）などに前記キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物を添加して製造できる。また、栄養補助剤としては、これに限定されないが、カプセル、錠剤、丸などに前記キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物を添加して製造できる。また、健康機能食品としては、これに限定されないが、例えば、前記キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物自体をお茶、ジュース及びドリンクの形態で製造して飲用（健康飲料）できるように、液状化、顆粒化、カプセル化及び粉末化して製造できる。また、前記キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物を食品添加剤の形態で使用するために、粉末又は濃縮液形態で製造して使用できる。また、前記キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物と筋機能改善効果又は運動能力増強効果があると知られた公知の活性成分とともに混合し、組成物の形態で製造できる。

本発明の筋機能改善用又は運動能力増強用組成物が健康飲料組成物として利用される場合、前記健康飲料組成物は、通常の飲料のように、さまざまな香味剤又は天然炭水化物などを追加成分として含有できる。前述した天然炭水化物は、ブドウ糖、果糖のようなモノサッカライド；マルトース、スクロースのようなジサッカライド；デキストリン、シクロデキストリンのようなポリサッカライド；キシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールであることができる。甘味剤は、タウマチン、ステビア抽出物のような天然甘味剤；サッカリン、アスパルタムのような合成甘味剤などを使用できる。前記天然炭水化物の比率は、本発明の組成物１００ｍＬ当たり一般的に約０．０１〜０．０４ｇ、好ましくは約０．０２〜０．０３ｇである。

キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物は、筋機能改善用又は運動能力増強用食品組成物の有効成分として含有され得、その量は、筋機能改善作用又は運動能力増強効果を達成するのに有効な量であって、特に限定されるものではないが、全体組成物の全体重量に対して０．０１〜１００重量％であることが好ましい。

前記以外に、本発明の健康食品は、さまざまな栄養剤、ビタミン、電解質、風味剤、着色剤、ペクチン酸、ペクチン酸の塩、アルギン酸、アルギン酸の塩、有機酸、保護性コロイド増粘剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、防腐剤、グリセリン、アルコール又は炭酸化剤などを含むことができる。その他、本発明の健康食品は、天然フルーツジュース、フルーツジュース飲料、又は野菜飲料の製造のための果肉を含有できる。このような成分は、独立的に又は混合して使用できる。このような添加剤の比率は、大きく重要ではないが、本発明の組成物１００重量部当たり０．０１〜０．１重量部の範囲で選択されることが一般的である。

本発明は、また、シーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物を有効成分として含む組成物を個体に投与することを含む筋機能改善又は運動能力増強方法を提供する。

一具体例において、個体は、筋機能改善又は運動能力の増強が必要な個体を意味し、これに制限されるものではないが、人間を含む哺乳動物であることができる。

一具体例において、シーゲスベッキアハーブ抽出物は、シーゲスベッキア・グラブレセンス、シーゲスベッキア・プベスセンス及びシーゲスベッキア・オリエンタリスよりなる群から選択される一つ以上であることができる。

一具体例において、シーゲスベッキアハーブ抽出物は、水、炭素数１〜６の有機溶媒、亜臨界水及び超臨界流体よりなる群から選択される一つ以上の溶媒でシーゲスベッキアハーブを抽出して收得したものであることができる。

一具体例において、炭素数１〜６の有機溶媒は、炭素数１〜６のアルコール（ａｌｃｏｈｏｌ）、アセトン（ａｃｅｔｏｎｅ）、エーテル（ｅｔｈｅｒ）、ベンゼン（ｂｅｎｚｅｎｅ）、クロロホルム（ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ）、エチルアセテート（ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ）、メチレンクロリド（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ヘキサン（ｈｅｘａｎｅ）、シクロヘキサン（ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｅ）及び石油エーテル（ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ）よりなる群から選択される一つ以上であることができる。

一具体例において、シーゲスベッキアハーブ抽出物は、１００ＭＰａ以上の超高圧条件下でシーゲスベッキアハーブを抽出して收得したものであることができる。

一具体例において、シーゲスベッキアハーブ抽出物の分画物は、エチルアセテート、メタノール又はこれらの混合溶媒でシーゲスベッキアハーブ抽出物を分画して收得したものであることができる。

一具体例において、筋機能改善又は運動能力増強方法は、緊張減退症（ａｔｏｎｙ）、筋萎縮症（ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ）、筋異栄養症（ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、筋肉退化、筋無力症及び筋肉減少症（Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ）よりなる群から選択される一つ以上の疾病を治療、予防又は改善することによって達成され得る。

本発明は、また、下記化学式１で表示される化合物を有効成分として含む組成物を個体に投与することを含む筋機能改善又は運動能力増強方法を提供する：

［化学式１］

一具体例において、化学式１で表示される化合物は下記化学式２で表示されるキレノールであることができる：

［化学式２］

一具体例において、個体は、筋機能改善又は運動能力の増強が必要な個体を意味し、これに制限されるものではないが、人間を含む哺乳動物であることができる。

一具体例において、化学式１で表示される化合物は、シーゲスベッキア・グラブレセンス、シーゲスベッキア・プベスセンス及びシーゲスベッキア・オリエンタリスよりなる群から選択される一つ以上の抽出物又はその分画物から分離したものであることができる。

一具体例において、筋機能改善又は運動能力増強方法は、緊張減退症（ａｔｏｎｙ）、筋萎縮症（ｍｕｓｃｕｌａｒ ａｔｒｏｐｈｙ）、筋異栄養症（ｍｕｓｃｕｌａｒ ｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）、筋肉退化、筋無力症及び筋肉減少症（Ｓａｒｃｏｐｅｎｉａ）よりなる群から選択される一つ以上の疾病を治療、予防又は改善することによって達成され得る。

その他、筋機能改善用又は運動能力増強用組成物について前述したすべての内容が筋機能改善方法又は運動能力増強方法にも制限なしに適用又は準用され得る。

以下、本発明を実施例によって詳しく説明する。但し、下記実施例は、本発明に対する理解を助けるために例示の目的で提供されたものに過ぎず、本発明の範囲がこれらにのみ限定されるものではない。下記実施例の実験結果は、平均±標準偏差で表示し、統計的分析は、ｔ検定を使用してｐ ｖａｌｕｅが０．０５又は０．０１以下である場合、有意性があるものと評価した。

参照例１：キレノール（ｋｉｒｅｎｏｌ）物質情報

名称：Ｋｉｒｅｎｏｌ；Ｋｉｒｅｌ；（１Ｒ、３Ｓ、４ａＳ、４ｂＳ、７Ｓ、１０ａＳ）−１、２、３、４、４ａ、４ｂ、５、６、７、９、１０、１０ａ−Ｄｏｄｅｃａｈｙｄｒｏ−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−７−［（Ｒ）−１、２−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ］−１、４ａ、７−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎｅ−１−ｍｅｔｈａｎｏｌ
ＣＡＳＮｏ．：５２６５９−５６−０

［実施例１］シーゲスベッキア・グラブレセンス抽出物の製造
［実施例１−１］シーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・グラブレセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・グラブレセンス試料１００ｇをエタノール１Ｌに入れ、５０℃で６０分間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン（Ｗｈａｔｍａｎ）２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物を得た。

［実施例１−２］シーゲスベッキア・グラブレセンス熱水抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・グラブレセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・グラブレセンス試料１００ｇを水１Ｌに入れ、１００℃で４時間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・グラブレセンス熱水抽出物を得た。

［実施例１−３］シーゲスベッキア・グラブレセンスヘキサン抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・グラブレセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・グラブレセンス試料１００ｇをヘキサン１Ｌに入れ、５０℃で６０分間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・グラブレセンスヘキサン抽出物を得た。

［実施例１−４］シーゲスベッキア・グラブレセンスエチルアセテート抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・グラブレセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・グラブレセンス試料１００ｇをエチルアセテート１Ｌに入れ、５０℃で６０分間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・グラブレセンスエチルアセテート抽出物を得た。

［実施例１−５］シーゲスベッキア・グラブレセンス超高圧抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・グラブレセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・グラブレセンス試料１ｇと１８％エタノール７６ｍＬをポリエチレン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ）パックに入れ、密封した後、超高圧抽出装置（Ｆｒｅｓｃａｌ ＭＦＰ−７０００；Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｈｅａｖｙ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を利用して抽出した。超高圧抽出条件は、抽出圧力が３２０ＭＰａ、抽出時間が５ｍｉｎであった。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・グラブレセンス超高圧抽出物を得た。

［実施例１−６］シーゲスベッキア・グラブレセンス超臨界流体抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・グラブレセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・グラブレセンス試料１ｇを試料カートリッジに充填し、超臨界流体抽出装置（ＳＦＸ ３５６０、Ｉｓｃｏ Ｉｎｃ．、Ｌｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ、ＵＳＡ）を利用して抽出した。超臨界流体抽出条件は、抽出圧力が２０ＭＰａ、抽出温度が６０℃、超臨界二酸化炭素の流速が６０ｍＬ／ｍｉｎ、抽出時間が６０ｍｉｎであった。超臨界流体抽出が完了すると、抽出装置の圧力を低めて、超臨界流体状態を解除し、シーゲスベッキア・グラブレセンス超臨界流体抽出物を得た。

［実施例１−７］シーゲスベッキア・グラブレセンス亜臨界水抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・グラブレセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・グラブレセンス試料１ｇを蒸留水１０ｍＬに入れ、亜臨界水抽出装置（ＤＩＯＮＥＸ Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ １００、ＤＩＯＮＥＸ ｃｏ．、ＵＳＡ）を利用して抽出した。亜臨界水抽出条件は、抽出圧力０．５ＭＰａ、抽出温度２４０℃、抽出時間２０分の条件の下で亜臨界水抽出を行った。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を−４０℃で凍結乾燥し、シーゲスベッキア・グラブレセンス亜臨界水抽出物を得た。

［実施例２］シーゲスベッキア・プベスセンス抽出物の製造
［実施例２−１］シーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・プベスセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・グラブレセンス試料１００ｇをエタノール１Ｌに入れ、５０℃で６０分間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン（Ｗｈａｔｍａｎ）２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物を得た。

［実施例２−２］シーゲスベッキア・プベスセンス熱水抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・プベスセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・プベスセンス試料１００ｇを水１Ｌに入れ、１００℃で４時間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・プベスセンス熱水抽出物を得た。

［実施例２−３］シーゲスベッキア・プベスセンスヘキサン抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・プベスセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・プベスセンス試料１００ｇをヘキサン１Ｌに入れ、５０℃で６０分間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・プベスセンスヘキサン抽出物を得た。

［実施例２−４］シーゲスベッキア・プベスセンスエチルアセテート抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・プベスセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・プベスセンス試料１００ｇをエチルアセテート１Ｌに入れ、５０℃で６０分間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・プベスセンスエチルアセテート抽出物を得た。

［実施例２−５］シーゲスベッキア・プベスセンス超高圧抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・プベスセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・プベスセンス試料１ｇと１８％エタノール７６ｍＬをポリエチレン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ）パックに入れ、密封した後、超高圧抽出装置（Ｆｒｅｓｃａｌ ＭＦＰ−７０００；Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｈｅａｖｙ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を利用して抽出した。超高圧抽出条件は、抽出圧力が３２０ＭＰａ、抽出時間が５ｍｉｎであった。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・プベスセンス超高圧抽出物を得た。

［実施例２−６］シーゲスベッキア・プベスセンス超臨界流体抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・プベスセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・プベスセンス試料１ｇを試料カートリッジに充填し、超臨界流体抽出装置（ＳＦＸ ３５６０、Ｉｓｃｏ Ｉｎｃ．、Ｌｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ、ＵＳＡ）を利用して抽出した。超臨界流体抽出条件は、抽出圧力が５０ＭＰａ、抽出温度が４０℃、超臨界二酸化炭素の流速が６０ｍＬ／ｍｉｎ、抽出時間が６０ｍｉｎであった。超臨界流体抽出が完了すると、抽出装置の圧力を低めて超臨界流体状態を解除し、シーゲスベッキア・プベスセンス超臨界流体抽出物を得た。

［実施例２−７］シーゲスベッキア・プベスセンス亜臨界水抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・プベスセンスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・プベスセンス試料１ｇを蒸留水１０ｍＬに入れ、亜臨界水抽出装置（ＤＩＯＮＥＸ Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ １００、ＤＩＯＮＥＸ ｃｏ．、ＵＳＡ）を利用して抽出した。亜臨界水抽出条件は、抽出圧力５ＭＰａ、抽出温度９０℃、抽出時間１５分の条件の下で亜臨界水抽出を行った。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を−４０℃で凍結乾燥し、シーゲスベッキア・プベスセンス亜臨界水抽出物を得た。

［実施例３］シーゲスベッキア・オリエンタリス抽出物の製造

［実施例３−１］シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・オリエンタリスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・オリエンタリス試料１００ｇをエタノール１Ｌに入れ、５０℃で６０分間撹拌しながら抽出した。抽出した試料はワトマン（Ｗｈａｔｍａｎ）２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を得た。

［実施例３−２］シーゲスベッキア・オリエンタリス熱水抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・オリエンタリスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・オリエンタリス試料１００ｇを水１Ｌに入れ、１００℃で４時間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・オリエンタリス熱水抽出物を得た。

［実施例３−３］シーゲスベッキア・オリエンタリスヘキサン抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・オリエンタリスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・オリエンタリス試料１００ｇをヘキサン１Ｌに入れ、５０℃で６０分間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・オリエンタリスヘキサン抽出物を得た。

［実施例３−４］シーゲスベッキア・オリエンタリスエチルアセテート抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・オリエンタリスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・オリエンタリス試料１００ｇをエチルアセテート１Ｌに入れ、５０℃で６０分間撹拌しながら抽出した。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・オリエンタリスエチルアセテート抽出物を得た。

［実施例３−５］シーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・オリエンタリスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・オリエンタリス試料１ｇと１８％エタノール７６ｍＬをポリエチレン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ）パックに入れて密封した後、超高圧抽出装置（Ｆｒｅｓｃａｌ ＭＦＰ−７０００；Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｈｅａｖｙ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を利用して抽出した。超高圧抽出条件は、抽出圧力が３２０ＭＰａ、抽出時間が５ｍｉｎであった。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を真空回転濃縮器で濃縮して溶媒成分を除去することによって、シーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物を得た。

［実施例３−６］シーゲスベッキア・オリエンタリス超臨界流体抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・オリエンタリスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・オリエンタリス試料１ｇを試料カートリッジに充填し、超臨界流体抽出装置（ＳＦＸ ３５６０、Ｉｓｃｏ Ｉｎｃ．、Ｌｉｎｃｏｌｎ、ＮＥ、ＵＳＡ）を利用して抽出した。超臨界流体抽出条件は、抽出圧力が４０ＭＰａ、抽出温度が５０℃、超臨界二酸化炭素の流速が６０ｍＬ／ｍｉｎ、抽出時間が６０ｍｉｎであった。超臨界流体抽出が完了すると、抽出装置の圧力を低めて超臨界流体状態を解除し、シーゲスベッキア・オリエンタリス超臨界流体抽出物を得た。

［実施例３−７］シーゲスベッキア・オリエンタリス亜臨界水抽出物の製造
乾燥させたシーゲスベッキア・オリエンタリスの葉と幹をミキサーで粉砕した後、粉砕したシーゲスベッキア・オリエンタリス試料１ｇを蒸留水１０ｍＬに入れ、亜臨界水抽出装置（ＤＩＯＮＥＸ Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｅｘｔｒａｃｔｏｒ １００、ＤＩＯＮＥＸ ｃｏ．、ＵＳＡ）を利用して抽出した。亜臨界水抽出条件は、２．５ＭＰａ、抽出温度１５０℃、抽出時間１５分の条件の下で亜臨界水抽出を行った。抽出した試料は、ワトマン２番濾過紙で濾過し、濾過した抽出液を−４０℃で凍結乾燥し、シーゲスベッキア・オリエンタリス亜臨界水抽出物を得た。

［実施例４］キレノールの分離及び構造決定
［実施例４−１］キレノールの分離
前記実施例３−１で得た濃縮されたシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物をシリカゲルが充填されたカラムに積載し、エチルアセテート、メタノールを１０：０．５（ｖ／ｖ）の比率で混合した溶媒システムを利用して分取した。前記分取順序によって総７個の分画に分けて、それぞれの分画を濃縮乾燥した。７個の分画のうち６番分画（分画６）をＲＰ−１８逆相カラムクロマトグラフィー（Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ ＲＰ−１８ ２５〜４０ｕｍ、Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．、Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ Ｓｔａｔｉｏｎ、ＮＪ、ＵＳＡ）を利用して展開溶媒１０％エチルアセテートで分取した。前記分取順序によって総２個の分画に分けてそれぞれの分画を濃縮乾燥した。前記２個の分画のうち２番分画（分画６−２）を濃縮乾燥し、さらにＲＰ−１８逆相カラムクロマトグラフィー利用して展開溶媒２０％エチルアセテートで分取した。前記分取順序によって総３個の分画に分けて、それぞれの分画を濃縮乾燥した。最終的に３個の分画のうち２番分画（分画６−２−２）を濃縮乾燥させて純粋な単一活性物質を分離した。

［実施例４−２］キレノールの構造決定
前記実施例４−１で分離した単一活性物質の構造決定のために^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルと^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルをそれぞれ５００ＭＨｚと１２５ＭＨｚ（溶媒：ＭｅＯＨ）で測定した。收得された^１Ｈ−ＮＭＲスペクトルと^１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルの結果に基づいて^１Ｈ^１Ｈの相関関係と^１Ｈ^１３Ｃの相関関係を測定するために、^１Ｈ^１Ｈ ＣＯＳＹスペクトルと^１Ｈ^１３Ｃ ＨＳＱＣスペクトルを測定し、炭素共鳴を通じて出る波長によりそれぞれの炭素信号を区別し、その結果を測定した。

また、前記分離した単一物質の質量分析のために測定したＦＡＢ−ＭＳを測定した。本化合物は、ＦＡＢ−ＭＳで［Ｍ］がｍ／ｚ ３３８．４８で観測され、分子量が３３８．４８と判明され、分子式Ｃ_２０Ｈ_３４Ｏ_４であった。

以上の^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲ、及びＦＡＢ−ＭＳに対する結果と既存に発表された研究報告（Ｗａｎｇ Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．、Ｐｈａｒｍａｃｏｇｎ．Ｍａｇ．、８：１４９−１５５、２０１２）を比較分析し、同定した結果、前記で分離した単一物質は、下記化学式２で表示されるキレノール（ｋｉｒｅｎｏｌ）化合物であると確認された。

［化学式２］

［実施例５］筋機能に関与する主要遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現増加効果
［実施例５−１］キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の筋機能改善効果
筋肉細胞であるＬ６ミオブラスト（ｍｙｏｂｌａｓｔ；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）を１０％ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ；Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ、ＵＳＡ）と１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ、ＵＳＡ）が含有されたＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉａ（ＤＭＥＭ；Ｈｙｃｌｏｎｅ）で培養した。Ｌ６細胞に前記実施例１−１で製造したシーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物、実施例２−１で製造したシーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物、実施例３−１で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を１０ｐｐｍ濃度で処理した。また、Ｌ６細胞に前記実施例４で製造したキレノールを１０μＭ濃度で処理した。この際、試料の代わりに、０．０１％ＤＭＳＯを処理した群を対照群とした。２４時間経過後、Ｌ６細胞をプロテアーゼインヒビターカクテル（ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｏｃｋｔａｉｌ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）が含まれたＲＩＰＡ（ＥＬＰＩＳ−Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）緩衝溶液で溶解させた。前記試料を５分間沸かした後、同量のタンパク質（２０μｇ）を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで電気泳動して分離した。電気泳動後、分離したタンパク質をニトロセルロース膜に伝達し、ウェスタンブロットを行った。１次抗体に反応させた後、Ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ０．１％ Ｔｗｅｅｎ ２０（ＴＢＳＴ）を利用して１０分間３回洗浄した。この際、本発明で使用された１次抗体の種類と希釈率は、１：１０００である。２次抗体反応は、前記１次抗体反応を行った膜に２次抗体（ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ）を入れ、常温で２時間反応した。この際、２次抗体の希釈率は、１：５０００にした。タンパク質バンドは、ＥＣＬウェスタンブロット検出試薬（ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔｓ；Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を使用して発色し、筋機能に関与する主要遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現を確認し、α−チューブリン（α−ｔｕｂｕｌｉｎ）でタンパク質ローディング量が一定であることを示した。

その結果、図１に示されたように、キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の処理によって筋機能改善に関与する主要遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量が増加することが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量の増加を通じて筋肉量を増加させる活性があることを意味する。

［実施例５−２］シーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物の筋機能改善効果
前記実施例３−５で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物を１０、２０、４０ｐｐｍ濃度で前記実施例５−１と同一の方法で筋肉細胞に処理した。

その結果、図２に示されたように、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物の処理によって筋機能改善に関与する主要遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量が増加することが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量の増加を通じて筋肉量を増加させる活性があることを意味する。

［実施例５−３］シーゲスベッキアハーブエチルアセテート抽出物の筋機能改善効果
前記実施例１−４で製造したシーゲスベッキア・グラブレセンスエチルアセテート抽出物、前記実施例２−４で製造したシーゲスベッキア・プベスセンスエチルアセテート抽出物、前記実施例３−４で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエチルアセテート抽出物を１０ｐｐｍ濃度で前記実施例５−１と同一の方法で筋肉細胞に処理した。

ＥＣＬウェスタンブロット検出試薬（ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔｓ；Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を使用してｐ−ｍＴＯＲタンパク質バンドを発色し、Ｇ；ＢＯＸ ＥＦ ｉｍａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｙｎｇｅｎｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を利用して発色されたタンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを測定した。この際、対照群タンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを１００％にして、試料を処理した実験群の相対的なタンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを百分率（％）で示した。

その結果を下記表１に示した。

シーゲスベッキアハーブエチルアセテート抽出物のｐ−ｍＴＯＲタンパク質発現量増加効果

前記表１に示したようにシーゲスベッキア・グラブレセンスエチルアセテート抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンスエチルアセテート抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリスエチルアセテート抽出物は、筋機能改善に関与する主要遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量を増加させることが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量の増加を通じて筋肉量を増加させる活性があることを意味する。

［実施例５−４］シーゲスベッキアハーブ超臨界及び亜臨界水抽出物の筋機能改善効果
前記実施例１−６と実施例１−７で製造したシーゲスベッキア・グラブレセンス超臨界及び亜臨界水抽出物、前記実施例２−６と実施例２−７で製造したシーゲスベッキア・プベスセンス超臨界及び亜臨界水抽出物、前記実施例３−６と実施例３−７で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリス超臨界及び亜臨界水抽出物を２０ｐｐｍ濃度で前記実施例５−１と同一の方法で筋肉細胞に処理した。次に、実施例５−３と同一の方法で対照群タンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを１００％にして、試料を処理した実験群の相対的なタンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを百分率（％）で示した。

その結果を下記表２に示した。

シーゲスベッキアハーブ超臨界及び亜臨界水抽出物のｐ−ｍＴＯＲタンパク質発現量増加効果

前記表２に示したように、シーゲスベッキア・グラブレセンス、シーゲスベッキア・プベスセンス、シーゲスベッキア・オリエンタリス超臨界及び亜臨界水抽出物は筋機能改善に関与する主要遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量を増加させることが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量の増加を通じて筋肉量を増加させる活性があることを意味する。

［実施例５−５］シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の分画物の筋機能改善効果
前記実施例４−１で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物のエチルアセテートとメタノールの１０：０．５（ｖ／ｖ）混合溶媒に対する分画物６を２０ｐｐｍ濃度で前記実施例５−１と同一の方法で筋肉細胞に処理した。次に、実施例５−３と同一の方法で対照群タンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを１００％にして、試料を処理した実験群の相対的なタンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを百分率（％）で示した。

その結果、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の分画物の対照群に対する相手ｄｅｎｓｉｔｙは、１２６％であって、筋機能改善に関与する主要遺伝子ｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量を増加させることが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がｐ−ｍＴＯＲのタンパク質発現量の増加を通じて筋肉量を増加させる活性があることを意味する。

［実施例６］筋肉分化作用及び同和作用増加、異化作用減少効果
［実施例６−１］筋肉分化及び同和作用増加効果
筋肉細胞であるＬ６ミオブラスト（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）をＤＭＥＭ（１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００ｇ／ｍＬストレプトマイシン）で培養した。細胞密度が約８０〜８５％となったとき、細胞培地を２％のＦＢＳを添加したＤＭＥＭ成長培地に交替して、６日間分化した後、実験を進行した。分化したＬ６細胞に筋減少を誘導させるために、ＴＮＦ−αを２４時間処理した後、前記実施例３−１で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物（１０、４０ｐｐｍ）と前記実施例４で製造したキレノール（１０、４０μＭ）を処理した。筋肉分化調節因子であるミオゲニン（ｍｙｏｇｅｎｉｎ）とｍｙｏＤのｍＲＮＡ発現量を調べるために、ＲＴ−ＰＣＲを行った。分化した細胞からＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して全体ＲＮＡを収穫して逆転写させた後、ＲＴ−ＰＣＲ分析を次のように行った。まず、ｃＤＮＡ合成のために、前記ＲＮＡを逆転写酵素で逆転写させた。ＲＴ−ＰＣＲは、次の特定プライマーで行い、β−アクチン（β−ａｃｔｉｎ）でｍＲＮＡローディング量が一定であることを示した。

ミオゲニン：
配列番号１：５’−ＴＧＧＧＣＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＣＡＧＡＣ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号２：５’−ＣＡＧＣＣＣＡＧＣＣＡＣＴＧＧＣＡＴＣＡ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）
ＭｙｏＤ：
配列番号３：５’−ＧＧＡＴＧＧＴＧＣＣＣＣＴＧＧＧＴＣＣＴ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号４：５’−ＴＧＧＣＣＴＴＣＧＣＴＧＴＧＡＧＴＣＧＣ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）
β−アクチン：
配列番号５：５’−ＡＧＣＣＡＴＧＴＡＣＧＴＡＧＣＣＡＴＣＣ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号６：５’−ＣＴＣＴＣＡＧＣＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＡＡ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）

その結果、図３及び図４に示したように、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物又はキレノールが、筋肉分化調節因子であるミオゲニンとｍｙｏＤのｍＲＮＡ発現量を増加させることが分かる。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が筋肉分化作用及び同和作用を増加させて、筋肉形成に寄与することを意味する。

［実施例６−２］筋肉異化作用減少効果
前記実施例３−１と同一の方法で分化した細胞から全体ＲＮＡを収穫して逆転写させた後、ＲＴ−ＰＣＲを行った。この際、前記実施例３−１で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物（１０、４０ｐｐｍ）と前記実施例４で製造したキレノール（１０、４０μＭ）を処理した。ＲＴ−ＰＣＲは、次の特定プライマーで行った。

アトロジン−１：
配列番号７：５’−ＣＣＣＴＧＡＧＴＧＧＣＡＴＣＧＣＣＣＡＡ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号８：５’−ＡＧＧＴＣＣＣＧＣＣＣＡＴＣＧＣＴＣＡ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）
ＭｕＲＦ１：
配列番号９：５’−ＴＣＴＡＣＴＣＧＧＣＣＡＣＡＧＧＣＧＣＴ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号１０：５’−ＣＴＴＧＡＣＡＧＣＴＣＣＣＧＣＣＧＣＡＡ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）

その結果、図５及び図６に示したように、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物又はキレノールが、筋肉内タンパク質の異化作用に関与する主要リガアーゼ（ｌｉｇａｓｅ）であるアトロジン−１とＭｕＲＦ１のｍＲＮＡ発現量を減少させることが分かる。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が筋肉損失に関与する筋肉異化作用を抑制し、筋肉量の維持に寄与することを意味する。

［実施例７］正常食餌動物モデルで筋肉量増加効果確認
［実施例７−１］実験動物食餌
４週齢のＣ５７ＢＬ／６雄性マウスを１週間適応させ、食餌は、正常食餌（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ Ｄ１２４５０Ｂ、１０％ ｋｃａｌ ｆｒｏｍ ｆａｔ、Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ、ＵＳＡ）を提供し、体重を基礎にして無作為的に群を配置し、それぞれ５匹ずつ総３群に分けて実験に利用した。実験群としては、前記実施例３−１で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を０．２５％カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）に懸濁し、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物２５０ｍｇ／ｄａｙ／ｋｇ体重の投与濃度で１日１回ずつ６週間一定の時間に経口投与し、対照群は、同一量の０．２５％カルボキシメチルセルロースのみを経口投与した。試料を投与したマウスの食餌量と個体の重さを１週間ごとに測定した。

［実施例７−２］筋肉量増加効果
実施例７−１の正常食餌マウスから両ふくらはぎ筋肉（ｃａｌｆ ｍｕｓｃｌｅ）を摘出し、マイクロバランス（ｍｉｃｒｏｂａｌａｎｃｅ；Ｍｅｔｔｌｅｒ ＰＥ１６０、ＵＳＡ）で重さを測定した。実験結果は、正常食餌群とシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与群のｔ検定を実施し、その有意性を検証し、統計学的に有意な差異を示した（＊＊ｐ＜０．０１）。

その結果、図７に示されたように、対照群と比べてシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を投与した群において筋肉の重さが２３％増加した。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が筋肉量の増大に効率的に作用することを意味する。

［実施例７−３］筋肉体積増加効果
実施例７−１の正常食餌マウスからマイクロＰＥＴ／ＣＴ（ｐｏｓｉｔｒｏｎ ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ／ｃｏｍｐｕｔｅｄ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ、ＩＮＶＥＯＮ、Ｓｉｅｍｅｎｓ、ＵＳＡ）を利用して最終筋肉体積を測定した。

その結果、図８に示されたように、対照群と比べてシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を投与した群において筋肉の体積が１１．４％増加した。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が筋肉体積を増加させることによって、筋肉量の増大に効率的に作用することを意味する。

［実施例７−４］シーゲスベッキアハーブ熱水抽出物に対する筋肉量増加効果
前記実施例７−１と実施例７−２と同一の方法で前記実施例１−２で製造したシーゲスベッキア・グラブレセンス熱水抽出物、前記実施例２−２で製造したシーゲスベッキア・プベスセンス熱水抽出物、前記実施例３−２で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリス熱水抽出物に対する筋肉量の重さをそれぞれ測定した。

その結果を下記表３に示した。

メナトミ熱水抽出物の筋肉量増加効果

前記表３に示したように、対照群に比べてシーゲスベッキア・グラブレセンス熱水抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンス熱水抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリス熱水抽出物の筋肉量がそれぞれ有意的に増加することが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が筋肉量の増大に効率的に作用することを意味する。

［実施例８］高脂肪食餌動物モデルで筋肉量増加効果確認
［実施例８−１］実験動物食餌
４週齢のＣ５７ＢＬ／６雄性マウスを１週間適応させ、肥満を誘導するために、高脂肪食餌（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ Ｄ１２４９２、６０％ ｋｃａｌ ｆｒｏｍ ｆａｔ）を６週間供給して肥満を誘導させた後、それぞれ５匹ずつ総２群に任意的に分けて、前記実施例７−１と同一の方法で肥満動物モデルに経口投与した。

［実施例８−２］筋肉量増加効果
実施例８−１の高脂肪食餌マウスから両ふくらはぎ筋肉（ｃａｌｆ ｍｕｓｃｌｅ）を摘出し、前記実施例７−２と同一の方法で重さを測定した。実験結果は、高脂肪食餌群と高脂肪食餌シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与群のｔ検定を実施し、その有意性を検証し、統計学的に有意な差異を示した（＊＊＜ｐ０．０１）。

その結果、図９に示されたように、対照群と比べてシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を投与した群において筋肉の重さが２３％増加した。
これは、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が筋肉量の増大に効率的に作用することを意味する。

［実施例８−３］筋肉体積増加効果
実施例８−１の高脂肪食餌マウスから前記実施例７−３と同一の方法で筋肉体積を測定した。
その結果、図１０に示されたように、対照群と比べてシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を投与した群において筋肉の体積が６％増加した。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が筋肉体積を増加させることによって、筋肉量の増大に効率的に作用することを意味する。

［実施例９］運動能力に関与する主要遺伝子ＰＧＣ−１αのタンパク質発現増加効果
［実施例９−１］キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の運動能力増強効果
筋肉細胞であるＬ６ミオブラスト（ｍｙｏｂｌａｓｔ；Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）を１０％ ｆｅｔａｌｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ；Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、ＵＴ、ＵＳＡ）と１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ、Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ、ＮＹ、ＵＳＡ）が含有されたＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉａ（ＤＭＥＭ；Ｈｙｃｌｏｎｅ）で培養した。Ｌ６細胞に前記実施例１−１で製造したシーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物、実施例２−１で製造したシーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物、実施例３−１で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を１０ｐｐｍ濃度で処理した。また、Ｌ６細胞に前記実施例４で製造したキレノールを１０μＭ濃度で処理した。この際、試料の代わりに、０．０１％ＤＭＳＯを処理した群を対照群にした。２４時間経過後、Ｌ６細胞をプロテアーゼインヒビターカクテル（ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｃｏｃｋｔａｉｌ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）が含まれたＲＩＰＡ（ＥＬＰＩＳ−Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｄａｅｊｅｏｎ、Ｋｏｒｅａ）緩衝溶液で溶解させた。前記試料を５分間沸かした後、同量のタンパク質（２０μｇ）を１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで電気泳動して分離した。電気泳動後、分離したタンパク質をニトロセルロース膜に伝達し、ウェスタンブロットを行った。１次抗体に反応させた後、Ｔｒｉｓ−ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ０．１％ Ｔｗｅｅｎ ２０（ＴＢＳＴ）を利用して１０分間３回洗浄した。この際、本発明で使用された１次抗体の種類と希釈率は、１：１０００である。２次抗体反応は、前記１次抗体反応を行った膜に２次抗体（ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ）を入れ、常温で２時間反応した。この際、２次抗体の希釈率は、１：５０００にした。タンパク質バンドは、ＥＣＬウェスタンブロット検出試薬（ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔｓ；Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を使用して発色し、運動能力に関与する主要遺伝子ＰＧＣ−１αのタンパク質発現を確認し、α−チューブリン（α−ｔｕｂｕｌｉｎ）でタンパク質ローディング量が一定であることを示した。

その結果、図１１に示したように、キレノール又はこれを含有するシーゲスベッキア・グラブレセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンスエタノール抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の処理によって運動能力に関与する主要遺伝子ＰＧＣ−１αのタンパク質発現量が増加することが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がＰＧＣ−１αのタンパク質発現量の増加を通じて運動能力を増強する活性があることを意味する。

［実施例９−２］シーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物の運動能力増強効果
前記実施例３−５で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物を１０、２０、４０ｐｐｍ濃度で前記実施例９−１と同一の方法で筋肉細胞に処理した。

その結果、図１２に示したように、キレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリス超高圧抽出物の処理によって運動能力に関与する主要遺伝子ＰＧＣ−１αのタンパク質の発現量が増加することが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がＰＧＣ−１αのタンパク質発現量の増加を通じて運動能力を増強する活性があることを意味する。

［実施例９−３］シーゲスベッキアハーブエチルアセテート抽出物の運動能力増強効果
前記実施例１−４で製造したシーゲスベッキア・グラブレセンスエチルアセテート抽出物、前記実施例２−４で製造したシーゲスベッキア・プベスセンスエチルアセテート抽出物、前記実施例３−４で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエチルアセテート抽出物を１０ｐｐｍ濃度で前記実施例５−１と同一の方法で筋肉細胞に処理した。

ＥＣＬウェスタンブロット検出試薬（ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔｓ；Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｔｏｋｙｏ、Ｊａｐａｎ）を使用してＰＧＣ−１αタンパク質バンドを発色し、Ｇ；ＢＯＸ ＥＦ ｉｍａｇｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ（Ｓｙｎｇｅｎｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）を利用して発色されたタンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを測定した。この際、対照群タンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを１００％にして、試料を処理した実験群の相対的なタンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを百分率（％）で示した。

その結果を下記表４に示した。

シーゲスベッキアハーブエチルアセテート抽出物のＰＧＣ−１αタンパク質発現量増加効果

前記表４に示したように、シーゲスベッキア・グラブレセンスエチルアセテート抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンスエチルアセテート抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリスエチルアセテート抽出物が運動能力に関与する主要遺伝子ＰＧＣ−１αのタンパク質発現量を増加させることが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がＰＧＣ−１αのタンパク質発現量の増加を通じて運動能力を増強する活性があることを意味する。

［実施例９−４］シーゲスベッキアハーブ超臨界及び亜臨界水抽出物の運動能力増強効果
前記実施例１−６と実施例１−７で製造したシーゲスベッキア・グラブレセンス超臨界及び亜臨界水抽出物、前記実施例２−６と実施例２−７で製造したシーゲスベッキア・プベスセンス超臨界及び亜臨界水抽出物、前記実施例３−６と実施例３−７で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリス超臨界及び亜臨界水抽出物を２０ｐｐｍ濃度で前記実施例５−１と同一の方法で筋肉細胞に処理した。次に、実施例９−３と同一の方法で対照群タンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを１００％にして、試料を処理した実験群の相対的なタンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを百分率（％）で示した。

その結果を下記表５に示した。

シーゲスベッキアハーブ超臨界及び亜臨界水抽出物のＰＧＣ−１αタンパク質発現量増加効果

前記表５に示したように、シーゲスベッキア・グラブレセンス、シーゲスベッキア・プベスセンス、シーゲスベッキア・オリエンタリス超臨界及び亜臨界水抽出物は、運動能力に関与する主要遺伝子ＰＧＣ−１αのタンパク質発現量を増加させることが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がＰＧＣ−１αのタンパク質発現量の増加を通じて運動能力を増強する活性があることを意味する。

［実施例９−５］シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の分画物の運動能力増強効果
前記実施例４−１で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物のエチルアセテートとメタノールの１０：０．５（ｖ／ｖ）混合溶媒に対する分画物６を２０ｐｐｍ濃度で前記実施例５−１と同一の方法で筋肉細胞に処理した。次に、実施例５−３と同一の方法で対照群タンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを１００％にして、試料を処理した実験群の相対的なタンパク質バンドのｄｅｎｓｉｔｙを百分率（％）で示した。

その結果、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の分画物の対照群に対する相手ｄｅｎｓｉｔｙは、１６８％であって、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物の分画物が運動能力に関与する主要遺伝子ＰＧＣ−１αのタンパク質発現量を増加させることが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がＰＧＣ−１αのタンパク質発現量の増加を通じて運動能力を増強する活性があることを意味する。

［実施例１０］正常食餌動物モデルにおいて運動能力向上効果確認
［実施例１０−１］実験動物食餌
４週齢のＣ５７ＢＬ／６雄性マウスを１週間適応させ、食餌は、正常食餌（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ Ｄ１２４５０Ｂ、１０％ ｋｃａｌ ｆｒｏｍ ｆａｔ、Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ、ＵＳＡ）を提供し、体重を基礎にして無作為的に群を配置し、それぞれ５匹ずつ総３群に分けて実験に利用した。実験群としては、前記実施例４で製造したキレノール、前記実施例３−１で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物をそれぞれ０．２５％カルボキシメチルセルロース（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）に懸濁し、シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物２５０ｍｇ／ｄａｙ／ｋｇ体重の投与濃度で１日１回ずつ６週間一定の時間に経口投与し、対照群は、同一量の０．２５％カルボキシメチルセルロースのみを経口投与した。試料を投与したマウスの食餌量と個体の重さを１週間ごとに測定した。

［実施例１０−２］運動能力向上効果
６週間試料を投与した後、トレッドミル（ｔｒｅａｄｍｉｌｌ）を利用して運動能力を評価した。運動能力の評価は、傾斜度５゜で２５ｃｍ／秒の速度で２０分、３０ｃｍ／秒の速度で２０分、３３ｃｍ／秒の速度で２０分、３６ｃｍ／秒の速度で２０分、３６ｃｍ／秒の速度で１５分、傾斜度１０゜で３８ｃｍ／秒の速度で１５分、そして４１ｃｍ／秒の速度でくたびれるまで走るように構成し、実験動物の最大運動能力を測定した。最大運動能力の決定時点は、運動実行開始後、実験動物がトレッドミル速度を１０秒以上追い付かない現象が発生するか、電気衝撃の累積数が５分内に１００回を超える時点として定義した。最大運動能力は、実験動物の運動距離（ｒｕｎｎｉｎｇ ｄｉｓｔａｎｃｅ）と運動時間（ｒｕｎｎｉｎｇ ｔｉｍｅ）で測定した。対照群とシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与群のｔ検定を実施し、実験結果に対する有意性を検証し、統計学的に有意な差異を示した（＊＊ｐ＜０．０１）。

その結果、図１３に示されたように、対照群と比べてキレノールを含有するシーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を投与した群において運動能力が増加することを確認した （ａ：運動距離、ｂ：運動時間）。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が運動能力を効率的に増強する効果があることを意味する。

［実施例１０−３］シーゲスベッキアハーブ熱水抽出物に対する運動能力増加効果
前記実施例１０−１と実施例１０−２と同一の方法で前記実施例１−２で製造したシーゲスベッキア・グラブレセンス熱水抽出物、前記実施例２−２で製造したシーゲスベッキア・プベスセンス熱水抽出物、前記実施例３−２で製造したシーゲスベッキア・オリエンタリス熱水抽出物に対する運動時間をそれぞれ測定した。

その結果を下記表６に示した。

シーゲスベッキアハーブ熱水抽出物の運動能力増加効果

その結果、前記表６に示したように、対照群に比べてシーゲスベッキア・グラブレセンス熱水抽出物、シーゲスベッキア・プベスセンス熱水抽出物、シーゲスベッキア・オリエンタリス熱水抽出物によって運動時間がそれぞれ有意的に増加することが分かった（ｐ＜０．０１）。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が運動能力を効率的に増強する効果があることを意味する。

［実施例１１］高脂肪食餌で誘導された肥満動物モデルにおいて運動能力向上効果確認
［実施例１１−１］実験動物食餌
４週齢のＣ５７ＢＬ／６雄性マウスを１週間適応させ、肥満を誘導するために、高脂肪食餌（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔｓ Ｄ１２４９２、６０％ ｋｃａｌ ｆｒｏｍ ｆａｔ）を６週間供給して肥満を誘導させた後、それぞれ５匹ずつ総２群に任意的に分けて、前記実施例１０−１と同一の方法で肥満動物モデルに経口投与した。

［実施例１１−２］運動能力向上効果
高脂肪食餌で誘導された肥満動物モデルを利用して前記実施例１０−２と同一の方法で運動能力を評価した。実験結果は、高脂肪食餌対照群と高脂肪食餌シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物投与群のｔ検定を実施し、その有意性を検証し、統計学的に有意な差異を示した（＊＊ｐ＜０．０１）。

その結果、図１４に示されたように、高脂肪食餌対照群と比べて高脂肪食餌シーゲスベッキア・オリエンタリスエタノール抽出物を投与した群において運動能力が増加することを確認した（ａ：運動距離、ｂ：運動時間）。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が肥満モデルにおいて運動能力を効率的に増強する効果があることを意味する。

［実施例１２］動物モデルの筋肉組織において運動能力向上と関連した遺伝子のタンパク質発現増進効果
実施例１０−１の正常食餌マウスと実施例１１−１の高脂肪食餌マウスからふくらはぎ筋肉（ｃａｌｆ ｍｕｓｃｌｅ）を摘出した後、ウェスタンブロット（ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ）を通じてｐ−ＡＭＰＫ、ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ−１α、ＰＰＡＲδのタンパク質発現を確認し、α−チューブリンでタンパク質ローディング量が一定であることを示した。

その結果、図１５に示したように、シーゲスベッキア・オリエンタリス抽出物が正常食餌モデル及び高脂肪食餌モデルにおいていずれも運動能力向上と関連した遺伝子であるｐ−ＡＭＰＫ、ＳＩＲＴ１、ＰＧＣ−１α、ＰＰＡＲδのタンパク質発現量を増加させることが分かった。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物が動物モデルで運動能力向上と関連した遺伝子のタンパク質発現を増加させて、運動能力を効率的に増加する効果があることを意味する。

［実施例１３］動物モデルの筋肉組織においてミトコンドリア生合成と関連した遺伝子発現増進効果
実施例１０−１の正常食餌マウスと実施例１１−１の高脂肪食餌マウスからふくらはぎ筋肉（ｃａｌｆ ｍｕｓｃｌｅ）を摘出した後、ＲＴ−ＰＣＲを通じてＰＧＣ−１α、ＮＲＦ−１、ＥＲＲα、ＴｆａｍのｍＲＮＡ発現を確認した。ふくらはぎ筋肉からＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して全体ＲＮＡを収穫して逆転写させた後、ＲＴ−ＰＣＲ分析を次のように行った。まず、ｃＤＮＡ合成のために前記ＲＮＡを逆転写酵素で逆転写させた。ＲＴ−ＰＣＲは、次の特定プライマーで行った：

ＰＧＣ−１α：
配列番号１１：５’−ＡＴＧＴＧＴＣＧＣＣＴＴＣＴＴＧＣＴＣＴ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号１２：５’−ＡＴＣＴＡＣＴＧＣＣＴＧＧＧＧＡＣＣＴＴ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）
ＥＲＲα：
配列番号１３：５’−ＧＣＴＧＧＴＧＧＴＴＧＡＡＣＣＴＧＡＧＡ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号１４：５’−ＧＧＧＣＴＡＡＣＡＣＣＣＴＡＴＧＣＣＡＧ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）
ＮＲＦ−１：
配列番号１５：５’−ＴＧＧＡＣＣＣＡＡＧＣＡＴＴＡＣＧＧＡＣ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号１６：５’−ＧＧＴＣＡＴＴＴＣＡＣＣＧＣＣＣＴＧＴＡ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）
Ｔｆａｍ：
配列番号１７：５’−ＴＣＧＣＣＴＧＴＣＡＧＣＣＴＴＡＴＣＴＧ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号１８：５’−ＣＣＧＧＧＣＴＴＣＣＴＴＣＴＣＴＡＡＣ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）
β−アクチン：
配列番号１９：５’−ＴＡＡＣＣＡＡＣＴＧＧＧＡＣＧＡＴＡＴＧ−３’（Ｆｏｒｗａｒｄ ｐｒｉｍｅｒ）
配列番号２０：５’−ＡＴＡＣＡＧＧＧＡＣＡＧＣＡＣＡＧＣＣＴ−３’（Ｒｅｖｅｒｓｅ ｐｒｉｍｅｒ）

その結果、図１６に示したように、シーゲスベッキア・オリエンタリス抽出物が正常食餌モデル及び高脂肪食餌モデルにおいてミトコンドリア生合成遺伝子であるＰＧＣ−１α、ＮＲＦ−１、ＥＲＲα、ＴｆａｍのｍＲＮＡ発現量を増加させることを確認できた。

このような結果は、本発明のキレノール、これを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物又はその分画物がミトコンドリア生合成を増加させて、運動能力を効率的に増強する効果があることを意味する。

以下、本発明によるキレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物を有効成分として含有する筋機能改善用又は運動能力増強用食品類及び医薬品の製造例を説明するが、本発明は、これを限定しようとするものではなく、ただ具体的に説明しようとするものである。前記筋機能改善効果又は運動能力増強効果に優れたキレノール又はこれを含有するシーゲスベッキアハーブ抽出物を有し、下記のような組成成分及び組成比によって製造例１〜２の筋機能改善用又は運動能力増強用食品及び医薬品組成物を通常的な方法によって製造した。

［製造例１］食品の製造
［製造例１−１］健康食品の製造
前記実施例１〜３のシーゲスベッキアハーブ抽出物又はキレノール１０００ｍｇ、ビタミンＡアセテート７０ｕｇ、ビタミンＥ１．０ｍｇ、ビタミンＢ１０．１３ｍｇ、ビタミンＢ２０．１５ｍｇ、ビタミンＢ６０．５ｍｇ、ビタミンＢ１２０．２ｕｇ、ビタミンＣ１０ｍｇ、ビオチン１０ｕｇ、ニコチン酸アミド１．７ｍｇ、葉酸５０ｕｇ、パントテン酸カルシウム０．５ｍｇ、硫酸第１鉄１．７５ｍｇ、酸化亜鉛０．８２ｍｇ、炭酸マグネシウム２５．３ｍｇ、第１リン酸カリウム１５ｍｇ、第２リン酸カルシウム５５ｍｇ、クエン酸カリウム９０ｍｇ、炭酸カルシウム１００ｍｇ、塩化マグネシウム２４．８ｍｇを混合して製造でき、その配合比を任意に変形実施してもよく、通常の健康食品の製造方法によって前記の成分を混合した後、顆粒を製造し、通常の方法によって健康食品組成物の製造に使用できる。

［製造例１−２］健康飲料の製造
前記実施例１〜３のシーゲスベッキアハーブ抽出物又はキレノール１０００ｍｇ、クエン酸１０００ｍｇ、オリゴ糖１００ｇ、梅濃縮液２ｇ、タウリン１ｇに合計９００ｍｌになるよう精製水を添加し、通常の健康飲料の製造方法によって前記の成分を混合した後、約１時間８５℃で撹拌加熱した後、作られた溶液を濾過して滅菌された２Ｌ容器に取得し、密封滅菌した後、冷蔵保管した後、健康飲料組成物の製造に使用できる。

［製造例１−３］チューインガム
ガムベース２０重量％、砂糖７６．９重量％、香料１重量％及び水２重量％と前記実施例１〜３のシーゲスベッキアハーブ抽出物又はキレノール０．１重量％を配合し、通常の方法でチューインガムを製造した。

［製造例１−４］キャンディー
砂糖６０重量％、水飴３９．８重量％及び香料０．１重量％と前記実施例１〜３のシーゲスベッキアハーブ抽出物又はキレノール０．１重量％を配合し、通常の方法でキャンディーを製造した。

［製造例１−５］ビスケット
薄力１級２５．５９重量％、中力１級２２．２２重量％、精白糖４．８０重量％、食塩０．７３重量％、ブドウ糖０．７８重量％、パームショートニング１１．７８重量％、アンモニウム１．５４重量％、重曹０．１７重量％、重亜硫酸ナトリウム０．１６重量％、米粉１．４５重量％、ビタミンＢ０．０００１重量％、ミルクヒャング０．０４重量％、水２０．６９９８重量％、全脂粉乳１．１６重量％、代用粉乳０．２９重量％、第１リン酸カルシウム０．０３重量％、散布塩０．２９重量％及び噴霧油７．２７重量％と前記実施例１〜３のシーゲスベッキアハーブ抽出物又はキレノール重量％を配合し、通常の方法でビスケットを製造した。

［製造例２−医薬品］
［製造例２−１］散剤
前記実施例１〜３のシーゲスベッキアハーブ抽出物又はキレノール５０ｍｇ、結晶セルロース２ｇを混合した後、通常の散剤の製造方法によって気密布に充填し、散剤を製造した。

［製造例２−２］錠剤
前記実施例１〜３のシーゲスベッキアハーブ抽出物又はキレノール５０ｍｇ、結晶セルロース４００ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム５ｍｇを混合した後、通常の錠剤の製造方法によって打錠し、錠剤を製造した。

［製造例２−３］カプセル制
前記実施例１〜３のシーゲスベッキアハーブ抽出物又はキレノール３０ｍｇ、乳清タンパク質１００ｍｇ、結晶セルロース４００ｍｇ、ステアリン酸マグネシウム６ｍｇを混合した後、通常のカプセル剤の製造方法によってゼラチンカプセルに充填し、カプセル剤を製造した。

［製造例２−４］注射剤
通常の注射剤の製造方法によって活性成分を注射用蒸留水に溶解し、ｐＨを約７．５に調節した後、前記実施例３−５のキレノール１００ｍｇ、注射用蒸留水、ｐＨ調節剤を混合し、２ｍｌ容量のアンプルに充填し、滅菌させて、注射剤を製造した。

Claims (4)

1. シーゲスベッキアハーブ（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｈｅｒｂａ）抽出物又はその分画物を有効成分として含む運動能力増強用薬学組成物。
2. シーゲスベッキアハーブ抽出物は、シーゲスベッキア・グラブレセンス、シーゲスベッキア・プベスセンス及びシーゲスベッキア・オリエンタリスよりなる群から選択される一つ以上の抽出物である、請求項１に記載の運動能力増強用薬学組成物。
3. シーゲスベッキアハーブ（Ｓｉｅｇｅｓｂｅｃｋｉａ ｈｅｒｂａ）抽出物又はその分画物を有効成分として含む運動能力増強用食品組成物。
4. シーゲスベッキアハーブ抽出物は、シーゲスベッキア・グラブレセンス、シーゲスベッキア・プベスセンス及びシーゲスベッキア・オリエンタリスよりなる群から選択される一つ以上の抽出物である、請求項３に記載の運動能力増強用食品組成物。

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